KR20180089725A - Kit for measuring skin sensitivity using lipid profile of skin stratum corneum and method for providing information to diagnose skin sensitivity - Google Patents
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Abstract
Description
본 명세서에는 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법이 개시된다.Disclosed herein are methods for providing information necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the skin.
민감성 피부란 정식 학술 용어는 아니지만 건조 피부에 의한 피부의 장벽(barrier) 기능의 저하를 원인으로 외부 자극에 대한 저항성이 떨어지고, 일차 자극 또는 알레르기성 접촉 피부염을 일으키기 쉬운 피부 상태라고 정의할 수 있다. 민감성 피부가 되는 원인들은 여러 가지가 있지만, 선천적인 피부 특성이나 가족력, 병력, 화장품 등의 오남용에 따라 민감성 피부가 되기도 하고, 환경의 변화, 습관 등 여러 가지 이유로 민감성 피부가 발생할 수 있다.Sensitive skin is not a formal academic term but can be defined as a skin condition that is less resistant to external stimuli due to reduced barrier function of the skin due to dry skin and prone to primary irritation or allergic contact dermatitis. Although there are many causes of sensitive skin, sensitive skin may be caused by abuse of inherent skin characteristics, family history, medical history, cosmetics, etc., and sensitive skin may occur for various reasons such as change of environment and habit.
한편, 일반인을 대상으로 한 조사 결과에 따르면, 민감성 피부에 대한 인식도 높아지고, 스스로 민감성 피부라고 인식하는 비율도 높은 편이며, 환경 오염이나 스트레스의 증가, 화장품 및 의약품 사용의 증가에 따라 민감성 피부가 증가하는 추세라고 한다. 피부의 민감성 등 개인의 피부 상태를 감별하여 진단하고 그 원인을 분석하는 것은 특히, 화장품에 사용되는 재료를 정확하게 선택하거나 특정 피부에 적합한 치료 방법을 결정하는 데에 필수적인 것이라 할 수 있다.On the other hand, according to the results of the survey on the general public, the awareness of sensitive skin increases, and the rate of recognizing it as self-sensitive skin is high. As a result of increasing environmental pollution and stress and increasing use of cosmetics and medicines, . It is essential to accurately select a material used in cosmetics or to determine a suitable treatment method for a specific skin, by distinguishing and diagnosing the skin condition of the individual such as skin sensitivity, and analyzing the cause thereof.
종래에는 민감성 피부 진단 및 원인 분석을 피부 미용 및 행태 설문 조사 분석을 통하여 실제 소비자를 진단함으로써 수행되었다. 그러나 설문 진단만으로 민감성 피부의 특성을 파악하기에는 경향성은 파악할 수 있으나 정확도가 떨어지는 어려움이 있다. In the past, the diagnosis of the sensitive skin and the cause analysis were performed by diagnosing the actual consumer through analysis of the skin beauty and behavior survey. However, there is a tendency that the tendency to detect the characteristics of sensitive skin can be grasped only by the questionnaire diagnosis, but the accuracy is low.
이러한 배경하에서 본 발명자들은 피부의 지질, 아미노산, 아미노산 대사체의 함량을 분석하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 키트 및 방법을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Under these circumstances, the present inventors have completed the present invention by confirming the kit and method for determining the degree of sensitivity of skin by analyzing the contents of lipids, amino acids, and amino acid metabolites of skin.
일 측면에서, 본 발명의 목적은, 피부 민감성 정도 측정용 키트를 제공하는 것이다.In one aspect, an object of the present invention is to provide a kit for measuring the degree of skin sensitivity.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.In another aspect, an object of the present invention is to provide a method for providing information necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the skin.
일 측면에서, 본 발명은, 피부 민감성 정도 측정용 키트로서, 상기 키트는, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하는 세라마이드 측정부를 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트를 제공한다.In one aspect, the present invention provides a kit for measuring the degree of skin sensitivity, the kit comprising a ceramide measuring part for measuring a ceramide content of a target skin, wherein the ceramide comprises C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP, A kit for measuring the degree of skin sensitivity is provided.
다른 측면에서 본 발명은, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것을 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention is directed to a method for determining the degree of sensitivity of a skin based on the measured content by measuring a ceramide content of a subject skin, wherein the ceramide comprises C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP And provides a method for providing information necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the subject.
일 측면에 있어서, 본 발명의 대상 피부에서 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량을 측정하고, 상기 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 측정하는 경우 우수한 판별력으로 피부의 민감성 정도를 측정할 수 있는 효과가 있다.In one aspect, the content of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP in the subject skin of the present invention is measured and the degree of sensitivity of the skin is determined based on the contents of the ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP And the degree of sensitivity of the skin can be measured with excellent discriminating power.
도 1은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 18종의 아미노산 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 2은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 4종의 아미노산 대사체 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 3은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 5종의 세라마이드 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 4은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 11종의 지방산 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 5은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 콜레스테롤 함량에 대한 세라마이드 함량의 비율(세라마이드/콜레스테롤)의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 6은, 민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명의 피부 각질에 포함된 아미노산, 아미노산 대사체, 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤 함량을 기초로 주성분 분석법(PCA)을 수행한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은, 민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명의 주성분 1(지질 PC1) 및 주성분 2(지질 PC2)의 산점도이다(1: 민감성 패널, 2: 비민감성 패널).1 is a graph showing the mean of the total content of 18 amino acids in each of 29 non-sensitive panels and 28 sensitive panels (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 2 is a graph showing the mean of the total content of four amino acid metabolites of each of 29 non-sensitive panels and 28 sensitive panels (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
3 is a graph showing the average of the total content of five ceramides of 29 non-sensitive panels and 28 sensitive panels, respectively (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
FIG. 4 is a graph showing the mean of the total fatty acid content of eleven species of each of 29 non-sensitive panels and 28 sensitive panels (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 5 is a graph (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel) showing the average of the ratio of ceramide content (ceramide / cholesterol) to the cholesterol content of each of 29 non-sensitive panels and 28 sensitive panels.
FIG. 6 is a graph showing the results of principal component analysis (PCA) performed on the basis of the amino acid, amino acid metabolism, ceramide, fatty acid and cholesterol content of 28 skin members of the sensitive panel and 29 skin members of the non-sensitive panel 29.
7 is a scatter plot (1: sensitive panel, 2: non-sensitive panel) of 28 sensitive members and non-sensitive panel 29 principal component 1 (lipid PC1) and main component 2 (lipid PC2).
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 세라마이드는 각질을 구성하는 주요 지질 성분으로서 피부의 보습능 형성과 피부 장벽 질환 발생에 중요한 역할을 한다. 세라마이드는 스핑고신 또는 파이토스핑고신에 지방산이 연결되어 있는 구조를 가지고 있는 스핑고 지질의 일종으로 피부 각질층을 구성하는 각질 세포간 지질 중 약 40~50% 이상을 차지하며 각질층의 구조 형성이나 기능을 나타내는데 필수적인 성분으로 각질층에서 수분증발을 억제하는 지질 장벽 역할과 각질층의 정연한 구조를 유지하게 하는 기능을 하고 있다. 세라마이드는 디하이드로스핑고신, 스핑고신, 피토스핑고신, 6-하이드록시스핑고신 등의 스핑고신 베이스와 비하이드록시 지방산, α-하이드록시 지방산, 에스테르-결합 ω-하이드록시 지방산 등의 지방산이 결합하여 형성된다. 이렇게 다양한 스핑고신 베이스와 지방산류들이 결합하여 세라마이드를 구성하기 때문에 다양한 계열의 세라마이드가 각질층에 존재할 수 있다. The ceramide of the present invention is a major lipid component constituting keratin and plays an important role in the formation of moisturizing function of the skin and the occurrence of skin barrier diseases. Ceramide is a type of sphingoid lipid that has a structure in which fatty acids are linked to sphingosine or phytosphingosine. It accounts for about 40 ~ 50% of the intercellular lipid constituting the skin stratum corneum and is essential for showing the structure and function of the stratum corneum It acts as a lipid barrier to inhibit water evaporation in the stratum corneum and maintains a square structure of the stratum corneum. The ceramide may be selected from the group consisting of sphingosine bases such as dihydrophosphingosine, sphingosine, phytosphingosine, 6-hydroxysingin and the like, and nonhydroxy fatty acids,? -Hydroxy fatty acids and ester-linked? -Hydroxy fatty acids Fatty acids. Since various sphingosine bases and fatty acids are combined to form ceramides, various types of ceramides may exist in the stratum corneum.
본 발명의 세라마이드는 NDS 계열, NS 계열, NP 계열, AP 계열 및 AS 계열을 포함할 수 있다. 상기 세라마이드 NDS 계열은 C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS 및 C32_NDS을 포함할 수 있고, 상기 세라마이드 NS 계열은 C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS 및 C28_NS을 포함할 수 있고, 상기 세라마이드 NP 계열은 C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP 및 C32_NP을 포함할 수 있으며, 세라마이드 AP 계열은 C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP 및 C32_AP을 포함할 수 있고, 상기 세라마이드 AS 계열은 C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS 및 C30_AS를 포함할 수 있다.The ceramide of the present invention may include NDS series, NS series, NP series, AP series and AS series. The ceramide NDS series may include C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS, and C28_NS, which may include C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS and C32_NDS. And the ceramide NP series may include C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C20_NP, C20_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP and C32_NP. C30_AP, and C32_AP, and the ceramide AS sequence may include C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS and C30_AS.
일 측면에서, 본 발명은 피부 민감성 정도 측정용 키트로서, 상기 키트는, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하는 세라마이드 측정부를 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트를 제공한다.In one aspect, the present invention is a kit for measuring the degree of skin sensitivity, the kit comprising a ceramide measuring unit for measuring a ceramide content of a target skin, the ceramide comprising C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP And provides a kit for measuring the degree of sensitivity.
상기 세라마이드 측정부는 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정할 수 있는 정량 장치라면 제한 없이 사용될 수 있으며, 구체적으로 크로마토그래피/질량분석기일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 크로마토그래피는 액체 크로마토그래피(Liquid Chromatography, LC), 가스 크로마토그래피(Gas Chromatography), 액체-고체 크로마토그래피(Liquid-Solid Chromatography, LSC), 종이 크로마토그래피(Paper Chromatography, PC), 박층 크로마토그래피(Thin-Layer Chromatography, TLC), 기체-고체 크로마토그래피(Gas-Solid Chromatography, GSC), 액체-액체 크로마토그래피(Liquid-Liquid Chromatography, LLC), 포말 크로마토그래피(Foam Chromatography, FC), 유화 크로마토그래피(Emulsion Chromatography, EC), 기체-액체 크로마토그래피(Gas-Liquid Chromatography, GLC), 이온 크로마토그래피(Ion Chromatography, IC), 겔 여과 크로마토그래피(Gel Filtration Chromatograhy, GFC) 또는 겔 투과 크로마토그래피(Gel Permeation Chromatography, GPC)를 포함하나, 이에 제한되지 않고 당업계에서 통상적으로 사용되는 모든 정량용 크로마토그래피를 사용할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명에서 이용되는 크로마토그래피는 액체 크로마토그래피일 수 있으며, 본 발명에서 이용되는 질량분석기는 LC-MS일 수 있다.The ceramide measuring unit can be used without limitation as long as it is a quantitative device capable of measuring the ceramide content of the target skin, and can be specifically a chromatography / mass spectrometer. Chromatography used in the present invention can be carried out by liquid chromatography (LC), gas chromatography, Liquid-Solid Chromatography (LSC), paper chromatography (PC) (TLC), Gas-Solid Chromatography (GSC), Liquid-Liquid Chromatography (LLC), Foam Chromatography (FC) (GLC), ion chromatography (IC), Gel Filtration Chromatography (GFC), or gel permeation chromatography But not limited to, Gel Permeation Chromatography (GPC), all chromatographic chromatography It can be used. Specifically, the chromatography used in the present invention may be liquid chromatography, and the mass analyzer used in the present invention may be LC-MS.
본 발명의 피부 민감성 정도 측정용 키트는 상기 세라마이드 측정부를 통해 측정된 각 세라마이드 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 결과 제시부를 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 결과 제시부는 하기 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 각각 계산하고 그에 따라 피부 만감성 정도를 판별하는 것일 수 있다.The kit for measuring skin sensitivity of the present invention may further include a result presentation unit for presenting a sensitivity result value determined based on each of the ceramide contents measured through the ceramide measurement unit. In addition, the result presentation unit may calculate the following sensitivity function value and non-sensitive function value, respectively, and determine the degree of skin sensitivity.
상기 민감성 함수는 Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28이고, 상기 비민감성 함수는 NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 이다. 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이다. The non-sensitive function is NSc + NSc 16 x C 16 + Sc 16 x C 16 + Sc 22 x C 22 + Sc 24 x C 24 + Sc 26 x C 26 + Sc 28 x C 28 . NSc 22 x C 22 + NSc 24 x C 24 + NSc 24 x C 26 + NSc 24 x C 28 . In the sensitivity function and the non-sensitive function C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 the amount of ceramide C22_NP, C 24 is the content of the content, C 26 of ceramide C24_NP is Ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP.
상기 민감성 함수에서 Sc는 -4.12535 내지 -2.53265이고, Sc16은 0.7437 내지 0.7907 이고, Sc22는 -0.01255 내지 0.03935이고, Sc24는 0.0339 내지 0.1517이고, Sc26은 -0.4386 내지 -0.078이고, Sc28은 0.0408 내지 0.2362이며, 상기 비민감성 함수에서 NSc는 -5.71805 내지 -4.12535이고, NSc16은 0.6967 내지 0.7437이고, NSc22는 0.03935 내지 0.09125이고, NSc24는 -0.0839 내지 0.0339이고, NSc26은 -0.078 내지 0.2826이고, NSc28은 -0.1546 내지 0.0408일 수 있다. 구체적으로, 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 Sc, Sc16, Sc22, Sc24, Sc26, Sc28, NSc, NSc16, NSc22, NSc24, NSc26 및 NSc28는 각각 하기 식 1 내지 12를 각각 동시에 만족하는 값이거나, 또는 하기 식 13 내지 24를 각각 동시에 만족하는 값일 수 있으며, 하기 수식에서 n은 2 이상의 자연수일 수 있고, 구체적으로는 2 이상 1016의 자연수일 수 있다.In the above sensitivity function, Sc is -4.12535 to -2.53265, Sc 16 is 0.7437 to 0.7907, Sc 22 is -0.01255 to 0.03935, Sc 24 is 0.0339 to 0.1517, Sc 26 is -0.4386 to -0.078, Sc 28 The NSc in the non-sensitive function is -5.71805 to -4.12535, the NSc 16 is 0.6967 to 0.7437, the NSc 22 is 0.03935 to 0.09125, the NSc 24 is -0.0839 to 0.0339, the NSc 26 is -0.078 To 0.2826, and NSc 28 may be from -0.1546 to 0.0408. Specifically, Sc, Sc 16 , Sc 22 , Sc 24 , Sc 26 , Sc 28 , NSc, NSc 16 , NSc 22 , NSc 24 , NSc 26 and NSc 28 in the above sensitivity function and non- 12, respectively, or a value that simultaneously satisfies the following equations (13) to (24). In the following mathematical expression, n may be a natural number of 2 or more, and may be a natural number of 2 or more and 10 16 .
[식 1][Formula 1]
[식 2][Formula 2]
[식 3][Formula 3]
[식 4][Formula 4]
[식 5][Formula 5]
[식 6][Formula 6]
[식 7][Equation 7]
[식 8][Equation 8]
[식 9][Equation 9]
[식 10][Equation 10]
[식 11][Equation 11]
[식 12][Equation 12]
[식 13][Formula 13]
[식 14][Equation 14]
[식 15][Formula 15]
[식 16][Formula 16]
[식 17][Formula 17]
[식 18][Formula 18]
[식 19][Formula 19]
[식 20][Formula 20]
[식 21][Formula 21]
[식 22][Formula 22]
[식 23][Equation 23]
[식 24][Equation 24]
보다 구체적으로 상기 민감성 함수에서 Sc는 -3.329이고, Sc16은 0.7672 이고, Sc22는 0.0134이고, Sc24는 0.0928이고, Sc26은 -0.2583이고, Sc28은 0.1385이며, 상기 비민감성 함수에서 NSc는 -4.9217이고, NSc16은 0.7202이고, NSc22는 0.0653이고, NSc24는 -0.025이고, NSc26은 0.1023이고, NSc28은 -0.0569일 수 있다.More specifically, in the sensitivity function, Sc is -3.329, Sc 16 is 0.7672, Sc 22 is 0.0134, Sc 24 is 0.0928, Sc 26 is -0.2583, Sc 28 is 0.1385, and the non-sensitive function NSc Is -4.9217, NSc 16 is 0.7202, NSc 22 is 0.0653, NSc 24 is -0.025, NSc 26 is 0.1023, and NSc 28 is -0.0569.
상기 결과 제시부는 상기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면 민감성 피부로 판별하고, 상기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면 비민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 예로서, 제1 대상 피부의 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP 함량을 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에 각각 대입하여 각각의 함수값을 계산한 결과 민감성 함수값이 -4.4699, 비민감성 함수값이 6.7640으로 계산되면, 상기 제1 대상 피부는 상기 결과 제시부에 비민감성 피부로 판별된다. 또 다른 예로서, 제2 대상 피부의 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP 함량을 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에 각각 대입하여 각각의 함수값을 계산한 결과 민감성 함수값이 5.2654, 비민감성 함수값이 -1.7951로 계산되면, 상기 제2 대상 피부는 상기 결과 제시부에 민감성 피부로 판별된다.The result presentation unit may discriminate the sensitive function value as a sensitive skin if the sensitivity function value is larger than the non-sensitive function value and discriminate it as a non-sensitive skin if the non-sensitive function value is larger than the sensitivity function value. For example, when the measured values of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP of the first target skin were substituted into the sensitivity function and the non-sensitive function, respectively, the sensitivity function value was -4.4699, If the function value is calculated to be 6.7640, the first target skin is determined to be non-sensitive skin in the result presentation unit. As another example, the measured values of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP of the second target skin were substituted into the sensitivity function and the non-sensitive function, respectively. As a result, the sensitivity function value was 5.2654 If the sensitivity function value is calculated as -1.7951, the second target skin is discriminated as a sensitive skin in the result presentation portion.
본 발명의 피부 민감성 정도 측정용 키트는 대상 피부의 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 함량을 측정하는 제2측정부를 더 포함할 수 있으며, 상기 제2 세라마이드는 세라마이드 NDS 계열, 세라마이드 NS 계열, 세라마이드 NP 계열, 세라마이드 AP 계열 및 세라마이드 AS 계열로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 세라마이드일 수 있다.The kit for measuring skin sensitivity of the present invention may further comprise a second measurement unit for measuring a content of at least one selected from the group consisting of amino acids, amino acid metabolites, second ceramides, fatty acids and cholesterol of the target skin, The ceramide may be one or more ceramides selected from the group consisting of ceramide NDS series, ceramide NS series, ceramide NP series, ceramide AP series and ceramide AS series.
상기 아미노산은 히스티딘, 아스파라긴, 세린, 글루타민, 아르기닌, 글리신, 아스파르트산, 글루탐산, 트레오닌, 알라닌, 프롤린, 리신, 티로신, 발린, 류신, 이소류신, 페닐알라닌 또는 트립토판일 수 있다. 상기 아미노산 대사체는 피로글루탐산(pyroglutamic acid), 시스-유로카닌 산(cis-urocanic acid), 티-유로카닌 산(t-urocanic acid) 또는 시트룰린(citrulline)일 수 있다. 상기 제2 세라마이드는 세라마이드 NDS 계열, 세라마이드 NS 계열, 세라마이드 NP 계열, 세라마이드 AP 계열 또는 세라마이드 AS 계열일 수 있다. 구체적으로, 상기 세라마이드 NDS 계열은 C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS 또는 C32_NDS일 수 있고, 상기 세라마이드 NS 계열은 C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS 또는 C28_NS일 수 있고, 상기 세라마이드 NP 계열은 C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP 또는 C32_NP일 수 있고, 상기 세라마이드 AP 계열은 C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP 또는 C32_AP일 수 있으며, 상기 세라마이드 AS 계열은 C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS 또는 C30_AS일 수 있다. 상기 지방산은 지방산 C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16:1FA, C18:2FA, C18:1FA, C22:1FA 또는 C24:1FA일 수 있다.The amino acid may be histidine, asparagine, serine, glutamine, arginine, glycine, aspartic acid, glutamic acid, threonine, alanine, proline, lysine, tyrosine, valine, leucine, isoleucine, phenylalanine or tryptophan. The amino acid metabolite may be pyroglutamic acid, cis-urocanic acid, t-urocanic acid or citrulline. The second ceramide may be ceramide NDS series, ceramide NS series, ceramide NP series, ceramide AP series, or ceramide AS series. Specifically, the ceramide NDS series may be C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS, or C28_NS, C16_NDS, C20_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS, And the ceramide NP sequence may be C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP or C32_NP, or the ceramide NP sequence may be C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP or C32_NP C32_AP, and the ceramide AS sequence may be C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS or C30_AS. The fatty acids may be fatty acids C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16: 1FA, C18: 2FA, C18: 1FA, C22: 1FA or C24: 1FA.
본 발명의 피부 민감성 정도 측정용 키트는 상기 제2 측정부를 통해 측정된 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 제2결과 제시부를 더 포함할 수 있다. 상기 제2결과 제시부는 상기 제1결과 제시부와 통합된 것일 수 있다.The kit for measuring skin sensitivity of the present invention may further comprise a sensitivity degree determination value determined based on at least one content selected from the group consisting of amino acid, amino acid metabolism, second ceramide, fatty acid and cholesterol measured through the second measurement unit And a second result presentation unit for presenting the second result. The second result presentation unit may be integrated with the first result presentation unit.
상기 제2결과 제시부는 비민감성 피부에 비하여 아미노산 총 중량(μg/mg protein)이 8% 이상 더 적거나, 아미노산 대사체 총 중량(μg/mg protein)이 27% 이상 더 적거나, 제2 세라마이드 총 중량(μg/mg protein)이 29% 이상 더 적거나, 지방산 총 중량(μg/mg protein)이 9% 이상 더 적거나, 또는 콜레스테롤에 대한 세라마이드의 비율이 9% 이상 더 적으면 민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 상기 비민감성 피부는 민감 피부의 성질을 나타내지 않는 건강하고 정상적인 피부로서, UV 빛, 열, 추위, 화학 약품(chemicals), 또는 피부 제형의 활성 성분들 등과 같은 자극에 노출되었을 때 피부가 홍조(flushing), 붉어짐(reddening), 또는 얼굴 붉어(blushing)지려는 경향을 가지지 않는 상태인 정상피부를 말한다. 구체적으로, 다수의 피험자의 피부 각질을 동일한 방법으로 동일 압력, 시간, 및 횟수로 채취하여 동일한 추출 조건 하에서 추출된 아미노산, 아미노산 대사체, 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤의 각각의 함량을 측정한 결과, 비민감성으로 분류되는 피부의 각 성분 함량 범위에 속하는 피부일 수 있다. 상기 제2결과 제시부에서 총 아미노산, 총 아미노산 대사체, 총 세라마이드, 총 지방산, 콜레스테롤 각각의 중량은 피부 각질 채취용 스트리핑 테이프(상표명: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, 제조사: CUDERM, Disc: 0.875 in. diameter (22.0 mm))를 이용하여 D500 D-squame Disc Applicator(상표명: D500 - D-Squame Pressure Instrument, 제조사: CUDERM, 압력: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm. Pressure Area: 7/8 in. (22.24 mm))로 회당 1초간 얼굴 뺨 부위와 이마 부위의 피부에 부착한 후 떼어내는 테이프 스트리핑을 10회 반복하여 얻어지는 피부 각질로부터 동일한 추출 조건 하에서 추출된 각 성분의 중량일 수 있으며, 중량 단위는 μg/mg protein이다.The second result presentation unit may be configured such that the total amino acid weight (μg / mg protein) is less than 8%, the total amino acid metabolism weight (μg / mg protein) is less than 27% If the total weight (μg / mg protein) is less than 29%, the total weight of fatty acids (μg / mg protein) is less than 9%, or if the ratio of ceramide to cholesterol is less than 9% It may be to discriminate. The non-sensitive skin is a healthy, normal skin which does not show the property of sensitive skin. When the skin is flushed with exposure to stimuli such as UV light, heat, cold, chemicals, ), Reddening, or blushing of the skin. Specifically, the skin keratin contents of a large number of subjects were sampled at the same pressure, time, and frequency in the same manner, and the contents of extracted amino acids, amino acid metabolites, ceramides, fatty acids and cholesterol were measured under the same extraction conditions. It may be skin belonging to each component content range of skin classified as sensitive. The weight of each of the total amino acid, the total amino acid metabolism, the total ceramide, the total fatty acid and the cholesterol in the second result presentation unit was measured using a stripping tape (trade name: D-100-D-squame Standard Sampling Discs, manufactured by CUDERM, Disc Pressure Profile: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm.Pressure Area: 0.875 in. Diameter (22.0 mm)) using a D500 D-squame Disc Applicator (trade name: D500 - D- Squame Pressure Instrument, 7/8 in. (22.24 mm)) for one second per synapse, and then peeled off the skin by peeling off the tape and stripping it ten times. The weight of each component extracted under the same extraction conditions , And the weight unit is μg / mg protein.
본 발명은 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것을 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. 또한, 상기 방법은 상기 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 비교하여, 상기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면, 민감성 피부로 판별하고, 상기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면, 비민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 상기 세라마이드, C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP, 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것, 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수는 전술한 바와 같다.The present invention includes determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content by measuring the ceramide content of the subject skin, wherein the ceramide has a degree of sensitivity to the skin, including C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP Provides a way to provide the information needed to diagnose. The method further comprises comparing the sensitivity function value with a non-sensitivity function value, and if the sensitivity function value is larger than the non-sensitivity function value, discriminates the skin sensitive skin, and if the non-sensitivity function value is larger than the sensitivity function value, It can be discriminating as non-sensitive skin. The ceramide, C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP, to determine the degree of sensitivity of the skin based on the measured content, the sensitivity function and the non-sensitive function are as described above.
또한, 상기 방법은 대상 피부의 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 더 판별하는 것을 포함하고, 상기 제2 세라마이드는 세라마이드 NDS 계열, 세라마이드 NS 계열, 세라마이드 NP 계열, 세라마이드 AP 계열 및 세라마이드 AS 계열로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 세라마이드인 것인, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법일 수 있다. 또한, 상기 방법은 비민감성 피부에 비하여 아미노산 총 중량(μg/mg protein)이 8% 이상 더 적거나, 아미노산 대사체 총 중량(μg/mg protein)이 27% 이상 더 적거나, 제2 세라마이드 총 중량(μg/mg protein)이 29% 이상 더 적거나, 지방산 총 중량(μg/mg protein)이 9% 이상 더 적거나, 또는 콜레스테롤에 대한 세라마이드의 비율이 9% 이상 더 적으면 민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 상기 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산, 콜레스테롤, 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 더 판별하는 것, 정상피부와 비교하여 민감성 피부 또는 비민감성 피부로 판별하는 것은 전술한 바와 같다.The method may further comprise determining the level of at least one selected from the group consisting of amino acids, amino acid metabolites, second ceramides, fatty acids and cholesterol of the target skin to further determine the degree of sensitivity of the skin based on the measured content , And the second ceramide is at least one ceramide selected from the group consisting of ceramide NDS series, ceramide NS series, ceramide NP series, ceramide AP series and ceramide AS series. Lt; / RTI > In addition, the method may further comprise administering to the skin a composition comprising less than 8% total amino acid total weight (μg / mg protein), less than 27% total amino acid metabolite weight (μg / mg protein) If it is less than 29% by weight (μg / mg protein), less than 9% by weight of total fatty acids (μg / mg protein), or less than 9% by weight of ceramide for cholesterol, . Further discrimination of the degree of sensitivity of the skin based on the amino acid, amino acid metabolism, secondary ceramide, fatty acid, cholesterol, and the measured content, discrimination as sensitive skin or non-sensitive skin as compared to normal skin, same.
이하, 본 발명을 하기의 실시예를 통하여 설명한다. 하기 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described with reference to the following examples. The following examples are provided for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope and scope of the present invention in order to facilitate understanding of the present invention.
[실시예 1] 민감성 패널 및 비민감성 패널 선정[Example 1] Selection of sensitive panel and non-sensitive panel
중국 상해 지역에 5년 이상 거주하고 있는 45세 미만 성인 여성 253명을 대상으로 하기의 설문조사 방법(실시예 1-1), 피부 일차 자극시험(실시예 1-2) 및 자극감 시험(실시예 1-3)을 수행하여 민감성 패널 및 비민감성 패널을 선정하였다.A total of 253 adult women under the age of 45 living in Shanghai, China, who had been living in Shanghai for 5 years or more, were evaluated by the following survey method (Example 1-1), skin primary stimulation test (Example 1-2) 1-3) were performed to select sensitive panels and non-sensitive panels.
[실시예 1-1] 설문조사[Example 1-1] Survey
대한민국 특허 공개공보 10-2002-0040283의 민감성 피부 진단 방법에 따라 상기 특허문헌의 민감성 진단 설문 데이터를 이용하여 민감성 패널 및 비민감성 패널을 선정하였다. 구체적으로 보편적인 현상 관련 질문(화장품 트러블, 광민감 및 광염증, 피부 두께, 피부 알레르기, 피부 변화)과 원인 및 현상 관련 질문(화장품 관련문항 15문항, 선천성 및 가족력 관련 14문항, 환경 요인 관련 9문항, 생활 습관 및 기타 관련 10문항)에 대한 내용을 기반으로 점수화하여 가중치 부여함으로써 민감성 피부를 비민감, 약간 민감, 민감한 편, 매우 민감으로 분류하였으며, 이를 바탕으로 민감성 패널과 비민감성 패널을 분류하였다.Sensitive panels and non-sensitive panels were selected using the sensitivity diagnostic questionnaire data of the above patent literature according to the method of diagnosing sensitive skin of Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2002-0040283. Specifically, questions related to cosmetic problems (cosmetic troubles, light sensitivity and light irritation, skin thickness, skin allergy, skin changes) and causes and phenomena (15 questions on cosmetics, 14 questions on congenital and family history, Sensitive, sensitive, sensitive, and highly sensitive, and classified sensitive and non-sensitive panels based on their scores and weighting based on the content of the questionnaire, Respectively.
[실시예 1-2] 피부 일차 자극시험[Example 1-2] Skin primary stimulation test
피부 자극 유발도를 평가하여 민감성/비민감성 패널을 선정하기 위해 단회 밀폐 첩포 시험을 하기와 같이 수행하였다. 먼저 시험 대상자의 등 부위를 70% 에탄올로 닦아내고 완전히 건조시킨 후, 0.3%의 소듐 라우릴 설페이트(Sodium Lauryl Sulfate)를 24시간 동안 단회 밀폐 첩포하고, 첩포를 제거한 후, 30분, 24시간이 경과하였을 때 시험 부위를 관찰하였다. CTFA guideline을 응용하여 Frosch & Kligman의 고안된 측정 평가법으로 자극 정도를 평가 및 분석하고, 민감성 패널과 비민감성 패널을 분류하였다.A single hermetically sealed patch test was performed as follows to evaluate the skin irritation induction and to select the sensitive / non-sensitive panel. First, the back part of the test subject was wiped with 70% ethanol and completely dried. Then 0.3% of sodium lauryl sulfate was applied for 24 hours, and the pellet was removed. After 30 minutes and 24 hours The test site was observed. The CTFA guideline was applied to assess and analyze the degree of stimulation by Frosch & Kligman 's designed measurement and evaluation method, and to classify sensitive panel and non - sensitive panel.
[실시예 1-3] 자극감 시험[Example 1-3] Stimuli sensation test
자극감 유발 시료로 5%의 젖산 용액을, 대조시료로 증류수를 이용하여 2회 자극감 시험을 수행하였다. 각 테스트에서 각각 상기 자극감 유발 시료 및 대조시료 1.5mL을 시험 대상자에게 좌우 눈밑 피부에 2회씩 동시에 문지르게 하였다. 그런 다음, 따가움, 화끈거림, 가려움, 눈시림 등에 대한 4가지 느낌에 대하여 0점(느낌 없음)부터 3점(매우 심함)까지의 점수를 9분 동안(최초 10초) 1분 간격으로 평가하고 각 피험자의 측정 시간에 따른 자극감 점수의 평균 수치를 분석하여, 민감성 패널과 비민감성 패널을 분류하였다.A 5% lactic acid solution was used as a stimuli-sensitive sample, and an irritation test was performed twice using distilled water as a control sample. In each test, 1.5 mL of the stimulus-inducing sample and the control sample were simultaneously rubbed twice on the left and right subcutaneous tissues of the subject. Then, scores of 0 (no feeling) to 3 (very severe) were evaluated for 9 minutes (first 10 seconds) at 1 minute intervals for the four senses of burning, burning, itching, Sensitivity panel and non-sensitive panel were classified by analyzing average value of stimulation score according to measurement time of each subject.
상기 실시예 1-1 내지 실시예 1-3 모두에서 민감성 패널로 분류된 28명의 민감성 패널과 상기 실시예 1-1 내지 실시예 1-3 모두에서 비민감성 패널로 분류된 29명의 비민감성 패널을 포함하는 총 57명을 대상으로 아미노산, 아미노산 대사체, 세라마이드, 지방산, 콜레스테롤 함량을 분석하였다.28 sensitive panels classified as sensitive panels in Examples 1-1 through 1-3 and 29 non-sensitive panels classified as non-sensitive panels in Examples 1-1 through 1-3, The amino acid, amino acid metabolism, ceramide, fatty acid and cholesterol contents were analyzed.
[실시예 2] 피부 각질 채취[Example 2] Skin keratin extraction
실시예 1에서 선정된 민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명을 대상으로 피부 각질 채취용 스트리핑 테이프(상표명: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, 제조사: CUDERM, Disc: 0.875 in. diameter (22.0 mm))를 이용하여 얼굴 뺨 부위와 이마 부위에서 피부 각질을 채취하였다. 구체적으로, D500 D-squame Disc Applicator(상표명: D500 - D-Squame Pressure Instrument, 제조사: CUDERM, 압력: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm. Pressure Area: 7/8 in. (22.24 mm))로 회당 1초간 피부에 부착한 후 떼어내는 테이프 스트리핑을 10회 반복하여 57명 각각의 피부 각질을 수득하였다.28 sensitive panels and 29 non-sensitive panels selected in Example 1 were subjected to stripping tape (trade name: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, manufacturer: CUDERM, Disc: 0.875 in. 22.0 mm)) was used to collect skin keratin from the cheek area and forehead area. Specifically, a D500 D-squame Disc Applicator (trade name: D500-D-Squame Pressure Instrument, manufactured by CUDERM, Pressure Applied: 225 gr./sq.cm.Press Area: 7/8 in. To the skin for one second per synapse, and stripping of the tape was repeated ten times to obtain 57 skin hairs of each person.
[실시예 3] 성분 분석[Example 3] Component analysis
[실시예 3-1] 아미노산 및 아미노산 대사체 분석[Example 3-1] Analysis of amino acids and amino acid metabolites
(1) 단백질 정량 분석(1) Quantitative analysis of protein
상기 실시예 2에서 연속적으로 채취한 각질 채취용 스트리핑 테이프 5장을 각각 반으로 잘라 20 mL 유리 바이알에 넣고 PBS 버퍼에 0.1%(w/v) 도데실 황산 나트륨/2%(w/v) 프로필렌 글리콜이 되도록 제조한 용액 1 mL를 넣어 실온에서 60분간 초음파 추출하였다. PierceTM BCA Protein Assay Kit를 사용하여 제조원의 실험방법에 따라 시료 및 표준액을 준비하여 단백질 정량을 분석하였다.Five stripping strips for keratin harvesting in Example 2 were cut in half and placed in 20 mL glass vials. To the PBS buffer, 0.1% (w / v) sodium dodecyl sulfate / 2% (w / v) propylene 1 mL of the solution prepared to be glycol was added and ultrasonically extracted at room temperature for 60 minutes. Using the Pierce TM BCA Protein Assay Kit, samples and standard solutions were prepared according to the manufacturer's test method and protein quantification was analyzed.
(2) 아미노산 분석(2) Analysis of amino acids
상기 (1)에서 추출한 시료 중 일부를 원심분리(12,000 rpm, 4℃, 5분)하여 상등액을 검액으로 사용하였다. 18종의 아미노산을 0.5 ~ 50 ㎍/mL 범위에서 6개 농도로 각각 만들어 표준액을 준비하였다. 상기 표준액 및 검액을 20 μL씩 취하여 HPLC 바이알에 넣고 AccQ-Tag amino acids derivatization kit의 유도체화 시액 중 보퍼레이트 버퍼 70 μL, 밀 시약(Flour reagent) 2A 20 μL를 넣어 잘 흔들어 섞고 1분간 실온에 방치한 뒤 55℃에서 10분간 반응시켜 형광 유도체화 후 UPLC-PDA로 분석하였다. 분석 컬럼은 ACQUITY UPLC AccQ-Tag Ultra C18 컬럼(2.1 × 100 mm, 1.7 μm)을 사용하였으며 이동상은 AccQ-Tag Ultra Eluent A, B를 이용하여 농도구배조건으로 하기의 분석 조건 하에서 분석하였으며, 이동상은 하기 표 1에 나타내었다.A portion of the sample extracted in (1) above was centrifuged (12,000 rpm, 4 ° C, 5 minutes) and the supernatant was used as the sample solution. Sixteen kinds of 18 kinds of amino acids were prepared in the range of 0.5 ~ 50 ㎍ / mL and standard solutions were prepared. Add 20 μL of the standard solution and the sample solution to the HPLC vial, add 70 μL of the Beaporate buffer and 20 μL of Flour reagent 2A in the derivatization solution of the AccQ-Tag amino acids derivatization kit, shake well and allow to stand at room temperature for 1 minute And then reacted at 55 ° C for 10 minutes. After fluorescence derivatization, the reaction was analyzed by UPLC-PDA. The analytical column was analyzed using the ACQUITY UPLC AccQ-Tag Ultra C18 column (2.1 × 100 mm, 1.7 μm) and the mobile phase was analyzed under the following analytical conditions with concentration gradient conditions using AccQ-Tag Ultra Eluent A, The results are shown in Table 1 below.
<UPLC-PDA 분석 조건>≪ UPLC-PDA analysis condition >
유속 : 0.7 mL/minFlow rate: 0.7 mL / min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55 ° C
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 20 ℃Autosampler tray Temperature: 20 ° C
주입량 : 1 μLInjection volume: 1 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 10% 아세토나이트릴Weak needle wash: 10% acetonitrile < RTI ID = 0.0 >
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 70% 아세토나이트릴Strong needle wash: 70% acetonitrile < RTI ID = 0.0 >
이동상 : A는 AccQ-Tag Ultra Eluent A(버퍼), B는 AccQ-Tag Ultra Eluent B(아세토나이트릴 중 1 % 포름산)Mobile phase: A is AccQ-Tag Ultra Eluent A (buffer), B is AccQ-Tag Ultra Eluent B (1% formic acid in acetonitrile)
(3) 아미노산 대사체 분석(3) Analysis of amino acid metabolism
상기 (1)에서 추출한 시료 중 일부를 원심분리(12,000 rpm, 4℃, 5분)하여 상등액 20 μL을 취해 갈색 HPLC 바이알에 넣고 980 μL의 70 % 아세토나이트릴을 넣어 희석한 것을 검액으로 하였다. 표준품인 피로글루탐산(PCA, pyroglutamic acid), 시스-유로카닌 산(cis-UCA, cis-urocanic acid), 티-유로카닌 산(t-UCA, t-urocanic acid) 및 시트룰린(citrulline) 은 각각 1 mg/mL의 농도가 되도록 하여 물에 녹여 표준원액으로 하였다. 상기 4가지 표준원액을 혼합하여 혼합액 중 PCA는 5 ~ 500 ng/mL, cis-UCA 는 0.2 ~ 20 ng/mL, t-UCA는 0.5 ~ 50 ng/mL, 시트룰린은 5 ~ 500 ng/mL의 농도가 되게 70 % 아세토나이트릴로 희석하여 표준액으로 하였다. 준비된 표준액 및 검액은 LC-MS로 분석하였다. 이 때 분석 컬럼은 ACQUITY BEH Amide (2.1 mm X 100 mm, 1.7 mm)을 이용하여 유속 0.3 mL/min, 주입량 2 μL, 컬럼온도 40 ℃, 오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 4 ℃, 위크 니들 워시(Weak needle wash)로 70% 아세토나이트릴, 스트롱 니들 워시(Strong needle wash)로 10% 아세토나이트릴, 이동상으로 A는 물, B는 아세토나이트릴의 조건 하에서 분석하였으며, 이동상은 하기 표 2에 나타내었다. 또한, MS 분석 조건은 하기와 같다.A portion of the sample extracted in (1) above was centrifuged (12,000 rpm, 4 ° C, 5 minutes), and 20 μL of the supernatant was taken in a brown HPLC vial and diluted with 980 μL of 70% acetonitrile to prepare a sample solution. (TCA), cis-urocanic acid (TCA), t-urocanic acid (TCA), and citrulline (TCA) mg / mL, and dissolved in water to prepare a standard stock solution. The concentrations of PCA, cis-UCA and t-UCA were 0.5 to 50 ng / mL and 5 to 500 ng / mL, respectively. The mixture was diluted with 70% acetonitrile to give a standard solution. The prepared standard and test solutions were analyzed by LC-MS. At this time, the analytical column was analyzed with ACQUITY BEH Amide (2.1 mm × 100 mm, 1.7 mm) at a flow rate of 0.3 mL / min, an injection volume of 2 μL, a column temperature of 40 ° C., an autosampler tray temperature of 4 ° C., 10% acetonitrile with 70% acetonitrile, Strong needle wash with a weak needle wash, A with water and B with acetonitrile under the conditions of mobile phase, mobile phase, Respectively. The MS analysis conditions are as follows.
<MS 분석 조건><MS analysis condition>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS apparatus: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : ESI 양성 이온 모드Ionization mode: ESI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150 ° C
탈용매 온도 : 350 ℃Desolvation temperature: 350 DEG C
탈용매 가스 유량 : 550 L/hDesolvation gas flow rate: 550 L / h
모세관 전압(Capillay) : 3.5 kVCapillary voltage (Capillay): 3.5 kV
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: multiple reaction monitoring (MRM)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 (2) 및 (3)에서 분석된 아미노산은 히스티딘, 아스파라긴, 세린, 글루타민, 아르기닌, 글리신, 아스파르트산, 글루탐산, 트레오닌, 알라닌, 프롤린, 리신, 티로신, 발린, 류신, 이소류신, 페닐알라닌 및 트립토판으로 총 18종이며, 아미노산 대사체는 피로글루탐산(pyroglutamic acid), 시스-유로카닌 산(cis-urocanic acid), 티-유로카닌 산(t-urocanic acid) 및 시트룰린(citrulline)으로 총 4종이다.The amino acids analyzed in (2) and (3) are histidine, asparagine, serine, glutamine, arginine, glycine, aspartic acid, glutamic acid, threonine, alanine, proline, lysine, tyrosine, valine, leucine, isoleucine, phenylalanine and tryptophan There are a total of 18 kinds of amino acid metabolites: pyroglutamic acid, cis-urocanic acid, t-urocanic acid and citrulline.
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 아미노산 총 함량(μg/mg protein)과 아미노산 대사체 총 함량(μg/mg protein)을 도출하였으며, 민감성 패널 28명의 아미노산 총 함량의 평균 및 아미노산 대사체 총 함량의 평균을 계산하고, 비민감성 패널 29명 역시 아미노산 총 함량의 평균 및 아미노산 대사체 총 함량의 평균을 계산하여 그 결과를 각각 도 1 및 도 2에 나타내었다.The total amino acid content (μg / mg protein) and the total amino acid metabolite content (μg / mg protein) contained in the skin of each of the 28 sensitive panel and 29 non-sensitive panel of Example 2 were derived from the above analysis, The average of the total amino acid contents and the total amino acid metabolite contents of 28 non-sensitive panel members were calculated and the average of the total amino acid content and the total amino acid metabolite content of the non-sensitive panel were also calculated. The results are shown in FIGS. 1 and 2 Respectively.
도 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 18종의 아미노산 및 4종의 아미노산 대사체 함량을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 총 18종의 아미노산과 총 4종의 아미노산 대사체를 각각 약 8% 이상, 약 27% 이상 더 많이 함유하고 있음을 확인하였다.As shown in FIGS. 1 and 2, the contents of 18 amino acids and 4 amino acid metabolites in each of the sensitive panel and the non-sensitive panel were examined. As a result, non-sensitive skin contained 18 amino acids and 4 And more than about 8% and about 27%, respectively, of the amino acid metabolites of the species.
[실시예 3-2] 세라마이드 분석[Example 3-2] Ceramide analysis
상기 실시예 3-1에서 아미노산 및 아미노산 대사체 분석 후 남은 나머지 각 반장씩의 테이프를 메탄올/에틸아세테이트(2:1) 용매 3 mL가 담긴 20 mL 바이알에 넣어 15분간 초음파 추출하였다. 추출액을 PTFE syringe filter(0.45 um, 13 mm)로 필터하여 필터액 1 mL를 1.5 mL 마이크로튜브에 옮겨 SpeedvacTM(40분, 40 ℃)에 증발시킨 후 다시 필터액 1 mL를 취하여 같은 조건에서 다시 증발시켜 총 2 mL의 시료를 건조시켰다. 그런 다음 상기 추출된 지질을 클로로포름/메탄올 혼합액(2:1) 300 μL에 녹인 후 원심분리(12,000 rpm, 4 ℃, 5분)하여 상등액 중 200 μL을 취하여 검액으로 사용하였다. 각 세라마이드 표준품(CER-NP (nonhydroxy fatty acid conjugated to phytosphingosine), CER-NDS (nonhydroxy fatty acid conjugated to dihydrosphingosine), CER-NS (nonhydroxy fatty acid conjugated to sphingosine), CER-AP (a-hydroxy fatty acid conjugated to phytosphingosine, CER-AS (a-hydroxy fatty acid conjugated to sphingosine))은 각각 1 mg/mL의 농도가 되도록 하여 클로로포름/메탄올 혼합액(2:1)에 녹여 표준원액으로 하였다. 세라마이드 표준액은 상기 5가지 표준원액의 혼합액 중 각 세라마이드 표준원액의 농도가 1 ~ 500 ng/mL 농도가 되도록 준비하여 LC-MS 분석을 수행하였으며, UPLC 및 LC-MS 분석 조건은 하기와 같다. 이 때 이동상은 하기 표 3에 나타내었다.The remaining half-size tapes remaining after analysis of amino acid and amino acid metabolism in Example 3-1 were placed in a 20 mL vial containing 3 mL of a methanol / ethyl acetate (2: 1) solvent and sonicated for 15 minutes. The extract was filtered with a PTFE syringe filter (0.45 μm, 13 mm), and 1 mL of the filter solution was transferred to a 1.5 mL microtube and evaporated on Speedvac ™ (40 min, 40 ° C.) A total of 2 mL of the sample was dried by evaporation. Then, the extracted lipid was dissolved in 300 μL of a chloroform / methanol mixture (2: 1), and centrifuged (12,000 rpm, 4 ° C., 5 minutes) to obtain 200 μL of the supernatant. Each CER-NP (nonhydroxy fatty acid conjugated to phytosphingosine), CER-NDS (nonhydroxy fatty acid conjugated to dihydrosphingosine), CER-NS (nonhydroxy fatty acid conjugated to sphingosine) (CER-AS, a-hydroxy fatty acid conjugated to sphingosine) was dissolved in a chloroform / methanol mixture (2: 1) to give a concentration of 1 mg / LC-MS analysis was performed to prepare a concentration of 1 to 500 ng / mL of each of the ceramide standard stock solutions in the mixed solution of the standard stock solution, and UPLC and LC-MS analysis conditions were as follows. Respectively.
<UPLC 분석 조건>≪ UPLC analysis condition >
컬럼 : ACQUITY BEH C18(2.1mm × 50mm, 1.7μm)Column: ACQUITY BEH C18 (2.1 mm x 50 mm, 1.7 m)
유속 : 0.35 mL/minFlow rate: 0.35 mL / min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55 ° C
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 4 ℃Autosampler tray Temperature: 4 ° C
주입량 : 2 μLInjection volume: 2 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 70% 메탄올Weak needle wash: 70% methanol
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 메탄올/이소프로판올(1:1)Strong needle wash: methanol / isopropanol (1: 1)
이동상 : A는 2mM 암모늄 포메이트/메탄올(1/1, 0.1% 포름산), B는 메탄올/이소프로판올(6/4, 2mM 암모늄 포메이트 및 0.1% 포름산 포함)Mobile phase: A is 2 mM ammonium formate / methanol (1/1, 0.1% formic acid), B is methanol / isopropanol (containing 6/4, 2 mM ammonium formate and 0.1% formic acid)
<MS 분석 조건><MS analysis condition>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS apparatus: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : ESI 양성 이온 모드Ionization mode: ESI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150 ° C
탈용매 온도 : 350 ℃Desolvation temperature: 350 DEG C
탈용매 가스 유량 : 550 L/hDesolvation gas flow rate: 550 L / h
모세관 전압(Capillay) : 3.3 kVCapillary voltage (Capillay): 3.3 kV
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: multiple reaction monitoring (MRM)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 분석된 세라마이드는 NDS 계열(C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS 및 C32_NDS, 총 9종) NS 계열(C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS 및 C28_NS, 총 8종), NP 계열(C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP 및 C32_NP, 총 9종), AP 계열(C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP 및 C32_AP, 총 9종) 및 AS 계열(C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS 및 C30_AS, 총 8종)로 총 43종이다.The analyzed ceramides were classified into NDS series (C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS, and C28_NS), NDS series (C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS, C28_NDS, 8 series), NP series (C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP, C32_NP, C32_NP, total 9 kinds), AP series (C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP and C32_AP , Total 9 kinds) and AS series (C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS and C30_AS, total 8 kinds).
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 5 계열의 세라마이드 총 함량(μg/mg protein)을 도출하였으며, 민감성 패널 28명의 세라마이드 총 함량의 평균 및 비민감성 패널 29명의 세라마이드 총 함량의 평균을 계산하여 그 결과를 도 3에 나타내었다.Through this analysis, the total content (μg / mg protein) of 5 classes of ceramide contained in the skin of 28 of the sensitive panel of Example 2 and 29 of the non-sensitive panel was derived, and the average and the ratio The average of the ceramide total contents of 29 sensitive panels was calculated and the results are shown in Fig.
도 3에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 5 계열의 세라마이드 함량을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 5 계열의 세라마이드를 약 29% 이상 더 많이 함유하고 있음을 확인하였다.As shown in FIG. 3, it was confirmed that the non-sensitive skin contained about 5% or more of the ceramide in the non-sensitive skin than the sensitive skin in the 5-type of each of the sensitive panel and the non-sensitive panel.
[실시예 3-3] 지방산 분석[Example 3-3] Fatty acid analysis
상기 실시예 3-2에서 세라마이드 분석에 사용 후 남은 100 μL의 시료 중 20 μL를 취하여 클로로포름/메탄올 혼합액(2:1) 80 μL을 넣어 1/5 희석하였다. 그런 다음 시료액 10 μL 에 유도체화 시약으로 트리페닐포스페이트(TPP, triphenyl phosphate), 디피리딜 디설파이드(DPDS, dipyridyl disulfide), 피콜릴아미드(PA, picolylamide), 아세토니트릴을 순서대로 넣어 유도체화 반응을 진행한 후 LC-MS 분석을 수행하였으며, UPLC 분석 조건, MS 분석 조건은 하기와 같으며, 이동상은 하기 표 4에 나타내었다.20 μL of the 100 μL sample remaining after use in the ceramide analysis in Example 3-2 was diluted 1/5 by adding 80 μL of chloroform / methanol mixture (2: 1). Then, 10 μL of the sample solution was subjected to a derivatization reaction by sequentially adding TPP, dipyridyl disulfide (DPDS), picolylamide (PA), and acetonitrile as a derivatization reagent LC-MS analysis was carried out. UPLC analysis conditions and MS analysis conditions were as follows, and the mobile phase was shown in Table 4 below.
<UPLC 분석 조건>≪ UPLC analysis condition >
컬럼 : ACQUITY BEH C18(2.1mm × 50mm, 1.7?m)Column: ACQUITY BEH C18 (2.1 mm x 50 mm, 1.7 m)
유속 : 0.35 mL/minFlow rate: 0.35 mL / min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55 ° C
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 4 ℃Autosampler tray Temperature: 4 ° C
주입량 : 2 μLInjection volume: 2 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 70% 메탄올Weak needle wash: 70% methanol
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 메탄올/이소프로판올(1:1)Strong needle wash: methanol / isopropanol (1: 1)
이동상 : A는 2mM 암모늄 포메이트/메탄올(1/1, 0.1% 포름산), B는 메탄올/이소프로판올(6/4, 2mM 암모늄 포메이트 및 0.1% 포름산 포함)Mobile phase: A is 2 mM ammonium formate / methanol (1/1, 0.1% formic acid), B is methanol / isopropanol (containing 6/4, 2 mM ammonium formate and 0.1% formic acid)
<MS 분석 조건><MS analysis condition>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS apparatus: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : ESI 양성 이온 모드Ionization mode: ESI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150 ° C
탈용매 온도 : 350 ℃Desolvation temperature: 350 DEG C
탈용매 가스 유량 : 550 L/hDesolvation gas flow rate: 550 L / h
모세관 전압(Capillay) : 3.3 kVCapillary voltage (Capillay): 3.3 kV
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: multiple reaction monitoring (MRM)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 분석된 지방산은 C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16:1FA, C18:2FA, C18:1FA, C22:1FA 및 C24:1FA로 총 11종이다.The analyzed fatty acids are 11 kinds in total including C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16: 1FA, C18: 2FA, C18: 1FA, C22: 1FA and C24:
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 지방산 함량(μg/mg protein)을 도출하였으며, 민감성 패널 28명의 지방산 총 함량의 평균 및 비민감성 패널 29명의 지방산 총 함량의 평균을 도출하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다.In the above analysis, the fatty acid content (μg / mg protein) contained in the skin of each of the 28 sensitive panel and the 29 non-sensitive panel of Example 2 was derived, and the average of total fatty acid contents of 28 sensitive panels and 29 non- The average of total fatty acid content was deduced, and the result is shown in FIG.
도 4에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 11종의 지방산 함량을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 11종의 지방산을 약 9% 이상 더 많이 함유하고 있음을 알 수 있었다.As shown in FIG. 4, 11 fatty acids in each of the sensitive panel and the non-sensitive panel were examined. As a result, it was found that the non-sensitive skin contained 11 kinds of fatty acids by about 9% more than the sensitive skin .
[실시예 3-4] 콜레스테롤 분석[Example 3-4] Cholesterol analysis
상기 실시예 3-2에서 세라마이드 분석에 사용했던 검액을 동시에 콜레스테롤 분석에 이용하였으며 콜레스테롤 표준액은 0.1 ~ 10 μL의 범위로 준비하였다. 이후 LC-MS 분석을 수행하였으며, UPLC 조건 및 LC-MS 조건은 하기와 같으며, 이동상은 하기 표 5에 나타내었다.The sample solution used for the ceramide analysis in Example 3-2 was simultaneously used for cholesterol analysis and the cholesterol standard solution was prepared in the range of 0.1 to 10 μL. LC-MS analysis was performed thereafter. The UPLC condition and the LC-MS condition were as follows, and the mobile phase was shown in Table 5 below.
<UPLC 조건><UPLC condition>
컬럼 : ACQUITY BEH C18(2.1mm × 50mm, 1.7 μm)Column: ACQUITY BEH C18 (2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm)
유속 : 0.4 mL/minFlow rate: 0.4 mL / min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55 ° C
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 4 ℃Autosampler tray Temperature: 4 ° C
주입량 : 2 μLInjection volume: 2 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 70% 메탄올Weak needle wash: 70% methanol
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 메탄올/이소프로판올(1:1)Strong needle wash: methanol / isopropanol (1: 1)
이동상 : A는 물, B는 아세토나이트릴Mobile phase: A is water, B is acetonitrile
<MS 분석 조건><MS analysis condition>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS apparatus: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : APCI 양성 이온 모드Ionization mode: APCI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150 ° C
탈용매 온도 : 400 ℃Desolvation temperature: 400 DEG C
탈용매 가스 유량 : 500 L/hDesolvating gas flow rate: 500 L / h
코로나 전류(corona current) : 4.0 mACorona current: 4.0 mA
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: multiple reaction monitoring (MRM)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 콜레스테롤 함량(μg/mg protein)을 도출하고, 도출된 콜레스테롤에 대한 상기 세라마이드 분석을 통해 얻어진 세라마이드 함량(μg/mg protein)의 비율인 세라마이드/콜레스테롤을 계산하였으며, 민감성 패널 28명의 상기 세라마이드/콜레스테롤의 평균 및 비민감성 패널 29명의 상기 세라마이드/콜레스테롤의 평균을 도출하여 그 결과를 도 5에 나타내었다.The cholesterol content (μg / mg protein) contained in the skin of each of the 28 sensitive panel and 29 non-sensitive panel of Example 2 was derived from the above analysis, and the ceramide content (μg / mg protein) was calculated, and the average of the ceramide / cholesterol of the 28 sensitive panels and the average of the ceramide / cholesterol of 29 non-sensitive panels of the 28 sensitive panels were calculated and the results are shown in FIG.
도 5에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 세라마이드/콜레스테롤 비율을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 세라마이드/콜레스테롤 비율이 약 100% 이상 더 높음을 알 수 있었다.As shown in FIG. 5, the ceramide / cholesterol ratio of each of the sensitive panel and the non-sensitive panel was checked. As a result, it was found that the non-sensitive skin had a ceramide / cholesterol ratio of about 100% higher than that of the sensitive skin.
[실시예 4] 주성분 분석[Example 4] Principal component analysis
민감성 그룹과 비민감성 그룹을 판별할 수 있는 주요 변수를 찾기 위해서 주성분 분석법(Principle Component Analysis, PCA)을 통해 분석하였으며 Minitab 14 프로그램을 사용하여 통계처리 하였다. 상기 실시예 1에서 도출된 총 57명(민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명)의 피부 각질 시료를 대상으로 주성분 분석을 수행한 결과를 도 6에 나타내었으며, 그 결과 주성분 1(component 1, 지질 PC1)과 주성분 2(component 2, 지질 PC2)로 구분될 수 있음을 확인하였다. 또한, 57명의 분석 대상자들의 지질 PC1과 지질 PC2의 산점도를 그려보았을 때(도 7), 상기 주성분 1 및 주성분 2로 민감성 그룹과 비민감성 그룹을 명확히 구분할 수 있음을 확인하였다. Principal Component Analysis (PCA) was used to identify the major variables that could discriminate between sensitive and non - sensitive groups. Statistical analysis was performed using the Minitab 14 program. FIG. 6 shows the result of principal component analysis of skin keratin samples from 57 patients (28 sensitive panel and 29 non-sensitive panel) derived from Example 1, Lipid PC1) and the main component 2 (component 2, lipid PC2). In addition, when the scattergrams of lipid PC1 and lipid PC2 of 57 subjects were plotted (Fig. 7), it was confirmed that the main component 1 and the main component 2 clearly distinguished the sensitive group from the non-sensitive group.
상기 분석 결과 세라마이드 NP 계열이 민감성/비민감성을 판별하는 주된 요인으로 선정되었으며, 그 중 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP가 유의한 차이가 있는 주요 요인으로 선별되었다.As a result of the above analysis, the ceramide NP line was selected as the main factor for discriminating the sensitivity / non - sensitivity, among which C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP were selected as the main factors having significant difference.
[실시예 5] 세라마이드 함량들에 기초한 민감성 함수 및 비민감성 함수 도출[Example 5] Derivation of a sensitivity function and a non-sensitive function based on ceramide contents
상기 실시예 1에서 선정된 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부 민감성 정도를 참값으로 두고, 상기 실시예 4의 주성분 분석을 통해 주요 요인으로 선별된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량을 기초로 민감성 피부와 비민감성 피부를 판별할 수 있는 유의한 민감성 함수 및 비민감성 함수를 도출하였으며, 각각의 함수는 하기와 같다.C24_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP, which were selected as major factors through analysis of the principal component of the Example 4, respectively, with the sensitivity of skin sensitivity of each of the 28 sensitive panels and the 29 non- sensitive panels selected in Example 1, Sensitive skin and non-sensitive skin based on the content of the non-sensitive skin and non-sensitive function, respectively.
민감성 함수 = Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28 Sensitive function = Sc + Sc 16 × C 16 + Sc 22 × C 22 + Sc 24 × C 24 + Sc 26 × C 26 + Sc 28 × C 28
비민감성 함수 = NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 Non-sensitive function = NSc + NSc 16 x C 16 + NSc 22 x C 22 + NSc 24 x C 24 + NSc 24 x C 26 + NSc 24 x C 28
상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이고, 각 함량의 단위는 μg/mg protein이며, Sc, Sc16, Sc22, Sc24, Sc26, Sc28, NSc, NSc16, NSc22, NSc24, NSc24 및 NSc24는 상수이다.In the sensitivity function and the non-sensitive function C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of the content of ceramide C22_NP, C 24 the amount of ceramide C24_NP, C 26 is Ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP, The unit of each content is μg / mg protein, and Sc, Sc 16 , Sc 22 , Sc 24 , Sc 26 , Sc 28 , NSc, NSc 16 , NSc 22 , NSc 24 , NSc 24 and NSc 24 are constants.
[실시예 6] 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용한 피부 민감성 정도 판별[Example 6] Determination of degree of skin sensitivity using a sensitive function and a non-sensitive function
민감성 피부와 비민감성 피부를 판별하기 위해, 상기 실시예 5의 민감성 함수에서 Sc에 -3.329, Sc16에 0.7672, Sc22에 0.0134, Sc24에 0.0928, Sc26에 -0.2583, Sc28에 0.1385를 대입하고, 상기 실시예 5의 비민감성 함수에서 NSc에 -4.9217, NSc16에 0.7202, NSc22에 0.0653, NSc24에 -0.025, NSc26에 0.1023, NSc28에 -0.0569를 대입하였으며, 상기 실시예 2의 세라마이드 분석을 통해 얻어진 57명 각각의 고유한 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP 함량(단위: μg/mg protein)을 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에 각각 대입하고, 57명의 패널 각각의 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 계산하였다.In order to discriminate between the sensitive skin and the non-sensitive skin, in the sensitivity function of Example 5, -3.329 for Sc, 0.7672 for Sc 16 , 0.0134 for Sc 22 , 0.0928 for Sc 24 , -0.2583 for Sc 26 and 0.1385 for Sc 28 In the non-sensitive function of Example 5, -4.9217 was assigned to NSc, 0.7202 to NSc 16 , 0.0653 to NSc 22 , -0.025 to NSc 24 , 0.1023 to NSc 26 , and -0.0569 to NSc 28 were substituted for NSc, C24_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP contents (unit: μg / mg protein) of each of the 57 individual ceramides obtained through the ceramide analysis of each of the 57 panels Sensitivity function values and non-sensitive function values were calculated.
그런 다음, 각 패널들의 민감성 함수값 및 비민감성 함수값 중 민감성 함수값이 비민감성 함수값보다 크면 민감성 피부로, 비민감성 함수값이 민감성 함수값보다 크면 비민감성 피부로 판별하고, 이를 판별값으로 하여, 그 결과를 하기 표 6 및 표 7에 나타내었다. 하기 표 6에서 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP 함량의 단위는 μg/mg protein이며, NS는 비민감성, S는 민감성을 나타낸다. Then, when the sensitivity function value and the non-sensitive function value of each panel are larger than the non-sensitive function value, the non-sensitive skin function value is determined to be non-sensitive skin if the non-sensitive function value is larger than the sensitivity function value. The results are shown in Tables 6 and 7 below. In Table 6, the unit of the content of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP is μg / mg protein, NS is non-sensitive and S is sensitive.
[표 6][Table 6]
따른 피부 민감성 판별값Sensitive function, non-sensitive function
Sensitivity to skin sensitivity
상기 표 6 및 표 7의 판별 결과를 바탕으로, 피부의 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 각 함량들에 기초하여 판별한, 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용한 피부 민감성 정도 판별의 민감도, 특이도, 양성 예측도, 음성 예측도, 위음성, 위양성 및 정확도를 계산한 결과를 하기 표 8에 나타내었다.Based on the results of the discrimination in Tables 6 and 7, the sensitivity of skin sensitivity determination using the sensitivity function and the non-sensitizing function determined based on the respective contents of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP of the skin , Specificity, positive predictive value, negative predictive value, false negative, false positive, and accuracy are shown in Table 8 below.
상기 표 8에 나타난 바와 같이, 상기 실시예 5의 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용한 피부 민감성 정도 판별은 96%의 민감도, 93%의 특이도, 4%의 위음성, 7%의 위양성을 보이는 등 판별력이 우수함을 확인하였다. As shown in Table 8, discrimination of the degree of skin sensitivity using the sensitivity function and the non-sensitive function of Example 5 was 96% sensitivity, 93% specificity, 4% false negative, 7% false positive .
따라서, 세라마이드 함량들에 기초한 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용하여 피부 민감성 정도를 판별 시, 우수한 판별력으로 민감성 피부 또는 비민감성 피부를 판별할 수 있음을 알 수 있었다. Therefore, it was found that sensitive or non-sensitive skin can be discriminated by discriminating ability when determining the degree of skin sensitivity using the sensitivity function based on ceramide contents and the non-sensitive function.
Claims (8)
상기 키트는, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하는 세라마이드 측정부를 포함하며,
상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트.A kit for measuring skin sensitivity,
The kit includes a ceramide measuring unit for measuring a ceramide content of a target skin,
Wherein the ceramide comprises C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP.
상기 키트는, 상기 세라마이드 측정부를 통해 측정된 각 세라마이드 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 결과 제시부를 더 포함하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트.The method according to claim 1,
Wherein the kit further comprises a result presentation unit for presenting a sensitivity result value determined based on each of the ceramide contents measured through the ceramide measurement unit.
상기 결과 제시부는 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 각각 계산하고 그에 따라 피부 민감성 정도를 판별하는 것인, 피부 민감성 정도 측정용 키트.3. The method of claim 2,
Wherein the result presentation unit calculates the sensitivity function value and the non-sensitive function value, respectively, and determines the degree of skin sensitivity according to the calculated value.
상기 민감성 함수는 Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28이고,
상기 비민감성 함수는 NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 이며,
상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이고,
상기 민감성 함수에서 Sc는 -4.12535 내지 -2.53265이고, Sc16은 0.7437 내지 0.7907이고, Sc22는 -0.01255 내지 0.03935이고, Sc24는 0.0339 내지 0.1517이고, Sc26은 -0.4386 내지 -0.078이고, Sc28은 0.0408 내지 0.2362이며,
상기 비민감성 함수에서 NSc는 -5.71805 내지 -4.12535이고, NSc16은 0.6967 내지 0.7437이고, NSc22는 0.03935 내지 0.09125이고, NSc24는 -0.0839 내지 0.0339이고, NSc26은 -0.078 내지 0.2826이고, NSc28은 -0.1546 내지 0.0408인 것인, 피부 민감성 정도 측정용 키트.The method of claim 3,
The sensitivity function is Sc + Sc 16 x C 16 + Sc 22 x C 22 + Sc 24 x C 24 + Sc 26 x C 26 + Sc 28 x C 28 ,
The non-sensitive function is NSc + NSc 16 x C 16 + NSc 22 x C 22 + NSc 24 x C 24 + NSc 24 x C 26 + NSc 24 x C 28 ,
In the sensitivity function and the non-sensitive function C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of the content of ceramide C22_NP, C 24 the amount of ceramide C24_NP, C 26 is Ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP,
In the above sensitivity function, Sc is -4.12535 to -2.53265, Sc 16 is 0.7437 to 0.7907, Sc 22 is -0.01255 to 0.03935, Sc 24 is 0.0339 to 0.1517, Sc 26 is -0.4386 to -0.078, Sc 28 0.0408 to 0.2362,
NSc in the non-sensitive function is -5.71805 to -4.12535, NSc 16 is 0.6967 to 0.7437, NSc 22 is 0.03935 to 0.09125, NSc 24 is -0.0839 to 0.0339, NSc 26 is -0.078 to 0.2826, NSc 28 Lt; / RTI > is from-0.1546 to 0.0408.
상기 결과 제시부는,
상기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면, 민감성 피부로 판별하고
상기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면, 비민감성 피부로 판별하는 것인, 피부 민감성 정도 측정용 키트.5. The method of claim 4,
The result-
If the sensitivity function value is larger than the non-sensitivity function value, it is determined to be sensitive skin
Wherein the non-sensitive skin function value is determined as non-sensitive skin if the non-sensitive function value is larger than the sensitivity function value.
상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.Determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content by measuring the ceramide content of the target skin,
Wherein said ceramide provides information necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the skin, including C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP.
상기 방법은 하기 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 각각 계산하고 그에 따라 피부 민감성 정도를 판별하는 것인, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.
민감성 함수는 Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28이고,
비민감성 함수는 NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 이며,
상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이고,
상기 민감성 함수에서 Sc는 -4.12535 내지 -2.53265이고, Sc16은 0.7437 내지 0.7907이고, Sc22는 -0.01255 내지 0.03935이고, Sc24는 0.0339 내지 0.1517이고, Sc26은 -0.4386 내지 -0.078이고, Sc28은 0.0408 내지 0.2362이며,
상기 비민감성 함수에서 NSc는 -5.71805 내지 -4.12535이고, NSc16은 0.6967 내지 0.7437이고, NSc22는 0.03935 내지 0.09125이고, NSc24는 -0.0839 내지 0.0339이고, NSc26은 -0.078 내지 0.2826이고, NSc28은 -0.1546 내지 0.0408이다.The method according to claim 6,
Wherein the method calculates the following sensitivity function value and non-sensitive function value, respectively, and determines the degree of skin sensitivity accordingly.
The sensitivity function is Sc + Sc 16 x C 16 + Sc 22 x C 22 + Sc 24 x C 24 + Sc 26 x C 26 + Sc 28 x C 28 ,
The non-sensitive function is NSc + NSc 16 x C 16 + NSc 22 x C 22 + NSc 24 x C 24 + NSc 24 x C 26 + NSc 24 x C 28 ,
In the sensitivity function and the non-sensitive function C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of the content of ceramide C22_NP, C 24 the amount of ceramide C24_NP, C 26 is Ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP,
In the above sensitivity function, Sc is -4.12535 to -2.53265, Sc 16 is 0.7437 to 0.7907, Sc 22 is -0.01255 to 0.03935, Sc 24 is 0.0339 to 0.1517, Sc 26 is -0.4386 to -0.078, Sc 28 0.0408 to 0.2362,
NSc in the non-sensitive function is -5.71805 to -4.12535, NSc 16 is 0.6967 to 0.7437, NSc 22 is 0.03935 to 0.09125, NSc 24 is -0.0839 to 0.0339, NSc 26 is -0.078 to 0.2826, NSc 28 Is -0.1546 to 0.0408.
상기 방법은 하기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면, 민감성 피부로 판별하고, 하기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면, 비민감성 피부로 판별하는 것인, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.8. The method of claim 7,
The method is characterized in that if the following sensitivity function value is larger than the non-sensitive function value, it is discriminated as a sensitive skin, and if the following non-sensitive function value is larger than the sensitivity function value, How to provide the necessary information to do so.
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| KR20210097486A (en) | 2020-01-30 | 2021-08-09 | (주)아모레퍼시픽 | Method for Discriminating Sensitive Skin and Non-sensitive Skin |
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| KR20120009774A (en) * | 2010-07-21 | 2012-02-02 | (주)아모레퍼시픽 | Method for evaluating moisturising ability of skin through determining component ratio of ceramides in stratum corneum |
| KR20140123035A (en) | 2014-09-18 | 2014-10-21 | (주)아모레퍼시픽 | Biomarker for prediction of sensitive skin and test kit using the same |
| KR20150071856A (en) * | 2013-12-19 | 2015-06-29 | 코웨이 주식회사 | Estimation method of skin barrier function by lipid staining |
-
2017
- 2017-02-01 KR KR1020170014409A patent/KR102623440B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (3)
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| KR20120009774A (en) * | 2010-07-21 | 2012-02-02 | (주)아모레퍼시픽 | Method for evaluating moisturising ability of skin through determining component ratio of ceramides in stratum corneum |
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| KR20140123035A (en) | 2014-09-18 | 2014-10-21 | (주)아모레퍼시픽 | Biomarker for prediction of sensitive skin and test kit using the same |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210097486A (en) | 2020-01-30 | 2021-08-09 | (주)아모레퍼시픽 | Method for Discriminating Sensitive Skin and Non-sensitive Skin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR102623440B1 (en) | 2024-01-11 |
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