KR20170003289A - Strains having high gamma-glutamyltransferase activity, and method for manufacturing food composition and pharmaceutical composition using the same - Google Patents

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KR20170003289A
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Abstract

According to the present specification, disclosed are a gamma-glutamyltransferase Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain, a method for producing gamma-glutamyltransferase by using the same, and a method for producing a food by using the same. The strain according to an aspect of the present invention has a high gamma-glutamyltransferase activity, and thus is advantageous in mass-producing gamma-glutamyltransferase. Moreover, when a food is fermented by using the strain, a food having excellent flavors can be obtained. Furthermore, the strain according to an aspect of the present invention does not cause hematocytolysis and does not generate a material harmful to a human body, so the strain can be useful in the food field or in the pharmaceutical field.

Description

감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성이 높은 균주와 이를 이용한 식품 및 약학조성물의 제조 방법{Strains having high gamma-glutamyltransferase activity, and method for manufacturing food composition and pharmaceutical composition using the same}The present invention relates to a strain having high gamma-glutamyltransferase activity and a method for producing a food and a pharmaceutical composition using the same,

본 명세서에는, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성이 높은 균주, 이를 이용한 감마 글루타밀트랜스퍼레이즈 생산 방법 및 이를 이용한 발효방법이 개시된다.In this specification, a strain having a high gamma-glutamyltransferase activity, a method for producing gamma glutamyltransferase using the strain, and a fermentation method using the same are disclosed.

최근 미생물은 고부가가치 경제적 이윤을 창출할 수 있는 핵심 생물소재로 점점 각광을 받고 있다. 순수한 미생물 및 관련 분야의 세계 시장규모는 연간 약 100억불(약 10조원)로 추정되고 있고, 미생물이 생산 하는 항생제 등의 의약품을 합치면 미생물은 세계 바이오시장의 30%를 차지한다. 현재 바이오산업에서 가장 각광을 받고 있는 바이오시밀러(Biosimilar)로 대부분 미생물을 통해 의약 물질을 생산하고 있고, 이 중 신장병 환자에게 투여되는 적혈구 생산 촉진물질인 EPO(Erythropoietin)만 하더라도 2008년, 세계 매출이 100.5억불(약 1조원)에 달하여 미생물 관련 시장의 산업적 규모를 짐작할 수 있다. 한편 획기적으로 밝혀지는 미생물 유전체 해독은 현재 완전히 해독된 것이 1,250개, 해독 중인 것이 현재 4200개로 알려졌다. 이러한 미생물의 유전체 연구결과는 미생물이 갖는 공장, 농장, 발전소 기능을 완벽하게 알게 하여 차세대 정밀화학 소재, 식품소재, 에너지소재, 환경소재 및 의약소재 등을 발굴하여 효율적으로 산업화에 적용할 수 있을 것으로 기대되고 있다. 게다가 배양하기 어렵거나 해양 또는 극한 환경에서 살아가는 미생물의 99% 이상이 아직 발견되지 않았는데, 이러한 미생물과 함께 해당 특정 환경의 다양한 유전체 자원(Metagenome)을 함께 확보하여 활용할 경우에는 생물의약품, 효소, 항생제 등의 다양한 분야에서의 활용도가 더욱 높아질 것이다. 뿐만 아니라 기존의 화학공정을 대체하는 환경 친화적인 녹색기술인 바이오리파이너리(Biorefinery)에 합성생물학(Synthetic biology)이 도입되어 이용된다면 더 막대한 경제적 가치를 창출할 수 있을 것으로 전망된다.Recently, microorganisms are becoming increasingly popular as key biomaterials that can generate high value-added economic profit. The global market size of pure microorganisms and related fields is estimated to be about 10 billion US dollars (about 10 trillion won) per year, and when combined with antibiotics produced by microorganisms, microorganisms account for 30% of the world bio market. Biosimilar is the biosimilar that is currently receiving the most attention in the bio-industry. Most of them produce medicinal materials through microorganisms. Even in the case of EPO (erythropoietin), which is a red blood cell production promoting substance administered to patients with kidney disease, (About 1 trillion won), which can be used to estimate the industrial scale of the microorganism-related market. On the other hand, the breakthrough of microbial genome detoxification is now known as 1,250 completely decrypted and 4,200 currently decrypted. Genomic research results of these microorganisms will be able to find the next generation of fine chemical materials, food materials, energy materials, environmental materials and medicinal materials by efficiently knowing the functions of microorganisms such as factories, farms and power plants, It is expected. In addition, more than 99% of the microorganisms that are difficult to cultivate or live in marine or extreme environments have not yet been found. When a variety of genetic resources (metagenome) of the specific environment together with these microorganisms are secured and utilized, biologics, enzymes, antibiotics Will be used in various fields. In addition, if Synthetic biology is introduced into Biorefinery, an eco-friendly green technology that replaces existing chemical processes, it is expected to create greater economic value.

유전체 시대의 미생물 산업, Biosafety Vol.11 No.1, 오태광, 2010.06.09. 22-29pagesMicrobiology industry in the era of genome, Biosafety Vol.11 No.1, Tae Kwang, 2010.06.09. 22-29pages

일 측면에서, 본 발명의 목적은, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase) 활성이 높은 균주를 제공하는 것이다.In one aspect, an object of the present invention is to provide a strain having high gamma-glutamyltransferase activity.

다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 저비용으로 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈를 대량 생산하는 것이다.In another aspect, an object of the present invention is to mass-produce gamma-glutamyltransferase at low cost.

다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 풍미, 예컨대, 감칠맛, 입안에 꽉찬 느낌, 맛의 두께감, 맛의 지속성이 향상된 식품을 제공하는 것이다.In another aspect, an object of the present invention is to provide a food having improved flavor, such as a richness, a fullness in mouth, a feeling of thickness of taste, and a persistence of taste.

일 측면에서, 본 발명은, 높은 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase) 활성을 갖는, 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주이다. In one aspect, the present invention is a Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain having high gamma-glutamyltransferase activity.

다른 측면에서, 본 발명은, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주 또는 그 배양물을 유효성분으로 포함하는 조성물이다.In another aspect, the present invention is a composition comprising a strain of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 or a culture thereof as an active ingredient.

다른 측면에서, 본 발명은, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주를 배양하는 단계를 포함하는 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 생산방법이다.In another aspect, the present invention is a method for producing gamma-glutamyltransferase comprising culturing a strain of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469.

다른 측면에서, 본 발명은, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주를 배양하는 단계를 포함하는 식품 제조방법이다. In another aspect, the present invention is a food manufacturing method comprising culturing a strain of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469.

본 발명의 일 관점인 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주는, 우수한 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 가지며, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈의 대량 생산에 유리하다. 또한, 상기 균주를 이용하여 식품을 발효시킬 경우, 풍미가 우수한 식품을 얻을 수 있다. 또한, 본 발명의 일 관점인 균주는 용혈현상을 일으키지 않고, 인체에 해로운 물질을 생성하지 않기 때문에, 식품 분야 또는 제약분야에서 유용하게 사용할 수 있다. Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain, which is one aspect of the present invention, has excellent gamma-glutamyltransferase activity and is advantageous for mass production of gamma-glutamyltransferase. In addition, when the food is fermented using the strain, a food having excellent flavor can be obtained. In addition, the strain as an aspect of the present invention does not cause hemolysis and does not produce harmful substances to humans, and thus can be usefully used in food or pharmaceutical fields.

도 1은, 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주의 기탁증이다.
도 2는, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주(오른쪽)와 바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주(왼쪽)의 형태를 비교한 도이다.
도 3은, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주와 다른 균주의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 비교한 도이다.
도 4는, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 용혈성 테스트 결과를 보이는 도이다.
도 5는, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 바이오제닉 아민 생성능 테스트 결과를 보이는 도이다.
도 6은, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 16s rDNA의 서열을 보이는 도이다.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a donation of a strain of Bacillus amyloliquefacience SMB-469.
FIG. 2 is a view comparing the morphology of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain (right) and Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain (left).
FIG. 3 is a graph comparing the gamma-glutamyl transferase activity of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain and other strains.
4 is a diagram showing a hemolytic test result of a strain of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469.
FIG. 5 is a graph showing the results of biosynthetic amine production test of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain. FIG.
6 is a view showing the sequence of 16s rDNA of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 일 관점에서, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase) 활성을 갖는, 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주이다.In one aspect, the present invention is a Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain having gamma-glutamyltransferase activity.

본 명세서에서, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase, GGT, gamma-GT) 또는 감마-글루타밀 전이효소는, 감마-글루타밀 트랜스펩티다아제(gamma-glutamyl transpeptidase, GGTP)라고도 불리우는 효소를 의미할 수 있다. 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈는, 감마-글루타밀 화합물의 글루타밀기를 다른 수용체로 전이시키는 효소를 의미할 수 있다. 구체적으로, 글루타민에 특이적으로 작용하여 글루타민의 감마-글루타밀기를 히드록실아민으로 전이하는 효소를 의미할 수 있고, 그 결과 글루탐산을 생산하는 효소를 의미할 수 있다. 또한, 글루타밀펩타이드의 글루탐산을 다른 아미노산으로 전이시킨 결과 감마-글루타밀펩타이드를 생산하는 효소를 의미할 수 있다.In this specification, gamma-glutamyltransferase (GGT, gamma-GT) or gamma-glutamyltransferase refers to an enzyme also called gamma-glutamyl transpeptidase (GGTP) . Gamma-glutamyltransferase may refer to an enzyme that transduces the glutamyl group of a gamma-glutamyl compound to another receptor. Specifically, it may mean an enzyme that specifically acts on glutamine to transfer gamma-glutamyl group of glutamine to hydroxylamine, and as a result may mean an enzyme that produces glutamic acid. In addition, it may mean an enzyme that produces gamma-glutamyl peptide by transferring glutamate of glutamyl peptide to another amino acid.

상기와 같은 관점에서, 상기 균주는, 포도당 2 %, 효모 추출물1.5 %, 옥수수침지액(corn steep) liquor 1 %, MgSO4 ·7H2O 0.05% 및 K2HPO4 ·3H2O 0.1 %를 포함하는 배지에서, 상기 균주를 106CFU/ml로 접종하고, 37℃의 온도에서 72시간 배양한 경우, 5000mU/ml이상의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 갖는 것일 수 있다. From the viewpoint as described above, the strain, glucose 2%, 1.5% yeast extract, corn steep liquor (corn steep) liquor 1%, MgSO 4 · 7H 2 O 0.05% and K 2 HPO 4 · 3H 2 O 0.1% Glutamyltransferase activity of 5000 mU / ml or more when the strain is inoculated with 10 6 CFU / ml and cultured at a temperature of 37 ° C for 72 hours.

또한, 상기 조건에서, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성은 4000mU/ml 이상일 수 있고, 5000mU/ml 이상, 5500mU/ml이상, 6000mU/ml이상, 6500mU/ml이상, 또는 7000mU/ml이상일 수 있다.In addition, under the above conditions, the gamma-glutamyltransferase activity may be at least 4000 mU / ml, and may be at least 5000 mU / ml, at least 5500 mU / ml, at least 6000 mU / ml, at least 6500 mU / ml, or at least 7,000 mU / ml.

상기와 같은 관점에서, 상기 균주는 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) DSM7 균주와 비교하였을 때, 50배 이상의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 가질 수 있다. In view of the above, the strain may have a gamma-glutamyltransferase activity of 50-fold or more as compared to Bacillus amyloliquefacience DSM7 strain.

본 명세서에서 효소 활성은, 단위시간당 기질을 최종산물로 전환하는 효소의 양을 의미할 수 있다. Enzymatic activity as used herein may refer to the amount of enzyme that converts the substrate to the final product per unit time.

본 발명의 일 관점인, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주에 있어서, 상기 균주는 기탁번호 KCTC12822BP의 균주일 수 있다.In the Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain, which is an aspect of the present invention, the strain may be a strain of Accession No. KCTC12822BP.

상기와 같은 관점에서, 상기 균주는 용혈성이 없고 바이오제닉 아민(biogenic amine)을 생산하지 않으므로 인체에 무해할 수 있다. 본 명세서에서 용혈성이란, 균주가 적혈구를 파괴하는 현상을 의미할 수 있다.In view of the above, the strain is not hemolytic and does not produce a biogenic amine, so it may be harmless to the human body. The term " hemolytic " as used herein may mean that the strain destroys red blood cells.

또한, 상기와 같은 관점에서, 상기 균주는 바이오제닉 아민을 생성하지 않는 것일 수 있다. 본 명세서에서 바이오제닉 아민이란, 미생물의 대사과정 중에 생성될 수 있는데, 알러지 유발 물질, 발암물질 또는 식중독 등의 인체에 유해한 작용을 일으킬 수 있는 질소화합물을 의미할 수 있다.In addition, from the above viewpoint, the strain may not produce a biogenic amine. In the present specification, biogenic amines can be produced during the metabolic process of microorganisms, which may mean nitrogen compounds that can cause harmful effects to human body such as allergens, carcinogens or food poisoning.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주 또는 그 배양물을 유효성분으로 포함하는 조성물일 수 있다. In another aspect, the present invention may be a composition comprising Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain or a culture thereof as an active ingredient.

본 명세서에서 배양물이란, 균주를 배양한 배지 내에 포함되어 있는 모든 물질을 포함하는 물질을 의미할 수 있으며, 예컨대 균주 배양의 결과물인 대사물 또는 분비물을 포함하는 물질 또는 그 파쇄물을 의미할 수 있고 균주 자체도 배양물 내에 포함되어 있을 수 있다. As used herein, the term culture may mean a substance including all the substances contained in a medium in which the strain has been cultured, and may mean, for example, a substance including metabolites or secretions resulting from the culture of the strain or a lysate thereof The strain itself may also be contained in the culture.

상기와 같은 관점에서, 상기 조성물은 식품 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다. 또한, 식품 조성물은 발효식품일 수 있다. 본 명세서에서 발효식품은 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주에 의하여 발효된 식품, 발효가 진행중인 식품, 또는 발효를 촉진하는 식품을 의미할 수 있으며, 예컨대, 식초, 간장, 된장, 고추장과 같은 콩 발효식품, 발효유제품, 김치, 젓갈과 같은 소금절임류 또는 조미료와 같은 풍미제를 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. In view of the above, the composition may be a food composition or a pharmaceutical composition. The food composition may also be a fermented food. As used herein, the fermented food may mean food fermented by Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain, fermented food or fermentation-promoting food. Examples of the fermented food include beans such as vinegar, soy sauce, miso, Fermented food products, fermented milk products, salads such as kimchi, salted fish, or flavoring agents such as seasonings.

본 발명의 일 관점에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.The formulation of the food composition according to one aspect of the present invention is not particularly limited, but may be formulated into, for example, tablets, granules, powders, liquid preparations such as drinks, caramels, gels, bars and the like. The food composition may contain various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, colorants and enhancers (cheese, chocolate etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, Colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like. The food composition of each formulation can be blended with the ingredients commonly used in the field in addition to the active ingredient without difficulty by those skilled in the art depending on the purpose of formulation or use, and synergistic effect can be obtained when the composition is applied simultaneously with other ingredients.

본 발명의 일 관점인 약학적 조성물에 있어서, 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.In a pharmaceutical composition, which is an aspect of the present invention, the pharmaceutical composition may be of various oral or parenteral formulations. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, soft or hard capsules, etc. These solid preparations may contain one or more excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, Or lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc, and the like are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used. have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used as the non-aqueous solvent and suspension agent. Examples of the suppository base include witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerogelatin and the like.

본 발명의 일 관점에 있어서, 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1~500 ㎎, 바람직하게는 1~100 ㎎의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.In one aspect of the present invention, the composition may be administered parenterally or orally, as desired, and may be administered in an amount of 0.1 to 500 mg, preferably 1 to 100 mg, per 1 kg of body weight per day, . ≪ / RTI > The dosage for a particular patient may vary depending on the patient's body weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate, severity of disease, and the like.

본 발명의 일 관점에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention may be administered orally or parenterally in the form of powders, granules, tablets, soft or hard capsules, oral preparations such as suspensions, emulsions, syrups and aerosols, May be formulated and used in any form suitable for pharmaceutical preparations.

본 발명의 일 관점에 따른 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 정맥, 근육, 피하주사에 의해 투여될 수 있다.The composition according to one aspect of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans, and the like by various routes such as parenteral, oral, etc., and all the ways of administration can be expected, Oral, transdermally, intravenously, intramuscularly, or subcutaneously.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주를 배양하는 단계를 포함하는 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase) 생산방법이다. In another aspect, the present invention is a method for producing gamma-glutamyltransferase comprising culturing a strain of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주를 배양하는 단계를 포함하는 식품 제조방법이다. 상기와 같은 관점에서, 균주 또는 그 배양물을 식품에 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. Further, the present invention is, in a different aspect, a food manufacturing method comprising culturing a strain of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469. In view of the above, the method may further include the step of adding the strain or the culture thereof to the food.

본 발명의 일 관점인 식품 제조방법에 있어서, 상기 방법에 의하여 제조된 식품은 향상된 풍미를 가질 수 있다. 본 명세서에서 풍미란, 식품에서 사람이 느낄 수 있는 깊은 맛 또는 감칠맛을 의미할 수 있다. 풍미는 식품 내 글루탐산 또는 다양한 펩타이드 특히, 감마-글루타밀펩타이드의 함량 증가에 의한 것일 수 있다. 또한, 상기 방법에 의하여 제조된 식품은 풍미를 오랫동안 지속할 수 있어서 유리하다.In a food manufacturing method which is an aspect of the present invention, the food produced by the method may have an improved flavor. In the present specification, the flavor may mean a deep taste or a rich flavor that a person can feel in a food. The flavor may be due to an increase in the content of glutamic acid or various peptides in food, particularly gamma-glutamyl peptide. In addition, the food prepared by the above method is advantageous in that the flavor can be maintained for a long time.

상기와 같은 관점에서, 상기 균주 배양은 45℃이하의 온도에서 수행하는 것일 수 있다. 구체적으로, 배양 온도는 10℃ 이상 45℃이하, 15℃ 이상 45℃이하, 20℃ 이상 45℃이하, 25℃ 이상 45℃이하, 30℃ 이상 45℃이하, 35℃ 이상 45℃이하, 10℃ 이상 40℃이하, 10℃ 이상 35℃이하, 10℃ 이상 30℃이하, 10℃ 이상 25℃이하 또는 10℃ 이상 20℃이하일 수 있고, 약 37℃ 내외에서 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈의 활성이 가장 우수할 수 있다.In view of the above, the strain culture may be carried out at a temperature of 45 ° C or lower. Specifically, the incubation temperature is 10 ° C to 45 ° C, 15 ° C to 45 ° C, 20 ° C to 45 ° C, 25 ° C to 45 ° C, 30 ° C to 45 ° C, 35 ° C to 45 ° C, Or more and 40 ° C or less, 10 ° C or more and 35 ° C or less, 10 ° C or more and 30 ° C or less, 10 ° C or more and 25 ° C or less or 10 ° C to 20 ° C and the activity of gamma-glutamyltransferase is most It can be excellent.

또한, 상기 균주 배양은 풍부한 질소원이 주어지는 환경에서 수행될 수 있다. 질소원이 풍부할 때, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈의 활성이 우수할 수 있다. 본 명세서에서 질소원은, 균주 생장에 필요한 질소를 공급하는 물질을 의미하여, 공지의 것이라면, 제한되지 않고 포함할 수 있다.In addition, the strain culture can be performed in an environment in which a rich nitrogen source is given. When the nitrogen source is abundant, the activity of gamma-glutamyltransferase may be excellent. As used herein, the nitrogen source means a substance which supplies nitrogen necessary for growth of the strain, and may include, but not limited to, those known in the art.

또한, 상기 균주 배양은, 상기 환경에서 20시간 이상 170 시간 이하의 시간동안 수행하는 것일 수 있다. 1시간 내지 200시간, 10시간 내지 190시간, 15시간 내지 185시간, 20시간 내지 180시간, 20시간 내지 175시간 또는 24시간 내지 170시간 동안 배양할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
In addition, the strain culture may be performed in the above-described environment for 20 hours to 170 hours or less. For example, from 1 hour to 200 hours, from 10 hours to 190 hours, from 15 hours to 185 hours, from 20 hours to 180 hours, from 20 hours to 175 hours, or from 24 hours to 170 hours.

이하, 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되지 않는다.
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to the following examples. However, the following examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereto.

[실시예 1] 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주의 동정[Example 1] Identification of Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain

[실시예 1-1] 식품 미생물의 분리[Example 1-1] Isolation of food microorganisms

시중의 된장, 고추장, 청국장 등의 발효식품을 구입하여 바실러스의 분리를 하였다. 구입한 발효식품을 분쇄하여 발효식품 1g을 생리식염수로 현탁하고 희석한 현탁액의 상등액 0.2ml을 TSA( Tryptone 1.5%, Soybeanmeal digest 0.5%, sodium chloride 0.5%, agar 1.5%) 배지에 접종하여 37도에서 24시간 배양하여 분리하였다. 배양된 미생물의 형태적 차이를 이용하여 1차 선별하였다.
Commercial fermented foods such as miso, kochujang, and chungkukjang were purchased and Bacillus was isolated. 0.2 ml of the supernatant of the suspensions suspended and diluted with 1 g of the fermented food obtained by grinding the fermented food was inoculated into TSA medium (Tryptone 1.5%, 0.5% of soybeanmeal digest, 0.5% of sodium chloride, 1.5% of agar) For 24 hours. The morphological differences of the cultured microorganisms were used for primary selection.

[실시예 1-2] 유해 미생물의 선별 및 제거[Example 1-2] Screening and removal of harmful microorganisms

식중독을 유발하는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)의 판별 배지인 MYP 배지(Mannitol Egg Yolk Polymyxin Agar)에 균주를 접종하고 37℃에서 18시간 동안 배양하였다. 상기 배지는 육추출물0.1%, 펩톤 1%, 만니톨(mannitol) 1%, 염화나트륨 1%, 페놀레드 0.0025%, 아가(agar) 1.2%, 폴리믹신 B 50000IU/L, 달걀노른자(egg yolk) 2.5%를 포함하였다. 분홍 색을 나타내며 주변에 띠를 형성하는 균주를 바실러스 세레우스로 판단하여 선별 및 제거하였다.
The strains were inoculated into MYP medium (Mannitol Egg Yolk Polymyxin Agar) which is a culture medium of Bacillus cereus inducing food poisoning and cultured at 37 ° C for 18 hours. The culture medium contained 0.1% of meat extract, 1% of peptone, 1% of mannitol, 1% of sodium chloride, 0.0025% of phenol red, 1.2% of agar, 50000IU / L of polymyxin B, 2.5% . The strains forming pink band and surrounding band were selected as Bacillus cereus and selected.

[실시예 1-3] 균주의 동정[Example 1-3] Identification of strain

분리균주를 K 배지(포도당 2%, 효모추출물 2%, K2HPO4 1.25%, KH2PO4 0.39%, (NH4)2SO4 0.4%, MgSO4 ·7H2O 0.12%) 100 ml에 약 106 CFU/ml로 접종하여 37℃에서 72 시간 배양한 배양액의 상등액을 취하여 13000 rpm으로 10분간 원심분리한 후, 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(Gamma-glutamyltransferase) 분석 킷트(Biovision, cat. K-784-100)를 이용하여 그 활성을 측정하였고 그 중 효소활성이 높은 균주를 선별하였다.The strain K medium (glucose 2%, 2% yeast extract, K 2 HPO 4 1.25%, KH 2 PO 4 0.39%, (NH 4) 2 SO 4 0.4%, MgSO 4 · 7H 2 O 0.12%) 100 ml (10 6 CFU / ml) and cultured at 37 ° C for 72 hours. The supernatant was centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes, and then analyzed using a Gamma-glutamyltransferase assay kit (Biovision, cat. K-784-100), and the activity of the strain was selected.

그 후, 활성이 높은 균주의 DNA를 추출하고 27F, 1492R 프라이머를 이용(표 1)하여, 16s rRNA를 증폭시키고, 분석한 서열 정보를 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)의 BLAST를 이용하여 동정하였다. 그 결과 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주를 동정할 수 있었다.Then, the DNA of the highly active strain was extracted and the 16s rRNA was amplified by using 27F and 1492R primers (Table 1), and the sequence information was analyzed by BLAST of NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov) Respectively. As a result, the Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain of the present invention could be identified.

아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주의 16s rDNA 서열은 서열번호 1과 같다.
The 16s rDNA sequence of the Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain is shown in SEQ ID NO: 1.

서열번호 2SEQ ID NO: 2 27F27F AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAGAGTTTGATCCTGGCTCAG 서열번호 3SEQ ID NO: 3 1492R1492R GGTTACCTTGTTACGACTTGGTTACCTTGTTACGACTT

[실시예 2] 다른 균주와의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성의 비교[Example 2] Comparison of gamma-glutamyltransferase activity with other strains

실시예 1-3에서와 동일한 방법으로, 효소 활성을 측정하였다. 표준균주인 바실러스 아밀로리퀴파션스 DSM7 균주와 바실러스 아밀로리퀴파션스 FZB42 균주, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 균주에서의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 측정하였다. 바실러스 아밀로리퀴파션스 DSM7 균주와 바실러스 서브틸리스 균주는 한국 미생물자원센터에서 얻었고, 바실러스 아밀로리퀴파션스 FZB42 균주는 독일 미생물자원센터(DSMZ)로부터 얻었다. 그 결과 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주는 약 4000mU/ml이상의 효소 활성을 나타내어, 다른 균주보다 효소 활성이 우수함을 알 수 있었다(표 2).Enzyme activity was measured in the same manner as in Example 1-3. The gamma-glutamyltransferase activity in the strain Bacillus amyloliquefaciens DSM7, Bacillus amyloliquefaciens FZB42, and Bacillus subtilis was measured. Bacillus amyloliquefaciens DSM7 and Bacillus subtilis strains were obtained from the Korean Center for Microbial Resources and Bacillus amyloliquefaciens FZB42 was obtained from the Center for Microbial Resources in Germany (DSMZ). As a result, the Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain of the present invention showed an enzyme activity of about 4000 mU / ml or more, indicating that the enzyme activity was superior to other strains (Table 2).

균주Strain 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성(mU/ml)Gamma-glutamyltransferase activity (mU / ml) 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469Bacillus amyloliquefaciensis SMB-469 4000~50004000 to 5000 표준균주 바실러스 아밀로리퀴파션스 DSM7Standard strain Bacillus amyloliquefaciens DSM7 0 ~ 300 to 30

[실시예 3] 배양 배지에 따른 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성의 비교[Example 3] Comparison of gamma-glutamyltransferase activity according to culture medium

배지로, K배지 대신 고영양 배지를 사용한 점만 제외하고, 실시예 1-3과 동일하게 효소 활성을 측정하였다. 고영양 배지의 조성은 다음과 같다: 포도당 2 %, 효모추출물 1.5 %, 옥수수침지액(corn steep liquor) 1 %, MgSO4·7H2O 0.05%, K2HPO3H2O 0.1 %.Enzyme activity was measured in the same manner as in Example 1-3 except that high-nutrient medium was used instead of K medium as a medium. The composition of high nutrient medium is as follows: glucose 2%, yeast extract 1.5%, corn steep liquor 1%, MgSO 4 .7H 2 O 0.05%, K 2 HPO 4 .3H 2 O 0.1%.

그 결과는 표 3 및 도 3과 같다.The results are shown in Table 3 and FIG.

감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성(mU/ml)Gamma-glutamyltransferase activity (mU / ml) 균주 / 배지의 종류Type of strain / medium K 배지K medium 고영양 배지High nutrient medium 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469Bacillus amyloliquefaciensis SMB-469 4000 ~ 50004000 to 5000 5000 ~ 70005000 ~ 7000 바실러스 아밀로리퀴파션스 DSM7Bacillus amylolytica DSM7 0 ~ 300 to 30 0 ~ 1000-100 바실러스 아밀로리퀴파션스 FZB42Bacillus amyloliquefaciens FZB42 0 ~ 5000-500 1000 ~ 20001000 ~ 2000 바실러스 서브틸리스Bacillus Subtilis 0 ~ 6000-600 1000 ~ 20001000 ~ 2000

[실시예 4] 배양 시간에 따른 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성의 비교[Example 4] Comparison of gamma-glutamyltransferase activity with culture time

배양시간이 효소 활성에 미치는 영향을 확인하기 위해, 실시예3과 동일한 환경에서 배양 시간만 달리하여, 효소 활성을 측정하였다. 그 결과, 24시간 내지 168시간 배양하였을 경우, 가장 우수한 효소 활성을 나타냄을 알 수 있었다(표 4).In order to confirm the influence of the incubation time on the enzyme activity, the enzyme activity was measured by varying the incubation time in the same environment as in Example 3. As a result, it was found that when cultured for 24 to 168 hours, the enzyme activity was most excellent (Table 4).

배양시간Incubation time 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성(mU/ml)Gamma-glutamyltransferase activity (mU / ml) 24 시간 미만Less than 24 hours 0 ~ 10000 to 1000 24~168 시간24 to 168 hours 5000 ~ 70005000 ~ 7000 168 시간 이상 168 hours or more 3000 ~ 40003000 ~ 4000

[실시예 5] 배양 온도에 따른 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성의 비교[Example 5] Comparison of gamma-glutamyltransferase activity with culture temperature

온도가 효소 활성에 미치는 영향을 확인하기 위해, 실시예 1-3과 동일한 환경에서, 발효 온도만 달리하여, 효소 활성을 측정하였다. 그 결과, 약 40℃에서 효소 활성이 우수하고 약45℃ 이상의 온도에서는 효소활성이 떨어지는 것을 확인할 수 있었다(표 5).In order to confirm the effect of the temperature on the enzyme activity, the enzyme activity was measured under the same conditions as in Example 1-3, except that the fermentation temperature was different. As a result, it was confirmed that the enzyme activity was excellent at about 40 ° C and the enzyme activity was lowered at about 45 ° C or higher (Table 5).

배양온도 Incubation temperature 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성(mU/ml)Gamma-glutamyltransferase activity (mU / ml) 40 ℃40 ℃ 4000 ~ 50004000 to 5000 45 ℃45 ° C 1000 ~ 20001000 ~ 2000

[실시예 6] 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 용혈성 측정[Example 6] Measurement of hemolysis of Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain

알파용혈성(alpha hemolysis) 판별용 토끼 혈액(기산바이오텍)과 베타용혈성(beta hemolysis) 판별용 양 혈액 (한일komed)을 섬유소가 제거된 형태(Defibrinated blood)로 준비하였다. TSA 배지에 5%씩 혈액을 첨가하여 평판배지를 제조하고 배지에 멸균된 침으로 단일콜로니를 취해 찍어주었다. 알파용혈성의 경우 37℃에서 18 시간 배양 후 콜로니 주변을 관찰하고, 베타용혈성의 경우 37℃에서 18 시간 배양 후 4℃ 냉장고에 밤새 보관한 뒤 관찰하였다. 콜로니 주변의 혈액 분해 여부에 따라 용혈성 여부를 판별했다. 그 결과, 본 발명의 균주는 용혈성이 없음을 확인할 수 있었다(도 4)
Alpha hemolysis discrimination rabbit blood (Kisan Biotech) and beta hemolysis discrimination blood (Hanil komed) were prepared as defibrinated blood. The plate medium was prepared by adding 5% blood to the TSA medium, and a single colony was taken with the sterilized needle into the medium. In the case of alpha hemolytic, colonies were observed after culturing at 37 ° C for 18 hours. In the case of beta hemolytic, the cells were incubated at 37 ° C for 18 hours, stored in a refrigerator at 4 ° C overnight, and then observed. The presence or absence of hemolysis was determined according to whether the blood was decomposed around the colony. As a result, it was confirmed that the strain of the present invention was free from hemolysis (Fig. 4)

[실시예 7] 바이오제닉 아민 생성능 확인[Example 7] Confirmation of biogenic amine production ability

0.006% 지시약(Bromocresol Purple)을 함유한 LB (tryptone 1%, yeast extract 0.5%, sodium chloride 1%) 액체배지 3종을 제조하고 i)아미노산 무첨가 ii)0.1% histidine 첨가 iii) 0.1% tyrosine 첨가) 균주를 접종하여 37 ℃에서 24시간동안 배양하였다. 상층액만을 분리한 뒤 pH, 590nm에서의 흡광도를 측정하여 i) 아미노산 무첨가 배지보다 ii), iii) 아미노산을 전구체로 넣어준 배지에서 pH와 흡광도값이 더 높은 경우, 바이오제닉 아민 생성능이 있는 것으로 판별하였다. 그 결과 본 발명 균주는 바이오제닉 아민을 생성하지 않는 것을 확인할 수 있었다(도 5).
Three kinds of LB medium containing 0.006% indicator (Bromocresol Purple) (tryptone 1%, yeast extract 0.5%, sodium chloride 1%) were prepared and i) amino acid was not added ii) 0.1% histidine was added iii) The strain was inoculated and cultured at 37 DEG C for 24 hours. Iii) when the pH and the absorbance value are higher in the medium containing the amino acid as the precursor, the biosynthetic amine-producing ability is higher than that of the amino acid- Respectively. As a result, it was confirmed that the strain of the present invention did not produce a biogenic amine (Fig. 5).

[비교예] 바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주와의 특성 비교[Comparative Example] Comparison of characteristics with Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain

[비교예 1] 형태학적 비교[Comparative Example 1] Morphological comparison

한국특허출원번호 10-2012-0016591의 바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주(KCCM 11249BP)와 본 발명 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 형태학적 특성을 비교하였다. 그 결과 바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주는 불규칙한 모양이며, 주름이 있는 형태인 반면, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주는 주름이 없고 위로 봉긋하게 올라온 형태를 띄어 양자의 형태학적 차이를 확인할 수 있었다(도 2).
The morphological characteristics of the Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain (KCCM 11249BP) and Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain of the present invention were compared in Korean Patent Application No. 10-2012-0016591. As a result, the Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain had an irregular shape and a wrinkled form, whereas the Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain had a wrinkle-free and upturned form, (Fig. 2).

[비교예 2] 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성 비교[Comparative Example 2] Comparison of gamma-glutamyltransferase activity

바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주와 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 비교하였다. 바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주는 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을410nm에서 측정한 흡광도가 약 0.9였고, 그 결과 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주의 효소 활성이 약 13배 이상 우수함을 알 수 있었다.The gamma-glutamyltransferase activity of Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain and Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain were compared. The Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain had an absorbance of about 0.9 measured at 410 nm of the gamma-glutamyltransferase activity , and as a result, the enzyme activity of the Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain of the present invention was about 13 times more excellent And it was found.

바실러스 아밀로리큐파시엔스 KC41 균주의 pNA생성량을, 410nm 에서의 흡광도와 pNA생성량의 관계를 나타내는 회귀식(흡광도=0.027 X pNA 생성량)과 흡광도값 0.9를 이용하여 pNA의 생성량을 구한 결과, 약 33nM의 pNA 생성을 확인할 수 있었다. 이 때의 효소 활성(mU/ml)은 pNA의 생성량(33nM)을 반응시간(10분) 및 효소 첨가량(0.01667ml)으로 나누어 구한 결과, 약 198mU/ml였다. 반면, 바실러스 아밀로리퀴파션스 SMB-469 균주는 30배 희석한 효소액으로 반응 했을 때, 418nm에서의 회귀식(흡광도= 0.0198 X pNA 생성량)과 흡광도 0.51을 이용하여 pNA의 생성량을 구한 결과 약 26nM 이었으며, 여기에 희석비율(30)을 곱하여 약 780nM의 pNA 생성함을 확인할 수 있었다. 이때의 효소 활성(mU/ml)은, pNA의 생성량(780nM)을 반응시간(30분) 및 효소 첨가량(0.01ml)으로 나누어 구한 결과, 약 2600mU/ml였다.
The amount of pNA produced was determined using a regression equation (absorbance = 0.027 x pNA production amount) and an absorbance value of 0.9 indicating the relationship between the absorbance at 410 nm and the amount of pNA produced in the Bacillus amyloliquefaciens KC41 strain. As a result, PNA production of pNA was confirmed. The enzyme activity (mU / ml) was about 198 mU / ml as determined by dividing the amount of pNA produced (33 nM) by the reaction time (10 min) and the amount of enzyme added (0.01667 ml). On the other hand, when the Bacillus amyloliquefaciens SMB-469 strain was reacted with an enzyme solution diluted 30 times, the amount of pNA produced was determined to be about 26 nM by using a regression equation (absorbance = 0.0198 x pNA production amount) at 418 nm and absorbance 0.51 , Which was multiplied by the dilution ratio (30), indicating that pNA was generated at about 780 nM. The enzyme activity (mU / ml) was about 2600 mU / ml as determined by dividing the amount of pNA produced (780 nM) by the reaction time (30 minutes) and the amount of enzyme added (0.01 ml).

본 발명의 일 관점에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Formulation examples of compositions according to one aspect of the present invention are described below, but may be applied to various other formulations, which are not intended to be limiting but merely illustrative of the present invention.

[제형예 1] 간장[Formulation Example 1] Soy sauce

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1의 균주 분말The strain powder of Example 1 2%2% 탈지 대두Defatted soybeans 22.4%22.4% 소맥밀Wheat wheat 10%10% 천일염Sun salt 5%5% 액상과당Liquid fructose 5%5% 합성보존료Synthetic preservative 1%One% 정제수Purified water 60%60% 질소nitrogen 1.3%1.3% 기타Other 잔량Balance

[제형예 2] 된장[Formulation Example 2] miso

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1의 균주 분말The strain powder of Example 1 2%2% 탈지 대두Defatted soybeans 40%40% 소맥분Wheat flour 10%10% 정제소금Refined salt 5%5% 알파대두분Alpha soybean powder 5%5% 고춧가루chili powder 5%5% 정제수Purified water 30%30% 종국end 1.3%1.3% 기타Other 잔량Balance

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12822BPKCTC12822BP 2015052920150529

<110> SAMPIO FOOD COMPANY <120> Strains having high gamma-glutamyltransferase activity and method <130> 15P312IND <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1059 <212> DNA <213> Bacillus amyloliquefacience SMB-469_16s rDNA <400> 1 ggctaccact tacagatgga cccgcggcgc attagctagt tggtgaggta acggctcacc 60 aaggcgacga tgcgtagccg acctgagagg gtgatcggcc acactgggac tgagacacgg 120 cccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccgc aatggacgaa agtctgacgg 180 agcaacgccg cgtgagtgat gaaggttttc ggatcgtaaa gctctgttgt tagggaagaa 240 caagtgccgt tcaaataggg cggcaccttg acggtaccta accagaaagc cacggctaac 300 tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt 360 aaagggctcg caggcggttt cttaagtctg atgtgaaagc ccccggctca accggggagg 420 gtcattggaa actggggaac ttgagtgcag aagaggagag tggaattcca cgtgtagcgg 480 tgaaatgcgt agagatgtgg aggaacacca gtggcgaagg cgactctctg gtctgtaact 540 gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga acaggattag ataccctggt agtccacgcc 600 gtaaacgatg agtgctaagt gttagggggt ttccgcccct tagtgctgca gctaacgcat 660 taagcactcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaaa ttgacggggg 720 cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 780 cttgacatcc tctgacaatc ctagagatag gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt 840 ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 900 aacccttgat cttagttgcc agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa 960 accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac 1020 gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg aaaccgcga 1059 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer_27F <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer_1492R <400> 3 ggttaccttg ttacgactt 19 <110> SAMPIO FOOD COMPANY <120> Strains having high gamma-glutamyltransferase activity and method <130> 15P312IND <160> 3 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 1059 <212> DNA <213> Bacillus amyloliquefacience SMB-469_16s rDNA <400> 1 ggctaccact tacagatgga cccgcggcgc attagctagt tggtgaggta acggctcacc 60 aaggcgacga tgcgtagccg acctgagagg gtgatcggcc acactgggac tgagacacgg 120 cccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccgc aatggacgaa agtctgacgg 180 agcaacgccg cgtgagtgat gaaggttttc ggatcgtaaa gctctgttgt tagggaagaa 240 caagtgccgt tcaaataggg cggcaccttg acggtaccta accagaaagc cacggctaac 300 tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt 360 aaagggctcg caggcggttt cttaagtctg atgtgaaagc ccccggctcg accggggagg 420 gtcattggaa actggggaac ttgagtgcag aagaggagag tggaattcca cgtgtagcgg 480 tgaaatgcgt agagatgtgg aggaacacca gtggcgaagg cgactctctg gtctgtaact 540 gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga acaggattag ataccctggt agtccacgcc 600 gtaaacgatg agtgctaagt gttagggggt ttccgcccct tagtgctgca gctaacgcat 660 taagcactcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaaa ttgacggggg 720 cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 780 cttgacatcc tctgacaatc ctagagatag gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt 840 ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 900 aacccttgat cttagttgcc agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa 960 accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac 1020 gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg aaaccgcga 1059 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer_27F <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer_1492R <400> 3 ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (11)

감마-글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase) 활성을 갖는, 바실러스 아밀로리퀴파션스(Bacillus amyloliquefacience) SMB-469 균주. Bacillus amyloliquefacience SMB-469 strain having gamma-glutamyltransferase activity. 제1항에 있어서,
상기 균주는,
포도당 2 %, 효모 추출물1.5 %, 옥수수침지액(corn steep liquor) 1 %, MgSO4 ·7H2O 0.05% 및 K2HPO4 ·3H2O 0.1 %를 포함하는 배지에서, 상기 균주를 106CFU/ml로 접종하고, 37℃의 온도에서 72시간 배양한 경우,
5000mU/ml이상의 감마-글루타밀트랜스퍼레이즈 활성을 갖는 것인, 균주.
The method according to claim 1,
Wherein the strain comprises:
Glucose 2%, 1.5% yeast extract, corn steep liquor (corn steep liquor) 1%, MgSO 4 · 7H 2 O 0.05% and K 2 HPO 4 · in a culture medium containing 3H 2 O 0.1%, the strain 10 6 CFU / ml and cultured at 37 ° C for 72 hours,
Wherein the strain has a gamma-glutamyltransferase activity of greater than 5000 mU / ml.
제1항에 있어서,
상기 균주는 기탁번호 KCTC12822BP인, 균주.
The method according to claim 1,
Wherein said strain is the accession number KCTC12822BP.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 균주 또는 그 배양물을 유효성분으로 포함하는 조성물.A composition comprising the strain of any one of claims 1 to 3 or a culture thereof as an active ingredient. 제4항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물 또는 약학적 조성물인, 조성물.
5. The method of claim 4,
Wherein the composition is a food composition or a pharmaceutical composition.
제5항에 있어서,
상기 식품 조성물은, 발효식품인, 조성물.
6. The method of claim 5,
Wherein the food composition is a fermented food.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 균주를 배양하는 단계를 포함하는 감마- 글루타밀트랜스퍼레이즈(gamma-glutamyltransferase) 생산방법.A method for producing gamma-glutamyltransferase comprising culturing a strain according to any one of claims 1 to 3. 제7항에 있어서,
균주는 45℃이하의 온도에서 배양하는 것인, 생산방법.
8. The method of claim 7,
Wherein the strain is cultured at a temperature of 45 DEG C or less.
제7항에 있어서,
균주는 20 내지 170 시간 동안 배양하는 것인, 생산방법.
8. The method of claim 7,
Wherein the strain is cultured for 20 to 170 hours.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 균주를 배양하는 단계를 포함하는 식품 제조방법.A method for producing food, comprising culturing the strain of any one of claims 1 to 3. 제10항에 있어서,
균주 또는 그 배양물을 식품에 첨가하는 단계를 포함하는 식품 제조방법.
11. The method of claim 10,
And adding the strain or the culture thereof to the food.
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