KR20180014817A - 적어도 1종의 라카제를 함유하는 향상된 세척력을 갖는 세제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 텍스타일 세척 동안의 특정 라카제의 용도, 및 상기 라카제를 함유하는 세제에 관한 것이다.

Description

적어도 1종의 라카제를 함유하는 향상된 세척력을 갖는 세제

본 발명은 텍스타일 세척 동안의 특정 라카제(laccase)의 용도, 및 상기 라카제를 함유하는 세제에 관한 것이다.

라카제 (EC 1.10.3.2)는 많은 식물, 진균 및 미생물에 존재하는 구리-함유 "청색" 효소이다. 라카제는 옥시도리덕타제로 분류된다. 촉매적으로 활성인 중심부는 그의 분광학적 특성 면에서 상이할 수 있는 4개의 구리 이온을 포함한다. "청색" 유형 1 구리는 기질 산화와 연관되어 있으며; 1개의 유형 2 및 2개의 유형 3 구리 이온은 산소와 결합하여 물로 환원시키는 3핵 클러스터를 형성한다. 라카제는 p-디페놀 옥시다제로도 지칭된다. 디페놀 이외에, 라카제는 메톡시-치환된 페놀 및 디아민과 같은 많은 다른 기질들도 산화시킨다. 그의 기질과 관련하여, 라카제는 놀랍도록 비특이적이다. 그의 광범위한 기질 특이성 및 페놀계 화합물을 산화시키는 그의 능력으로 인하여, 라카제는 산업 적용분야에서 대단한 관심을 불러일으키고 있다. 라카제를 적용하기에 매우 유망한 영역으로는 예를 들면 목재 산업에서의 섬유판의 탈리그닌화 및 접착, 텍스타일 산업에서 바탕을 착색하고 염료 폐수를 정화하는 것은 물론, 바이오센서에서의 사용도 포함된다.

매개체, 즉 중간 분자의 도움으로, 라카제는 그렇지 않은 경우 그것이 산화시킬 수 없을 기질도 산화시킬 수 있다. 상기 매개체는 통상적으로 라카제에 의해 산화되는 "소형 분자 화합물"이다. 산화된 매개체는 이후 다시 실제 기질을 산화시킨다.

첫 번째 라카제는 1883년에 일본 옻나무 (루스 베르니시페라(Rhus vernicifera))에서 발견되었었다. 라카제는 복숭아, 토마토, 망고 및 감자와 같은 많은 식물에서 발견되며; 일부 곤충에서도 라카제가 알려져 있다. 그러나, 가장 빈번하게 사용되는 라카제는 진균, 예를 들면 타입 아가리우스(agaricus), 아스페르길루스(aspergillus), 세레나(cerrena), 쿠르불라리아(curvularia), 푸사리움(fusarium), 렌티누스(lentinus), 모노실리움(monocillium), 마이셀리오프토라(myceliophthora), 뉴로스포라(neurospora), 페니실리움(penicillium), 파네로차에타(phanerochaete), 플레비아(phlebia), 플레우로투스(pleurotus), 포도스포라(podospora), 쉬조필룸(schizophyllum), 스포로트리쿰(sporotrichum), 스타고노스포라(stagonospora) 및 트라메테스(trametes)로부터 유래한다.

자연에서, 라카제의 기능은 특히 리그노셀룰로스를 분해하는 것, 세포 벽의 생합성, 과실 및 채소의 갈변은 물론, 식물에서 미생물 공격을 방지하는 것과의 그의 연관으로 구성된다.

더러운 세탁물 또는 더러운 대상물로부터 효과적으로 착색 얼룩/불순물을 제거하는 것은 종종 어렵다. 강한 착색 얼룩 및 불순물, 즉 과실 및/또는 채소로부터 유래하는 것들을 제거하는 것은 특히 까다롭다. 이러한 얼룩 및 불순물은 카로티노이드 화합물 기재의 착색 색소, 예컨대 a-, b- 및 g-카로틴 및 리코펜, 포르피린, 예컨대 클로로필, 그리고 플라보노이드 색소 및 염료 성분들을 함유하고 있다. 천연 플라보노이드를 기재로 하는 상기 마지막 염료 성분 군은 펠라르고니딘, 시아니딘, 델피니딘, 그리고 이들의 메틸 에스테르 및 안톡산틴을 기재로 하는 강한 착색 안토시아닌 염료 및 색소를 포함한다. 이들 화합물은 대부분의 과실 중 오렌지-색상, 적색, 보라색 및 청색 색상의 기원이며, 모든 베리, 체리, 레드커런트 및 블랙커런트, 자몽, 패션 프루트, 오렌지, 레몬, 사과, 배, 석류, 적색 양배추, 비트뿌리 및 또한 꽃에 풍부하다. 시아니딘의 유도체는 색소성 잎의 80%까지, 과실의 70%까지, 그리고 꽃의 50%까지 존재한다. 그와 같은 불순물의 특별한 예로는 차, 커피, 향신료 예컨대 카레 및 파프리카, 오렌지, 토마토, 바나나, 차, 망고, 브로콜리, 당근, 비트뿌리, 시금치 및 잔디로부터의 불순물이 포함된다. 볼펜 잉크 역시 제거하기가 매우 어려운 얼룩인 것으로 알려져 있다. 이러한 강한 착색 플라보노이드 및 카로티노이드 염료는 종종 접합된 이중 결합 시스템을 갖는 다고리형 및 헤테로고리형 화합물이다. 이와 같은 화학적 구조는 종종 화합물의 선명한 색의 원인이 된다.

착색 얼룩 및 불순물을 제거하는 데에 있어서의 지명된 어려움들은 액체 세제 및 세척제를 제제화할 때 특히 심각한데, 이는 이들이 통상적으로 어떠한 표백제도 함유하지 않기 때문이다.

놀랍게도, 플레우로투스 풀모나리우스(Pleurotus pulmonarius)에 속하는 그렇게 널리 알려져 있지는 않은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 라카제, 또는 (서열 동일성에 있어서) 그와 충분히 유사한 라카제들이 액체 세제 또는 세척제에서 사용하기에 특히 적합하며, 세척력과 관련하여 향상되어 있다는 것이 발견되었다.

이에 따라, 본 발명의 제1 주제는 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 1에 표시되어 있는 아미노산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 라카제이다.

본 발명의 다른 주제는 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 2에 표시되어 있는 핵산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 핵산 서열에 의해 코딩되는 라카제이다.

본 발명의 다른 주제는 본 발명에 따른 적어도 1종의 라카제, 즉 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 1에 표시되어 있는 아미노산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 라카제, 또는 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 2에 표시되어 있는 핵산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 핵산 서열에 의해 코딩되는 라카제를 함유하는 세제이다.

유리하게도, 본 발명에 따른 제제는 특히 착색 얼룩 및 불순물을 제거하는 경우에 향상된 세척력을 갖는다. 특히 바람직하게도, 본 발명에 따른 제제는 안토시아닌-함유 불순물을 제거하는 데에 적합하다.

서열식별번호: 1은 담자균류인 플레우로투스 풀모나리우스 DSMZ 5331 (DSMZ: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) 유래 라카제의 서열이다.

서열식별번호: 2는 서열식별번호: 1을 갖는 라카제를 코딩하는 cDNA, 즉 인트론이 없는 것이다.

더하여, 놀랍게도, 하기의 라카제들 역시 액체 세제 또는 세척제에서 사용하기에 특히 적합하며, 세척력과 관련하여 향상된다는 것이 발견되었다:

a) 담자균류인 플레우로투스 오스트레아투스(Pleurotus ostreatus) 변종 플로리다 유래의 라카제 [서열식별번호: 3], 또는 (서열 동일성에 있어서) 그와 충분히 유사한 라카제들;

b) 쉬이타케 펑구스(Shiitake fungus) (렌티눌라 에도데스(Lentinula edodes)) 유래의 그렇게 널리 알려져 있지는 않은 라카제 [서열식별번호: 5], 또는 (서열 동일성에 있어서) 그와 충분히 유사한 라카제들;

c) 트라메테스(Trametes) 종 (Tsp, DSMZ 11309) (DSMZ: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) 유래의 그렇게 널리 알려져 있지는 않은 라카제 [서열식별번호: 7], 또는 (서열 동일성에 있어서) 그와 충분히 유사한 라카제들.

이에 따라, 본 발명의 다른 주제는 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5 및/또는 서열식별번호: 7에 표시되어 있는 아미노산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 라카제이다.

이에 따라, 본 발명의 다른 주제는 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5 및/또는 서열식별번호: 7에 표시되어 있는 아미노산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1종의 라카제를 함유하는 세제이다.

유리하게도, 본 발명에 따른 제제는 특히 착색 얼룩 및 불순물을 제거하는 경우에 향상된 세척력을 갖는다. 특히 바람직하게도, 본 발명에 따른 제제는 안토시아닌-함유 불순물을 제거하는 데에 적합하다.

서열식별번호: 3은 문헌 [Palmieri, G. et al. (2003) Atypical laccaseisoenzymes from coppersupplemented Pleurotus ostreatus cultures. EnzymeMicrob.Technol. 33(2-3), 220-230]으로부터의 플레우로투스 오스트레아투스 변종 플로리다로부터 유래하는 라카제의 서열이다. 서열은 문헌의 227 페이지에 있다.

서열식별번호: 5는 담자균류 렌티눌라 에도데스 (쉬타케(Shitake)) 유래 라카제의 서열이다.

서열식별번호: 7은 트라메테스 종 (Tsp, DSMZ 11309) (DSMZ: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) 유래 라카제의 서열이다.

본 발명의 다른 주제는 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 8에 표시되어 있는 핵산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 핵산 서열에 의해 코딩되는 적어도 1종의 라카제를 함유하는 세제이다.

서열식별번호: 4는 서열식별번호: 3을 갖는 라카제를 코딩하는 cDNA, 즉 인트론이 없는 것이다.

서열식별번호: 6은 서열식별번호: 5를 갖는 라카제를 코딩하는 cDNA, 즉 인트론이 없는 것이다.

서열식별번호: 8은 서열식별번호: 7을 갖는 라카제를 코딩하는 cDNA, 즉 인트론이 없는 것이다.

핵산 또는 아미노산 서열들의 동일성은 서열 비교에 의해 측정된다. 이와 같은 서열 비교는 선행 기술에서 확립되어 통상적으로 사용되고 있는 블라스트(BLAST) 알고리즘 (cf. 예를 들면 문헌 [Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, DJ. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403410] 및 [Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, pp. 3389-3402])을 바탕으로 하며, 뉴클레오티드 또는 아미노산의 유사한 서열들이 핵산 서열 또는 아미노산 서열에서 서로 할당되는 형태를 취한다. 각 위치의 표로 나타낸 할당은 정렬(alignment)로 지칭된다. 선행 기술에서 이용가능한 추가적인 알고리즘은 파스타(FASTA) 알고리즘이다. 서열 비교 (정렬), 특히 다중 서열 비교는 컴퓨터 프로그램에 의해 산출된다. 빈번하게 사용되는 것으로, 예를 들면 클러스탈(Clustal) 시리즈 (cf. 예를 들면 문헌 [Chenna et al. (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31, 3497-3500]), T-커피(Coffee) (cf. 예를 들면 문헌 [Notredame et al. (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217]), 또는 이들 프로그램 또는 알고리즘을 바탕으로 하는 프로그램들이 있다. 본 특허 출원에서, 모든 서열 비교 (정렬)는 주어진 표준 파라미터들을 사용하며 서열 비교를 위한 그의 얼라인(Align)X 모듈이 클러스탈W를 바탕으로 하고 있는 컴퓨터 프로그램 벡터(Vector) NTI® 수이트(Suite) 10.3 (인비트로겐 코포레이션(Invitrogen Corporation) 사, 미국 캘리포니아 칼스배드 1600 패러데이 애비뉴 소재)을 사용하여 산출되었다.

그와 같은 비교는 비교되는 서열들의 유사성에 대하여 평가하는 것도 가능케 한다. 그것은 보통 동일성의 백분율, 즉 동일한 위치 또는 또 다른 위치에 해당하는 정렬에서의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 비율로 표시된다. 아미노산 서열에서, 더 광범위하게 공식화되어 있는 용어인 상동성은 보존되는 아미노산 교체에 따른 유사한 화학적 활성을 가지며 그에 따라 그들이 단백질 내에서 거의 유사한 화학적 활성을 발휘하는 아미노산들에 관한 것이다. 이에 따라, 비교되는 서열들 사이의 유사성은 상동성의 백분율 또는 유사성의 백분율로 표시될 수도 있다. 동일성 및/또는 상동성에 대한 세부사항은 전체 폴리펩티드 또는 유전자를 통하여, 또는 개별 영역을 통하여서만 탐색될 수 있다. 이에 따라, 서로 다른 핵산 서열 또는 아미노산 서열들의 상동성이거나 동일한 영역은 서열에서의 유사성에 의해 정해진다. 그와 같은 영역들은 종종 동일한 기능을 갖는다. 그들은 소형이어서 몇 개의 뉴클레오티드 또는 아미노산만을 포함할 수 있다. 종종, 그와 같은 소형의 영역이 단백질의 전체 활성에 있어서 본질적인 기능을 보유한다. 따라서, 서열 유사성은 개별적으로 있을 수 있는 소형 영역으로만 관련시키는 것이 편리할 수 있다. 그러나, 달리 표시되지 않는 한, 본 발명에서 동일성 또는 상동성 세부사항은 각 표시되는 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 전체 길이에 관한 것이다.

본 발명에 따른 라카제, 및 본 발명에 따른 세제에 사용될 수 있는 라카제는 식물, 진균 및 바람직하게는 세균, 특히 바실루스(bacillus) 및 방선균류(actinomycetes)로부터 수득될 수 있다. 서열식별번호: 1을 포함하는 라카제는 플레우로투스 풀모나리우스로부터 수득될 수 있다. 서열식별번호: 3을 포함하는 라카제는 플레우로투스 오스트레아투스 변종 플로리다로부터 수득될 수 있다. 서열식별번호: 5를 포함하는 라카제는 렌티눌라 에도데스로부터 수득될 수 있다. 서열식별번호: 7을 포함하는 라카제는 트라메테스 종으로부터 수득될 수 있다.

그러나, 라카제의 자연 생산량은 종종 매우 저조하다. 이에 따라, 외래 생산 숙주에서 발현되는 라카제 유전자를 보유한다면 생산을 증가시키는 데에 편리할 수 있을 것이다.

이와 같은 목적으로, 일반적으로 본 발명에 따른 라카제를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터가 사용된다.

그것은 DNA 분자 또는 RNA 분자일 수 있다. 그것은 단일 가닥으로, 그와 같은 단일 가닥에 대하여 상보성인 단일 가닥으로, 또는 이중 가닥으로 존재할 수 있다. 특히 DNA 분자의 경우, 2개 상보성 가닥의 서열은 각각 3종 전체의 가능한 리딩 프레임으로 고려되어야 한다. 또한, 상이한 코돈, 즉 염기 삼중체가 동일한 아미노산을 코딩할 수 있어서, 결과적으로 특정 아미노산 서열이 몇 가지 상이한 핵산으로부터 코딩될 수 있다는 것이 고려되어야 한다. 유전자 코드가 축퇴성을 가짐에도 불구하고 정해진 아미노산에 대하여 개별 코돈들이 할당될 수 있으므로, 관련 기술분야 통상의 기술자라면 헷갈리지 않고 이러한 핵산 서열을 결정할 수 있다. 따라서, 관련 기술분야 통상의 기술자라면, 아미노산 서열에서 시작하여 문제없이 그와 같은 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 찾아낼 수 있다. 또한, 핵산에서는, 하나 이상의 코돈이 동의 코돈으로 대체될 수 있다. 이와 같은 측면은 특히 본 발명에 따른 효소의 이종유래 발현과 관련된다. 이와 같은 방식에서, 모든 생물체, 예를 들면 생산 균주의 숙주 세포는 고유한 코돈 용법을 보유하고 있다. 코돈 용법은 각 생물체에 의한 유전자 코드의 아미노산으로의 번역을 의미하는 것으로 이해된다. 생물체에서 핵산상의 코돈이 상대적으로 적은 수의 충전된 tRNA 분자에 직면하게 되는 경우, 단백질 생합성의 결핍이 있을 수 있다. 동일한 아미노산을 코딩한다 할지라도, 이는 그 아미노산을 코딩하는 동의 코돈에 비해 생물체에서 코돈이 덜 효율적으로 번역되는 것으로 이어진다. 그것은 동의 코돈을 위한 더 많은 수의 tRNA 분자의 존재로 인하여 생물체에서 더 효율적으로 번역될 수 있는 것이다.

예를 들면 분자-생물학적 및/또는 단백질-화학적 표준 방법들과 연계된 화학적 합성 또는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)과 같이 오늘날 관련 기술분야 통상의 기술자에게 일반적으로 알려져 있는 방법을 사용하면, 알려져 있는 DNA 및/또는 아미노산 서열을 사용하여 완전한 유전자까지의 상응하는 핵산을 생성시키는 것이 가능하다. 그와 같은 방법에 대해서는, 예를 들면 문헌 [Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. 2001. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd Edition Cold Spring Laboratory Press]에 공지되어 있다.

본 발명의 의미상, 벡터는 핵산으로 구성되는 요소를 의미하는 것으로 이해되는데, 상기 요소는 특징적인 핵산 영역으로서 본 발명에 따른 라카제를 코딩하는 핵산을 포함한다. 그것은 수세대 또는 수회의 세포 분할 동안 종 또는 세포주에서 안정한 유전자 요소로서 그것을 확립할 수 있다. 벡터는 특정 플라스미드이며, 그에 따라 특히 세균에서 사용될 때, 원형의 유전자 요소이다. 본 발명의 체제 내에서, 본 발명에 따른 라카제를 코딩하는 핵산은 벡터에 클로닝된다. 벡터에는 예를 들면 그 기원이 세균 플라스미드, 바이러스 또는 박테리오파지의 것인 것들, 또는 주로 가장 변이된 기원의 요소들을 갖는 합성 벡터 또는 플라스티드가 포함된다. 각각 이용가능한 다른 유전자 요소들을 가지고 있기 때문에, 벡터는 수세대에 걸쳐 관련 숙주 세포에서 안정한 단위로서 그 자체를 확립할 수 있다. 그것은 염색체-외에 별도의 단위로서 존재하거나, 또는 염색체 또는 염색체 DNA에 통합될 수 있다.

발현 벡터는 그것을 포함하는 숙주 세포에서 그것이 바람직하게는 미생물, 특히 바람직하게는 세균을 복제하고 거기에 포함되어 있는 핵산을 발현하는 것을 가능케 하는 핵산 서열을 포함한다. 발현은 특히 전사를 조절하는 프로모터(들)에 의해 영향을 받는다. 원칙적으로, 발현은 발현될 핵산 전에 원래 위치되는 자연 프로모터에 의해서는 물론, 발현 벡터에 제공되는 숙주 세포의 프로모터, 또는 또 다른 생물체 또는 또 다른 숙주 세포의 변형되거나 완전히 상이한 프로모터에 의해서도 이루어질 수 있다. 본 사례에서는, 적어도 1종의 프로모터가 본 발명에 따른 라카제를 코딩하는 핵산의 발현에 이용가능해지며, 그의 발현에 사용된다. 예를 들면 배양 조건을 변화시키는 것에 의해, 또는 그것을 포함하는 숙주 세포의 특정 세포 밀도에 도달시, 또는 특정 물질, 특히 유전자 발현의 활성화인자를 첨가하는 것에 의해 발현 벡터를 조절하는 것 또한 가능할 수 있다. 그와 같은 물질의 예는 갈락토스 유도체인 이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노시드 (IPTG)이며, 세균 락토스 오페론 (lac-오페론)의 활성화인자로 사용되는 것이다. 발현 벡터와의 컨트랙트시, 포함된 핵산은 클로닝 벡터에서 발현되지 않는다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 라카제를 코딩하는 핵산, 또는 그와 같은 핵산을 포함하는 벡터는 이후 숙주 세포로서 작용하는 미생물로 형질전환된다. 대안적으로는, 개별 구성요소들, 즉 본 발명에 따른 라카제를 코딩하는 핵산의 핵산 일부 또는 단편들이 숙주 세포에 도입되어, 생성되는 숙주 세포가 하나의 그와 같은 핵산 또는 하나의 그와 같은 벡터를 포함하도록 할 수 있다. 이와 같은 과정은 숙주 세포가 이미 그와 같은 핵산 또는 그와 같은 벡터의 하나 이상의 구성요소 또는 몇 개의 구성요소들을 포함하고 있으며 추가적인 구성요소들이 이후 상응하여 보충되는 경우에 특히 적합하다. 세포를 형질전환시키는 방법에 대해서는 선행 기술에 확립되어 있으며, 관련 기술분야 통상의 기술자에게 충분히 알려져 있다. 원칙적으로, 모든 세포, 즉 원핵 또는 진핵 세포가 숙주 세포로서 적합하다. 유리하게는 예를 들면 핵산 또는 벡터를 사용한 형질전환 및 그의 안정한 확립에 영향을 주는 유전자 조작을 할 수 있는 숙주 세포, 예를 들면 단일-세포 진균 또는 세균이 바람직하다. 또한, 바람직한 숙주 세포는 우수한 미생물학적 및 생물공학적 취급 거동을 특징으로 한다. 이는 예를 들면 용이한 배양성, 높은 성장 속도, 적은 발효 배지 요구량, 및 외래 단백질에 있어서의 우수한 생성 및 분비 속도와 관련된다. 본 발명에 따른 바람직한 숙주 세포는 (유전자 이전에 의해) 발현되는 단백질을 숙주 세포를 둘러싸고 있는 배지 중으로 분비한다. 또한, 라카제는 그것을 생성시키는 세포의 의한 생성 후 예를 들면 당 분자의 연결, 포르밀화, 아민화 등에 의해 변형될 수 있다. 그와 같은 번역-후 변형은 라카제에 기능적으로 영향을 줄 수 있다.

예를 들면 벡터에서 이용가능하나 숙주 세포에 이미 존재할 수도 있는 유전자 조절 요소로 인하여 조절될 수 있는 활성을 갖는 그와 같은 숙주 세포가 본 발명에 따른 라카제를 생성시키는 데에 특히 적합하다. 예를 들면, 활성화인자로 작용하는 화합물의 모니터링되는 첨가, 배양 조건의 변화, 또는 특정 세포 밀도에 도달하는 것에 의해, 그것이 발현되도록 촉진될 수 있다. 이는 본 발명에 따른 단백질의 경제적 생산을 가능케 한다. 그와 같은 관계의 예로 전기한 바와 같은 IPTG가 있다.

바람직한 숙주 세포는 원핵 또는 세균 세포이다. 세균은 짧은 세대 시간 및 적은 배양 조건상 요건을 특징으로 한다. 그 결과, 비용상 바람직한 배양 방법 또는 생산 방법이 확립된다. 또한, 발효 기술 관련 기술분야 통상의 기술자라면, 세균을 사용한 실질적인 경험을 가지고 있을 것이다. 개별 사례에서 실험적으로 확립될 영양소 공급원, 생성물 형성 속도, 필요한 시간 등과 같은 가장 가변적인 이유로, 그람-음성 또는 그람-양성의 세균이 특별한 생산에 적합할 수 있다.

예를 들면 에셰리키아 콜리(Escherichia coli)와 같은 그람-음성 세균을 사용하면, 다수의 단백질들이 주변세포질 공간에 분비되며, 그에 따라 세포를 봉입하는 멤브레인들 사이의 구획으로 분비된다. 이는 특별한 적용분야에 유리할 수 있다. 또한, 그람-음성 세균은 그것이 주변세포질 공간 뿐만 아니라 세균을 둘러싸고 있는 배지에도 발현된 단백질을 배출하도록 개발될 수도 있다. 반면, 예를 들면 바실루스 또는 방선균류 또는 방선균목의 다른 대표적인 것들과 같은 그람-양성 세균은 외부 멤브레인이 없는데, 그 결과 분비된 단백질이 즉시 세균을 둘러싸고 있는 배지, 일반적으로는 영양 배지로 방출되며, 그로부터 발현된 단백질이 정제될 수 있다. 그것은 직접 배지로부터 단리되거나, 추가적으로 처리될 수 있다. 또한, 그람-양성 세균들은 기술적으로 중요한 효소들에 있어서 가장 원형의 생물과 관련되거나 그와 동일해서, 그 자체로서 가장 유사한 효소들을 형성시켜, 그 결과 그것이 유사한 코돈 용법을 가지며, 그의 단백질 합성 장치가 자연적으로 상응하여 정렬된다.

지명된 숙주 세포들은 그의 배양 조건에 있어서의 요건과 관련하여 변화되거나, 또는 상이하거나 추가적인 선택 마커를 가지거나, 또는 상이하거나 추가적인 단백질을 발현할 수 있다. 특히, 그것은 유전자이전에 의해 몇 가지 단백질 또는 효소를 발현하는 숙주 세포일 수도 있다.

본 발명은 원칙적으로 모든 미생물, 특히 모든 발효가능 미생물에 적용되어, 그러한 미생물의 사용에 의해 생성될 수 있는 본 발명에 따른 라카제로 이어질 수 있다.

본 발명에 따른 라카제를 수득하기 위한 특히 바람직한 숙주 세포는 세균, 특히 에셰리키아(Escherichia), 클렙시엘라(Klebsiella), 바실루스(Bacillus), 스태필로쿠쿠스(Staphylococcus), 코리네박테리움(Corynebacterium), 아트로박터(Arthrobacter), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 스테노트로포모나스(Stenotrophomonas) 및 슈도모나스(Pseudomonas) 속, 특히 에셰리키아 콜리(Escherichia coli), 클렙시엘라 플란티콜로(Klebsiella planticola), 바실루스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실루스 렌투스(Bacillus lentus), 바실루스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실루스 알칼로필루스(Bacillus alcalophilus), 바실루스 글로비기이(Bacillus globigii), 바실루스 기브소니이(Bacillus gibsonii), 바실루스 클라우시이(Bacillus clausii), 바실루스 할로두란스(Bacillus halodurans), 바실루스 푸밀루스(Bacillus pumilus), 스태필로코쿠스 카르노수스(Staphylococcus carnosus), 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum), 아트로박터 옥시단스(Arthrobacter oxidans), 스트렙토마이세스 리비단스(Streptomyces lividans), 스트렙토마이세스 코엘리콜로르(Streptomyces coelicolor) 및 스테노트로포모나스 말토필리아(Stenotrophomonas maltophilia)로부터 선택되는 것들이다.

그러나, 숙주 세포는 그것이 세포 핵을 갖는 것을 특징으로 하는 진핵 세포일 수도 있다. 원핵 세포와 달리, 진핵 세포는 번역-후 방식으로 형성된 단백질을 변형시킬 수 있다. 그 예로는 방선균류와 같은 진균, 또는 효모균류(Saccharomyces) 또는 클루이베로마이세스(Kluyveromyces)와 같은 효모가 있다. 이는 나중에 예를 들면 그의 합성과 연계되어 그러한 시스템이 가능하게 하는 특정 변형에 단백질을 적용하고자 하는 경우에 특히 유리할 수 있다. 특히 단백질 합성과 연계되어 진핵 시스템이 수행하는 변형에는 예를 들면 멤브레인 앵커(anchor) 또는 올리고당류와 같은 저분자량 화합물들을 결합시키는 것이 포함된다. 그와 같은 올리고당류 변형은 예를 들면 발현되는 단백질의 알레르기원성을 감소시키는 데에 바람직할 수 있다. 또한, 예를 들면 셀룰라제 또는 리파제와 같이 그러한 세포에 의해 자연적으로 형성되는 효소와의 공동발현은 유리할 수 있다. 또한, 예를 들면 호열성 진균 발현 시스템은 온도-내성 단백질 또는 변이를 발현하는 데에 특히 적합할 수 있다.

지명된 숙주 세포들은 예를 들면 불연속식 또는 연속식 시스템에서 통상적으로 배양 및 발효된다. 앞의 사례에서는, 적합한 영양 배지에 숙주 세포가 접종되고, 실험적으로 결정될 시간 기간 후에 배지로부터 생성물이 수확된다. 연속식 발효는 상대적으로 긴 시간 기간 동안 세포가 부분적으로는 사멸 제거되나 다시 성장하기도 하며 동시에 형성되는 단백질이 배지로부터 제거될 수 있는 동적 평형을 달성하는 것을 특징으로 한다.

발효 방법에 대해서는 선행 기술에 원래 알려져 있는 바, 실제 산업 생산 단계를 나타내며, 일반적으로 생성되는 생성물, 예를 들면 본 발명에 따른 라카제의 적합한 정제 방법이 후속한다.

공급 전략을 통하여 발효가 수행되는 것을 특징으로 하는 발효 방법이 특히 고려된다. 이에 의해 연속식 배양에 의해 소비되는 배지 성분이 보충된다. 그 결과, 세포 밀도, 및 또한 세포 질량 또는 건조 질량 및/또는 특히 관심 라카제의 활성에 있어서 상당한 증가가 달성될 수 있다. 또한, 발효는 원치 않는 대사 생성물이 여과 제거되거나, 또는 완충제 또는 각각 적합한 상대이온을 첨가하는 것에 의해 중화되도록 개발될 수도 있다.

생성되는 라카제는 발효 배지로부터 수확될 수 있다. 그와 같은 발효 방법은 숙주 세포로부터의 라카제의 단리, 즉 세포 질량 (건조 질량)으로부터의 생성물 제조에 있어서 바람직하지만, 숙주 세포가 발효 배지로 라카제를 분비하기 위해서는 적합한 숙주 세포, 또는 1종 이상의 적합한 분비 마커 또는 메커니즘 및/또는 수송 시스템의 제공을 필요로 한다. 분비가 없는 경우, 대안적으로 숙주 세포로부터의 라카제의 단리, 즉 세포 질량으로부터의 그의 정제는 예를 들면 염 침전, 한외여과, 이온-교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피와 같은 효소 화학상의 통상적인 방법들을 사용하여 이루어질 수 있다. 정제는 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 의해 모니터링될 수 있다. 상이한 온도 및 pH 값에서의 정제된 효소의 효소 활성이 측정될 수 있으며; 마찬가지로 분자량 및 등전점이 측정될 수 있다.

놀랍게도, 본 발명에 따른 라카제, 특히 서열식별번호: 1을 포함하는 라카제 및 또한 서열식별번호; 3, 서열식별번호; 5 및 서열식별번호; 7을 포함하는 라카제가 특히 액체 세제 제제에서 세척력을 향상시키면서도, 다른 라카에에서 알려져 있는 바와 같은 원치 않는 다크닝(darkening) 및 그에 따른 얼룩, 특히 차 및 커피 얼룩의 강화를 초래하지 않는다는 것이 발견되었다.

본 발명에 따른 세제 중 라카제의 농도는 활성 단백질 대비 0.001 내지 0.15 중량%, 바람직하게는 0.005 내지 0.06 중량%이다.

본 발명에 따른 세제는 바람직하게는 5℃ 내지 95℃, 바람직하게는 20℃ 내지 60℃, 특히 바람직하게는 30℃ 내지 40℃의 온도 범위에서 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 세제는 더 높은 효율로 제거될 염료를 산화시키기 위하여 추가적인 매개체를 함유할 수 있다. 본 발명에 있어서 적합한 매개체는 예를 들면 템포(Tempo) (2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시), HBT (1-히드록시벤조트리아졸), ABTS (2,2'-아지노비스-3-에틸벤조티아졸-6-술포네이트), NHA (N-히드록시-아세트아닐리드), 2,5-크실리딘, 에탄올, 구리, 4-메틸카테콜, N-히드록시프탈이미드, 갈산, 탄닌산, 퀘르세틴, 시린지산, 구아이아콜, 디메톡시벤질 알콜, 페놀, 비올루르산 (이소니트로소바르비투르산), 페놀 레드, 브로모페놀 블루, 셀룰로스, p-쿠마린산, 루이보스(Rooibos), o-크레졸, 디클로로인도페놀, 히드록시벤조트리아졸, 시클로헥스이미드 또는 바닐린이다.

본 발명의 다른 주제는, 특히 착색 얼룩 및 불순물을 제거하는 경우, 특히 바람직하게는 안토시아닌을 함유하는 불순물을 제거하는 경우 세제의 세척력을 향상시키기 위한, 본 발명에 따른 라카제의 용도이다.

본 발명의 다른 주제는 본 발명에 따른 적어도 1종의 라카제를 함유하는 계면활성제 함유 수용액이 사용되는 것을 특징으로 하는, 계면활성제 함유 수용액에서의 텍스타일의 세척 방법이다.

상기 방법은 세척을 필요로 하는 텍스타일이 수성 액과 접촉되며, 통상적인 세탁기가 사용될 수 있거나 손으로 세탁이 수행될 수 있다는 점에서, 그의 가장 단순한 형태로 달성된다. 본 발명에서는, 통상적인 가정용 세탁기 프로그램을 사용하는 경우에서와 마찬가지로 집중적인 수성 액의 환기를 동반하여 상기 방법을 수행하는 것이 바람직하다.

지명된 얼룩 및 불순물을 제거하는 데에 적합한 라카제 이외에, 세제는 이 성분과 일반적으로 상용성인 성분들을 함유할 수 있다. 이에 따라, 예를 들면, 그것은 또한 1종 이상의 색상-전달 억제제를 추가적으로 함유할 수 있는데, 그러할 경우 그것은 바람직하게는 0.1 중량% 내지 2 중량%, 특히 0.2 중량% 내지 1 중량%의 양이며, 바람직한 실시양태에서는 비닐피롤리돈, 비닐이미다졸, 비닐피리딘-N-옥시드의 중합체 또는 이들의 공중합체로부터 선택된다. 15 000 g/mol 내지 50 000 g/mol의 분자량을 갖는 폴리비닐피롤리돈 및 또한 예를 들면 1 000 000 g/mol 초과까지, 특히 1 500 000 g/mol 내지 4 000 000 g/mol의 더 높은 분자량을 갖는 폴리비닐피롤돈 양자, N-비닐이미다졸/N-비닐피롤리돈 공중합체, 폴리비닐옥사졸리돈, 비닐 단량체 및 카르복실산 아미드를 기재로 하는 공중합체, 피롤리돈 기를 포함하는 폴리에스테르 및 폴리아미드, 그래프팅된 폴리아미도아민 및 폴리에틸렌 이민, 폴리아민-N-옥시드 중합체 및 폴리비닐 알콜이 사용될 수 있다. 수중에 퍼옥시다제 및 수소 퍼옥시드, 또는 수소 퍼옥시드를 제공하는 물질을 포함하는 효소 시스템 역시 사용될 수 있다. 이와 같은 경우에서는, 퍼옥시다제용 매개체 화합물, 예를 들면 아세토시링곤, 페놀 유도체 또는 페노티아진 또는 페녹사진의 추가가 바람직한데, 이 경우에도 추가적으로 상기-언급된 중합체성 색상-전달 억제제 활성 성분들이 사용될 수 있다. 폴리비닐피롤리돈은 바람직하게는 10 000 g/mol 내지 60 000 g/mol 범위, 특히 25 000 g/mol 내지 50 000 g/mol 범위의 평균 몰질량을 갖는다. 공중합체로는, 5 000 g/mol 내지 50 000 g/mol, 특히 10 000 g/mol 내지 20 000 g/mol 범위의 평균 몰질량을 갖는 5:1 내지 1:1 몰비의 비닐피롤리돈 및 비닐이미다졸로 구성되는 것들이 바람직하다.

특히 분말형 고체, 재농밀화 입자 형태, 과립 형태, 균질 용액 또는 현탁액으로 존재할 수 있는 세제들 역시 본 발명에 따라 사용되는 라카제 이외에 원칙적으로는 그와 같은 제제에 알려져 있으며 흔한 모든 성분들을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 제제는 특히 빌터, 표면-활성 계면활성제, 유기 및/또는 무기 과산소 화합물 기재의 표백제, 표백 활성화제, 수-혼화성 유기 용매, 효소, 금속이온봉쇄제, 전해질, pH 조절제 및 추가적인 보조제, 예컨대 광학 증백제, 회색화 억제제, 발포 조절제는 물론, 염료 및 방향제를 함유할 수 있다.

제제는 바람직하게는 계면활성제 또는 수 종의 계면활성제들을 함유하는데, 특히 음이온계 계면활성제, 비-이온계 계면활성제 및 이들의 혼합물은 물론, 양이온계, 양쪽이온성 및 양쪽성 계면활성제도 고려된다.

적합한 비-이온계 계면활성제는 특히 각각 알킬 부분에 12 내지 18개의 C 원자를 가지며 3 내지 20개, 바람직하게는 4 내지 10개의 알킬 에테르 기를 갖는 알킬 글리코시드, 및 알킬 글리코시드의 에톡실화 및/또는 프로폭실화 생성물 또는 선형 또는 분지형 알콜이다. 또한, 알킬 부분에 있어서 지명된 장-쇄 알콜 유도체는 물론 알킬 잔기에 5 내지 12개의 C 원자를 갖는 알킬 페놀에 해당하는 N-알킬아민, 비시날 디올, 지방산 에스테르 및 지방산 아미드의 상응하는 에톡실화 및/또는 프로폭실화 생성물이 사용될 수 있다.

바람직하게는 알콕실화, 유리하게는 에톡실화된, 특히 바람직하게는 8 내지 18개 C 원자 및 알콜 mol 당 평균 1 내지 12 mol의 에틸렌 옥시드 (EO)를 갖는 일차 알콜이 비-이온계 계면활성제로서 사용되는데, 옥소 알콜 잔기에서 통상적으로 존재하는 바와 같이 그의 알콜 잔기는 선형 또는 바람직하게는 2-위치에서의 메틸-분지형일 수 있거나, 또는 혼합물 중에 선형 및 메틸-분지형 잔기를 함유할 수 있다. 그러나, 특히 12 내지 18개 C 원자를 갖는 자연 기원의 알콜, 예컨대 코코야자, 팜, 수지 지방 또는 올레일 알콜로 구성되는 선형 잔기를 가지며 알콜 몰 당 평균 2 내지 8개의 EO를 갖는 알콜 에톡실레이트가 바람직하다. 바람직한 에톡실화 알콜에는 예를 들면 3개 EO 또는 4개 EO를 갖는 C₁₂-C₁₄ 알콜, 7개 EO를 갖는 C₉-C₁₁ 알콜, 3개 EO, 5개 EO, 7개 EO 또는 8개 EO를 갖는 C₁₃-C₁₅ 알콜, 3개 EO, 5개 EO 또는 7개 EO를 갖는 C₁₂-C₁₈ 알콜, 및 이들의 혼합물, 예컨대 3개 EO를 갖는 C₁₂-C₁₄ 알콜과 7개 EO를 갖는 C₁₂-C₁₈ 알콜의 혼합물이 포함된다. 표시된 에톡실화도는 특정 생성물의 정수 또는 분수일 수 있는 통계적 평균을 나타낸다. 바람직한 알콜 에톡실레이트는 밀집된 상동성 분포 (좁은 범위의 에톡실레이트, NRE)를 갖는다. 이러한 비-이온계 계면활성제 이외에, 12개를 초과하는 EO를 갖는 지방 알콜도 그렇게 사용될 수 있다. 그의 예는 14개 EO, 16개 EO, 20개 EO, 25개 EO, 30개 EO 또는 40개 EO를 갖는 (수지) 지방 알콜이다. 특히 기계적 방법에서 사용하기 위한 제제에서는 통상적인 극히 저-발포성인 화합물이 사용된다. 여기에는 바람직하게는 각각 분자에 8 mol 이하의 에틸렌 옥시드 및 프로필렌 옥시드 단위를 갖는 C₁₂-C₁₈ 알킬 폴리에틸렌 글리콜 폴리프로필렌 글리콜 에테르가 포함된다. 그러나, 예를 들면 각각 분자에 8 mol 이하의 에틸렌 옥시드 및 부틸렌 옥시드 단위를 갖는 C₁₂-C₁₈ 알킬 폴리에틸렌 글리콜 폴리부틸렌 글리콜 에테르와 같은 다른 공지의 저-발포성 비-이온계 계면활성제는 물론 말단-기 봉쇄 알킬 폴리알킬렌 글리콜 혼합 에테르도 사용될 수 있다. 히드록시-기 포함 알코실화 알콜, 소위 히드록시 혼합 에테르 역시 특히 바람직하다. 사용될 수 있는 비-이온계 계면활성제에는 또한 일반 화학식 RO(G)_x의 알킬 글리코시드가 포함되는데, 여기서 R은 8 내지 22개, 바람직하게는 12 내지 18개의 C 원자를 갖는 일차 직-쇄 또는 메틸-분지형 지방족 잔기, 특히 2 위치에서 메틸-분지된 것을 의미하며, G는 5 또는 6개의 C 원자를 갖는 글루코스 단위, 바람직하게는 글루코스를 나타낸다. 모노글리코시드 및 올리고글리코시드의 분포를 표시하는 올리고머화도 x는 1 내지 10 사이의 - 분석에 의해 측정될 변수로서 분수 값을 취할 수도 있는 - 임의의 수이며; 바람직하게는 x는 1.2 내지 1.4이다. 역시 적합한 것은 하기 화학식의 폴리히드록시 지방산 아미드이다:

(식 중 R¹CO는 6 내지 22개 탄소 원자를 갖는 지방족 아실 잔기를 나타내며, R²는 수소, 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 알킬 또는 히드록시알킬 잔기를 나타내고, [Z]는 3 내지 10개의 탄소 원자 및 3 내지 10개의 히드록실 기를 갖는 선형 또는 분지형 폴리히드록시알킬 잔기를 나타냄).

바람직하게는, 상기 폴리히드록시 지방산 아미드는 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는 환원당, 특히 글루코스로부터 유래한다. 폴리히드록시 지방산 아미드의 군에는 하기 화학식의 화합물도 포함된다:

(식 중 R³는 7 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 또는 알케닐 잔기를 나타내며, R⁴는 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형, 분지형 또는 고리형 알킬렌 잔기 또는 아릴렌 잔기를 나타내고, R⁵는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형, 분지형 또는 고리형 알킬 잔기 또는 아릴 잔기 또는 옥시알킬 잔기를 나타내는 바, C₁-C₄ 알킬 또는 페닐 잔기가 바람직하며, [Z]는 그의 알킬 사슬이 적어도 2개의 히드록실 기에 의해 치환되어 있는 선형 폴리히드록시알킬 잔기, 또는 그와 같은 잔기의 알콕실화, 바람직하게는 에톡실화 또는 프로폭실화 유도체를 나타냄). 본원에서 [Z]는 바람직하게는 글루코스, 프럭토스, 말토스, 락토스, 갈락토스, 만노스 또는 크실로스와 같은 당의 환원성 아민화에 의해 수득되기도 한다. N-알콕시-치환 또는 N-아릴옥시-치환된 화합물은 촉매로서의 알콕시드 존재하에서의 지방산 메틸 에스테르와의 반응에 의해 원하는 폴리히드록시 지방산 아미드로 전환될 수 있다. 단일 비-이온계 계면활성제 또는 특히 알콕실화 지방 알콜 및/또는 알킬 글리코시드와 함께인 다른 비-이온계 계면활성제와의 조합 중 어느 하나로 사용되는 다른 바람직하게 사용되는 비-이온계 계면활성제 클래스는 바람직하게는 알킬 사슬에 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 알콕실화, 바람직하게는 에톡실화, 또는 에톡실화 및 프로폭실화된 지방산 알킬 에스테르, 특히 지방산 메틸 에스테르이다. 또한, 아민 옥시드 유형의 비-이온계 계면활성제, 예를 들면 N-코코-알킬-N,N-디메틸아민 옥시드 및 N-수지 알킬-N,N-디히드록시에틸 아민 옥시드, 그리고 지방산 알칸올아미드가 적합할 수 있다. 이러한 비-이온계 계면활성제의 양은 바람직하게는 에톡실화 지방 알콜의 것을 초과하지 않는 바, 특히 그의 절반을 초과하지 않는다. 소위 제미니 계면활성제(Gemini surfactant)가 추가적인 계면활성제로서 고려된다. 일반적으로, 그것은 분자 당 2개의 친수성 기를 갖는 화합물을 의미한다. 상기 기들은 일반적으로 소위 "스페이서(spacer)"에 의해 서로 분리되어 있다. 이와 같은 스페이서는 일반적으로 친수성 기들이 충분한 거리를 가짐으로써 그들이 서로 독립적으로 작용할 수 있기에 충분하게 길어야 하는 탄소 사슬이다. 그와 같은 계면활성제는 일반적으로 매우 작은 임계 미포 농도 및 물의 표면 장력을 강하게 감소시키는 능력을 특징으로 한다. 예외적인 경우에서, 제미니 계면활성제의 표상은 그와 같은 "이량체"뿐만 아니라 상응하는 "삼량체" 계면활성제도 의미하는 것으로 이해된다. 적합한 제미니 계면활성제는 예를 들면 술페이트화 히드록시 혼합 에테르 또는 이량체 알콜-비스- 및 삼량체 알콜-트리스-술페이트 및 -에테르 술페이트이다. 말단-기 봉쇄 이량체 및 삼량체 혼합 에테르는 특히 그의 이관능성 및 다관능성을 특징으로 한다. 따라서, 지명된 말단-기 봉쇄 계면활성제는 우수한 가교-결합 특성을 가지며, 저-발포성이서, 결과적으로 기계 세탁 또는 세척 방법에서 사용하기에 그것이 특히 적합하다. 그러나, 제미니 폴리히드록시 지방산 아미드 또는 폴리-폴리히드록시 지방산 아미드가 사용될 수도 있다.

적합한 음이온계 계면활성제는 특히 비누, 및 술페이트 또는 술포네이트 기를 포함하는 것들이다. 술포네이트-유형 계면활성제로는 바람직하게는 C₉-C₁₃ 알킬벤젠 술포네이트, 올레핀 술포네이트, 즉 알켄과 히드록시 알칸 술포네이트 및 디술포네이트의 혼합물, 예를 들자면 말단 또는 내부 이중 결합을 갖는 C₁₂-C₁₈ 모노올레핀을 기체성 삼산화 황을 사용하여 술폰화한 다음, 술폰화 생성물을 알칼리 또는 산 가수분해함으로써 수득되는 것들이 고려된다. 또한, 예를 들면 이후의 가수분해 또는 중화를 동반하는 술포 염소화 또는 술폭시드화에 의해 C₁₂-C₁₈ 알칸으로부터 수득되는 알칸 술포네이트가 적합하다. 또한, α-술포지방산의 에스테르 (에스테르술포네이트)가 적합한데, 예를 들면 수소화 코코야자 지방산, 팜인 지방산 또는 수지 지방산의 α-술폰화 메틸 에스테르이며, 지방산 분자에 8 내지 20개의 C 원자를 갖는 식물 및/또는 동물 기원의 지방산의 메틸 에스테르의 α-술폰화, 및 이후의 수용성 모노 염으로의 중화에 의해 제조된다. 바람직하게는, 본원에서 그것은 수소화 코코야자 지방산, 팜인 지방산 또는 수지 지방산의 α-술폰화 에스테르이며, 거기에는 불포화 지방산, 예를 들면 올레산의 술폰화 생성물도 소량, 바람직하게는 대략 2 내지 3 중량% 이하의 양으로 존재할 수 있다. 특히, 에스테르 기에 4개 이하의 C 원자를 갖는 알킬 사슬, 예를 들면 메틸 에스테르, 에틸 에스테르, 프로필 에스테르 및 부틸 에스테르를 갖는 α-술포 지방산 알킬 에스테르가 바람직하다. 특히 유리하게는, α-술포 지방산 (MES)의 메틸 에스테르는 물론, 그의 사포닌화 이염(disalt)도 사용된다. 다른 적합한 음이온계 계면활성제로는 1 내지 3 mol의 지방산과의 모노글리세롤에 의한 에스테르화에 의한 제조 동안, 또는 0.3 내지 2 mol 글리세롤과의 트리글리세리드의 에스테르화 동안 수득되는 것과 같이 모노, 디 및 트리에스테르는 물론 이들의 혼합물을 나타내는 술폰계 지방산 글리세롤 에스테르가 있다. C₁₂-C₁₈ 지방산 알콜, 예를 들면 코코넛 오일 알콜, 수지 지방 알콜, 라우릴, 미리스틸, 세틸 또는 스테아릴 알콜, 또는 C₁₀-C₂₀ 옥소알콜의 황산 세미에스테르, 및 이러한 사슬 길이의 이차 알콜의 세미에스테르의 알칼리, 특히 나트륨 염이 알킬(알케닐) 술페이트로서 바람직하다. 다른 바람직한 것으로는, 석유화학을 기반으로 제조되며 지방-화학 원료를 기반으로 하는 적정한 화합물과 유사한 분해 거동을 보유하는 합성의 직쇄 알킬 잔기를 포함하는 지명된 사슬 길이의 알킬(알케닐) 술페이트이다. 세척-관련 기술 측면의 관점에서는, C₁₂-C₁₆ 알킬 술페이트 및 C₁₂-C₁₅ 알킬 술페이트는 물론, C₁₄-C₁₅ 알킬 술페이트도 특히 바람직하다. 또한, 셸 오일 컴패니(Shell Oil Company) 사로부터 DAN®이라는 명칭하에 시중 제품으로 구입될 수 있는 2,3-알킬 술페이트가 적합한 음이온계 계면활성제이다. 역시 적합한 것은 평균 3.5 mol의 에틸렌 옥시드 (EO)를 갖는 2-메틸-분지형 C₉-C₁₁ 알콜과 같은 직-쇄 또는 분지형 C₇-C₂₁ 알콜, 또는 1 내지 4개 EO를 갖는 C₁₂-C₁₈ 지방산 알콜의 황산 모노에스테르이며, 상기 C₇-C₂₁ 알콜은 1 내지 6 mol의 에틸렌 옥시드에 의해 에톡실화되어 있다. 바람직한 음이온계 계면활성제에는 또한 술포숙시네이트 또는 술포숙신산 에스테르로도 지칭되며 알콜, 바람직하게는 지방 알콜, 특히 에톡실화 지방 알콜과의 술포숙신산의 모노에스테르 및/또는 디에스테르를 나타내는 알킬 술포숙신산의 염이 포함된다. 바람직한 술포숙시네이트는 C₈ 내지 C₁₈ 지방 알콜 잔기 또는 그들의 혼합물을 포함한다. 특히, 바람직한 술포숙시네이트는 원래 고려되었던 비-이온계 계면활성제를 나타내는 에톡실화 지방 알콜로부터 유래하는 지방 알콜 잔기를 포함한다. 다시, 그의 지방 알콜 잔기가 밀집된 상동성 분포를 갖는 에톡실화 지방 알콜로부터 유래하는 술포숙시네이트가 특히 바람직하다. 알킬(알케닐) 사슬에 바람직하게는 8 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 알킬(알케닐) 술포숙신산, 또는 그의 염을 사용하는 것 또한 마찬가지로 가능하다. 아미노산, 예를 들면 N-메틸타우린 (타우리드) 및/또는 N-메틸글리세롤 (사르코시드)의 지방산 유도체가 다른 음이온계 계면활성제로서 고려된다. 특히 바람직한 것은 사르코시드 또는 사르코시네이트, 본원에서는 특히 더 고급이며 임의적으로 단일 또는 다중 불포화인 지방산의 사르코시네이트, 예컨대 올레일 사르코시네이트이다. 특히, 비누가 다른 음이온계 계면활성제로서 고려된다. 특히, 포화 지방산 비누, 예컨대 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 수소화 에루크산 및 베헨산의 염, 특히 자연 지방산, 예를 들면 코코넛, 팜인 또는 수지 지방산으로부터 유래하는 것들, 또는 유도되는 비누 혼합물이 적합하다. 공지의 알케닐 숙신산 염들 역시 이러한 비누와 함께, 또는 비누의 대체물로서 사용될 수 있다.

나트륨, 칼륨 또는 암모늄 염은 물론, 유기 염기, 예컨대 모노-, 디- 또는 트리에탄올 아민의 가용성 염 형태인 비누를 포함한 음이온계 계면활성제들이 존재한다. 바람직하게는, 음이온계 계면활성제는 그의 나트륨 또는 칼륨 염의 형태, 특히 나트륨 염의 형태로 존재한다. 계면활성제는 보통 1 중량% 내지 50 중량%, 특히 5 중량% 내지 30 중량%의 상세한 양으로 세제 중에 함유된다.

세제는 바람직하게는 적어도 1종의 수용성 및/또는 수-불용성인 유기 및/또는 무기 빌더를 함유한다. 수용성 유기 빌더 물질에는 폴리카르복실산, 특히 시트르산 및 사카르산, 단량체성 및 중합체성 아미노 폴리카르복실산, 특히 글리신 디아세트산, 메틸글리신 디아세트산, 니트릴로트리아세트산, 이미노디숙시네이트 예컨대 에틸렌 디아민-N,N'-디숙신산 및 히드록시이미노 디숙시네이트, 에틸렌 디아민 테트라아세트산은 물론, 폴리아스파르트산, 폴리포스폰산, 특히 아미노트리스(메틸렌 포스폰산), 에틸렌 디아민 테트라키스(메틸렌 포스폰산), 리신 테트라(메틸렌 포스폰산) 및 1-히드록시에탄-1,1-디포스폰산, 중합체성 히드록시 화합물 예컨대 덱스트린은 물론, 중합체성 (폴리)카르복실산, 특히 다당류의 산화에 의해 수득가능한 폴리카르복실레이트, 중합체성 아크릴산, 메타크릴산, 말레산 및 그의 혼합 중합체가 포함되는데, 카르복실산 관능기는 거기에 중합되지 않는 작은 중합가능 물질 부분을 포함할 수도 있다. 불포화 카르복실산의 단일중합체의 상대적인 평균 분자 질량은 일반적으로 5 000 g/mol 내지 200 000 g/mol 사이이며, 공중합체의 경우에는 2 000 g/mol 내지 200 000 g/mol, 바람직하게는 50 000 g/mol 내지 120 000 g/mol이며, 매 경우 그의 유리 염 기준이다. 특히 바람직한 아크릴산-말레산 공중합체는 50 000 내지 100 000의 상대적 평균 분자 질량을 갖는다. 덜 바람직하기는 하지만 적합하게는, 이와 같은 클래스의 화합물은 산의 비율이 적어도 50 중량%인 아크릴산 또는 메타크릴산의 비닐 에테르, 예컨대 비닐메틸 에테르, 비닐 에스테르, 에틸렌, 프로필렌 및 스티렌과의 공중합체이다. 단량체로서의 2종의 불포화 산 및/또는 그의 염은 물론, 제3의 단량체로서의 비닐 알콜 및/또는 비닐 알콜 유도체 또는 탄수화물을 포함하는 삼원중합체 역시 수용성 유기 빌더로서 사용될 수 있다. 제1 산 단량체 또는 그의 염은 모노에틸렌형 불포화 C₃-C₈ 카르복실산, 바람직하게는 C₃-C₄ 모노카르복실산, 특히 (메트)아크릴산으로부터 유래한다. 제2 산 단량체 또는 그의 염은 C₄-C₈ 디카르복실산의 유도체일 수 있는데, 말레산이 특히 바람직하다. 이와 같은 경우에서, 제3 단량체 단위는 비닐 알콜 및/또는 바람직하게는 에스테르화된 비닐 알콜에 의해 형성된다. 특히, 단-쇄 카르복실산, 예를 들면 C₁-C₄ 카르복실산의 비닐 알콜과의 에스테르에 상당하는 비닐 알콜 유도체가 바람직하다. 바람직한 중합체는 60 중량% 내지 95 중량%, 특히 70 중량% 내지 90 중량%의 (메트)아크릴산 또는 (메트)아크릴레이트, 특히 바람직하게는 아크릴산 또는 아크릴레이트, 및 말레산 또는 말레이네이트는 물론, 5 중량% 내지 40 중량%, 바람직하게는 10 중량% 내지 30 중량%의 비닐 알콜 및/또는 비닐 아세테이트를 포함한다. 매우 특히 바람직한 것은 (메트)아크릴산 또는 (메트)아크릴레이트 대 말레산 또는 말레이네이트의 중량비가 1:1 내지 4:1 사이, 바람직하게는 2:1 내지 3:1, 특히 2:1 내지 2.5:1 사이인 중합체이다. 양 및 또한 중량 비 양자는 산 기준이다. 제2 산 단량체 또는 그의 염은 2 위치에서 알킬 잔기, 바람직하게는 C₁-C₄ 알킬 잔기, 또는 바람직하게는 벤젠 또는 벤젠 유도체로부터 유래하는 방향족 잔기로 치환되어 있는 알릴 술폰산의 유도체일 수도 있다. 바람직한 삼원중합체는 40 중량% 내지 60 중량%, 특히 45 내지 55 중량%의 (메트)아크릴산 또는 (메트)아크릴레이트, 특히 바람직하게는 아크릴산 또는 아크릴레이트, 10 중량% 내지 30 중량%, 바람직하게는 15 중량% 내지 25 중량%의 메탈릴 술폰산 또는 메탈릴 술포네이트, 그리고 제3 단량체로서의 15 중량% 내지 40 중량%, 바람직하게는 20 중량% 내지 40 중량%의 탄화수소를 포함한다. 이와 같은 탄화수소는 예를 들면 단당류, 이당류, 올리고당류 또는 다당류일 수 있는데, 단당류, 이당류 또는 올리고당류가 바람직하다. 사카로스가 특히 바람직하다. 예측상 약화되는 지점이 제3 단량체를 사용하여 중합체로 구성되는데, 이와 같은 지점은 중합체의 우수한 생분해성의 원인이 된다. 이러한 삼원중합체는 일반적으로 1 000 g/mol 내지 200 000 g/mol 사이, 바람직하게는 200 g/mol 내지 50 000 g/mol 사이의 상대적 평균 분자 질량을 갖는다. 다른 바람직한 공중합체는 단량체로서 아크롤레인 및 아크릴산/아크릴산 염 또는 비닐 아세테이트를 갖는 것들이다. 유기 빌더는 특히 액체 제제를 제조하는 데에 수용액의 형태, 바람직하게는 30 내지 50 중량% 수용액의 형태로 사용될 수 있다. 모든 지명된 산들은 일반적으로 그의 수용성 염, 특히 그의 알칼리 염 형태로 사용된다.

그와 같은 유기 빌더는 원할 경우 40 중량% 이하, 특히 25 중량% 이하, 바람직하게는 1 중량% 내지 8 중량%의 양으로 함유될 수 있다. 지명된 상위 한계에 가까운 양은 바람직하게는 페이스트질 또는 액체, 특히 물-함유 제제에서 사용된다.

수용성 무기 빌더 물질, 특히 폴리포스페이트, 바람직하게는 나트륨 트리포스페이트가 고려된다. 수용성 무기 빌더 물질로는, 특히 결정질 또는 무정형인 수-분산성 알칼리 알루미노실리케이트가 25 중량% 이하, 바람직하게는 3 중량% 내지 20 중량%의 양, 특히 5 중량% 내지 15 중량%의 양으로 사용된다. 세제 품질의 결정질 나트륨 알루미노실리케이트, 특히 제올라이트 A, 제올라이트 P 및 제올라이트 MAP, 그리고 임의적으로 제올라이트 X가 특히 바람직하다. 지명된 상위 한계에 가까운 양은 바람직하게는 고체 미립자 제제에서 사용된다. 적합한 알루미노실리케이트는 특히 30 ㎛를 초과하는 입자 크기를 갖는 어떠한 입자도 포함하지 않으며, 바람직하게는 적어도 80 중량% 까지 10 ㎛ 미만 크기를 갖는 입자로 구성된다. 칼슘 결합 능력은 일반적으로 그램 당 100 내지 200 mg CaO의 범위이다.

추가적으로, 또는 지명된 수-불용성 알루미노실리케이트 및 알칼리카르보네이트에 대하여 대안적으로, 다른 수용성 무기 빌더 물질이 함유될 수 있다. 여기에는 나트륨 트리포스페이트와 같은 폴리포스포네이트 이외에, 특히 수용성 결정질 및/또는 무정형 알칼리실리케이트 빌더가 포함된다. 그와 같은 수용성 무기 빌더 물질은 바람직하게는 1 중량% 내지 20 중량%, 특히 5 중량% 내지 15 중량%의 양으로 제제에 함유된다. 빌더 물질로 사용될 수 있는 알칼리실리케이트는 바람직하게는 0.95 미만, 특히 1:1.1 내지 1:12의 알칼리 옥시드 대 SiO₂ 몰비를 가지며, 무정형 또는 결정질 형태로 존재할 수 있다. 바람직한 알칼리실리케이트는 1:2 내지 1:2.8의 Na₂O:SiO₂ 몰비를 갖는 나트륨 실리케이트, 특히 무정형 나트륨 실리케이트이다. 단독으로 또는 무정형 실리케이트와의 혼합물로 존재할 수 있는 결정질 실리케이트로는 바람직하게는 일반 화학식 Na₂Si_xO_{2x +1}ㆍyH₂O의 결정질 시트 실리케이트가 사용되는데, 여기서 소위 모듈러스 x는 1.9 내지 4의 수이며, y는 0 내지 20의 수이며, x의 경우 바람직한 값은 2, 3 또는 4이다. 바람직한 결정질 시트 실리케이트는 지명된 일반 화학식에서 x가 2 또는 3의 값을 취하는 것들이다. 특히, β- 및 또한 δ-나트륨 디실리케이트 양자가 바람직하다 (Na₂Si₂O₅ㆍyH₂O). 또한, x가 1.9 내지 2.1의 수인 상기-지명된 일반 화학식의 무정형 알칼리 실리케이트로부터 제조되는 실질적으로 무수인 결정질 알칼리 실리케이트가 제제에 사용될 수 있다. 다른 바람직한 실시양태에서는, 모래 및 소다로부터 제조될 수 있기 때문에, 2 내지 3의 모듈러스를 갖는 결정질 나트륨 시트 실리케이트가 사용된다. 다른 실시양태에서는, 1.9 내지 3.5 범위의 모듈러스를 갖는 나트륨 실리케이트가 사용된다. 그러한 제제의 바람직한 실시양태에서는, 알칼리 실리케이트 및 알칼리 카르보네이트의 과립형 화합물이 사용되는데, 예를 들면 나비온(Nabion)® 15라는 명칭하에 시중에서 구입가능하기 때문이다.

표백제로는, 염소를 기재로 하는 것들, 예컨대 특히 알칼리성 히포클로라이트, 디클로로이소시아누르산 및 이들의 염, 특히 또한 과산소를 기재로 하는 것들이 고려된다. 특히, 유기 과산 또는 유기 산의 과산 염, 예컨대 프탈이미도-퍼카프로산, 퍼벤조산, 모노퍼옥시프탈산 및 디퍼도데칸산, 및 이들의 염, 예컨대 마그네슘 모노퍼옥시프탈레이트, 수소 퍼옥시드, 그리고 사용 조건하에서는 H₂O₂ 우레아 부가물과 같은 수소 퍼옥시드 포함 화합물이 그러하듯이 수소 퍼옥시드 방출 무기 염 예컨대 퍼보레이트, 퍼카르보네이트 및/또는 퍼실리케이트가 적합한 과산소 화합물로 고려된다. 수소 퍼옥시드는 효소 시스템, 즉 옥시다제 및 그의 기질을 사용하여 제조될 수도 있다. 고체 과산소 화합물이 사용될 예정인 경우, 그것은 공지의 방식으로 캡슐화되었을 수도 있는 분말 또는 과립의 형태로 사용될 수 있다. 특히 바람직하게는, 3 중량% 내지 10 중량%의 수소 퍼옥시드를 함유하는 수용액 형태의 알칼리퍼카르보네이트, 알칼리퍼보레이트-일수화물 또는 수소 퍼옥시드가 사용된다. 세제가 과산소 화합물을 함유하는 경우, 그것은 바람직하게는 25 중량% 이하, 특히 1 중량% 내지 20 중량%, 특히 바람직하게는 7 중량% 내지 20 중량%의 양으로 존재한다.

특히, 과가수분해(perhydrolysis) 조건하에서 1 내지 12개의 C 원자, 특히 2 내지 4개의 C 원자를 갖는 임의 치환 퍼벤조산 및/또는 지방족 퍼옥소카르복실산을 생성시키는 화합물이 단독 또는 혼합물로서 과가수분해 조건하에 퍼옥시카르복실산을 제공하는 표백-활성화 화합물로 사용된다. 특히 지명되는 C 원자 수의 O- 및/또는 N-아실 기 및/또는 임의 치환된 벤조일 기를 보유하는 표백 활성화제가 특히 바람직하다. 다중 아실화 알킬렌 디아민, 특히 테트라아세틸에틸렌디아민 (TAED), 아실화 글리콜우릴, 특히 테트라아세틸 글리콜우릴 (TAGU), 아실화 트리아진 유도체, 특히 1,5-디아세틸-2,4-디옥소헥사히드로-1,3,5-트리아진 (DADHT), N-아실이미드, 특히 N-노나노일숙신이미드 (NOSI), 아실화 페놀술포네이트 또는 카르복실레이트 또는 그의 술폰산 또는 카르복실산, 특히 노나노일 또는 이소노나노일 또는 라우로일옥시벤졸 술포네이트 (NOBS 또는 이소-NOBS 또는 LOBS) 또는 데카노일 옥시벤조에이트 (DOBA), 그의 일반적인 탄산 유도체 예컨대 4-(2-데카노일옥시 에톡시카르보닐옥시)-벤조술포네이트 (DECOBS), 아실화 다가 알콜, 특히 트리아세틴, 에틸렌 글리콜 디아세테이트 및 2,5-디아세톡시-2,5-디히드로퓨란은 물론, 아세틸화 소르비톨 및 만니톨 및 이들의 혼합물 (SORMAN), 아세틸화 당 유도체, 특히 펜타아세틸글루코스 (PAG), 펜타아세틸프럭토스, 테트라아세틸크실로스 및 옥타아세틸락토스, 아세틸화된 임의적 N-알킬화 글루카민 및 글루코노락톤, 및/또는 N-아세틸화 락탐, 예를 들면 N-벤조일 카프로락탐이 바람직하다.

과가수분해 조건하에서 퍼옥소카르복실산을 형성하는 화합물 이외에, 예를 들면 과가수분해 조건하에서 그로부터 퍼이미드산이 형성되는 니트릴과 같은 다른 표백-활성화 화합물도 존재할 수 있다. 여기에는 특히 하기 화학식에 따른 사차화된 수소 원자를 갖는 아미노아세토니트릴 유도체가 포함되어 사용될 수 있다:

(식 중 R¹은 -H, -CH₃, C_2-24 알킬 또는 알케닐 잔기, -Cl, -Br, -OH, -NH₂, -CN 및 -N(+)-CH₂-CN의 군에 속하는 적어도 하나의 치환체를 갖는 치환 C_1-24 알킬 또는 C_2-24 알케닐 잔기, C_1-24 알킬 기를 갖는 알킬 또는 알케닐 아릴 잔기, 또는 방향족 고리상에 적어도 하나, 바람직하게는 2개의 임의 치환 C_1-24 알킬 기(들) 및 임의적으로 추가적인 치환체들을 갖는 치환 알킬 또는 알케닐 아릴 잔기를 나타내며, R² 및 R³는 서로 독립적으로 -CH₂-CN, -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH₂-CH₂-CH₃, -CH(CH₃)-CH₃,-CH₂-OH, -CH₂-CH₂-OH, -CH(OH)-CH₃, -CH₂-CH₂-CH₂-OH, -CH₂-CH(OH)-CH₃, -CH(OH)-CH₂-CH₃, n = 1, 2, 3, 4, 5 또는 6인 -(CH₂CH₂-O)_nH로부터 선택되고, R⁴ 및 R⁵는 서로 독립적으로 이전에 R¹, R² 또는 R³에 대하여 나타낸 것과 같은 의미를 가지며, 여기서 지명된 잔기들 중 적어도 2개, 특히 역시 질소 원자 및 임의적으로 다른 헤테로원자를 포함하는 R² 및 R³는 고리-폐쇄 방식으로 서로 연결될 수 있고, 그러할 경우 바람직하게는 모르폴리노 고리를 형성하며, X는 바람직하게는 벤젠술포네이트, 톨루엔술포네이트, 큐몰 술포네이트, C_9-15 알킬벤졸 술포네이트, C_1-20 알킬술페이트, C_8-22 카르복실산 메틸에스테르 술포네이트, 술페이트, 수소술페이트 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 전하-균등화 음이온임). 또한, 산소를 전달하는 술폰이민 및/또는 아실히드라존이 사용될 수 있다.

또한, 표백-촉매촉진 전이 금속 착물의 존재가 가능하다. 그것은 바람직하게는 코발트, 철, 구리, 티타늄, 바나듐, 망가니즈 및 루테늄 착물로부터 선택된다. 그와 같은 전이 금속 착물에서는 리간드로서 무기 및 또한 유기 화합물 모두가 고려되는데, 카르복실레이트에 더하여, 특히 일차, 이차 및/또는 삼차 아민 및/또는 알콜 관능기를 갖는 화합물, 예컨대 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 2,2'-비스피리딜아민, 트리스-(2-피리딜메틸)아민, 1,4,7-트리아자시클로노난, 1,4,7-트리메틸-1,4,7-트리아자시클로노난, 1,5,9-트리메틸-1,5,9-트리아자시클로도데칸, (비스((1-메틸이미다졸-2-일)-메틸))-(2-피리딜메틸)-아민, N,N'-(비스-(1-메틸이미다졸-2-일)-메틸)-에틸렌디아민, N-비스-(2-벤즈이미다졸릴메틸)-아미노-에탄올, 2,6-비스-(비스-(2-벤즈이미다졸릴메틸)아미노메틸)-4-메틸페놀, N,N,N',N'-테트라키스-(2-벤즈이미다졸릴메틸)-2-히드록시-1,3-디아미노프로판, 2,6-비스-(비스-(2-피리딜메틸)아미노메틸)-4-메틸페놀, 1,3-비스-(비스-(2-벤즈이미다졸릴메틸)아미노메틸)-벤젠, 소르비톨, 만니톨, 에리트리톨, 아도니톨, 이노시톨, 락토스, 그리고 임의 치환된 식염수, 포르핀 및 포르피린을 포함한 화합물들이다. 무기 중성 리간드에는 특히 암모니아 및 물이 포함된다. 전이 금속 중심 원자의 모든 배위 중심이 중성 리간드에 의해 점유되어 있지는 않은 경우, 착물은 추가적인 바람직하게는 음이온성이며 그중에서도 특히 한자리 또는 두자리인 리간드를 포함한다. 여기에는 특히 할로겐화물 예컨대 플루오라이드, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드, 그리고 (NO₂)^- 기, 즉 니트로 리간드 또는 니트리토 리간드가 포함된다. 상기 (NO₂)^- 기는 또한 킬레이팅 방식으로 전이 금속에 결합될 수 있거나, 또는 비대칭 또는 ŋ¹-O 방식으로 그것이 2개의 전이 금속 원자를 가교시킬 수 있다. 지명된 리간드들 이외에, 전이 금속 착물은 일반적으로 단순하게 구성되는 리간드, 특히 일가 또는 다가 음이온 리간드를 추가적으로 보유할 수 있다. 예를 들면, 니트레이트, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 포르미에이트, 카르보네이트, 옥살레이트, 퍼클로레이트 및 착물 음이온 예컨대 헥사플루오로포스페이트가 고려된다. 음이온 리간드는 전이 금속 중심 원자와 리간드 시스템 사이의 전하 균등화를 보장하고자 하는 것이다. 또한, 옥소 리간드, 퍼옥소 리간드 및 이미노 리간드의 존재도 가능하다. 특히, 그와 같은 리간드들은 다핵 착물이 생성되는 결과를 초래할 수도 있다. 가교된 2핵 착물의 경우, 2개의 착물 중 금속 원자가 동일해야 하는 것은 아니다. 또한, 2개의 전이 금속 중심 원자가 상이한 산화수를 갖는 2핵 착물의 사용이 가능하다. 음이온 리간드가 생략되는 경우 또는 음이온 리간드의 존재가 착물에서 전하 균등화로 이어지지 않는 경우, 본 발명에 따라 사용될 전이 금속 착물 화합물에는 양이온성 전이 금속 착물을 중화하는 음이온성 상대이온이 존재한다. 이러한 음이온성 상대이온에는 특히 니트레이트, 히드록시드, 헥사플루오로포스페이트, 술페이트, 클로레이트, 퍼클로레이트, 할로겐화물 예컨대 클로라이드 또는 카르복실산의 음이온 예컨대 포르미에이트, 아세테이트, 옥살레이트, 벤조에이트 또는 시트레이트가 포함된다. 사용될 수 있는 전이 금속 착물 화합물의 예는 Mn(IV)₂(μ-O)₃(1,4,7-트리메틸-1,4,7-트리아자시클로노난)-디-헥사플루오로포스페이트, [N,N'-비스[(2-히드록시-5-비닐페닐)-메틸렌]-1,2-디아미노시클로헥산]-망가니즈-(III)-클로라이드, [N,N'-비스[(2-히드록시-5-니트로페닐)-메틸렌]-1,2-디아미노시클로헥산]-망가니즈-(III)-아세테이트, [N,N'-비스[(2-히드록시페닐)-메틸렌]-1,2-페닐렌디아민]-망가니즈-(III)-아세테이트, [N,N'-비스[(2-히드록시페닐)-메틸렌]-1,2-디아미노시클로헥산]-망가니즈-(III)-클로라이드, [N,N'-비스[(2-히드록시페닐)-메틸렌]-1,2-디아미노에탄]-망가니즈-(III)-클로라이드, [N,N'-비스[(2-히드록시-5-술포네이토페닐)-메틸렌]-1,2-디아미노에탄]-망가니즈-(III)-클로라이드, 망가니즈-옥살레이트 착물, 니트로펜타아민-코발트(III) 클로라이드, 니트리토펜타아민-코발트(III)-클로라이드, 헥사아민 코발트(III)-클로라이드, 클로로펜타아민-코발트(III)-클로라이드 및 퍼옥소-착물 [(NH₃)₅Co-O-O-Co(NH₃)₅]C_l4이다.

본 발명에 따른 라카제 이외에 제제에 사용될 수 있는 효소로는 아밀라제, 프로테아제, 리파제, 큐티나제, 풀룰라나제, 헤미셀룰라제, 셀룰라제, 옥시다제 및 퍼옥시다제 클래스, 및 이들의 혼합물에 속하는 것들이 고려된다. 또한, 본 발명에 따른 라카제 이외에, 1종 이상의 추가적인 라카제 또는 다중-구리 옥시다제의 사용이 본 발명에 따라 가능한다. 진균 또는 세균, 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실루스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실루스 렌투스(Bacillus lentus), 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus), 휴미콜라 라누지노사(Humicola lanuginosa), 휴미콜라 인솔렌스(Humicola insolens), 슈도모나스 슈도알칼리제네스(Pseudomonas pseudoalcaligenes), 슈도모나스 세파시아(Pseudomonas cepacia) 또는 코프리누스 시네레우스(Coprinus cinereus)로부터 수득되는 효소 활성 성분들이 특히 적합하다. 상기 효소들은 미성숙 불활성화로부터 그것을 보호하기 위하여 지지체상에 흡착되고/거나 고체 물질에 매립될 수 있다. 그것은 바람직하게는 5 중량% 이하, 특히 0.2 중량% 내지 4 중량%의 양으로 본 발명에 따른 세제 또는 세척제에 함유된다. 본 발명에 따른 제제가 프로테아제를 함유하는 경우, 그것은 바람직하게는 대략 100 PE/g 내지 대략 10 000 PE/g, 특히 300 PE/g 내지 8000 PE/g 범위의 단백질분해 활성을 갖는다. 본 발명에 따른 제제에 몇 가지 효소가 사용될 예정인 경우, 그것은 별도이거나 공지의 방식으로 별도로 제조되는 2종 이상의 효소, 또는 과립상으로 함께 제조되는 2종 이상의 효소를 도입하는 것에 의해 수행될 수 있다.

물 이외에, 특히 액체 또는 페이스트질 형태로 존재하는 경우에 세제에 사용될 수 있는 유기 용매로는 1 내지 4개의 C 원자를 갖는 알콜, 특히 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 및 tert-부탄올, 2 내지 4개의 C 원자를 갖는 디올, 특히 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜은 물론, 이들의 혼합물, 그리고 지명된 클래스의 화합물로부터 유래할 수 있는 에테르가 포함된다. 그와 같은 수-혼화성 용매는 바람직하게는 30 중량% 이하, 특히 6 중량% 내지 20 중량%의 양으로 본 발명에 따른 제제 중에 존재한다.

나머지 성분들을 혼합함으로써, 그 자체에 의해서는 야기되지 않는 원하는 pH를 설정하기 위하여, 본 발명에 따른 제제는 시스템-상용성이며 환경-상용성인 산, 특히 시트르산, 아세트산, 타르타르산, 말산, 락트산, 글리콜산, 숙신산, 글루타르산 및/또는 아디프산은 물론, 무기 산, 특히 황산, 또는 염기, 특히 암모늄 또는 알칼리 히드록시드를 함유할 수 있다. 그와 같은 pH 조절제는 바람직하게는 20 중량% 이하, 특히 1.2 중량% 내지 17 중량%의 양으로 본 발명에 따른 제제 중에 함유된다.

회색화 억제제는 액(liquor) 중에 부유되는 텍스타일 섬유로부터 방출되는 먼지를 유지하는 임무를 가지고 있다. 이를 위해서는, 거의 유기 특성인 수용성 콜로이드가 적합한데, 예를 들면 전분, 사이징(sizing) 물질, 젤라틴, 전분 또는 셀룰로스의 에테르카르복실산 또는 에테르술폰산의 염, 또는 셀룰로스 또는 전분의 산 황산 에스테르의 염이다. 또한, 수용성 산 기를 포함하는 폴리아미드가 이와 같은 목적에 적합하다. 또한, 상기-지명된 전분 유도체가 아닌 다른 것들, 예를 들면 알데히드 전분이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 카르복시메틸 셀룰로스 (Na 염), 메틸 셀룰로스, 히드록시알킬 셀룰로스 및 혼합 에테르 예컨대 메틸히드록시에틸 셀룰로스, 메틸히드록시프로필 셀룰로스, 메틸카르복시메틸 셀룰로스 및 이들의 혼합물과 같은 셀룰로스 에테르가 예를 들면 제제 대비 0.1 내지 5 중량%의 양으로 사용된다.

예를 들면 세제는 광학 증백제로서 디아미노스틸벤 디술폰산의 유도체 또는 그의 알칼리 금속 염을 함유할 수 있지만, 바람직하게는 컬러용 세제로 사용하기 위해서는 거기에 광학 증백제가 없다. 예를 들면, 4,4'-비스(2-아닐리노-4-모르폴리노-1,3,5-트리아지닐-6-아미노)스틸벤-2,2'-디술폰산, 또는 모르폴리노 기 대신 디에탄올 아미노 기, 메틸아미노 기, 아닐리노 기 또는 2-메톡시에틸아미노 기를 보유하는 유사한 구조 화합물의 염이 적합하다. 또한, 치환된 디페닐 스티릴 유형의 증백제, 예를 들면 4,4'-비스(2-술포스티릴)-디페닐, 4,4'-비스(4-클로로-3-술포스티릴)-디페닐 또는 4-(4-클로로스티릴)-4'-(2-술포스티릴)-디페닐의 알칼리 염이 존재할 수 있다. 또한, 상기-지명된 광학 증백제들의 혼합물이 사용될 수 있다.

특히 기계적 방법에서 사용되는 경우, 통상적인 발포 억제제를 제제에 첨가하는 것이 유리할 수 있다. 예를 들면, 높은 C₁₈-C₂₄ 지방산 비율을 갖는 자연 또는 합성 기원의 비누가 발포 억제제로서 적합하다. 적합한 비-계면활성제 발포 억제제는 예를 들면 유기폴리실록산 및 그의 초미립자와의 혼합물, 임의적으로 실란화된 규산 및 파라핀, 왁스, 미세결정질 왁스 및 그의 실란화된 규산과의 혼합물, 또는 비스 지방산 알킬렌 디아미드이다. 또한, 유리하게는, 상이한 발포 억제제들의 혼합물이 사용되는데, 예를 들면 실리콘, 파라핀 또는 왁스로부터 제조되는 것들이다. 바람직하게는, 발포 억제제, 특히 실리콘 및/또는 파라핀-함유 발포 억제제는 물에 가용성이거나 분산성인 과립형의 담체 물질에 결합된다. 특히, 파라핀과 비스테아릴에틸렌 디아미드의 혼합물이 바람직하다.

고체 제제의 제조는 어떠한 어려움도 나타내지 않으며, 예를 들면 분무-건조 또는 과립화에 의해 공지의 방식으로 이루어질 수 있는데, 효소, 및 있을 수 있는 추가적인 열적으로 민감한 성분들 예를 들자면 표백제는 임의적으로 나중에 첨가된다. 특히 650 g/l 내지 950 g/l 범위의 증가된 벌크 밀도를 갖는 제제를 제조하기 위해서는, 압출 단계를 포함하는 방법이 바람직하다.

단일상 또는 다중상이며 단색성 또는 다색성이고 특히 하나의 층 또는 다수 특히 2개의 층으로 구성되는 정제 형태로 제제를 제조하기 위해서는, 바람직하게는 모든 성분들 - 임의적으로 층 당의 것 -이 믹서에서 함께 혼합된 후, 통상적인 정제 프레스, 예를 들면 편심 프레스 또는 회전 프레스에 의해 대략 50 내지 100 kN, 바람직하게는 60 내지 70 kN 범위의 압착력으로 혼합물이 압축될 것으로 추정된다. 특히, 다층 정제에서는, 적어도 하나의 층이 예비압축되는 경우에 유리할 수 있다. 이는 바람직하게는 5 내지 20 kN, 특히 10 내지 15 kN 사이의 압착력으로 수행된다. 이와 같은 방식으로, 적용 조건하에서 충분히 빠르게 용해되는 파손-방지(break-proof) 정제가 이후 문제없이 수득되는 바, 상기 정제는 보통 100 내지 200 N, 그러나 바람직하게는 150 N 초과의 파손 강도 및 굽힘 강도를 갖는다. 바람직하게는, 이와 같은 방식으로 제조되는 정제는 10 g 내지 50 g, 특히 15 g 내지 40 g의 중량을 갖는다. 정제는 어떠한 공간적인 형태도 취할 수 있어서, 원형, 타원형 또는 사각형일 수 있으며, 중간 형태 역시 가능하다. 모서리 및 가장자리는 유리하게는 원형이다. 원형 정제는 바람직하게는 30 mm 내지 40 mm의 직경을 갖는다. 특히, 주로 세탁기 투여 장치를 통하여 도입되는 사각형 또는 다면형-설계 정제의 크기는 이러한 투여 장치의 형상구조 및 부피에 따라 달라진다. 바람직한 실시양태는 예를 들자면 (20 내지 30 mm) × (34 내지 40 mm), 특히 26 × 36 mm 또는 24 × 38 mm의 기제 표면을 갖는다.

통상적인 용매-함유 용액 형태의 액체 또는 페이스트질 제제는 일반적으로 자동 믹서에 물질 또는 용액으로 배치될 수 있는 성분들의 단순한 혼합에 의해 제조된다.

본 발명에 따른 고체 및/또는 액체 세제는 예를 들면 또한 부분 백 (바람직하게는 자가-용해), 부분 파우치, 특히 또한 다중-챔버 파우치에 포장될 수 있다. 본 발명의 의미에서, "액체"라는 용어에는 임의의 액체 중 고체 분산액도 포함된다. 본 발명에 따른 액체 제제는 다중상일 수도 있으며, 상기 상들이 예를 들면 수직이어서, 서로의 상부상에 배열되거나, 또는 수평이어서 나란할 수 있다.

[ 실시예 ]

하기 실시예로서 본 발명을 설명하는 바이나, 그를 제한하는 것은 아니다.

실시예 1:

서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 라카제의 활성 측정:

말비딘 검정: 광도측정법에 의해 라카제의 효소 활성을 측정하였다. 이를 위하여, 안토시아닌 프리물린 (말비딘-3-갈라토시드 클로라이드, CAS 번호: 30113-37-2)을 라카제 기질로 사용하였다.

시너지(Synergy) 2™ 마이크로플레이트 해독기 (바이오텍 인스트루먼츠(BioTek Instruments) GmbH 사, 독일 배드 프리드리히샬 소재)에서 흡수를 측정하였다.

기질 용액은 완충제 (0.1 M NaAc; 0.1 M 칼륨 포스페이트, pH 8) 및 31 mmol의 프리물린 (시그마(Sigma) 사)으로 구성되었다. 마이크로플레이트에서 50 μL의 라카제 샘플을 100 μL의 기질 용액에 첨가하고, 30℃에서 30분 동안 mAbs/분으로 흡수의 감소를 측정하였다. 비교용 샘플은 라카제 샘플 대신 물을 사용하여 제조하였다.

유닛으로의 전환:

효소 활성은 하기의 공식을 사용하여 계산하였다:

활성 [말비딘 mU/mL] = (μL로 나타낸 검정 총 부피 * 분 당 증가) / (mL로 나타낸 검정에서의 샘플 부피 * 16000L/mol/cm * cm로 나타낸 층 두께)

미세역가 플레이트에서의 150 μL 용량을 갖는 층 두께는 0.425 cm이었다. 음의 증가 (-Abs/분)를 양으로 전환시켰다.

이와 같은 방법을 사용하여, 실시예 2에서 사용되었던 야생형 잔류물로부터 정제된 라카제의 활성을 측정하였다.

플레우로투스 풀모나리우스-정제 야생형 잔류물의 효소 샘플은 -21.4 mAbs/분 및 그에 따른 9 말비딘 mU/mL의 활성을 나타내었다.

플레우로투스 오스트레아투스 변종 플로리다-정제 야생형 잔류물의 효소 샘플은 -20.4 mAbs/분 및 그에 따른 9 말비딘 mU/mL의 활성을 나타내었다.

렌티눌라 에도데스-정제 야생형 잔류물의 효소 샘플은 -4.5 mAbs/분 및 그에 따른 2 말비딘 mU/mL의 활성을 나타내었다.

트라메테스 종 (Tsp, DSMZ 11309)-정제 야생형 잔류물의 효소 샘플은 -29.5 mAbs/분 및 그에 따른 13 말비딘 mU/mL의 활성을 나타내었다.

ABTS 검정:

ABTS 검정을 위하여, 245 μL의 50 mM Na 아세테이트 완충제 pH 4.5를 MTP에 제공하고, 상응하는 희석제 중에서 30 μL의 5 mM ABTS 용액, 10 μL의 2 mM H₂O₂, 15 μL의 샘플을 더하였다. 420 nm, 30℃에서 10분 동안 운동학적 측정을 수행하였다. ABTS의 몰 흡광 계수를 사용하여 방출된 ABTS 라디칼의 활성을 분 및 ml 당 μmol로 계산할 수 있었다.

샘플부피: 0.015 mL, 시험 부피: 0.3 mL, eABTS = 0.0368cm2*μmol-1, 405-420 nm.

활성 [μmol*분-1*ml-1]=(((DE/분샘플-DE/분바탕)*p*R²)/(eABTS*시험 부피))*(시험 부피/샘플 부피)*희석 계수

이와 같은 방법을 사용하여, 실시예 4에서 사용된 트리코데르마에서 이종유래 방식으로 발현된 라카제를 측정하였다.

Led 유래 라카제 2359 ABTS U/mL

Ppu 유래 라카제 6152 ABTS U/mL

Tsp 유래 라카제 3142 ABTS U/mL

실시예 2:

하기의 정제된 야생형 잔류물들 중 하나를 사용하여 각각 첫 번째 미니 세척 시험을 수행하였다:

a. 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 라카제가 존재하는 플레우로투스 풀모나리우스;

b. 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 라카제가 존재하는 플레우로투스 오스트레아투스 변종 플로리다;

c. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 라카제가 존재하는 렌티눌라 에도데스;

d. 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 라카제가 존재하는 트라메테스 종 (Tsp, DSMZ 11309).

시험 조건은 하기와 같았다: 40℃, 16°dH의 물, 1시간, 라카제 농도: 1 말비딘 mU/mL.

이와 같은 시험에는, 표준화된 오염 텍스타일을 사용하였다. 하기의 불순물들을 사용하였다:

i. 커런트(Currant) CS12 [CFT (시험재료 센터(Center For Testmaterials)) B.V. 네델란드 블라르딩겐 소재]

ii. 블루베리 CS15 [CFT (시험재료 센터) B.V. 네델란드 블라르딩겐 소재]

iii. 차 EMPA 167 [EMPA: Eidgenossische Material- und Prufanstalt (EMPA) Testmaterialien AG [연방 재료 시험국, 시험재료], 스위스 St. 갈렌 소재]

펀칭 분리한 직조 직물 (직경 = 10 mm)을 미세역가 플레이트에 제공하고, 세척액을 40℃로 예비-조율하였다. 세척 매트릭스의 종말 농도는 16°dH의 물에서 4.06 g/L이었다.

다음에, 액 및 효소를 불순물에 첨가한 후, 이어서 40℃ 및 600 rpm으로 1시간 동안 인큐베이팅하였다.

이어서, 깨끗한 물로 불순물을 수회 세정하고, 건조시킨 후, 미놀타(Minolta) 색상-측정 장치 Cm700d (CIE L*a*b*, D65/10°/SCI)를 사용하여 휘도를 측정하였다.

세척 성능은 세척된 직조 직물의 휘도로 나타내었다. 직조 직물이 밝을수록세척 성능은 더 우수한 것이다. 측정된 것은 L 값 = 휘도이며, 더 높을수록 더 밝다.

세척은 효소, 광학 증백제 및 염료를 함유하지 않는 액체 세제를 사용하여 수행하였다. 조성은 실시예 3에 나타내었다.

a) 트라메테스 종 (Tsp, DSMZ 11309) 유래 라카제를 사용한 세척 시험

샘플 1: 기준으로서의 세제 단독

샘플 2: 세제 더하기 트라메테스 종 (Tsp, DSMZ 11309) 유래 라카제, 1 mU/mL

샘플 3: 세제 더하기 플레우로투스 오스트레아투스 유래 라카제 (시그마 사), 1 mU/mL

결과 (샘플 1 대 샘플 2):

라카제가 양 안토시아닌-함유 불순물 (커런트 및 블루베리)에서 우수한 성능을 나타낸다는 것을 분명하게 알 수 있었다. 차 얼룩은 다른 라카제에서 알려져 있는 바와 같이 더 진해지지는 않았으며, 오히려 유리하게도 분명하게 밝아졌다. 1 유닛부터 이미 상당한 성능 향상이 언급될 수 있는데; 여기에서는 사실상 4.9 유닛의 향상이 달성되었다.

플레우로투스 오스트레아투스 유래의 시중에서 구입가능한 라카제는 샘플 2의 라카제와 동일한 활성 수준에서 음성 대조로 사용될 수 있다.

결과 (샘플 1 대 샘플 3):

샘플 3의 세척력은 샘플 1에 비해 눈에 띄게 향상되지 않았다.

b) 플레우로투스 오스트레아투스 변종 플로리다 (Pos) 유래 라카제를 사용한 세척 시험

샘플 1: 기준으로서의 세제 단독

샘플 2: 세제 더하기 Pos 유래 라카제, 1 mU/mL

샘플 3: 세제 더하기 플레우로투스 오스트레아투스 유래 라카제 (시그마 사), 1 mU/mL

결과 (샘플 1 대 샘플 2):

라카제가 양 안토시아닌-함유 불순물 (커런트 및 블루베리)에서 우수한 성능을 나타내며, 다른 라카제에서 초래하는 바와 같은 차에서의 진해짐은 없다는 것을 분명하게 알 수 있었다. 1 유닛부터 이미 상당한 성능 향상이 언급될 수 있는데; 여기에서는 사실상 각각 3.3 및 2.4 유닛의 향상이 달성되었다.

음성 대조에 대해서는 a)를 참조하라.

c) 렌티눌라 에도데스 유래 라카제를 사용한 세척 시험

샘플 1: 기준으로서의 세제 단독

샘플 2: 세제 더하기 렌티눌라 에도데스 (Led) 유래 라카제, 1 mU/mL

샘플 3: 세제 더하기 플레우로투스 오스트레아투스 유래 라카제 (시그마 사), 1 mU/mL

결과 (샘플 1 대 샘플 2):

라카제가 양 안토시아닌-함유 불순물 (커런트 및 블루베리)에서 우수한 성능을 나타낸다는 것을 분명하게 알 수 있었다. 차 얼룩은 다른 라카제에서 알려져 있는 바와 같이 더 진해지지는 않았을 뿐만 아니라, 오히려 유리하게도 분명하게 밝아졌다. 1 유닛부터 이미 상당한 성능 향상이 언급될 수 있는데; 여기에서는 사실상 각각 4.7 및 3.4 유닛의 향상이 달성되었다.

음성 대조에 대해서는 a)를 참조하라.

d) 플레우로투스 풀모나리우스 유래 라카제를 사용한 세척 시험

샘플 1: 기준으로서의 세제 단독

샘플 2: 세제 더하기 플레우로투스 풀모나리우스 (Ppu) 유래 라카제, 1 mU/mL

샘플 3: 세제 더하기 플레우로투스 오스트레아투스 유래 라카제 (시그마 사), 1 mU/mL

결과 (샘플 1 대 샘플 2):

라카제가 양 안토시아닌-함유 불순물 (커런트 및 블루베리)에서 우수한 성능을 나타낸다는 것을 분명하게 알 수 있었다. 차 얼룩은 다른 라카제에서 알려져 있는 바와 같이 더 진해지지는 않았을 뿐만 아니라, 오히려 유리하게도 분명하게 밝아졌다. 1 유닛부터 이미 상당한 성능 향상이 언급될 수 있는데; 여기에서는 사실상 각각 2.6 및 3.3 유닛의 향상이 달성되었다.

음성 대조에 대해서는 a)를 참조하라.

실시예 3:

세제 제제:

본 제제를 실시예 2에서 사용하였다. 투여량은 69 g/17 L이었다.

실시예 4:

라운더-O-미터(launder-O-meter)에서의 세척 시험:

시험 조건은 하기와 같았다:

i. 40℃, 16°dH의 물, 1시간, 200 mL의 세척액, 10개의 강철 볼, 16.8 g의 불순물 및 결합 조직

ii. 라카제 농도: 25 ABTS U/mL

이와 같은 시험에는, 주로 주스 및 마멀레이드로부터 생성되는 자연 불순물을 사용하였다. 하기 불순물들을 사용하였다:

i. 야생 월귤나무 잼, 다르보(Darbo) 사

ii. 바젤 블랙 체리(Basel black cherry) 마멀레이드, 모벤피크(Movenpick) 사

iii. 월귤나무 주스, 라벤호스트(Rabenhorst) 사

iv. 크랜베리 주스, 라벤호스트 사

v. 프레이셀비어(Preiselbeer) 주스, 라벤호스트 사

vi. 홀룬더비어(Holunderbeer) 주스, 라벤호스트 사

vii. 블루베리 CS15, [CFT (시험재료 센터) B.V., 네델란드 블라르딩겐 소재]

면 부직 직물 (대략 5 cm 직경)상에 불순물을 적용하고, 솔질한 후, 적어도 1주 동안 저장하였다.

40℃에서 1시간 동안 라운더-o-미터를 가동시킨 후, 불순물을 물로 4× 세정한 다음, 회전 및 공기-건조하였다. 비틀어 짠 후, 미놀타 CR400-1 색상-측정 장치를 사용하여 휘도를 측정하였다. 색상 값 Y를 측정한 후, 바탕 (효소 없는 세제)과 비교하였다.

세척 시험에는, 트리코데르마에서 이종유래 방식으로 발현된 하기 3종의 라카제를 사용하였다:

a. 서열식별번호: 1의 플레우로투스 풀모나리우스 (Ppu) 유래 라카제

b. 서열식별번호: 5의 렌티눌라 에도데스 (Led) 유래 라카제

c. 서열식별번호: 7의 트라메테스 종 (Tsp) (Tsp, DSMZ 11309) 유래 라카제.

결과:

값들은 효소가 없는 세제 바탕에 대한 델타-Y를 나타낸다. 겨우 1 유닛의 변화가 상당한 향상인 것으로 간주된다.

안토시아닌을 함유하는 얼룩에서 상당한 세척 성능을 볼 수 있었다. 플레우로투스 풀모나리우스 유래 라카제가 가장 광범위한 성능 스펙트럼을 나타내었다.

SEQUENCE LISTING <110> Henkel AG & Co. KGaA. <120> Waschmittel mit verbesserter Waschleistung, enthaltend mindestens eine Laccase <130> PT033256PCT <150> DE 102015210367.6, DE 102015210369.2, DE 102015210368.4, DE 102015210370.6 <151> 2015-06-05 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 533 <212> PRT <213> Pleurotus pulmonarius <400> 1 Met Ala Val Ala Phe Ile Ala Leu Val Ser Leu Ala Leu Ala Leu Val 1 5 10 15 Arg Val Glu Ala Ser Ile Gly Pro Arg Gly Thr Leu Asn Ile Ala Asn 20 25 30 Lys Val Ile Ser Pro Asp Gly Phe Ser Arg Ser Thr Val Leu Ala Gly 35 40 45 Gly Ser Tyr Pro Gly Pro Leu Ile Lys Gly Lys Thr Gly Asp Arg Phe 50 55 60 His Ile Asn Val Val Asn Glu Leu Ala Asp Thr Ser Met Pro Ile Asp 65 70 75 80 Thr Ser Ile His Trp His Gly Leu Phe Ala Lys Gly His Asn Trp Ala 85 90 95 Asp Gly Pro Ala Met Val Thr Gln Cys Pro Ile Val Pro Gly His Ser 100 105 110 Phe Leu Tyr Glu Phe Asp Val Pro Asp Gln Ala Gly Thr Phe Trp Tyr 115 120 125 His Ser His Leu Gly Thr Gln Tyr Cys Asp Gly Leu Arg Gly Pro Leu 130 135 140 Val Ile Tyr Ser Lys Asn Asp Pro His Lys Arg Leu Tyr Asp Val Asp 145 150 155 160 Asp Glu Ser Thr Val Leu Thr Val Gly Asp Trp Tyr His Ala Pro Ser 165 170 175 Leu Ser Leu Thr Gly Val Pro His Pro Asp Ser Thr Leu Phe Asn Gly 180 185 190 Leu Gly Arg Ser Leu Asn Gly Pro Ala Ser Pro Leu Tyr Val Met Asn 195 200 205 Val Val Lys Gly Lys Arg Tyr Arg Ile Arg Leu Ile Asn Thr Ser Cys 210 215 220 Asp Ser Asn Tyr Gln Phe Ser Ile Asp Gly His Thr Phe Thr Val Ile 225 230 235 240 Glu Ala Asp Gly Glu Asn Thr Gln Pro Leu Gln Val Asp Gln Val Gln 245 250 255 Ile Phe Ala Gly Gln Arg Tyr Ser Leu Val Leu Asn Ala Asn Gln Ala 260 265 270 Val Gly Asn Tyr Trp Ile Arg Ala Asn Pro Asn Ser Gly Asp Pro Gly 275 280 285 Phe Ala Asn Gln Met Asn Ser Ala Ile Leu Arg Tyr Lys Gly Ala His 290 295 300 Ser Ile Asp Pro Thr Thr Pro Glu Gln Asn Ala Thr Asn Pro Leu Arg 305 310 315 320 Glu Tyr Asn Leu Arg Pro Leu Val Lys Lys Pro Ala Pro Gly Lys Pro 325 330 335 Phe Pro Gly Gly Ala Asp His Asn Ile Asn Leu Asn Phe Ala Phe Asp 340 345 350 Pro Ala Thr Ala Leu Phe Thr Ala Asn Asn Phe Thr Phe Val Pro Pro 355 360 365 Thr Val Pro Val Leu Leu Gln Ile Leu Ser Gly Thr Arg Asp Ala His 370 375 380 Asp Leu Ala Pro Ala Gly Ser Ile Tyr Asp Ile Lys Leu Gly Glu Val 385 390 395 400 Val Glu Ile Thr Met Pro Ala Leu Val Phe Ala Gly Pro His Pro Leu 405 410 415 His Leu His Gly His Thr Phe Ala Val Val Arg Ser Ala Gly Ser Ser 420 425 430 Thr Tyr Asn Tyr Glu Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Val Ser Ile Gly 435 440 445 Asp Asp Pro Thr Asp Asn Val Thr Ile Arg Phe Val Ala Asp Asn Ala 450 455 460 Gly Pro Trp Phe Leu His Cys His Ile Asp Trp His Leu Asp Leu Gly 465 470 475 480 Phe Ala Val Val Phe Ala Glu Gly Val Asn Gln Thr Ala Val Ala Asn 485 490 495 Pro Val Pro Glu Ala Trp Asn Asn Leu Cys Pro Leu Tyr Asn Ser Ser 500 505 510 Asn Pro Ser Lys Leu Leu Met Gly Thr Asn Ala Ile Gly Arg Leu Pro 515 520 525 Ala Pro Leu Lys Ala 530 <210> 2 <211> 1602 <212> DNA <213> Pleurotus pulmonarius <400> 2 atggcggttg cattcattgc gcttgtttca cttgccttag cactcgtacg cgtcgaggcc 60 agcatcgggc cccgcggaac gctgaacata gcgaacaaag tcatcagccc agatggattt 120 tctcgctcaa ccgtgctcgc cggtggctcc tacccgggcc cgttgatcaa ggggaagacc 180 ggtgataggt ttcatatcaa tgtcgtgaac gagctcgccg atacgtcgat gccaatcgac 240 accagtatcc actggcatgg tctcttcgcc aagggccaca attgggcaga tggccctgcc 300 atggttacgc aatgcccaat cgttccgggc cactcgtttt tgtacgaatt cgacgtccct 360 gatcaagctg gaacattttg gtatcactcc catctgggga cacagtactg tgatggactg 420 cgagggccat tggtcatcta ctcgaagaac gacccccaca agcgtttgta cgatgtcgac 480 gatgaatcca cggtgctgac cgttggtgac tggtaccacg ccccctcatt atcacttact 540 ggagtgcccc atcccgactc aacactcttc aatggcctcg gacgttccct caacggtcca 600 gcatcgccgc tatacgttat gaacgtagtc aaaggcaaac gctatcgtat tcggctcatc 660 aacacctcct gcgactccaa ctaccaattt tccattgacg gacatacctt cactgttatc 720 gaagctgatg gggagaacac acagcctctg caggtcgatc aagtgcaaat ttttgcaggc 780 cagcgctatt cgcttgtcct caacgcgaat caggcggtcg gcaactactg gatccgcgca 840 aaccccaaca gcggcgatcc cggtttcgcg aaccagatga actctgccat cctccggtac 900 aaaggcgcac acagcatcga ccccacgacc cccgagcaga acgctaccaa ccccctccgc 960 gaatacaacc tccgcccgct cgtcaagaag cccgcgccag gcaaaccatt ccccggaggc 1020 gccgaccaca acatcaacct aaacttcgct ttcgatcctg ccaccgctct gttcactgcg 1080 aacaatttca cgtttgtccc ccctactgtt ccagtattgt tgcagatctt gtcgggcaca 1140 cgcgatgcgc atgatttggc ccctgctggg tcgatttatg acattaagct aggagaagtc 1200 gttgagatca ctatgcctgc acttgtattt gctggaccac atccccttca tttacatggg 1260 cataccttcg ctgtagttcg cagtgccggc agcagcacat ataactacga gaatcccgtc 1320 cgtagagatg ttgtatccat cggtgatgac ccaacggaca acgtcaccat ccgattcgta 1380 gcagacaacg caggtccttg gttcctgcac tgccacatcg actggcatct tgacctcggc 1440 ttcgcggtcg tctttgccga aggagtaaat cagaccgcag tagccaaccc cgtacctgaa 1500 gcctggaaca acctctgccc cctatacaac agctctaacc catctaaact tctaatgggc 1560 actaatgcca ttggccgtct gcctgcgcca ctgaaggcat ga 1602 <210> 3 <211> 521 <212> PRT <213> Pleurotus ostreatus var. florida <400> 3 Met Val Leu Ser Thr Lys Leu Ala Ala Leu Val Ala Ser Leu Pro Phe 1 5 10 15 Val Leu Ala Ala Thr Lys Lys Leu Asp Phe His Ile Arg Asn Asp Val 20 25 30 Val Ser Pro Asp Gly Phe Glu Arg Arg Ala Ile Thr Val Asn Gly Ile 35 40 45 Phe Pro Gly Thr Pro Val Ile Leu Gln Lys Asn Asp Lys Val Gln Ile 50 55 60 Asn Thr Ile Asn Glu Leu Thr Asp Pro Gly Met Arg Arg Ser Thr Ser 65 70 75 80 Ile His Trp His Gly Leu Phe Gln His Lys Thr Ser Gly Met Asp Gly 85 90 95 Pro Ser Phe Val Asn Gln Cys Pro Ile Pro Pro Asn Ser Thr Phe Leu 100 105 110 Tyr Asp Phe Asp Thr Ala Gly Gln Thr Gly Asn Tyr Trp Tyr His Ser 115 120 125 His Leu Ser Thr Gln Tyr Cys Asp Gly Leu Arg Gly Ser Phe Ile Val 130 135 140 Tyr Asp Pro Asn Asp Pro Leu Lys His Leu Tyr Asp Val Asp Asp Glu 145 150 155 160 Ser Thr Ile Ile Thr Leu Ala Asp Trp Tyr His Asp Leu Ala Pro His 165 170 175 Ala Gln Asn Gln Phe Phe Gln Thr Gly Ser Val Pro Ile Pro Asp Thr 180 185 190 Gly Leu Ile Asn Gly Val Gly Arg Phe Lys Gly Gly Pro Leu Val Pro 195 200 205 Tyr Ala Val Ile Asn Val Glu Gln Gly Lys Arg Tyr Arg Phe Arg Leu 210 215 220 Ile Gln Ile Ser Cys Arg Pro Phe Phe Thr Phe Ser Ile Asp Asn His 225 230 235 240 Thr Phe Asp Ala Ile Glu Phe Asp Gly Ile Glu His Asp Pro Thr Pro 245 250 255 Ala Gln Asn Ile Asp Ile Tyr Ala Ala Gln Arg Ala Ser Ile Ile Val 260 265 270 His Ala Asn Gln Thr Ile Asp Asn Tyr Trp Ile Arg Ala Pro Leu Thr 275 280 285 Gly Gly Asn Pro Ala Gly Asn Pro Asn Leu Asp Ile Ser Leu Ile Arg 290 295 300 Ala Ile Leu Arg Tyr Lys Gly Ala Pro Ala Val Glu Pro Thr Thr Val 305 310 315 320 Ala Thr Thr Gly Gly His Lys Leu Asn Asp Ala Glu Met His Pro Ile 325 330 335 Ala Gln Glu Gly Pro Gly Asn Leu Gly Thr Gly Pro Pro Asp Met Ala 340 345 350 Ile Thr Leu Asn Ile Ala Gln Pro Asn Pro Pro Phe Phe Asp Ile Asn 355 360 365 Gly Ile Ser Tyr Leu Ser Pro Ser Val Pro Val Leu Leu Gln Met Leu 370 375 380 Ser Gly Ala Arg Lys Pro Gln Asp Phe Leu Pro Ser Glu Gln Val Ile 385 390 395 400 Ile Leu Pro Ala Asn Lys Leu Ile Glu Val Ser Ile Pro Gly Ala Gly 405 410 415 Ala His Pro Phe His Leu His Gly His Thr Phe Asp Ile Val Arg Thr 420 425 430 Ser Asn Ser Asp Val Val Asn Leu Val Asn Pro Pro Arg Arg Asp Val 435 440 445 Leu Pro Ile Asn Gly Gly Asn Thr Thr Phe Arg Phe Phe Ser Gly Asn 450 455 460 Ser Gly Ala Trp Phe Leu His Cys His Ile Asp Trp His Leu Glu Ala 465 470 475 480 Gly Leu Ala Val Val Phe Ala Glu Arg Pro Ala Glu Val Asn Glu Gly 485 490 495 Glu Gln Ala Gln Ile Val Thr Gln Asp Trp Arg Thr Leu Cys Pro Ala 500 505 510 Tyr Asp Gly Leu Ala Pro Glu Phe Gln 515 520 <210> 4 <211> 1566 <212> DNA <213> Pleurotus ostreatus var. florida <400> 4 atggtgctct ctactaagct cgctgctctt gtggcttcgc tccccttcgt tcttgctgcg 60 acgaagaaac ttgacttcca cattcgaaac gacgttgtct caccagacgg cttcgagcgc 120 agggcgatca cagtcaatgg catcttccct gggacgcccg ttatactgca gaagaacgac 180 aaggtccaga tcaatactat caatgaactg acggaccctg gcatgcgtcg cagtacctcc 240 atccattggc acggtttatt ccaacataaa acctccggca tggacgggcc ttctttcgtt 300 aaccagtgcc cgattccccc caactctact ttcctttacg acttcgatac cgcaggacag 360 actggaaact actggtacca ctcccacttg tctacgcaat attgcgacgg tcttcgtggt 420 tctttcatcg tttatgatcc caatgatcct ctgaagcacc tgtacgatgt tgatgatgag 480 agcaccatca tcaccctggc agattggtat catgaccttg ctccccacgc tcaaaaccag 540 ttcttccaaa ctggttcggt cccgattccc gacactggcc tgatcaacgg tgttggacga 600 ttcaagggcg gtcctcttgt cccttacgcc gtcatcaacg ttgagcaggg caagcgatac 660 agattccgcc tcatccagat ttcatgtcgt cccttcttca ccttctctat tgacaaccac 720 acattcgatg caattgaatt cgacggcata gagcacgacc cgacacccgc ccagaacatt 780 gatatctatg ctgctcaacg tgcatccatc atcgtccacg ccaaccagac catcgacaac 840 tactggatcc gtgcgccact cacaggggga aaccccgcag gtaaccctaa cctggacata 900 tcgttgatca gggccatcct tcgttacaag ggtgctcccg ctgtcgagcc caccacagtt 960 gcgactactg gaggccacaa gctcaatgat gccgagatgc acccaattgc tcaggaaggt 1020 cccggaaact tgggcaccgg ccccccagac atggccatca ccttgaacat cgcccagccg 1080 aaccctccat tcttcgatat caacggcatt tcgtatctct ctccttcggt tccagtgttg 1140 ctccagatgc ttagcggtgc tcgcaaacca caagacttcc tgccatcgga acaagtcatc 1200 atcttgcccg ccaacaagct cattgaagtc tctatacccg gtgccggcgc gcatcctttc 1260 catttgcacg gtcatacctt cgacattgtc cgcacttcga atagcgacgt cgtgaacctt 1320 gtcaacccac cgcgtcgcga cgtattgcct atcaacggtg gaaacacaac attccgtttc 1380 ttctctggca actccggtgc atggttcctc cattgccata ttgactggca tcttgaagct 1440 ggtctcgctg ttgtcttcgc ggaacgacct gctgaagtga acgagggcga acaggctcag 1500 atcgtcaccc aagactggag gacgctttgc ccagcttatg atggcctcgc tcccgagttc 1560 cagtaa 1566 <210> 5 <211> 515 <212> PRT <213> Lentinula edodes <400> 5 Met Gly Phe Gln Ser Phe Thr Ser Leu Leu Ser Leu Val Ala Leu Val 1 5 10 15 Pro Ser Ala Phe Ala Val Leu Glu Thr Thr Gly Asp Leu Val Ile Ser 20 25 30 Asn Ala Ala Val Ser Pro Asp Gly Phe Ser Arg Thr Ala Val Leu Ala 35 40 45 Gly Gly Gly Val Val Gly Glu Leu Val Thr Gly Asn Lys Gly Asp Asn 50 55 60 Phe Gln Ile Asn Val Val Asn Glu Leu Thr Asp Asp Thr Met Leu Arg 65 70 75 80 Ser Thr Thr Val His Trp His Gly Ile Phe Gln Glu Gly Thr Asn Trp 85 90 95 Ala Asp Gly Pro Ala Phe Ile Asn Gln Cys Pro Ile Ala Ala Asn Asn 100 105 110 Ser Phe Leu Tyr Asp Phe Thr Val Ser Asp Gln Ala Gly Thr Phe Trp 115 120 125 Tyr His Ser His Leu Ala Thr Gln Tyr Cys Asp Gly Leu Arg Gly Pro 130 135 140 Met Val Ile Tyr Asp Pro Asp Asp Pro Tyr Ala Asp Leu Tyr Asp Val 145 150 155 160 Asp Asp Asp Thr Thr Ile Ile Ser Leu Met Asp Trp Tyr His Ala Lys 165 170 175 Ala Glu Thr Leu Thr Phe Pro Ala Pro Asp Ala Thr Leu Ile Asn Gly 180 185 190 Leu Gly Arg Tyr Ser Gly Gly Asn Ala Thr Asp Leu Ala Val Ile Thr 195 200 205 Val Thr Ser Gly Thr Arg Tyr Arg Phe Arg Leu Ile Asn Leu Ala Cys 210 215 220 Asp Pro Asn Phe Val Phe Ser Ile Asp Asn His Thr Met Thr Val Ile 225 230 235 240 Glu Val Asp Gly Val Asn His Glu Gln Leu Val Val Asp Ser Ile Gln 245 250 255 Ile Phe Ala Ala Gln Arg Tyr Ser Phe Ile Leu Glu Ala Asn Gln Ser 260 265 270 Val Asp Asn Tyr Trp Ile Arg Ala Asp Pro Ser Thr Gly Thr Ala Gly 275 280 285 Tyr Thr Gly Gly Ile Asn Ser Ala Ile Leu Arg Tyr Ser Gly Ala Ala 290 295 300 Asp Ser Glu Pro Gly Thr Pro Ala Val Thr Ser Val Leu Ala Leu Asn 305 310 315 320 Glu Thr Gln Leu Val Pro Leu Glu Asn Pro Gly Ala Pro Gly Glu Pro 325 330 335 Glu Val Gly Gly Val Asp Tyr Ala Leu Asn Leu Ala Met Ala Phe Thr 340 345 350 Gly Thr Ala Phe Thr Ile Asn Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Pro Thr Val 355 360 365 Pro Val Leu Leu Gln Ile Leu Ser Gly Ala Glu Thr Ala Asp Ser Leu 370 375 380 Leu Pro Thr Gly Ser Val Tyr Ser Leu Pro Thr Asn Ser Thr Ile Glu 385 390 395 400 Ile Ser Ile Pro Ser Gly Gly Leu Ala Gly Phe Pro His Pro Phe His 405 410 415 Leu His Gly His Thr Phe Asp Val Val Arg Ser Ala Gly Ser Thr Thr 420 425 430 Tyr Asn Tyr Val Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Val Ser Thr Gly Ala 435 440 445 Ala Gly Asp Asn Val Thr Ile Arg Phe Thr Thr Asp Asn Ala Gly Pro 450 455 460 Trp Phe Leu His Cys His Ile Asp Trp His Leu Glu Ala Gly Leu Ala 465 470 475 480 Ile Val Phe Ala Glu Asp Val Ala Asp Trp Asn Thr Thr Gln Thr Pro 485 490 495 Ser Thr Ala Trp Asp Asp Leu Cys Pro Ile Tyr Asp Ala Leu Ser Ala 500 505 510 Asp Gln Leu 515 <210> 6 <211> 1548 <212> DNA <213> Lentinula edodes <400> 6 atgggctttc aatcttttac ctccctcctt tcactggtcg cacttgttcc gtcagctttt 60 gctgtcctgg aaacaactgg tgacctcgtc atttccaacg ctgcagtcag ccccgatggt 120 ttcagccgta ccgctgtcct tgctggcggt ggggtcgtag gtgaacttgt cacaggaaac 180 aagggcgata acttccaaat caatgttgtg aacgagttga cggacgatac catgttgcga 240 tctacaaccg tccattggca cggcatcttc caagagggaa ccaattgggc tgatggacct 300 gcattcatca atcagtgtcc catagcagca aacaactcct tcttatacga cttcaccgtt 360 tctgatcaag cagggacatt ttggtatcac agccatctcg cgacgcaata ttgcgatggt 420 cttcgaggtc ctatggtcat ctatgatcct gatgatcctt atgcggactt gtacgatgtt 480 gacgacgaca ccaccattat cagtctcatg gattggtatc acgcaaaggc tgaaactctc 540 accttcccgg ctccggatgc taccttaatc aacggtcttg gacgttactc tggaggtaat 600 gccactgatt tggctgtcat cacagtgact tcagggactc gataccgatt ccgcttaatt 660 aatttggctt gtgatcccaa cttcgtgttc agcattgata atcatacgat gactgtcatc 720 gaagtagatg gagtcaacca cgagcaatta gtcgttgatt ctatccagat tttcgctgcc 780 caacgatact cattcattct tgaagctaat caatccgtgg acaattattg gattcgcgcg 840 gacccctcaa ccggtaccgc tggatataca ggagggatca attctgccat tctgcgatac 900 agtggagccg ccgacagtga gcctggaact ccggcagtta caagtgttct ggctctaaac 960 gaaactcagc ttgtgccttt ggaaaaccct ggtgctccag gagaacctga agtaggaggc 1020 gtagattatg ctttaaatct ggctatggca tttactggaa cggctttcac tatcaatggc 1080 tatagcttta cttcaccgac ggtacccgtc ttgcttcaaa tcctcagcgg tgcggaaacg 1140 gccgattcgc ttttgcctac ggggtctgtt tactccttgc ccaccaactc gaccatcgag 1200 atttctattc cttctggagg acttgccggt ttccctcacc ccttccatct tcacggtcat 1260 accttcgatg ttgtgcgcag tgctggtagt acgacctata actacgtcaa cccggtccgt 1320 cgagatgtcg tcagcactgg agccgccggg gacaatgtaa caatccgttt cactacagat 1380 aacgcgggtc cttggttcct tcactgccac attgactggc atttggaggc cggtcttgcc 1440 attgtctttg ctgaagatgt tgccgattgg aacactaccc agactccctc cactgcttgg 1500 gatgatctgt gccccatcta cgacgctctt tctgctgacc aactttga 1548 <210> 7 <211> 520 <212> PRT <213> Trametes species (Tsp, DSMZ 11309) <400> 7 Met Ser Arg Phe Gln Ser Leu Leu Ala Phe Val Val Ala Ser Leu Ala 1 5 10 15 Ala Val Ala His Ala Ala Ile Gly Pro Thr Ala Asp Leu Thr Ile Ser 20 25 30 Asn Ala Glu Val Ser Pro Asp Gly Phe Ala Arg Gln Ala Val Val Val 35 40 45 Asn Asn Val Thr Pro Gly Pro Leu Val Ala Gly Asn Lys Gly Asp Arg 50 55 60 Phe Gln Leu Asn Val Ile Asp Asn Leu Thr Asn His Thr Met Leu Lys 65 70 75 80 Ser Thr Ser Ile His Trp His Gly Phe Phe Gln Lys Gly Thr Asn Trp 85 90 95 Ala Asp Gly Pro Ala Phe Val Asn Gln Cys Pro Ile Ser Ser Gly His 100 105 110 Ser Phe Leu Tyr Asp Phe Gln Val Pro Asp Gln Ala Gly Thr Phe Trp 115 120 125 Tyr His Ser His Leu Ser Thr Gln Tyr Cys Asp Gly Leu Arg Gly Pro 130 135 140 Phe Val Val Tyr Asp Pro Asn Asp Pro His Ala Ser Leu Tyr Asp Val 145 150 155 160 Asp Asn Asp Asp Thr Val Ile Thr Leu Ala Asp Trp Tyr His Thr Ala 165 170 175 Ala Lys Leu Gly Pro Ala Phe Pro Leu Gly Ala Asp Ala Thr Leu Ile 180 185 190 Asn Gly Leu Gly Arg Ser Pro Ser Thr Thr Ala Ala Asp Leu Ala Val 195 200 205 Ile Asn Val Thr Lys Gly Lys Arg Tyr Arg Phe Arg Leu Val Ser Leu 210 215 220 Ser Cys Asp Pro Asn His Thr Phe Ser Ile Asp Gly His Asp Leu Thr 225 230 235 240 Ile Ile Glu Val Asp Ser Ile Asn Ser Gln Pro Leu Val Val Asp Ser 245 250 255 Ile Gln Ile Phe Ala Ala Gln Arg Tyr Ser Phe Val Leu Asn Ala Asp 260 265 270 Gln Asp Val Gly Asn Tyr Trp Ile Arg Ala Asn Pro Asn Phe Gly Asn 275 280 285 Val Gly Phe Ala Gly Gly Ile Asn Ser Ala Ile Leu Arg Tyr Asp Gly 290 295 300 Ala Asp Pro Val Glu Pro Thr Thr Thr Gln Thr Thr Pro Thr Lys Pro 305 310 315 320 Leu Asn Glu Val Asp Leu His Pro Leu Ala Thr Met Ala Val Pro Gly 325 330 335 Ser Pro Val Ala Gly Gly Val Asp Thr Ala Ile Asn Met Ala Phe Asn 340 345 350 Phe Asn Gly Thr Asn Phe Phe Ile Asn Gly Ala Ser Phe Val Pro Pro 355 360 365 Thr Val Pro Val Leu Leu Gln Ile Ile Ser Gly Ala Gln Asn Ala Gln 370 375 380 Asp Leu Leu Pro Ser Gly Ser Val Tyr Ser Leu Pro Ala Asn Ala Asp 385 390 395 400 Ile Glu Ile Ser Phe Pro Ala Thr Ala Ala Ala Pro Gly Ala Pro His 405 410 415 Pro Phe His Leu His Gly His Ala Phe Ala Val Val Arg Ser Ala Gly 420 425 430 Ser Thr Val Tyr Asn Tyr Asp Asn Pro Ile Phe Arg Asp Val Val Ser 435 440 445 Thr Gly Thr Pro Ala Ala Gly Asp Asn Val Thr Ile Arg Phe Arg Thr 450 455 460 Asp Asn Pro Gly Pro Trp Phe Leu His Cys His Ile Asp Phe His Leu 465 470 475 480 Glu Ala Gly Phe Ala Val Val Phe Ala Glu Asp Ile Pro Asp Val Ala 485 490 495 Ser Ala Asn Pro Val Pro Gln Ala Trp Ser Asp Leu Cys Pro Ile Tyr 500 505 510 Asp Ala Leu Asp Val Asn Asp Gln 515 520 <210> 8 <211> 1563 <212> DNA <213> Trametes species (Tsp, DSMZ 11309) <400> 8 atgtcgaggt ttcagtctct gctcgccttc gtcgtcgcct ccctcgcggc tgtggcccat 60 gccgccattg ggcccaccgc tgacctcacc atctccaatg ccgaggtcag ccccgatggg 120 ttcgctcgtc aggctgtggt tgtcaacaat gttaccccag gacccctcgt cgcgggcaac 180 aagggtgacc gcttccaact caatgtcatc gacaacctca cgaaccacac tatgctgaag 240 agcacgagta ttcactggca tggcttcttc cagaagggga caaactgggc tgatggtccc 300 gcgtttgtga accagtgccc tatttcctct gggcactcgt tcctctacga tttccaggtt 360 cccgaccagg ccggtacctt ctggtaccac agccacttgt ccactcagta ctgtgacggc 420 ctgcggggtc ctttcgttgt gtacgatccc aatgacccgc acgcgagctt gtatgacgtc 480 gacaatgacg acaccgtgat caccctcgcg gattggtacc acactgccgc gaagctcggc 540 cccgcgttcc cactgggcgc ggatgctacc cttatcaacg ggctcgggcg ctcccccagc 600 accacggcgg cggacctcgc ggtcatcaac gtcacgaagg gtaaacgcta ccgtttccgc 660 ctggtttccc tgtcgtgtga ccccaaccac acgttcagca tcgatggtca tgacttgacg 720 atcatcgagg tggactccat caattcccaa cctctggtgg ttgactccat ccagattttc 780 gctgcgcagc ggtactcctt tgtgttgaat gccgatcagg acgtcgggaa ctactggatt 840 cgcgccaacc ccaactttgg caacgtcgga tttgcggggg gtatcaactc ggccatcctg 900 cgctatgacg gcgccgaccc ggttgagccc accacgactc agactacgcc gaccaagccc 960 ctgaacgagg tcgacttgca cccgctcgcc accatggctg tgcccggctc cccggtcgca 1020 ggtggtgttg acacggctat caacatggcc ttcaacttta acggtaccaa ctttttcatc 1080 aacggcgcga gctttgtgcc ccccaccgtg ccggtcctgc tccagatcat cagcggcgcc 1140 caaaacgccc aggatctcct cccgtctggc agcgtctact ccctcccggc gaacgcggac 1200 atcgagatct cgttccctgc taccgcggct gctccgggtg cccctcaccc cttccacttg 1260 cacggtcacg ccttcgccgt cgttcgcagc gctggcagca ccgtctacaa ctacgacaac 1320 cccatcttcc gcgacgtcgt cagcacgggg acgcctgcgg ccggtgacaa cgtcaccatc 1380 cgcttccgca ccgacaaccc cggtccgtgg ttcctccact gccacatcga cttccacctc 1440 gaggccggct tcgcggtcgt gttcgcggag gacatccccg acgtcgcgtc ggcgaaccct 1500 gtccctcagg cgtggtctga tctgtgcccc atctacgacg cgctcgatgt caacgaccag 1560 tag 1563

Claims (8)

1. 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 1에 표시되어 있는 아미노산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 라카제.
2. 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐, 서열식별번호: 2에 표시되어 있는 핵산 서열과 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일한 핵산 서열에 의해 코딩되는 것을 특징으로 하는 라카제.
3. 제1항 또는 제2항에 따른 적어도 1종의 라카제를 함유하는 세제.
4. 제3항에 있어서, 적어도 1종의 라카제의 농도가 활성 단백질에 대하여 0.001 내지 0.15 중량%, 바람직하게는 0.005 내지 0.06 중량%인 것을 특징으로 하는 세제.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 5℃ 내지 95℃, 바람직하게는 20℃ 내지 60℃, 특히 바람직하게는 30℃ 내지 40℃의 온도 범위에서 바람직하게 사용될 수 있는 것을 특징으로 하는 세제.
6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시, 1-히드록시벤조트리아졸, 2,2'-아지노비스-3-에틸벤즈티아졸-6-술포네이트, N-히드록시-아세트아닐리드, 2,5-크실리딘, 에탄올, 구리, 4-메틸카테콜, N-히드록시프탈이미드, 갈산, 탄닌산, 퀘르세틴, 시린지산, 구아이아콜, 디메톡시벤질 알콜, 페놀, 비올루르산, 페놀 레드, 브로모페놀 블루, 셀룰로스, p-쿠마르산, 루이보스, o-크레졸, 디클로로인도페놀, 히드록시벤조트리아졸, 시클로헥스이미드 또는 바닐린으로부터 선택되는 추가적인 매개체를 함유하는 것을 특징으로 하는 세제.
7. 특히 착색 얼룩 및 불순물을 제거하는 경우, 특히 바람직하게는 안토시아닌을 함유하는 불순물을 제거하는 경우 세제의 세척력을 향상시키기 위한, 제1항 또는 제2항에 따른 라카제의 용도.
8. 제1항 또는 제2항에 따른 적어도 1종의 라카제를 함유하는 계면활성제 함유 용액이 사용되는 것을 특징으로 하는, 계면활성제 함유 수용액에서의 텍스타일의 세척 방법.