KR20170106291A - 모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하기 위한 방법 및 물질 - Google Patents

모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하기 위한 방법 및 물질 Download PDF

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KR20170106291A
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리차드 사이먼 브로디
스캇 조셉 브릿지맨
우데이 비 샌드보르
니콜 회퍼
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세이프화이트 인코포레이티드
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Abstract

본 문서는 하나 이상의 접착 분자를, 단독으로 사용하거나 하나 이상의 인터로킹 금속, 하나 이상의 염료 및/또는 하나 이상의 폴리펩티드와 조합으로 사용하여 모발, 피부 및/또는 손발톱에 제제를 전달하기 위한 방법 및 물질을 제공한다. 예를 들어, 인터로킹 금속, 염료, 또는 폴리펩티드를 포유동물(예컨대, 인간)의 모발, 피부 또는 손발톱에 전달하기 위한 방법 및 물질이 제공된다.

Description

모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하기 위한 방법 및 물질{METHODS AND MATERIALS FOR DELIVERING AGENTS TO HAIR, SKIN, OR NAILS}
본 문서는 하나 이상의 접착 분자를 사용하여 모발, 피부 및/또는 손발톱에 제제를 전달하기 위한 방법 및 물질에 관한 것이다. 본 문서는 또한 모발, 피부 및/또는 손발톱의 색상, 외양 또는 안정성을 변경하는 것에 관한 것이다. 예를 들어, 본 문서는 모발, 피부 및/또는 손발톱을 인터로킹 금속(interlocking metal)(예컨대, 구리), 염료(예컨대, 카민) 및/또는 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 또는 알부민 폴리펩티드)와 조합된 하나 이상의 접착 분자(예컨대, 하나 이상의 홍합(mussel) 접착 폴리펩티드)와 접촉시키기 위한 방법 및 물질에 관한 것이다.
사람들은 여러 가지 이유로 그들의 모발, 피부 및/또는 손발톱을 착색한다. 주된 이유는 미용이다(예컨대, 흰머리를 감추거나 모발, 피부 또는 손발톱을 더 유행하거나 원하는 것으로 여겨지는 색상으로 변경하기 위함).
본 문서는 하나 이상의 접착 분자를, 단독으로 사용하거나 하나 이상의 인터로킹 금속, 하나 이상의 염료 및/또는 하나 이상의 폴리펩티드와 조합으로 사용하여 모발, 피부 및/또는 손발톱에 제제를 전달하기 위한 방법 및 물질을 제공한다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법 및 물질은 포유동물(예컨대, 인간)의 모발, 피부 또는 손발톱에 인터로킹 금속, 염료, 또는 폴리펩티드를 전달하는데 사용될 수 있다. 일부 경우, 본원에 기재된 제제의 전달은 모발, 피부 또는 손발톱의 외양을 개선할 수 있거나, 모발, 피부 또는 손발톱의 외양을 변경할 수 있거나, 또는 모발, 피부 또는 손발톱의 무결성을 강화할 수 있다.
본 문서는 또한 포유동물(예컨대, 인간)의 모발, 피부 또는 손발톱의 색상을 변경하기 위한 방법 및 물질을 제공한다. 예를 들어, 본 문서는 모발, 피부 또는 손발톱을 하나 이상의 인터로킹 금속 및/또는 하나 이상의 염료와 조합된 하나 이상의 접착 분자(예컨대, 하나 이상의 홍합 접착 폴리펩티드)와 접촉시켜 변경된 색상 외양을 갖는 모발, 피부 또는 손발톱을 제공하기 위한 방법 및 물질을 제공한다. 본원에 기재된 바와 같이, 접착 분자는 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 폴리펩티드와 조합되어 모발, 피부 또는 손발톱에 적용될 수 있다. 접착 분자는 복수의 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA) 잔기를 포함할 수 있고 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력뿐만 아니라 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 폴리펩티드와 상호작용하거나 결합하는 능력을 가질 수 있다. 본원에 기재된 방법 및 물질은 건조한 모발, 피부 및/또는 손발톱 또는 젖거나 촉촉한 모발, 피부 및/또는 손발톱에 사용될 수 있다.
일반적으로, 본 문서의 일 양태는 복수의 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA) 잔기를 포함하는 접착 분자, 및 하나 이상의 DOPA 잔기와의 상호작용을 통해 상기 접착 분자에 부착된 금속 이온 또는 염료를 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어진 조성물을 특징으로 하며, 여기서 접착 분자는 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 포함한다. 접착 분자는 홍합 접착 폴리펩티드일 수 있다. 접착 분자는 복수의 라이신 잔기 및 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체일 수 있다. 접착 분자는 복수의 라이신 잔기, 복수의 글리신 잔기 및 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체일 수 있다. 접착 분자는 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 폴리메타크릴레이트 중합체일 수 있다. 조성물은 금속 이온을 포함할 수 있다. 금속 이온은 구리 이온, 비스무트 이온, 크롬 이온, 철 이온, 은 이온, 알루미늄 이온, 망간 이온, 아연 이온, 또는 이들의 조합일 수 있다. 조성물은 염료를 포함할 수 있다. 염료는 카민, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모일 수 있다. 조성물은 폴리펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 케라틴 폴리펩티드 또는 형광 발광 폴리펩티드일 수 있다. 폴리펩티드는 접착 분자에 접합될 수 있다. 조성물은 샴푸, 헤어 컨디셔너, 겔, 폴리시(polish) 또는 페이스트일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 문서는 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱의 외양을 변경하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 모발, 피부 또는 손발톱에, 이전 단락의 임의의 조성물 또는 본원에 제공된 임의의 조성물을 적용하는 것을 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어지며, 여기서 하나 이상의 DOPA 잔기는 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하고, 여기서 모발, 피부 또는 손발톱의 외양은 변경된다. 조성물은 모발에 적용될 수 있다. 조성물은 피부에 적용될 수 있다. 조성물은 손발톱에 적용될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 문서는 모발, 피부 또는 손발톱의 외양을 변경하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 (a) 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 접착 분자를 모발, 피부 또는 손발톱에 적용하는 단계로서, 여기서 하나 이상의 DOPA 잔기는 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하는 단계, 및 (b) 모발, 피부 또는 손발톱에 금속 이온 또는 염료를 적용하는 단계로서, 여기서 금속 이온 또는 염료는 접착 분자의 하나 이상의 DOPA 잔기와 상호작용하는 것인 단계를 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어지며, 여기서 모발, 피부 또는 손발톱의 외양이 변경된다. 접착 분자 및 금속 이온 또는 염료는 순차적으로 적용될 수 있다. 접착 분자 및 금속 이온 또는 염료는 함께 적용될 수 있다. 접착 분자는 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 폴리메타크릴레이트 중합체; 홍합 접착 폴리펩티드; 복수의 라이신 잔기 및 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체; 및 복수의 라이신 잔기, 복수의 글리신 잔기, 및 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 접착 분자는 홍합 접착 폴리펩티드일 수 있다. 접착 복수의 라이신 잔기 및 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체일 수 있다. 접착 분자는 복수의 라이신 잔기, 복수의 글리신 잔기 및 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체일 수 있다. 접착 분자는 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 폴리메타크릴레이트 중합체일 수 있다. 상기 방법은 모발, 피부 또는 손발톱에 금속 이온을 적용하는 것을 포함할 수 있다. 금속 이온은 구리 이온, 비스무트 이온, 크롬 이온, 철 이온, 은 이온, 알루미늄 이온, 망간 이온, 아연 이온, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 방법은 모발, 피부 또는 손발톱에 염료를 적용하는 것을 포함할 수 있다. 염료는 카민, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모일 수 있다. 상기 방법은 모발, 피부 또는 손발톱에 폴리펩티드를 적용하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 케라틴 폴리펩티드 또는 형광 발광 폴리펩티드일 수 있다. 폴리펩티드는 접착 분자에 접합될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 문서는 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA)과 중합체의 동결건조된 혼합물을 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어진 전달 필름을 특징으로 한다. 중합체는 PMA, PEMA, 및 PBMA일 수 있다. 전달 필름은 제제를 포함할 수 있다. 상기 제제는 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 항생제, 치료제, 미백 입자 또는 착색 입자일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 문서는 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 (a) 전달 필름을 모발, 피부 또는 손발톱에 접촉시키는 단계, 및 (b) 전달 필름을 제제와 접촉시키는 단계를 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어진다. 전달 필름은 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA)과 중합체의 동결건조된 혼합물을 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어진다. 중합체는 PMA, PEMA, 및 PBMA일 수 있다. 제제는 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 항생제, 치료제, 미백 입자 또는 착색 입자일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 문서는 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하는 방법을 특징으로 하며, 여기서 상기 방법은 전달 필름을 모발, 피부 또는 손발톱에 접촉시켜, 모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하는 것을 포함한다. 전달 필름은 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA)과 중합체의 동결건조된 혼합물을 포함하거나 실질적으로 그것으로 이루어지며, 제제를 추가로 포함한다. 중합체는 PMA, PEMA, 및 PBMA일 수 있다. 제제는 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 항생제, 치료제, 미백 입자 또는 착색 입자일 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있음에도 불구하고, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 문헌은 그 전체가 참고로 통합되어 있다. 충돌이 있는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 물질, 방법, 및 실시예는 단지 예시적이며 제한하고자 하는 것이 아니다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명확해질 것이다.
도 1은 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열(서열번호:1)의 목록이다(GenBank Accession No. AY521220.1; GI No. 41350294).
도 2는 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:2)의 목록이다(GenBank Accession No. AAS00463; GI No. 41350295).
도 3은 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:3)의 목록이다(GenBank Accession No. AAL35297.1; GI No. 17066511).
도 4는 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:4)의 목록이다(GenBank Accession No. ABE01084.1; GI No. 90823165).
도 5는 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:5)의 목록이다(GenBank Accession No. AAF89290.1; GI No. 9587380).
도 6은 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:6)의 목록이다(GenBank Accession No. AAY29129.1; GI No. 63055693).
도 7은 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:7)의 목록이다(GenBank Accession No. BAB16314.1; GI No. 10641127).
도 8은 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:8)의 목록이다(GenBank Accession No. AAX23968.1; GI No. 60548042).
도 9는 예시적인 홍합 접착 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:9)의 목록이다(GenBank Accession No. AAY29131.1; GI No. 63055728).
도 10은 예시적인 BFP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열(서열번호:10)의 목록이다(GenBank Accession No. U70497.1; GI No. 1619752).
도 11은 예시적인 BFP 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:11)의 목록이다(GenBank Accession No. AAB16959.1; GI No. 1619753).
도 12는 예시적인 BFP 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호:12)의 목록이다.
본 문서는 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 접착 분자를 사용하여 다른 화합물(예컨대, 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 중합체, 항생제, 치료제, 핵산, 미백 입자, 착색 입자, 회생 입자, 색상-변화 안료, 복합 안료, 야광 착색제, 실리카 코팅된 입자, 액정 색상, 문신 안료, 이론적 메이크업, 또는 생물학적 모이어티)를 모발, 피부 및/또는 손발톱에 접착시키기 위한 방법 및 물질을 제공한다. 일부 경우, 본 문서는 변경된 외양을 제공하기 위해, 항균제를 전달하기 위해, 또는 치료 또는 미적 용도를 제공하기 위해 제제를 모발, 피부 및/또는 손발톱에 부착하기 위한 방법 및 물질을 제공한다. 예를 들어, 본 문서는 모발을 접착 분자 및 인터로킹 금속 또는 염료와 접촉시켜 변경된 색상 외양을 갖는 모발을 제공하기 위한 방법 및 물질을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같이 "DOPA 잔기"는, 예를 들어, 작은 합성 DOPA 펩티드 및/또는 DOPA/Lys를 모방하는 카테콜 중합체(예컨대, Ham et al. Angew. Chem. Int. Ed. 50:732-736 (2011) 참고)를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 접착 분자는 복수의 DOPA 잔기를 포함할 수 있고 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력뿐만 아니라 다른 화합물(예컨대, 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 중합체, 항생제, 또는 치료제, 핵산, 미백 입자, 회생 입자, 또는 생물학적 모이어티)과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가질 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 접착 분자의 예는, 비제한적으로, 홍합 접착 폴리펩티드(예컨대, 홍합 발(foot) 단백질 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 이들의 조합)를 포함한다. 홍합 접착 폴리펩티드는, 예를 들어, 티로신 잔기의 효소적 산화를 통해 형성된 하나 이상의 DOPA 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 홍합 접착 폴리펩티드의 총 아미노산 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 퍼센트 이상이 DOPA 잔기일 수 있다. 재조합 폴리펩티드의 티로신 잔기는 티로시나제(예컨대, 버섯 티로시나제)를 이용하여 DOPA 잔기로 전환될 수 있다. 예컨대, 문헌[Choi et al., Microb . Cell. Fact., 11:139(2012)]을 참고한다.
예를 들어, 접착 분자는 서열번호:2-9 및 13-29에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 가질 수 있다. 일부 경우, 접착 분자는 서열번호:2-9 및 13-29에 제시된 아미노산 서열을 가질 수 있다. 특정 아미노산 서열 및 서열번호:2-9 및 13-29 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열 간의 퍼센트 동일성은 하기와 같이 결정될 수 있다. 먼저, 아미노산 서열들을 BLASTP 버전 2.0.14를 포함하는 BLASTZ의 독립형 버전으로부터의 BLAST 2 Sequences(Bl2seq) 프로그램을 사용하여 정렬한다. BLASTZ의 이 독립형 버전은 Fish & Richardson 웹 사이트(예컨대, www.fr.com/blast/) 또는 미국 정부의 국립생물공학정보센터 웹 사이트(www.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 얻을 수 있다. Bl2seq 프로그램 사용법을 설명하는 설명서는 BLASTZ과 함께 제공되는 readme 파일에서 찾을 수 있다. Bl2seq는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 2개의 아미노산 서열을 비교한다. 2개의 아미노산 서열을 비교하기 위해, Bl2seq의 옵션은 하기와 같이 설정된다: -i는 비교될 제1 아미노산 서열을 함유하는 파일(예컨대, C:\seq1.txt)로 설정되고; -j는 비교될 제2 아미노산 서열을 함유하는 파일(예컨대, C:\seq2.txt)로 설정되며; -p는 blastp로 설정되고; -o는 임의의 원하는 파일명(예컨대, C:\output.txt)으로 설정되며; 모든 다른 옵션은 기본 설정으로 유지된다. 예를 들어, 하기 명령을 사용하여 2개의 아미노산 서열 간의 비교를 포함하는 출력 파일을 생성할 수 있다: C:\Bl2seq -i c:\seq1.txt -j c:\seq2.txt -p blastp -o c:\output.txt. 2개의 비교된 서열이 상동성이 있으면, 지정된 출력 파일은 상동성 영역을 정렬된 서열로서 나타낼 것이다. 2개의 비교된 서열이 상동성이 없으면, 지정된 출력 파일은 정렬된 서열을 나타내지 않을 것이다. 핵산 서열의 경우에도 blastn을 사용하는 것을 제외하고 유사한 절차를 수행할 수 있다.
일단 정렬되면, 매치 수를 두 서열에서 동일한 아미노산 잔기가 나타나는 위치의 수를 계수하여 결정한다. 퍼센트 동일성은 매치 수를 서열번호:2-9 및 13-29 중 어느 하나의 아미노산 서열의 길이로 나눈 다음, 결과 값에 100을 곱함으로써 결정한다.
퍼센트 동일성 값은 소수점 첫째 자리에서 반올림된다는 점에 유의한다. 예를 들어, 78.11, 78.12, 78.13, 및 78.14는 78.1로 반내림되는 반면, 78.15, 78.16, 78.17, 78.18, 및 78.19는 78.2로 반올림된다. 또한 길이 값은 항상 정수임에 유의한다.
많은 핵산이 서열번호:2-9 및 13-29에 제시된 아미노산 서열을 코딩할 수 있음을 이해할 것이다. 유전적 코드의 축퇴성은 당업계에 잘 알려져 있으며; 즉 많은 아미노산의 경우, 아미노산에 대한 코돈으로서 작용하는 둘 이상의 뉴클레오타이드 3염기(triplet)가 존재한다.
본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 홍합 접착 폴리펩티드는 임의의 유형의 홍합에서 자연적으로 발생하는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 홍합 접착 폴리펩티드는 미틸러스 에둘리스(Mytilus edulis ; 보통의 파란색 홍합), 미틸러스 바이수스(Mytilus byssus), 미틸러스 갈로프로빈시알리스(Mytilus galloprovincialis), 미틸러스 칼리포니아누스(Mytilus californianus), 미틸러스 코루스쿠스(Mytilus coruscus), 미틸러스 트로술루서(Mytilus trossulusor), 또는 페르나 비리디스(Perna viridis; 녹색 홍합)에서 자연적으로 발생하는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 홍합 접착 폴리펩티드는, 비제한적으로, 미틸러스 갈로프로빈시알리스(GenBank Accession No. AAS00463), 미틸러스 에둘리스(GenBank Accession No. AAL35297.1), 또는 미틸러스 칼리포니아누스(GenBank Accession No. ABE01084.1)로부터의 mfp-5; 미틸러스 에둘리스(GenBank Accession No. AAF89290.1, mfp-3 전구체 변이체 11), 미틸러스 칼리포니아누스(GenBank Accession No. AAY29129.1) 또는 미틸러스 갈로프로빈시알리스(GenBank Accession No. BAB16314.1)로부터의 mfp-3; 또는 미틸러스 에둘리스(GenBank Accession No., AAX23968.1), 미틸러스 칼리포니아누스(GenBank Accession No. AAY29131.1), 또는 미틸러스 갈로프로빈시알리스(UniProtKB/Swiss-Prot Q27409.1)로부터의 mfp-1, 또는 자연적으로 발생하는 홍합 접착 폴리펩티드 중 어느 것의 단편을 포함한다.
일부 경우, mfp-1 홍합 접착 폴리펩티드는 AKPSYPPTYK(서열번호:13) 또는 PKISYPPTYK(서열번호:14)와 같은 공통 서열(consensus sequence)의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다. 예를 들어, 홍합 접착 폴리펩티드는 서열번호:13 또는 서열번호:14에 제시된 공통 서열의 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 반복을 포함할 수 있다. 일부 경우, 위치 6 및/또는 7에 있는 프롤린 잔기는 히드록시프롤린 잔기이다. 일부 경우, 위치 5 및/또는 9에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다.
일부 경우, mfp-2 홍합 접착 폴리펩티드는 TDKAYKPNPCVVSKPCKNRGKCIWN-GKAYRCKCAYGYGGRHC(서열번호:15)와 같은 공통 서열의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다. 예를 들어, 홍합 접착 폴리펩티드는 서열번호:15에 제시된 공통 서열의 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 반복을 포함할 수 있다. 일부 경우, 서열번호:15의 위치 5, 29, 35, 및/또는 37에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다.
일부 경우, mfp-3 홍합 접착 폴리펩티드는 ADYYGPNYGPPRRYGGGNYNRYN-RYGRRYGGYKGWNNGWNRGRRGKYW(서열번호:16)와 같은 공통 서열의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다. 일부 경우, 서열번호:16의 위치 3, 4, 8, 14, 19, 22, 25, 29, 32, 및/또는 47에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다.
일부 경우, mfp-4 홍합 접착 폴리펩티드는 HVHTHRVLHK(서열번호:17) 또는 DDHVNDIAQTA(서열번호:18)와 같은 공통 서열의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다. 예를 들어, 홍합 접착 폴리펩티드는 서열번호:17 또는 서열번호:18에 제시된 공통 서열의 5, 10, 12, 14, 16, 20, 25, 30, 32, 34, 35, 또는 36 반복을 포함할 수 있다.
일부 경우, mfp-5 홍합 접착 폴리펩티드는 SSEEYKGGYYPGNAYHYSGGSYH-GSGYHGGYKGKYYGKAKKYYYKYKNSGKYKYLKKARKYHRKGYKYYGGSS(서열번호:19)와 같은 공통 서열의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다. 일부 경우, 서열번호:19의 위치 5, 9, 10, 15, 17, 22, 27, 31, 35, 36, 42, 43, 44, 46, 52, 54, 61, 66, 68, 및/또는 69에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다.
일부 경우, mfp-6 홍합 접착 폴리펩티드는 GGGNYRGYCSNKGCRSGYIFYDNR-GFCKYGSSSYKYDCGNYACLPRNPYGRVKYYCTKKYSCPDDFYYYNNKGYYYYNDKDYGCFNCGSYNGCCLRSGY(서열번호:20)와 같은 공통 서열의 하나 이상의 카피를 포함할 수 있다. 일부 경우, 서열번호:20의 위치 5, 8, 18, 21, 29, 34, 36, 41, 49, 54, 55, 60, 67, 68, 69, 74, 75, 76, 77, 82, 90, 및/또는 99에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다.
일부 경우, 도 2-9 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열(서열번호:2-9)을 갖거나 또는 도 1에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 홍합 접착 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다.
일부 경우, 홍합 접착 폴리펩티드는 전장 홍합 접착 폴리펩티드의 일부일 수 있다. 예를 들어, 데카펩티드 AKPSYPPTYK(서열번호:13)의 6개의 반복을 포함하는 홍합 접착 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 문헌[Kitamura et al., J. Polymer Science: Part A: Polymer Chemistry, 37:729-736 (1991)]을 참고한다.
일부 경우, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 홍합 접착 폴리펩티드는 MFP-3(예컨대, 서열번호:8)의 N- 및 C-말단 모두에 MFP-1의 6개의 데카펩티드(AKPSYPPTYK; 서열번호:13) 반복을 포함하는 키메라 폴리펩티드일 수 있다. 문헌[Lim, et al., Biomaterials , 31:3715-3722 (2010); 및 Hwang et al., Biomaterials, 28:3560 - 3568 (2007)]을 참고한다. 일부 경우, 서열번호:13의 위치 6 및/또는 7에 있는 프롤린 잔기는 히드록시프롤린 잔기이다. 일부 경우, 서열번호:13의 위치 5 및/또는 9에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다.
일부 경우, 본원에 기재된 바와 사용될 수 있는 홍합 접착 폴리펩티드는 MFP-5의 N- 및 C-말단 모두에 MFP-1의 6개의 데카펩티드(AKPSYPPTYK; 서열번호:13) 반복을 포함하는 키메라 폴리펩티드일 수 있다. 문헌[Lim, et al., Biomaterials, 31:3715-3722 (2010); 및 Hwang et al., Biomaterials , 28:3560 - 3568 (2007)]을 참고한다. 일부 경우, 서열번호:13의 위치 6 및/또는 7에 있는 프롤린 잔기는 히드록시프롤린 잔기이다. 일부 경우, 서열번호:13의 위치 5 및/또는 9에 있는 티로신 잔기는 DOPA 잔기이다. 홍합 접착 폴리펩티드는 임의의 유형의 홍합으로부터 추출될 수 있거나 폴리펩티드 발현 기술(예컨대, 박테리아 세포, 곤충 세포, 또는 포유동물 세포를 이용한 이종 발현 기술)을 사용하여 재조합적으로 생산될 수 있다. 홍합으로부터 추출되는 홍합 접착 폴리펩티드는 Cell-Tek(Catalog No. 354240) 및 ACRO Biosystems(Catalog No. MAP-O4012)로부터 상업적으로 이용가능하다. 일부 경우, 홍합 접착 폴리펩티드는 다른 곳에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다(예컨대, Kitamura et al., J. Polymer Science: Part A: Polymer Chemistry, 37:729-736 (1991); Lim et al., Biomaterials , 31: 3715-3722 (2010); 및 Hwang et al., Biomaterials , 28:3560-3568 (2007)). 일부 경우, 표준 폴리펩티드 합성 기술(예컨대, 액상 폴리펩티드 합성 기술 또는 고상 폴리펩티드 합성 기술)이 홍합 접착 폴리펩티드를 합성적으로 생산하는데 사용될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 접착 분자의 다른 예는 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체를 포함한다. 예를 들어, 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 표 1의 접착 분자를 참고한다. 일부 경우, 그러한 중합체는 공통 서열 XYX4YX3YX3YYX5YYYXYX5YXYX6YX4YXYYX(여기서 X는 라이신, 글리신, 세린, 히스티딘, 또는 아스파라긴이고, Y는 티로신 대신에 DOPA임(서열번호:37))의 하나 이상의 반복을 가질 수 있다. 세린이 중합체 내에 포함되는 경우에, 포스포세린 잔기가 하나 이상의 세린 잔기를 치환할 수 있다. 예를 들어, 서열번호:23-25 중 어느 하나의 접착 분자에서, 포스포세린 잔기가 하나 이상의 세린 잔기를 치환할 수 있다. 일부 경우, 접착 분자는 DOPA 및 라이신 잔기의 무작위 혼합물, DOPA, 라이신, 및 글리신 잔기의 무작위 혼합물, 또는 DOPA 및 N5-(2-히드록시에틸)-L-글루타민의 무작위 혼합물을 함유하는 폴리펩티드일 수 있다. 예를 들어, 문헌[Wang et al., Biomaterials, 28:3456-3468 (2007); 및 Anderson et al., Advanced Functional Materials, 20:4196-4205 (2010)]을 참고한다. 접착 분자는 또한 카테콜을 함유하는 폴리아미노산일 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,506,577호를 참고한다.
일부 경우, 부착 분자는 크기가 10 내지 1000 아미노산 길이(예컨대, 10 내지 1000, 10 내지 900, 10 내지 800, 10 내지 700, 10 내지 600, 10 내지 500, 10 내지 400, 10 내지 300, 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 750, 20 내지 500, 20 내지 350, 20 내지 300, 20 내지 250, 20 내지 200, 20 내지 150, 20 내지 125, 20 내지 100, 30 내지 600, 30 내지 550, 30 내지 500, 30 내지 450, 30 내지 400, 30 내지 350, 30 내지 300, 30 내지 250, 30 내지 200, 30 내지 150, 30 내지 125, 30 내지 100, 50 내지 750, 50 내지 700, 50 내지 650, 50 내지 600, 50 내지 550, 50 내지 500, 50 내지 450, 50 내지 400, 50 내지 350, 50 내지 300, 50 내지 250, 50 내지 200, 50 내지 150, 50 내지 125, 또는 50 내지 100 아미노산 길이) 범위인 폴리펩티드일 수 있다. 일부 경우, 부착 분자는 크기가 5 내지 10 아미노산 길이의 범위인 폴리펩티드일 수 있다.
적합한 중합체는 펩티드성 또는 비펩티드성 골격을 가질 수 있고, 고상 또는 용액상 합성에 의해 합성될 수 있다. 그러한 합성 기술은 높은 퍼센트의 DOPA(예컨대, 10% 초과, 15% 초과, 20% 초과, 30% 초과의 DOPA, 또는 40% 초과의 DOPA)를 중합체 내에 혼입시킨다.
[표 1]
복수의 DOPA 잔기를 함유하는 접착 분자.
Figure pct00001
접착 분자는 복수의 DOPA 잔기를 갖는 폴리(아크릴산) 골격을 가질 수 있다. 예를 들어, 접착 분자는 측쇄에 부착된, 복수의 DOPA 잔기, 및 선택적으로 복수의 라이신 잔기를 갖는 폴리[부타디엔-co-(말레산)] 또는 폴리[에틸렌-co-(말레산)] 골격을 가질 수 있다. 예를 들어, 문헌[Laulicht et al., Macromol . Biosci ., 12: 1555-1565 (2012)]을 참고한다. 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 그러한 중합체는 염기성 pH 값에서 가용성이다. 라이신 잔기의 부가는 산 및 염기성 값 모두에서 용해도를 증가시킬 수 있다. 접착 분자는 복수의 DOPA 잔기, 및 선택적으로 복수의 라이신 잔기가 혼입된 폴리메타크릴레이트 골격을 가질 수 있다. 문헌[Kim et al., J. Porous Mater., 20:177-182 (2013)]을 참고한다. 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 폴리메타크릴레이트 중합체는 산 및 염기성 pH 값에서 가용성일 수 있다.
일부 경우, 접착 분자는 폴리펩티드 또는 폴리(도파민) 중합체를 함유하는 DOPA일 수 있다. 예를 들어, 문헌[Fuller et al., Biopolymers , 17:2939-2943 (1998); 및 Lee et al., Adv . Mater., 21:431-434 (2009)]을 참고한다. 폴리(도파민) 중합체는, 예를 들어, 인 시츄(in situ) 중합에 의해 제조될 수 있다.
일부 경우, 접착 분자는 DOPA로 종결된 폴리에틸렌 글리콜일 수 있다. 예를 들어, 문헌[Dalsin et al., J. Am. Chem . Soc ., 125:4253-4258 (2003)]을 참고한다.
본원에 기재된 바와 같이, 본원에 제공된 접착 분자는 다른 제제(예컨대, 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 중합체, 항생제, 또는 치료제, 핵산, 미백 입자, 회생 입자, 또는 생물학적 모이어티)를 모발, 피부 및/또는 손발톱에 부착시키는데 사용될 수 있다.
본원에 제공된 접착 분자에 부착되거나 결합할 수 있는 인터로킹 금속의 예는, 비제한적으로, 구리, 산화철, 산화아연, 비스무트 옥시클로라이드 또는 산화크롬을 포함한다. 일반적으로, 본원에 제공된 접착 분자는 하나 이상의 DOPA 모이어티를 통해 모발, 피부 및/또는 손발톱에 부착하거나 결합할 수 있고, 예를 들어, 하나 이상의 DOPA 모이어티를 통해 인터로킹 금속에 부착하거나 결합할 수 있다. 일부 경우, 본원에 제공된 접착 분자는 하나 이상의 티올 또는 말레이미드기를 통해 인터로킹 금속에 부착하거나 결합할 수 있다.
본원에 제공된 접착 분자에 부착하거나 결합할 수 있는 염료의 예는, 비제한적으로, 헤나, 구아닌, 엽납석, 울트라마린, 및 운모를 포함한다. 일반적으로, 본원에 제공된 접착 분자는 하나 이상의 DOPA 모이어티를 통해 모발, 피부 및/또는 손발톱에 부착하거나 결합할 수 있고, 예를 들어, 하나 이상의 DOPA 모이어티를 통해 염료에 부착하거나 결합할 수 있다. 일부 경우, 본원에 제공된 접착 분자는 하나 이상의 티올, 하이드록사이드 또는 말레이미드기를 통해 염료에 부착하거나 결합할 수 있다.
표 2는 모발, 피부 및/또는 손발톱에 색상을 제공하는데 사용될 수 있는 제제의 예를 제공한다.
[표 2]
색상을 제공하는데 사용되는 제제의 예
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
본원에 제공된 접착 분자에 부착하거나 결합할 수 있는 폴리펩티드의 예는, 비제한적으로, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 콜라겐 폴리펩티드, 및 알부민 폴리펩티드를 포함한다. 일반적으로, 본원에 제공된 접착 분자는 하나 이상의 DOPA 모이어티를 통해 모발, 피부 및/또는 손발톱에 부착하거나 결합할 수 있고, 예를 들어, 하나 이상의 DOPA 모이어티를 통해 폴리펩티드에 부착하거나 결합할 수 있다. 일부 경우, 본원에 제공된 접착 분자는 하나 이상의 티올 또는 말레이미드기를 통해 폴리펩티드에 부착하거나 결합할 수 있다.
임의의 적절한 케라틴 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 케라틴 폴리펩티드의 예는, 비제한적으로, 표피 케라틴(GenBank® Accession No. J00124; GI No. 186704), 상피 세포 케라틴(GenBank® Accession No. X13320.1; GI No. 1200071), 및 모발-특이적 케라틴(GenBank® Accession No. AJ000263; GI No. 2695878)을 포함한다.
임의의 적절한 형광 발광 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 형광 발광 폴리펩티드는 특정 파장에서 형광을 방출할 수 있다. BFP 폴리펩티드의 경우, BFP 폴리펩티드는 약 440 nm 내지 약 500 nm의 범위(예컨대, 약 450 nm 내지 약 500 nm, 약 460 nm 내지 약 500 nm, 약 470 nm 내지 약 500 nm, 약 480 nm 내지 약 500 nm, 약 440 nm 내지 약 490 nm, 약 440 nm 내지 약 480 nm, 약 440 nm 내지 약 470 nm, 약 440 nm 내지 약 460 nm, 약 450 nm 내지 약 490 nm, 또는 약 460 nm 내지 약 480 nm)의 형광을 방출할 수 있다. 일부 경우, 약 420 nm 내지 약 450 nm, 약 430 nm 내지 약 450 nm, 약 440 nm 내지 약 450 nm, 약 420 nm 내지 약 440 nm, 또는 약 485 nm 내지 약 505 nm의 방출 파장에서 형광을 방출하는 형광 발광 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다.
상이한 색상의 모발, 피부 및/또는 손발톱을 갖기를 원하는 경우, 적색, 녹색, 또는 황색 스펙트럼에서 형광을 방출하는 폴리펩티드가 사용될 수 있다. 적색 형광은 약 555 nm 내지 약 655 nm(예컨대, 약 565 nm 내지 약 645 nm, 약 575 nm 내지 약 635 nm, 또는 약 585 nm 내지 약 625 nm)의 방출 파장을 가질 수 있다. 녹색 형광은 약 500 nm 내지 약 525 nm(예컨대, 약 505 nm 내지 약 520 nm 또는 약 510 nm 내지 약 515 nm)의 방출 파장을 가질 수 있다. 황색 형광은 약 525 nm 내지 약 555 nm(예컨대, 약 530 nm 내지 약 550 nm 또는 535 nm 및 약 545 nm)의 파장을 가질 수 있다. 일부 경우, 상이한 형광 발광 폴리펩티드의 조합이 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 예를 들어, 사람의 모발, 피부 및/또는 손발톱에 BFP 폴리펩티드 및 적색 형광 단백질(RFP) 폴리펩티드의 조합이 적용될 수 있다. 일부 경우, 사람의 모발, 피부 및/또는 손발톱에 RFP 폴리펩티드 및 녹색 형광 단백질(GFP) 폴리펩티드의 조합이 적용될 수 있다.
임의의 적절한 BFP 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 BFP 폴리펩티드의 예는, 비제한적으로, EBFP(예컨대, 460 nm의 방출 최대를 갖는 EBFP), 형광 단백질 SBFP1(GenBank® Accession No. ABM97856; GI No. 124264536), 형광 단백질 SBFP2(GenBank® Accession No. ABM97857, GI No. 124264538), EBFP2(GenBank® Accession No. EF517318, GI No. 145666498), Azurite(Mena et al., Nature Biotechnology, 24:1569-1571 (2006)), mKalama1(GenBank® Accession No. EF517317, GI No. 145666496), 아연 핑거 단백질 383(GenBank® Accession No. EDU39924.1, GI No. 187972425), 미국 특허 제7,166,424호에 제시된 서열번호:445(GenBank® Accession No. ABN30727.1; GI No. 125148618), 가용성-변형된 청색 형광 단백질(smBFP)(GenBank® Accession No. U70497.1; GI No.1619752), GenBank® Accession No. CAE00365.1(GI No. 32260521)에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드, GenBank® Accession No. CAE00361.1(GI No. 32260509)에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드, GenBank® Accession No. CAE00361.1(GI No. 32260509)에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드, ECFP 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACO48275.1; GI No. 226331138), Cerulean 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ADE48834.1; GI No. 293612838), 형광 단백질 Cypet 폴리펩티드(GenBank® Accession No. 3GEX_A; GI No. 290789997), MiCy 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ADE48830.1; GI No. 293612833), 및 mTFP1 형광 단백질 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACO48263.1; GI No. 226320339)를 포함한다. 일부 경우, 미국 특허출원 공개 제2010/0062460호에 제시된 BFP 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다.
임의의 적절한 RFP 폴리펩티드 및 GFP 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 RFP 폴리펩티드의 예는, 비제한적으로, 가용성-변형된 적색-편이 녹색 형광 단백질(smRSGFP) 폴리펩티드(GenBank® Accession No. U70496.1; GI No.1619750), GenBank® Accession No. AAG16224.1(GI No. 10304307); ABO38175.1(GI No.133753343); 또는 AAU06852.1(GI No. 51593130)에 제시된 서열을 갖는 적색 형광 단백질 폴리펩티드, 주황색-방출 GFP-유사 단백질 폴리펩티드(GenBank® Accession No. 2ZMW_D; GI No. 209870302), mOrange 형광 단백질 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACO48285.1; GI No. 226331152), NLS-dTomato 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ADC42843.1; GI No. 288188779), 적색 형광 단백질 tdTomato 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACQ43939.1; GI No. 228484713), DsRed 폴리펩티드(GenBank® Accession No. BAE53441.1; GI No. 83016748), DsRed2 폴리펩티드(GenBank® Accession No. AAV73970.1; GI No. 56119204), DsRed-Express 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACU30027.1; GI No. 255689290), DsRed-단량체 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACF35425.1; GI No. 194245628), 단량체성 주황색-적색 형광 단백질 폴리펩티드(GenBank® Accession No. AAV52170.1; GI No. 55420625), 단량체성 주황색-적색 형광 단백질 폴리펩티드(GenBank® Accession No. AAV52166.1; GI No. 55420617), mCherry 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACY24904.1; GI No. 262089840), 미국 특허 제7,393,923호에 제시된 서열번호:3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACH06540.1; GI No. 197013979), 및 미국 특허 제7,393,923호에 제시된 서열번호:5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACH06541.1; GI No. 197013980)를 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 GFP 폴리펩티드의 예는, 비제한적으로, 가용성-변형된 녹색 형광 단백질(smGFP) 폴리펩티드(GenBank® Accession No. U70495.1; GI No.1619748), 변형된 녹색 형광 단백질 GFP-ER(mfgp4-ER) 폴리펩티드(GenBank® Accession No. U87625.1; GI No. 1842446), GFP 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACJ06700.1, GI No. 210076685), 향상된 GFP 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ACV20892.1; GI No. 256708579), turboGFP 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ADD23343.1; GI No. 290131407), VisGreen GFP 폴리펩티드(GenBank® Accession No. ABR26680.1; GI No. 149393496), 및 Azami-Green 폴리펩티드(GenBank® Accession No. BAD52001.1; GI No. 52839539)를 포함한다.
일부 경우, 문헌[Subach et al.(Chem . Biol ., 15:1116-1124 (2008))]에 기재된 것과 같은 형광 발광 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 또한, GenBank® Accession No. 3M24_A(GI No. 296863586), GenBank® Accession No. 3M24_B(GI:296863587), GenBank® Accession No. 3M24_C(GI:296863588), 및 GenBank® Accession No. 3M24_D(GI:296863589)를 참고한다. 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 형광 발광 폴리펩티드의 추가의 예는, 비제한적으로, 다른 곳(Alieva et al. PLoS ONE, 3(7):e2680 (2008) 및 Chudafov et al., Physiol . Rev., 90:1103-1163 (2010))에 기재된 것을 포함한다. 예컨대, Alieva et al. 문헌의 표 1 및 Chudafov et al. 문헌의 도 5, 10, 12, 및 14를 참고한다. 일부 경우, 산호 형광 발광 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 일부 경우, 도 11 또는 12에 제시된 아미노산 서열 또는 도 10에 제시된 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 형광 발광 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다.
임의의 적절한 알부민 폴리펩티드가 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 알부민 폴리펩티드의 예는, 비제한적으로, 인간 혈청 알부민(GenBank® Accession No. M12523; GI No. J04457), 인간 알부민(GenBank® Accession No. EF649953.1; GI No. 152112963), 및 합성 인간 알부민(GenBank® Accession No. DQ894588.2; GI No. 123995824)을 포함한다
임의의 적절한 방법이 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 비-형광 폴리펩티드)를 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 발현 기술(예컨대, 박테리아 세포, 곤충 세포, 또는 포유동물 세포를 이용한 이종 발현 기술)이 폴리펩티드를 제조하는데 사용될 수 있다. 일부 경우, BFP 폴리펩티드와 같은 형광 발광 폴리펩티드는 다른 곳(Yakhnin et al., Protein Expr . Purif ., 14:382-386 (1998) 및 Jain et al., J. Chromatography A, 1035:83-86 (2004))에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 일부 경우, 표준 폴리펩티드 합성 기술(예컨대, 액상 폴리펩티드 합성 기술 또는 고상 폴리펩티드 합성 기술)이 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 비-형광 폴리펩티드)를 합성적으로 생산하는데 사용될 수 있다.
일부 경우, 본 문서는 모발, 피부 및/또는 손발톱을 접착 분자 및 하나 이상의 인터로킹 금속 및/또는 하나 이상의 염료, 및 선택적으로 하나 이상의 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드)와 접촉시켜 개선된 외양, 변경된 외양, 및/또는 강화된 무결성을 갖는 모발, 피부 및/또는 손발톱을 제공하기 위한 방법 및 물질을 제공한다.
일부 경우, 접착 분자 및 다른 제제(예컨대, 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 핵산, 형광 모이어티, 항생제, 또는 다른 약물)는 모발, 피부 및/또는 손발톱에 순차적으로 적용될 수 있다. 예를 들어, 접착 분자 및 하나 이상의 인터로킹 금속 및/또는 하나 이상의 염료는 순차적으로 적용될 수 있고, 즉, 접착 분자가 모발, 피부 및/또는 손발톱(건성 조건 또는 습성 조건 하에)에 적용된 다음, 하나 이상의 인터로킹 금속 및/또는 하나 이상의 염료가 적용될 수 있다.
일부 경우, 접착 분자 및 다른 제제(예컨대, 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 핵산, 형광 모이어티, 항생제, 또는 다른 약물)는 함께 적용될 수 있다. 예를 들어, 접착 분자 및 하나 이상의 인터로킹 금속 및/또는 하나 이상의 염료는 서로 부착될 수 있고(예컨대, 서로 접합될 수 있고), 상기 복합체는 모발, 피부 및/또는 손발톱에 적용될 수 있다.
폴리펩티드는 홍합 접착 폴리펩티드 또는 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 중합체와 같은 접착 분자에 공유적으로 또는 비공유적으로 부착될 수 있다. 임의의 적절한 방법이 폴리펩티드를 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 접착 분자(예컨대, 폴리펩티드 또는 중합체)에 공유적으로 또는 비공유적으로 부착시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 케라틴 폴리펩티드, 콜라겐 폴리펩티드, 또는 알부민 폴리펩티드와 같은 폴리펩티드는 하나 이상의 배위 공유 결합, 공유 결합, 디설파이드 결합, 고에너지 결합, 수소 결합, 이온 결합, 또는 펩티드 결합을 통해 홍합 접착 폴리펩티드 또는 중합체와 같은 접착 분자에 화학적으로 접합될 수 있다. 일부 경우, 폴리펩티드는 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드(예컨대, 홍합 접착 폴리펩티드 또는 복수의 DOPA 잔기를 갖는 다른 폴리펩티드) 상에 존재하는 아민기에 화학적으로 접합될 수 있다. 그러한 아민기는 폴리펩티드의 N-말단, 폴리펩티드의 C-말단, 또는 폴리펩티드의 N-말단과 C-말단 사이에 위치할 수 있다.
일부 경우, 접합될 폴리펩티드는 접합 전에 활성화될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드(예컨대, 접착 분자, 케라틴 폴리펩티드, 또는 형광 발광 폴리펩티드)는 반응성 티올기의 혼입에 의해(예컨대, 트라우트 시약과 같은 2-이미노티올란과의 반응, 또는 하나의 말단에 N-석신이미딜 3-(2-피리딜디티오)-프로피오네이트(SPDP) 모이어티 및 다른 말단에 N-히드록시석신이미드 에스테르를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 중합체와의 반응, 및 티올을 활성화시키는 디티오트레이톨(DTT)과 같은 환원제를 이용한 SPDP 모이어티의 절단에 의해) 활성화될 수 있다. 예를 들어, 홍합 접착 폴리펩티드는 다른 곳(McCall et al., Bioconjugate Chem., 1:222-226 (1990))에 기재된 바와 같이 2-이미노티올란(예컨대, 트라우트 시약)과의 반응에 의해 티올화될 수 있다. 상기 반응 조건은 하나 이상의 티올로 활성화된 분자의 수율을 최대화하여 접합이 모발, 피부 및/또는 손발톱에의 결합을 방해할 가능성을 감소시키도록 달라질 수 있다. 형광 또는 비-형광 폴리펩티드를 이용한 티올 혼입의 정도는 다른 곳(Lacy et al., Analytical Biochemistry, 382:66-68 (2008))에 기재된 바와 같이 민감성 형광 분석을 이용하여 측정될 수 있다. 폴리펩티드 접합체는 DOPA 펩티드를 이용하여 직접 합성될 수 있거나 또는 재조합 FP의 꼬리에 부가될 수 있다(예컨대, 가교에 의해)
접착 분자 또는 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드)는 상기 폴리펩티드의 아민과 말레이미드기 및 반응성 N-히드록시석신이미드 에스테르를 함유하는 이작용성 시약(예컨대, 하나의 말단에 말레이미드기 및 다른 말단에 반응성 N-히드록시석신이미드 에스테르를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 중합체)과의 반응을 통해 하나 이상의 말레이미드기로 치환될 수 있다. 이후, 상기 말레이미드 치환된 폴리펩티드는 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 접착 분자(예컨대, 접착 폴리펩티드)의 티올기에 접합될 수 있다. 일부 경우, 말레이미드 치환된 접착 분자는 폴리펩티드의 티오기에 접합될 수 있다. 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드) 또는 접착 분자가 말레이미드기로 치환되는 정도는 다른 곳(Singh, Bioconjugate Chem., 5:348-351 (1994))에 기재된 바와 같이 달라질 수 있다.
접착 분자를 폴리펩티드에 접합시키는데 사용될 수 있는 접합 방법의 추가의 예는, 비제한적으로, 다른 곳(예컨대, Hermanson, G.T. Bioconjugate Techniques, Second Edition, 2008, Elsevier)에 기재된 것을 포함한다. 예컨대, 파트 I, 섹션 4 및 파트 II, 섹션 5를 참고한다.
일부 경우, 본원에 제공된 방법 및 물질을 사용하여 수득되는 색상 강도 또는 형광 신호는 다수의 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 형광 발광 폴리펩티드를 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 단일 접착 분자에 연결함으로써 향상될 수 있다.
일부 경우, 이 증폭은 먼저 다수의 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 형광 발광 폴리펩티드를 함유하는 중합체를 제조한 다음 이 중합체를 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 접착 분자(예컨대, 홍합 접착 폴리펩티드)에 연결함으로써 효과적으로 달성될 수 있다. 일부 경우, 중합체는 카제인 폴리펩티드와 같은 폴리펩티드에 연결된 다수의 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 형광 발광 폴리펩티드를 갖도록 형성될 수 있고, 이 중합체는 접착 분자와 함께 적용될 수 있다. 다수의 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 형광 발광 폴리펩티드를 함유하는 중합체를 형성하는데 사용될 수 있는 방법(예컨대, 중합 방법)의 예는, 비제한적으로, 다른 곳(예컨대, Hermanson, G.T. Bioconjugate Techniques, Second Edition, 2008, Elsevier)에 기재된 것을 포함한다. 예컨대, 파트 II, 섹션 25를 참고한다. 또한 미국 특허공개 제2010/0203533호; 미국 특허공개 제2013/0022555호(카제인 폴리펩티드에의 접합을 기술하는 섹션 포함); 미국 특허 제4,657,853호; 미국 특허 제7,220,405호, 미국 특허 제8,263,056호, 및 Hoshino et al., J. Biochem. 102:785 - 791 (1987)을 참고한다.
다수의 말레이미드기로 활성화된 접착 분자를 다수의 티올기를 함유하는 폴리펩티드에 접합시키는 것은 단량체성 접착 분자-폴리펩티드 접합체뿐만 아니라 상이한 많은 접착 분자 및 폴리펩티드를 함유하는 올리고머를 생산할 수 있다. 그러한 공유 연결된 올리고머의 분자량 분포는 변성 조건 하에 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의해 결정될 수 있다. 생성물의 분자량 분포는 접착 분자 및 폴리펩티드가 활성화되는 정도, 접합 반응의 pH(예컨대, 약 pH 5 내지 약 pH 7, 예컨대, pH 5 내지 6), 및 접합 반응에서 접착 분자 대 폴리펩티드의 비와 같은 많은 인자에 좌우된다.
상이한 수의 접착 분자 및 폴리펩티드를 함유하는 올리고머의 분자량 분포 외에도, 그러한 올리고머는 응집이라 불리는 비공유 상호작용을 통해 결합할 수 있다. 올리고머의 응집 상태는 천연 조건 하에 크기 배제 크로마토그래피 분석에 의해 결정될 수 있다. 응집을 최소화하기 위해, 접합 반응의 pH, 보관 pH, 및 이온 강도와 같은 인자뿐만 아니라 접착 분자 및 폴리펩티드(예컨대, 형광-방출 폴리펩티드)의 농도 및 활성화 정도가 조절될 수 있다. 전형적으로, 응집은 접합 반응의 pH가 약 pH 5 내지 약 pH 6일 때, 그리고 접합 반응이 약 pH 5 내지 약 pH 6.0에서 보관될 때 감소한다. 응집은 또한 전형적으로 이온 강도가 >5 mM, 예컨대, 50 mM일 때 최소화된다. 접착 분자 및 폴리펩티드의 더 낮은 농도, 예컨대, <1 mg/mL, <0.5 mg/mL, <0.2 mg/mL, 또는 <0.1 mg/mL가 또한 응집을 최소화할 수 있다.
접착 분자 및 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드) 간의 접합 반응은 또한 수득되는 접합체가 모발, 피부 및/또는 손발톱에서 통상적으로 발견되는 조건 하에 안정하고(예컨대, 1 내지 7일의 기간 동안, 또는 2, 3, 4주 이상과 같은 1주 이상 동안), 산화 또는 변색을 야기하지 않도록 수행된다.
일부 경우, 폴리펩티드는 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드와의 융합 또는 키메라 폴리펩티드로서 생산될 수 있으며, 이로써 융합 또는 키메라 폴리펩티드는 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 갖는다. 예를 들어, 이종 폴리펩티드 발현 기술 또는 합성 폴리펩티드 합성 기술이 전장 폴리펩티드 또는 이의 단편의 아미노산 서열 및 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 접착 분자(예컨대, 홍합 접착 폴리펩티드 또는 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 중합체와 같은 접착 분자)의 아미노산 서열을 갖는 단일 폴리펩티드 사슬을 생산하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 키메라 폴리펩티드는 전장 케라틴 폴리펩티드 또는 전장 케라틴 폴리펩티드와 적어도 약 90퍼센트 동일한 이의 단편 및 접착 분자(예컨대, 전장 홍합 접착 폴리펩티드 또는 전장 홍합 접착 폴리펩티드와 적어도 약 80 퍼센트 동일한 이의 단편 또는 표 1에 제시된 중합체와 같이 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 중합체)를 포함할 수 있다.
일부 경우, 단일 폴리펩티드 사슬은 (a) 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드)의 아미노산 서열 이후에 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드의 아미노산 서열 또는 (b) 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드의 아미노산 서열 이후에 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드)의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 일부 경우, 단일 폴리펩티드 사슬은 각각 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드)를 코딩하는 하나 이상(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)의 아미노산 서열 및 각각 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)의 아미노산 서열을 가질 수 있다.
일부 경우, 본원에 제공된 융합 또는 키메라 폴리펩티드는 다른 아미노산 서열(예컨대, 스페이서 또는 결합 잔기)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드)의 아미노산 서열 및 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드의 아미노산 서열을 갖는 융합 또는 키메라 폴리펩티드는 하나 이상의 부가적인 아미노산 잔기, 예컨대 글리신, 라이신, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파트산, 시스테인, 글루타민산, 글루타민, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 프롤린, 히스티딘, 발린, 세린, 티로신, 오르니틴, 타우린, 피로라이신, 또는 셀레오시스테인 잔기, 또는 아미노산 유도체(예컨대, 5-히드록시트립토판, L-디히드록시페닐알라닌, 또는 α-디플루오로메틸오르니틴)를 포함할 수 있다. 그러한 부가적인 아미노산 잔기는 스페이서(예컨대, 일련의 5개 이상의 글리신 잔기)가 되도록 설계될 수 있거나 또는 폴리펩티드 또는 다른 분자가 융합 또는 키메라 폴리펩티드에 화학적으로 접합되도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드(예컨대, 케라틴 폴리펩티드, 형광 발광 폴리펩티드, 또는 콜라겐 폴리펩티드)의 아미노산 서열 및 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드의 아미노산 서열을 갖는 융합 또는 키메라 폴리펩티드는 1,2, 3, 4, 5개 이상의 부가적인 라이신 잔기를 포함할 수 있고 이로써 하나 이상의 모발, 피부 및/또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 폴리펩티드(예컨대, 홍합 접착 폴리펩티드)는 융합 또는 키메라 폴리펩티드에 화학적으로 접합될 수 있다.
본원에 기재된 방법은 접착 분자 및 선택적으로 다른 제제(예컨대, 폴리펩티드)를 사용하여, 예를 들어, 히드록시아파타이트, 치환된 히드록시아파타이트, 무정형 인산칼슘, 플루오라이드, 칼슘, 마그네슘, 포스페이트, 철, 주석 이온, 이산화티타늄, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 발광 황화아연, 카민, 헤나, 구아닌, 엽납석, 운모, 및 이의 임의의 염 형태(예컨대, 나트륨 헥사메타포스페이트, 염화마그네슘, 황산제일철)로 구성된 착색 또는 미백 입자를 모발, 피부 및/또는 손발톱에 적용하여 모발, 피부 및/또는 손발톱의 색상 외관을 변경하는 것을 포함한다.
착색 또는 미백 입자는 나노입자 또는 마이크로입자, 또는 나노입자 또는 마이크로입자의 응집체일 수 있고, 크기가 1 나노미터(nm) 내지 100 마이크로미터(μm) 크기, 예컨대 1 nm 내지 50 μm, 1 nm 내지 20 μm, 5 nm 내지 20 μm, 10 nm 내지 20 μm, 1 nm 내지 10 μm, 5 nm 내지 10 μm, 10 nm 내지 10 μm , 1 nm 내지 1 μm, 5 nm 내지 1 μm, 10 nm 내지 1 μm, 100 nm 내지 1 μm, 1 nm 내지 500 nm, 1 nm 내지 250 nm, 1 nm 내지 125 nm, 1 nm 내지 100 nm, 1 nm 내지 75 nm, 1 nm 내지 50 nm, 5 nm 내지 500 nm, 5 nm 내지 250 nm, 5 nm 내지 125 nm, 5 nm 내지 100 nm, 5 nm 내지 75 nm, 5 nm 내지 50 nm, 5 nm 내지 20 nm, 10 nm 내지 150 nm, 10 nm 내지 125 nm, 10 nm 내지 100 nm, 10 nm 내지 75 nm, 10 nm 내지 50 nm, 또는 50 nm 내지 150 nm, 또는 50 nm 내지 125 nm 크기의 범위일 수 있다. 착색 또는 미백 입자는 운모, 히드록시아파타이트, 또는 이산화티타늄으로 구성될 수 있다. 다른 유용한 착색 또는 미백 입자는 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 발광 황화아연, 이산화규소, 지르코늄 실리케이트, 인산칼슘, 또는 산화아연으로 구성될 수 있다. 예컨대, 문헌[Photochem . Photobiol. Sci., 9, 495-509 (2010); 및 미국 특허 제6,004,567호]을 참고한다.
일부 경우, 접착 분자 및 착색 또는 미백 입자(또는 인터로킹 금속 또는 염료와 같은 다른 제제)는 순차적으로 적용될 수 있다. 예를 들어, 접착 분자는 모발, 피부 및/또는 손발톱에 적용된 다음, 착색 또는 미백 입자(또는 다른 화합물)가 적용될 수 있다. 일부 경우, 접착 분자 및 착색 또는 미백 입자(또는 다른 화합물)는 동시에 적용될 수 있다. 일부 경우, 접착 분자, 폴리펩티드, 및 착색 또는 미백 입자는 순차적으로 적용될 수 있다. 일부 경우, 접착 분자, 폴리펩티드, 및 착색 또는 미백 입자는 동시에 적용될 수 있다. 예를 들어, 착색 또는 미백 입자는 접착 분자 및 폴리펩티드를 함유하는 접합체에 결합될 수 있고, 착색 또는 미백 입자 및 접합체를 함유하는 복합체는 모발, 피부 및/또는 손발톱에 적용될 수 있다. 일부 경우, 인터로킹 금속 및/또는 염료와 조합된 착색 또는 미백 입자를 사용하는 것은 모발, 피부 및/또는 손발톱의 외관을 향상시키는 것을 도울 수 있다.
이산화티타늄, 산화철, 산화크롬, 또는 다른 입자가 사용되는 일부 경우, 입자는 이산화티타늄에 비-특이적으로 결합하는 알부민 또는 면역글로불린과 같은 하나 이상의 혈청 단백질로 코팅될 수 있고(예컨대, 입자를 혈청과 함께 인큐베이션함으로써), 상기 코팅된 입자는 접착 분자(예컨대, 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 중합체)와 조합하여 적용될 수 있다. 일부 경우, 혈청 단백질은 활성화되어 접착 분자/폴리펩티드 접합체에 화학적으로 접합된 다음, 혈청 단백질, 접착 분자, 및 폴리펩티드를 함유하는 접합체가 이산화티타늄, 산화철, 또는 산화크롬 입자와 같은 착색 또는 미백 입자에 결합할 수 있다.
접착 분자 및 하나 이상의 다른 분자를 함유하는 본원에 제공된 조성물(예컨대, 모발, 피부 또는 손발톱에 흔히 사용되는 다른 물질과 함께 컨디셔너(실란트 포함), 착색제, 향료, 자외선 차단제 등과 같이 항생제 또는 다른 치료 분자에 부착된 접착 분자를 함유하는 조성물)은 포유동물의 모발, 피부 및/또는 손발톱에 투여될 수 있다. 예를 들어, 접착 분자, 인터로킹 금속, 및 항생제를 함유하는 조성물은 겔로서 제형화될 수 있다. 일부 경우, 조성물은 하나 이상의 약제학적 부형제를 포함할 수 있다.
임의의 적절한 방법이 본원에 제공된 조성물을 모발, 피부 및/또는 손발톱에 전달하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 조성물은 샴푸, 컨디셔너, 헤어 젤, 무스, 로션, 오일, 자외선 차단제, 비누, 바디 워시, 향수 또는 매니큐어와 같은 모발, 피부, 또는 네일 케어 제품 또는 화장품 내에 혼입될 수 있다. 일부 경우, 조성물은 하나 이상의 약제학적 부형제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 접착 분자, 인터로킹 금속, 및 선택적으로 폴리펩티드를 함유하는 겔은 하나 이상의 증점제(예컨대, 미네랄 콜로이드 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)), 완충제, 계면활성제, 및/또는 항균제(예컨대, Triclosan 또는 염화아연)를 포함할 수 있다.
일부 경우, 본원에 제공된 조성물의 유효량은 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 개선하기 위해, 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 변화시키기 위해, 및/또는 모발, 피부 또는 손발톱의 무결성을 강화시키기 위해 모발, 피부 및/또는 손발톱에 전달될 수 있다.
접착 분자, 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 착색 또는 미백 입자, 이들의 조합, 또는 본원에 제공된 조성물의 유효량은 심각한 독성을 유발하지 않으면서 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 개선하고, 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 변경하고/거나 모발, 피부 또는 손발톱의 무결성을 강화시키는 임의의 양일 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 조성물은 화장품 또는 케어 제품의 그램 당 약 0.0001 mg 내지 약 100 mg(예컨대, 약 0.001 mg 내지 약 100 mg, 약 0.01 mg 내지 약 100 mg, 약 0.1 mg 내지 약 100 mg, 약 0.5 mg 내지 약 100 mg, 약 0.5 mg 내지 약 50 mg, 약 0.5 mg 내지 약 25 mg, 약 1 mg 내지 약 100 mg, 약 1 mg 내지 약 50 mg, 또는 약 1 mg 내지 약 25 mg)의 착색 화합물을 야기하는 양으로, 샴푸, 컨디셔너, 헤어 젤, 무스, 로션, 오일, 자외선 차단제, 비누, 바디 워시, 향수 또는 매니큐어와 같은 모발, 피부, 또는 네일 케어 제품 또는 화장품 내로 혼입될 수 있다. 상기 양은 특정 제형, 예컨대, 느린 방출 속도를 갖는 컨디셔닝 제제의 경우 더 높을 수 있는 것으로 이해될 것이다.
일부 경우, 본원에 제공된 조성물은 일정 기간 동안 모발, 피부 또는 손발톱에 적용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 조성물은 모발, 피부 또는 손발톱에 적용될 수 있고(예컨대, 직접 적용될 수 있고), 헹구지 않고 30초 내지 10분(예컨대, 30초 내지 5분, 30초 내지 2.5분, 30초 내지 2분, 1분 내지 10분, 2분 내지 10분, 또는 1분 내지 5분) 동안 모발, 피부 또는 손발톱과 접촉된 상태를 유지할 수 있다. 리브인(leave-in) 컨디셔닝 제제와 같은 일부 경우, 본원에 제공된 조성물은 상기 조성물이 모발, 피부 또는 손발톱을 흠뻑 적시도록 일정한 기간 동안 모발, 피부 또는 손발톱과 접촉하도록 허용될 수 있다. 본원에 기재된 조성물은 습윤 또는 건조 조건 하에 모발, 피부 또는 손발톱에 적용될 수 있다.
일부 경우, 사람의 모발, 피부 또는 손발톱은 본원에 제공된 조성물을 전달하기 전에 준비될 수 있다. 예를 들어, 사람의 모발, 피부 또는 손발톱은 본원에 제공된 조성물을 전달하기 전에 세정하거나, 브러시하거나, 광택을 낼 수 있다(예컨대, 부석(pumice)으로 광택을 낼 수 있음). 일부 경우, 처리될 모발, 피부 또는 손발톱의 표면은 모발, 피부 또는 손발톱 결합 부위를 노출시킬 수 있는 하나 이상의 제제로 처리될 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 조성물로 처리될 모발, 피부 또는 손발톱은 모발, 피부 또는 손발톱 상에 존재하는 결합 부위를 노출시키기 위해 EDTA, 인산, 아세톤, 또는 부석과 접촉될 수 있다.
일부 경우, 둘 이상의 단계 공정이 접착 분자 및 다른 제제를 모발, 피부 또는 손발톱에 적용하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 접착 분자(예컨대, 홍합 접착 폴리펩티드 또는 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 중합체)를 함유하는 조성물은 1단계로서 처리될 모발, 피부 또는 손발톱에 전달될 수 있으며, 이어서, 예를 들어, 접착 분자와 상호작용하거나 결합하는 능력을 가진 인터로킹 금속, 염료, 및/또는 폴리펩티드를 전달하는 단계가 뒤따를 수 있다. 일부 경우, 이러한 2단계는 폴리펩티드로부터 분리된 분자를 함유하는 단일 조성물을 이용하여 또는 하나의 조성물은 접착 분자를 함유하고 다른 조성물은 하나 이상의 다른 제제를 함유하는 별개의 조성물을 이용하여 동시에 수행될 수 있다.
일부 경우, 본원에 제공된 조성물 또는 본원에 제공된 조성물의 성분(예컨대, 홍합 접착 폴리펩티드 또는 복수의 DOPA 잔기를 함유하는 중합체)이 모발, 피부 또는 손발톱에 대해 결합 친화성을 갖는다는 것을 확인하기 위해 분석이 수행될 수 있다. 예를 들어, 시험 물질은 모발, 피부 또는 손발톱 매트릭스와 인큐베이션될 수 있고, 결합 후 용액 중의 물질의 양을 초기 농도와 비교하여 결합된 물질의 양을 차이에 의해 결정할 수 있다. 예컨대, 문헌[Raj et al., J. Biol . Chem ., 267:5968-5976 (1992)]을 참고한다. 폴리펩티드 물질의 경우, 용액 중의 폴리펩티드 농도는 비신코닌산 분석 및/또는 오르토-프탈알데하이드 아민 분석을 이용하여 측정될 수 있다. 결합 상수는 랭뮤어 모델(Bouropoulos and Moradian-Oldak, Calcif. Tissue Int ., 72:599-603 (2003))을 사용하여 결정될 수 있다.
임의의 적절한 방법이 모발, 피부 또는 손발톱 또는 모발, 피부 또는 손발톱 매트릭스에 대한 본원에 제공된 조성물의 친화성을 평가하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 결합된 조성물 및 비결합된 조성물이 정량될 수 있다.
임의의 적절한 방법이 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 변경하는 능력에 대해 본원에 제공된 조성물을 평가하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 육안 검사 기술이 본원에 제공된 조성물이 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 변경할 수 있는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 그러한 육안 검사 기술은 다른 곳(Paravina et al., J. Esthet . Restor . Dent., 19:276-283 (2007))에 기재된 바와 같이 비교를 위한 색 견본(shade guide)을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 일부 경우, 모발, 피부 또는 손발톱의 외관을 변경하는 본원에 제공된 조성물의 능력은 반사 분광광도법(reflectance spectrophotometry)을 사용하여 측정될 수 있다. 그러한 경우, 모발, 피부 또는 손발톱에 백색 광원을 비추고 반사 분광광도법(비색법)에 의해 상이한 파장에서 흡수된 광량에 대해 분석할 수 있다. 이후, 광원에서 필터링된 자외선으로 이러한 측정을 반복할 수 있다. UV 광의 포함 및 배제로 얻어진 반사율 값의 차이는 모발, 피부 또는 손발톱 표면의 UV 형광 스펙트럼이다. 일부 경우, 인터로킹 금속을 모발, 피부 또는 손발톱에 결합시키는 본원에 기재된 조성물의 능력은, 예를 들어, 주사 전자 현미경법, 프로필로메트리(profilometry), 또는 바이오패닝(biopanning)을 사용하여 관찰될 수 있다.
본원에 제공된 조성물은 상기 조성물을 사용하여 사람에게 낮은 독성 위험을 가질 수 있고, 인간 기원의 하나 이상의 폴리펩티드를 함유할 수 있으며, 식품 또는 음료 제품에 자연적으로 존재하는 하나 이상의 폴리펩티드를 함유할 수 있고/거나, 잠재적 독성 염료가 없을 수 있다.
본 문서는 또한 전달 구조체, 전달 구조체를 제조하는 방법, 및 전달 구조체를 사용하여 제제를 모발, 피부 또는 손발톱에 전달하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 중합체 박막은 3가지 상이한 중합체인 폴리메타크릴산(PMA), 폴리[에틸렌-co-(말레산 무수물)(PEMA), 및 폴리[부타디엔-co-(말레산 무수물)(PBMA)을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 폴리-L-DOPA-PMA 중합체는 PMA 용액을 함유하는 PBS 용액에 용해된 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 및 N-히드록시석신이미드를 사용하여 상이한 농도의 DOPA를 이용하여 합성될 수 있다. L-DOPA는 상기 중합체 용액에 첨가될 수 있고, 침전된 폴리(L-DOPA)를 건조하여 중합체를 생산할 수 있다.
중합체 박막은 합성된 폴리-L-DOPA-PEMA 및 폴리-L-DOPA-PBMA 중합체를 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 폴리[에틸렌-co-(말레산 무수물)] 및 폴리[부타디엔-co-(말레산 무수물)]은 별도로, 각각 에탄올 용액 중의 DOPA에 부가될 수 있다. 상기 반응은 집중적으로 가열되고 냉각되며, 침전된 중합체를 건조하여 중합체(예컨대, 메타크릴레이트 골격 상에 카테콜아민/라이신 중합체 모방체)를 생산할 수 있다.
박막을 생성하기 위해, 폴리-L-DOPA 용액은 트레이 상에 적층되고 얇은 시트로 동결될 수 있다. 상기 동결된 용액을 동결건조하여, 시트 구조를 유지하는 필름을 생산할 수 있다. 필름의 한쪽 면에, 모발, 피부 또는 손발톱에 전달하기 위한 제제 용액을 배치할 수 있다. 예를 들어, 컨디셔닝 또는 치료제의 층을 필름의 한쪽 면에 적용하여 모발, 피부 및 손발톱의 표면에 배치할 수 있다.
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 설명될 것이며, 이는 청구범위에 기재된 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
실시예
실시예 1 - 모발 염색에 사용하기 위해 인터로킹 금속을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
22.6 kDa 홍합 접착 폴리펩티드(MAP-22)를 트라우트 시약(2-이미노티올란(IT))을 사용하여 라이신 잔기를 티올화시킴으로써 접합을 위해 활성화시킨다. MAP-22(0.4 mg/mL)를 MAP-22의 DOPA 잔기가 산화하는 것을 방지하기 위해 나트륨 보레이트의 존재하에 실온에서 40분간 pH 8에서 1.8 mM 또는 5 mM IT와 함께 인큐베이션한다. 상이한 수의 티올이 부착된 MAP-22-Hi-SH(5 mM IT) 및 MAP-22-Lo-SH(1.8 mM IT)를 이용하여 MAP-22의 두 개의 배치(batch)를 생산한다.
이 경우, Cu가 착색제로서 사용되지만, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 또는 발광 황화아연과 같은 유사한 금속이 Cu 대신에 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/Cu 비율로 MAP-Lo-SH + Cu를 함유하는 3가지 반응.
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/Cu 비율로 MAP-Hi-SH + Cu를 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 모발에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 모발 샘플을 물로 헹구고, 샘플을 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 2 - 손발톱 착색에 사용하기 위해 인터로킹 금속을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
MAP-22를 트라우트 시약(2-이미노티올란(IT))을 사용하여 라이신 잔기를 티올화시킴으로써 접합을 위해 활성화시킨다. MAP-22(0.4 mg/mL)를 MAP-22의 DOPA 잔기가 산화하는 것을 방지하기 위해 나트륨 보레이트의 존재하에 실온에서 40분간 pH 8에서 1.8 mM 또는 5 mM IT와 함께 인큐베이션한다. 상이한 수의 티올이 부착된 MAP-22-Hi-SH(5 mM IT) 및 MAP-22-Lo-SH(1.8 mM IT)를 이용하여 MAP-22의 두 개의 배치(batch)를 생산한다.
이 경우, Cu가 착색제로서 사용되지만, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 또는 발광 황화아연과 같은 유사한 금속이 Cu 대신에 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/Cu 비율로 MAP-Lo-SH + Cu를 함유하는 3가지 반응.
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/Cu 비율로 MAP-Hi-SH + Cu를 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 손발톱에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 손발톱 샘플을 물로 헹구고, 샘플을 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 3 - 피부 착색에 사용하기 위해 인터로킹 금속을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
MAP-22를 트라우트 시약(2-이미노티올란(IT))을 사용하여 라이신 잔기를 티올화시킴으로써 접합을 위해 활성화시킨다. MAP-22(0.4 mg/mL)를 MAP-22의 DOPA 잔기가 산화하는 것을 방지하기 위해 나트륨 보레이트의 존재하에 실온에서 40분간 pH 8에서 1.8 mM 또는 5 mM IT와 함께 인큐베이션한다. 상이한 수의 티올이 부착된 MAP-22-Hi-SH(5 mM IT) 및 MAP-22-Lo-SH(1.8 mM IT)를 이용하여 MAP-22의 두 개의 배치(batch)를 생산한다.
이 경우, Cu가 착색제로서 사용되지만, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 또는 발광 황화아연과 같은 유사한 금속이 Cu 대신에 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/Cu 비율로 MAP-Lo-SH + Cu를 함유하는 3가지 반응.
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/Cu 비율로 MAP-Hi-SH + Cu를 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 피부에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 피부 샘플을 물로 헹구고, 샘플을 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 4 - 모발 염색에 사용하기 위해 미네랄 및 염료를 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
MAP-22를 트라우트 시약(2-이미노티올란(IT))을 사용하여 라이신 잔기를 티올화시킴으로써 접합을 위해 활성화시킨다. MAP-22(0.4 mg/mL)를 MAP-22의 DOPA 잔기가 산화하는 것을 방지하기 위해 나트륨 보레이트의 존재하에 실온에서 40분간 pH 8에서 1.8 mM 또는 5 mM IT와 함께 인큐베이션하였다. 상이한 수의 티올이 부착된 MAP-22-Hi-SH(5 mM IT) 및 MAP-22-Lo-SH(1.8 mM IT)를 이용하여 MAP-22의 두 개의 배치(batch)를 생산한다.
이 경우, 카민이 착색제로서 사용되지만, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모와 같은 유사한 미네랄 및 염료가 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-Lo-SH + 카민을 함유하는 3가지 반응.
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-Hi-SH + 카민을 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 모발에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 모발 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 5 - 손발톱 착색에 사용하기 위해 미네랄 및 염료를 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
MAP-22를 트라우트 시약(2-이미노티올란(IT))을 사용하여 라이신 잔기를 티올화시킴으로써 접합을 위해 활성화시킨다. MAP-22(0.4 mg/mL)를 MAP-22의 DOPA 잔기가 산화하는 것을 방지하기 위해 나트륨 보레이트의 존재하에 실온에서 40분간 pH 8에서 1.8 mM 또는 5 mM IT와 함께 인큐베이션한다. 상이한 수의 티올이 부착된 MAP-22-Hi-SH(5 mM IT) 및 MAP-22-Lo-SH(1.8 mM IT)를 이용하여 MAP-22의 두 개의 배치(batch)를 생산한다.
이 경우, 카민이 착색제로서 사용되지만, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모와 같은 유사한 미네랄 및 염료가 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-Lo-SH + 카민을 함유하는 3가지 반응.
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-Hi-SH + 카민을 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 손발톱에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 손발톱 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 6 - 피부 착색에 사용하기 위해 미네랄 및 염료를 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
MAP-22를 트라우트 시약(2-이미노티올란(IT))을 사용하여 라이신 잔기를 티올화시킴으로써 접합을 위해 활성화시킨다. MAP-22(0.4 mg/mL)를 MAP-22의 DOPA 잔기가 산화하는 것을 방지하기 위해 나트륨 보레이트의 존재하에 실온에서 40분간 pH 8에서 1.8 mM 또는 5 mM IT와 함께 인큐베이션하였다. 상이한 수의 티올이 부착된 MAP-22-Hi-SH(5 mM IT) 및 MAP-22-Lo-SH(1.8 mM IT)를 이용하여 MAP-22의 두 개의 배치(batch)를 생산한다.
이 경우, 카민이 착색제로서 사용되지만, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모와 같은 유사한 미네랄 및 염료가 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-Lo-SH + 카민을 함유하는 3가지 반응.
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-Hi-SH + 카민을 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 피부에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 피부 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 7 - 모발 염색에 사용하기 위해 인터로킹 금속 및 스캐폴딩 단백질로서 케라틴을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
분자의 크기를 증가시키기 위한 스캐폴드 중합체로서 사용되는 케라틴을 제조하고 하기와 같이 활성화시킨다. 스캐폴드 중합체 케라틴을 2개의 배치로 분할한다: 하나의 배치는 스캐폴드 중합체에 티올기를 부가하기 위해 트라우트 시약(2-이미노티올란 또는 2-IT)으로 활성화시키고, 두 번째 배치는 스캐폴드 중합체 케라틴에 말레이미드기를 부가하기 위하여 MAL-dPEG4-NHS 에스테르로 활성화시킨다.
트라우트 시약을 이용한 스캐폴드 중합체 케라틴의 활성화는 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈-20을 함유하는 50 mM 보레이트 완충액 pH 8.0에서 수행한다. 이미노티올란의 최종 농도는 45 mM이다. 스캐폴드 중합체 케라틴은 1 mg/mL로 유지한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 반응하지 않은 IT를 50 mM 포스페이트 완충액, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20 pH 7.0에서 겔 여과에 의해 반응으로부터 제거한다. 말레이미드 반응에서, 스캐폴드 중합체 케라틴은 1 mg/mL의 농도이고, MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 첨가하여 50 mM 포스페이트, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20의 완충액 중에 3 mg/mL의 최종 농도를 생성한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 접합된 물질의 생성된 반응을 정제하기 위해, 반응하지 않은 MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 5 mM MES, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20, pH 6에서 세파덱스 G25 컬럼(GE Healthcare) 상에서 겔 여과 크로마토그래피에 의해 스캐폴드 중합체 케라틴으로부터 분리한다.
이후, 2개의 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 함께 반응시켜 폴리-스캐폴드 중합체를 형성한다. 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 스캐폴드 중합체 케라틴-말레이미드 및 스캐폴드 중합체 케라틴-SH의 1:3 비율로 조합하고 50 mM 포스페이트 완충액, pH 7.0, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 상기 반응을 NMM으로 ??칭한다. 샘플을 농축하고 크기 배제 컬럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 적용하여 상이한 크기의 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 분리하고 반응하지 않은 스캐폴드 중합체 케라틴을 제거한다.
폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 MAP-22-SH와 반응시키기 위해, 220 kDa를 초과하는 분자량을 갖는 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴 분획을 사용한다. 중합체성 스캐폴드 중합체 케라틴을 pH 7의 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 50 mM 포스페이트 완충액에서 0.33 mg/mL MAL-dPEG4-NHS 에스테르와의 반응에 의해 활성화시킨다. 반응하지 않은 시약을 겔 여과에 의해 제거한 후, 상이한 MAP-22/폴리-케라틴 비율(MAP-22:케라틴; 4:1; 2:1; 1:1; 1:2; 1:4)로 MAP-22-SH(5 mM 이미노티올란으로 활성화됨)와 반응시킨다.
이러한 조건 하에, 중합체성 스캐폴딩 단백질 케라틴을 코팅하기에 충분한 물질이 있으며, 추가적인 중합 또는 응집 후 침전이 일어나지 않을 수 있다.
이 경우, Cu가 착색제로서 사용되지만, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 또는 발광 황화아연과 같은 유사한 금속이 Cu 대신에 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22:케라틴/Cu 비율로 MAP-22:케라틴 + Cu를 함유하는 3가지 반응.
이 화합물을 모발에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 모발 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 8 - 손발톱 착색에 사용하기 위해 인터로킹 금속 및 스캐폴딩 단백질로서 케라틴을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
분자의 크기를 증가시키기 위한 스캐폴드 중합체로서 사용되는 케라틴을 제조하고 하기와 같이 활성화시킨다. 스캐폴드 중합체 케라틴을 2개의 배치로 분할한다: 하나의 배치는 스캐폴드 중합체에 티올기를 부가하기 위해 트라우트 시약(2-이미노티올란 또는 2-IT)으로 활성화시키고, 두 번째 배치는 스캐폴드 중합체 케라틴에 말레이미드기를 부가하기 위하여 MAL-dPEG4-NHS 에스테르로 활성화시킨다.
트라우트 시약을 이용한 스캐폴드 중합체 케라틴의 활성화는 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈-20을 함유하는 50 mM 보레이트 완충액 pH 8.0에서 수행한다. 이미노티올란의 최종 농도는 45 mM이다. 스캐폴드 중합체 케라틴은 1 mg/mL로 유지한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 반응하지 않은 IT를 50 mM 포스페이트 완충액, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20 pH 7.0에서 겔 여과에 의해 반응으로부터 제거한다. 말레이미드 반응에서, 스캐폴드 중합체 케라틴은 1 mg/mL의 농도이고, MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 첨가하여 50 mM 포스페이트, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20의 완충액 중에 3 mg/mL의 최종 농도를 생성한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 접합된 물질의 생성된 반응을 정제하기 위해, 반응하지 않은 MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 5 mM MES, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20, pH 6에서 세파덱스 G25 컬럼(GE Healthcare) 상에서 겔 여과 크로마토그래피에 의해 스캐폴드 중합체 케라틴으로부터 분리한다.
이후, 2개의 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 함께 반응시켜 폴리-스캐폴드 중합체를 형성한다. 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 스캐폴드 중합체 케라틴-말레이미드 및 스캐폴드 중합체 케라틴-SH의 1:3 비율로 조합하고 50 mM 포스페이트 완충액, pH 7.0, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 상기 반응을 NMM으로 ??칭한다. 샘플을 농축하고 크기 배제 컬럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 적용하여 상이한 크기의 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 분리하고, 반응하지 않은 스캐폴드 중합체 케라틴을 제거한다.
폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 MAP-22-SH와 반응시키기 위해, 220 kDa를 초과하는 분자량을 갖는 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴 분획을 사용한다. 중합체성 스캐폴드 중합체 케라틴을 pH 7의 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 50 mM 포스페이트 완충액에서 0.33 mg/mL MAL-dPEG4-NHS 에스테르와의 반응에 의해 활성화시킨다. 반응하지 않은 시약을 겔 여과에 의해 제거한 후, 상이한 MAP-22/폴리-케라틴 비율(MAP-22:케라틴; 4:1; 2:1; 1:1; 1:2; 1:4)로 MAP-22-SH(5 mM 이미노티올란으로 활성화됨)와 반응시킨다.
이러한 조건 하에, 중합체성 스캐폴딩 단백질 케라틴을 코팅하기에 충분한 물질이 있으며, 추가적인 중합 또는 응집 후 침전이 일어나지 않을 수 있다.
이 경우, Cu가 착색제로서 사용되지만, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 또는 발광 황화아연과 같은 유사한 금속이 Cu 대신에 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22:케라틴/Cu 비율로 MAP-22:케라틴 + Cu를 함유하는 3가지 반응.
이 화합물을 손발톱에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 손발톱 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 9 - 피부 착색에 사용하기 위해 인터로킹 금속 및 스캐폴딩 단백질로서 알부민을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
분자의 크기를 증가시키기 위한 스캐폴드 중합체로서 사용되는 알부민을 제조하고 하기와 같이 활성화시킨다. 스캐폴드 중합체 알부민을 2개의 배치로 분할한다: 하나의 배치는 스캐폴드 중합체에 티올기를 부가하기 위해 트라우트 시약(2-이미노티올란 또는 2-IT)으로 활성화시키고, 두 번째 배치는 스캐폴드 중합체 알부민에 말레이미드기를 부가하기 위하여 MAL-dPEG4-NHS 에스테르로 활성화시킨다.
트라우트 시약을 이용한 스캐폴드 중합체 알부민의 활성화를 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈-20을 함유하는 50 mM 보레이트 완충액 pH 8.0에서 수행한다. 이미노티올란의 최종 농도는 45 mM이다. 스캐폴드 중합체 알부민을 1 mg/mL로 유지한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 반응하지 않은 IT를 50 mM 포스페이트 완충액, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20 pH 7.0에서 겔 여과에 의해 반응으로부터 제거한다. 말레이미드 반응에서, 스캐폴드 중합체 알부민은 1 mg/mL의 농도이고, MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 첨가하여 50 mM 포스페이트, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20의 완충액 중에 3 mg/mL의 최종 농도를 생성한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 접합된 물질의 생성된 반응을 정제하기 위해, 반응하지 않은 MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 5 mM MES, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20, pH 6에서 세파덱스 G25 컬럼(GE Healthcare) 상에서 겔 여과 크로마토그래피에 의해 스캐폴드 중합체 알부민으로부터 분리한다.
이후, 2개의 활성화된 스캐폴드 중합체 알부민 종을 함께 반응시켜 폴리-스캐폴드 중합체를 형성한다. 활성화된 스캐폴드 중합체 알부민 종을 스캐폴드 중합체 알부민-말레이미드 및 스캐폴드 중합체 알부민-SH의 1:3 비율로 조합하고 50 mM 포스페이트 완충액, pH 7.0, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 상기 반응을 NMM으로 ??칭한다. 샘플을 농축하고 크기 배제 컬럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 적용하여 상이한 크기의 폴리-스캐폴드 중합체 알부민을 분리하고 반응하지 않은 스캐폴드 중합체 알부민을 제거한다.
폴리-스캐폴드 중합체 알부민을 MAP-22-SH와 반응시키기 위해, 220 kDa를 초과하는 분자량을 갖는 폴리-스캐폴드 중합체 알부민 분획을 사용한다. 중합체성 스캐폴드 중합체 알부민을 pH 7의 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 50 mM 포스페이트 완충액에서 0.33 mg/mL MAL-dPEG4-NHS 에스테르와의 반응에 의해 활성화시킨다. 반응하지 않은 시약을 겔 여과에 의해 제거한 후, 상이한 MAP-22/폴리-알부민 비율(MAP-22:알부민; 4:1; 2:1; 1:1; 1:2; 1:4)로 MAP-22-SH(5 mM 이미노티올란으로 활성화됨)와 반응시킨다.
이러한 조건 하에, 중합체성 스캐폴딩 단백질 알부민을 코팅하기에 충분한 물질이 있으며, 추가적인 중합 또는 응집 후 침전이 일어나지 않을 수 있다.
이 경우, Cu가 착색제로서 사용되지만, 비스무트 옥시클로라이드, 산화철, 산화크롬, 은, 알루미늄, 브론즈, 구리, 망간, 산화아연, 또는 발광 황화아연과 같은 유사한 금속이 Cu 대신에 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22:알부민/Cu 비율로 MAP-22:알부민 + Cu를 함유하는 3가지 반응.
이 화합물을 피부에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 피부 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 10 - 모발 염색에 사용하기 위해 미네랄/염료 및 스캐폴딩 단백질로서 케라틴을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
분자의 크기를 증가시키기 위한 스캐폴드 중합체로서 사용되는 케라틴을 제조하고 하기와 같이 활성화시킨다. 스캐폴드 중합체 케라틴을 2개의 배치로 분할한다: 하나의 배치는 스캐폴드 중합체에 티올기를 부가하기 위해 트라우트 시약(2-이미노티올란 또는 2-IT)으로 활성화시키고, 두 번째 배치는 스캐폴드 중합체 케라틴에 말레이미드기를 부가하기 위하여 MAL-dPEG4-NHS 에스테르로 활성화시킨다.
트라우트 시약을 이용한 스캐폴드 중합체 케라틴의 활성화는 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈-20을 함유하는 50 mM 보레이트 완충액 pH 8.0에서 수행한다. 이미노티올란의 최종 농도는 45 mM이다. 스캐폴드 중합체 케라틴을 1 mg/mL로 유지한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 반응하지 않은 IT를 50 mM 포스페이트 완충액, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20 pH 7.0에서 겔 여과에 의해 반응으로부터 제거한다. 말레이미드 반응에서, 스캐폴드 중합체 케라틴은 1 mg/mL의 농도이고, MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 첨가하여 50 mM 포스페이트, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20의 완충액 중에 3 mg/mL의 최종 농도를 생성한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 접합된 물질의 생성된 반응을 정제하기 위해, 반응하지 않은 MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 5 mM MES, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20, pH 6에서 세파덱스 G25 컬럼(GE Healthcare) 상에서 겔 여과 크로마토그래피에 의해 스캐폴드 중합체 케라틴으로부터 분리한다.
이후, 2개의 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 함께 반응시켜 폴리-스캐폴드 중합체를 형성한다. 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 스캐폴드 중합체 케라틴-말레이미드 및 스캐폴드 중합체 케라틴-SH의 1:3 비율로 조합하고 50 mM 포스페이트 완충액, pH 7.0, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 상기 반응을 NMM으로 ??칭한다. 샘플을 농축하고 크기 배제 컬럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 적용하여 상이한 크기의 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 분리하고, 반응하지 않은 스캐폴드 중합체 케라틴을 제거한다.
폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 MAP-22-SH와 반응시키기 위해, 220 kDa를 초과하는 분자량을 갖는 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴 분획을 사용한다. 중합체성 스캐폴드 중합체 케라틴을 pH 7의 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 50 mM 포스페이트 완충액에서 0.33 mg/mL MAL-dPEG4-NHS 에스테르와의 반응에 의해 활성화시킨다. 반응하지 않은 시약을 겔 여과에 의해 제거한 후, 상이한 MAP-22/폴리-케라틴 비율(MAP-22:케라틴; 4:1; 2:1; 1:1; 1:2; 1:4)로 MAP-22-SH(5 mM 이미노티올란으로 활성화됨)와 반응시킨다.
이러한 조건 하에, 중합체성 스캐폴딩 단백질 케라틴을 코팅하기에 충분한 물질이 있으며, 추가적인 중합 또는 응집 후 침전이 일어나지 않을 수 있다.
이 경우, 카민이 착색제로서 사용되지만, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모와 같은 유사한 미네랄 및 염료가 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-22:케라틴+ 카민을 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 모발에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 모발 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 11 - 손발톱 착색에 사용하기 위해 미네랄/염료 및 스캐폴딩 단백질로서 케라틴을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
분자의 크기를 증가시키기 위한 스캐폴드 중합체로서 사용되는 케라틴을 제조하고 하기와 같이 활성화시킨다. 스캐폴드 중합체 케라틴을 2개의 배치로 분할한다: 하나의 배치는 스캐폴드 중합체에 티올기를 부가하기 위해 트라우트 시약(2-이미노티올란 또는 2-IT)으로 활성화시키고, 두 번째 배치는 스캐폴드 중합체 케라틴에 말레이미드기를 부가하기 위하여 MAL-dPEG4-NHS 에스테르로 활성화시킨다.
트라우트 시약을 이용한 스캐폴드 중합체 케라틴의 활성화는 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈-20을 함유하는 50 mM 보레이트 완충액 pH 8.0에서 수행한다. 이미노티올란의 최종 농도는 45 mM이다. 스캐폴드 중합체 케라틴을 1 mg/mL로 유지한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 반응하지 않은 IT를 50 mM 포스페이트 완충액, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20 pH 7.0에서 겔 여과에 의해 반응으로부터 제거한다. 말레이미드 반응에서, 스캐폴드 중합체 케라틴은 1 mg/mL의 농도이고, MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 첨가하여 50 mM 포스페이트, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20의 완충액 중에 3 mg/mL의 최종 농도를 생성한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 접합된 물질의 생성된 반응을 정제하기 위해, 반응하지 않은 MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 5 mM MES, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20, pH 6에서 세파덱스 G25 컬럼(GE Healthcare) 상에서 겔 여과 크로마토그래피에 의해 스캐폴드 중합체 케라틴으로부터 분리한다.
이후, 2개의 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 함께 반응시켜 폴리-스캐폴드 중합체를 형성한다. 활성화된 스캐폴드 중합체 케라틴 종을 스캐폴드 중합체 케라틴-말레이미드 및 스캐폴드 중합체 케라틴-SH의 1:3 비율로 조합하고 50 mM 포스페이트 완충액, pH 7.0, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 상기 반응을 NMM으로 ??칭한다. 샘플을 농축하고 크기 배제 컬럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 적용하여 상이한 크기의 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 분리하고, 반응하지 않은 스캐폴드 중합체 케라틴을 제거한다.
폴리-스캐폴드 중합체 케라틴을 MAP-22-SH와 반응시키기 위해, 220 kDa를 초과하는 분자량을 갖는 폴리-스캐폴드 중합체 케라틴 분획을 사용한다. 중합체성 스캐폴드 중합체 케라틴을 pH 7의 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 50 mM 포스페이트 완충액에서 0.33 mg/mL MAL-dPEG4-NHS 에스테르와의 반응에 의해 활성화시킨다. 반응하지 않은 시약을 겔 여과에 의해 제거한 후, 상이한 MAP-22/폴리-케라틴 비율(MAP-22:케라틴; 4:1; 2:1; 1:1; 1:2; 1:4)로 MAP-22-SH(5 mM 이미노티올란으로 활성화됨)와 반응시킨다.
이러한 조건 하에, 중합체성 스캐폴딩 단백질 케라틴을 코팅하기에 충분한 물질이 있으며, 추가적인 중합 또는 응집 후 침전이 일어나지 않을 수 있다.
이 경우, 카민이 착색제로서 사용되지만, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모와 같은 유사한 미네랄 및 염료가 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-22:케라틴+ 카민을 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 손발톱에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 손발톱 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 12 - 피부 착색에 사용하기 위해 미네랄/염료 및 스캐폴딩 단백질로서 알부민을 사용하여 착색 화합물을 제조하는 방법
분자의 크기를 증가시키기 위한 스캐폴드 중합체로서 사용되는 알부민을 제조하고 하기와 같이 활성화시킨다. 스캐폴드 중합체 알부민을 2개의 배치로 분할한다: 하나의 배치는 스캐폴드 중합체에 티올기를 부가하기 위해 트라우트 시약(2-이미노티올란 또는 2-IT)으로 활성화시키고, 두 번째 배치는 스캐폴드 중합체 알부민에 말레이미드기를 부가하기 위하여 MAL-dPEG4-NHS 에스테르로 활성화시킨다.
트라우트 시약을 이용한 스캐폴드 중합체 알부민의 활성화를 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈-20을 함유하는 50 mM 보레이트 완충액 pH 8.0에서 수행한다. 이미노티올란의 최종 농도는 45 mM이다. 스캐폴드 중합체 알부민을 1 mg/mL로 유지한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 반응하지 않은 IT를 50 mM 포스페이트 완충액, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20 pH 7.0에서 겔 여과에 의해 반응으로부터 제거한다. 말레이미드 반응에서, 스캐폴드 중합체 알부민은 1 mg/mL의 농도이고, MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 첨가하여 50 mM 포스페이트, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20의 완충액 중에 3 mg/mL의 최종 농도를 생성한다. 상기 반응을 실온에서 40분간 인큐베이션한다. 접합된 물질의 생성된 반응을 정제하기 위해, 반응하지 않은 MAL-dPEG4-NHS 에스테르를 5 mM MES, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20, pH 6에서 세파덱스 G25 컬럼(GE Healthcare) 상에서 겔 여과 크로마토그래피에 의해 스캐폴드 중합체 케라틴으로부터 분리한다.
이후, 2개의 활성화된 스캐폴드 중합체 알부민 종을 함께 반응시켜 폴리-스캐폴드 중합체를 형성한다. 활성화된 스캐폴드 중합체 알부민 종을 스캐폴드 중합체 알부민-말레이미드 및 스캐폴드 중합체 알부민-SH의 1:3 비율로 조합하고 50 mM 포스페이트 완충액, pH 7.0, 2 mM EDTA, 및 0.05% 트윈-20에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 상기 반응을 NMM으로 ??칭한다. 샘플을 농축하고 크기 배제 컬럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 적용하여 상이한 크기의 폴리-스캐폴드 중합체 알부민을 분리하고, 반응하지 않은 스캐폴드 중합체 알부민을 제거한다.
폴리-스캐폴드 중합체 알부민을 MAP-22-SH와 반응시키기 위해, 220 kDa를 초과하는 분자량을 갖는 폴리-스캐폴드 중합체 알부민 분획을 사용한다. 중합체성 스캐폴드 중합체 알부민을 pH 7의 2 mM EDTA 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 50 mM 포스페이트 완충액에서 0.33 mg/mL MAL-dPEG4-NHS 에스테르와의 반응에 의해 활성화시킨다. 반응하지 않은 시약을 겔 여과에 의해 제거한 후, 상이한 MAP-22/폴리-알부민 비율(MAP-22:알부민; 4:1; 2:1; 1:1; 1:2; 1:4)로 MAP-22-SH(5 mM 이미노티올란으로 활성화됨)와 반응시킨다.
이러한 조건 하에, 중합체성 스캐폴딩 단백질 알부민을 코팅하기에 충분한 물질이 있으며, 추가적인 중합 또는 응집 후 침전이 일어나지 않을 수 있다.
이 경우, 카민이 착색제로서 사용되지만, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모와 같은 유사한 미네랄 및 염료가 사용될 수 있다. 하기를 포함하는 일련의 소규모 조합 반응을 수행한다:
3:1, 1:1, 및 1:3의 MAP-22/카민 비율로 MAP-22:알부민+ 카민을 함유하는 3가지 반응.
반응 생성물을 피부에 적용하고 실온에서 20분간 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 피부 샘플을 물로 헹구고 착색 효과에 대해 분석한다.
실시예 13 - 전달 구조체로서 사용하기 위한 얇은 중합체 접착 필름을
제조하는 방법
폴리 DOPA를 3개의 상이한 중합체인 폴리메타크릴산(PMA), 폴리[에틸렌-co-(말레산 무수물)(PEMA), 및 폴리[부타디엔-co-(말레산 무수물)(PBMA)을 사용하여 합성하였다.
폴리-L-DOPA-PMA 중합체를 상이한 농도의 DOPA를 사용하여 합성하였다. 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드(EDC; 0.5 g) 및 N-히드록시석신이미드(NHS; 0.5 g)를 2.5 g의 PMA(MW 9.5 kDa, Sigma) 용액을 함유하는 PBS 용액에 용해시켰다. 상기 용액을 실온에서 4시간 동안 혼합한 후, L-DOPA(PMA1의 경우 0 g, PMA2의 경우 0.25 g, 및 PMA3의 경우 0.75 g)를 각각의 중합체 용액에 첨가하였다(표 3). 상기 반응 부피를 PBS를 이용하여 10 mL로 조정하고, 상기 반응을 약 2시간 동안 교반하였다. 이후, 침전된 반응 생성물을 에탄올로 잘 세척하고, 침전된 폴리(L-DOPA)를 건조하고, 생성물을 진공 건조기에 보관하였다.
폴리-L-DOPA-PEMA 및 폴리-L-DOPA-PBMA 중합체를 하기와 같이 합성하였다. 냉수 응축기가 부착된 둥근 바닥 플라스크에서, 0.5 g의 각 중합체, 폴리[에틸렌-co-(말레산 무수물)] 1:1(PEMA, MW, 400 kDa, Polysciences) 및 폴리[부타디엔-co-(말레산 무수물)] 1:1(PBMA, MW 10-15 kDa, Polysciences)를 50 mL 에탄올 중의 0.65 g DOPA에 첨가하였다. 상기 반응을 일정하게 교반하면서 12시간 동안 물 또는 오일 배스에서 핫 플레이트 상에서 70-90℃에서 환류하였다. 12시간 후, 상기 반응을 실온으로 냉각하고, 침전된 중합체를 건조하고, 진공 건조기에 보관하였다(표 3).
[표 3]
PMA, PEMA 및 PBMA를 이용한 폴리-L-DOPA의 합성.
Figure pct00005
이들 결과는 원하는 높은 L-DOPA 함량을 갖는 중합체가 생성될 수 있다는 것을 입증하였다.
박막을 생성하기 위해, 폴리-L-DOPA 용액을 스테인레스 스틸 트레이 상에 적층하고 용액의 결정 구조가 시트와 유사하도록 동결한다. 상기 동결된 용액을 건조하고, 승화 및 해동 후 박막은 그의 시트 구조를 유지할 것으로 예상된다. 필름의 한쪽 면에, 제제 용액을 전달을 위해 배치할 수 있다. 상기 박막은 그의 높은 L-DOPA 함량으로 인해 모발, 손발톱, 및/또는 피부에 부착될 수 있다.
다른 구현예
본 발명이 이의 상세한 설명과 관련하여 설명되었지만, 전술한 설명은 예시하기 위한 것이며 첨부된 청구범위의 범위에 의해 정의되는 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아닌 것으로 이해되어야 한다. 다른 양태, 이점, 및 변형이 하기 청구범위의 범위에 속한다.
SEQUENCE LISTING <110> SafeWhite, Inc. <120> METHODS AND MATERIALS FOR DELIVERING AGENTS TO HAIR, SKIN, OR NAILS <130> 29673-0012WO1 <150> US 62/051,723 <151> 2014-09-17 <160> 37 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 231 <212> DNA <213> Mytilus galloprovincialis <400> 1 agttctgaag aatacaaagg tggttattac ccaggcaata cttaccacta tcattcaggt 60 ggtagttatc acggatccgg ctatcatgga ggatataagg gaaagtatta cggaaaggca 120 aagaaatact attataaata taaaaacagc ggaaaataca agtatctgaa gaaagctaga 180 aaataccata gaaagggtta caagaagtat tatggaggtg gtagcagtta g 231 <210> 2 <211> 76 <212> PRT <213> Mytilus galloprovincialis <400> 2 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His 1 5 10 15 Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr 20 25 30 Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys 35 40 45 Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg 50 55 60 Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser 65 70 75 <210> 3 <211> 98 <212> PRT 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Met Arg Ile Lys Val Val Glu 35 40 45 Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Phe Asp Ile Leu Ala Thr Ser Phe Leu 50 55 60 Tyr Gly Ser Lys Thr Phe Ile Asn His Thr Gln Gly Ile Pro Asp Phe 65 70 75 80 Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Thr Thr 85 90 95 Tyr Glu Asp Gly Gly Val Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln 100 105 110 Asp Gly Cys Leu Ile Tyr Asn Val Lys Ile Arg Gly Val Asn Phe Thr 115 120 125 Ser Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Ala Phe 130 135 140 Thr Glu Thr Leu Tyr Pro Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Asn Asp 145 150 155 160 Met Ala Leu Lys Leu Val Gly Gly Ser His Leu Ile Ala Asn Ile Lys 165 170 175 Thr Thr Tyr Arg Ser Lys Lys Pro Ala Lys Asn Leu Lys Met Pro Gly 180 185 190 Val Tyr Tyr Val Asp Tyr Arg Leu Glu Arg Ile Lys Glu Ala Asn Asn 195 200 205 Glu Thr Tyr Val Glu Gln His Glu Val Ala Val Ala Arg Tyr Cys Asp 210 215 220 Leu Pro Ser Lys Leu Gly His Lys Leu Asn 225 230 <210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> Mytilus edulis <220> <221> MOD_RES <222> (6)...(7) <223> can be Hyp <220> <221> MOD_RES <222> 5, 9 <223> can be DOPA <400> 13 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 1 5 10 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Mytilus edulis <220> <221> MOD_RES <222> (6)...(7) <223> can be Hyp <220> <221> MOD_RES <222> 5, 9 <223> can be DOPA <400> 14 Pro Lys Ile Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 1 5 10 <210> 15 <211> 42 <212> PRT <213> Mytilus galloprovincialis <220> <221> MOD_RES <222> 5, 29, 35, 37 <223> can be DOPA <400> 15 Thr Asp Lys Ala Tyr Lys Pro Asn Pro Cys Val Val Ser Lys Pro Cys 1 5 10 15 Lys Asn Arg Gly Lys Cys Ile Trp Asn Gly Lys Ala Tyr Arg Cys Lys 20 25 30 Cys Ala Tyr Gly Tyr Gly Gly Arg His Cys 35 40 <210> 16 <211> 48 <212> PRT <213> Mytilus edulis <220> <221> MOD_RES <222> 3, 4, 8, 14, 19, 22, 25, 29, 32, and/or 47 <223> can be DOPA <400> 16 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Asn Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly 1 5 10 15 Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr 20 25 30 Lys Gly Trp Asn Asn Gly Trp Asn Arg Gly Arg Arg Gly Lys Tyr Trp 35 40 45 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Mytilus californianus <400> 17 His Val His Thr His Arg Val Leu His Lys 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Mytilus californianus <400> 18 Asp Asp His Val Asn Asp Ile Ala Gln Thr Ala 1 5 10 <210> 19 <211> 73 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mussel adhesive polypeptide consensus sequence <220> <221> MOD_RES <222> 5, 9, 10, 15, 17, 22, 27, 31, 35, 36, 42, 43, 44, 46, 52, 54, 61, 66, 68, and/or 69 <223> can be DOPA <400> 19 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ala Tyr His 1 5 10 15 Tyr Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys 20 25 30 Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys 50 55 60 Gly Tyr Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser 65 70 <210> 20 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mussel adhesive polypeptide consensus sequence <220> <221> MOD_RES <222> 5, 8, 18, 21, 29, 34, 36, 41, 49, 54, 55, 60, 67, 68, 69, 74, 75, 76, 77, 82, 90, and/or 99 <223> can be DOPA <400> 20 Gly Gly Gly Asn Tyr Arg Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Gly Cys Arg Ser 1 5 10 15 Gly Tyr Ile Phe Tyr Asp Asn Arg Gly Phe Cys Lys Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Lys Tyr Asp Cys Gly Asn Tyr Ala Cys Leu Pro Arg Asn Pro 35 40 45 Tyr Gly Arg Val Lys Tyr Tyr Cys Thr Lys Lys Tyr Ser Cys Pro Asp 50 55 60 Asp Phe Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Asp Lys 65 70 75 80 Asp Tyr Gly Cys Phe Asn Cys Gly Ser Tyr Asn Gly Cys Cys Leu Arg 85 90 95 Ser Gly Tyr <210> 21 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15, 16, 22, 23, 24, 26, 32, 34, 41, 46, 48, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 21 Lys Xaa Lys Gly Lys Gly Xaa Lys Gly Gly Xaa Lys Gly Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly Lys Gly Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Gly Lys Gly Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Gly Lys Lys Lys Gly Lys Xaa Lys Gly Lys Gly Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa Gly 50 <210> 22 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15, 16, 22, 23, 24, 26, 32, 34, 41, 46, 48, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 22 Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Xaa Lys Lys Lys Xaa Lys Lys Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Lys Lys Lys Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Lys Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa Lys 50 <210> 23 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15, 16, 22, 23, 24, 26, 32, 34, 41, 46, 48, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 23 Ser Xaa His Gly Ser Gly Xaa His Gly Gly Xaa Lys Gly Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly Lys Ala Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Asn Ser Gly Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Leu Lys Lys Ala Arg Lys Xaa His Arg Lys Gly Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa Gly 50 <210> 24 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15, 16, 22, 23, 24, 26, 32, 34, 41, 46, 48, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 24 Ser Xaa Ser Ser Ser Ser Xaa Ser Ser Ser Xaa Lys Ser Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Ser Lys Ser Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Ser Ser Ser Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Ser Lys Lys Ser Ser Lys Xaa Ser Ser Lys Ser Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa Ser 50 <210> 25 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15, 16, 22, 23, 24, 26, 32, 34, 41, 46, 48, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 25 Gly Xaa Ser Gly Lys Asn Xaa His Gly Ser Xaa Lys Gly Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 His Lys His Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Leu Leu His Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Gly Lys Lys Gly Asn Lys Xaa Gly Gly Lys Gly Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa His 50 <210> 26 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 4, 6, 7, 9, 10, 11, 13, 15, 16, 17, 19, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 35, 39, 41, 43, 45, 46, 48, 49, 50 <223> Xaa = L-DOPA <400> 26 Lys Xaa Lys Xaa Lys Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Lys Xaa Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Xaa Lys Xaa Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Xaa Lys Lys Lys Xaa Lys Xaa Lys Xaa Lys Xaa Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa Xaa 50 <210> 27 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 11, 16, 23, 26, 34, 46, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 27 Lys Xaa Lys Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly Xaa Lys Gly Lys Gly Xaa 1 5 10 15 Gly Lys Gly Lys Lys Gly Xaa Gly Lys Xaa Lys Gly Lys Gly Lys Gly 20 25 30 Lys Xaa Leu Lys Lys Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gly Xaa Lys Gly 35 40 45 Xaa Gly 50 <210> 28 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15, 16, 22, 23, 24, 32, 34, 41, 46, 48, 49 <223> Xaa = L-DOPA <400> 28 Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Xaa Lys Lys Lys Xaa Lys Lys Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 Lys Lys Lys Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Tyr Lys Lys Lys Lys Lys Xaa 20 25 30 Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Lys Lys Xaa Lys Lys Lys Lys Xaa Lys Xaa 35 40 45 Xaa Lys 50 <210> 29 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 5, 6, 10, 12, 20, 21, 25, 26, 31, 34, 35, 36, 37, 38, 42, 43, 45, 47 <223> Xaa = L-DOPA <400> 29 Lys Lys Gly Gly Xaa Xaa Lys Gly Lys Xaa Lys Xaa Gly Lys Lys Lys 1 5 10 15 Lys Gly Gly Xaa Xaa Gly Gly Lys Xaa Xaa Gly Lys Lys Lys Xaa Gly 20 25 30 Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Gly Lys Xaa Xaa Gly Xaa Lys Xaa Gly 35 40 45 Lys Lys 50 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 3, 4 <223> Xaa = L-DOPA <400> 30 Gly Lys Xaa Xaa Gly 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 3, 8 <223> Xaa = L-DOPA <400> 31 Gly Lys Xaa Gly Gly Gly Lys Xaa Gly Gly 1 5 10 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 3, 9, 10, 11, 13 <223> Xaa = L-DOPA <400> 32 Lys Xaa Xaa Gly Lys Gly Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Lys Gly 1 5 10 15 <210> 33 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 3, 9, 10, 11 <223> Xaa = L-DOPA <400> 33 Lys Xaa Xaa Gly Lys Gly Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Gly 1 5 10 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 3, 9, 10, 11 <223> Xaa = L-DOPA <400> 34 Lys Gly Xaa Gly Lys Gly Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Gly 1 5 10 <210> 35 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 9, 10, 11 <223> Xaa = L-DOPA <400> 35 Lys Gly Lys Gly Lys Gly Lys Lys Xaa Xaa Xaa Lys Gly 1 5 10 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic adhesive molecule <220> <221> MOD_RES <222> 2, 5, 8 <223> Xaa = L-DOPA <400> 36 Lys Xaa Gly Lys Xaa Gly Lys Xaa Lys Gly 1 5 10 <210> 37 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> adhesive polypeptide consensus sequence <220> <221> MOD_RES <222> 1, 3-6, 8-10, 12-14, 17-21, 25, 27-31, 33, 35-40, 42-45, 47, 50 <223> Xaa = Lys, Gly, Ser, His, Asn <220> <221> MOD_RES <222> 2, 7, 11, 15-16, 22-24, 26, 32, 34, 41, 46, 48-49 <223> Xaa = DOPA <400> 37 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa 50

Claims (39)

  1. 복수의 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA) 잔기를 포함하는 접착 분자, 및
    상기 DOPA 잔기 중 하나 이상과의 상호작용을 통해 상기 접착 분자에 부착된 금속 이온 또는 염료
    를 포함하고, 상기 접착 분자는 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하거나 결합하는 능력을 포함하는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 접착 분자는 홍합(mussel) 접착 폴리펩티드인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 접착 분자는 복수의 라이신 잔기 및 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 복수의 라이신 잔기, 복수의 글리신 잔기 및 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체인 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 폴리메타크릴레이트 중합체인 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 상기 금속 이온을 포함하는 것인 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 금속 이온은 구리 이온, 비스무트 이온, 크롬 이온, 철 이온, 은 이온, 알루미늄 이온, 망간 이온, 아연 이온, 또는 이들의 조합인 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 상기 염료를 포함하는 것인 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 염료는 카민, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모인 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 폴리펩티드를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 케라틴 폴리펩티드 또는 형광 발광 폴리펩티드인 조성물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 상기 접착 분자에 접합되는 것인 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 샴푸, 헤어 컨디셔너, 겔, 폴리시(polish) 또는 페이스트인 조성물.
  14. 모발, 피부 또는 손발톱의 외양을 변경하는 방법으로서,
    (a) 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 접착 분자를 모발, 피부 또는 손발톱에 적용하는 단계로서, 상기 DOPA 잔기 중 하나 이상은 상기 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하는 것인 단계, 및
    (b) 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 금속 이온 또는 염료를 적용하는 단계로서, 상기 금속 이온 또는 상기 염료는 상기 접착 분자의 상기 DOPA 잔기 중 하나 이상과 상호작용하는 것인 단계,
    를 포함하고, 상기 모발, 피부 또는 손발톱의 외양이 변경되는 것인 변경 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 접착 분자 및 상기 금속 이온 또는 상기 염료는 순차적으로 적용되는 것인 변경 방법.
  16. 제14항에 있어서, 상기 접착 분자 및 상기 금속 이온 또는 상기 염료는 함께 적용되는 것인 변경 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 폴리메타크릴레이트 중합체; 홍합 접착 폴리펩티드; 복수의 라이신 잔기 및 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체; 및 복수의 라이신 잔기, 복수의 글리신 잔기 및 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 변경 방법.
  18. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 홍합 접착 폴리펩티드인 변경 방법.
  19. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 복수의 라이신 잔기 및 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체인 변경 방법.
  20. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 복수의 라이신 잔기, 복수의 글리신 잔기 및 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 중합체인 변경 방법.
  21. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접착 분자는 상기 복수의 DOPA 잔기를 포함하는 폴리메타크릴레이트 중합체인 변경 방법.
  22. 제14항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 상기 금속 이온을 적용하는 단계를 포함하는 것인 변경 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 금속 이온은 구리 이온, 비스무트 이온, 크롬 이온, 철 이온, 은 이온, 알루미늄 이온, 망간 이온, 아연 이온, 또는 이들의 조합인 변경 방법.
  24. 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 상기 염료를 적용하는 단계를 포함하는 것인 변경 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 염료는 카민, 헤나, 구아닌, 엽납석 또는 운모인 변경 방법.
  26. 제14항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 폴리펩티드를 적용하는 단계를 추가로 포함하는 것인 변경 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 케라틴 폴리펩티드 또는 형광 발광 폴리펩티드인 변경 방법.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 상기 접착 분자에 접합되는 것인 변경 방법.
  29. 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱의 외양을 변경하는 방법으로서, 상기 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 조성물을 모발, 피부 또는 손발톱에 적용하는 단계를 포함하고, 상기 DOPA 잔기 중 하나 이상이 상기 모발, 피부 또는 손발톱과 상호작용하며, 상기 모발, 피부 또는 손발톱의 외양이 변경되는 것인 변경 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 조성물이 모발에 적용되는 것인 변경 방법.
  31. 제29항에 있어서, 상기 조성물이 피부에 적용되는 것인 변경 방법.
  32. 제29항에 있어서, 상기 조성물이 손발톱에 적용되는 것인 변경 방법.
  33. 3,4-디히드록시페닐-L-알라닌(DOPA)과 중합체의 동결건조된 혼합물을 포함하는 전달 필름.
  34. 제33항에 있어서, 상기 중합체가 PMA, PEMA 및 PBMA인 전달 필름.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 전달 필름은 제제를 포함하는 것인 전달 필름.
  36. 제35항에 있어서, 상기 제제가 인터로킹 금속(interlocking metal), 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 항생제, 치료제, 미백 입자 또는 착색 입자인 전달 필름.
  37. 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하는 방법으로서,
    (a) 제33항 또는 제34항의 전달 필름을 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 접촉시키는 단계, 및
    (b) 상기 전달 필름을 상기 제제와 접촉시키는 단계
    를 포함하는 전달 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 제제는 인터로킹 금속, 염료, 폴리펩티드, 형광 분자, 항생제, 치료제, 미백 입자 또는 착색 입자인 전달 방법.
  39. 포유동물의 모발, 피부 또는 손발톱에 제제를 전달하는 방법으로서, 제35항 또는 제36항의 전달 필름을 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 접촉시켜, 상기 제제를 상기 모발, 피부 또는 손발톱에 전달하는 단계를 포함하는 전달 방법.
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