KR20170109812A - 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 사비넨(sabinene)을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 자연치아 및 인공치아에서 치면세균막 형성 원인균을 억제하는 것을 특징으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 상기 사비넨이 S. mutans 5×10⁵ CFU/ml/dish 기준으로 0.025 ~ 0.2 mg/ml 처리되되, 그 함량이 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml 및 0.4 mg/ml 중 어느 하나인 것을 기술적 특징으로 한다.

Description

사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물{ANTIMOCROBIAL DRUG COMPOSITION AGAINST PATHOGRN OF DENTAL PLAQUE FARMATION CONTAINING SABINENE}

본 발명은 사비넨(sabinene)을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 자연치아 및 인공치아에서 치면세균막 형성 원인균을 억제하는 것을 특징으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 상기 사비넨이 S. mutans 5×10⁵ CFU/ml/dish 기준으로 0.025 ~ 0.2 mg/ml 처리되되, 그 함량이 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml 및 0.4 mg/ml 중 어느 하나인 것을 기술적 특징으로 한다.

사람의 입안에는 무수히 많은 세균들이 서식하며 이 세균들이 치아 표면에 침과 같은 타액과 엉겨 붙으면서 끈끈한 막을 형성하게 되는데 이를 치면세균막 또는 바이오필름(biofilm)이라고 한다.

상기 바이오필름은 치아 표면뿐만 아니라 주변 조직이나 보철물, 교정장치에서도 발생하는데 이러한 바이오필름이 형성되면 내부에서 세균들이 번식하고 음식물 찌꺼기에서 나오는 당분에 의하여 그 수가 증가한다. 또한, 음식물 찌꺼기들을 분해하면서 발생하는 산성 물질은 치아 표면을 부식시켜 치아우식증과 같은 구강질환을 유발하게 된다.

이에 따라 구강 세균의 바이오필름 형성을 방지하기 위한 방안이 지속적으로 연구되어 왔으며, 바이오필름의 형성을 방지하기 위한 기존의 방안으로써, 양치, 스케일링 및 구강청결제 사용 등의 요법을 들 수 있다.

양치는 세균의 증식을 억제하는 물질이 함유된 약제인 치약을 묻힌 솔로 치아 표면의 바이오필름을 긁어내는 원리이며, 스케일링은 초음파 기구 등을 사용하여 치아 표면의 바이오필름을 긁어내는 원리이다. 또한 구강청결제는 세균의 증식을 억제하는 물질이 함유된 구강청결제를 구강 내에 일정 시간 머금어 구강을 세정하는 원리이다.

그러나 이러한 요법들에는 부작용이 있는데, 양치 및 스케일링은 부주의하게 실행하였을 시 잇몸에 출혈 및 상처가 생기거나 치아가 시린 느낌이 들 수 있다. 또한 구강청결제는 과다하게 사용하였을 시 우세하게 분포하는 구강 세균뿐만 아니라 모든 구강 세균이 살균된다. 따라서 구강 내 세균 분포의 균형이 무너져 구강 내의 면역력이 감소되어 구강건조증 등의 질환이 유발될 수 있다.

또한 상기 요법들은 구강 세균을 정균 또는 살균하여 구강 세균이 바이오필름을 형성하는 것을 방지하는 것으로서, 구강 세균의 독력인자를 근원적으로 불활성화하거나 구강 세균의 분포 균형을 유지하며 구강질환을 치료하는 요법은 없는 실정이다.

이에 본 출원인은 편백 에센셜오일의 주요 성분 중 하나인 사비넨(sabinene)을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물을 제조하여 구강 세균이 바이오필름을 형성하는 것을 방지함과 동시에 구강 세균을 정균 또는 살균하지 않음으로써 구강 세균의 분포 균형을 유지하는 편백 오일을 제공할 수 있다고 판단하여, 본 발명을 안출하였다.

이하, 본 발명과 관련된 선행기술에 대하여 간략하게 살펴본다. 등록특허공보 제10-1312257호에는 수용성 진주분말을 포함하는 잇몸도포제에 대해 기재되어 있다.

상기 기술의 청구항 1을 살펴보면, "수용성 진주가루, 편백오일, 강황추출물, 카바추출물, 산뽕나무추출물 및 판테놀을 포함하는 수용성 진주분말을 포함하는 잇몸도포제에 있어서, 상기 잇몸도포제의 조성비율은 수용성 진주가루 30~40 중량부에 대하여, 편백오일 10~15 중량부, 강황추출물 5~10 중량부, 카바추출물 10~15 중량부, 산뽕나무추출물 10~15 중량부, 판테놀 5~10 중량부인 것을 특징으로 하는 수용성 진주분말을 포함하는 잇몸도포제"라고 기재되어 있다.

그러나 상기 기술은 구강 세균을 저해하는 실험예가 기재되어 있지 않아 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물의 구강 세균 저해능을 전혀 도출할 수 없다.

등록특허공보 제10-1312257호(2013.09.25.)

본 발명의 목적은, 자연치아 및 인공치아에서 치면세균막 형성 원인균을 억제하는 것을 특징으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 목적은 구강 상태 개선을 위한 치약, 세정제(가글 등) 및 탈취제(구강 탈취용품 등) 등과 같은 기능성 제품을 제조하는 데 있다.

본 발명은, 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 사비넨이 S. mutans 5×10⁵ CFU/ml/dish 기준으로 0.025 ~ 0.2 mg/ml 처리되되, 그 함량이 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml 및 0.4 mg/ml 중 어느 하나인 것을 기술적 특징으로 하는, 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 사비넨이 S. mutans 5×10⁵ CFU/ml/dish 기준으로 0.025 ~ 0.2 mg/ml 처리되되, 그 함량이 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml 및 0.4 mg/ml 중 어느 하나의 것을 사용함으로써, 바이오필름을 형성하는 S. mutans 균을 억제할 수 있는 효과를 보유한다.

또한 본 발명은, 상술된 효과를 인공치와 자연치 모두에서 유효하여 S. mutans 균의 바이오필름 형성을 억제할 수 있는 효과를 보유한다.

도 1은 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에서 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 흡광도를 측정한 결과와 대조군을 기준으로 한 상대성장률을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에서 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을 시의 바이오필름 억제 효능을 나타낸 사진이다.
도 3은 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에서 각각 다른 방법으로 제조된 sabinene을 S. mutans에 처리한 후 인공치에 도포하였을시의 바이오필름 억제 효능을 나타낸 사진이다.
도 4는 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에서 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 바이오필름 형성 억제 효능을 SEM으로 관찰한 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에서 Confocal laser Microscopy를 이용하여 S. mutans 살균 효능을 측정한 결과이다.
도 6은 본 발명에 따른 사비넨을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물에서 sabinene을 S. mutans에 sub-minimal inhibitory concentration(sub-MIC) 이하의 농도(0.05~0.2 mg/ml)로 처리한 후 구강세균의 독력인자 발현을 real-time PCR을 이용하여 관찰한 결과를 나타낸 그래프이다.

본 명세서 및 청구 범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참조예 및 도면에 기술된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

설명에 앞서, 본 발명에서 사용되는 sabinene은 편백오일에 19% 정도 함유되어 있고 피부의 섬유아세포의 콜라겐 총량을 증가시켜 피부의 재생을 촉진시키며 자유 라디칼(활성산소)을 소고하여 항산화효과를 나타낸다. 또한, 산화질소 생성을 억제하여 항염증 또는 피부미백에 탁월하다고 알려져있다.

이에 본 연구에서는 편백오일에 함유된 sabinene을 유효성분으로 함유하는 치면세균막 형성의 중요한 원인균인 S. mutans의 구강세균 성장 및 산 생성 억제, 바이오필름 형성 억제효능 및 독성유전자 발현 등을 관찰하였다.

실시예 1. 편백오일에서 sabinene의 분리

편백오일에 함유된 sabinene을 물, 에탄올 또는 메탄올 또는 기타 유기용매를 이용하여 추출 또는 분획추출한 후에 sabinene를 분리 동정한다. 추출 용매의 종류에 따라 추출 온도, 추출 시간, 용매의 양 및 잔류성분 처리 방식 등을 달리하여 처리한다.

한편, 상술된 실시예 1에 비롯한 sabinene을 통해 구강 상태 개선을 위한 기능성 제품을 제조할 수 있는데, 여기서 기능성 제품은 구강 상태 개선을 위한 치약, 세정제(가글 등) 및 탈취제(구강 탈취용품 등) 등과 같이 통상의 기술자에 의해 도출될 수 있는 모든 제품을 의미한다.

또한 구강 상태 개선이라 함은, 상술된 제품에 효능이 유효하여 구강의 상태를 개선할 수 있는 의미와 더불어, 원인균(S. mutans)에 대한 항균 작용으로 형성을 억제하여 바이오필름(치면세균막)의 형성을 억제할 수 있는 의미를 포함한다.

이때 sabinene의 바람직한 농도는 아래 실험예들을 통해 후술하겠지만, 개략적으로 정리하여 보면, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4 mg/ml 중 하나일 수 있다.

구체적인 사항은 실험예 1 내지 5를 통해 설명한다.

실험예 1. sabinene의 구강세균 성장 및 산 생성 억제 효능

(1) 실험준비

S. mutans ATCC 25175 균주를 준비하여, Brain heart infusion (BHI, Difco, USA) 액체배지에 1~2차 계대배양 후 같은 배지에 식균하고, 37의 항온기에서 24시간 배양하였다.

(2) 실험과정

1%의 glucose가 들어있는 BHI 액체배지에 sabinene을 첨가한 후 균을 110⁸CFU/ml이 되게 접종하였다. 37°C의 항온기에서 24시간 배양한 후 BHI 액체배지를 기준으로 ELISA reader(Molecular Decives Co. CF. U.S.A)를 이용하여 pH를 측정하여 산 생성 억제 효과를 관찰하였다. 대조군은 목향 추출물을 넣지 않고 시행하였다.

(3) 실험결과

도 1은 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 흡광도를 측정한 결과와 대조군을 기준으로 한 상대성장률을 나타낸 것이다.

도 1을 참조하여 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 바이오필름 억제 효능을 관찰한 결과, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4 mg/ml로 증가함에 따라 바이오필름 형성율이 감소함을 알 수 있었다.

하기의 [표 1]은 sabinene 첨가에 따른 S. mutans에 의한 유기산 생성 억제 효과를 나타낸 것이다.

Conc.(ug/ml)	pH(before incubation)	pH(after incubation)
Control	7.07±0.05	5.93±0.05*
0.05	7.13±0.05	5.30±0.17
0.1	7.10±0.00	5.93±0.30
0.2	7.17±0.05	6.70±0.17
0.4	7.10±0.00	6.60±0.17
NaF (0.1%)	7.07±0.05	6.87±0.05*

[표 1]을 참조하여 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 유기산 생성 억제 효능을 관찰한 결과, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4 mg/ml로 증가함에 따라 유기산 생성억제 효과를 보였다.

세균을 접종하지 않은 배양액의 pH는 약 7.07이나 세균만을 접종한 대조군에서는 pH가 5.93까지 떨어졌다. sabinene을 첨가한 실험군에서는 농도 의존적으로 pH의 강하가 억제되는 것을 관찰할 수 있었다.

이로써, sabinene은 농도의존적으로 구강 세균의 증식을 저해하고 구강 세균의 유기산 생성을 억제하는 것을 알 수 있다.

실험예 2. sabinene의 구강세균 바이오필름 형성 억제 효능

(1) 실험 과정

35mm 디쉬에 BHI 액체배지와 sabinene을 첨가한 후 510⁶CFI/ml/dish 접종하였다.

S. mutans를 37 incubator에서 24시간 배양한 후 상청액을 모두 제거하고, 각각의 디쉬에 증류수를 1.5ml씩 넣어 워싱하였다.

0.1%의 사프라닌 스테인(safranin stain)으로 30초 동안 염색한 후, 증류수로 두 번 세척하고 건조하여 사진 촬영하였다.

30% 아세트산으로 사프라닌 스테인을 용해시켜 96 웰 플레이트(well plate)에 100씩 분주 후 ELISA reader(Molecular Devices CO., CF., U.S.A.)를 이용하여 530 nm에서 흡광도를 측정하였다.

편의상 각 실험군들을 A, B, C, D, E 및 F의 6개 군으로 임의분류하였다. (A : 대조군, B : sabinene 0.05 mg/ml 처리군, C : sabinene 0.1 mg/ml 처리군, D : sabinene 0.2 mg/ml 처리군, E : sabinene 0.4 mg/ml 처리군, F : 0.1% NaF 처리군)

이 때, BHI 액체배지에 S. mutans만을 접종하고 sabinene을 주입하지 않은 군을 대조군으로 하였다.

또한, 실험의 정확성을 높이기 위하여 NaF를 양성 대조군으로 설정하였다.

NaF는 무색의 고체이며 여러 용도로 사용되는 이온성 화합물이며, 대표적인 용도에는 충치 예방이 있다. 플루오린화염은 치아 표면 에나멜 층의 주 성분인 플루오린화인회석(fluoroapatite) 형성을 도와 치아의 강도를 증강시킨다. 치약에도 첨가되며, 충치 예방을 위한 정제로 시판되기도 한다.

(2) 실험 결과

도 2는 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을 시의 바이오필름 억제 효능을 나타낸 사진이다.

도 2를 참조하여 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 바이오필름 억제 효능을 관찰한 결과, sabinene의 농도가 0.05, 0.1, 0.2 및 0.4 mg/ml로 증가함에 따라 바이오필름 형성율이 감소함을 알 수 있었다.

A군에서는 S. mutans의 바이오필름 두께가 가장 두껍게 형성되어, 액체배지가 보이지 않고 사프라닌 스테인의 색인 붉은색의 반점만 보일 정도로 S. mutans의 분포도가 높았다.

또한 B군에서 E군 방향으로 갈수록, 즉 sabinene의 처리 농도를 높일 수록 S. mutans의 바이오필름 두께가 점점 얇아져, E군에서는 액체배지만이 남아있으며 붉은색 반점은 전혀 보이지 않는 것을 알 수 있다.

특히 E군은 양성 대조군인 F군과 비등한 정도의 바이오필름 형성 저해 양상을 보였다.

이로써, sabinene은 농도의존적으로 구강 세균의 증식을 저해하는 것을 알 수 있으며, 특히 sabinene을 0.4 mg/ml 처리시 NaF와 비등한 정도의 구강 세균 증식 저해능을 보유한다는 결론을 도출할 수 있다.

실험예 3. sabinene의 구강 세균 바이오필름 형성 저해 양상 관찰

(1) 실험 방법

인공치(Endura, Shofu Inc., Kyoto, Japan)에 BHI 액체배지와, 공정에 따라 sabinene을 첨가한 후 510⁵CFU/ml/dish가 되도록 도포하였다. 37 인큐베이터에서 24시간 배양한 후 남은 용액을 모두 제거하였다.

각 인공치에 증류수를 1.5 ml씩 넣어서 워싱하였다. 0.1%의 사프라닌 스테인으로 30초동안 염색한 후 증류수로 두 번 세척하고 건조하여 사진 촬영을 시행하였다.

(2) 실험 결과

도 3은 각각 다른 방법으로 제조된 sabinene을 S. mutans에 처리한 후 인공치에 도포하였을시의 바이오필름 억제 효능을 나타낸 사진이다.

도 3을 참조하여 제조 방법이 각각 다른 SABINENE을 S. mutans에 처리한 후 인공치에 도포하였을시의 바이오필름 억제 효능을 관찰한 결과, A군에서 E군으로 갈수록 바이오필름 형성율이 감소함을 알 수 있었다.

A군에서 S. mutans 바이오필름이 가장 많이 형성되어, 본래의 인공치 색인 갈색이 보이지 않고 붉은색 반점이 뒤덮였으며, B군에서 E군 방향으로 갈수록, 즉 sabinene 처리 농도가 높아질수록 S. mutans 바이오필름의 형성율이 현저히 감소하여 E군에서는 인공치 색만 보이며 붉은색 반점은 전혀 보이지 않는 것을 알 수 있다.

특히 E군은 양성 대조군인 F군과 더 뛰어난 바이오필름 형성 저해 양상을 보였다.

이로써, sabinene은 인공치에서 구강 세균의 증식을 저해한다는 결론을 도출할 수 있다.

실험예 4. sabinene에 따른 바이오필름 생성 억제 효과 실험

(1) 실험방법

1% 수크로스(sucrose)를 첨가한 BHI 액체배지와 sabinene을 35mm 디쉬에 첨가한 후 S. mutans를 510⁵CFU/ml/dish가 되도록 접종하였다.

S.mutans 접종 배지를 37 인큐베이터에서 24시간 배양 후 상청액을 모두 제거하고, 각각의 디쉬에 증류수를 1.5ml씩 주입하여 워싱하였다.

워싱한 S.mutans 접종 배지를 2.5% 글루타르알데히드 용액(0.1M sodium cacodylate buffer, pH 7.2, 4)에서 2시간동안 고정시켰다.

고정한 S. mutans 접종 배지를 각각 70%, 80%, 95% 및 100%로 농도를 달리한 에탄올에 탈수하였다. 탈수한 S. mutans 접종 배지를 프리즈-드라이(Freeze-dry)한 후 금으로 코팅하여, SEM(Scanning Electron Microscopy, 주사전자현미경)을 사용하여 사진 촬영 후 관찰하였다.

(2) 실험결과

도 4는 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 바이오필름 형성 억제 효능을 SEM으로 관찰한 결과를 나타낸 사진이다.

도 4를 참조하여 sabinene을 S. mutans에 농도별로 처리했을시의 바이오필름 형성 억제 효능을 관찰한 결과, sabinene의 농도가 0.05, 0.1, 0.2 및 0.4 mg/ml로 증가함에 따라 바이오필름 형성률이 감소함을 알 수 있었다.

A군은 S. mutans의 증식이 매우 활발하였다. sabinene을 처리하기 시작한 B군부터는 S.mutans 균 수가 감소한 것이 확연하며, E군 방향으로 갈수록, 즉 sabinene의 처리 농도를 높일수록 S. mutans 균 수가 점점 감소한 것을 알 수 있다.

또한, sabinene의 처리 농도가 가장 높은 E군의 S. mutans 균 수가 양성 대조군인 F군의 균 수와 유사할 정도로 감소한 것을 알 수 있다.

이로써, saninene은 농도의존적으로 구강 세균의 증식을 저해하는 것을 알 수 있으며, 특히 sabinene을 0.4 mg/ml 처리 시 NaF와 비등한 구강 세균 증식 저해능을 보유한다는 결론을 도출할 수 있다.

도 5는 Confocal laser Microscopy를 이용하여 S. mutans 살균 효능을 측정한 결과이다.

도 5를 참조하여 sabinene을 처리하지 않은 대조군은 S. mutans 살균효과가 나타나지 않았으며, sabinene의 농도가 높아질수록 살아있는 세균(SYTO염색:green color)에 비하여 죽어있는 세균(PI염색:red color)이 증가하는 것이 관찰되어 sabinene이 살균효과가 있다는 것이 밝혀졌으며, 1.6 mg/ml 농도이상에서는 거의 모든 세균이 살균되는 것으로 확인되었다.

이로써, saninene은 살균 효능이 있다는 것을 알 수 있다.

실험예 5. sabinene에 따른 바이오필름 생성 억제 효과 실험

(1) 실험방법

편백 오일을 sub-mininal inhibitory concentration(sub-MIC) 이하의 농도인 0.025 ~ 0.2 mg/ml로 처리한 후 S. mutans를 24시간 배양한 다음, Trizol 시약 (Gibco-BRL)을 사용하여 S. mutans의 Total RNA를 추출하였다. S. mutans의 cDNA는 역전사 효소반응(Gibco-BRL)을 사용하여 합성하였다.

DNA의 분석은 qPCR SYBR Green Mixes (Applied Bio systems Inc., Foster City, CA, USA)에서 RT-PCR(Real-time PCR, 실시간 중합연쇄반응)을 수행한 후 PCR 산물을 ABI-Prism 7,000에서 분석하는 과정으로 수행되었다.

중합연쇄반응 조건은 95에서 15초간 초기 디내츄레이션(denaturation) 후 60에서 1분간 어닐링(annealing)과 익스텐션(extension) 과정을 거치도록 구성하였다.

모든 유전자들의 발현 정도는 내부 스탠다드(standard)로써, S. mtans의 16S rRNA를 사용해서 노멀라이제이션(normalization)하였으며, 분석은 적어도 두 개의 독립적인 RNA 샘플을 듀폴리케이트(duplicate)로 시행하였다.

(2) 실험결과

도 6은 sabinene을 S. mutans에 sub-minimal inhibitory concentration(sub-MIC) 이하의 농도(0.05~0.2 mg/ml)로 처리한 후 구강세균의 독력인자 발현을 real-time PCR을 이용하여 관찰한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 6을 참조하여 sabinene의 농도를 증가시킴에 따른 GTFase B, C 및 D를 합성하는 유전자 gtfB, gtfC, gtfD의 발현이 sub-MIC 수준에서 감소하였고, 부착에 관여하는 유전자 spaP, gbpB의 발현도 역시 sub-MIC 수준에서 감소하였다.

구강세균의 clucose uptake system인 glucose phosphotransferase system(PT)의 조절 및 acid tolerence에도 기여하는 유전자 relA가 sub-MIC 수준에서 감소하였고, acid tolerenece에도 기여하는 유전자 brpA도 sub-MIC 수준에서 감소하였다.

또한, gbpB, gtfB, gtfC, gtfD, ftf의 발현을 조절하는 유전자 virB도 발현이 sub-MIC 수준에서 감소하였다.

이로써, subinene은 농도의존적으로 구강 세균의 독력인자 유전자를 불활성화하는 효능이 있다는 결론을 도출할 수 있다.

Claims (5)

1. 사비넨(sabinene)을 유효성분으로 하는 치면세균막 형성 원인균(S. mutans)에 대한 항균 약제용 조성물.
   
2. 청구항 1에 있어서,
   상기 사비넨은,
   S. mutans 5×10⁵ CFU/ml/dish 기준으로 0.025 ~ 0.2 mg/ml 처리되는 것을 특징으로 하는 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물.
   
3. 청구항 2에 있어서,
   상기 사비넨은,
   그 함량이 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml 및 0.4 mg/ml 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물.
   
4. 청구항 1에 있어서,
   상기 사비넨은,
   자연치아 및 인공치아에서 치면세균막 형성 원인균을 억제하는 것을 특징으로 하는, 치면세균막 형성 원인균에 대한 항균 약제용 조성물
   
5. 청구항 2에 기재된 사비넨에 약학적으로 첨가 가능한 약학 제제를 첨가하여 제조된, 치약, 세정제 및 탈취제를 포함하는 구강 상태 개선을 위한 기능성 제품.

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