KR102623440B1 - Kit for measuring skin sensitivity using lipid profile of skin stratum corneum and method for providing information to diagnose skin sensitivity - Google Patents
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Abstract
본 명세서에는 피부의 지질, 아미노산, 아미노산 대사체의 함량을 측정하는 측정부 및 상기 측정부를 통해 측정된 각 지질, 아미노산, 아미노산 대사체 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 결과 제시부를 포함하는 피부 민감성 정도 측정용 키트 및 피부의 지질, 아미노산, 아미노산 대사체의 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것을 포함하는 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법이 개시된다. 특히, 상기 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 측정하는 경우 우수한 판별력으로 피부의 민감성 정도를 측정할 수 있는 효과가 있다.This specification includes a measuring unit that measures the content of lipids, amino acids, and amino acid metabolites in the skin, and a result presentation unit that presents the results of the sensitivity level determined based on the contents of each lipid, amino acid, and amino acid metabolite measured through the measuring unit. A kit for measuring the degree of skin sensitivity, including a kit for measuring the degree of skin sensitivity, and measuring the content of lipids, amino acids, and amino acid metabolites in the skin and determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content. Necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the skin. A method of providing information is disclosed. In particular, when measuring the degree of skin sensitivity based on the measured contents of ceramides C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP, there is an effect of measuring the degree of skin sensitivity with excellent discrimination power.
Description
본 명세서에는 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법이 개시된다.Disclosed herein is a method of providing information necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the skin.
민감성 피부란 정식 학술 용어는 아니지만 건조 피부에 의한 피부의 장벽(barrier) 기능의 저하를 원인으로 외부 자극에 대한 저항성이 떨어지고, 일차 자극 또는 알레르기성 접촉 피부염을 일으키기 쉬운 피부 상태라고 정의할 수 있다. 민감성 피부가 되는 원인들은 여러 가지가 있지만, 선천적인 피부 특성이나 가족력, 병력, 화장품 등의 오남용에 따라 민감성 피부가 되기도 하고, 환경의 변화, 습관 등 여러 가지 이유로 민감성 피부가 발생할 수 있다.Sensitive skin is not an official academic term, but it can be defined as a skin condition that has reduced resistance to external stimuli and is prone to primary irritation or allergic contact dermatitis due to a decrease in the skin's barrier function due to dry skin. There are many causes of sensitive skin, but sensitive skin can occur due to congenital skin characteristics, family history, medical history, misuse of cosmetics, etc. Sensitive skin can also occur for various reasons such as environmental changes and habits.
한편, 일반인을 대상으로 한 조사 결과에 따르면, 민감성 피부에 대한 인식도 높아지고, 스스로 민감성 피부라고 인식하는 비율도 높은 편이며, 환경 오염이나 스트레스의 증가, 화장품 및 의약품 사용의 증가에 따라 민감성 피부가 증가하는 추세라고 한다. 피부의 민감성 등 개인의 피부 상태를 감별하여 진단하고 그 원인을 분석하는 것은 특히, 화장품에 사용되는 재료를 정확하게 선택하거나 특정 피부에 적합한 치료 방법을 결정하는 데에 필수적인 것이라 할 수 있다.Meanwhile, according to the results of a survey of the general public, awareness of sensitive skin is increasing, and the rate of people recognizing themselves as having sensitive skin is also high. Sensitive skin is also increasing due to increased environmental pollution, stress, and increased use of cosmetics and medicines. It is said to be a trend. Differentiating and diagnosing an individual's skin condition, such as skin sensitivity, and analyzing its cause are especially essential for accurately selecting ingredients used in cosmetics or determining a treatment method suitable for specific skin.
종래에는 민감성 피부 진단 및 원인 분석을 피부 미용 및 행태 설문 조사 분석을 통하여 실제 소비자를 진단함으로써 수행되었다. 그러나 설문 진단만으로 민감성 피부의 특성을 파악하기에는 경향성은 파악할 수 있으나 정확도가 떨어지는 어려움이 있다. Conventionally, sensitive skin diagnosis and cause analysis were performed by diagnosing actual consumers through skin care and behavioral survey analysis. However, it is difficult to determine the characteristics of sensitive skin through questionnaire diagnosis alone, although it is possible to determine the tendency, but the accuracy is low.
이러한 배경하에서 본 발명자들은 피부의 지질, 아미노산, 아미노산 대사체의 함량을 분석하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 키트 및 방법을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Against this background, the present inventors completed the present invention by identifying a kit and method for determining the degree of skin sensitivity by analyzing the content of lipids, amino acids, and amino acid metabolites in the skin.
일 측면에서, 본 발명의 목적은, 피부 민감성 정도 측정용 키트를 제공하는 것이다.In one aspect, an object of the present invention is to provide a kit for measuring the degree of skin sensitivity.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.In another aspect, an object of the present invention is to provide a method for providing information necessary for diagnosing the degree of sensitivity of the skin.
일 측면에서, 본 발명은, 피부 민감성 정도 측정용 키트로서, 상기 키트는, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하는 세라마이드 측정부를 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트를 제공한다.In one aspect, the present invention is a kit for measuring the degree of skin sensitivity, wherein the kit includes a ceramide measuring unit for measuring the ceramide content of target skin, wherein the ceramide includes C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP, A kit for measuring skin sensitivity is provided.
다른 측면에서 본 발명은, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것을 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention includes measuring the ceramide content of target skin and determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content, wherein the ceramide includes C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP. Provides a method of providing the information necessary to diagnose the level of sensitivity.
일 측면에 있어서, 본 발명의 대상 피부에서 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량을 측정하고, 상기 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 측정하는 경우 우수한 판별력으로 피부의 민감성 정도를 측정할 수 있는 효과가 있다.In one aspect, the content of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP is measured in the target skin of the present invention, and the degree of sensitivity of the skin is determined based on the measured content of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP. When measuring, it has the effect of measuring the degree of skin sensitivity with excellent discrimination power.
도 1은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 18종의 아미노산 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 2은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 4종의 아미노산 대사체 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 3은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 5종의 세라마이드 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 4은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 11종의 지방산 총 함량의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 5은, 비민감성 패널 29명 및 민감성 패널 28명 각각의 콜레스테롤 함량에 대한 세라마이드 함량의 비율(세라마이드/콜레스테롤)의 평균을 나타낸 그래프이다(NS: 비민감성 패널, S: 민감성 패널).
도 6은, 민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명의 피부 각질에 포함된 아미노산, 아미노산 대사체, 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤 함량을 기초로 주성분 분석법(PCA)을 수행한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은, 민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명의 주성분 1(지질 PC1) 및 주성분 2(지질 PC2)의 산점도이다(1: 민감성 패널, 2: 비민감성 패널).Figure 1 is a graph showing the average of the total content of 18 amino acids for 29 non-sensitive panelists and 28 sensitive panelists (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 2 is a graph showing the average of the total content of four amino acid metabolites for 29 non-sensitive panelists and 28 sensitive panelists (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 3 is a graph showing the average of the total content of five types of ceramides in each of 29 non-sensitive panelists and 28 sensitive panelists (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 4 is a graph showing the average of the total content of 11 types of fatty acids in each of 29 non-sensitive panelists and 28 sensitive panelists (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 5 is a graph showing the average ratio of ceramide content to cholesterol content (ceramide/cholesterol) for 29 non-sensitive panelists and 28 sensitive panelists, respectively (NS: non-sensitive panel, S: sensitive panel).
Figure 6 is a diagram showing the results of principal component analysis (PCA) based on the content of amino acids, amino acid metabolites, ceramides, fatty acids, and cholesterol contained in the skin keratin of 28 sensitive panelists and 29 non-sensitive panelists.
Figure 7 is a scatter plot of main component 1 (lipid PC1) and main component 2 (lipid PC2) of 28 sensitive panelists and 29 non-sensitive panelists (1: sensitive panel, 2: non-sensitive panel).
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 세라마이드는 각질을 구성하는 주요 지질 성분으로서 피부의 보습능 형성과 피부 장벽 질환 발생에 중요한 역할을 한다. 세라마이드는 스핑고신 또는 파이토스핑고신에 지방산이 연결되어 있는 구조를 가지고 있는 스핑고 지질의 일종으로 피부 각질층을 구성하는 각질 세포간 지질 중 약 40~50% 이상을 차지하며 각질층의 구조 형성이나 기능을 나타내는데 필수적인 성분으로 각질층에서 수분증발을 억제하는 지질 장벽 역할과 각질층의 정연한 구조를 유지하게 하는 기능을 하고 있다. 세라마이드는 디하이드로스핑고신, 스핑고신, 피토스핑고신, 6-하이드록시스핑고신 등의 스핑고신 베이스와 비하이드록시 지방산, α-하이드록시 지방산, 에스테르-결합 ω-하이드록시 지방산 등의 지방산이 결합하여 형성된다. 이렇게 다양한 스핑고신 베이스와 지방산류들이 결합하여 세라마이드를 구성하기 때문에 다양한 계열의 세라마이드가 각질층에 존재할 수 있다. Ceramide of the present invention is a major lipid component that constitutes keratin and plays an important role in forming the skin's moisturizing ability and developing skin barrier diseases. Ceramide is a type of sphingolipid that has a structure in which a fatty acid is linked to sphingosine or phytosphingosine. It accounts for more than 40 to 50% of the lipids between keratinocytes that make up the stratum corneum of the skin and is essential for the formation and function of the structure of the stratum corneum. As an ingredient, it functions as a lipid barrier to suppress moisture evaporation from the stratum corneum and maintains the orderly structure of the stratum corneum. Ceramides include sphingosine bases such as dihydrosphingosine, sphingosine, phytosphingosine, and 6-hydroxysphingosine, and non-hydroxy fatty acids, α-hydroxy fatty acids, and ester-linked ω-hydroxy fatty acids. It is formed by combining fatty acids. Since various sphingosine bases and fatty acids combine to form ceramides, various types of ceramides can exist in the stratum corneum.
본 발명의 세라마이드는 NDS 계열, NS 계열, NP 계열, AP 계열 및 AS 계열을 포함할 수 있다. 상기 세라마이드 NDS 계열은 C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS 및 C32_NDS을 포함할 수 있고, 상기 세라마이드 NS 계열은 C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS 및 C28_NS을 포함할 수 있고, 상기 세라마이드 NP 계열은 C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP 및 C32_NP을 포함할 수 있으며, 세라마이드 AP 계열은 C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP 및 C32_AP을 포함할 수 있고, 상기 세라마이드 AS 계열은 C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS 및 C30_AS를 포함할 수 있다.Ceramides of the present invention may include NDS series, NS series, NP series, AP series, and AS series. The ceramide NDS series may include C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS and C32_NDS, and the ceramide NS series may include C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C Includes 26_NS and C28_NS The ceramide NP series may include C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP, and C32_NP, and the ceramide AP series may include C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, It may include C30_AP and C32_AP, and the ceramide AS series may include C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS and C30_AS.
일 측면에서, 본 발명은 피부 민감성 정도 측정용 키트로서, 상기 키트는, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하는 세라마이드 측정부를 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트를 제공한다.In one aspect, the present invention is a kit for measuring the degree of skin sensitivity, wherein the kit includes a ceramide measuring unit for measuring the ceramide content of target skin, wherein the ceramide includes C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP. A kit for measuring sensitivity is provided.
상기 세라마이드 측정부는 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정할 수 있는 정량 장치라면 제한 없이 사용될 수 있으며, 구체적으로 크로마토그래피/질량분석기일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 크로마토그래피는 액체 크로마토그래피(Liquid Chromatography, LC), 가스 크로마토그래피(Gas Chromatography), 액체-고체 크로마토그래피(Liquid-Solid Chromatography, LSC), 종이 크로마토그래피(Paper Chromatography, PC), 박층 크로마토그래피(Thin-Layer Chromatography, TLC), 기체-고체 크로마토그래피(Gas-Solid Chromatography, GSC), 액체-액체 크로마토그래피(Liquid-Liquid Chromatography, LLC), 포말 크로마토그래피(Foam Chromatography, FC), 유화 크로마토그래피(Emulsion Chromatography, EC), 기체-액체 크로마토그래피(Gas-Liquid Chromatography, GLC), 이온 크로마토그래피(Ion Chromatography, IC), 겔 여과 크로마토그래피(Gel Filtration Chromatograhy, GFC) 또는 겔 투과 크로마토그래피(Gel Permeation Chromatography, GPC)를 포함하나, 이에 제한되지 않고 당업계에서 통상적으로 사용되는 모든 정량용 크로마토그래피를 사용할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명에서 이용되는 크로마토그래피는 액체 크로마토그래피일 수 있으며, 본 발명에서 이용되는 질량분석기는 LC-MS일 수 있다.The ceramide measuring unit can be used without limitation as long as it is a quantitative device capable of measuring the ceramide content of the target skin, and may specifically be a chromatography/mass spectrometer. Chromatography used in the present invention includes liquid chromatography (LC), gas chromatography (Gas Chromatography), liquid-solid chromatography (LSC), paper chromatography (PC), Thin-Layer Chromatography (TLC), Gas-Solid Chromatography (GSC), Liquid-Liquid Chromatography (LLC), Foam Chromatography (FC), Emulsion Chromatography (EC), Gas-Liquid Chromatography (GLC), Ion Chromatography (IC), Gel Filtration Chromatography (GFC), or Gel Permeation Chromatography Any quantitative chromatography commonly used in the art can be used, including, but not limited to (Gel Permeation Chromatography, GPC). Specifically, the chromatography used in the present invention may be liquid chromatography, and the mass spectrometer used in the present invention may be LC-MS.
본 발명의 피부 민감성 정도 측정용 키트는 상기 세라마이드 측정부를 통해 측정된 각 세라마이드 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 결과 제시부를 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 결과 제시부는 하기 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 각각 계산하고 그에 따라 피부 만감성 정도를 판별하는 것일 수 있다.The kit for measuring the level of skin sensitivity of the present invention may further include a result presentation unit that presents the results of the level of sensitivity determined based on the respective ceramide contents measured through the ceramide measurement unit. In addition, the result presentation unit may calculate the following sensitivity function value and non-sensitivity function value respectively and determine the degree of skin sensitivity accordingly.
상기 민감성 함수는 Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28이고, 상기 비민감성 함수는 NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 이다. 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이다. The sensitivity function is Sc + Sc 16 _ _ _ _ NSc 22 ×C 22 + NSc 24 ×C 24 + NSc 24 ×C 26 + NSc 24 ×C 28 . In the sensitivity function and the non-sensitivity function, C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of ceramide C22_NP, C 24 is the content of ceramide C24_NP, C 26 is the content of ceramide C26_NP, and C 28 is the content of ceramide C28_NP.
상기 민감성 함수에서 Sc는 -4.12535 내지 -2.53265이고, Sc16은 0.7437 내지 0.7907 이고, Sc22는 -0.01255 내지 0.03935이고, Sc24는 0.0339 내지 0.1517이고, Sc26은 -0.4386 내지 -0.078이고, Sc28은 0.0408 내지 0.2362이며, 상기 비민감성 함수에서 NSc는 -5.71805 내지 -4.12535이고, NSc16은 0.6967 내지 0.7437이고, NSc22는 0.03935 내지 0.09125이고, NSc24는 -0.0839 내지 0.0339이고, NSc26은 -0.078 내지 0.2826이고, NSc28은 -0.1546 내지 0.0408일 수 있다. 구체적으로, 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 Sc, Sc16, Sc22, Sc24, Sc26, Sc28, NSc, NSc16, NSc22, NSc24, NSc26 및 NSc28는 각각 하기 식 1 내지 12를 각각 동시에 만족하는 값이거나, 또는 하기 식 13 내지 24를 각각 동시에 만족하는 값일 수 있으며, 하기 수식에서 n은 2 이상의 자연수일 수 있고, 구체적으로는 2 이상 1016의 자연수일 수 있다.In the sensitivity function, Sc is -4.12535 to -2.53265, Sc 16 is 0.7437 to 0.7907, Sc 22 is -0.01255 to 0.03935, Sc 24 is 0.0339 to 0.1517, Sc 26 is -0.4386 to -0.078, Sc 28 is 0.0408 to 0.2362, NSc is -5.71805 to -4.12535 in the above insensitivity function, NSc 16 is 0.6967 to 0.7437, NSc 22 is 0.03935 to 0.09125, NSc 24 is -0.0839 to 0.0339, and NSc 26 is -0.078 to 0.2826, and NSc 28 may be -0.1546 to 0.0408. Specifically, in the sensitivity function and the non-sensitivity function, Sc, Sc 16 , Sc 22 , Sc 24 , Sc 26 , Sc 28 , NSc, NSc 16 , NSc 22 , NSc 24 , NSc 26 and NSc 28 are each represented by the following formulas 1 to It may be a value that simultaneously satisfies 12, or a value that simultaneously satisfies each of the following equations 13 to 24. In the equation below, n may be a natural number of 2 or more, and specifically, may be a natural number of 2 or more and 10 16 .
[식 1][Equation 1]
[식 2][Equation 2]
[식 3][Equation 3]
[식 4][Equation 4]
[식 5][Equation 5]
[식 6][Equation 6]
[식 7][Equation 7]
[식 8][Equation 8]
[식 9][Equation 9]
[식 10][Equation 10]
[식 11][Equation 11]
[식 12][Equation 12]
[식 13][Equation 13]
[식 14][Equation 14]
[식 15][Equation 15]
[식 16][Equation 16]
[식 17][Equation 17]
[식 18][Equation 18]
[식 19][Equation 19]
[식 20][Equation 20]
[식 21][Equation 21]
[식 22][Equation 22]
[식 23][Equation 23]
[식 24][Equation 24]
보다 구체적으로 상기 민감성 함수에서 Sc는 -3.329이고, Sc16은 0.7672 이고, Sc22는 0.0134이고, Sc24는 0.0928이고, Sc26은 -0.2583이고, Sc28은 0.1385이며, 상기 비민감성 함수에서 NSc는 -4.9217이고, NSc16은 0.7202이고, NSc22는 0.0653이고, NSc24는 -0.025이고, NSc26은 0.1023이고, NSc28은 -0.0569일 수 있다.More specifically, in the sensitivity function, Sc is -3.329, Sc 16 is 0.7672, Sc 22 is 0.0134, Sc 24 is 0.0928, Sc 26 is -0.2583, Sc 28 is 0.1385, and in the insensitivity function, NSc may be -4.9217, NSc 16 may be 0.7202, NSc 22 may be 0.0653, NSc 24 may be -0.025, NSc 26 may be 0.1023, and NSc 28 may be -0.0569.
상기 결과 제시부는 상기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면 민감성 피부로 판별하고, 상기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면 비민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 예로서, 제1 대상 피부의 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP 함량을 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에 각각 대입하여 각각의 함수값을 계산한 결과 민감성 함수값이 -4.4699, 비민감성 함수값이 6.7640으로 계산되면, 상기 제1 대상 피부는 상기 결과 제시부에 비민감성 피부로 판별된다. 또 다른 예로서, 제2 대상 피부의 측정된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP 함량을 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에 각각 대입하여 각각의 함수값을 계산한 결과 민감성 함수값이 5.2654, 비민감성 함수값이 -1.7951로 계산되면, 상기 제2 대상 피부는 상기 결과 제시부에 민감성 피부로 판별된다.The result presentation unit may determine the skin as sensitive if the sensitivity function value is greater than the non-sensitivity function value, and determine the skin as non-sensitive if the non-sensitivity function value is greater than the sensitivity function value. As an example, each function value was calculated by substituting the measured ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP content of the first target skin into the sensitivity function and non-sensitivity function, respectively. As a result, the sensitivity function value was -4.4699, and the non-sensitivity function value was -4.4699. If the function value is calculated as 6.7640, the first target skin is determined as non-sensitive skin in the result presentation section. As another example, each function value was calculated by substituting the measured ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP content of the second target skin into the sensitivity function and non-sensitivity function, respectively, and the sensitivity function value was 5.2654, ratio If the sensitivity function value is calculated as -1.7951, the second target skin is determined as sensitive skin in the result presentation section.
본 발명의 피부 민감성 정도 측정용 키트는 대상 피부의 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 함량을 측정하는 제2측정부를 더 포함할 수 있으며, 상기 제2 세라마이드는 세라마이드 NDS 계열, 세라마이드 NS 계열, 세라마이드 NP 계열, 세라마이드 AP 계열 및 세라마이드 AS 계열로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 세라마이드일 수 있다.The kit for measuring the level of skin sensitivity of the present invention may further include a second measuring unit that measures one or more contents selected from the group consisting of amino acids, amino acid metabolites, secondary ceramides, fatty acids, and cholesterol in the target skin, and the second measuring unit The ceramide may be one or more ceramides selected from the group consisting of the ceramide NDS series, ceramide NS series, ceramide NP series, ceramide AP series, and ceramide AS series.
상기 아미노산은 히스티딘, 아스파라긴, 세린, 글루타민, 아르기닌, 글리신, 아스파르트산, 글루탐산, 트레오닌, 알라닌, 프롤린, 리신, 티로신, 발린, 류신, 이소류신, 페닐알라닌 또는 트립토판일 수 있다. 상기 아미노산 대사체는 피로글루탐산(pyroglutamic acid), 시스-유로카닌 산(cis-urocanic acid), 티-유로카닌 산(t-urocanic acid) 또는 시트룰린(citrulline)일 수 있다. 상기 제2 세라마이드는 세라마이드 NDS 계열, 세라마이드 NS 계열, 세라마이드 NP 계열, 세라마이드 AP 계열 또는 세라마이드 AS 계열일 수 있다. 구체적으로, 상기 세라마이드 NDS 계열은 C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS 또는 C32_NDS일 수 있고, 상기 세라마이드 NS 계열은 C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS 또는 C28_NS일 수 있고, 상기 세라마이드 NP 계열은 C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP 또는 C32_NP일 수 있고, 상기 세라마이드 AP 계열은 C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP 또는 C32_AP일 수 있으며, 상기 세라마이드 AS 계열은 C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS 또는 C30_AS일 수 있다. 상기 지방산은 지방산 C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16:1FA, C18:2FA, C18:1FA, C22:1FA 또는 C24:1FA일 수 있다.The amino acid may be histidine, asparagine, serine, glutamine, arginine, glycine, aspartic acid, glutamic acid, threonine, alanine, proline, lysine, tyrosine, valine, leucine, isoleucine, phenylalanine or tryptophan. The amino acid metabolite may be pyroglutamic acid, cis-urocanic acid, t-urocanic acid, or citrulline. The second ceramide may be a ceramide NDS series, a ceramide NS series, a ceramide NP series, a ceramide AP series, or a ceramide AS series. Specifically, the ceramide NDS series may be C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS or C32_NDS, and the ceramide NS series may be C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS or C28_NS The ceramide NP series may be C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP or C32_NP, and the ceramide AP series may be C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP or It may be C32_AP, and the ceramide AS series may be C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS or C30_AS. The fatty acid may be fatty acid C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16:1FA, C18:2FA, C18:1FA, C22:1FA or C24:1FA.
본 발명의 피부 민감성 정도 측정용 키트는 상기 제2 측정부를 통해 측정된 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 제2결과 제시부를 더 포함할 수 있다. 상기 제2결과 제시부는 상기 제1결과 제시부와 통합된 것일 수 있다.The kit for measuring the level of skin sensitivity of the present invention provides a sensitivity level result value determined based on one or more contents selected from the group consisting of amino acids, amino acid metabolites, secondary ceramides, fatty acids, and cholesterol measured through the second measuring unit. A second result presentation section may be further included. The second result presentation unit may be integrated with the first result presentation unit.
상기 제2결과 제시부는 비민감성 피부에 비하여 아미노산 총 중량(μg/mg protein)이 8% 이상 더 적거나, 아미노산 대사체 총 중량(μg/mg protein)이 27% 이상 더 적거나, 제2 세라마이드 총 중량(μg/mg protein)이 29% 이상 더 적거나, 지방산 총 중량(μg/mg protein)이 9% 이상 더 적거나, 또는 콜레스테롤에 대한 세라마이드의 비율이 9% 이상 더 적으면 민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 상기 비민감성 피부는 민감 피부의 성질을 나타내지 않는 건강하고 정상적인 피부로서, UV 빛, 열, 추위, 화학 약품(chemicals), 또는 피부 제형의 활성 성분들 등과 같은 자극에 노출되었을 때 피부가 홍조(flushing), 붉어짐(reddening), 또는 얼굴 붉어(blushing)지려는 경향을 가지지 않는 상태인 정상피부를 말한다. 구체적으로, 다수의 피험자의 피부 각질을 동일한 방법으로 동일 압력, 시간, 및 횟수로 채취하여 동일한 추출 조건 하에서 추출된 아미노산, 아미노산 대사체, 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤의 각각의 함량을 측정한 결과, 비민감성으로 분류되는 피부의 각 성분 함량 범위에 속하는 피부일 수 있다. 상기 제2결과 제시부에서 총 아미노산, 총 아미노산 대사체, 총 세라마이드, 총 지방산, 콜레스테롤 각각의 중량은 피부 각질 채취용 스트리핑 테이프(상표명: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, 제조사: CUDERM, Disc: 0.875 in. diameter (22.0 mm))를 이용하여 D500 D-squame Disc Applicator(상표명: D500 - D-Squame Pressure Instrument, 제조사: CUDERM, 압력: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm. Pressure Area: 7/8 in. (22.24 mm))로 회당 1초간 얼굴 뺨 부위와 이마 부위의 피부에 부착한 후 떼어내는 테이프 스트리핑을 10회 반복하여 얻어지는 피부 각질로부터 동일한 추출 조건 하에서 추출된 각 성분의 중량일 수 있으며, 중량 단위는 μg/mg protein이다.The second result presentation area has a total weight of amino acids (μg/mg protein) that is 8% or more less, a total weight of amino acid metabolites (μg/mg protein) that is 27% or more less, or a second ceramide content compared to non-sensitive skin. Sensitive skin if the total weight (μg/mg protein) is more than 29% less, the total fatty acid weight (μg/mg protein) is more than 9% less, or the ratio of ceramide to cholesterol is more than 9% less. It may be a matter of discrimination. The non-sensitive skin is healthy, normal skin that does not exhibit the properties of sensitive skin, causing the skin to flush when exposed to irritants such as UV light, heat, cold, chemicals, or active ingredients in skin formulations. ), reddening, or normal skin that does not have a tendency to blush. Specifically, skin keratin from multiple subjects was collected using the same method, at the same pressure, time, and number of times, and the contents of each extracted amino acid, amino acid metabolite, ceramide, fatty acid, and cholesterol were measured under the same extraction conditions. The skin may fall within the content range of each ingredient classified as sensitive. In the second result presentation section, the weights of total amino acids, total amino acid metabolites, total ceramides, total fatty acids, and cholesterol are calculated using stripping tape for collecting skin exfoliation (brand name: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, manufacturer: CUDERM, Disc) : 0.875 in. diameter (22.0 mm)) using the D500 D-squame Disc Applicator (Brand name: D500 - D-Squame Pressure Instrument, Manufacturer: CUDERM, Pressure: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm. Pressure Area: 7/8 in. (22.24 mm)) is the weight of each ingredient extracted under the same extraction conditions from skin dead skin cells obtained by repeating tape stripping 10 times by attaching it to the skin of the cheek and forehead areas of the face for 1 second each time and then removing it. The weight unit is μg/mg protein.
본 발명은 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것을 포함하며, 상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하는, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. 또한, 상기 방법은 상기 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 비교하여, 상기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면, 민감성 피부로 판별하고, 상기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면, 비민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 상기 세라마이드, C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP, 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 판별하는 것, 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수는 전술한 바와 같다.The present invention includes measuring the ceramide content of target skin and determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content, wherein the ceramide includes C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP. Provides a method of providing the information necessary for diagnosis. In addition, the method compares the sensitivity function value and the non-sensitivity function value, and if the sensitivity function value is greater than the non-sensitivity function value, it is determined as sensitive skin, and if the non-sensitivity function value is greater than the sensitivity function value, This may indicate non-sensitive skin. The ceramide, C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP, determining the degree of skin sensitivity based on the measured content, and the sensitivity function and non-sensitivity function are as described above.
또한, 상기 방법은 대상 피부의 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 함량을 측정하여 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 더 판별하는 것을 포함하고, 상기 제2 세라마이드는 세라마이드 NDS 계열, 세라마이드 NS 계열, 세라마이드 NP 계열, 세라마이드 AP 계열 및 세라마이드 AS 계열로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 세라마이드인 것인, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법일 수 있다. 또한, 상기 방법은 비민감성 피부에 비하여 아미노산 총 중량(μg/mg protein)이 8% 이상 더 적거나, 아미노산 대사체 총 중량(μg/mg protein)이 27% 이상 더 적거나, 제2 세라마이드 총 중량(μg/mg protein)이 29% 이상 더 적거나, 지방산 총 중량(μg/mg protein)이 9% 이상 더 적거나, 또는 콜레스테롤에 대한 세라마이드의 비율이 9% 이상 더 적으면 민감성 피부로 판별하는 것일 수 있다. 상기 아미노산, 아미노산 대사체, 제2 세라마이드, 지방산, 콜레스테롤, 상기 측정된 함량에 기초하여 피부의 민감성 정도를 더 판별하는 것, 정상피부와 비교하여 민감성 피부 또는 비민감성 피부로 판별하는 것은 전술한 바와 같다.In addition, the method includes measuring the content of one or more selected from the group consisting of amino acids, amino acid metabolites, secondary ceramides, fatty acids, and cholesterol in the target skin and further determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content. , the second ceramide is one or more ceramides selected from the group consisting of the ceramide NDS series, ceramide NS series, ceramide NP series, ceramide AP series, and ceramide AS series, which provides the information necessary to diagnose the degree of sensitivity of the skin. It could be a way. In addition, the method results in a total weight of amino acids (μg/mg protein) that is at least 8% lower, a total weight of amino acid metabolites (μg/mg protein) that is at least 27% lower, or a total weight of secondary ceramides (μg/mg protein) compared to non-sensitive skin. If the weight (μg/mg protein) is more than 29% less, the total fatty acid weight (μg/mg protein) is more than 9% less, or the ratio of ceramide to cholesterol is more than 9% less, it is judged as sensitive skin. It may be. Further determining the degree of skin sensitivity based on the measured contents of the amino acid, amino acid metabolite, secondary ceramide, fatty acid, and cholesterol, and determining sensitive skin or non-sensitive skin compared to normal skin, are as described above. same.
이하, 본 발명을 하기의 실시예를 통하여 설명한다. 하기 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be explained through the following examples. The following examples are provided for illustrative purposes only to aid understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereto.
[실시예 1] 민감성 패널 및 비민감성 패널 선정[Example 1] Selection of sensitive and non-sensitive panels
중국 상해 지역에 5년 이상 거주하고 있는 45세 미만 성인 여성 253명을 대상으로 하기의 설문조사 방법(실시예 1-1), 피부 일차 자극시험(실시예 1-2) 및 자극감 시험(실시예 1-3)을 수행하여 민감성 패널 및 비민감성 패널을 선정하였다.The following survey method (Example 1-1), primary skin irritation test (Example 1-2), and irritation test (Example 1-3) were performed to select sensitive and non-sensitive panels.
[실시예 1-1] 설문조사[Example 1-1] Survey
대한민국 특허 공개공보 10-2002-0040283의 민감성 피부 진단 방법에 따라 상기 특허문헌의 민감성 진단 설문 데이터를 이용하여 민감성 패널 및 비민감성 패널을 선정하였다. 구체적으로 보편적인 현상 관련 질문(화장품 트러블, 광민감 및 광염증, 피부 두께, 피부 알레르기, 피부 변화)과 원인 및 현상 관련 질문(화장품 관련문항 15문항, 선천성 및 가족력 관련 14문항, 환경 요인 관련 9문항, 생활 습관 및 기타 관련 10문항)에 대한 내용을 기반으로 점수화하여 가중치 부여함으로써 민감성 피부를 비민감, 약간 민감, 민감한 편, 매우 민감으로 분류하였으며, 이를 바탕으로 민감성 패널과 비민감성 패널을 분류하였다.According to the sensitivity skin diagnosis method in Korean Patent Publication No. 10-2002-0040283, a sensitive panel and a non-sensitive panel were selected using the sensitivity diagnosis questionnaire data in the patent document. Specifically, questions related to general phenomena (cosmetics trouble, photosensitivity and photoinflammation, skin thickness, skin allergy, skin changes) and questions related to causes and phenomena (15 questions related to cosmetics, 14 questions related to congenital and family history, 9 questions related to environmental factors). Sensitive skin was categorized as non-sensitive, slightly sensitive, sensitive, and very sensitive by scoring and assigning weights based on the contents of the questions (questions, lifestyle habits, and other related 10 questions), and based on this, sensitive skin was classified into sensitive and non-sensitive panels. did.
[실시예 1-2] 피부 일차 자극시험[Example 1-2] Primary skin irritation test
피부 자극 유발도를 평가하여 민감성/비민감성 패널을 선정하기 위해 단회 밀폐 첩포 시험을 하기와 같이 수행하였다. 먼저 시험 대상자의 등 부위를 70% 에탄올로 닦아내고 완전히 건조시킨 후, 0.3%의 소듐 라우릴 설페이트(Sodium Lauryl Sulfate)를 24시간 동안 단회 밀폐 첩포하고, 첩포를 제거한 후, 30분, 24시간이 경과하였을 때 시험 부위를 관찰하였다. CTFA guideline을 응용하여 Frosch & Kligman의 고안된 측정 평가법으로 자극 정도를 평가 및 분석하고, 민감성 패널과 비민감성 패널을 분류하였다.To evaluate the degree of skin irritation and select a sensitive/non-sensitive panel, a single closed patch test was performed as follows. First, the test subject's back was wiped with 70% ethanol and dried completely, then a single, airtight patch of 0.3% Sodium Lauryl Sulfate was applied for 24 hours, the patch was removed, and then 30 minutes and 24 hours had passed. When done, the test area was observed. Applying the CTFA guideline, the degree of stimulation was evaluated and analyzed using Frosch & Kligman's measurement and evaluation method, and sensitive and non-sensitive panels were classified.
[실시예 1-3] 자극감 시험[Example 1-3] Irritation test
자극감 유발 시료로 5%의 젖산 용액을, 대조시료로 증류수를 이용하여 2회 자극감 시험을 수행하였다. 각 테스트에서 각각 상기 자극감 유발 시료 및 대조시료 1.5mL을 시험 대상자에게 좌우 눈밑 피부에 2회씩 동시에 문지르게 하였다. 그런 다음, 따가움, 화끈거림, 가려움, 눈시림 등에 대한 4가지 느낌에 대하여 0점(느낌 없음)부터 3점(매우 심함)까지의 점수를 9분 동안(최초 10초) 1분 간격으로 평가하고 각 피험자의 측정 시간에 따른 자극감 점수의 평균 수치를 분석하여, 민감성 패널과 비민감성 패널을 분류하였다.An irritation test was performed twice using a 5% lactic acid solution as an irritation-inducing sample and distilled water as a control sample. In each test, the test subject was asked to rub 1.5 mL of the irritation-inducing sample and control sample simultaneously on the skin under the left and right eyes twice, respectively. Then, the four feelings of stinging, burning, itching, and stinging eyes were rated from 0 (no feeling) to 3 (very severe) at 1-minute intervals for 9 minutes (the first 10 seconds). The average value of irritation score according to the measurement time of each subject was analyzed and classified into sensitive and non-sensitive panels.
상기 실시예 1-1 내지 실시예 1-3 모두에서 민감성 패널로 분류된 28명의 민감성 패널과 상기 실시예 1-1 내지 실시예 1-3 모두에서 비민감성 패널로 분류된 29명의 비민감성 패널을 포함하는 총 57명을 대상으로 아미노산, 아미노산 대사체, 세라마이드, 지방산, 콜레스테롤 함량을 분석하였다.28 sensitive panelists classified as sensitive panels in all of Examples 1-1 to 1-3 and 29 non-sensitive panelists classified as non-sensitive panels in all of Examples 1-1 to 1-3. A total of 57 people were analyzed for amino acid, amino acid metabolite, ceramide, fatty acid, and cholesterol content.
[실시예 2] 피부 각질 채취[Example 2] Skin keratin collection
실시예 1에서 선정된 민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명을 대상으로 피부 각질 채취용 스트리핑 테이프(상표명: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, 제조사: CUDERM, Disc: 0.875 in. diameter (22.0 mm))를 이용하여 얼굴 뺨 부위와 이마 부위에서 피부 각질을 채취하였다. 구체적으로, D500 D-squame Disc Applicator(상표명: D500 - D-Squame Pressure Instrument, 제조사: CUDERM, 압력: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm. Pressure Area: 7/8 in. (22.24 mm))로 회당 1초간 피부에 부착한 후 떼어내는 테이프 스트리핑을 10회 반복하여 57명 각각의 피부 각질을 수득하였다.Stripping tape for skin exfoliation (brand name: D-100 - D-squame Standard Sampling Discs, manufacturer: CUDERM, Disc: 0.875 in. diameter ( Exfoliated skin was collected from the cheek and forehead areas of the face using a 22.0 mm). Specifically, D500 D-squame Disc Applicator (Brand Name: D500 - D-Squame Pressure Instrument, Manufacturer: CUDERM, Pressure: Pressure Applied: 225 gr./sq.cm. Pressure Area: 7/8 in. (22.24 mm)) The tape stripping process, which involves attaching the tape to the skin for 1 second each time and then removing it, was repeated 10 times to obtain dead skin cells from each of 57 people.
[실시예 3] 성분 분석[Example 3] Ingredient analysis
[실시예 3-1] 아미노산 및 아미노산 대사체 분석[Example 3-1] Analysis of amino acids and amino acid metabolites
(1) 단백질 정량 분석(1) Protein quantitative analysis
상기 실시예 2에서 연속적으로 채취한 각질 채취용 스트리핑 테이프 5장을 각각 반으로 잘라 20 mL 유리 바이알에 넣고 PBS 버퍼에 0.1%(w/v) 도데실 황산 나트륨/2%(w/v) 프로필렌 글리콜이 되도록 제조한 용액 1 mL를 넣어 실온에서 60분간 초음파 추출하였다. PierceTM BCA Protein Assay Kit를 사용하여 제조원의 실험방법에 따라 시료 및 표준액을 준비하여 단백질 정량을 분석하였다.Each of the five stripping tapes for keratin collection collected sequentially in Example 2 was cut in half, placed in a 20 mL glass vial, and mixed with 0.1% (w/v) sodium dodecyl sulfate/2% (w/v) propylene in PBS buffer. 1 mL of the solution prepared to become glycol was added and ultrasonic extraction was performed for 60 minutes at room temperature. Samples and standard solutions were prepared using the Pierce TM BCA Protein Assay Kit according to the manufacturer's experimental method, and protein quantification was analyzed.
(2) 아미노산 분석(2) Amino acid analysis
상기 (1)에서 추출한 시료 중 일부를 원심분리(12,000 rpm, 4℃, 5분)하여 상등액을 검액으로 사용하였다. 18종의 아미노산을 0.5 ~ 50 ㎍/mL 범위에서 6개 농도로 각각 만들어 표준액을 준비하였다. 상기 표준액 및 검액을 20 μL씩 취하여 HPLC 바이알에 넣고 AccQ-Tag amino acids derivatization kit의 유도체화 시액 중 보퍼레이트 버퍼 70 μL, 밀 시약(Flour reagent) 2A 20 μL를 넣어 잘 흔들어 섞고 1분간 실온에 방치한 뒤 55℃에서 10분간 반응시켜 형광 유도체화 후 UPLC-PDA로 분석하였다. 분석 컬럼은 ACQUITY UPLC AccQ-Tag Ultra C18 컬럼(2.1 × 100 mm, 1.7 μm)을 사용하였으며 이동상은 AccQ-Tag Ultra Eluent A, B를 이용하여 농도구배조건으로 하기의 분석 조건 하에서 분석하였으며, 이동상은 하기 표 1에 나타내었다.Some of the samples extracted in (1) above were centrifuged (12,000 rpm, 4°C, 5 minutes), and the supernatant was used as a sample solution. A standard solution was prepared by preparing 18 types of amino acids at 6 concentrations in the range of 0.5 to 50 ㎍/mL. Take 20 μL of the above standard and sample solutions, place them in an HPLC vial, add 70 μL of borfurate buffer and 20 μL of Mill reagent (Flour reagent) 2A from the derivatization reagent of the ACCQ-Tag amino acids derivatization kit, shake well to mix, and leave at room temperature for 1 minute. Then, it was reacted at 55°C for 10 minutes to convert it into fluorescence and then analyzed by UPLC-PDA. The analysis column was an ACQUITY UPLC ACCQ-Tag Ultra C18 column (2.1 It is shown in Table 1 below.
<UPLC-PDA 분석 조건><UPLC-PDA analysis conditions>
유속 : 0.7 mL/minFlow rate: 0.7 mL/min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55℃
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 20 ℃Autosampler tray temperature: 20 ℃
주입량 : 1 μLInjection volume: 1 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 10% 아세토나이트릴Weak needle wash: 10% acetonitrile
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 70% 아세토나이트릴Strong needle wash: 70% acetonitrile
이동상 : A는 AccQ-Tag Ultra Eluent A(버퍼), B는 AccQ-Tag Ultra Eluent B(아세토나이트릴 중 1 % 포름산)Mobile phase: A is ACCQ-Tag Ultra Eluent A (buffer), B is ACCQ-Tag Ultra Eluent B (1% formic acid in acetonitrile)
(3) 아미노산 대사체 분석(3) Amino acid metabolite analysis
상기 (1)에서 추출한 시료 중 일부를 원심분리(12,000 rpm, 4℃, 5분)하여 상등액 20 μL을 취해 갈색 HPLC 바이알에 넣고 980 μL의 70 % 아세토나이트릴을 넣어 희석한 것을 검액으로 하였다. 표준품인 피로글루탐산(PCA, pyroglutamic acid), 시스-유로카닌 산(cis-UCA, cis-urocanic acid), 티-유로카닌 산(t-UCA, t-urocanic acid) 및 시트룰린(citrulline) 은 각각 1 mg/mL의 농도가 되도록 하여 물에 녹여 표준원액으로 하였다. 상기 4가지 표준원액을 혼합하여 혼합액 중 PCA는 5 ~ 500 ng/mL, cis-UCA 는 0.2 ~ 20 ng/mL, t-UCA는 0.5 ~ 50 ng/mL, 시트룰린은 5 ~ 500 ng/mL의 농도가 되게 70 % 아세토나이트릴로 희석하여 표준액으로 하였다. 준비된 표준액 및 검액은 LC-MS로 분석하였다. 이 때 분석 컬럼은 ACQUITY BEH Amide (2.1 mm X 100 mm, 1.7 mm)을 이용하여 유속 0.3 mL/min, 주입량 2 μL, 컬럼온도 40 ℃, 오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 4 ℃, 위크 니들 워시(Weak needle wash)로 70% 아세토나이트릴, 스트롱 니들 워시(Strong needle wash)로 10% 아세토나이트릴, 이동상으로 A는 물, B는 아세토나이트릴의 조건 하에서 분석하였으며, 이동상은 하기 표 2에 나타내었다. 또한, MS 분석 조건은 하기와 같다.Some of the samples extracted in (1) above were centrifuged (12,000 rpm, 4°C, 5 minutes), 20 μL of the supernatant was taken, placed in a brown HPLC vial, and diluted with 980 μL of 70% acetonitrile, which was used as the sample solution. Standard products pyroglutamic acid (PCA), cis-UCA (cis-urocanic acid), t-UCA (t-urocanic acid), and citrulline each contain 1 It was dissolved in water to obtain a concentration of mg/mL and used as a standard stock solution. By mixing the above four standard stock solutions, PCA is 5 to 500 ng/mL, cis-UCA is 0.2 to 20 ng/mL, t-UCA is 0.5 to 50 ng/mL, and citrulline is 5 to 500 ng/mL. It was diluted with 70% acetonitrile to obtain a standard solution. The prepared standard solution and sample solution were analyzed by LC-MS. At this time, the analysis column used ACQUITY BEH Amide (2.1 mm The analysis was conducted under the conditions of 70% acetonitrile for weak needle wash, 10% acetonitrile for strong needle wash, and water for A and acetonitrile for mobile phase. The mobile phase is listed in Table 2 below. indicated. Additionally, the MS analysis conditions are as follows.
<MS 분석 조건><MS analysis conditions>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS device: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : ESI 양성 이온 모드Ionization mode: ESI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150℃
탈용매 온도 : 350 ℃Desolvation temperature: 350℃
탈용매 가스 유량 : 550 L/hDesolvation gas flow rate: 550 L/h
모세관 전압(Capillay) : 3.5 kVCapillary voltage (Capillay): 3.5 kV
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: MRM (multiple reaction monitoring)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 (2) 및 (3)에서 분석된 아미노산은 히스티딘, 아스파라긴, 세린, 글루타민, 아르기닌, 글리신, 아스파르트산, 글루탐산, 트레오닌, 알라닌, 프롤린, 리신, 티로신, 발린, 류신, 이소류신, 페닐알라닌 및 트립토판으로 총 18종이며, 아미노산 대사체는 피로글루탐산(pyroglutamic acid), 시스-유로카닌 산(cis-urocanic acid), 티-유로카닌 산(t-urocanic acid) 및 시트룰린(citrulline)으로 총 4종이다.The amino acids analyzed in (2) and (3) above were histidine, asparagine, serine, glutamine, arginine, glycine, aspartic acid, glutamic acid, threonine, alanine, proline, lysine, tyrosine, valine, leucine, isoleucine, phenylalanine, and tryptophan. There are a total of 18 types, and there are a total of 4 types of amino acid metabolites: pyroglutamic acid, cis-urocanic acid, t-urocanic acid, and citrulline.
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 아미노산 총 함량(μg/mg protein)과 아미노산 대사체 총 함량(μg/mg protein)을 도출하였으며, 민감성 패널 28명의 아미노산 총 함량의 평균 및 아미노산 대사체 총 함량의 평균을 계산하고, 비민감성 패널 29명 역시 아미노산 총 함량의 평균 및 아미노산 대사체 총 함량의 평균을 계산하여 그 결과를 각각 도 1 및 도 2에 나타내었다.Through the above analysis, the total amino acid content (μg/mg protein) and the total amino acid metabolite content (μg/mg protein) contained in the skin of each of the 28 sensitive and 29 non-sensitive panel members in Example 2 were derived, and the sensitive panel The average of the total amino acid content and the average of the total amino acid metabolite content of the 28 people were calculated, and the average of the total amino acid content and the average of the total amino acid metabolite content of the 29 non-sensitive panelists were also calculated, and the results are shown in Figures 1 and 2, respectively. shown in
도 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 18종의 아미노산 및 4종의 아미노산 대사체 함량을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 총 18종의 아미노산과 총 4종의 아미노산 대사체를 각각 약 8% 이상, 약 27% 이상 더 많이 함유하고 있음을 확인하였다.As shown in Figures 1 and 2, as a result of checking the contents of 18 amino acids and 4 amino acid metabolites in each of the sensitive and non-sensitive panels, non-sensitive skin had a total of 18 amino acids and a total of 4 amino acids compared to sensitive skin. It was confirmed that the species contained about 8% more and about 27% more amino acid metabolites, respectively.
[실시예 3-2] 세라마이드 분석[Example 3-2] Ceramide analysis
상기 실시예 3-1에서 아미노산 및 아미노산 대사체 분석 후 남은 나머지 각 반장씩의 테이프를 메탄올/에틸아세테이트(2:1) 용매 3 mL가 담긴 20 mL 바이알에 넣어 15분간 초음파 추출하였다. 추출액을 PTFE syringe filter(0.45 um, 13 mm)로 필터하여 필터액 1 mL를 1.5 mL 마이크로튜브에 옮겨 SpeedvacTM(40분, 40 ℃)에 증발시킨 후 다시 필터액 1 mL를 취하여 같은 조건에서 다시 증발시켜 총 2 mL의 시료를 건조시켰다. 그런 다음 상기 추출된 지질을 클로로포름/메탄올 혼합액(2:1) 300 μL에 녹인 후 원심분리(12,000 rpm, 4 ℃, 5분)하여 상등액 중 200 μL을 취하여 검액으로 사용하였다. 각 세라마이드 표준품(CER-NP (nonhydroxy fatty acid conjugated to phytosphingosine), CER-NDS (nonhydroxy fatty acid conjugated to dihydrosphingosine), CER-NS (nonhydroxy fatty acid conjugated to sphingosine), CER-AP (a-hydroxy fatty acid conjugated to phytosphingosine, CER-AS (a-hydroxy fatty acid conjugated to sphingosine))은 각각 1 mg/mL의 농도가 되도록 하여 클로로포름/메탄올 혼합액(2:1)에 녹여 표준원액으로 하였다. 세라마이드 표준액은 상기 5가지 표준원액의 혼합액 중 각 세라마이드 표준원액의 농도가 1 ~ 500 ng/mL 농도가 되도록 준비하여 LC-MS 분석을 수행하였으며, UPLC 및 LC-MS 분석 조건은 하기와 같다. 이 때 이동상은 하기 표 3에 나타내었다.After analyzing amino acids and amino acid metabolites in Example 3-1, each remaining half of the tape was placed in a 20 mL vial containing 3 mL of methanol/ethyl acetate (2:1) solvent and subjected to ultrasonic extraction for 15 minutes. Filter the extracted liquid with a PTFE syringe filter (0.45 um, 13 mm), transfer 1 mL of the filter liquid to a 1.5 mL microtube, evaporate it in Speedvac TM (40 minutes, 40 °C), then take 1 mL of the filter liquid again and repeat under the same conditions. A total of 2 mL of sample was dried by evaporation. Then, the extracted lipid was dissolved in 300 μL of chloroform/methanol mixture (2:1), centrifuged (12,000 rpm, 4°C, 5 minutes), and 200 μL of the supernatant was taken and used as a sample solution. Each ceramide standard (CER-NP (nonhydroxy fatty acid conjugated to phytosphingosine), CER-NDS (nonhydroxy fatty acid conjugated to dihydrosphingosine), CER-NS (nonhydroxy fatty acid conjugated to sphingosine), CER-AP (a-hydroxy fatty acid conjugated) to phytosphingosine, CER-AS (a-hydroxy fatty acid conjugated to sphingosine)) were each dissolved in a chloroform/methanol mixture (2:1) at a concentration of 1 mg/mL to prepare a standard stock solution. The five ceramide standard solutions were listed above. LC-MS analysis was performed by preparing the concentration of each ceramide standard stock solution in the mixture of standard stock solutions to a concentration of 1 to 500 ng/mL, and the UPLC and LC-MS analysis conditions are as follows. At this time, the mobile phase is Table 3 below. shown in
<UPLC 분석 조건><UPLC analysis conditions>
컬럼 : ACQUITY BEH C18(2.1mm × 50mm, 1.7μm)Column: ACQUITY BEH C18 (2.1mm × 50mm, 1.7μm)
유속 : 0.35 mL/minFlow rate: 0.35 mL/min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55℃
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 4 ℃Autosampler tray temperature: 4 ℃
주입량 : 2 μLInjection volume: 2 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 70% 메탄올Weak needle wash: 70% methanol
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 메탄올/이소프로판올(1:1)Strong needle wash: Methanol/isopropanol (1:1)
이동상 : A는 2mM 암모늄 포메이트/메탄올(1/1, 0.1% 포름산), B는 메탄올/이소프로판올(6/4, 2mM 암모늄 포메이트 및 0.1% 포름산 포함)Mobile phase: A: 2mM ammonium formate/methanol (1/1, 0.1% formic acid), B: methanol/isopropanol (6/4, containing 2mM ammonium formate and 0.1% formic acid)
<MS 분석 조건><MS analysis conditions>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS device: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : ESI 양성 이온 모드Ionization mode: ESI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150℃
탈용매 온도 : 350 ℃Desolvation temperature: 350℃
탈용매 가스 유량 : 550 L/hDesolvation gas flow rate: 550 L/h
모세관 전압(Capillay) : 3.3 kVCapillary voltage (Capillay): 3.3 kV
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: MRM (multiple reaction monitoring)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 분석된 세라마이드는 NDS 계열(C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS 및 C32_NDS, 총 9종) NS 계열(C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26_NS 및 C28_NS, 총 8종), NP 계열(C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP 및 C32_NP, 총 9종), AP 계열(C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP 및 C32_AP, 총 9종) 및 AS 계열(C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS 및 C30_AS, 총 8종)로 총 43종이다.The ceramides analyzed above were NDS series (C16_NDS, C18_NDS, C20_NDS, C22_NDS, C24_NDS, C26_NDS, C28_NDS, C30_NDS and C32_NDS, a total of 9 types) and NS series (C16_NS, C18_NS, C20_NS, C22_NS, C24_1_NS, C24_NS, C26). _NS and C28_NS, total 8 types), NP series (C16_NP, C18_NP, C20_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP, C30_NP and C32_NP, 9 types in total), AP series (C16_AP, C18_AP, C20_AP, C22_AP, C24_AP, C26_AP, C28_AP, C30_AP and C32_ AP , a total of 9 species) and the AS series (C16_AS, C18_AS, C20_AS, C22_AS, C24_AS, C26_AS, C28_AS and C30_AS, a total of 8 species), for a total of 43 species.
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 5 계열의 세라마이드 총 함량(μg/mg protein)을 도출하였으며, 민감성 패널 28명의 세라마이드 총 함량의 평균 및 비민감성 패널 29명의 세라마이드 총 함량의 평균을 계산하여 그 결과를 도 3에 나타내었다.Through the above analysis, the total content (μg/mg protein) of 5 series of ceramides contained in the skin of each of the 28 sensitive and 29 non-sensitive panelists in Example 2 was derived, and the average and ratio of the total ceramide content of the 28 sensitive panelists were calculated. The average of the total ceramide content of the 29 sensitive panelists was calculated, and the results are shown in Figure 3.
도 3에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 5 계열의 세라마이드 함량을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 5 계열의 세라마이드를 약 29% 이상 더 많이 함유하고 있음을 확인하였다.As shown in Figure 3, as a result of checking the content of ceramides of the 5 series in each of the sensitive and non-sensitive panels, it was confirmed that non-sensitive skin contained about 29% more ceramides of the 5 series than sensitive skin.
[실시예 3-3] 지방산 분석[Example 3-3] Fatty acid analysis
상기 실시예 3-2에서 세라마이드 분석에 사용 후 남은 100 μL의 시료 중 20 μL를 취하여 클로로포름/메탄올 혼합액(2:1) 80 μL을 넣어 1/5 희석하였다. 그런 다음 시료액 10 μL 에 유도체화 시약으로 트리페닐포스페이트(TPP, triphenyl phosphate), 디피리딜 디설파이드(DPDS, dipyridyl disulfide), 피콜릴아미드(PA, picolylamide), 아세토니트릴을 순서대로 넣어 유도체화 반응을 진행한 후 LC-MS 분석을 수행하였으며, UPLC 분석 조건, MS 분석 조건은 하기와 같으며, 이동상은 하기 표 4에 나타내었다.In Example 3-2, 20 μL of the remaining 100 μL sample was taken and diluted by 1/5 with 80 μL of a chloroform/methanol mixture (2:1). Then, add triphenyl phosphate (TPP, triphenyl phosphate), dipyridyl disulfide (DPDS), picolylamide (PA), and acetonitrile as derivatization reagents to 10 μL of sample solution in that order for derivatization reaction. After proceeding, LC-MS analysis was performed. The UPLC analysis conditions and MS analysis conditions were as follows, and the mobile phase was shown in Table 4 below.
<UPLC 분석 조건><UPLC analysis conditions>
컬럼 : ACQUITY BEH C18(2.1mm × 50mm, 1.7μm)Column: ACQUITY BEH C18 (2.1mm × 50mm, 1.7μm)
유속 : 0.35 mL/minFlow rate: 0.35 mL/min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55℃
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 4 ℃Autosampler tray temperature: 4 ℃
주입량 : 2 μLInjection volume: 2 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 70% 메탄올Weak needle wash: 70% methanol
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 메탄올/이소프로판올(1:1)Strong needle wash: Methanol/isopropanol (1:1)
이동상 : A는 2mM 암모늄 포메이트/메탄올(1/1, 0.1% 포름산), B는 메탄올/이소프로판올(6/4, 2mM 암모늄 포메이트 및 0.1% 포름산 포함)Mobile phase: A: 2mM ammonium formate/methanol (1/1, 0.1% formic acid), B: methanol/isopropanol (6/4, containing 2mM ammonium formate and 0.1% formic acid)
<MS 분석 조건><MS analysis conditions>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS device: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : ESI 양성 이온 모드Ionization mode: ESI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150℃
탈용매 온도 : 350 ℃Desolvation temperature: 350℃
탈용매 가스 유량 : 550 L/hDesolvation gas flow rate: 550 L/h
모세관 전압(Capillay) : 3.3 kVCapillary voltage (Capillay): 3.3 kV
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: MRM (multiple reaction monitoring)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 분석된 지방산은 C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16:1FA, C18:2FA, C18:1FA, C22:1FA 및 C24:1FA로 총 11종이다.There are a total of 11 types of fatty acids analyzed: C20FA, C22FA, C24FA, C26FA, C28FA, C30FA, C16:1FA, C18:2FA, C18:1FA, C22:1FA, and C24:1FA.
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 지방산 함량(μg/mg protein)을 도출하였으며, 민감성 패널 28명의 지방산 총 함량의 평균 및 비민감성 패널 29명의 지방산 총 함량의 평균을 도출하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다.Through the above analysis, the fatty acid content (μg/mg protein) contained in the skin of each of the 28 sensitive and 29 non-sensitive panelists in Example 2 was derived, and the average of the total fatty acid content of the 28 sensitive panelists and the 29 non-sensitive panelists were derived. The average of the total fatty acid content was derived, and the results are shown in Figure 4.
도 4에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 11종의 지방산 함량을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 11종의 지방산을 약 9% 이상 더 많이 함유하고 있음을 알 수 있었다.As shown in Figure 4, as a result of checking the content of 11 types of fatty acids in each of the sensitive and non-sensitive panels, it was found that non-sensitive skin contained about 9% more fatty acids of 11 types than sensitive skin. .
[실시예 3-4] 콜레스테롤 분석[Example 3-4] Cholesterol analysis
상기 실시예 3-2에서 세라마이드 분석에 사용했던 검액을 동시에 콜레스테롤 분석에 이용하였으며 콜레스테롤 표준액은 0.1 ~ 10 μL의 범위로 준비하였다. 이후 LC-MS 분석을 수행하였으며, UPLC 조건 및 LC-MS 조건은 하기와 같으며, 이동상은 하기 표 5에 나타내었다.The sample solution used for ceramide analysis in Example 3-2 was simultaneously used for cholesterol analysis, and the cholesterol standard solution was prepared in the range of 0.1 to 10 μL. Afterwards, LC-MS analysis was performed. UPLC conditions and LC-MS conditions were as follows, and the mobile phase was shown in Table 5 below.
<UPLC 조건><UPLC conditions>
컬럼 : ACQUITY BEH C18(2.1mm × 50mm, 1.7 μm)Column: ACQUITY BEH C18 (2.1mm × 50mm, 1.7 μm)
유속 : 0.4 mL/minFlow rate: 0.4 mL/min
칼럼온도 : 55 ℃Column temperature: 55℃
오토샘플러 트레이(Autosampler tray) 온도 : 4 ℃Autosampler tray temperature: 4 ℃
주입량 : 2 μLInjection volume: 2 μL
위크 니들 워시(Weak needle wash) : 70% 메탄올Weak needle wash: 70% methanol
스트롱 니들 워시(Strong needle wash) : 메탄올/이소프로판올(1:1)Strong needle wash: Methanol/isopropanol (1:1)
이동상 : A는 물, B는 아세토나이트릴Mobile phase: A is water, B is acetonitrile
<MS 분석 조건><MS analysis conditions>
MS 장치 : Waters Xevo TQ-S mass spectrometerMS device: Waters Xevo TQ-S mass spectrometer
이온화 모드 : APCI 양성 이온 모드Ionization mode: APCI positive ion mode
소스 온도 : 150 ℃Source temperature: 150℃
탈용매 온도 : 400 ℃Desolvation temperature: 400℃
탈용매 가스 유량 : 500 L/hDesolvation gas flow rate: 500 L/h
코로나 전류(corona current) : 4.0 mACorona current: 4.0 mA
이온 모니터 : MRM(multiple reaction monitoring)Ion monitor: MRM (multiple reaction monitoring)
소프트웨어 : MassLynx 4.1Software: MassLynx 4.1
상기 분석을 통해 실시예 2의 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부에 함유된 콜레스테롤 함량(μg/mg protein)을 도출하고, 도출된 콜레스테롤에 대한 상기 세라마이드 분석을 통해 얻어진 세라마이드 함량(μg/mg protein)의 비율인 세라마이드/콜레스테롤을 계산하였으며, 민감성 패널 28명의 상기 세라마이드/콜레스테롤의 평균 및 비민감성 패널 29명의 상기 세라마이드/콜레스테롤의 평균을 도출하여 그 결과를 도 5에 나타내었다.Through the above analysis, the cholesterol content (μg/mg protein) contained in the skin of each of the 28 sensitive and 29 non-sensitive panel members of Example 2 was derived, and the ceramide content (μg) obtained through the ceramide analysis for the derived cholesterol was calculated. The ceramide/cholesterol ratio (/mg protein) was calculated, and the average of the ceramide/cholesterol of the 28 sensitive panelists and the average of the ceramide/cholesterol of the 29 non-sensitive panelists were calculated, and the results are shown in Figure 5.
도 5에 나타난 바와 같이, 민감성 패널과 비민감성 패널 각각의 세라마이드/콜레스테롤 비율을 확인한 결과, 비민감성 피부는 민감성 피부에 비하여 세라마이드/콜레스테롤 비율이 약 100% 이상 더 높음을 알 수 있었다.As shown in Figure 5, as a result of checking the ceramide/cholesterol ratio of each of the sensitive and non-sensitive panels, it was found that the ceramide/cholesterol ratio of non-sensitive skin was about 100% higher than that of sensitive skin.
[실시예 4] 주성분 분석[Example 4] Principal component analysis
민감성 그룹과 비민감성 그룹을 판별할 수 있는 주요 변수를 찾기 위해서 주성분 분석법(Principle Component Analysis, PCA)을 통해 분석하였으며 Minitab 14 프로그램을 사용하여 통계처리 하였다. 상기 실시예 1에서 도출된 총 57명(민감성 패널 28명 및 비민감성 패널 29명)의 피부 각질 시료를 대상으로 주성분 분석을 수행한 결과를 도 6에 나타내었으며, 그 결과 주성분 1(component 1, 지질 PC1)과 주성분 2(component 2, 지질 PC2)로 구분될 수 있음을 확인하였다. 또한, 57명의 분석 대상자들의 지질 PC1과 지질 PC2의 산점도를 그려보았을 때(도 7), 상기 주성분 1 및 주성분 2로 민감성 그룹과 비민감성 그룹을 명확히 구분할 수 있음을 확인하였다. In order to find key variables that can distinguish between sensitive and non-sensitive groups, the analysis was conducted using Principal Component Analysis (PCA) and statistical processing was performed using the Minitab 14 program. The results of principal component analysis on the skin keratin samples of a total of 57 people (28 sensitive panelists and 29 non-sensitive panelists) derived in Example 1 are shown in Figure 6. As a result, main component 1 (component 1, It was confirmed that it can be divided into lipid PC1) and main component 2 (lipid PC2). In addition, when a scatter plot of lipid PC1 and lipid PC2 of 57 analysis subjects was drawn (Figure 7), it was confirmed that the sensitive group and the non-sensitive group could be clearly distinguished using principal component 1 and principal component 2.
상기 분석 결과 세라마이드 NP 계열이 민감성/비민감성을 판별하는 주된 요인으로 선정되었으며, 그 중 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP가 유의한 차이가 있는 주요 요인으로 선별되었다.As a result of the above analysis, the ceramide NP series was selected as the main factor in determining sensitivity/non-sensitivity, and among them, C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP were selected as the main factors with significant differences.
[실시예 5] 세라마이드 함량들에 기초한 민감성 함수 및 비민감성 함수 도출[Example 5] Derivation of sensitivity function and non-sensitivity function based on ceramide contents
상기 실시예 1에서 선정된 민감성 패널 28명과 비민감성 패널 29명 각각의 피부 민감성 정도를 참값으로 두고, 상기 실시예 4의 주성분 분석을 통해 주요 요인으로 선별된 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 함량을 기초로 민감성 피부와 비민감성 피부를 판별할 수 있는 유의한 민감성 함수 및 비민감성 함수를 도출하였으며, 각각의 함수는 하기와 같다.The skin sensitivity level of each of the 28 sensitive and 29 non-sensitive panelists selected in Example 1 was set as the true value, and ceramides C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP were selected as main factors through principal component analysis in Example 4. Based on the content of , a significant sensitivity function and non-sensitivity function that can distinguish sensitive skin from non-sensitive skin were derived, and each function is as follows.
민감성 함수 = Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28 Sensitivity function = Sc + Sc 16 ×C 16 + Sc 22 ×C 22 + Sc 24 ×C 24 + Sc 26 ×C 26 + Sc 28 ×C 28
비민감성 함수 = NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 Insensitivity function = NSc + NSc 16 ×C 16 + NSc 22 ×C 22 + NSc 24 ×C 24 + NSc 24 ×C 26 + NSc 24 ×C 28
상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이고, 각 함량의 단위는 μg/mg protein이며, Sc, Sc16, Sc22, Sc24, Sc26, Sc28, NSc, NSc16, NSc22, NSc24, NSc24 및 NSc24는 상수이다.In the sensitivity function and the insensitivity function, C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of ceramide C22_NP, C 24 is the content of ceramide C24_NP, C 26 is the content of ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP, The unit of each content is μg/mg protein, and Sc, Sc 16 , Sc 22 , Sc 24 , Sc 26 , Sc 28 , NSc, NSc 16 , NSc 22 , NSc 24 , NSc 24 and NSc 24 are constants.
[실시예 6] 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용한 피부 민감성 정도 판별[Example 6] Determination of skin sensitivity level using sensitivity function and non-sensitivity function
민감성 피부와 비민감성 피부를 판별하기 위해, 상기 실시예 5의 민감성 함수에서 Sc에 -3.329, Sc16에 0.7672, Sc22에 0.0134, Sc24에 0.0928, Sc26에 -0.2583, Sc28에 0.1385를 대입하고, 상기 실시예 5의 비민감성 함수에서 NSc에 -4.9217, NSc16에 0.7202, NSc22에 0.0653, NSc24에 -0.025, NSc26에 0.1023, NSc28에 -0.0569를 대입하였으며, 상기 실시예 2의 세라마이드 분석을 통해 얻어진 57명 각각의 고유한 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP 함량(단위: μg/mg protein)을 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에 각각 대입하고, 57명의 패널 각각의 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 계산하였다.To distinguish between sensitive skin and non-sensitive skin, in the sensitivity function of Example 5, -3.329 for Sc, 0.7672 for Sc 16 , 0.0134 for Sc 22 , 0.0928 for Sc 24 , -0.2583 for Sc 26 , and 0.1385 for Sc 28 . Substituting -4.9217 for NSc, 0.7202 for NSc 16 , 0.0653 for NSc 22 , -0.025 for NSc 24 , 0.1023 for NSc 26 , and -0.0569 for NSc 28 in the insensitivity function of Example 5, the above example The unique ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP content (unit: μg/mg protein) of each of the 57 people obtained through the ceramide analysis in 2 was substituted into the sensitivity function and non-sensitivity function, respectively, and the Sensitivity function values and non-sensitivity function values were calculated.
그런 다음, 각 패널들의 민감성 함수값 및 비민감성 함수값 중 민감성 함수값이 비민감성 함수값보다 크면 민감성 피부로, 비민감성 함수값이 민감성 함수값보다 크면 비민감성 피부로 판별하고, 이를 판별값으로 하여, 그 결과를 하기 표 6 및 표 7에 나타내었다. 하기 표 6에서 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, C28_NP 함량의 단위는 μg/mg protein이며, NS는 비민감성, S는 민감성을 나타낸다. Then, among the sensitivity function value and non-sensitivity function value of each panel, if the sensitivity function value is greater than the non-sensitivity function value, it is judged as sensitive skin, and if the non-sensitivity function value is greater than the sensitivity function value, it is judged as non-sensitive skin, and this is used as the discriminant value. So, the results are shown in Tables 6 and 7 below. In Table 6 below, the unit of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP content is μg/mg protein, NS indicates non-sensitivity, and S indicates sensitivity.
[표 6][Table 6]
따른 피부 민감성 판별값Sensitivity function, insensitivity function
Skin sensitivity determination value according to
상기 표 6 및 표 7의 판별 결과를 바탕으로, 피부의 세라마이드 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP의 각 함량들에 기초하여 판별한, 상기 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용한 피부 민감성 정도 판별의 민감도, 특이도, 양성 예측도, 음성 예측도, 위음성, 위양성 및 정확도를 계산한 결과를 하기 표 8에 나타내었다.Based on the discrimination results in Tables 6 and 7, the sensitivity of skin sensitivity determination using the sensitivity function and non-sensitivity function, determined based on the respective contents of ceramide C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP, and C28_NP in the skin. , the results of calculating specificity, positive predictive value, negative predictive value, false negative, false positive, and accuracy are shown in Table 8 below.
상기 표 8에 나타난 바와 같이, 상기 실시예 5의 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용한 피부 민감성 정도 판별은 96%의 민감도, 93%의 특이도, 4%의 위음성, 7%의 위양성을 보이는 등 판별력이 우수함을 확인하였다. As shown in Table 8, the skin sensitivity level discrimination using the sensitivity function and non-sensitivity function of Example 5 showed a sensitivity of 96%, a specificity of 93%, a false negative of 4%, and a false positive of 7%. This excellence was confirmed.
따라서, 세라마이드 함량들에 기초한 민감성 함수 및 비민감성 함수를 이용하여 피부 민감성 정도를 판별 시, 우수한 판별력으로 민감성 피부 또는 비민감성 피부를 판별할 수 있음을 알 수 있었다. Therefore, when determining the degree of skin sensitivity using a sensitivity function and a non-sensitivity function based on ceramide contents, it was found that sensitive skin or non-sensitive skin could be distinguished with excellent discrimination power.
Claims (8)
상기 키트는, 대상 피부의 세라마이드 함량을 측정하는 세라마이드 측정부; 및 상기 세라마이드 측정부를 통해 측정된 각 세라마이드 함량들에 기초해 판별된 민감성 정도 결과값을 제시하는 결과 제시부를 포함하며,
상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하고,
상기 결과 제시부는 민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 각각 계산하고 그에 따라 피부 민감성 정도를 판별하는, 피부 민감성 정도 측정용 키트.A kit for measuring skin sensitivity,
The kit includes a ceramide measuring unit that measures the ceramide content of the target skin; And a result presentation unit that presents results of the degree of sensitivity determined based on the respective ceramide contents measured through the ceramide measurement unit,
The ceramides include C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP,
A kit for measuring the degree of skin sensitivity, wherein the result presentation unit calculates the sensitivity function value and the non-sensitivity function value respectively and determines the degree of skin sensitivity accordingly.
상기 민감성 함수는 Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28이고,
상기 비민감성 함수는 NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 이며,
상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이고,
상기 민감성 함수에서 Sc는 -4.12535 내지 -2.53265이고, Sc16은 0.7437 내지 0.7907이고, Sc22는 -0.01255 내지 0.03935이고, Sc24는 0.0339 내지 0.1517이고, Sc26은 -0.4386 내지 -0.078이고, Sc28은 0.0408 내지 0.2362이며,
상기 비민감성 함수에서 NSc는 -5.71805 내지 -4.12535이고, NSc16은 0.6967 내지 0.7437이고, NSc22는 0.03935 내지 0.09125이고, NSc24는 -0.0839 내지 0.0339이고, NSc26은 -0.078 내지 0.2826이고, NSc28은 -0.1546 내지 0.0408인 것인, 피부 민감성 정도 측정용 키트.According to paragraph 1,
The sensitivity function is Sc + Sc 16 × C 16 + Sc 22 × C 22 + Sc 24 × C 24 + Sc 26 × C 26 + Sc 28 × C 28 ,
The insensitivity function is NSc + NSc 16 × C 16 + NSc 22 × C 22 + NSc 24 × C 24 + NSc 24 × C 26 + NSc 24 × C 28 ,
In the sensitivity function and the insensitivity function, C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of ceramide C22_NP, C 24 is the content of ceramide C24_NP, C 26 is the content of ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP,
In the sensitivity function, Sc is -4.12535 to -2.53265, Sc 16 is 0.7437 to 0.7907, Sc 22 is -0.01255 to 0.03935, Sc 24 is 0.0339 to 0.1517, Sc 26 is -0.4386 to -0.078, Sc 28 is 0.0408 to 0.2362,
In the above insensitivity function, NSc is -5.71805 to -4.12535, NSc 16 is 0.6967 to 0.7437, NSc 22 is 0.03935 to 0.09125, NSc 24 is -0.0839 to 0.0339, and NSc 26 is -0.078 to 0.2826. And, NSc 28 A kit for measuring the degree of skin sensitivity, wherein is -0.1546 to 0.0408.
상기 결과 제시부는,
상기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면, 민감성 피부로 판별하고
상기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면, 비민감성 피부로 판별하는 것인, 피부 민감성 정도 측정용 키트.According to paragraph 4,
In the result presentation section,
If the sensitivity function value is greater than the non-sensitivity function value, the skin is judged to be sensitive.
A kit for measuring the degree of skin sensitivity, wherein if the non-sensitivity function value is greater than the sensitivity function value, the skin is determined to be non-sensitive.
상기 세라마이드는 C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP 및 C28_NP를 포함하며,
민감성 함수값 및 비민감성 함수값을 각각 계산하고 그에 따라 피부 민감성 정도를 판별하는, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.It includes measuring the ceramide content of the target skin and determining the degree of sensitivity of the skin based on the measured content,
The ceramides include C16_NP, C22_NP, C24_NP, C26_NP and C28_NP,
A method of providing the information necessary to diagnose the degree of skin sensitivity by calculating the sensitivity function value and the non-sensitivity function value respectively and determining the degree of skin sensitivity accordingly.
상기 방법은 민감성 함수값 및 비민감성 함수값이 하기와 같은, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.
민감성 함수는 Sc + Sc16×C16 + Sc22×C22 + Sc24×C24 + Sc26×C26 + Sc28×C28이고,
비민감성 함수는 NSc + NSc16×C16 + NSc22×C22 + NSc24×C24 + NSc24×C26 + NSc24×C28 이며,
상기 민감성 함수 및 비민감성 함수에서 C16은 세라마이드 C16_NP의 함량, C22는 세라마이드 C22_NP의 함량, C24는 세라마이드 C24_NP의 함량, C26은 세라마이드 C26_NP의 함량이며, C28은 세라마이드 C28_NP의 함량이고,
상기 민감성 함수에서 Sc는 -4.12535 내지 -2.53265이고, Sc16은 0.7437 내지 0.7907이고, Sc22는 -0.01255 내지 0.03935이고, Sc24는 0.0339 내지 0.1517이고, Sc26은 -0.4386 내지 -0.078이고, Sc28은 0.0408 내지 0.2362이며,
상기 비민감성 함수에서 NSc는 -5.71805 내지 -4.12535이고, NSc16은 0.6967 내지 0.7437이고, NSc22는 0.03935 내지 0.09125이고, NSc24는 -0.0839 내지 0.0339이고, NSc26은 -0.078 내지 0.2826이고, NSc28은 -0.1546 내지 0.0408이다.According to clause 6,
The method provides the information necessary to diagnose the degree of sensitivity of the skin, where the sensitivity function value and the non-sensitivity function value are as follows.
The sensitivity function is Sc + Sc 16 ×C 16 + Sc 22 ×C 22 + Sc 24 ×C 24 + Sc 26 ×C 26 + Sc 28 ×C 28 ,
The insensitivity function is NSc + NSc 16 ×C 16 + NSc 22 ×C 22 + NSc 24 ×C 24 + NSc 24 ×C 26 + NSc 24 ×C 28 ,
In the sensitivity function and the insensitivity function, C 16 is the content of ceramide C16_NP, C 22 is the content of ceramide C22_NP, C 24 is the content of ceramide C24_NP, C 26 is the content of ceramide C26_NP, C 28 is the content of ceramide C28_NP,
In the sensitivity function, Sc is -4.12535 to -2.53265, Sc 16 is 0.7437 to 0.7907, Sc 22 is -0.01255 to 0.03935, Sc 24 is 0.0339 to 0.1517, Sc 26 is -0.4386 to -0.078, Sc 28 is 0.0408 to 0.2362,
In the above insensitivity function, NSc is -5.71805 to -4.12535, NSc 16 is 0.6967 to 0.7437, NSc 22 is 0.03935 to 0.09125, NSc 24 is -0.0839 to 0.0339, and NSc 26 is -0.078 to 0.2826. And, NSc 28 is -0.1546 to 0.0408.
상기 방법은 하기 민감성 함수값이 비민감성 함수값에 비해 크면, 민감성 피부로 판별하고, 하기 비민감성 함수값이 민감성 함수값에 비해 크면, 비민감성 피부로 판별하는 것인, 피부의 민감성 정도를 진단하기 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.In clause 7,
The method diagnoses the degree of sensitivity of the skin, which determines the skin as sensitive if the sensitivity function value below is greater than the non-sensitivity function value, and determines the skin as non-sensitive if the non-sensitivity function value below is greater than the sensitivity function value. How to provide the information needed to do so.
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|---|
| JOO KYUNG-MI et al., Journal of Dermatological Science, 2015, Vol. 77, pp 71-74. 1부.* |
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