KR20180114499A - in situ Hydrogel Forming Powder Composition for Wound Healing, and Method for Preparing thereof - Google Patents

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KR20180114499A KR1020180019353A KR20180019353A KR20180114499A KR 20180114499 A KR20180114499 A KR 20180114499A KR 1020180019353 A KR1020180019353 A KR 1020180019353A KR 20180019353 A KR20180019353 A KR 20180019353A KR 20180114499 A KR20180114499 A KR 20180114499A
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Abstract

The present invention relates to a powder composition for treating wound, containing S-nitrosoglutathione (GSNO), an alginate salt, pectin, and polyethylene glycol (PEG) as active ingredients. The present invention further relates to a production method thereof. According to the present invention, the composition uses GSNO and an in-situ hydrogel formation system based on alginate capable of adequately regulating drug release. The composition has advantages of acid agents and film agents, increases stability of preparations when stored, and also provides moisturized environment or covers up the wound as the composition quickly changes to gel when applied to the wound. In addition, bacteria present in exudative wounds are effectively removed, and wound healing can be facilitated as cell differentiation and collagen synthesis are promoted.

Description

하이드로겔화 되는 창상 치료용 파우더 조성물 및 이의 제조방법{in situ Hydrogel Forming Powder Composition for Wound Healing, and Method for Preparing thereof}BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a powder composition for wound healing,

본 발명은 창상 적용 시 하이드로겔화 되는 창상 치료용 파우더 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a powder composition for wound healing which is hydrogelized when applied to a wound, and a method for producing the same.

우리 몸을 밖에서 감싸고 있는 피부는 일상생활에서 여러 가지 위험한 물리적 손상에 노출되어 있다. 따라서 피부의 기계적 손상, 타박상, 화상 등 우리 주위에서 많은 요인들로 인해 상처가 발생한다. 상처는 사람의 조직이 가지는 해부학적인 연속성이 외부의 작용에 의해 그 본래의 연속성을 상실한 상태를 말한다. 예를 들어 우리의 피부는 표피, 진피, 피하지방으로 이루어져 있는데, 베이거나 넘어지는 등의 외상에 의해서 이러한 표피나 진피, 피하지방 등의 연속성을 상실한 것을 상처라고 한다.The skin that surrounds our body is exposed to many dangerous physical injuries in our daily lives. Therefore, there are a lot of factors around us, such as mechanical damage, bruises, burns, etc., of the skin. A wound refers to a state in which the anatomical continuity of a human tissue has lost its original continuity due to external action. For example, our skin consists of epidermis, dermis, and subcutaneous fat, and it is said that the loss of continuity of epidermis, dermis, subcutaneous fat, etc.

일반적으로 창상, 외상 등과 같은 피부의 상처를 효과적으로 치료하기 위하여 드레싱(Wound dressing)을 사용한다. 상처 치료용 드레싱이 가져야 할 특성으로서 상처와의 접촉 면에서 적당한 습기의 유지능력, 상처분비물의 조절 능력, 상처에 대한 드레싱의 부착 및 제거의 용이성, 외부의 상처 부위 간의 공기 및 수증기 관통성, 외부에 대한 상처부위의 단열성, 박테리아의 침입에 대한 저항성, 인체에 대한 무독성, 우수한 기계적 물성 등이 요구된다.Generally, dressing is used to effectively treat skin wounds such as wound, trauma, and the like. The characteristics of dressing for wound healing should be as follows: ability to maintain proper moisture in contact with wound, ability to control wound excretion, ease of adhesion and removal of dressing to wound, air and water vapor permeability between external wound area, , Resistance to invasion of bacteria, non-toxicity to the human body, and excellent mechanical properties are required.

현재 가장 대중화된 상처의 치유 방법으로는 연고를 바르는 것인데, 가장 많이 사용되는 피부 상처 치유 촉진 제품으로는 마데카솔(동국제약), 센티카(삼진제약) 및 티나덱스(종근당) 등이 있다. Currently, the most popular methods of healing wounds include applying ointment. Madecasol (Dongkuk Pharm), Sentica (Samjin Pharm) and Tinadex (Chong Kun Dang) are the most commonly used skin wound healing stimulants.

인체에서 자발적으로 형성되는 산화질소 공여체인 S-나이트로소글루타치온 (S-Nitrosoglutathione; 이하 'GSNO')을 함유한 산화질소 방출성 필름은 인체에 적용할 수 있는 기계적 특성을 가질 뿐 아니라, 서서히 산화질소를 방출하며 상처 감염의 주원인이 되는 병원균을 억제하고 상처를 신속하게 치료할 수 있기 때문에 상기 필름은 상처치료에 유용하게 사용될 수 있다.The nitric oxide-releasing film containing S-nitrosoglutathione (GSNO), which is a nitrogen oxide donor spontaneously formed in the human body, not only has mechanical properties applicable to the human body but also gradually oxidizes The film can be useful for wound healing since it releases nitrogen and inhibits pathogens that are the main cause of wound infections and can treat wounds quickly.

그러나 필름 제형의 특성상 삼출물이 나오는 상처, 광범위한 상처 혹은 움직임이 많은 신체부위의 상처 등에는 적용하기에 한계가 있다. 또한, 제조 공정 상의 문제로 -20℃ 외의 냉장, 상온 등의 보관 조건에서는 GSNO의 안정성을 담보할 수 없는 한계점이 있다.However, due to the nature of the film formulation, there are limitations in application to wounds resulting from exudates, wounds on a wide range of wounds or body parts with many movements. In addition, there is a limit in that the stability of GSNO can not be secured under the storage conditions such as refrigeration and room temperature outside the -20 ° C due to a manufacturing process problem.

또한, 넓은 면적의 상처 혹은 움직임이 많은 부분의 상처인 경우에는 필름 형태의 제제보다 하이드로겔 형태의 제형이 보다 유용하게 사용될 수 있으나, S-나이트로소글루타치온을 비롯한 대부분의 산화질소 공여체는 수분이 있는 환경에서 불안정하여 빠르게 분해되므로, 필름제로 제형화 하기에는 제제의 안정성을 확보하기가 매우 어렵다는 문제가 있다. 반면, 산제의 경우 안정성은 뛰어나지만 상처 부위의 습윤 환경을 제공할 수 없고 NO의 방출 패턴 또한 급격하게 이루어져 치료 효과를 유지할 수 있는 농도를 장시간 유지하기 어렵다는 문제가 있다.In addition, hydrogel-type formulations may be more useful than film formulations in the case of wounds with large areas of wounds or movement, but most of the nitric oxide donors, including S-nitroglycerin, , It is very difficult to secure the stability of the preparation for film-form preparation. On the other hand, in the case of powder, the stability is excellent, but it is not possible to provide a wet environment at the wound site, and the emission pattern of NO is abruptly formed, which makes it difficult to maintain the concentration for maintaining the therapeutic effect for a long time.

한국등록특허 제10-0445146호(2004.08.10 등록).Korean Registered Patent No. 10-0445146 (registered August 10, 2004).

본 발명의 목적은 상처 회복 촉진 효과와 항균 효과를 지닌 산화질소 공여체 S-나이트로글루타치온(S-Nitrosoglutathione)을 상처 부위의 삼출물을 흡수하여 겔 형태로 신속하게 바뀔 수 있도록 하는, 창상 적용 시 하이드로겔화 되는 창상 치료용 파우더 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a method of hydrogeling (S-Nitrosoglutathione) which is capable of rapidly absorbing exudate from a wound site and converting it into a gel form, which is a nitric oxide donor S- And to provide a powder composition for wound healing.

본 발명의 다른 목적은 창상 적용 시 신속하게 하이드로겔화 되는 창상 치료용 파우더 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for producing a powder composition for wound healing which is quickly hydrogelized upon application to a wound.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 S-나이트로소글루타치온(S-Nitrosoglutathione; GSNO), 알지네이트염, 펙틴 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 유효성분으로 포함하는 창상(wound) 치료용 파우더 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a powder composition for wound treatment comprising S-Nitrosoglutathione (GSNO), alginate salt, pectin and polyethylene glycol (PEG) do.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (1) 분말 형태의 GSNO, 알지네이트염, 펙틴 및 PEG를 각각 분쇄하는 단계; (2) 상기 단계 (1)에서 제조한 분쇄물을 모두 혼합하는 단계; 및 (3) 상기 단계 (2)에서 제조한 혼합물을 체에 통과시키는 단계를 포함하는 창상 치료용 파우더 조성물의 제조방법을 제공한다.In order to achieve the above other objects, the present invention provides a method for producing a granulated product, comprising: (1) pulverizing GSNO, alginate salt, pectin and PEG in powder form, respectively; (2) mixing all the pulverized products produced in the step (1); And (3) passing the mixture prepared in the step (2) through a sieve.

본 발명은 창상 적용 시 하이드로겔화 되는 창상 치료용 파우더 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 파우더 조성물은 하이드로겔화 되어 필름 형태의 제제보다 대면적의 창상 부위를 효과적으로 치료할 수 있는 바, 특히, 욕창이나 화상 등과 같은 삼출물이 있고 감염될 여지가 높으며 광범위하게 생길 수 있는 상처에 기존의 상품화 된 제품보다 적합한 특성을 지니고 있고, 사용된 물질들은 모두 생체적합성이 뛰어난 물질들이므로 독성 문제를 해결하였으며, 또한 제조 과정이 단순하여 대량생산에 용이하며, 밀봉용기에 보관 시 상온에서 또한 안정하다.The present invention relates to a powder composition for wound healing which is hydrogelized when applied to a wound, and the powder composition of the present invention is hydrogelized to effectively treat a wound area of a larger area than a film-shaped preparation, There are exudates such as pressure ulcers and burns, which are more susceptible to infections and have a wider range of wounds than those of conventional commercialized products. All of the materials used are biocompatible, In addition, the production process is simple and easy to mass-produce, and is also stable at room temperature when stored in a sealed container.

도 1은 본 발명의 창상 적용 시 하이드로겔화 되는 산화질소 함유 창상 치료 파우더 조성물의 수분 흡수와 그에 따른 형태 변화를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 파우더 조성물의 저장 안정성을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 파우더 조성물의 수분 흡수 정도에 따른 NO 방출 실험의 결과이다.
도 4는 본 발명의 파우더 조성물의 in vitro 항균 실험(antibacterial test)의 결과이다.
도 5는 본 발명의 파우더 조성물의 공초점 레이저 형광 현미경(Confocal laser fluorescence microscopy)을 이용한 항균 능력 시험의 결과이다.
도 6은 본 발명의 파우더 조성물의 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 감염 동물 모델에서의 상처 회복 능력 시험 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 in vivo 동물 모델에서 상처에 있는 균 수 정량 실험의 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 치료 개시 후 14일째 되는 시점에서 상처 표면에 있는 균 확인 시험 (Twort's gram staining) 결과를 나타낸 것이다(정상 피부(A), 비처리군(B, C), 파우더 담체 처리군(D), 본 발명의 파우더 조성물 처리군(E)).
도 9는 조직학적 염색을 통한 조직 회복 정도를 비교하여 나타낸 것이다(A, B, C, D는 H&E 염색, E, F, G, H는 메이슨 트리크롬(Masson's trichrome) 염색 기법을 사용한 것으로서, A, E는 정상 조직, B, F는 비처리군, C, G는 파우더 담체만을 처리한 그룹, D, H는 본 발명의 파우더 조성물을 처리한 그룹임. E: 표피(epidermis), F: 섬유조직(fibrous tissue) G: 육아조직(granulation tissue), H: 모공(hair follicle), I: 면역세포(immune cells), M: 근육(muscle)).
도 10은 분쇄 과정을 포함 또한 비포함한 제조방법으로 제조된 조성물 파우더의 GSNO 함량 균일성을 확인한 결과이다.
도 11은 본 발명의 조성물 파우더에서 알지네이트염의 함량에 따른 치료 효과를 비교한 결과이다.
도 12는 본 발명의 조성물 파우더에서 펙틴 및 PEG의 포함 여부에 따른 겔화 형성 실험 결과를 나타낸 것이다.
FIG. 1 shows water absorption and morphological changes of a wound treatment powder composition containing nitrogen oxide which is hydrogelized when applied to a wound of the present invention.
2 shows the storage stability of the powder composition of the present invention.
FIG. 3 shows the results of an experiment of NO release according to the degree of water absorption of the powder composition of the present invention.
FIG. 4 shows the results of an in vitro antibacterial test of the powder composition of the present invention.
5 shows the results of the antibacterial activity test using the confocal laser fluorescence microscopy of the powder composition of the present invention.
6 is a Pseudomonas aeruginosa of a powder composition of this invention (Pseudomonas aeruginosa ) infected animal models.
FIG. 7 shows the results of an experiment to determine the number of bacteria in the wound in an in vivo animal model.
FIG. 8 shows the result of Twot's gram staining (normal skin (A), untreated group (B), group C), powder carrier treated group (D) , The powder composition treatment group (E) of the present invention).
(A, B, C and D show H & E staining and E, F, G and H show Masson's trichrome staining technique. E is a normal tissue, B and F are untreated groups, C and G are groups treated only with a powder carrier, D and H are groups treated with the powder composition of the present invention, E: epidermis, F: Fibrous tissue G: granulation tissue H: hair follicle I: immune cells M: muscle.
FIG. 10 shows the results of confirming the uniformity of the GSNO content of the powder of the composition prepared by the method including the pulverization process.
FIG. 11 shows the results of comparing the therapeutic effects according to the content of alginate salt in the composition powder of the present invention.
FIG. 12 shows the gelation formation test results according to the presence or absence of pectin and PEG in the composition powder of the present invention.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명의 발명자들은 GSNO와 알지네이트염을 기반으로 할 경우 상처 회복 촉진 효과가 우수하고 항균 효과로 인하여 상처 부위의 삼출물을 효과적으로 흡수함으로써 겔 형태로 신속하게 변환할 수 있고, 이로 인해 필름형태의 제제보다 파우더 형태의 제제를 사용할 경우 넓은 면적의 상처 치료에 유용할 수 있음을 밝혀내어 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention have found that when GSNO and alginate salts are used as a base, they are excellent in promoting wound healing and can be rapidly converted into a gel form by effectively absorbing exudates from wound sites due to their antibacterial effect. As a result, The present invention has been completed based on the finding that a powdery preparation can be used for treating wounds having a large area.

따라서 본 발명은 S-나이트로소글루타치온(S-Nitrosoglutathione; GSNO), 알지네이트염, 펙틴 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 유효성분으로 포함하는 창상(wound) 치료용 파우더 조성물을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a powder composition for treating wound comprising S-Nitrosoglutathione (GSNO), alginate salt, pectin and polyethylene glycol (PEG) as an active ingredient.

본 발명은 겔화제로서 알지네이트를 사용하는 바, 상처 회복 촉진 효과와 항균 효과를 지닌 산화질소 공여체 GSNO가 상처 부위의 삼출물을 흡수하여 겔 형태로 신속하게 바뀔 수 있도록 하여, in situ에서 하이드로겔 형성이 가능하다.Using alginate as a gelling agent, GSNO having a wound-promoting effect and antimicrobial effect absorbs the exudate from the wound site and can quickly change into a gel form, and hydrogel formation in situ It is possible.

상기 파우더 조성물에서 주요 활성 성분인 GSNO는 체내에도 존재하는 산화질소 공여체이며, 분해되면서 발생하는 산화질소(NO)에 의해 세포 분화, 콜라겐 합성과정 등에 관여하여 이를 촉진하고 상처의 회복을 돕는다. 또한, 발생한 산화질소에 의한 산화 스트레스는 항균 효과를 갖는데, 이러한 기전은 내성을 거의 일으키지 않으며 그람 음/양성 구분 없이 항균 효과를 나타내므로 피부 상처 감염에 사용하기 적합하다. GSNO, which is a major active ingredient in the powder composition, is a nitric oxide donor which is also present in the body. It is involved in cell differentiation and collagen synthesis process by nitrogen oxide (NO) generated by decomposition and promotes it and helps recovery of the wound. In addition, oxidative stress caused by oxidized nitrogen has an antimicrobial effect, and this mechanism is suitable for use in skin wound infections because it has almost no resistance and exhibits an antibacterial effect without distinguishing between gram-negative and positive.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 파우더 조성물 100 중량부에 대하여, GSNO 2 중량부 내지 10 중량부, 알지네이트염 10 중량부 내지 40 중량부, 펙틴 5 중량부 내지 20 중량부 및 PEG 50 중량부 내지 80 중량부로 포함될 수 있는 바, 상기 수치 범위로 포함되는 경우, 상처 부위에서 균일하고 튼튼한 겔로의 변성이 신속하게 이루어졌으며, 또한 상처 치유 효과가 극대화되므로 바람직하다.In one embodiment of the present invention, 2 parts by weight to 10 parts by weight of GSNO, 10 to 40 parts by weight of alginate salt, 5 to 20 parts by weight of pectin and 50 parts by weight of PEG are added to 100 parts by weight of the powder composition, 80 wt.%. If it is included in the above-mentioned numerical range, it is preferable that denaturation into a uniform and strong gel is performed rapidly at the wound site and the wound healing effect is maximized.

보다 바람직하게는, 상기 GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG는 4 : 21 : 11: 64의 중량비로 포함될 수 있다.More preferably, the GSNO: alginate salt: pectin: PEG may be included in a weight ratio of 4: 21: 11: 64.

상기 파우더 조성물은 창상 부위에서 1분 내지 3분 내에 하이드로겔 형태로 변성될 수 있는 바, 본 발명에 따른 파우더 조성물은 산제 형태나 필름 형태에서 나타나는 문제점을 해결하고, 각각의 형태의 장점들만을 모두 나타낼 수 있다.The powder composition can be modified into a hydrogel form within 1 minute to 3 minutes at the wound site. The powder composition according to the present invention solves the problem in powder form or film form, .

특히, 상기 파우더 조성물은 창상 부위에서 산화질소(NO)를 서방출함으로써 창상을 치료하거나, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 또는 메티실린 내성 황색포도알균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus; MRSA) 중 어느 하나 이상의 균에 대한 항균 활성을 나타냄으로써 창상을 치료할 수 있는 바, 본 발명의 일 실시예에서, 본 발명의 파우더 조성물은 일산화질소의 서방출성이 향상되었고, 또한, 병원 내 감염균 중 가장 문제가 되는 그람 양성균인 MRSA와 그람 음성균인 P. aeruginosa 의 2종 균에 대해 99.99% 이상의 살균 효과를 나타냄을 검증하였다.Particularly, the powder composition can be used for treating wound healing by releasing nitrogen oxide (NO) from the wound site, or for treating a wound of any one or more of Pseudomonas aeruginosa or methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) In the present invention, the powder composition of the present invention is improved in the release of nitrogen monoxide, and the MRSA, which is the most problematic Gram- And gram-negative bacteria, P. aeruginosa Of the bacteria were found to be more than 99.99%.

상기 창상은 찰과상, 열상, 화상, 자상, 절상, 결출상, 관통상 및 좌상에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.The wound can be any one or more selected from abrasions, lacerations, burns, stabbing, raising, plating, penetrating, and upper left, but is not limited thereto.

더욱이, 본 발명은 (1) 분말 형태의 GSNO, 알지네이트염, 펙틴 및 PEG를 각각 분쇄하는 단계; (2) 상기 단계 (1)에서 제조한 분쇄물을 모두 혼합하는 단계; 및 (3) 상기 단계 (2)에서 제조한 혼합물을 체에 통과시키는 단계를 포함하는 창상 치료용 파우더 조성물의 제조방법을 제공한다.Further, the present invention provides a method for producing a granulated product comprising: (1) pulverizing GSNO, alginate salt, pectin and PEG in powder form, respectively; (2) mixing all the pulverized products produced in the step (1); And (3) passing the mixture prepared in the step (2) through a sieve.

상기 단계 (1) 내지 (3)에서, 상기 파우더 조성물 100 중량부에 대하여, GSNO 2 중량부 내지 10 중량부, 알지네이트염 10 중량부 내지 40 중량부, 펙틴 5 중량부 내지 20 중량부 및 PEG 50 중량부 내지 80 중량부로 포함될 수 있는 바, 이러한 범위 내로 포함되어 제조될 때 상처 부위에서 균일하고 튼튼한 겔로의 변성이 신속하게 이루어졌으며, 또한 상처 치유 효과가 극대화되는 파우더 조성물이 제조될 수 있다.2 to 10 parts by weight of GSNO, 10 to 40 parts by weight of alginate salt, 5 to 20 parts by weight of pectin, and 50 to 50 parts by weight of PEG 50, based on 100 parts by weight of the powder composition in the above steps (1) to (3) To 80 parts by weight. When the powder composition is contained in such a range, it is possible to produce a powder composition which is rapidly denatured to a uniform and durable gel at the wound site and maximizes the wound healing effect.

상기 단계 (3)에서, 상기 체는 80 ㎛ 내지 100 ㎛의 평균직경의 다공성 구조일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.In the step (3), the sieve may be a porous structure having an average diameter of 80 [mu] m to 100 [mu] m, but is not limited thereto.

보다 상세하게는, 상기 단계 (3)에서, 제조된 창상 치료용 파우더 조성물은 GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG를 4 : 21 : 11 : 64의 중량비로 포함하고 있을 수 있다.More specifically, in step (3), the powdered wound treatment powder composition may contain GSNO: alginate salt: pectin: PEG in a weight ratio of 4: 21: 11: 64.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이며 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐이므로 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples. It is to be understood that both the foregoing description and the following detailed description are exemplary and explanatory and are intended to provide further explanation of the invention as claimed. no.

<< 실시예Example 1> 본 발명에 따른 창상 치료용 파우더 조성물의 제조 1> Preparation of Powder Composition for Wound Treatment according to the Present Invention

본 발명에 따른 창상 치료용 파우더 조성물을 제조하기 위하여, 먼저 GSNO, 소듐 알지네이트, 펙틴 및 PEG(MW: 8000)를 170호 표준체(구멍의 평균직경이 90 ㎛임)를 통과할 정도로 분쇄하였다. 그 후, GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG를 4 : 21 : 11 : 64의 중량비로 혼합한 후 170호 체를 통과시킴으로써 본 발명에 따른 창상 치료용 파우더 조성물을 제조하였다. 대조군으로는 분쇄 과정을 거지 않은 GSNO, 소듐 알지네이트, 펙틴 및 PEG(MW: 8000)를 상기와 동일한 중량비로 혼합하여 제조한 겔링 파우더(비교예 1)를 사용하였고, GSNO를 포함하지 않은 담체의 경우, 소듐 알지네이트 : 펙틴 : PEG를 2 : 1 : 6의 중량비로 섞어 제조한 것을 사용하였다.GSNO, sodium alginate, pectin and PEG (MW: 8000) were first pulverized to pass through the No. 170 standard (the average diameter of the pores was 90 탆) in order to prepare the powder composition for wound treatment according to the present invention. Thereafter, GSNO: alginate salt: pectin: PEG was mixed at a weight ratio of 4: 21: 11: 64, and the mixture was passed through a No. 170 sieve to prepare a powder composition for wound treatment according to the present invention. As a control, a gelling powder (Comparative Example 1) prepared by mixing GSNO, sodium alginate, pectin and PEG (MW: 8000) without grinding at the same weight ratio as above was used. In the case of a carrier not containing GSNO , Sodium alginate: pectin: PEG in a weight ratio of 2: 1: 6 was used.

<실험예 1> 수분 흡수와 그에 따른 형태 변화 분석<Experimental Example 1> Analysis of moisture absorption and morphological change

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, 수분 흡수 실험을 통해 시간에 따른 형태 변화를 확인하였다. 구체적으로, in vitro 실험 방법은 다음과 같았다: 먼저 셀룰로오스 멤브레인을 상처 삼출물을 흉내 낸 모조의 상처 유체(simulated wound fluid ; SWF) 위에 접촉시킨 후, 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물 40 mg을 셀룰로오스 멤브레인 위에 고르게 분포시켰다. 이때, 물 분자가 셀룰로오스 멤브레인 너머로 확산되어 파우더 조성물에 흡수되므로 지정된 시간마다 사진을 촬영하고 그 무게를 측정하여 흡수한 유체(삼출물)의 양을 측정하였다.The morphological changes of the powder composition prepared in Example 1 over time were confirmed through water absorption experiments. Specifically, the in vitro test method was as follows: First, the cellulose membrane was brought into contact with a simulated wound fluid (SWF) simulating a wound exudate. Then, 40 mg of the powder composition prepared in Example 1 was dissolved in cellulose And distributed evenly over the membrane. At this time, since water molecules are diffused over the cellulose membrane and absorbed into the powder composition, photographs are taken at designated time intervals and the weight thereof is measured to measure the amount of absorbed fluid (exudate).

또한, in vivo 실험 방법은 다음과 같았다: 7주령 ICR 마우스를 마취한 후 등 쪽 부분의 털을 제거하고 8 mm 생검 펀치(biopsy punch)로 전층 상처를 생성하였다. 그 위에 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물 40 mg을 고르게 뿌린 후 지정된 시간에 따라 사진을 촬영하였다.In vivo experiments were as follows: Seven-week-old ICR mice were anesthetized and the hairs on the dorsal side were removed and a full-thickness wound was created with an 8 mm biopsy punch. 40 mg of the powder composition prepared in Example 1 was evenly sprayed thereon, and a photograph was taken at a designated time.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물은 350 % 까지의 수분을 흡수할 수 있는 능력이 있으며 겔 형태로 신속하게 변화됨을 확인하였다(도 1(A): in vitro 상 수분 흡수 실험에서 시간에 따른 파우더의 상태 변화를 나타낸 것, 도 1(B): in vivo 마우스 모델에서의 풀 두께 절제 상처(full thickness excision wound)에 파우더를 처리하였을 때 파우더의 상태 변화를 나타낸 것, 도 1(C): 파우더의 수분 흡수 능력을 측정한 것).As a result, as shown in FIG. 1, it was confirmed that the powder composition prepared in Example 1 had a capability of absorbing up to 350% of water and rapidly changed into a gel form (FIG. 1 (A) FIG. 1 (B): Changes in the state of the powder when the powder was treated with a full thickness excision wound in an in vivo mouse model. 1 (C): Measured water absorption ability of powder).

<실험예 2> 저장 안정성 분석<Experimental Example 2> Storage stability analysis

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, 저장 안정성을 분석하였다. 구체적인 실험 방법은 다음과 같았다: 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 10 mg 씩 마이크로튜브에 넣은 후 4℃ 냉장고 및 37℃ 인큐베이터에 넣었다. 그 후, 일정 시간마다 3개의 마이크로튜브를 꺼내어 물에 녹인 후 자외가시부 흡광광도계로 335 nm에서의 흡광도를 측정하여 GSNO의 양을 정량, 비교하였다.The storage stability of the powder composition prepared in Example 1 was analyzed. Specific experimental methods were as follows: 10 mg of the powder composition prepared in Example 1 was placed in a microtube, and then placed in a 4 ° C refrigerator and a 37 ° C incubator. After that, 3 microtubes were taken out at a constant time and dissolved in water, and the absorbance at 335 nm was measured with an ultraviolet absorption spectrophotometer to quantitatively compare the amount of GSNO.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 140일 동안, 4℃와 37℃ 보관 조건에서도 파우더 조성물의 의미 있는 GSNO의 분해는 관찰되지 않은 것을 확인할 수 있었고, 이러한 점을 볼 때, 상기의 저장 조건에서는 약물의 분해 우려 없이 보관이 가능하다는 것을 알 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 2, significant decomposition of GSNO in the powder composition was not observed even at the storage conditions of 4 ° C. and 37 ° C. for 140 days. From this point of view, It is possible to store without fear of decomposition of the drug.

<실험예 3> GNSO의 수분 흡수 정도에 따른 NO 방출 실험 분석<Experimental Example 3> Experimental analysis of NO emission according to degree of water absorption of GNSO

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, 수분 흡수 정도에 따른 GNSO 방출량을 확인하였다. 구체적으로, 다음과 같은 실험 방법을 수행하였다: 50 mg의 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 바닥면이 평평한 2 ml 마이크로 튜브 바닥에 고루 분산시킨 후, 삼출물을 적게 흡수한 상태(200 % 흡수), 가장 많이 흡수한 상태(350 %), 흡수할 수 있는 양보다 더 많은 양의 삼출물에 노출되었을 상태(500 %)에 해당되는 양의 SWF를 각각의 튜브에 넣어주었다. 그 후 37℃ 인큐베이터에 넣고 일정 시간마다 3개씩의 마이크로 튜브를 취하여 물에 녹인 후 자외가시부 분광광도계를 이용하여 남아있는 GSNO의 양을 측정, 비교 분석하였다.The powder composition prepared in Example 1 was examined for the amount of GNSO released depending on the degree of water absorption. Specifically, 50 mg of the powder composition prepared in Example 1 was uniformly dispersed on a bottom surface of a 2-ml microtube which had a flat bottom, ), The most absorbed state (350%), and the amount of SWF (500%) that was exposed to a larger amount of exudate than the absorbable amount. After that, 3 microtubes were placed in a 37 ° C incubator and the contents of residual microspheres were measured and analyzed by using an external spectrophotometer.

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 파우더가 적은 양의 수분에 노출되었을 때, 많은 양의 수분에 노출되었을 때, 최대 흡수점 이상의 수분 환경에 있을 때의 모든 조건에서 24시간 이상의 NO 방출 패턴을 나타내었다.As a result, as shown in FIG. 3, when the powder is exposed to a small amount of moisture, exposed to a large amount of moisture, and exposed to moisture in a moisture environment of a maximum absorption point or more, Respectively.

<실험예 4> in vitro 항균 실험(antibacterial test)<Experimental Example 4> In vitro antibacterial test

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, in vitro에서 항균 실험을 수행하였다. 구체적으로, 다음과 같은 실험 방법을 수행하였다: P. aeruginosa (PAO1, KCTC에서 구입) 및 MRSA (USA 300, ATCC에서 구입) 균을 12시간 배양한 후, 최대 흡수량만큼의 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물에 108 CFU/ml 정도의 균을 가하여 24시간 배양하였고, CFU를 측정함으로써 비교, 분석하였다. 또한, Baclight live/dead kit를 사용하여 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물에 24시간 노출시킨 균을 염색하였고, 공초점 레이저 형광 현미경으로 촬영하였다.The powder composition prepared in Example 1 was subjected to an in vitro antibacterial test. Specifically, the following experimental methods were carried out: After culturing for 12 hours, P. aeruginosa (purchased from PAO1, purchased from KCTC) and MRSA (purchased from USA 300, ATCC) 10 8 CFU / ml of the microorganism was added to the powder composition for 24 hours, and the CFU was measured and compared. The bacterium exposed to the powder composition prepared in Example 1 for 24 hours was stained using a Baclight live / dead kit and photographed with a confocal laser fluorescence microscope.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, in vitro에서 P. aeruginosa와 MRSA 균에 처리 시 모두 99.99% 이상의 균이 감소함을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 4, it was confirmed that 99.99% or more of bacteria were reduced in both P. aeruginosa and MRSA bacteria in vitro.

또한, 도 5에 나타난 바와 같이, 조성물을 처리한 그룹에서는 거의 모든 점들이 빨간색으로 보였는데, 이는 대부분의 균이 사멸했다는 것을 나타낸다(초록색 형광은 살아있는 균을, 빨간색 형광은 죽어있는 균을 나타냄).Also, as shown in Fig. 5, almost all the points in the group treated with the composition appeared red, indicating that most of the bacteria died (green fluorescence indicates living bacteria and red fluorescence indicates dead bacteria) .

<실험예 5> 상처 회복 능력 시험 분석&Lt; Experimental Example 5 >

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, 세균 감염 ICR 마우스 모델에서 상처 회복 능력을 확인하였다. 구체적으로, 다음과 같은 실험 방법을 수행하였다: 6주령의 ICR 마우스를 구입하여 1주 동안 적응 시킨 후 마취하고 털을 제거하였다. 등 부분에 8 mm의 생검 펀치를 이용하여 전층 상처를 생성하였고 상처마다 109 CFU의 P. aeruginosa 균을 가한 후 상처를 밀봉, 2일간 방치하여 감염된 전층 상처를 만들었다. 그 후, 2일마다 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물 및 GSNO가 없는 파우더 조성물(파우더 담체), 비처리 그룹의 총 3 그룹으로 나누어 처리를 하고 그때마다 사진을 촬영하여 그 크기를 비교, 분석하였다.The powder composition prepared in Example 1 was tested for wound recovery ability in a bacterial infected ICR mouse model. Specifically, the following experiment was carried out: Six weeks old ICR mice were purchased, adapted for 1 week, then anesthetized and hair removed. An 8-mm biopsy punch was used to create a full-thickness wound on the back, 10 9 CFU of P. aeruginosa was added per wound and the wound was sealed and left for 2 days to create an infected whole wound. Thereafter, the powder composition prepared in Example 1, the powder composition without powdery GSNO (powder carrier), and the non-treated group were treated every two days, and the photographs were taken every time, and the sizes were compared and analyzed Respectively.

그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 시간에 따라 상처의 크기가 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었고, 파우더를 처리한 그룹이 비처리군이나 파우더 담체(carrier)만 넣은 그룹에 비해 현저하게 뛰어난 상처 크기 감소 효과를 나타내었다.As a result, as shown in FIG. 6, it was confirmed that the size of the wound was remarkably decreased with time, and it was confirmed that the group treated with the powder had a remarkably superior wound than the group treated with only the powder- Size reduction effect.

<실험예 6> in vivo 균 수 정량 및 Twort의 그람 염색법&Lt; Experimental Example 6 > In vivo determination of mycobacteria and Gram staining of Twort

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, 마우스 모델에서 상처에 있는 균 수를 정량하였다. 이때 다음과 같은 실험 방법을 수행하였다: 6주령의 ICR 마우스를 구입하여 1주 동안 적응 시킨 후 마취하고 털을 제거하였다. 등 부분에 8 mm의 생검 펀치를 이용하여 전층 상처를 생성하였고 상처마다 109 CFU의 P. aeruginosa 균을 가한 후 상처를 밀봉, 2일간 방치하여 감염된 전층 상처를 만들었다. 그 후 상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물 및 GSNO가 없는 파우더 조성물(파우더 담체), 비처리 그룹의 총 3 그룹으로 나누어 처리를 하고 정해진 날짜마다 3마리의 마우스를 안락사 시켜 상처 부위를 뜯어낸 후 잘게 분쇄하고 희석하여, P. aeruginosa 균만 선택적으로 성장 가능한 세트리미드(cetrimide) 배지에서 배양하였고, CFU를 측정하였다.In the powder composition prepared in Example 1, the number of bacteria in the wound in the mouse model was determined. At this time, the following experiment was carried out: 6 weeks old ICR mice were purchased, adapted for 1 week, then anesthetized and hair removed. An 8-mm biopsy punch was used to create a full-thickness wound on the back, 10 9 CFU of P. aeruginosa was added per wound and the wound was sealed and left for 2 days to create an infected whole wound. Thereafter, the powder composition prepared in Example 1, the powder composition without powdery GSNO (powder carrier), and the untreated group were divided into three groups, and three mice were euthanized each day to remove the wound area After finely crushed and diluted, only P. aeruginosa was cultured in selectively grown cetrimide medium, and CFU was measured.

또한, Twort의 그람 염색법을 다음과 같이 수행하였다: 실험 마지막 날인 14일째에 동물을 안락사시킨 후 상처 부위를 채취하여 파라핀 블록(paraffin block)으로 만들어 보존하였다. 상기 블록을 5 um 두께로 절단하여 슬라이드 글라스 위에 붙이고 12시간 37℃ 오븐에서 건조시켰다. 자일렌을 이용하여 파라핀을 제거하고 100 % 에탄올, 95 % 에탄올을 각각 가하고 증류수로 세척하였다. 크리스탈 바이올렛으로 1차 염색, 내추럴 레드(Natural red) 및 패스트 그린(fast green) 용액으로 2차 염색한 후, 자일렌으로 투명 과정을 거쳐서 마운팅 미디어를 넣고 커버글라스를 덮었다. 마지막으로 광학 현미경을 이용하여 1000배 확대한 배율에서 1 um정도 길이의 빨간색을 띄는 P. aeruginosa 균을 관찰, 촬영하였다.Also, Twort's Gram stain was performed as follows: On the 14th day of the experiment, the animal was euthanized, and the injured area was collected and made into a paraffin block. The block was cut to a thickness of 5 μm and attached on a slide glass and dried in an oven at 37 ° C for 12 hours. Paraffin was removed using xylene, and 100% ethanol and 95% ethanol were added, respectively, followed by washing with distilled water. After primary dyeing with crystal violet, secondary dyeing with natural red and fast green solution, the mounting medium was put through the transparent process with xylene and the cover glass was covered. Lastly, P. aeruginosa with a red length of about 1 μm was observed and photographed at a magnification of 1000 times magnified using an optical microscope.

그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, P. aeruginosa 감염 ICR 마우스 모델에서 상처에 존재하는 균의 양을 측정하였을 때, 상기 파우더 조성물 처리군에서 세균의 양이 현저히 감소하였는 바, 본 발명에 따른 파우더 조성물이 상처 부위의 균을 효과적으로 제거할 수 있다는 것을 증명하였다.As a result, as shown in Fig. 7, P. aeruginosa When the amount of microorganisms present in the wound was measured in the infected ICR mouse model, the amount of microorganisms in the powder composition-treated group was remarkably reduced, indicating that the powder composition according to the present invention was able to effectively remove microorganisms in the wound area .

또한, 치료 개시 후 14일째 되는 시점에서 상처 표면에 있는 균 확인 시험 (Twort's gram staining)의 결과를 나타내는 도 8의 내용과 같이, 치료 개시 후 14 일째 되던 날의 상처 부분을 조직학적으로 관찰하여 거기에 P. aeruginosa 균이 있는지 시각화하는 조직 염색 기법을 통해, 비처리군에서는 매우 많은 수의 균을 시각적으로 관찰할 수 있었으나, 상기 파우더 조성물을 처리한 그룹에서는 탐지가 되지 않을 정도로 적은 균만 존재한다는 것을 볼 수 있었다(정상 피부(A), 비처리군(B, C), 파우더 담체 처리군(D), 본 발명의 파우더 조성물(E) 처리군).In addition, as shown in FIG. 8 showing the result of the bacterium identification test (Twort's gram staining) on the wound surface at the 14th day after the initiation of treatment, the wound area on the day 14 after the initiation of treatment was histologically observed P. aeruginosa Through the tissue staining technique to visualize the presence of bacteria, a large number of bacteria could be visually observed in the untreated group, but there was only a small number of bacteria that could not be detected in the group treated with the powder composition ( Treated group (A), untreated group (B, C), powder carrier treated group (D), powder composition (E) treated group of the present invention).

<실험예 7> 조직 회복 정도 분석&Lt; Experimental Example 7 >

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물을 대상으로, 조직 확인을 위한 헤마톡실린(Hematoxylin) & 에오신(Eosin) 염색(H&E 염색)과 콜라겐 양 확인을 위한 메이슨의 트리크롬 염색 기법(masson’s trichrome staining)을 수행하였다. 구체적으로, 다음과 같은 방법으로 수행하였다: 실험 마지막 날인 14일째에 동물을 안락사시킨 후 상처 부위를 채취하여 파라핀 블록으로 만들어 보존하였다. 그 후 5 um 두께로 절단하여 슬라이드 글라스 위에 붙이고 12시간동안 37℃ 오븐에서 건조시켰다. 자일렌을 이용하여 파라핀을 제거하고 100 % 에탄올, 95 % 에탄올을 각각 가하였고, 증류수로 세척하였다. H&E 염색법의 경우, 헤마톡실린과 에오신으로 차례대로 염색하였고, 메이슨의 트리크롬 염색의 경우, 판매자(ABCAM)가 제공한 염색 방법 순서에 따라 염색하였다. 그 후 광학 현미경을 이용하여 200배의 배율에서 조직을 비교, 관찰하여 촬영하였다.The powder composition prepared in Example 1 was subjected to masson's trichrome staining for hematoxylin & eosin staining (H & E staining) and collagen amount confirmation for tissue confirmation, Respectively. Specifically, the method was performed as follows: Animals were euthanized on the 14th day of the experiment, and the injured area was collected and made into a paraffin block. It was then cut into 5-μm thick slices on a slide glass and dried in an oven at 37 ° C for 12 hours. Paraffin was removed using xylene, 100% ethanol and 95% ethanol were added, respectively, and washed with distilled water. In the case of H & E staining, hematoxylin and eosin were stained in turn. In the case of Mathon's trichrome staining, staining was performed according to the staining procedure provided by the seller (ABCAM). The tissues were then compared and observed at a magnification of 200 times using an optical microscope.

그 결과, 도 9A 내지 D를 참조하면, 파우더 조성물을 처리하였을 때, 비처리군이나 파우더 담체만을 처리한 그룹에 비해 보다 정상 조직에 가까운 정도로 회복이 잘 된 것을 볼 수 있었다. 또한, 도 9E 내지 9H를 참조하면, 상기 파우더 조성물을 처리한 그룹에서 다른 두 그룹에 비해 많은 콜라겐 양을 관찰할 수 있었다.As a result, referring to FIG. 9A to FIG. D, when the powder composition was treated, it was found that the powder composition recovered to a level close to normal tissue as compared with the non-treated group or the powder group treated only with the powder carrier. In addition, referring to FIGS. 9E to 9H, a larger amount of collagen was observed in the group treated with the powder composition than in the other two groups.

<실험예 8> 실험 방법에 따른 파우더 입자 특성의 비교<Experimental Example 8> Comparison of Powder Particle Characteristics According to Experimental Methods

상기 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물과 분쇄 과정을 거치지 않고 제조된 비교예 1을 대상으로 함량 균일성을 확인하였다. 즉, 각 파우더를 펼쳐 놓고 무작위로 10 곳에서 샘플링하여 GSNO의 함량을 측정하였다. 이때, 10 mg 정도의 파우더의 무게를 측정하고 물에 녹인 후 자외가시부 분광광도계를 이용하여 335 nm에서 흡광도를 측정하여 GSNO의 함량을 측정, 비교하였다. 또한, 하우스너 비율은 탭 밀도와 벌크 밀도를 구하여 이들의 비로 계산하였다.The powder composition prepared in Example 1 and the comparative example 1 prepared without the pulverization process were tested for uniformity of contents. That is, the GSNO content was measured by randomly sampling 10 powder samples from each powder. At this time, the weight of powder of about 10 mg was measured, and after dissolving in water, the absorbance was measured at 335 nm using an ultraviolet spectrophotometer, and the content of GSNO was measured and compared. In addition, the ratio of the housing ratio was calculated by dividing the tap density and the bulk density.

그 결과, 도 10에 개시된 바와 같이, 분쇄 과정을 거친 실시예 1의 파우더 조성물은 GNSO가 더 고르게 분포되어 균일성이 높은 제제를 제조할 수 있음을 확인하였고, 또한 하우스너 비율이 증가하여 분체 상태에서 유동성이 저하되므로, 실제 상처에 적용 시 파우더가 겔로 변하기 전에 흘러내리는 현상을 더 감소시킬 수 있음을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 10, it was confirmed that the powder composition of Example 1 after the pulverization process was able to produce a more uniformly distributed preparation of GNSO, and also the powder ratio , It is confirmed that the phenomenon of flowing down before the powder changes into gel when applied to actual wound can be further reduced.

<실험예 9> 다른 겔화제와의 겔 형성 시간 비교Experimental Example 9 Comparison of gel formation time with other gelling agents

알지네이트 대신 다른 겔화제를 사용할 경우 겔 형성 능력에 차이가 생기는지 여부를 확인하기 위하여, GSNO를 혼합하지 않은 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 다양한 겔화제를 함유하는 파우더 담체 조성물을 제조하였다. 구체적으로, 비교예로서 겔화제인 알지네이트 대신 각각 히알루론산(Hyaluronate), 카라기난(Carrageenan), 폴록사머(Poloxamer), 젤라틴(Gelatin), 구아검(Guar gum), CMC-Na 또는 키토산(Chitosan)을 사용하여 비교예 2 내지 8 파우더 담체 조성물을 제조하였다. 이때, 각 조성물의 함량 비율은 실시예 1의 파우더 조성물의 GSNO를 제외한 부형제 비율과 동일하게, 겔화제 : 펙틴 : PEG = 2 : 1 : 6 이었다.A powder carrier composition containing various gelling agents was prepared in the same manner as in Example 1 except that GSNO was not mixed in order to confirm whether or not there was a difference in gel forming ability when using other gelling agent instead of alginate . Specifically, as a comparative example, hyaluronic acid (Hyaluronate), carrageenan, poloxamer, gelatin, guar gum, CMC-Na or chitosan were used instead of alginate as a gelling agent Comparative Examples 2 to 8 Powder carrier compositions were prepared. At this time, the content ratio of each composition was the gelling agent: pectin: PEG = 2: 1: 6 in the same manner as the excipient ratio of the powder composition of Example 1 except GSNO.

이후, 10 mg의 각 조성물을 바닥이 평평한 2 ml 튜브에 넣고 100 μl의 PBS를 떨어뜨린 다음 겔이 되는 시점을 측정하였다. 이때, 겔이 되는 시점으로서 튜브를 뒤집어서 가볍게 두드렸을 때 생성된 겔이 5초 이상 떨어지지 않고 튜브에 붙어 있는 시점을 기준으로 하였다.Then, 10 mg of each composition was placed in a 2 ml flat bottomed tube, 100 μl of PBS was dropped, and the time point of gelation was measured. At this time, when the tube was inverted and lightly knocked as a gel, the gel was not dropped more than 5 seconds and was attached to the tube.

그 결과, in situ 하이드로겔 형성 파우더로 사용하기 위해서는 3분 이내의 신속한 겔 형성 능력이 필수적인 바, 하기 <표 1>을 참조하면, 알지네이트와 히알루론산을 제외한 나머지 겔화제의 경우 겔 형성까지 10분 이상 경과하였으므로 in situ 하이드로겔 형성 파우더의 겔화제로서는 부적합함을 알 수 있다. 즉, 알지네이트 및 히알루론산이 in situ 하이드로겔 형성 현상을 보였으나, 히알루론산은 알지네이트에 비해 느린 겔화 속도를 보였으므로, 신속한 겔 형성을 위해서는 알지네이트가 가장 최적의 겔화제임을 증명하였다.As a result, in order to use as in situ hydrogel-forming powder, rapid gel-forming ability within 3 minutes is essential. As shown in Table 1 below, in case of the gelling agent except for alginate and hyaluronic acid, Or more, indicating that it is not suitable as a gelling agent for the in situ hydrogel-forming powder. That is, although alginate and hyaluronic acid showed in situ hydrogel formation phenomenon, hyaluronic acid showed a slower gelation rate than alginate, so that alginate was the most suitable gelling agent for rapid gel formation.

Figure pat00001
Figure pat00001

<실험예 10> 알지네이트 함량에 따른 치료 효과 비교<Experimental Example 10> Comparison of therapeutic effect according to alginate content

낮은 농도의 알지네이트를 포함할 경우에도 치료 효과가 있는지 확인하기 위해, 상기 실시예 1에서 개시한 제조방법대로 파우더 조성물을 제조하되, 알지네이트 함량을 10%(전체 중량에 대하여)로 하여, 효과가 검증된 GSNO의 중량비인 2%의 GSNO를 함유하는 파우더 및 10%의 GSNO를 함유하는 파우더를 제조하였다. 이때 함량 비율로서 GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG가 2 : 10 : 5 : 83 및 10 : 10 : 5 : 75 가 되도록 제조하였다. 그리고 높은 농도의 알지네이트가 실제 상처에 미치는 영향을 알아보기 위해, 40 %의 알지네이트를 함유하는 파우더를 제조(GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG는 4 : 40 : 20 : 36)하였고, 실시예 1에서 제조한 파우더 조성물과 동일하게 마우스 동물 모델에 처리하였다.In order to confirm whether the treatment effect is effective even when a low concentration of alginate is contained, a powder composition is prepared according to the preparation method described in Example 1, and the alginate content is set to 10% (based on the total weight) A powder containing 2% of GSNO and a powder containing 10% of GSNO were prepared. The ratio of GSNO: alginate salt: pectin: PEG was 2: 10: 5: 83 and 10: 10: 5: 75 as the content ratios. (GSNO: alginate salt: pectin: PEG: 4: 40: 20: 36) was prepared in the same manner as in Example 1, except that the amount of alginate And treated in a mouse animal model in the same manner as the powder composition.

이때, 구체적인 실험 방법은 다음과 같았다: 6주령의 ICR 마우스를 구입하여 1주동안 적응시킨 후 마취, 털을 제거하였다. 등 부분에 8 mm의 생검 펀치를 이용하여 전층 상처를 생성하고 위의 약물 및 GSNO가 없는 담체 파우더 조성물, 비처리그룹으로 나누어 약물을 처리하고 2일마다 사진을 촬영하여 그 크기를 비교, 분석하였다.At this time, specific experimental methods were as follows: 6 weeks old ICR mice were purchased and adapted for 1 week, then anesthesia and hairs were removed. The wound was created using a biopsy punch of 8 mm on the back, and the drug was treated with the drug and the GSNO-free carrier powder composition and the untreated group, and the photographs were taken every 2 days for comparison and analysis .

그 결과, 도 11a를 참조하면, 15% 미만의 낮은 함량의 알지네이트(2% 및 10%)를 이용한 조성물 파우더의 경우, 삼출물을 적절히 흡수하지 못해 겔 형태를 유지하지 못했고, GSNO가 쉽게 제거되었으며, 특히 마우스에 처리한 경우 유의미한 치료 효과가 나타나지 않았다. 반면, 도 11b를 참조하면, 15 내지 30%의 알지네이트를 포함하는 파우더 조성물은 삼출물을 흡수하여 겔 형태를 유지하면서 지속적으로 NO를 방출하였고, 특히 마우스 모델에서 유의미한 치료 효과를 나타내었다. 또한, 도 11c를 참조하면, 알지네이트가 너무 높은 비율(30% 초과)로 포함된 경우, 흡수력이 너무 높아 창상 부위가 건조해지고 드레싱이 상처에 강하게 엉겨 붙는 현상이 발생하여, 일반적인 창상에 사용하기에는 어려울 것으로 판단하였다.As a result, referring to FIG. 11A, in the case of the composition powder using alginate (2% and 10%) having a low content of less than 15%, the gel form could not be maintained due to insufficient absorption of the exudate, GSNO was easily removed, In particular, treatment with a mouse showed no significant therapeutic effect. On the other hand, referring to FIG. 11B, the powder composition containing 15 to 30% of alginate continuously absorbed exudates to maintain the gel shape, and released NO, showing a significant therapeutic effect, particularly in the mouse model. In addition, referring to FIG. 11C, when the alginate is contained at a too high ratio (more than 30%), the absorbency is too high to dry the wound area and the dressing is strongly clogged with the wound, Respectively.

<실험예 11> 펙틴 및 PEG의 역할 확인 실험<Experimental Example 11> Examination of the role of pectin and PEG

펙틴 및 PEG의 역할을 확인하기 위해 알지네이트를 22 중량부로 고정하고 펙틴과 PEG의 양을 변경하여 실험하였다. 즉, 상기 실시예 1에서 개시한 제조방법대로 파우더 조성물을 제조하되, 알지네이트 22 중량부와 펙틴 77 중량부(알지네이트:펙틴 = 2:7 중량비)만 포함된 경우(A), 알지네이트 22 중량부와 PEG 77 중량부 (알지네이트:PEG = 2:7 중량비)만 포함된 경우(B), 및 알지네이트 22 중량부와 펙틴 11 중량부 및 PEG 66 중량부(알지네이트:펙틴:PEG = 2:1:6 중량비)가 포함된 경우(C)의 파우더를 각각 제조한 뒤, 겔 형성 실험을 수행하였다. 구체적인 방법은 다음과 같았다: 제조한 각각의 파우더를 작은 디쉬에 50 mg씩 고르게 퍼트린 다음, 1 ml의 증류수를 고르게 가하여 형성되는 겔의 형상을 관찰, 촬영하였다.In order to confirm the role of pectin and PEG, alginate was fixed at 22 parts by weight and the amount of pectin and PEG was changed to experiment. That is, a powder composition was prepared according to the preparation method described in Example 1, except that 22 parts by weight of alginate and 77 parts by weight of pectin (alginate: pectin = 2: 7 ratio by weight) (Alginate: pectin: PEG = 2: 1: 6 weight ratio (weight ratio)) containing only 77 parts by weight of PEG (alginate: PEG = 2: 7 weight ratio) and 22 parts by weight of alginate, 11 parts by weight of pectin and 66 parts by weight of PEG ) Was contained, the gel-forming experiment was carried out after each powder of (C) was prepared. Specific methods were as follows: Each powder prepared was evenly dispersed into a small dish of 50 mg, and 1 ml of distilled water was evenly added to observe the shape of the formed gel.

그 결과, 도 12에 나타난 바와 같이, PEG가 없는 경우(A), 서로 파우더 입자들끼리 엉기는 현상이 발생하여 파우더가 뿌려진 부분에만 점도 높은 겔이 형성되었고, 펙틴이 없는 경우(B), 균일한 겔이 형성되지만 겔의 강도가 약했고, 겔이 완전히 흐르지 않을 때까지의 시간이 펙틴이 있는 경우보다 오래 걸리는 것을 확인할 수 있었다. 본 발명의 실시예 1과 같이, 알지네이트, 펙틴, PEG가 모두 포함되어 있는 경우(C), 신속하면서도 균일하게 겔이 형성되는 것을 확인하였다.As a result, as shown in Fig. 12, when no PEG was present (A), a phenomenon in which the powder particles were entangled with each other occurred, and a gel having a high viscosity was formed only at the portion where the powder was sprayed. One gel was formed but the strength of the gel was weak and the time until the gel did not completely flow was longer than when pectin was present. As in Example 1 of the present invention, it was confirmed that a gel was uniformly formed quickly and uniformly when all of alginate, pectin and PEG were contained (C).

이러한 실험 결과로부터, 과량의 펙틴 또는 PEG는 균일하고 튼튼한 겔의 형성에 좋지 않고, 펙틴은 5 내지 20 중량부, PEG는 50 내지 80 중량부로 포함된 제제가 in situ 하이드로겔 형성 파우더로 적합함을 알 수 있었다.From these experimental results, it was found that an excessive amount of pectin or PEG is not suitable for the formation of a homogeneous and durable gel, and the formulation containing 5 to 20 parts by weight of pectin and 50 to 80 parts by weight of PEG is suitable as an in situ hydrogel- Could know.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the present invention is not limited thereby. Do. That is, the practical scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (10)

S-나이트로소글루타치온(S-Nitrosoglutathione; GSNO), 알지네이트염, 펙틴 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 유효성분으로 포함하는 창상(wound) 치료용 파우더 조성물.A wound treatment powder composition comprising S-Nitrosoglutathione (GSNO), alginate salt, pectin and polyethylene glycol (PEG) as an active ingredient. 제 1 항에 있어서, 상기 파우더 조성물 100 중량부에 대하여, GSNO 2 중량부 내지 10 중량부, 알지네이트염 10 중량부 내지 40 중량부, 펙틴 5 중량부 내지 20 중량부 및 PEG 50 중량부 내지 80 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.2. The process according to claim 1, wherein the powder composition comprises 2 to 10 parts by weight of GSNO, 10 to 40 parts by weight of alginate salt, 5 to 20 parts by weight of pectin and 50 to 80 parts by weight of PEG, Wherein the powdery composition is a powder. 제 1 항에 있어서, 상기 GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG는 4 : 21 : 11 : 64의 중량비로 포함되는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.The wound dressing powder composition according to claim 1, wherein the GSNO: alginate salt: pectin: PEG is contained in a weight ratio of 4: 21: 11: 64. 제 1 항에 있어서, 상기 파우더 조성물은 창상 부위에서 1분 내지 3분 내에 하이드로겔 형태로 변성되는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.The powder composition for wound healing according to claim 1, wherein the powder composition is modified into a hydrogel form within 1 minute to 3 minutes at the wound site. 제 1 항에 있어서, 상기 파우더 조성물은 창상 부위에서 산화질소(NO)를 서방출함으로써 창상을 치료하는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.2. The powder composition for wound healing according to claim 1, wherein the powder composition is treated by releasing nitrogen oxides (NO) from the wound area. 제 1 항에 있어서, 상기 파우더 조성물은 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 또는 메티실린 내성 황색포도알균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus) 중 어느 하나 이상의 균에 대한 항균 활성을 나타냄으로써 창상을 치료하는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.The method of claim 1, wherein the powder composition is selected from the group consisting of Pseudomonas aeruginosa , or methicillin-resistant Staphylococcus aureus . The present invention also provides a powder composition for wound healing, which comprises an antimicrobial activity against at least one microorganism selected from the group consisting of aeruginosa , methicillin-resistant Staphylococcus aureus , and methicillin-resistant Staphylococcus aureus . 제 1 항에 있어서, 상기 창상은 찰과상, 열상, 화상, 자상, 절상, 결출상, 관통상 및 좌상에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.[Claim 2] The powder composition for treating wound healing according to claim 1, wherein the wound is at least one selected from the group consisting of abrasion, laceration, burn, swelling, raising, plating, penetration and sediment. (1) 분말 형태의 GSNO, 알지네이트염, 펙틴 및 PEG를 각각 분쇄하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 제조한 분쇄물을 모두 혼합하는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 제조한 혼합물을 체에 통과시키는 단계를 포함하는 창상 치료용 파우더 조성물의 제조방법.
(1) pulverizing GSNO, alginate salt, pectin and PEG in powder form, respectively;
(2) mixing all the pulverized products produced in the step (1); And
(3) passing the mixture prepared in the step (2) through a sieve.
제 8 항에 있어서, 상기 단계 (1) 내지 (3)에서, 상기 파우더 조성물 100 중량부에 대하여, GSNO 2 중량부 내지 10 중량부, 알지네이트염 10 중량부 내지 40 중량부, 펙틴 5 중량부 내지 20 중량부 및 PEG 50 중량부 내지 80 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물의 제조방법.9. The method according to claim 8, wherein, in steps (1) to (3), 2 to 10 parts by weight of GSNO, 10 to 40 parts by weight of alginate salt, 5 to 40 parts by weight of pectin, 20 to 50 parts by weight of PEG and 50 to 80 parts by weight of PEG. 제 8 항에 있어서, 상기 단계 (3)에서, 제조된 창상 치료용 파우더 조성물은 GSNO : 알지네이트염 : 펙틴 : PEG를 4 : 21 : 11 : 64의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 창상 치료용 파우더 조성물.The wound treatment powder according to claim 8, wherein in the step (3), the powdered wound dressing composition comprises GSNO: alginate salt: pectin: PEG in a weight ratio of 4: 21: Composition.
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