KR20180052130A - 리포산 콜린 에스테르 조성물, 및 생체적합성 안과용 제형의 생성 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 안과용 리포산 콜린 에스테르 조성물, 및 눈에 적합한 상기 조성물의 생체적합성 제형을 제조하기 위한 구체적인 방법을 기재한다.

Description

리포산 콜린 에스테르 조성물, 및 생체적합성 안과용 제형의 생성 방법

I. 본 발명의 분야

본 발명은 일반적으로 안과용 리포산 콜린 에스테르 조성물, 및 생체적합성이고 안정하며 비자극성인 점안제 제형의 제조 방법에 관한 것이다. 본원의 조성물은 안구 장애, 예컨대 노안, 안구 건조증, 백내장, 및 연령-관련 황반 변성 (이에 제한되지는 않음)을 위한 요법으로서 고려된다.

II. 본 발명의 배경기술

리포산 콜린 에스테르 (LACE)는 R-α-리포산의 화학적 합성 유도체이다.

티옥트산으로도 공지된 리포산은 탄소 6과 8을 연결하여 1,2-디티올란 고리를 형성하는 디술파이드 연결을 갖는 8개 탄소 지방산이다. 상기 산은 광학 이성질체를 형성하며, 이성질체 R-α-리포산이 생물학적으로 가장 활성이다.

리포산 콜린 에스테르 (LACE, 화학 구조, 도 1 참조)는 양이온성 콜린 헤드 기의 도입에 의해 생물학적 막을 투과하도록 고안되었다. 리포산은 각막을 투과하지 않는 반면에, 리포산의 콜린 에스테르 유도체는 각막을 투과하고, 각막 에스테라제에 의해 가수분해되어, 생물학적으로 활성인 리포산으로 변형된다. LACE는 노안을 치료하기 위한 점안제로서 1일 2회 적용되는 안과용 용액으로 제형화된 바 있다.

리포산 및 콜린으로 이루어진 전구약물인 LACE는 노안의 치료를 위한 특별한 분자이다. 리포산 (LA)은 활성 성분이고, 콜린 헤드 기는 눈으로의 투과성을 보조하는 역할을 한다. 점안제가 투여된 후, LA와 콜린 사이의 결합은 눈물막 및 각막에 있는 에스테라제에 의해 가수분해된다. 유리 리포산이 눈으로 들어가고, 궁극적으로 수정체에 도달한다. 거기서, 내인성 옥시도리덕타제에 의해 디히드로리포산으로 환원된 다음, 표면으로 연장된 수정체 세포 내에서 시토졸 단백질의 가수분해를 일으킨다. 이 단백질 분할은 시토졸의 자유 유동, 및 수정체의 연령-관련 강직과 관련된 산화 과정의 역전을 가능하게 한다. LACE로부터 제조된 안과용 용액은 원근조절을 가능하게 하고, 원근조절의 연령-관련 상실인 노안을 가진 사람에서 근거리 시력 초점을 개선시킬 것으로 예상된다.

노안은 근거리 물체에 대해 초점을 맞추는 것의 연령-관련 불능이고, 이 상태는 가시적인 물체에 대해 초점을 맞추기 위해 수정체의 초점 거리 및 곡률을 자동 조정하는데 있어서 유연성을 상실하게 만드는 수정체의 미세구조에서의 생리학적 변화에 의해 유발된다. 이 상태는 교정 렌즈에 의해 교정된다. 리포산 콜린 에스테르 ("LACE") (예를 들어, 미국 특허 번호 8,410,462 참조)가 근거리 시력을 복구시킬 수 있음이 보고된 바 있다.

이러한 주장은, 수정체 연화가 단백질 디술파이드 환원제인 디티오트레이톨 (DTT)을 이용하는 인간 공여자 수정체에서 및 리포산을 이용하는 마우스 수정체에서 약리학적으로 유도될 수 있음을 입증한 생체외 연구에 의해 뒷받침된다.

이 작용 메카니즘은 여러 안구 질환 및 장애의 치료에 대한 고려를 가능하게 한다. 이들 장애에는 노안, 연령-관련 황반 변성, 백내장 및 안구 건조증이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

LACE 제형을 문제가 있게 만드는 사안은, 디티올란 연결의 개환에 의해 분자의 활성을 저해하는 산화된 종이 형성되어 불안정화되는 경향이 있다는 것이었다. 실온에서, LACE는 산화된 종으로 급속히 분해된다 ("분해 생성물을 가진 LACE 안과용 용액의 HPLC 크로마토그램(HPLC Chromatogram of LACE Ophthalmic Solution with Degradation Products)" 참조, 도 2 참조). 심지어 냉장 온도에서 보관할 때에도, 보관 1주일만에 이미 급속한 산화가 일어나며, 이는 약물 제품으로서 분자의 유용성을 손상시킨다. LACE 안과용 용액 (EV06 안과용 용액으로도 지칭됨)이 약물 제품으로서 그의 최대한의 잠재력을 발휘하도록 하기 위해서는, 수성 제형을 보관시에 및 사용 동안에 안정화시키는 것이 중요하였다.

LACE 안과용 용액의 제약적 개발을 어렵게 만드는 또 다른 사안은, 토끼 자극 모델에서 생체내에서 관찰된 안구 표면 자극의 발생이었다. 본 발명은 안구 자극에 기여하거나 이를 유발하는 예상치 못한 파라미터, 및 이들 파라미터를 제거하거나 최소화하기 위한 방법을 설명한다. 이들 파라미터는 일반적으로 안구 자극과 상관관계가 있거나 그에 기여하는 인자인 제형의 조성 또는 약물 물질의 성질과는 관련이 없었다.

본원에 기재된 조성물 및 방법은 안과용 LACE 제형을 장기간 안정화시키는 방법을 기재한다. 또한, 특정한 공정 조건 하에 제형화된 LACE 제형의 자극의 원인에 대한 예상치 못한 발견이 기재된다. 또한, 최종적인 편안한 LACE 안과용 용액 (EV06 안과용 용액)의 생성에서의 주요 인자로서 확인된 중요한 공정 파라미터는 확실하지 않았다.

최종 공정 조건은 분해 종의 형성을 최소화하고, 안구 자극에 기여하는 종의 형성을 최소화시켰다.

III. 도면의 설명
도 1: 리포산 콜린 에스테르의 화학 구조.
도 2: 1, 3 및 4시간의 혼합에 대해 8.1분에서의 LACE 미셀 종, 제형 KW-LACE-01-86-2.
도 3: 6, 8 및 24시간의 혼합에 대해 8.1분에서의 LACE 미셀 종, 제형 KW-LACE-01-86-2.
도 4: 미셀 LACE 종 (피크는 화살표로 표시됨)은 냉장 온도에서 혼합할 때 가장 높다.
도 5a: 높은 미셀 LACE 농도 (HPLC에 대해 7.9-8.5분의 큰 피크에 의해 표시됨)는 "덩어리가 있는" LACE 클로라이드 API와 상관관계가 있다.
도 5b: 낮은 미셀 LACE (피크는 화살표로 표시됨)는 덩어리가 없는 LACE API와 상관관계가 있다.
도 6: 알라닌 및 pH의 효과.
도 7은 하기 변수들을 비교하는 제형의 플롯이다: (a) 대조군 (원래) 대 대조군 + 0.25% 염화나트륨, 대조군 + 0.25% 염화나트륨, 글리세린 무함유, (b) 대조군 (원래) 대 염화벤즈알코늄 (BAC) 무함유 대조군, (c) 대조군 (원래) 대 글리세린 무함유 원래 제형.
도 8은 57℃에서 LACE 안정성에 대한 술파이트의 효과를 제시한다. 술파이트-함유 제형을 pH 4 및 4.5에서 0.05% 술파이트 (■, ▲) 및 0.1% 술파이트 (x)의 농도로 제조하였다. 술파이트 첨가는 원래 제형 (◆)을 안정화시키지 않았다.
도 9는 염화벤즈알코늄 제거의 잠재적인 안정화 효과를 추가로 분석한다. 염화벤즈알코늄을 함유하지 않는 모든 제형 변형물은 대조군인 원래 제형 (pH 4.5)에 비해 우수하였다. 제형 변형물은 pH 4, 4.5에서의 BAC-무함유 조성물 (▲, ■), 글리세린 무함유/BAC 무함유 + 0.9% 염화나트륨 (x), pH 4 및 4.5에서의 BAC 무함유 + 0.05% 술파이트 (●, ■)이었다.
도 10: LACE 안정성에 대한 글리세린 제거의 효과.
도 11: LACE 안정성에 대한 완충된 조성물의 효과.
도 12a: (토끼 자극 모델에서) 자극 점수와 HPLC-UV에 의해 측정된 % LACE 미셀 종의 상관관계.
도 12b: (토끼 자극 모델에서) 자극 점수와 HPLC-ELSD에 의해 측정된 % LACE 미셀 종의 상관관계.
도 13: 글리세롤 오스몰랄농도 표준 곡선.

IV. 본 발명의 간략한 개요

본 발명은 하기 2가지 주요 목표를 달성한다: (a) 2-5℃의 냉장 보관 온도에서 적어도 1년 동안 안정한 LACE의 안과용 용액의 생성, 및 (b) 눈에 비자극성인 LACE의 안과용 용액의 제조를 위한 공정 파라미터의 생성 및 최적화.

LACE의 화학 구조는 2개의 분해 지점을 나타낸다. 하나는 디티올란 고리의 개환이고, 다른 하나는 산화성 및 가수분해성 분해이다. 앞서 언급된 바와 같이, LACE는 산소와 상호작용하여, 산화된 종을 급속하게 생성한다. 물 중에서 LACE는 에스테르 연결의 가수분해에 의해 리포산 및 콜린을 생성하기 쉽다. 가수분해 속도는 온도와 상관관계가 있고, 가수분해는 낮은 온도 및 pH에서 덜하다.

기체 투과성인 투과성 LDPE (저밀도 폴리에틸렌) 점안기 병에 보관된, EV06 안과용 용액으로도 지칭되는 LACE 안과용 용액 유도체에 대한 연구를 수행하였다. 보관하는 동안 배합된 LACE 용액의 산화를 최소화하기 위해 본 발명자들이 개발한 방법이 본원에 기재된다.

추가적으로, LACE와 부형제 혼합물의 광범위한 상용성 연구는 안정화 인자로서 특정한 부형제의 중요성, 물 중 LACE의 가수분해 안정화에 대한 pH의 역할, 뿐만 아니라 오스몰랄농도-조정제, 예컨대 염화나트륨 및 글리세롤의 효과를 확립하였다. 가장 중요하게는, 시트레이트, 포스페이트 및 보레이트와는 대조적으로 LACE에 대한 알라닌의 안정화 효과가 본 발명에 기재된다.

자극의 원인을 조사하면서, LACE가 물에 용해되었을 때 양친매성인 화합물에서 흔한 미셀 및 미셀 응집물을 형성한다는 것을 발견하였다. 정의로서, 미셀-형성 화합물은 포스파티딜 콜린, PEG화 포스파티딜 콜린, PEG-스테아레이트, 소르비톨 등이다. 분자의 양친매성으로 인해 LACE의 미셀-형성 현상이 예상치 못한 것은 아니지만, 저온에서 이들 응집물의 형성은 놀라운 것이었다. 응집물의 존재는 자체 개발된 RP-HPLC 방법에 의해 측정하였다. 상기 측정은 HPLC-UV (도 3a) 및 HPLC-ELSD (도 3b) 둘 다에 의해 수행될 수 있었다.

LACE 수성 용액은 냉장 온도 (2-5℃)에서 겔과 같은 구조체를 형성하였다. 미셀-형성 약물의 농도가 증가함에 따라 이들 미셀 조립물의 개수 및 응집이 증가할 것으로 또한 예상된다. 본 발명자들은 LACE의 미셀 응집의 정도와 안구 표면 자극의 상관관계를 보여주었고, 미셀 비히클이 종종 불용성 화합물을 위한 약물 전달 시스템으로 고려되기 때문에, 이는 예상치 못한 놀라운 결과였다. 따라서, 이는 자극과 미셀 응집체의 상관관계를 설명하는 최초의 보고였다. 상기 발견 후, 배합 방법을 통해 이 현상을 최소화시켜 편안함과의 상관관계를 보여주어야 하였다.

미셀 응집물의 형성은 배합 온도와 상관관계가 있는 것으로 보였다 (도 4). 자가-조립물의 형성은 최소화된 에너지 상태를 달성하기 위한 표면 자유 에너지의 효율적인 저하와 상관관계가 있는 열역학적 현상이다. LACE를 저온의 (5℃) 물에서 배합하였을 때, 겔과 같은 점조도를 갖는 응집물이 형성되었다. 냉장 온도에서 제형화된 조성물은 눈에 극도로 자극적이었다. 응집된 상태는 RP-HPLC 방법 (도 3a-3b에 제시된 크로마토그램 참조)에 의해 정량화될 수 있다. 일련의 조사 실험에 의해, 광범위한 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정시 중합체 또는 올리고머가 존재하지 않는 것이 입증되었다. 다른 조사에서는 주위 공기의 존재 하에 또는 질소의 존재 하에 수행된 공정의 함수로서 안구 자극을 시험하였다. 공기 또는 질소에 대한 자극의 상관관계는 없었다. 둘 다가 실온에서 제형화하였을 때 동등하게 편안하였지만, 분해 생성물은 공기의 존재 하에서 더 많았다. LACE를 실온에서 배합하였을 때, HPLC 방법에 의해 정량화시 미셀 응집이 더 적었다. 실온에서 배합된 LACE는 편안하고 비자극성인 용액을 생성하였다.

미셀 응집물의 "풀림" 또한 예상치 못한 것이었다. LACE 수성 조성물 중에서 형성된 응집물은, HPLC에 의해 측정시, 용액을 실온에서 벤치 위에서 평형을 유지할 때 "풀릴" 수 있었다. 추가적인 실험은, 격렬한 혼합에 의해 탈응집이 달성되었음을 제시하였다. 따라서, 이들 종이 공유 결합을 가진 영구적인 종인 아니라, 5℃에 비해 실온에서 더 낮은 농도를 갖는 것으로 보이는 LACE 응집물의 자가-조립물임이 증명되었다. LACE 수성 용액은 동결시 단단한 점조도를 형성하였다. 이들 용액을 실온으로 만들어서 이 온도에서 보관하였을 때 다시 균질한 용액처럼 보였으며, 이는 자가-조립물의 온도 의존성 개념에 대해 추가의 신뢰도를 제공하였다.

그러나, 일단 배합되면, 산화성 및 가수분해성 분해를 최소화시키기 위해 LACE의 응집물-무함유 용액을 냉장 조건에서 보관할 수 있다. 안정성 연구를 통해, 분해 사건을 최소화시키기 위한 LACE의 이상적인 보관 온도가 2-5℃임이 확립되었다.

최소 자극성 용액을 수득하기 위한 이상적인 배합 조건은 실온 (22-25℃)인 것으로 결정되었고, 노안을 위한 안정하고 편안한 LACE 안과용 용액을 달성하기 위한 이상적인 보관 조건은 2-5℃인 것으로 결정되었다.

LACE로부터 제조된 안과용 용액의 안정화에 추가로 도움이 되기 위해, LDPE 안과용 병이 들어있는 마일라 불투과성 파우치에 산소 스캐빈저 패킷을 넣어서, 산화-유도된 분해를 방지하였다. 광범위한 안정성 연구는 EV06 안과용 용액의 1년 안정성의 달성을 입증하였다.

약물의 안정화라는 주요 목적을 위해 배합된 리포솜, 에멀젼과 같은 다른 유형의 수성 제제를 포함한, LACE를 안정화시키는 다양한 조성물의 실시양태가 본 발명에 또한 기재된다.

V. 본 발명의 상세한 설명

A. 용어의 정의

용어 "EV06", "LACE" 또는 "리포산 콜린 에스테르"는 도 1에 제시된 화학 구조를 갖는 것으로 이해한다.

본원에서 사용된 바와 같이, LACE 제형은 리포산 콜린 에스테르 제형을 지칭한다. 예를 들어, LACE 1.5% 제형은 제형의 중량을 기준으로 1.5% 리포산 콜린 에스테르를 갖는 제형을 지칭한다. 대안적으로, EV06 안과용 용액, 1.5%는 1.5% 리포산 콜린 에스테르로 구성된 제형을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 리포산 콜린 에스테르의 "유도체"는 리포산 콜린 에스테르와 비수성 제약적 부형제의 반응으로부터 형성된, 리포산 및 콜린을 제외한, 임의의 화합물 또는 화합물의 혼합물인 것으로 이해한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "자가-조립물"은 가장 안정한 에너지 상태를 달성하기 위한 분자의 열역학적 조립을 지칭한다. 자가-조립물의 예는 물 중에서 형성된 미셀이며, 이는 전형적으로 소수성 성분 및 친수성 성분을 가진 분자에 의해 형성된다. 분자의 친수성 성분은 미셀의 표면 상에 있는 반면에, 내부는 소수성 부분을 함유하며, LACE의 경우에는 콜린 헤드 기가 미셀의 표면 상에 있다.

문맥상 구체적으로 명시되거나 명백하지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "부형제"는 제약상 허용되는 부형제를 지칭한다.

용어 "치료하는"은 질환 또는 장애와 관련된 상태, 증상 또는 파라미터를 개선시키는데 효과적인 양, 방식 또는 형태로 치료제를 투여하는 것을 지칭한다.

용어 "예방하는"은 통계적으로 유의한 정도로 또는 통상의 기술자에 의해 검출가능한 정도로, 환자가 장애를 갖지 않도록 방지하거나, 환자가 장기간 동안 장애가 없이 유지되게 하거나, 또는 장애의 진행을 멈추게 하는 것을 지칭한다.

용어 "치료 유효량"은 대상체에서 안구 질환 또는 장애 (예를 들어, 노안)의 발병의 예방 또는 지연, 또는 그의 증상의 개선을 제공하거나, 또는 원하는 생물학적 결과, 예컨대 개선된 원근조절 크기, 또는 질환 상태를 나타내는 또 다른 적합한 파라미터의 획득을 제공하는, 활성 성분 (예를 들어, LACE 또는 그의 유도체)의 양을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "보관 안정성" 또는 "보관 안정한"은 보관시 실질적으로 변하지 않는 조성물 또는 활성 성분 (예를 들어, LACE 또는 그의 유도체)의 특성 또는 그를 특성화하는 것으로 이해한다. 이러한 보관 안정성을 결정하는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 보관 안정성은 특정한 기간 동안 제형을 보관한 후에 제형에서 유지되거나 분해된 조성물 또는 활성 성분 (예를 들어, 리포산 콜린 에스테르)의 백분율을 결정하기 위해 HPLC에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 보관 안정성 제약 조성물은 제약적 표준 (ICH)에 따라 보관한 후에 HPLC에 의해 측정시 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 초과)의 활성 성분 (예를 들어, 리포산 콜린 에스테르)이 조성물에 존재하는 것인 조성물을 지칭할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 화합물의 "상대적인 체류 시간" 또는 "RRT"는 방정식 "RRT = (t₂ - t₀) / (t₁ - t₀)" (여기서, t₀ = 무효 시간, t₁ = 리포산 콜린 에스테르의 체류 시간, 및 t₂ = 화합물의 체류 시간, HPLC에 의해 측정됨)에 의해 계산할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이 용어 "대상체"는 일반적으로 동물 (예를 들어, 애완동물) 또는 인간, 예컨대 건강한 인간 또는 특정 질환 또는 장애 (예를 들어, 노안)를 가진 환자를 지칭한다.

VI. LACE 조성물 및 실시양태

본원에 기재된 바와 같이, 제안된 발명은 치료 유효량의 리포산 콜린 에스테르, 부형제, 완충제를 포함하는 제약 조성물, 및 상용성인 조건, 및 안과용 점안제로서 적합한 생체적합성 (비자극성)이고 안정한 용액을 생성하는 방법 및 공정의 실시양태를 제공한다.

제약 조성물 중 리포산 콜린 에스테르 또는 그의 유도체의 농도는 조성물 중량의 0.01-0.1%, 0.1% 내지 10%의 임의의 농도 (예를 들어, 0.1%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 리포산 콜린 에스테르의 농도는 1%이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 리포산 콜린 에스테르의 농도는 3%이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물 중 리포산 콜린 에스테르의 농도는 4%이다. 조성물 중 LACE의 바람직한 범위는 1-3%이다. 이 범위 내에서, 바람직한 조성 범위는 1.5-4%이다.

또 다른 실시양태에서, 제안된 발명에서 효과적인 조성물은 LACE 및 알라닌을 함유하는 수성 제형이며, 알라닌은 0.1-0.5%, 0.5%-1%, 1%-1.5%, 1.5%-3%의 농도를 갖는다. 이 범위 내에서, 바람직한 조성은 0.5% 알라닌 및 1.5% LACE이다.

바람직한 실시양태에서, 효과적인 LACE 및 알라닌-함유 조성물은 보존제로서 30-150 ppm의 농도로 염화벤즈알코늄을 함유한다.

또 다른 실시양태에서, 다른 보존제, 예컨대 폴리쿼터늄, 소프지아(SofZia)가 보존제로서 FDA에 의한 인간 사용에 대해 승인된 농도로 LACE 수성 제형에 포함된다. 다른 보존제는 2-페닐 에탄올, 붕산, 에데트산이나트륨일 수 있다.

또 다른 실시양태에서, LACE-함유 안과용 용액은 보존제가 없는 단일 용량 멸균 생성물이다.

물에 고농도로 용해된 LACE의 자가-조립된 미셀 용액이 일부 자극을 나타낼 수 있기 때문에, 생체적합성 용액으로 만드는 방법은 리포솜 내로의 캡슐화일 수 있다. 이러한 경우에, LACE는 리포솜의 내부에 함유될 것이다. 리포솜은 일반적으로 안구 표면과 생체적합성이다.

또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 0.1%-10%의 농도로 글리세롤을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 0.1-5%의 글리세롤 농도를 갖는다.

일부 실시양태에서, 보존제는 염화벤즈알코늄이고, 생화학적 에너지원은 알라닌이다. 일부 실시양태에서, 리포산 콜린 에스테르는 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 니트레이트, 말레에이트, 아세테이트, 시트레이트, 푸마레이트, 히드로겐 푸마레이트, 타르트레이트 (예를 들어, (+)-타르트레이트, (-)-타르트레이트, 또는 이들의 혼합물), 비타르트레이트, 숙시네이트, 벤조에이트, 및 글루탐산과 같은 아미노산의 음이온으로 이루어진 군으로부터 선택된 반대 이온을 갖는다.

제약 조성물에 대해 원하는 pH (예를 들어, 본원에서 기재됨)를 달성할 수 있는 적합한 완충제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 비제한적인 예로는 포스페이트 완충제 (예를 들어, 인산나트륨 일염기성 일수화물, 인산나트륨 이염기성 무수물), 아세테이트 완충제, 시트레이트 완충제, 보레이트 완충제, 및 HBSS (행크(Hank) 균형 염 용액)가 포함된다. 완충제의 적합한 양은 원하는 pH를 기준으로 용이하게 계산될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 완충제는 안과용 제품으로서 허용되는 양으로 사용된다. 그러나, 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 완충제를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 수성 용액 또는 최종 제약 조성물의 pH는 산 (예를 들어, 염산) 또는 염기 (예를 들어, 수산화나트륨)을 사용하여 원하는 pH 범위 (예를 들어, 본원에서 기재됨)로 조정된다.

다른 실시양태에서, 완충제 시스템은 보레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 칼슘 완충제, 및 이들의 조합물 및 혼합물로부터 선택될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 완충제는 아미노산 완충제이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 아미노산 완충제는 알라닌으로 구성된다.

일부 실시양태에서, 리포산 콜린 에스테르는 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 니트레이트, 말레에이트, 아세테이트, 시트레이트, 푸마레이트, 히드로겐 푸마레이트, 타르트레이트 (예를 들어, (+)-타르트레이트, (-)-타르트레이트, 또는 이들의 혼합물), 숙시네이트, 벤조에이트, 및 글루탐산과 같은 아미노산의 음이온으로 이루어진 군으로부터 선택된 반대 이온을 갖는다. 다른 반대 이온은 스테아레이트, 프로피오네이트 및 푸로에이트이다.

일부 실시양태에서, 안과용 제형은 4 내지 8의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 안과용 제형은 4.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 안과용 제형은 생화학상 허용되는 에너지원, 보존제, 완충제, 장성 작용제, 계면활성제, 점도 개질제, 및 항산화제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함한다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 항산화제를 함유한다. 일부 바람직한 실시양태에서, 항산화제는 아스코르베이트로 구성된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항산화제는 글루타티온을 함유한다. 적합한 항산화제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 비제한적인 예로는 아스코르브산, L-아스코르브산 스테아레이트, 알파티오글리세린, 에틸렌디아민테트라아세트산, 에리토르브산, 시스테인 히드로클로라이드, N-아세틸시스테인, L-카르니틴, 시트르산, 토코페롤 아세테이트, 칼륨 디클로로이소시아누레이트, 디부틸히드록시톨루엔, 2,6-디-t-부틸-4-메틸페놀, 대두 레시틴, 나트륨 티오글리콜레이트, 나트륨 티오말레이트, 천연 비타민 E, 토코페롤, 아스코르빌 파스티미네이트, 나트륨 피로술파이트, 부틸히드록시아니솔, 1,3-부틸렌 글리콜, 펜타에리트리틸 테트라키스[3-(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]프로피오네이트, 프로필 갈레이트, 2-머캅토벤즈이미다졸 및 옥시퀴놀린 술페이트가 포함된다. 항산화제의 적합한 양은 조성물 중량의 0.1% 내지 5%의 범위 (예를 들어, 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 항산화제는 안과용으로 허용되는 양으로 사용된다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 불활성 환경, 예컨대 고순도 질소 또는 아르곤 하에 배합함으로써 제조된다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 2 ppm 미만의 산소를 갖는 질소 환경 하에 배합된다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 20-25℃의 온도에서 배합함으로써 제조된다.

바람직한 실시양태에서, 고체 LACE 분자를 미세한 분말로 분쇄한다. 바람직하게는, 고체 LACE 분자를 덩어리가 없는 분말로 분쇄한다. 한 실시양태에서, 입자 크기는 500 마이크로미터 미만일 것이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 입자 크기는 100 마이크로미터 미만일 것이다.

바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 실온으로 (20-25℃) 유지된 수성 용액을 초기 탈기시킨 다음, 상기 용액에 부형제를 용해시킨 후, 질소를 천천히 살포하면서 강력한 용해 하에 고체 LACE를 일부씩 나누어 첨가함으로써 제조된다.

한 실시양태에서, 제약 조성물을 4시간 내지 24시간 동안 강력 교반한다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물을 4시간 내지 8시간 동안 강력 교반한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물을 8시간 동안 강력 교반한다.

이들 방법에 의해 제조된 제약 조성물은 적어도 3개월 (예를 들어, 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 또는 1년 초과)의 보관 안정성을 가질 수 있다.

제약 조성물은 또한 5℃에서 특정 기간 동안 보관한 후에 약물 관련된 분해물의 유리한 프로파일 (예를 들어, 전체 약물 관련된 불순물, 또는 특정 약물 관련된 불순물의 양)을 가질 수 있다. 제형 중 약물 관련된 분해물의 양을 측정하기 위한 분석 도구 (예를 들어, HPLC)는 공지되어 있다.

적합한 생화학상 허용되는 에너지원은 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 생화학상 허용되는 에너지원은 에너지 대사 경로, 특히 글루코스 대사 경로의 중간체로서 참여함으로써 환원을 용이하게 할 수 있는 임의의 것일 수 있다. 적합한 생화학상 허용되는 에너지원의 비제한적인 예로는 아미노산 또는 그의 유도체 (예를 들어, 알라닌, 글리신, 발린, 류신, 이소류신, 2-옥소글루타레이트, 글루타메이트, 및 글루타민 등), 당 또는 그의 대사물 (예를 들어, 글루코스, 글루코스-6-포스페이트 (G6P)), 피루베이트 (예를 들어, 에틸 피루베이트), 락토즈, 락테이트, 또는 그의 유도체), 지질 (예를 들어, 지방산 또는 그의 유도체, 예컨대 모노-, 디- 및 트리-글리세리드 및 인지질), 및 기타 (예를 들어, NADH)가 포함된다. 생화학상 허용되는 에너지원의 적합한 양은 조성물 중량의 0.01% 내지 5%의 범위 (예를 들어, 0.05%, 0.1%, 0.2%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 생화학적 에너지원은 에틸 피루베이트이다. 일부 실시양태에서, 생화학적 에너지원은 알라닌이다. 일부 실시양태에서, 에틸 피루베이트 또는 알라닌의 양은 조성물 중량의 0.05% 내지 5%의 범위 (예를 들어, 0.05%, 0.1%, 0.2%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)이다. 일부 실시양태에서, 알라닌의 양은 조성물의 0.5 중량%이다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 생화학상 허용되는 에너지원은 안과용으로 허용되는 양으로 사용된다.

적합한 보존제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 비제한적인 예로는 염화벤즈알코늄 (BAC), 세트리모늄, 클로로부탄올, 에데트산이나트륨 (EDTA), 폴리쿼터늄-1 (폴리쿼드(Polyquad®)), 폴리헥사메틸렌 비구아니드 (PHMB), 안정화된 옥시클로로 복합체 (푸리트(PURITE®)), 과붕산나트륨, 및 소프지아®가 포함된다. 제약 조성물 중 보존제의 적합한 양은 조성물 중량의 0.005% 내지 0.1%의 범위 (예를 들어, 0.005, 0.01, 0.02%, 0.05%, 0.1%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 보존제는 염화벤즈알코늄이다. 일부 실시양태에서, 염화벤즈알코늄은 조성물 중량의 0.003% 내지 0.1%의 양 (예를 들어, 0.003, 0.01, 0.02%, 0.05%, 0.1%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 염화벤즈알코늄은 조성물의 0.01 중량%의 양으로 사용된다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 보존제는 안과용으로 허용되는 양으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 보존제를 함유하지 않는다.

적합한 장성 작용제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 비제한적인 예로는 염화나트륨, 염화칼륨, 만니톨, 덱스트로즈, 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물이 포함된다. 제약 조성물 중 장성 작용제의 적합한 양은 200-460 mOsm (예를 들어, 260-360 mOsm, 또는 260-320 mOsm)의 오스몰랄농도를 달성할 수 있는 임의의 양이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 등장성 조성물이다. 일부 실시양태에서, 장성 작용제 (예를 들어, 염화나트륨)의 양은 조성물 중량의 0.1% 내지 5% (예를 들어, 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)이다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 장성 작용제는 안과용으로 허용되는 양으로 사용된다.

이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제를 포함한 적합한 계면활성제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 유용한 비이온성 계면활성제의 비제한적인 예에는 폴리옥시에틸렌 지방 에스테르 (예를 들어, 폴리소르베이트 80 [폴리(옥시에틸렌)소르비탄 모노올레에이트], 폴리소르베이트 60 [폴리(옥시에틸렌)소르비탄 모노스테아레이트], 폴리소르베이트 40 [폴리(옥시에틸렌)소르비탄 모노팔미테이트], 폴리(옥시에틸렌)소르비탄 모노라우레이트, 폴리(옥시에틸렌)소르비탄 트리올레에이트, 또는 폴리소르베이트 65 [폴리(옥시에틸렌)소르비탄 트리스테아레이트]), 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 10, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 40, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 50, 또는 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 60), 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 글리콜 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 (160) 폴리옥시프로필렌 (30) 글리콜 [플루로닉(Pluronic) F681], 폴리옥시에틸렌 (42) 폴리옥시프로필렌 (67) 글리콜 [플루로닉 P123], 폴리옥시에틸렌 (54) 폴리옥시프로필렌 (39) 글리콜 [플루로닉 P85], 폴리옥시에틸렌 (196) 폴리옥시프로필렌 (67) 글리콜 [플루로닉 F1271], 또는 폴리옥시에틸렌 (20) 폴리옥시프로필렌 (20) 글리콜 [플루로닉 L-441]), 폴리옥실 40 스테아레이트, 수크로즈 지방 에스테르, 및 이들의 조합물이 포함된다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 제약 조성물 중 계면활성제의 적합한 양은 조성물 중량의 0.01% 내지 5%의 범위 (예를 들어, 0.05, 0.1, 0.2%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이고, 폴리소르베이트 80의 양은 조성물 중량의 0.05% 내지 5%의 범위 (예를 들어, 0.05, 0.1, 0.2%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)이다. 일부 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 조성물의 0.5 중량%이다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 계면활성제는 안과용으로 허용되는 양으로 사용된다. 그러나, 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 계면활성제를 함유하지 않는다.

적합한 점도 개질제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 것일 수 있다. 비제한적인 예로는 카르보폴 겔, 셀룰로스제 (예를 들어, 히드록시프로필 메틸셀룰로스), 폴리카르보필, 폴리비닐 알콜, 덱스트란, 젤라틴 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 폴록사머 407, 폴리비닐 알콜 및 폴리비닐 피롤리돈 및 이들의 혼합물이 포함된다. 점도 개질제의 적합한 양은 조성물 중량의 0.1% 내지 5%의 범위 (예를 들어, 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 이들 명시된 수치 값을 기준으로 하는 임의의 범위)일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 점도 개질제는 안과용으로 허용되는 양으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 점도 개질제 (예를 들어, 중합체성 점도 개질제, 예컨대 히드록시프로필 메틸셀룰로스)를 함유하지 않는다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 다음 중 하나 이상을 특징으로 한다:

(a) 조성물 중량의 0.1% 내지 10% (예를 들어, 0.1%, 1.0%, 1.5%, 3%, 4%, 5%, 또는 명시된 수치 값들 사이의 임의의 범위)의 리포산 콜린 에스테르의 농도를 가짐;

(b) 조성물 중량의 0.003% 내지 0.1% (예를 들어, 0.01%)의 보존제 (예를 들어, 염화벤즈알코늄)의 농도를 가짐;

(c) 조성물 중량의 0.1% 내지 5% (예를 들어, 0.5%)의 생화학적 에너지원 (예를 들어, 알라닌)을 가짐; 및

(d) 조성물 중량의 0.5% 내지 5% (예를 들어, 2.7%)의 글리세롤의 농도를 가짐.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 1-3 중량%의 글리세린, 0.5 중량%의 알라닌, 0.005-0.01 중량%의 염화벤즈알코늄, 1-3 중량%의 리포산 콜린 에스테르, 및 물로 본질적으로 이루어지며, 제약 조성물의 pH는 4.3 내지 4.7이다.

한 실시양태에서, 안과용 조성물은 대상체의 각각의 눈에 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회 및 1일 4회로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 수성 용액 중에서 가수분해되기 쉬운 활성 성분 (예를 들어, 리포산 콜린 에스테르 또는 그의 유도체)을 수성 용액 중에 포함하는 제약 조성물을 보관하기 위한 시스템을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 충전 공정 동안에 질소로 오버레이되고 캡핑된 다음, 산소 흡수제를 함유하는 이차적인 마일라 기체-불투과성 파우치에 패키징된, LDPE 안과용 점안기 병에서 제약 조성물을 보관한다.

또 다른 실시양태에서, 점안기 병 또는 유닛은 폴리에틸렌 테레프탈레이트 (PET)이다. 또 다른 실시양태에서, 점안기 병은 낮은 기체 투과성을 갖는 물질로 제조된다.

다른 실시양태에서, 점안기 병은 낮은 기체 투과성을 갖는 임의의 물질로 제조될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 점안기 병은 취입성형 충전 밀봉 기술에 의해 충전된 단위 용량일 수 있다.

한 실시양태에서, 제약 조성물은 3개월 내지 2년의 기간 동안 2-5℃에서 보관된다.

VII. 치료 방법

리포산 콜린 에스테르 또는 그의 유도체 (예를 들어, 본원에 기재됨)를 포함하는 제약 조성물은 산화성 손상과 관련된 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법에서 사용될 수 있다. 산화성 손상과 관련된 질환 또는 장애는 공지되어 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 안구 질환의 치료를 필요로 하는 대상체의 눈에 본원에 기재된 임의의 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 안구 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

일부 실시양태에서, 안구 질환은 노안, 안구 건조증, 백내장, 황반 변성 (예컨대, 연령-관련 황반 변성), 망막병증 (예컨대, 당뇨병성 망막병증), 녹내장, 또는 안구 염증이다. 일부 실시양태에서, 안구 질환은 노안이다.

본원에서 안구 질환의 치료 또는 예방 방법에 적합한 제약 조성물의 양은 임의의 치료 유효량일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 수정체의 원근조절 크기를 적어도 0.1 디옵터 (D) (예를 들어, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 1.2, 1.5, 1.8, 2, 2.5, 3, 또는 5 디옵터)만큼 증가시키는데 효과적인 제약 조성물의 양을 대상체의 눈에 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 1-5 점적 (약 40 μL/점적)의 제약 조성물을 대상체의 눈에 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체의 눈을 매회 1-5 점적 (약 40 μL/점적)으로서 1일 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 또는 5회 초과로 제약 조성물로 처리한다. 일부 실시양태에서, 대상체의 수정체 또는 눈을 매회 1, 2, 3, 4, 5, 또는 5 초과의 점적으로 제약 조성물로 처리한다. 일부 실시양태에서, 대상체의 눈을 매회 1 또는 2 점적 (약 40 μL/점적)으로 1일 2회 또는 3회로 본원의 제약 조성물로 처리한다.

상기 방법은 임의 연령의 환자에 대해 수행될 수 있는 예방적 방법을 포함한다. 상기 방법은 임의 연령의 환자, 특히 20 내지 75세의 환자에 대해 수행될 수 있는 치료적 방법 또한 포함한다.

하기 실시예는 청구된 실시양태를 설명하는 것이며 그의 범위를 제한하지 않는다.

실시예

실시예 1

표 1: 리포산 콜린 에스테르 (LACE)의 일반적인 성질

실시예 2

미셀 종의 동력학과 LACE 공정 용액의 혼합 시간의 상관관계

이 섹션에 기재된 실험은, 25℃에서 혼합 시간이 연장됨에 따라 LACE 미셀 종이 안정화되고 감소됨을 입증한다. 그 결과, 자가-조립된 시스템, 예컨대 미셀 및 미셀 응집물인 것을 특징으로 하는 이들 종의 가역적인 성질이 입증되었다.

분자의 자발적인 자가-조립에 의해 형성된 미셀 종은 평형화된 시스템의 전체 자유 에너지에 의해 유도되었다. 본 실험은 보다 긴 혼합 시간에 의해 상기 평형화된 상태를 달성하는 동력학을 입증하였다.

목표:

o 성장중인 미셀 종이 안정화되었는지를 확립함으로써 공정-시간 계층을 확립한다.

o "유지 시간"을 확립한다.

절차:

o 질소로 버블링하여 비히클로부터 산소를 제거한 후, 1.5% LACE의 2개의 200-g 배치를 25℃에서 제조하였다. 질소를 LACE의 용해 동안에 계속해서 버블링하였다.

o 1개의 배치는 상당한 덩어리를 가진 GMP 배치 #2 (G2-14LAC)를 그대로 사용하여 제조하였고, 다른 배치는 막자사발 및 막자를 사용하여 미세한 분말로 분쇄한 G2-14LAC 샘플을 사용하여 제조하였다.

o LACE를 용해시키고 pH를 조정한 후, 용존 산소량을 ~1.6 ppm (이에 대해 8.2 ppm 포화 용해도)으로 유지하면서 배치를 일정한 질소 오버레이 하에 24시간 동안 교반하였다. 1h, 3h, 4h, 6h, 8h, 9h 및 24h의 시점에서, 약 5-15 mL를 시린지에 의해 제거하여, 병 내로 질소 오버레이 없이 점안기 병 (5 mL/병)으로 멸균 여과하였다 (장치는 벌크 배치를 위해 사용중이었음).

o 모든 시점의 샘플을 10 mg/g으로 희석한 다음, 벌크 용액으로부터 제거한지 30분 이내에 ELSD 검출에 의한 RP-HPLC 분석을 위해 주입하였다.

o 24시간 시점 이후에, 벌크 용액을 멸균 여과하고, 각각을 2개의 ~ 50 mL 부분으로 나누었고, 하나는 5℃에서 유지하고, 다른 50-mL 부분은 25℃에서 유지하였다. 모든 부분들을 용기로 취입된 질소로 오버레이하였다.

o 추가적인 24시간 유지 시간의 종료 시, 병 내로 질소를 오버레이하면서 각각의 부분을 점안기 병에 충전하였다.

용해에 대한 관찰

o G2-14LAC의 덩어리진 부분을 약 5분에 걸쳐 제형 KW-LACE-01-86-1에 첨가하였고, 일부 덩어리는 용해되는데 추가 20분이 필요하였다.

o 분말화된 G2-14LAC를 약 15분에 걸쳐 제형 KW-LACE-01-86-2에 첨가하였는데, 이는 각각의 스패츌라 가득한 양이 표면 상에 부유하는 물질의 얇은 부유물로 응집되어 즉시 분산되지 않았기 때문이다. 따라서, 이전 부분이 볼텍스로 유인될 때까지 또 다른 부분을 첨가하지 않았다. 임의의 한 부분이 용해되는 시간은 약 10분으로 추정되었고, 전체 공정은 대략 25분이 소요되었다.

결과

o RT에서의 피크 = 8분 (미셀 종과 상관관계가 있음)은 제1 시점에서 취한 제형 둘 다에서 명백하였다.

o 분말화된 LACE로 제조된 제2 배치가 일부 시점에서 더 높은 수준의 미셀 종을 가졌지만, 8분 피크 (미셀 종)의 % 면적에 있어서 두 배치 사이에 일관된 차이는 없었다.

o 8분 피크의 %면적은 하기 표에 제시된 바와 같이 24시간째에 유의하게 감소하였다.

o 배치 둘 다에 대한 최종 pH는 4.54이었다.

표 2:

장시간 혼합에 따른 LACE 미셀 종의 형성 및 탈응집화의 동력학

그 결과, 혼합 시간이 연장됨에 따라 8.1분에서의 LACE 미셀 종이 최소화됨이 입증되었다. 8.1분의 피크는 혼합 시간이 길어짐에 따라 극적으로 감소되었다.

각각의 용액을 리포산 콜린 에스테르의 분해물에 대해서도 측정하였다. 앞서 언급한 바와 같이, LACE의 분해 메카니즘은 산화성 및 가수분해성이며, 산화되고 가수분해된 종을 생성한다.

표 3:

혼합의 함수로서 EV06 안과용 용액의 불순물 (관련 물질) 분석

상기 데이터는 혼합 시간이 연장됨에 따라 LACE의 분해 생성물이 증가하였음을 제시한다. 따라서, 최소화된 분해물을 갖는 비자극성 용액을 달성하기 위해 EV06 안과용 용액의 배합을 위한 최종 공정 조건은 최대 8시간이었다.

실시예 3

혼합 온도와 미셀 LACE 종의 존재의 상관관계

도 4에 제시된 데이터는 아르곤 및 냉장 조건 하에 제형화된 LACE 클로라이드의 용액이다. 상기 용액은 안구 표면에 극도로 자극성이었다. 퍼센트 미셀 종은 8-10%의 주요 LACE API 피크 (미셀 종은 체류 시간 7.9-8.1분에서 화살표로 표시됨)이었으며, 이는 실온에서 혼합된 용액에서는 일반적으로 관찰되지 않는 농도이다.

실시예 4

미셀 LACE 종 형성에 대한 덩어리의 상관관계

도 5a는 고체 "덩어리"를 가진 LACE 배치로부터 제조된 EV06 안과용 용액의 RP-HPLC 클로라이드 크로마토그램이다. 상기 로트의 API (활성 제약 성분, 고체 LACE 약물 물질)로부터 제조된 용액은 분말상인 API 로트로부터 제조된 용액 (도 5b)에 비해 더 높은 백분율 (10-15%)의 미셀 LACE 종 (화살표로 제시됨)을 제시하였다. 따라서, 용액 둘 다가 완전히 용해된 것으로 보였지만, 덩어리가 없는 API로부터 제형화된 용액이 더 낮은 농도의 미셀 LACE 종을 가졌다. 안구 자극과의 상관관계에 있어서, 도 5a에 제시된 용액이 토끼 모델에서 자극에 대한 점수가 더 높았다. 이는 배합하기 전에 분말화된 물질로 만들기 위해 덩어리 제거 절차의 도입을 유도하였다.

실시예 5

부형제와 LACE의 상용성 연구

개요

이들 실험의 목적은 제형 조성 및 미세환경 (예컨대 pH)에서의 체계적인 변화를 통해 제형에서 가능한 불안정화 변수를 알아내는 것이었다. 리포산 및 리포산의 임의의 유도체는 열, 빛 및 산소에 의해 분해 및 중합되어 디티올란 고리의 개환을 일으키기 쉽다. 따라서, 산화성 유리 라디칼 절단을 초래할 수 있는 부형제의 존재는 불안정화 인자일 수 있다. 제형 그리드 1 및 2는 가능한 불안정화 인자로서 제형에 이미 존재하는 부형제의 효과를 체계적으로 조사하였다.

이들 실험에서 LACE의 제형은 4.4-4.6의 pH 및 290-300 mOsm/kg의 오스몰랄농도를 달성하기 위해 첨가된 1N 수산화나트륨 또는 1N 염산과 함께 정제수 중에 약물 물질, 알라닌, 글리세린, 염화벤즈알코늄을 함유하였다. 본원에 기재된 실험은 LACE 안과용 용액을 안정화시킬 수 있는 부형제를 확인하기 위한 상용성 연구였다.

제형 그리드#1을 (a)-(e)에 제시된 하기 변수에 대해 시험하였다. 상기 제형을 질소-플러싱된 글러브 박스에서 제조하고 멸균 여과하였다. 모든 제형을 57℃에서 가속된 조건 하에 시험하였고, 검정 및 불순물을 위해 T=0, 3.5일째 및 7일째에 HPLC에 의해 시험하였다. 19개의 모든 제형을 그리드#1에서 시험하였다.

(a) pH의 효과: 제형을 pH 3.5, 4 및 5에서 제조하였고, pH 4.5에서의 대조군 제형과 비교하였다. 도 6에 제시된 바와 같이, LACE의 분해 속도는 3.5-5의 모든 pH 수준에서 동등하였다.

(b) 알라닌의 효과: 분해 속도를 원래 제형 (대조군)과 비교함으로써 제형에서 알라닌의 역할을 도출하였다. 도 6에 제시된 바와 같이, 알라닌의 부재는 LACE의 분해 속도를 가속시키는 것으로 여겨졌다. 따라서, 알라닌은 EV06 안과용 제형에서 중요한 부형제이다.

(c) 염화벤즈알코늄 및 글리세린의 효과: 글리세린에 함유된 퍼옥시드가 산화를 촉매할 수 있는 것으로 가정하였고, 유사하게 자유 라디칼 절단 및 후속적인 산화로 인해 BAC가 약물 물질을 불활성화시킬 수 있는 것으로 가정하였다. 도 7에 도시된 바와 같이, 염화벤즈알코늄-무함유 제형은 대조군에 비해 실질적으로 더 안정하였다. 글리세린-무함유 견본 또한 대조군에 비해 더 안정하였다. 추가적으로, (글리세롤 대신에, 오스몰랄농도를 조정하기 위해) 제형에 첨가된 염화나트륨은 불안정화 효과를 갖는 것으로 여겨졌다 (또한 도 7에 제시됨). 글리세린, 염화나트륨, 술파이트 및 pH의 다양한 조합을 가지며 모두 염화벤즈알코늄-무함유인 변화를 갖는 또 다른 실험에서, 모든 염화벤즈알코늄-무함유 제형은 대조군에 비해 더욱 안정함이 주목할 만하였다 (도 5). 도 7 및 9에서의 실험은 LACE 중 염화벤즈알코늄의 제거가 제형을 안정화시킬 수 있음을 입증하였다. EV06 안과용 조성물의 경우, 염화벤즈알코늄 함량을 50 ppm으로 최소화시키는 것이 주요 안정화 인자를 가질 수 있다. 염화나트륨은 불안정화 효과를 나타내었으며, 따라서 글리세롤이 최종 EV06 조성물 중의 장성 작용제로서 더욱 적합한 것으로 여겨졌다.

(d) 술파이트의 효과: 다양한 수준의 술파이트의 조합에 의해 술파이트를 사용하여 다양한 실험을 수행하였다 (도 8). 항산화제로서 술파이트를 다양한 pH 수준 (4, 4.5) 및 농도로 제형에 첨가하였다 (도 8). 술파이트의 존재는 LACE의 안정성을 실질적으로 개선시키는 것으로 보이지 않았다. 제형 중 0.1% 술파이트가 대조군과 동등하기 때문에, 유해한 효과가 있는지는 명확하지 않았다.

(e) 글리세린의 효과: 다양한 제형 조합물에서 글리세린의 체계적인 제거에 의해 글리세린의 효과를 조사하였다. 도 7 및 10에 제시된 바와 같이, 글리세린-무함유 조합물은 대조군에 비해 더욱 안정한 것으로 보였다. 그러나, 염화나트륨의 높은 불안정화 효과로 인해, 글리세린이 장성 조정을 위한 중요한 부형제로서 선택되었다.

(f) 완충제의 효과: 다양한 완충된 조성물을 시험하였다. 아세테이트 완충제 및 아세테이트 + 붕산은 제형을 안정화시키는 것으로 보였다.

실험

a) HPLC 방법 설정: HPLC 검정은 (A) 0.05M 나트륨 포스페이트 일염기성, 0.005M 1-헵탄 술폰산 나트륨염, 0.2% v/v 트리에틸아민, 인산에 의해 pH 4.5로 조정됨; 및 (B) 아세토니트릴로 이루어진 50분 이동상 구배로 구성되었다. 사용된 분석 컬럼은 YMC 팩 ODS AQ (4.6x250 mm, 5 ㎛, 120 Å), P/N AQ125052546WT였고, 분석 검출 파장은 225 nm였다.

b) 제형

LACE API가 산소 또는 열에 노출되지 않도록 주의해서 보장하면서 제형을 제조하였다. API를 글러브 백 내부의 불활성 N₂ 분위기 하에 깨끗한 유리 바이알에 분취하였고, 사용할 때까지 -20℃ 냉동고에서 주석 호일로 싸서 보관하였다. 제형을 고순도 부형제 및 멸균 유리 제품을 사용하여 제조하였다. 모든 부형제를 스톡 용액으로 미리 제조하였고, API 첨가 & 최종 pH 조정 이전에 함께 혼합하였다. 제형은 부록 A에 요약되어 있다.

II. 결과 및 논의

도 6은 pH 3.5, 4, 4.5 (원래), 5에서 제조된 제형과 알라닌 무함유 대조군을 체계적으로 비교하는, % LACE API 대 57℃에서의 일수 (T=0, 3.5일 및 7일에 걸쳐)의 플롯이다. 심지어 T=0에서, 알라닌 무함유 제형은 API 함량에서의 상당한 분해가 있었다. 도 6에 도시된 바와 같이, pH 3.5-5에서의 이들 조건 하에 제형들은 동등하였다. 도 7은 하기 변수를 비교하는 제형의 플롯이다: (a) 대조군 (원래) 대 대조군 + 0.25% 염화나트륨, 대조군 + 0.25% 염화나트륨, 글리세린 무함유, (b) 대조군 (원래) 대 염화벤즈알코늄 무함유 대조군, (c) 대조군 (원래) 대 글리세린 무함유 원래 제형.

도 7에 도시된 바와 같이, 원래 제형에 염화나트륨의 첨가는 제형을 안정화시키지 않았다.

도 8은 57℃에서 LACE 안정성에 대한 술파이트의 효과를 제시한다. 술파이트-함유 제형을 pH 4 및 4.5에서 0.05% 술파이트 (■, ▲) 및 0.1% 술파이트 (x)의 농도로 제조하였다. 술파이트 첨가는 원래 제형 (◆)을 안정화시키지 않았다.

도 9는 염화벤즈알코늄 제거의 잠재적인 안정화 효과를 추가로 분석한다. 염화벤즈알코늄을 함유하지 않는 모든 제형 변형물은 대조군인 원래 제형 (pH 4.5)에 비해 우수하였다. 제형 변형물은 pH 4, 4.5에서의 BAC-무함유 조성물 (▲, ■), 글리세린 무함유/BAC 무함유 + 0.9% 염화나트륨 (x), pH 4 및 4.5에서의 BAC 무함유 + 0.05% 술파이트 (●, ■)이었다.

도 7 및 10은 pH, 술파이트 및 염화나트륨의 함수로서 다양한 조성물에서 글리세린 제거의 효과를 비교한다. 염화나트륨 및 술파이트 (+)의 존재 하에 글리세린 무함유, BAC 무함유 제형, 및 글리세린 무함유, BAC 함유 제형 (*)은 원래 제형 (◆)에 비해 우수하였다.

도 11은 LACE 안정성에 대한 다양한 완충된 조성물의 사용을 연구하였다. 원래 제형 (pH 4.5)을 아세테이트 완충제 조성물 (■, x, *, ●) 및 pH 7.5의 보레이트와 비교하였다. 항산화제로서 첨가된 에데트산나트륨은 제형을 안정화시키지 않았다. 아세테이트 완충제 및 아세테이트 완충제 + 붕산은 대조군 제형에 비해 우수한 것으로 보였다.

요약하면, 염화벤즈알코늄의 제거는 안정성을 일관되게 개선시키는 것으로 보였다. 글리세롤의 제거 또한 긍정적인 단계일 수 있다. 글리세롤은 가끔 API 분해를 초래하는 포름알데히드를 잔존시키는 것으로 공지되어 있다. 흥미롭게도, 에데테이트 또는 술파이트의 첨가는 긍정적인 효과를 갖지 않았다. 또 다른 항산화제, 예컨대 아스코르브산나트륨은 긍정적인 효과를 가질 수 있다.

표 4:

상용성 실험 제형

실시예 6:

안구 자극과 퍼센트 미셀 LACE 종의 상관관계

도 12a 및 12b는 일반적으로 수많은 배합 배치에 대해 자극과 미셀 LACE 종의 상관관계의 스냅샷을 제공한다.

실시예 7

글리세롤을 사용하여 오스몰랄농도를 조정하는 방법

약물-함유 제형 및 플라시보에 필요한 오스몰랄농도 범위는 280-320 mOsm/kg이다. 바람직하게는, 모든 LACE 제형은 290-310 mOsm/Kg 이내일 필요가 있다.

LACE가 오스몰랄농도에 기여하기 때문에, 각각의 제형은 필요한 오스몰랄농도를 달성하기 위해 다양한 농도의 글리세롤을 가질 것이다.

I. 개요: 최종 조정된 조성물

표 5:

조정된 글리세롤 농도를 갖는 EV06 안과용 용액의 최종 조성물

II. 실험 세부사항:

A. 글리세롤-함유 플라시보

일련의 플라시보를 제조하였다. 모든 플라시보, 및 후속적으로 제조된 LACE-함유 용액은 다양한 양의 글리세롤과 함께 하기 성분들을 함유하였다:

ㆍ 0.5% (5 mg/g) 알라닌

ㆍ 0.005% (0.05 mg/g) 염화벤즈알코늄

ㆍ 소량의 1 N 수산화나트륨, 1 N 염산, pH를 4.5로 조정하기 위해

ㆍ 주사용수 (최종 중량을 위해 첨가됨)

표 6:

글리세롤-함유 플라시보 (글리세롤 농도의 효과)

B. LACE-함유 제형

상기 글리세롤 오스몰랄농도 표준 곡선 (표 6 참조), 및 1% LACE마다 추가적인 44-55 mOsm/kg (평균 48 mOsm/kg)을 제시하였던 출원인의 관찰에 기초하여, 일련의 용액을 제조하였고, LACE의 실제 삼투성 기여를 확인하였다. 총 오스몰랄농도에 대한 목표는 300 mOsm/kg이었다.

표 7:

EV06 조성물에 대한 글리세롤 농도

이들 데이터는 오스몰랄농도에 대한 LACE의 효과가 1%마다 57-60 mOsm/kg 정도로 예상한 것보다 다소 더 양호함을 나타낸다. 따라서, 일련의 전체 용액을 LACE 무함유 용액에 대해 약간 변경된 목표 오스몰랄농도로, 따라서 상이한 목표 글리세롤 함량으로 제조하였다. 모든 용액을 플라시보에서 사용된 것과 동일한 알라닌/염화벤즈알코늄, pH 4.5 스톡 용액을 사용하여 제조하여, 최종 조성물이 일관되도록 하였다:

0.5% (5 mg/g) 알라닌

0.005% (0.05 mg/g) 염화벤즈알코늄

소량의 1 N 수산화나트륨, 1 N 염산, pH를 4.5로 조정하기 위해

주사용수 (제형당 5.0 g의 최종 중량을 위해 첨가됨)

표 8:

EV06 조성물의 오스몰랄농도의 조정

C. 멸균 제조

이들 실험 결과에 기초하여, 각각의 제형의 멸균 여과된 10.0-g 배치를 하기 목표 조성물로 제조하고, 멸균 점안제를 병 (2 mL/병)으로 패키징하였다:

표 9:

EV06 조성물의 최종 조성물 그리드

실시예 8

LACE 제약 조성물의 제조 방법

LACE 제약 조성물의 제조 방법은 다음과 같다:

o 실온에서, 주사용수 (WFI)를 배치 중량의 80%로 유리 배합 용기에 첨가하였다. 물을 질소로 퍼징하여 ≤ 10 ppm 산소를 달성하였다.

o 알라닌, 글리세린 및 BAC를 단계적으로 첨가하고, 용해될 때까지 혼합하였다.

o HCl 또는 NaOH에 의해 pH를 4.4 - 4.6으로 조정하였다.

o LACE를 질소 하에 막자사발 및 막자에서 분쇄하여 덩어리를 제거하고, 혼합하는 동안 천천히 첨가하였다.

o 산소 제거된 주사용수를 첨가하여 최종 배치 목표 중량을 달성하였다.

o 배치를 총 8시간 동안 혼합하여 완전한 분산 및 용해를 보장하였다.

o 필요한 경우 NaOH 또는 HCl에 의해 pH를 4.4 - 4.6으로 조정할 수 있다.

o 필요한 경우 글리세롤에 의해 오스몰랄농도를 290-310으로 조정할 수 있다.

o 8시간 동한 혼합한 후, EV06 벌크 약물 생성물 용액을 캡슐 SHC 0.5/0.2 ㎛ 멸균 여과기를 통해 홀딩 백으로 무균적으로 여과하였다.

o 홀딩 백 중의 벌크 생성물 용액을 냉장 또는 빙조에 의해 5℃로 유지하였다.

o 여과 기포점 시험을 수행하여 여과기의 완전성을 보장하였다.

o 멸균 여과된 벌크 용액을 무균적으로 클래스 100 룸으로 옮기고, 미리 멸균시킨 병에 충전하였다.

o 멸균 팁 및 캡을 질소 오버레이 하에 병에 적용하였다.

o 밀봉된 병을 트레이로 옮기고, 상기 트레이를 질소 퍼징 하에 백에 넣고, 즉시 5℃ 보관으로 옮겼다.

실시예 9

LACE 제형의 안정성 연구

초기 제형 견본은 에데트산나트륨 및 0.01% 염화벤즈알코늄을 함유하였다. 이들 부형제 함유 및 무함유 안정성 연구는 에데트산나트륨이 LACE를 안정화시키지 않음을 입증하였다. 과량의 염화벤즈알코늄의 존재는 약물을 약간 불안정화시켰다. 따라서, 최종 제형은 에데트산나트륨은 함유하지 않고 0.005% 염화벤즈알코늄을 함유하였다. 미생물학 시험을 통해, 현재 제형 조성물 중 0.004% 염화벤즈알코늄이 약물 생성물에서 보존제로서 효과적인 것으로 제시되었다.

약물 제형을 추가로 안정화시키기 위한 노력으로서, 중간 규모 R&D 배치에 대한 체계적인 안정성 연구 (5℃, 25℃ 및 40℃)를 지퍼락식 증기 불투과성 호일 파우치에 함유된 산소 스캐빈징 패킷의 존재 및 부재 하에 병에 담긴 EV06 안과용 용액을 사용하여 수행하였다. 재밀봉가능한 호일 파우치에 밀봉된 산소 스캐빈징 패킷의 존재 하에 5℃에서 보관된 생성물의 병은 12개월의 안정성을 입증하였다.

환경 산소로의 노출 및 비냉장 조건으로 인한 분해로부터 최종 제형을 안정화시키기 위해 진행 과정에서 추가적인 예방조치를 실시하였다. 질소 하에 약물 물질의 취급 (산소의 배제 및 수분의 최소화) 및 질소 블랭킷 하에 배합을 실시하여 산소로의 노출을 최소화하였다. 배합 후에, 생성물을 수증기 불투과성 홀딩 백에 충전하고, 병에 담을 때까지 냉장 조건 하에 보관하였다. 벌크 용액을 함유하는 홀딩 백을 충전하는 동안 저온으로 유지하였다. 질소 블랭킷을 각 병의 약물 용액 위에 넣어서, 질소 노출을 최소화하였다.

표 10: EV06 안과용 용액 (3.0%)의 안정성

Claims (15)

1. 0.1-10 중량%의 리포산 콜린 에스테르의 제약상 허용되는 염, 0.1-2 중량%의 장성 조정제, 0.003-0.01 중량%의 보존제, 0.05-1.0 중량%의 생화학적 에너지원, 및 물을 포함하는, 노안의 치료를 위한 제약 조성물.
2. 제1항에 있어서, 리포산 콜린 에스테르의 제약상 허용되는 염이 클로라이드, 브로마이드 또는 아이오다이드 염인 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 장성 조정제가 글리세롤인 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 보존제가 염화벤즈알코늄인 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 생화학적 에너지원이 알라닌인 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월 또는 적어도 1년의 보관 안정성을 갖는 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 비자극성 점안제 용액인 조성물.
8. 하기를 포함하는, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 제조하는 방법:
   리포산 콜린 에스테르의 제약상 허용되는 염을 미세 분쇄하는 것,
   분쇄된 염을 5 ppm 미만, 바람직하게는 2 ppm 미만의 산소를 갖는 물에 첨가하는 것,
   6 내지 8시간 동안, 바람직하게는 8시간 동안 실온에서 혼합하여 혼합물을 형성하는 것,
   안과용 병을 상기 혼합물로 충전하고, 캡핑하기 전에 불활성 기체 오버레이를 첨가하는 것,
   충전 및 캡핑된 안과용 병을 기체-불투과성 파우치에 패키징하는 것, 및
   패키지를 2-8℃에서 보관하는 것.
9. 제8항에 있어서, 파우치가 산소 스캐빈저를 함유하는 것인 방법.
10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 리포산 콜린 에스테르의 제약상 허용되는 염을 5 mm 이하의 평균 입자 크기를 갖는 분말로 분쇄하는 것인 방법.
11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 혼합 온도가 20 내지 25℃인 방법.
12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성 기체가 질소인 방법.
13. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 안과용 병이 저밀도 폴리프로필렌 (LDPE), 폴리에틸렌 테레프탈레이트 (PET) 또는 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE) 병인 방법.
14. 제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 안과용 병이 취입성형-충전-밀봉 유닛인 방법.
15. 제8항 내지 제14항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 보관 안정성 및/또는 비자극성 점안제 용액.

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