KR20160026855A

KR20160026855A - 근육 이영양증에서의 안지오텐신

Info

Publication number: KR20160026855A
Application number: KR1020157032700A
Authority: KR
Inventors: 라스나 사브하르왈; 마크 채플로; 리처드 프랭클린
Original assignee: 유니버시티 오브 아이오와 리써치 파운데이션; 타릭스 오펀, 엘엘씨.
Priority date: 2013-04-19
Filing date: 2014-04-18
Publication date: 2016-03-09
Also published as: RU2015141336A; US20180221433A1; US20160074464A1; BR112015026286A2; JP2016522178A; MX2015014668A; EP2986341A4; CN105636645A; CA2909002A1; WO2014189634A1; AU2014269028A1; EP2986341A1

Abstract

본 발명은 특히, 근육 이영양증을 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 근육 이영양증을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은, 부분적으로는, 근육 이영양증 동물 모델에서 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 투여가 근육 이영양증을 앓고 있는 환자에서의 특징적 증상인 섬유증을 감소시키고, 운동 활성을 복원시키고, 교감미주신경 균형을 복원시킨다는 예상치 못한 발견을 기반으로 한다. 따라서, 본 발명은 근육 이영양증을 위한 신규하고 보다 효과적인 요법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)의 자연-발생 안지오텐신 (1-7) 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 서열 1의 기능적 등가물이다. 일부 실시양태에서, 선형 펩티드는 Asp¹-Arg²-Val³-Ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 2)의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드는 4,7-고리화 안지오텐신 (1-7)이다.

Description

근육 이영양증에서의 안지오텐신 {ANGIOTENSINS IN MUSCULAR DYSTROPHY}

관련 출원에 대한 상호-참조

본원은 2013년 4월 19일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 61/813,929, 및 2013년 5월 1일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 61/818,307을 우선권 주장하며, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

연방 후원 연구에 관한 진술

본 발명은 국립 보건원 (NIH)에 의해 수여된 HL14388 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에서 특정 권리를 갖는다.

근육 이영양증 (MD)은 근섬유가 손상에 대해 비정상적으로 감수성인 일군의 질환을 지칭한다. 뒤시엔느 근육 이영양증과 같은 일부 하위유형은 전형적으로 일생 중 매우 초기에 나타나는 반면에, 다른 것, 예컨대 안근마비성 근육 이영양증은 일생 중 훨씬 후기에 나타나는 경향이 있다. 근육 이영양증을 위한 현행 치료는 코르티코스테로이드 투여, 이동을 지원하고 구축을 방지하기 위한 정형외과 장치의 사용, 및 물리요법을 포함한다. 불행하게도, 현재 사용되는 치료 중 어떠한 것도 질환의 진행을 저지하거나 역전시킬 수 있는 것으로 입증되지 않았다.

본 발명은 안지오텐신(1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 기반으로 하는, 근육 이영양증을 치료하는 개선된 방법을 제공한다. 본 발명은, 부분적으로는, 근육 이영양증 동물 모델에서 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 투여가 근육 이영양증을 앓고 있는 환자에서의 특징적 증상인 섬유증을 감소시키고, 운동 활성을 복원시키고, 교감미주신경 균형을 복원시킨다는 예상치 못한 발견을 기반으로 한다. 따라서, 본 발명은 근육 이영양증을 위한 신규하고 보다 효과적인 요법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 근육 이영양증을 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 투여하는 것을 포함하는, 근육 이영양증을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상이 강도, 중증도, 지속기간 또는 빈도에서 감소되거나 또는 발병 지연되도록 하는 투여 간격으로 주기적으로 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상은 근육 소모, 근육 약화, 근육 취약성, 근육 가성비대, 관절 구축, 골격 변형, 심근병증, 연하 장애, 장 및 방광 기능 장애, 근육 허혈, 인지 장애, 행동 기능장애, 사회화 장애, 척추측만증, 및 호흡 기능 장애로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 투여는 근육 재생, 섬유증 감소, 증가된 근육 강도, 증가된 유연성, 증가된 운동 범위, 증가된 스태미나, 감소된 피로감, 증가된 혈류, 개선된 인지, 개선된 폐 기능, 및/또는 염증 억제를 생성한다.

일부 실시양태에서, 근육 이영양증은 뒤시엔느 근육 이영양증, 베커 근육 이영양증, 베커 선천성 근긴장증, 에머리-드레이푸스 근육 이영양증, 미요시 근병증, 선천성 근육 이영양증, 안면견갑상완 근육 이영양증, 안인두 근육 이영양증, 원발성 측삭 경화증, 척수성 근육 위축, 다발근염, 길랑-바레 증후군, 앤더슨-타윌 증후군, 베스렘 근병증, 연수척수성 근육 위축, 카르니틴 결핍, 카르니틴 팔미틸 트랜스퍼라제 결핍, 중심핵병, 중심핵성 근병증, 샤르코-마리-투스병, 선천성 근무력 증후군, 선천성 근긴장성 이영양증 (워커-워버그 증후군), 코리병 (탈분지 효소 결핍), 데제린-소타스병, 피부근염, 원위 근육 이영양증, 근긴장성 이영양증 (근긴장성 근육 이영양증), 내분비 근병증, 오일렌부르그병 (선천성 이상근긴장증), 핀란드 원위 근병증, 포르브스병, 프리드리히 운동실조, 후쿠야마 선천성 근육 이영양증, 제2형, 제3형, 제5형, 제7형, 제9형, 제10형, 제11형 글리코겐증, 고워스-라잉 원위 근병증, 유전 봉입체 근염, 갑상선기능항진성 근병증, 갑상선기능저하성 근병증, 봉입체 근염, 유전성 근병증, 인테그린-결핍 선천성 근육 이영양증, 케네디병 (척수-연수성 근육 위축), 락테이트 데히드로게나제 결핍, 램버트-이튼 근무력 증후군, 지대 근육 이영양증, 맥아들병, 메로신-결핍 선천성 근육 이영양증, 미토콘드리아 근병증, 운동 뉴런 질환, 근육-눈-뇌 질환, 중증 근무력증, 미오아데닐레이트 데아미나제 결핍, 근원섬유성 근병증, 미오포스포릴라제 결핍, 선천성 근긴장증 (톰센병), 근세관성 근병증, 근긴장성 근육 이영양증, 네말린 근병증, 노나카 원위 근병증, 선천성 이상근긴장증, 피어슨 증후군, 주기성 마비, 포스포프룩토키나제 결핍 (타루이병), 포스포글리세레이트 키나제 결핍, 포스포글리세레이트 뮤타제 결핍, 포스포릴라제 결핍, 폼페병 (산 말타제 결핍), 진행성 외안근마비, 벨란더 원위 근병증 및 ZASP-관련 근병증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 선천성 근육 이영양증은 라미닌-α2-결핍 선천성 근육 이영양증, 울리히 선천성 근육 이영양증, 워커-워버그 증후군, 후쿠야마 선천성 근육 이영양증, 및 정신 지체 및 뇌회비대 동반 선천성 근육 이영양증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 근육 이영양증은 뒤시엔느 근육 이영양증이다.

임의의 다양한 투여 경로가 다양한 실시양태에 따라 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 비경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 비경구 투여는 정맥내, 피내, 흡입, 경피 (국소), 안내, 근육내, 피하, 근육내 및/또는 경점막 투여로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 경구로 투여된다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 매주, 매일 또는 가변 간격으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 약 1-1,000 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 약 50-500 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 약 400-500 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 항-근육 이영양증 의약과 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-근육 이영양증 의약은 에테플러센 (AVI-4658), HCT 1026, NCX 320, 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 아바나필, 아이오데나필, 미로데나필, 우데나필, 자프리나스트, 코르티코스테로이드, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)의 자연-발생 안지오텐신 (1-7) 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 서열 1의 기능적 등가물이다.

일부 실시양태에서, 기능적 등가물은 선형 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 선형 펩티드는 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에 나타나는 7개의 아미노산으로부터의 적어도 4개의 아미노산을 포함하는 서열을 포함하며, 여기서 적어도 4개의 아미노산은 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에 나타나는 것과 같은 그의 상대 위치를 유지한다. 일부 실시양태에서, 선형 펩티드는 4-25개의 아미노산을 함유한다. 일부 실시양태에서, 선형 펩티드는 자연-발생 안지오텐신 (1-7)의 단편이다. 일부 실시양태에서, 선형 펩티드는 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에서 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 함유한다. 일부 실시양태에서, 선형 펩티드는 Asp¹-Arg²-Val³-Ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 2)의 아미노산 서열을 갖는다.

일부 실시양태에서, 기능적 등가물은 시클릭 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드는 아미노산 사이에 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결은 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에서 위치 Tyr⁴ 및 Pro⁷에 상응하는 잔기에 위치한다. 일부 실시양태에서, 연결은 티오에테르 가교이다. 일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드는 그 외에는 서열 Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)의 자연-발생 안지오텐신 (1-7) 아미노산과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드는 하기 화학식을 갖는 4,7-고리화 안지오텐신 (1-7)이다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 프로테아제 내성, 혈청 안정성 및/또는 생체이용률을 증가시키는 하나 이상의 화학적 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 화학적 변형은 PEG화를 포함한다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 본 발명에 따라 근육 이영양증을 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 비-펩티드성 효능제이다. 일부 실시양태에서, 비-펩티드성 효능제는 하기 구조:

를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 경구로 투여된다.

본원에 사용된 용어 "약" 및 "대략"은 동의어로서 사용된다. 본원에서 약/대략의 존재 또는 부재 하에 사용된 임의의 수치는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인식하는 임의의 정상적인 변동을 포괄하는 것으로 의도된다.

본 발명의 다른 양상, 목적 및 이점은 하기 상세한 설명에서 분명해진다. 그러나, 본 발명의 실시양태를 나타내는 상세한 설명은 제한하는 것이 아니라 단지 예시로서 제공되는 것임을 이해해야 한다. 본 발명의 범위 내에서의 다양한 변화 및 변형은 상세한 설명으로부터 통상의 기술자에게 분명해질 것이다.

정의

본 발명이 보다 용이하게 이해되도록, 먼저 특정 용어를 하기에 정의한다. 하기 용어 및 다른 용어에 대한 추가의 정의는 본 명세서 전체에 걸쳐 기재되어 있다.

효능제: 본원에 사용된 용어 "효능제"는 관심 단백질의 기능에 긍정적 영향을 미치는 임의의 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 효능제는 관심 단백질의 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 증진, 강화, 활성화, 및/또는 증가시킨다. 특정한 실시양태에서, 효능제는 관심 단백질과 직접적으로 상호작용한다. 이러한 효능제는, 예를 들어 단백질, 화학적 화합물, 소분자, 핵산, 항체, 약물, 리간드 또는 다른 작용제일 수 있다.

동물: 본원에 사용된 용어 "동물"은 동물계의 임의의 구성원을 지칭한다. 일부 실시양태에서, "동물"은 임의의 발생 단계의 인간을 지칭한다. 일부 실시양태에서, "동물"은 임의의 발생 단계의 비-인간 동물을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 비-인간 동물은 포유동물 (예를 들어, 설치류, 마우스, 래트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 양, 소, 영장류 및/또는 돼지)이다. 일부 실시양태에서, 동물은 포유동물, 조류, 파충류, 양서류, 어류, 곤충류 및/또는 연충류를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 동물은 트랜스제닉 동물, 유전자 조작된 동물 및/또는 클론일 수 있다.

대략 또는 약: 본원에 사용된 용어 "대략" 또는 "약"은, 하나 이상의 관심 값에 적용되었을 때, 언급된 참조 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 언급되거나 또는 문맥으로부터 달리 분명하지 않은 한, 언급된 참조 값의 어느쪽 방향으로든 (더 크거나 또는 더 적은) 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 그 미만에 속하는 값의 범위를 지칭한다 (이러한 수치가 가능한 값의 100%를 초과할 경우는 제외함).

생물학적 활성: 본원에 사용된 어구 "생물학적 활성"은 생물계, 특히 유기체에서 활성을 갖는 임의의 작용제의 특성을 지칭한다. 예를 들어, 유기체에 투여되었을 때 그 유기체에 대해 생물학적 효과를 갖는 작용제는 생물학적 활성인 것으로 간주된다. 특정한 실시양태에서, 펩티드가 생물학적 활성인 경우에, 펩티드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 공유하는 그 펩티드의 부분은 전형적으로 "생물학적 활성" 부분으로 지칭된다. 특정 실시양태에서, 고유의 생물학적 활성이 없지만 하나 이상의 자연-발생 안지오텐신 화합물의 효과를 억제하는 펩티드는 생물학적 활성인 것으로 간주된다.

담체 또는 희석제: 본원에 사용된 용어 "담체" 및 "희석제"는 제약 제제의 제조에 유용한 제약상 허용되는 (예를 들어, 인간에게 투여하기에 안전하고 비-독성인) 담체 또는 희석 물질을 지칭한다. 예시적인 희석제는 멸균수, 정박테리아 주사용수 (BWFI), pH 완충 용액 (예를 들어, 포스페이트-완충 염수), 멸균 염수 용액, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.

투여 형태: 본원에 사용된 용어 "투여 형태" 및 "단위 투여 형태"는 치료되는 환자를 위한 치료제의 물리적 이산 단위를 지칭한다. 각 단위는 목적하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 물질을 함유한다. 그러나, 조성물의 총 투여량은 타당한 의학적 판단 범위 내에서 담당의에 의해 결정될 것으로 이해될 것이다.

투약 요법: 본원에 사용된 용어 "투약 요법" (또는 "치료 요법")은 전형적으로는 시간상 이격되어 대상체에게 개별적으로 투여되는 (전형적으로 하나 초과의) 일련의 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, 주어진 치료제는 하나 이상의 용량을 수반할 수 있는, 권고되는 투약 요법을 갖는다. 일부 실시양태에서, 투약 요법은 각각 서로 같은 길이의 시간으로 이격된 복수 회의 용량을 포함하고; 일부 실시양태에서, 투약 요법은 개개의 용량이 적어도 2개의 상이한 시간으로 이격된 복수 회의 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 미리 결정된 기간에 걸쳐 연속적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 치료제는 1일에 1회 (QD) 또는 1일에 2회 (BID) 투여된다.

기능적 등가물 또는 유도체: 본원에 사용된 용어 "기능적 등가물" 또는 "기능적 유도체"는 원래 서열의 그것과 실질적으로 유사한 (기능 또는 구조적) 생물학적 활성을 보유하는 분자를 나타낸다. 기능적 유도체 또는 등가물은 천연 유도체일 수 있거나 또는 합성적으로 제조된다. 예시적인 기능적 유도체는 1개 이상의 아미노산의 치환, 결실 또는 부가를 가지며, 단 단백질의 생물학적 활성은 보존된 아미노산 서열을 포함한다. 치환하는 아미노산은 바람직하게는 치환되는 아미노산의 그것과 유사한 화학-물리적 특성을 갖는다. 바람직한 유사한 화학-물리적 특성은 전하, 벌크성, 소수성, 친수성 등에서의 유사성을 포함한다.

개선시키다, 증가시키다 또는 감소시키다: 본원에 사용된 용어 "개선시키다", "증가시키다" 또는 "감소시키다", 또는 문법적 동의어는 기준선 측정치, 예컨대 본원에 기재된 치료의 개시 전의 동일 개체에서의 측정치, 또는 본원에 기재된 치료의 부재 하의 대조군 개체 (또는 다수의 대조군 개체)에서의 측정치에 대해 상대적인 값을 나타낸다. "대조군 개체"는 치료되는 개체와 거의 동일한 연령인, 치료되는 개체와 동일한 형태의 질환을 앓는 개체이다 (치료되는 개체 및 대조군 개체(들)에서의 질환 단계가 비슷함을 보장하기 위함).

시험관내: 본원에 사용된 용어 "시험관내"는 다세포 유기체 내에서보다는 인공 환경에서, 예를 들어 시험 튜브 또는 반응 용기에서, 세포 배양물 등에서 일어나는 사건을 지칭한다.

생체내: 본원에 사용된 용어 "생체내"는 다세포 유기체, 예컨대 인간 및 비-인간 동물 내에서 일어나는 사건을 지칭한다. 세포-기반 시스템과 관련하여, 상기 용어는 (예를 들어, 시험관내 시스템과 대조적으로) 살아있는 세포 내에서 일어나는 사건을 지칭하는데 사용될 수 있다.

단리된: 본원에 사용된 용어 "단리된"은 (1) (천연에서든 및/또는 실험 설정에서든) 처음 생산되었을 때 그와 회합되어 있던 성분 중 적어도 일부로부터 분리되고/거나, (2) 인공적으로 생산, 제조 및/또는 제작된 물질 및/또는 실체를 지칭한다. 단리된 물질 및/또는 실체는 그와 처음 회합되어 있던 다른 성분의 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 98%, 약 99%, 실질적으로 100%, 또는 100%로부터 분리될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 작용제는 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 초과로, 실질적으로 100%, 또는 100% 순수하다. 본원에 사용된 바와 같이, 물질은 다른 성분이 실질적으로 없는 경우에 "순수"하다. 본원에 사용된 용어 "단리된 세포"는 다세포 유기체에 함유되지 않은 세포를 지칭한다.

근육 이영양증: 본원에 사용된 용어 "근육 이영양증" 또는 "MD"는 근골격계를 약화시키는 일군의 질환을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 근육 이영양증은 MD-유사 상태이다. 일부 실시양태에서, 이러한 질환은 골격근의 진행성 소모를 포함한다. 일부 실시양태에서, 심장근 및 평활근이 이환된다.

예방하다: 본원에 사용된 용어 "예방하다" 또는 "예방"은 질환, 장애 및/또는 상태의 발생과 관련하여 사용되는 경우에 질환, 장애 및/또는 상태가 발생할 위험을 감소시키는 것을 지칭한다. "위험"의 정의를 참조한다.

폴리펩티드: 본원에 사용된 용어 "폴리펩티드"는 펩티드 결합을 통해 함께 연결된 아미노산의 순차적 쇄를 지칭한다. 이 용어는 임의의 길이의 아미노산 쇄를 지칭하는데 사용되지만, 통상의 기술자는 이 용어가 긴 쇄에 제한되지 않고 펩티드 결합을 통해 함께 연결된 2개의 아미노산을 포함하는 최소 쇄를 지칭할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 통상의 기술자에게 공지된 바와 같이, 폴리펩티드는 가공 및/또는 변형될 수 있다.

단백질: 본원에 사용된 용어 "단백질"은 이산 단위로서 기능하는 하나 이상의 폴리펩티드를 지칭한다. 단일 폴리펩티드가 이산 기능 단위이고 이산 기능 단위를 형성하기 위해 다른 폴리펩티드와의 영구적 또는 일시적 물리적 회합을 필요로 하지 않는 경우에, 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 이산 기능 단위가 서로 물리적으로 회합된 1개 초과의 폴리펩티드로 구성된 경우에, 용어 "단백질"은 물리적으로 커플링되고 이산 단위로서 함께 기능하는 다중 폴리펩티드를 지칭한다.

위험: 문맥으로부터 이해될 바와 같이, 질환, 장애 및/또는 상태의 "위험"은 특정한 개체에서 질환, 장애 및/또는 상태 (예를 들어, 근육 이영양증)가 발생할 가능성을 포함한다. 일부 실시양태에서, 위험은 백분율로 표현된다. 일부 실시양태에서, 위험은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90에서 100%까지이다. 일부 실시양태에서 위험은 참조 샘플 또는 참조 샘플의 군과 연관된 위험에 대해 상대적인 위험으로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 참조 샘플 또는 참조 샘플의 군은 질환, 장애, 상태 및/또는 사건 (예를 들어, 근육 이영양증)의 공지된 위험을 갖는다. 일부 실시양태에서, 참조 샘플 또는 참조 샘플의 군은 특정한 개체와 비슷한 개체로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 상대적인 위험은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과이다.

안정성: 본원에 사용된 용어 "안정한"은 연장된 기간에 걸쳐 치료 효능 (예를 들어, 의도된 생물학적 활성 및/또는 생리화학적 완전성의 전부 또는 대부분)을 유지하는 치료제의 능력을 지칭한다. 치료제의 안정성 및 이러한 치료제의 안정성을 유지하는 제약 조성물의 능력은 연장된 기간에 걸쳐 (예를 들어, 적어도 1, 3, 6, 12, 18, 24, 30, 36개월 또는 그 초과 동안) 평가될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 제약 조성물은 그와 함께 제제화되는 1종 이상의 치료제를 안정화시킬 수 있거나 또는 대안적으로 그의 분해를 늦추거나 또는 예방할 수 있도록 제제화된다. 제제와 관련하여, 안정한 제제는 그 안의 치료제가 보관시 및 공정 (예컨대 동결/해동, 기계적 혼합 및 동결건조) 동안 그의 물리적 및/또는 화학적 완전성 및 생물학적 활성을 본질적으로 보유하는 것이다.

대상체: 본원에 사용된 용어 "대상체"는 인간 또는 임의의 비-인간 동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 개, 고양이, 소, 돼지, 양, 말 또는 영장류)을 지칭한다. 인간은 출생 전 및 출생 후의 형태를 포함한다. 많은 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 대상체는 질환의 진단 또는 치료를 위해 의료 제공자에게 진찰을 받는 인간을 지칭하는 환자일 수 있다. 용어 "대상체"는 본원에서 "개체" 또는 "환자"와 상호교환가능하게 사용된다. 대상체는 질환 또는 장애를 앓고 있을 수 있거나 또는 그에 걸리기 쉽지만, 질환 또는 장애의 증상을 나타낼 수도 있고 나타내지 않을 수도 있다.

실질적으로: 본원에 사용된 용어 "실질적으로"는 관심 특성 또는 특징을 전체적으로 또는 거의 전체적인 범위 또는 정도로 나타내는 정성적 상태를 지칭한다. 생물학적 및 화학적 현상은, 그것이 있을지라도, 드물게 완결되고/거나 완성까지 진행되거나 또는 절대적 결과를 달성하거나 회피한다는 것을 생물학 분야의 통상의 기술자는 이해할 것이다. 용어 "실질적으로"는 따라서 본원에서 많은 생물학적 및 화학적 현상에 내재된 완성의 잠재적인 부족을 포착하기 위해 사용된다.

를 앓고 있는: 질환, 장애 및/또는 상태"를 앓고 있는" 개체는 질환, 장애 및/또는 상태로 진단되었거나 또는 그의 하나 이상의 증상을 나타낸다.

에 걸리기 쉬운: 질환, 장애 및/또는 상태"에 걸리기 쉬운" 개체는 질환, 장애 및/또는 상태로 진단된 적은 없다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애 및/또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 질환, 장애 및/또는 상태의 증상을 나타내지 않을 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애, 상태 또는 사건 (예를 들어, 근육 이영양증)에 걸리기 쉬운 개체는 하기 중 하나 이상을 특징으로 할 수 있다: (1) 질환, 장애 및/또는 상태의 발생과 연관이 있는 유전자 돌연변이; (2) 질환, 장애 및/또는 상태의 발생과 연관이 있는 유전자 다형성; (3) 질환, 장애 및/또는 상태와 연관이 있는 단백질의 증가 및/또는 감소된 발현 및/또는 활성; (4) 질환, 장애, 상태 및/또는 사건의 발생과 연관이 있는 습관 및/또는 생활방식; (5) 이식을 겪었거나, 이식을 겪을 계획이 있거나, 또는 이식이 요구됨. 일부 실시양태에서, 질환, 장애 및/또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 질환, 장애 및/또는 상태가 발생할 것이다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애 및/또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 질환, 장애 및/또는 상태가 발생하지 않을 것이다.

치료 유효량: 본원에 사용된 용어 치료제의 "치료 유효량"은 질환, 장애 및/또는 상태를 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 투여된 경우에 질환, 장애 및/또는 상태를 치료, 진단, 예방, 및/또는 그의 증상(들)의 발병을 지연시키기에 충분한 양을 의미한다. 통상의 기술자는 치료 유효량이 적어도 하나의 단위 용량을 포함하는 투약 요법을 통해 전형적으로 투여된다는 것을 인식할 것이다.

치료하는: 본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료" 또는 "치료하는"은 특정한 질환, 장애 및/또는 상태의 하나 이상의 증상 또는 양상을 부분적으로 또는 완전히 완화, 개선, 경감, 억제, 예방, 발병을 지연, 중증도를 감소 및/또는 발생률을 감소시키는데 사용되는 임의의 방법을 지칭한다. 치료는 질환과 연관된 병리상태가 발생할 위험을 감소시키기 위한 목적으로, 질환의 징후를 나타내지 않고/거나 단지 질환의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 투여될 수 있다.

도 1A는 수행된 분석 중 일부와 함께, 실시예 2에 사용된 원격측정의 여러 개략도를 제시하고, 1B는 실시예 2에 제시된 실험 설계를 제시한다.
도 2A는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 평균 동맥 혈압을 도시한 막대 그래프를 제시하고, 2B는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 24시간 평균 심박수를 제시한다.
도 3은 무선원격측정을 통해 측정된, 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 24시간 평균 운동 활성을 나타내는 막대 그래프를 제시한다.
도 4A는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 압력반사 감수성을 도시한 막대 그래프를 제시하고, 4B는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 아트로핀에 대한 반응에 의해 측정된 심장 미주신경 긴장을 제시하고, 4C는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 프로프라놀롤에 대한 반응에 의해 측정된 심장 교감신경 긴장을 제시하고, 4D는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 클로리손다민에 대한 반응에 의해 측정된 혈관운동 교감신경 긴장을 제시한다.
도 5A는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 사이의 근육 조직의 섬유증의 비교를 제시하기 위한, 마송 트리크롬 염색을 사용한 조직병리학적 데이터를 제시하고, 5B는 패널 A에서의 결과를 정량화한 막대 그래프를 제시한다.
도 6은 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 조직에서의 안지오텐신 제1형 수용체 (AT₁R) 수용체 발현 수준을 제시하는, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 488 염색의 결과를 나타낸다.
도 7A는 대조군 C57BL6 마우스 +/- Ang (1-7) 처리 및 Sgcd -/- 마우스 +/- Ang (1-7) 처리에서 골격근 세포의 디히드로에티듐 (DHE) 염색을 제시하고, 7B는 패널 A에 제시된 데이터를 나타내는 막대 그래프를 제시한다.
도 8은 염수, TXA127 (서열 1), 팬사이트 (서열 22), 또는 TXA 301 (서열 2) 중 하나를 사용한 제6주, 제7주 및 제8주의 처리 동안 러닝 휠 상에서 Sgcd -/- 마우스에 의해 이루어진 평균 분당 회전의 예시적인 그래프를 제시한다. 데이터 = 평균 ± SE이고, * = p < 0.05 vs. 염수 군이다.
도 9는 20일 동안 염수, TXA127 (서열 1), 팬사이트 (서열 22), 또는 TXA 301 (서열 2) 중 하나를 사용하여 처리한 Sgcd -/- 마우스에 의해 이루어진 러닝 휠 상에서의 평균 분당 회전의 예시적인 그래프를 제시한다.
도 10A는 염수, TXA127 (서열 1), 팬사이트 (서열 22), 또는 TXA 301 (서열 2) 중 하나를 사용하여 처리한 36-43주령 사이의 Sgcd -/- 마우스로부터 채취한 사두근 근육의 예시적인 헤마톡실린-에오신 염색 (상단 열) 및 마송 트리크롬 염색 (하단 열)을 제시하고; 10B는 마송 트리크롬 데이터로부터 계산된 (청색의 면적으로서 계산됨) 섬유증의 양을 제시하고 이를 막대 그래프로 나타낸다. 데이터 = 평균 ± SE이고, * = p < 0.05 vs. 염수 군이다.
도 11A는 염수, TXA127 (서열 1), 팬사이트 (서열 22), 또는 TXA 301 (서열 2) 중 하나를 사용하여 처리한 Sgcd -/- 마우스로부터 채취한 사두근 근육의 예시적인 공초점 영상을 제시하고, 산화성 스트레스는 디히드로에티듐 (DHE) 염색을 통해 나타내어지며; 11B는 형광 강도를 NIH 이미지J 소프트웨어를 사용하여 정량화하고 염수-처리된 Sgcd-/- 마우스에서 측정된 평균 형광 강도의 백분율로 정규화한 후의, 염색된 사두근의 6개 절편의 평균을 도시한 막대 그래프를 제시한다. 데이터 = 평균 ± SE이고, * = p < 0.05 vs. 염수 군이다.

본 발명은 특히, 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 그의 유사체 또는 유도체, 또는 AVE0991과 같은 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 사용을 기반으로 하는 근육 이영양증을 치료하기 위한 개선된 조성물 및 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상은 강도, 중증도, 지속기간 또는 빈도에서 감소되거나 또는 발병 지연된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 그의 유사체 또는 유도체, 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 투여는 근육 재생, 섬유증 감소, 증가된 근육 강도, 증가된 유연성, 증가된 운동 범위, 증가된 스태미나, 감소된 피로감, 증가된 혈류, 개선된 인지, 개선된 폐 기능, 및/또는 염증 억제를 생성한다.

본 발명의 다양한 측면이 하기 섹션에 상세하게 기재되어 있다. 섹션의 용도는 본 발명을 제한하려는 의도가 아니다. 각 섹션은 본 발명의 임의의 측면에 적용될 수 있다. 본원에서, 달리 언급되지 않는 한 "또는"의 사용은 "및/또는"을 의미한다.

근육 이영양증

근육 이영양증 (MD)은 근육의 변성을 유발하여 약하고 손상된 운동으로 이어지는 일군의 유전성 장애이다. 모든 근육 이영양증의 중심 양상은 그것이 사실상 진행성이라는 것이다. 근육 이영양증은 뒤시엔느 근육 이영양증, 베커 근육 이영양증, 베커 선천성 근긴장증, 에머리-드레이푸스 근육 이영양증, 미요시 근병증, 선천성 근육 이영양증, 안면견갑상완 근육 이영양증, 안인두 근육 이영양증, 원발성 측삭 경화증, 척수성 근육 위축, 다발근염, 길랑-바레 증후군, 앤더슨-타윌 증후군, 베스렘 근병증, 연수척수성 근육 위축, 카르니틴 결핍, 카르니틴 팔미틸 트랜스퍼라제 결핍, 중심핵병, 중심핵성 근병증, 샤르코-마리-투스병, 선천성 근무력 증후군, 선천성 근긴장성 이영양증 (워커-워버그 증후군), 코리병 (탈분지 효소 결핍), 데제린-소타스병, 피부근염, 원위 근육 이영양증, 근긴장성 이영양증 (근긴장성 근육 이영양증), 내분비 근병증, 오일렌부르그병 (선천성 이상근긴장증), 핀란드 원위 근병증, 포르브스병, 프리드리히 운동실조, 후쿠야마 선천성 근육 이영양증, 제2형, 제3형, 제5형, 제7형, 제9형, 제10형, 제11형 글리코겐증, 고워스-라잉 원위 근병증, 유전 봉입체 근염, 갑상선기능항진성 근병증, 갑상선기능저하성 근병증, 봉입체 근염, 유전성 근병증, 인테그린-결핍 선천성 근육 이영양증, 케네디병 (척수-연수성 근육 위축), 락테이트 데히드로게나제 결핍, 램버트-이튼 근무력 증후군, 맥아들병, 메로신-결핍 선천성 근육 이영양증, 미토콘드리아 근병증, 운동 뉴런 질환, 근육-눈-뇌 질환, 중증 근무력증, 미오아데닐레이트 데아미나제 결핍, 근원섬유성 근병증, 미오포스포릴라제 결핍, 선천성 근긴장증 (톰센병), 근세관성 근병증, 근긴장성 근육 이영양증, 네말린 근병증, 노나카 원위 근병증, 선천성 이상근긴장증, 피어슨 증후군, 주기성 마비, 포스포프룩토키나제 결핍 (타루이병), 포스포글리세레이트 키나제 결핍, 포스포글리세레이트 뮤타제 결핍, 포스포릴라제 결핍, 폼페병 (산 말타제 결핍), 진행성 외안근마비, 벨란더 원위 근병증 및 ZASP-관련 근병증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 선천성 근육 이영양증은 라미닌-α2-결핍 선천성 근육 이영양증, 울리히 선천성 근육 이영양증, 워커-워버그 증후군, 후쿠야마 선천성 근육 이영양증, 및 정신 지체 및 뇌회비대 동반 선천성 근육 이영양증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 근육 이영양증은 뒤시엔느 근육 이영양증이다.

근육 이영양증의 증상은 일부 또는 전체 근육에 이환되는 근육 이영양증의 유형에 의해 달라질 수 있다. 근육 이영양증의 예시적인 증상은 근육 운동 기능의 발달 지연, 하나 이상의 근육군 사용 곤란, 근육 소모, 근육 약화, 근육 취약성, 근육 가성비대, 관절 구축, 골격 변형, 심근병증, 근육 허혈, 척추측만증, 연하, 말하기 또는 섭식 곤란, 장 및 방광 기능 장애, 침흘림, 안검 하수, 빈번한 넘어짐, 성인으로서 근육 또는 근육군에서의 강도 상실, 근육 크기에서의 상실, 약화 또는 변경된 신체 생물역학으로 인한 보행 문제, 호흡 기능 장애, 및/또는 인지 또는 행동 장애/정신 지체를 포함한다.

근육 이영양증에 대해 어떠한 공지된 치유도 존재하지 않지만, 대증적 및 질환 조절 요법 둘 다를 포함하는 몇몇 지지적 치료가 사용된다. 코르티코스테로이드, ACE 억제제, 안지오텐신 수용체 차단제, 물리 요법, 교정 장치, 휠체어, 또는 ADL 및 폐 기능을 위한 다른 보조 의료 장치가 통상적으로 근육 이영양증에서 사용된다. 심장 박동조율기는 근긴장성 이영양증에서 심장 부정맥으로부터의 돌연사를 예방하기 위해 사용된다. 근긴장증의 증상 (이완 불능)을 개선시키는 항-근긴장성 작용제는 멕실레틴을 포함하고, 일부 경우에 페니토인, 프로카인아미드 및 퀴닌을 포함한다.

뒤시엔느 근육 이영양증

뒤시엔느 근육 이영양증 (DMD)은 근육 변성 및 최종 사망을 야기하는 근육 이영양증의 열성 X-연관 형태이다. DMD는 근위 근육에서의 약화, 비정상적 보행, 비복근 (종아리) 근육에서의 비대, 및 상승된 크레아틴 키나제를 특징으로 한다. 많은 DMD 환자는 증상/징후가 전형적으로 더 분명해졌을 때 5세경에 진단된다. 이환 개체는 전형적으로 10-13세경에 보행이 정지되고, 심호흡 기능장애로 인해 20대 중후반 또는 그 전에 사망한다.

장애 DMD는 세포막의 디스트로글리칸 복합체 (DGC)에 구조적 안정성을 제공하는 근육 조직 내 중요한 구조적 성분인 단백질 디스트로핀을 코딩하는, 인간 X 염색체 상에 위치하는 디스트로핀 유전자에서의 돌연변이에 의해 유발된다. 디스트로핀은 내부 세포질 액틴 필라멘트망 및 세포외 매트릭스를 연결하여 근섬유에 물리적 힘을 제공한다. 따라서, 디스트로핀의 변경 또는 부재는 비정상적 근초막 열상 및 근섬유 괴사를 야기한다. 둘 다의 성별이 돌연변이를 보유할 수 있지만, 여성이 질환의 중증 징후를 드물게 나타낸다.

DMD의 주요 증상은 근육 소모와 연관된 근육 약화로, 전형적으로 수의근이 최초로 이환되고, 특히 엉덩이, 골반 부위, 넓적다리, 어깨, 및 종아리 근육이 이환된다. 근육 약화는 또한 팔, 목 및 다른 부위에서 발생한다. 종종 종아리가 확대된다. 징후 및 증상은 통상적으로 6세 전에 나타나고, 유아기와 같이 초기에 나타날 수 있다. 다른 신체 증상은 지연된 독립 보행 능력, 보행, 발디딤 또는 달리기에서의 진행성 곤란, 및 보행 능력의 최종 상실 (통상적으로 12세쯤), 빈번한 넘어짐, 피로; 운동 기능 (달리기, 호핑, 점핑) 곤란, 증가된 요추 전만, 엉덩이-굴곡근 단축으로 이어짐, 근섬유가 단축되고 결합 조직에서 섬유증이 발생함으로 인해 기능성을 손상시키는 아킬레스건 및 슬와부근의 구축, 근섬유 변형, 지방 및 결합 조직에 의한 근육 조직의 대체로 인한 혀 및 종아리 근육의 가성비대 (팽대), 보다 높은 신경행동 장애 (예를 들어, ADHD)의 위험, 학습 장애 (난독증), 및 특정 인지 기능 (특히 단기 언어 기억)에서의 비-진행성 약화, 골격 변형 (일부 경우에 척추측만증 포함)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

베커 근육 이영양증

베커 근육 이영양증은 다리 및 골반 근육의 진행성 약화를 특징으로 하는 X-연관 열성 유전성 질환이다. DMD와 마찬가지로 베커 근육 이영양증은 디스트로핀 유전자에서의 돌연변이에 의해 유발되지만, DMD와 달리 베커 근육 이영양증을 앓고 있는 대상체는 일반적으로, 실제 어떠한 기능적 디스트로핀도 생산하지 않을 수 있는 DMD 환자보다 더 높은 수준의 기능적 디스트로핀을 생산한다. 그 결과, 베커 근육 이영양증은 전형적으로 DMD보다 덜 중증인 것으로 여겨진다.

베커 근육 이영양증의 증상은 특히 하지에서의 진행성 근육 약화, 발가락-보행, 빈번한 넘어짐, 호흡 곤란, 골격 변형, 예컨대 척추측만증, 피로, 및 상승된 크레아틴 포스포키나제 (CPK)를 포함한다. 증상의 중증도 및 배열은 DMD에서보다 훨씬 더 큰 정도로 개체마다 다르다.

지대 근육 이영양증

지대 근육 이영양증은 뒤시엔느 및 베커 근육 이영양증 둘 다와 몇몇 유사성을 보유하지만, 엉덩이 및 어깨 근육 (즉, "지대" 근육)에 가장 크게 이환되는 별개의 병리상태를 나타낸다. 지대 근육 이영양증의 정확한 기저 메카니즘은 공지되어 있지 않지만, α, β, γ, 및 δ 사르코글리칸을 비롯한 여러 사르코글리칸이 질환의 발생 및 진행에서 유의한 역할을 하는 것으로 여겨진다.

지대 근육 이영양증의 발달 과정을 고려하면, (비록 LGMD2C로 공지된 지대 근육 이영양증의 가장 중증 형태에서와 같이, 심장 및 호흡 근육의 부전이 일어날 수 있을 지라도) 이는 종종 치명적이지 않을 수 있다. 그러나, 전형적으로 대상체는 상기 질환이 진단된 지 20년 내에 휠체어를 타게 된다. 지대 근육 이영양증의 일부 증상은 다른 유형의 근육 이영양증과 중첩되지만, 지대 MD 환자에게 특히 흔한 증상은 보행 곤란, 굽힘 곤란, 및 보행 또는 계단 오르기 도중 넘어짐을 포함한다.

안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제

본 발명은 특히, 근육 이영양증을 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 근육 이영양증을 치료하는 방법을 제공한다.

안지오텐신 (1-7) 펩티드

본원에 사용된 용어 "안지오텐신 (1-7) 펩티드"는 자연-발생 안지오텐신 (1-7), 및 자연-발생 안지오텐신 (1-7)의 임의의 기능적 등가물, 유사체 또는 유도체를 둘 다 지칭한다. 본원에 사용된 "펩티드" 및 "폴리펩티드"는 상호교환가능한 용어이고, 펩티드 결합에 의해 함께 결합된 2개 이상의 아미노산을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "펩티드" 및 "폴리펩티드"는 선형 및 시클릭 펩티드 둘 다를 포함한다. 용어 "안지오텐신-(1-7)", "Ang-(1-7)", 및 "TXA-127"은 상호교환가능하게 사용된다.

자연-발생 안지오텐신 (1-7)

자연-발생 안지오텐신 (1-7) (Ang-(1-7)로도 지칭됨)은 하기 제시된 7개의 아미노산 펩티드이다:

Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)

이는 레닌-안지오텐신계의 일부이고, 주로 간에 의해 구성적으로 생산되고 순환 내로 방출되는 α-2-글로불린인, 안지오텐시노겐으로도 공지되어 있는 전구체로부터 전환된다. 안지오텐시노겐은 세르핀 패밀리의 구성원이고, 레닌 기질로도 공지되어 있다. 인간 안지오텐시노겐은 452개의 긴 아미노산이지만, 다른 종은 다양한 크기의 안지오텐시노겐을 갖는다. 전형적으로, 처음 12개의 아미노산이 안지오텐신 활성에 가장 중요하다:

Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷-Phe⁸-His⁹-Leu¹⁰-Val¹¹-Ile¹² (서열 3)

다양한 유형의 안지오텐신이 다양한 효소의 작용에 의해 형성될 수 있다. 예를 들어, 안지오텐신 (1-7)은 안지오텐신-전환 효소 2 (ACE 2)의 작용에 의해 생성된다.

Ang-(1-7)은 Mas 수용체에 대한 내인성 리간드이다. Mas 수용체는 7개의 막횡단 관통 영역을 함유하는 G-단백질 커플링된 수용체이다. 본원에 사용된 용어 "안지오텐신-(1-7) 수용체"는 G 단백질-커플링된 Mas 수용체를 포괄한다.

본원에 사용된 용어 "자연-발생 안지오텐신 (1-7)"은 천연 공급원으로부터 정제된 임의의 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 및 자연-발생 안지오텐신 (1-7)의 아미노산 서열과 동일한 서열을 갖는 임의의 재조합적으로 생성되거나 화학적으로 합성된 펩티드를 포함한다.

Ang-(1-7)의 기능적 등가물, 유사체 또는 유도체

일부 실시양태에서, 본 발명에 적합한 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 자연-발생 Ang-(1-7)의 기능적 등가물이다. 본원에 사용된 자연-발생 Ang-(1-7)의 기능적 등가물은 자연-발생 Ang-(1-7)과 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 자연-발생 Ang-(1-7)과 실질적으로 동일하거나 유사한 활성을 보유하는 임의의 펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 자연-발생 Ang-(1-7)의 기능적 등가물은 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 결정된 바와 같은 혈관신생촉진 활성, 또는 혈관신생에 긍정적 영향을 미치는 활성, 예컨대 산화질소 방출, 혈관확장, 내피 기능 개선, 항이뇨, 또는 본원에서 논의된 다른 특성 중 하나를 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 자연-발생 Ang-(1-7)의 기능적 등가물은 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 다양한 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 안지오텐신-(1-7) 수용체 (예를 들어, G 단백질-커플링된 Mas 수용체)에 결합할 수 있거나, 그를 활성화시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, Ang-(1-7)의 기능적 등가물은 또한 안지오텐신 (1-7) 유사체 또는 유도체, 또는 기능적 유도체로도 지칭된다.

전형적으로, 안지오텐신 (1-7)의 기능적 등가물은 자연-발생 Ang-(1-7)과 아미노산 서열 유사성을 공유한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 Ang-(1-7)의 기능적 등가물은 자연-발생 Ang-(1-7)에 나타나는 7개의 아미노산으로부터의 적어도 3개 (예를 들어, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개)의 아미노산을 포함하는 서열을 함유하며, 여기서 적어도 3개 (예를 들어, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 또는 적어도 7개)의 아미노산은 자연-발생 Ang-(1-7)에 나타나는 것과 같은 그의 상대 위치 및/또는 간격을 유지한다.

일부 실시양태에서, Ang-(1-7)의 기능적 등가물은 또한 자연-발생 Ang-(1-7)의 아미노산 서열과 적어도 50% (예를 들어, 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90%) 동일한 서열을 함유하는 임의의 펩티드를 포괄한다. 아미노산 서열 동일성의 백분율은 아미노산 서열의 정렬에 의해 결정될 수 있다. 관련 기술분야의 기술 내의 다양한 방식으로, 예를 들어 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 아미노산 서열의 정렬이 달성될 수 있다. 통상의 기술자는 비교될 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여, 정렬 측정에 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 바람직하게는, 아미노산 서열 동일성을 결정하는데 WU-BLAST-2 소프트웨어가 사용된다 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266, 460-480 (1996); http://blast.wustl/edu/blast/README.html). WU-BLAST-2는 대부분이 디폴트 값으로 설정된 몇몇 검색 파라미터를 사용한다. 조정가능한 파라미터는 하기 값으로 설정된다: 오버랩 범위=1, 오버랩 분율=0.125, 워드 역치 (T)=11. HSP 점수 (S) 및 HSP S2 파라미터는 동적 값이고, 특정한 서열의 조성에 따라 프로그램 그 자체에 의해 확립되지만, 최소 값은 조정될 수 있고, 상기 나타낸 바와 같이 설정된다.

일부 실시양태에서, Ang-(1-7)의 기능적 등가물, 유사체 또는 유도체는 자연-발생 Ang-(1-7)의 단편이다. 일부 실시양태에서, Ang-(1-7)의 기능적 등가물, 유사체 또는 유도체는 자연-발생 Ang-(1-7) 내에 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 함유한다. Ang-(1-7) 기능적 등가물, 유사체 또는 유도체는 아미노산 서열을 치환, 부가 및/또는 결실에 의해 변경함으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, 자연-발생 Ang-(1-7)의 서열 (서열 1) 내의 1개 이상의 아미노산 잔기는 기능적 등가물로서 작용하는 유사한 극성의 또 다른 아미노산에 의해 치환될 수 있고, 이는 침묵 변경을 생성한다. 서열 내의 아미노산에 대한 치환은 아미노산이 속하는 부류의 다른 구성원으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 양으로 하전된 (염기성) 아미노산은 아르기닌, 리신 및 히스티딘을 포함한다. 비극성 (소수성) 아미노산은 류신, 이소류신, 알라닌, 페닐알라닌, 발린, 프롤린, 트립토판 및 메티오닌을 포함한다. 비하전 극성 아미노산은 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴 및 글루타민을 포함한다. 음으로 하전된 (산성) 아미노산은 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 아미노산 글리신은 비극성 아미노산 패밀리 또는 비하전 (중성) 극성 아미노산 패밀리에 포함될 수 있다. 아미노산 패밀리 내에서 이루어지는 치환은 일반적으로 보존적 치환인 것으로 이해된다. 예를 들어, 펩티드 억제제의 아미노산 서열은 변형 또는 치환될 수 있다.

Ang-(1-7) 기능적 등가물, 유사체 및 유도체의 예는 하기 표제 "예시적인 안지오텐신(1-7) 펩티드" 섹션에 기재되어 있다.

안지오텐신-(1-7) 펩티드는 임의의 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 안지오텐신-(1-7) 펩티드는 5-25개의 아미노산 잔기, 예컨대 5-20, 5-15 또는 5-10개의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 Ang(1-7) 펩티드는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 잔기를 함유한다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신-(1-7) 펩티드는 프로테아제 내성, 혈청 안정성 및/또는 생체이용률을 증가시키는 하나 이상의 변형을 함유한다. 일부 실시양태에서, 적합한 변형은 PEG화, 아세틸화, 글리코실화, 비오티닐화, D-아미노산 및/또는 비천연 아미노산으로의 치환, 및/또는 펩티드의 고리화로부터 선택된다.

본원에 사용된 용어 "아미노산"은 가장 넓은 의미로, 폴리펩티드 쇄 내로 혼입될 수 있는 임의의 화합물 및/또는 물질을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 아미노산은 일반 구조 H₂N-C(H)(R)-COOH를 갖는다. 특정 실시양태에서, 아미노산은 자연-발생 아미노산이다. 특정 실시양태에서, 아미노산은 합성 또는 비천연 아미노산 (예를 들어, α,α-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산)이고; 일부 실시양태에서, 아미노산은 D-아미노산이고; 특정 실시양태에서, 아미노산은 L-아미노산이다. "표준 아미노산"은 둘 다 천연에서 펩티드에 혼입되는 L- 및 D- 아미노산 둘 다를 비롯한, 자연 발생 펩티드에서 통상적으로 발견되는 임의의 20종의 표준 아미노산을 지칭한다. "비표준" 또는 "비통상 아미노산"은, 이것이 합성적으로 제조되는지 또는 천연 공급원으로부터 수득되는지의 여부와 관계없이, 표준 아미노산 이외의 임의의 아미노산을 지칭한다. 본원에 사용된 "합성 또는 비천연 아미노산"은 염, 아미노산 유도체 (예컨대 아미드) 및/또는 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 화학적으로 변형된 아미노산을 포괄한다. 펩티드 내의 카르복시- 및/또는 아미노-말단의 아미노산을 비롯한 아미노산은 그의 활성에는 불리한 영향을 미치지 않으면서 펩티드의 순환 반감기를 변화시킬 수 있는 메틸화, 아미드화, 아세틸화, 및/또는 다른 화학적 기로의 치환에 의해 변형될 수 있다. 비통상 또는 비천연 아미노산의 예는 시트룰린, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 4-(E)-부테닐-4(R)-메틸-N-메틸트레오닌 (MeBmt), N-메틸-류신 (MeLeu), 아미노이소부티르산, 스타틴 및 N-메틸-알라닌 (MeAla)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 아미노산은 디술피드 결합에 참여할 수 있다. 용어 "아미노산"은 "아미노산 잔기"와 상호교환가능하게 사용되고, 유리 아미노산 및/또는 펩티드의 아미노산 잔기를 지칭할 수 있다. 유리 아미노산을 지칭하는지 또는 펩티드의 잔기를 지칭하는지의 여부는 그 용어가 사용되는 문맥으로부터 분명해질 것이다.

특정 실시양태에서, 안지오텐신-(1-7) 펩티드는 하나 이상의 L-아미노산, D-아미노산 및/또는 비천연 아미노산을 함유한다.

자연 발생 아미노산만을 함유하는 펩티드에 더하여, 펩티드모방체 또는 펩티드 유사체도 또한 본 발명에 포괄된다. 펩티드 유사체는 주형 펩티드의 특성과 유사한 특성을 갖는 비-펩티드 약물로서 제약 업계에서 통상적으로 사용된다. 비-펩티드 화합물은 "펩티드 모방체" 또는 펩티드모방체로 불린다 (Fauchere et al., Infect. Immun. 54:283-287 (1986); Evans et al., J. Med. Chem. 30:1229-1239 (1987)). 치료상 유용한 펩티드와 구조적으로 관련된 펩티드 모방체는 등가의 또는 증진된 치료 또는 예방 효과를 생성하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 펩티드모방체는 패러다임 폴리펩티드 (즉, 생물학적 또는 약리학적 활성을 갖는 폴리펩티드), 예컨대 자연-발생 수용체-결합 폴리펩티드와 구조적으로 유사하지만, 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 연결, 예컨대 -CH₂NH-, -CH₂S-, -CH₂-CH₂-, -CH=CH- (시스 및 트랜스), -CH₂SO-, -CH(OH)CH₂-, -COCH₂- 등에 의해 임의로 대체된 하나 이상의 펩티드 연결을 갖는다 (Spatola, Peptide Backbone Modifications, Vega Data, 1(3):267 (1983); Spatola et al. Life Sci. 38:1243-1249 (1986); Hudson et al. Int. J. Pept. Res. 14:177-185 (1979); 및 Weinstein. B., 1983, Chemistry and Biochemistry, of Amino Acids, Peptides and Proteins, Weinstein eds, Marcel Dekker, New-York). 이러한 펩티드 모방체는 보다 경제적인 생산, 더 큰 화학적 안정성, 증진된 약리학적 특성 (예를 들어, 반감기, 흡수, 효력, 효율 등), 감소된 항원성 등을 비롯하여 자연-발생 폴리펩티드보다 유의한 이점을 가질 수 있다.

Ang-(1-7) 펩티드는 통상적으로는 펩티드의 일부가 아닌 추가의 화학적 모이어티를 함유하는 다른 유형의 펩티드 유도체를 또한 포함하며, 단 유도체는 펩티드의 목적하는 기능적 활성을 보유한다. 이러한 유도체의 예는 (1) 아실 기가 알카노일 기 (예를 들어, 아세틸, 헥사노일, 옥타노일), 아로일 기 (예를 들어, 벤조일) 또는 차단 기, 예컨대 F-moc (플루오레닐메틸-O-CO-)일 수 있는, 아미노 말단의 또는 또 다른 유리 아미노 기의 N-아실 유도체; (2) 카르복시 말단의 또는 또 다른 유리 카르복시 또는 히드록실 기의 에스테르; (3) 암모니아 또는 적합한 아민과의 반응에 의해 생성된 카르복시-말단의 또는 또 다른 유리 카르복실 기의 아미드; (4) 인산화 유도체; (5) 항체 또는 다른 생물학적 리간드에 접합된 유도체 및 다른 유형의 유도체; 및 (6) 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 쇄에 접합된 유도체를 포함한다.

Ang-(1-7) 펩티드는 합성 (예를 들어, 완전 고체 상 합성, 부분 고체 상 합성, 단편 축합, 전형적 용액 합성, 천연-화학적 라이게이션) 및 재조합 기술을 비롯한, 통상의 기술자에게 공지된 임의의 펩티드 합성 방법에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 펩티드 또는 펩티드 유도체는 고체 상 펩티드 합성에 의해 수득될 수 있고, 이는 간략하게, C-말단 아미노산의 카르복실 기를 수지 (예를 들어, 벤즈히드릴아민 수지, 클로로메틸화 수지, 히드록시메틸 수지)에 커플링시키고, 연속적으로 N-알파 보호된 아미노산을 첨가하는 것으로 이루어진다. 보호기는 관련 기술분야에 공지된 임의의 이러한 기일 수 있다. 각각의 새로운 아미노산을 성장 쇄에 첨가하기 전에, 쇄에 첨가된 이전 아미노산의 보호기를 제거한다. 이러한 고체 상 합성은, 예를 들어 문헌 [Lubell et al. "Peptides" Science of Synthesis 21.11, Chemistry of Amides. Thieme, Stuttgart, 713-809 (2005)]에서 검토된 기술에 의해 문헌 [Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149 (1964); Vale et al., Science 213:1394-1397 (1981)], 미국 특허 번호 4, 305, 872 및 4,316, 891, 문헌 [Bodonsky et al. Chem. Ind. (London), 38:1597 (1966); 및 Pietta and Marshall, Chem. Comm. 650 (1970)]에 개시되어 있다. 아미노산을 적절한 수지에 커플링시키는 것도 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 미국 특허 번호 4,244,946에 개시되어 있다. (문헌 [Houver-Weyl, Methods of Organic Chemistry. Vol E22a. Synthesis of Peptides and Peptidomimetics, Murray Goodman, Editor-in-Chief, Thieme. Stuttgart. New York 2002]에서 검토됨).

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 과학 기술 용어 및 명명법은 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 세포 배양 절차, 감염, 분자 생물학 방법 등은 관련 기술분야에서 사용되는 통상적인 방법이다. 이러한 표준 기술은 참조 매뉴얼, 예컨대 예를 들어 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001; 및 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3^rd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., 2001]에서 찾아볼 수 있다.

Ang-(1-7) 펩티드를 제조하는 임의의 공정 동안, 임의의 관심 분자 상의 감수성 반응성 기를 보호하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 통상의 보호기, 예컨대 문헌 [Protective Groups In Organic Synthesis by T.W. Greene & P.G.M. Wuts, 1991, John Wiley and Sons, New-York; 및 Peptides: chemistry and Biology by Sewald and Jakubke, 2002, Wiley-VCH, Wheinheim p.142]에 기재된 것에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 알파 아미노 보호기는 아실 유형 보호기 (예를 들어, 트리플루오로아세틸, 포르밀, 아세틸), 지방족 우레탄 보호기 (예를 들어, t-부틸옥시카르보닐 (BOC), 시클로헥실옥시카르보닐), 방향족 우레탄 유형 보호기 (예를 들어, 플루오레닐-9-메톡시-카르보닐 (Fmoc), 벤질옥시카르보닐 (Cbz), Cbz 유도체) 및 알킬 유형 보호기 (예를 들어, 트리페닐 메틸, 벤질)를 포함한다. 아미노산 측쇄 보호기는 벤질 (Thr 및 Ser의 경우), Cbz (Tyr, Thr, Ser, Arg, Lys), 메틸 에틸, 시클로헥실 (Asp, His), Boc (Arg, His, Cys) 등을 포함한다. 보호기는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.

또한, Ang-(1-7) 펩티드는 FMOC 프로토콜에 따라 유기 상에서 보호기를 사용하여 합성될 수 있다. 바람직하게는, 펩티드를 C18 크로마토그래피 칼럼 상에서 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 70%의 수율로 정제하고, 10-60%의 아세토니트릴 구배로 용리시킨다. 펩티드의 분자량은 질량 분광측정법에 의해 확인할 수 있다 (문헌 [Fields, G.B. "Solid-Phase Peptide Synthesis" Methods in Enzymology. Vol. 289, Academic Press, 1997]에서 검토됨).

대안적으로, Ang-(1-7) 펩티드는 예를 들어 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 사용하여 재조합 시스템에서 제조될 수 있다. 폴리펩티드는 동일한 폴리펩티드 내에 상기 기재된 변형 중 하나 초과를 함유할 수 있는 것으로 이해된다.

펩티드는 시험관내에서 생물학적 활성을 도출하는데 효과적일 수 있지만, 생체내에서의 그의 유효성은 프로테아제의 존재에 의해 감소될 수 있다. 혈청 프로테아제는 특이적 기질 요건을 갖는다. 기질은 절단을 위해 L-아미노산 및 펩티드 결합을 둘 다 가져야 한다. 또한, 혈청에서 프로테아제 활성의 가장 우세한 성분을 대표하는 엑소펩티다제는 통상적으로 펩티드의 제1 펩티드 결합에 대해 작용하고, 유리 N-말단을 필요로 한다 (Powell et al., Pharm. Res. 10:1268-1273 (1993)). 이러한 관점에서, 종종 변형된 버전의 펩티드를 사용하는 것이 유리하다. 변형된 펩티드는 Ang-(1-7)의 목적하는 생물학적 활성을 부여하는 원래의 L-아미노산 펩티드의 구조적 특징은 보유하지만, 유리하게는 프로테아제 및/또는 엑소펩티다제에 의해 용이하게 절단되지 않는다.

컨센서스 서열의 하나 이상의 아미노산의 동일한 유형의 D-아미노산에 의한 체계적 치환 (예를 들어, L-리신 대신 D-리신)을 사용하여 보다 안정한 펩티드를 생성할 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩티드 유도체 또는 펩티드모방체는 정순 또는 역순의 모든 L, 모든 D, 또는 혼합된 D, L 펩티드일 수 있다. N-말단 또는 C-말단 D-아미노산의 존재는 펩티다제가 기질로서 D-아미노산을 사용할 수 없기 때문에 펩티드의 생체내 안정성을 증가시킨다 (Powell et al., Pharm. Res. 10:1268-1273 (1993)). 역-D 펩티드는 L-아미노산을 함유하는 펩티드에 대해 역순으로 배열된, D-아미노산을 함유하는 펩티드이다. 따라서, L-아미노산 펩티드의 C-말단 잔기는 D-아미노산 펩티드에 대해 N-말단이 되는 등이다. 역 D-펩티드는 L-아미노산 펩티드와 동일한 2차 입체형태를 보유하며 따라서 유사한 활성을 보유하지만, 시험관내 및 생체내 효소적 분해에 대해 원래의 펩티드보다 더 내성이고, 따라서 더 큰 치료 효능을 가질 수 있다 (Brady and Dodson, Nature 368:692-693 (1994); Jameson et al., Nature 368:744-746 (1994)). 유사하게, 역-L 펩티드는, 모 펩티드의 C-말단이 역-L 펩티드의 N-말단을 대신하게 하는 표준 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 유의한 2차 구조를 갖지 않는 (예를 들어, 짧은 펩티드) L-아미노산 펩티드의 역 L-펩티드는 L-아미노산 펩티드의 측쇄의 동일한 간격 및 입체형태를 보유하며, 따라서 종종 원래의 L-아미노산 펩티드와 유사한 활성을 갖는 것으로 고려된다. 또한, 역 펩티드는 L- 및 D-아미노산의 조합을 함유할 수 있다. 측쇄의 아미노산 사이의 간격 및 입체형태가 보유될 수 있고, 이로써 원래의 L-아미노산 펩티드와 유사한 활성이 생성될 수 있다.

펩티드의 N-말단 또는 C-말단 잔기에 작용하는 펩티다제에 대한 내성을 부여하는 또 다른 효과적인 접근법은 펩티드 말단에 화학적 기를 부가하여 변형된 펩티드가 더 이상 펩티다제에 대한 기질이 되지 않게 하는 것이다. 하나의 이러한 화학적 변형은 한쪽 또는 양쪽 말단에서의 펩티드의 글리코실화이다. 특정 화학적 변형, 특히 N-말단 글리코실화는 인간 혈청에서 펩티드의 안정성을 증가시키는 것으로 밝혀졌다 (Powell et al., Pharm. Res. 10:1268-1273 (1993)). 혈청 안정성을 증진시키는 다른 화학적 변형은 1 내지 20개의 탄소의 저급 알킬로 이루어진 N-말단 알킬 기, 예컨대 아세틸 기의 부가, 및/또는 C-말단 아미드 또는 치환된 아미드 기의 부가를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특히, 본 발명은 N-말단 아세틸 기 및/또는 C-말단 아미드 기를 보유하는 펩티드로 이루어진 변형된 펩티드를 포함한다.

펩티드의 하위서열 내의 천연 아미노산의 비-자연-발생 아미노산으로의 치환은 단백질분해에 대한 내성을 또한 부여할 수 있다. 이러한 치환은 예를 들어 생물학적 활성에는 영향을 미치지 않으면서 N-말단에 작용하는 엑소펩티다제에 의한 단백질분해에 대한 내성을 부여할 수 있다. 비-자연-발생 아미노산의 예는 α,α-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, C-α-메틸 아미노산, β-아미노산, 및 β-메틸 아미노산을 포함한다. 본 발명에 유용한 아미노산 유사체는 β-알라닌, 노르발린, 노르류신, 4-아미노부티르산, 오르니틴, 히드록시프롤린, 사르코신, 시트룰린, 시스테산, 시클로헥실알라닌, 2-아미노이소부티르산, 6-아미노헥산산, t-부틸글리신, 페닐글리신, o-포스포세린, N-아세틸 세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘 및 다른 비통상 아미노산을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 비-자연-발생 아미노산을 사용한 펩티드의 합성은 관련 기술분야에서 일상적이다.

또한, 컨센서스 서열 또는 실질적으로 동일한 컨센서스 서열 변이를 포함하는 구속성 펩티드가 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다 (Rizo and Gierasch, Ann. Rev. Biochem. 61:387-418 (1992)). 예를 들어, 구속성 펩티드는 디술피드 가교를 형성할 수 있는 시스테인 잔기를 첨가함으로써 그에 의해 시클릭 펩티드를 형성하는 것에 의해 생성될 수 있다. 시클릭 펩티드는 어떠한 유리 N- 또는 C-말단도 갖지 않도록 구축될 수 있다. 따라서, 이는 펩티드 말단을 절단하지 않는 엔도펩티다제에 대해서는 감수성일 수 있지만, 엑소펩티다제에 의한 단백질분해에 대해서는 감수성이지 않다. N-말단 또는 C-말단 D-아미노산을 갖는 펩티드 및 시클릭 펩티드의 아미노산 서열은 각각 N-말단 또는 C-말단 D-아미노산 잔기의 존재 또는 그의 원형 구조를 제외하면, 상응하는 펩티드의 서열과 통상적으로 동일하다.

시클릭 펩티드

일부 실시양태에서, 자연-발생 Ang-(1-7)의 기능적 등가물, 유사체 또는 유도체는 시클릭 펩티드이다. 본원에 사용된 시클릭 펩티드는 2개의 비-인접한 잔기 사이에 분자내 공유 결합을 갖는다. 분자내 결합은 백본 대 백본, 측쇄 대 백본 또는 측쇄 대 측쇄 결합일 수 있다 (즉, 선형 펩티드의 말단 관능기 및/또는 말단 또는 내부 잔기의 측쇄 관능기가 연결되어 고리화를 달성할 수 있음). 전형적인 분자내 결합은 디술피드, 아미드 및 티오에테르 결합을 포함한다. 이러한 펩티드에 대해 이루어질 수 있는 많은 다른 변형과 같이, 폴리펩티드를 고리화하는 다양한 수단이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 일반적인 논의에 대해서는 국제 특허 공개 번호 WO 01/53331 및 WO 98/02452를 참조하고, 그의 내용은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 시클릭 결합 및 다른 변형은 본 발명의 시클릭 펩티드 및 유도체 화합물에 또한 적용될 수 있다.

본원에 기재된 바와 같은 시클릭 펩티드는 L-아미노산, D-아미노산, 또는 그의 임의의 조합의 잔기를 포함할 수 있다. 아미노산은 천연 또는 비-천연 공급원으로부터의 것일 수 있으며, 단 적어도 1개의 아미노 기 및 적어도 1개의 카르복실 기가 분자 내에 존재하며; α- 및 β-아미노산이 일반적으로 바람직하다. 시클릭 펩티드는 또한 임의의 다양한 측쇄 변형 및/또는 치환 (예를 들어, 메틸화, 벤질화, t-부틸화, 토실화, 알콕시카르보닐화 등)의 존재 또는 부재 하에, 하나 이상의 희귀 아미노산 (예컨대 4-히드록시프롤린 또는 히드록시리신), 유기 산 또는 아미드 및/또는 통상의 아미노산의 유도체, 예컨대 C-말단 카르복실레이트가 에스테르화된 (예를 들어, 벤질, 메틸 또는 에틸 에스테르) 또는 아미드화된 아미노산, 및/또는 N-말단 아미노 기의 변형을 갖는 (예를 들어, 아세틸화 또는 알콕시카르보닐화) 아미노산을 또한 함유할 수 있다. 적합한 유도체는 (고리화 전에 선형 펩티드의 N-말단을 나타내는 아미노 기가 아세틸화되도록) N-아세틸 기를 갖고/거나 C-말단 아미드 기를 갖는 (즉, 고리화 전에 선형 펩티드의 카르복시 말단이 아미드화된) 아미노산을 포함한다. 시클릭 펩티드로 존재할 수 있는 통상의 아미노산 이외의 잔기는 페니실라민, β,β-테트라메틸렌 시스테인, β,β-펜타메틸렌 시스테인, β-메르캅토프로피온산, β,β-펜타메틸렌-β-메르캅토프로피온산, 2-메르캅토벤젠, 2-메르캅토아닐린, 2-메르캅토프롤린, 오르니틴, 디아미노부티르산, α-아미노아디프산, m-아미노메틸벤조산 및 α,β-디아미노프로피온산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

선형 펩티드의 합성 후, N-아세틸화 및/또는 C-아미드화의 존재 또는 부재 하에, 관련 기술분야에 널리 공지된 임의의 다양한 기술에 의해 고리화를 달성할 수 있다. 한 실시양태에서, 반응성 아미노산 측쇄 사이에 결합이 생성될 수 있다. 예를 들어, 임의의 다양한 방법을 사용하여 펩티드를 산화시킴으로써 2개의 티올-함유 잔기를 포함하는 선형 펩티드로부터 디술피드 가교를 형성시킬 수 있다. 한 이러한 방법에서, 티올의 공기 산화는 염기성 또는 중성의 수성 매질을 사용하여 수일에 걸쳐 디술피드 연결을 생성할 수 있다. 응집 및 분자간 부반응을 최소화하기 위해 펩티드는 높은 희석률로 사용된다. 대안적으로, 강력한 산화제, 예컨대 I₂ 및 K₃Fe(CN)₆을 사용하여 디술피드 연결을 형성할 수 있다. 통상의 기술자는 Met, Tyr, Trp 또는 His의 감수성 측쇄가 산화되지 않도록 주의해야 한다는 것을 인식할 것이다. 추가 실시양태에서, 고리화는 아미드 결합 형성에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 펩티드 결합은 말단 관능기 (즉, 고리화 전의 선형 펩티드의 아미노 및 카르복시 말단) 사이에서 형성될 수 있다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 선형 펩티드는 D-아미노산을 포함한다. 대안적으로, 고리화는 N-말단 아세틸 기 및/또는 C-말단 아미드의 존재 또는 부재 하에 하나의 말단과 잔기 측쇄를 연결함으로써 또는 2개의 측쇄를 사용함으로써 달성될 수 있다. 락탐 결합을 형성할 수 있는 잔기는 리신, 오르니틴 (Orn), α-아미노 아디프산, m-아미노메틸벤조산, α,β-디아미노프로피온산, 글루타메이트 또는 아스파르테이트를 포함한다. 아미드 결합을 형성하는 방법은 일반적으로 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 하나의 이러한 방법에서, 카르보디이미드-매개 락탐 형성은 카르복실산과 DCC, DIC, ED AC 또는 DCCI의 반응에 의해 달성될 수 있고, 이로써 O-아실우레아가 형성되며, 이는 유리 아미노 기와 즉시 반응하여 고리화를 완성할 수 있다. 대안적으로, 고리화는 히드라지드를 통해 알킬 에스테르로부터 반응성 아지드 중간체가 생성되는 아지드 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 대안적으로, 고리화는 활성화된 에스테르를 사용하여 달성될 수 있다. 에스테르의 알콕시 탄소 상의 전자 끄는 치환기의 존재는 가아민분해에 대한 그의 감수성을 증가시킨다. p-니트로페놀, N-히드록시 화합물 및 폴리할로겐화 페놀의 에스테르의 높은 반응성은 이들 "활성 에스테르"를 아미드 결합의 합성에 유용하게 만든다. 추가 실시양태에서, 티오에테르 연결은 티올-함유 잔기의 측쇄와 적절하게 유도체화된 α-아미노산 사이에서 형성될 수 있다. 예로서, 리신 측쇄는 카르보디이미드 커플링 방법 (DCC, EDAC)을 통해 브로모아세트산에 커플링될 수 있고, 이어서 상기 언급된 임의의 티올 함유 잔기의 측쇄와 반응하여 티오에테르 연결을 형성할 수 있다. 디티오에테르를 형성하기 위해, 임의의 2개의 티올 함유 측쇄를 DMF 중에서 디브로모에탄 및 디이소프로필아민과 반응시킬 수 있다.

예시적인 안지오텐신-(1-7) 펩티드

선형 안지오텐신(1-7) 펩티드

특정 측면에서, 본 발명은 선형 안지오텐신-(1-7) 펩티드를 제공한다. 상기 논의된 바와 같이, 자연-발생 Ang-(1-7)의 구조는 하기와 같다:

Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)

본 발명의 펩티드 및 펩티드 유사체는 일반적으로 하기 서열 또는 그의 제약상 허용되는 염에 의해 나타내어질 수 있다.

Xaa¹-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶-Xaa⁷ (서열 4)

Xaa¹은 임의의 아미노산 또는 디카르복실산이다. 특정 실시양태에서, Xaa¹은 Asp, Glu, Asn, Acpc (1-아미노시클로펜탄 카르복실산), Ala, Me₂Gly (N,N-디메틸글리신), Pro, Bet (베타인, 1-카르복시-N,N,N-트리메틸메탄아미늄 히드록시드), Glu, Gly, Asp, Sar (사르코신) 또는 Suc (숙신산)이다. 특정의 이러한 실시양태에서, Xaa¹은 음으로 하전된 아미노산, 예컨대 Asp 또는 Glu, 전형적으로 Asp이다.

Xaa²는 Arg, Lys, Ala, Cit (시트룰린), Orn (오르니틴), 아세틸화 Ser, Sar, D-Arg 및 D-Lys이다. 특정 실시양태에서, Xaa²는 양으로 하전된 아미노산, 예컨대 Arg 또는 Lys, 전형적으로 Arg이다.

Xaa³은 Val, Ala, Leu, Nle (노르류신), Ile, Gly, Lys, Pro, 히드록시Pro (히드록시프롤린), Aib (2-아미노이소부티르산), Acpc 또는 Tyr이다. 특정 실시양태에서, Xaa³은 지방족 아미노산, 예컨대 Val, Leu, Ile 또는 Nle, 전형적으로 Val 또는 Nle이다.

Xaa⁴는 Tyr, Tyr(PO₃), Thr, Ser, 호모Ser (호모세린), 아자Tyr (아자-α¹-호모-L-티로신) 또는 Ala이다. 특정 실시양태에서, Xaa⁴는 히드록실-치환된 아미노산, 예컨대 Tyr, Ser 또는 Thr, 전형적으로 Tyr이다.

Xaa⁵는 Ile, Ala, Leu, 노르Leu, Val 또는 Gly이다. 특정 실시양태에서, Xaa⁵는 지방족 아미노산, 예컨대 Val, Leu, Ile 또는 Nle, 전형적으로 Ile이다.

Xaa⁶은 His, Arg 또는 6-NH₂-Phe (6-아미노페닐알라닌)이다. 특정 실시양태에서, Xaa⁶은 전체적으로 또는 부분적으로 양으로 하전된 아미노산, 예컨대 Arg 또는 His이다.

Xaa⁷은 Cys, Pro 또는 Ala이다.

특정 실시양태에서, Xaa¹-Xaa⁷ 중 1개 이상은 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다. 특정의 이러한 실시양태에서, Xaa¹-Xaa⁷ 중 1 또는 2개를 제외하고 모두 자연-발생 Ang-(1-7)의 상응하는 아미노산과 동일하다. 다른 실시양태에서, Xaa¹-Xaa⁶은 모두 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다.

특정 실시양태에서, Xaa³은 Nle이다. Xaa³이 Nle인 경우에, Xaa¹-Xaa² 및 Xaa^4-7 중 1개 이상은 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 임의로 동일하다. 특정의 이러한 실시양태에서, Xaa¹-Xaa² 및 Xaa⁴ ^- ⁷ 중 1 또는 2개를 제외하고 모두 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다. 다른 실시양태에서, Xaa¹-Xaa² 및 Xaa⁴ ^-7은 모두 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하며, 이로써 아미노산 서열: Asp¹-Arg²-Nle³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 5)이 생성된다.

특정 실시양태에서, 펩티드는 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Val³-Ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 2) 또는 Asp¹-Arg²-Val³-ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 6)을 갖는다.

예시적인 시클릭 안지오텐신 (1-7) 펩티드

특정 측면에서, 본 발명은 예컨대 Ang 내의 위치 Tyr⁴ 및 Pro⁷에 상응하는 아미노산의 측쇄 사이에 연결을 포함하는 시클릭 안지오텐신-(1-7) (Ang-(1-7)) 펩티드 유사체를 제공한다. 이들 펩티드 유사체는 전형적으로 7개의 아미노산 잔기를 포함하지만, 또한 절단가능한 서열도 포함할 수 있다. 아래에서 보다 상세하게 논의되는 바와 같이, 본 발명은 하나 이상의 아미노산이 또 다른 아미노산 (단편 포함)에 의해 치환된 단편 및 유사체, 예를 들어 Asp¹-Arg²-Val³-Ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 22)을 포함하며, 여기서 연결은 Ser⁴ 및 Cys⁷ 사이에 형성된다.

하기 섹션은 4- 및 7-위치에서 잔기를 연결하는 티오에테르 결합의 면에서 본 발명의 측면을 기재하지만, (상기 기재된 바와 같은) 다른 연결이 티오에테르 가교를 대체할 수 있고, 다른 잔기가 고리화될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 티오에테르 가교는 모노술피드 가교로서, 또는 Ala-S-Ala의 경우에 란티오닌 가교로서 또한 지칭된다. 티오에테르 가교-함유 펩티드는 하기 화학식 중 하나를 갖는 2개의 아미노산에 의해 형성될 수 있다:

<화학식 I>

<화학식 II>

<화학식 III>

이들 화학식에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ 및 R⁶은 독립적으로 -H, 알킬 (예를 들어, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₄ 알킬) 또는 아르알킬 기이고, 여기서 알킬 및 아르알킬 기는 1개 이상의 할로겐, -OH 또는 -NRR' 기 (여기서 R 및 R'는 독립적으로 -H 또는 C₁-C₄ 알킬임)로 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ 및 R⁶은 각각 독립적으로 -H 또는 -CH₃이고, 예컨대 모두 -H이다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I에 따른 티오에테르 가교를 포함하는 Ang 유사체 또는 유도체를 제공한다. 전형적으로, R¹, R², R³ 및 R⁴는 독립적으로 -H 및 -CH₃으로부터 선택된다. 화학식 I에 따른 티오에테르 가교를 포함하는 펩티드는, 예를 들어 란티바이오틱 효소에 의해 또는 디술피드의 황 압출에 의해 생성될 수 있다. 한 예에서, 황 압출로 인한 디술피드는 위치 4의 D-시스테인과 위치 7의 L-시스테인에 의해, 또는 위치 4의 D-시스테인과 위치 7의 L-페니실라민에 의해 형성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Galande, Trent and Spatola (2003) Biopolymers 71, 534-551] 참조).

다른 실시양태에서, 2개의 아미노산의 연결은 화학식 II 또는 화학식 III에 도시된 가교일 수 있다. 화학식 II에 따른 티오에테르 가교를 포함하는 펩티드는, 예를 들어 위치 4의 D-호모시스테인과 위치 7의 L-시스테인에 의해 형성된 디술피드의 황 압출에 의해 제조될 수 있다. 유사하게, 화학식 III에서와 같은 티오에테르 가교를 포함하는 펩티드는, 예를 들어 위치 4의 D-시스테인과 위치 7의 L-호모시스테인에 의해 형성된 디술피드의 황 압출에 의해 제조될 수 있다.

상기 논의된 바와 같이, 본 발명의 Ang 유사체 및 유도체는 길이 및 아미노산 조성이 다양하다. 본 발명의 Ang 유사체 및 유도체는 바람직하게는 생물학적 활성을 갖거나, (10개의 아미노산을 갖는 안지오텐신(I)이 2개의 아미노산의 절단에 의해 활성 단편으로 전환되는 것과 같이) 단백질분해적으로 활성화될 수 있는 불활성 전구체 분자이다. Ang 유사체 또는 유도체의 크기는 다양할 수 있지만, 3-7개의 Nle-티오에테르-고리 구조를 포함하는 "코어" 오량체성 절편이 포함되는 한, 전형적으로 약 5 내지 10개의 아미노산이다. 본 발명의 유사체 또는 유도체의 아미노산 서열은 다양할 수 있으며, 단 전형적으로 생물학적으로 활성이거나 단백질분해적으로 활성화될 수 있어야 한다. 유사체 또는 유도체의 생물학적 활성은 방사성리간드 결합 연구, 시험관내 세포 활성화 검정 및 생체내 실험을 비롯한, 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Godeny and Sayeski, (2006) Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 291:C1297-1307; Sarr et al., Cardiovasc. Res. (2006) 71:794-802; 및 Koziarz et al., (1933) Gen. Pharmacol. 24:705- 713]을 참조한다.

펩티드의 길이만 다른 Ang 유사체 및 유도체는 하기를 포함한다:

천연 Ang-(1-7)로부터 유래된, [Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(1-7)로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Asp¹-Arg²-Val³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷, 서열 7);

천연 안지오텐신 I (Ang-(1-10))로부터 유래된, [Nle³, Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(1-10)으로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Asp¹-Arg²-Nle³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷-Phe⁸-His⁹-Leu¹⁰, 서열 8);

천연 안지오텐신 II (Ang-(1-8))로부터 유래된, [Nle³, Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(1-8)로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Asp¹-Arg²-Nle³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷-Phe⁸, 서열 9);

천연 안지오텐신 III (Ang-(2-8))으로부터 유래된, [Nle³, Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(2-8)로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Arg²-Nle³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷-Phe⁸, 서열 10);

천연 안지오텐신 IV (Ang-(3-8))로부터 유래된, [Nle³, Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(3-8)로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Nle³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷-Phe⁸, 서열 11);

천연 Ang-(1-7)로부터 유래된, [Nle³, Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(1-7)로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Asp¹-Arg²-Nle³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷, 서열 12); 및

천연 Ang-(1-9)로부터 유래된, [Nle³, Cyc⁴ ^- ⁷]Ang-(1-9)로 지정된 4,7-고리화 유사체 (Asp¹-Arg²-Nle³-Cyc⁴-Ile⁵-His⁶-Cyc⁷-Phe⁸-His⁹, 서열 13).

이들 유사체는 예를 들어 Cyc⁴ 및 Cyc⁷이 화학식 I에 의해 나타내어지고, 예컨대 여기서 R¹-R⁴가 각각 -H 또는 -CH₃, 전형적으로 -H인 Cyc⁴ ^-7 모이어티로서 화학식 I-III에 제시된 티오에테르 가교 중 하나를 가질 수 있다.

천연 안지오텐신 펩티드의 아미노산 서열과 비교하여, Cyc⁴ ^-7 유사체의 위치 4 및 7의 아미노산은 상기 제시된 티오에테르-고리 구조의 도입이 가능하도록 변형된다. Ang 유사체의 길이에 더하여, 3, 4 및 7 이외의 위치에서의 아미노산은 자연-발생 펩티드와 동일하거나 상이할 수 있으며, 단 전형적으로 유사체는 생물학적 기능을 보유한다. 한 예는 Asp¹-Arg²-Val³-Ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 22)이다. [Cyc^4-7]Ang-(l-10)과 같은 불활성 전구체의 유사체의 경우에, 생물학적 기능은 그를 생물학적으로 활성인 단편 (예를 들어, Ang-(l-8) 또는 Ang-(l-7))으로 절단할 수 있는 안지오텐신-전환 효소에 대한 유사체의 감수성, 또는 단편 그 자체의 생물학적 활성 중 하나 또는 둘 다를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 Ang 유사체 또는 유도체는 고유의 기능은 갖지 않지만, 하나 이상의 자연-발생 안지오텐신 화합물의 효과를 억제한다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 Ang 유사체는 화학식 IV에 의해 나타내어진다:

Xaa¹-Xaa²-Xaa³-Cyc⁴-Xaa⁵-Xaa⁶-Cyc⁷ (IV, 서열 14)

Xaa¹은 임의의 아미노산이지만, 전형적으로는 음으로 하전된 아미노산, 예컨대 Glu 또는 Asp, 보다 전형적으로는 Asp이다.

Xaa²는 양으로 하전된 아미노산, 예컨대 Arg 또는 Lys, 전형적으로 Arg이다.

Xaa³은 지방족 아미노산, 예컨대 Leu, Ile 또는 Val, 전형적으로 Val이다.

Cyc⁴는 Cyc⁷과 함께 티오에테르 가교를 형성한다. Cyc⁴는 D-입체이성질체 및/또는 L-입체이성질체, 전형적으로는 D-입체이성질체일 수 있다. (Cyc⁷과 함께 하는) Cyc⁴의 예가 화학식 I, II 및 III에 제시된다. 전형적으로, 화학식 I, II 및 III에서 R 기는 -H 또는 -CH₃, 특히 -H이다.

Xaa⁵는 지방족 아미노산, 예컨대 Leu, Ile 또는 Val, 전형적으로 Ile이다.

Xaa⁶은 His이다.

Cyc⁷은 화학식 I, II 또는 III에서와 같이 Cyc⁴와 함께 티오에테르 가교를 형성한다. Cyc⁷은 D-입체이성질체 및/또는 L-입체이성질체, 전형적으로 L-입체이성질체일 수 있다. (Cyc⁴와 함께 하는) Cyc⁷의 예가 화학식 I, II 및 III에 제시된다. 전형적으로, 화학식 I, II 및 III에서 R 기는 -H 또는 -CH₃, 특히 -H이다.

특정 실시양태에서, (Cyc⁴ 및 Cyc⁷을 제외하고) Xaa¹-Xaa⁶ 중 1개 이상은 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다. 특정의 이러한 실시양태에서, Xaa¹-Xaa⁶ 중 1 또는 2개를 제외하고 모두 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다. 다른 실시양태에서, Xaa¹-Xaa⁶은 모두 자연-발생 Ang-(1-7) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다.

특정 실시양태에서, Cyc⁴ 및 Cyc⁷은 독립적으로 Abu (2-아미노부티르산) 및 Ala (알라닌)로부터 선택되며, 여기서 Ala는 적어도 하나의 위치에 존재한다. 따라서, 시클릭 유사체는 -Ala⁴-S-Ala⁷- (화학식 I, 여기서 R¹-R⁴는 각각 -H임); -Ala⁴-S-Abu⁷- (화학식 I: R¹-R³은 -H이고 R⁴는 -CH₃임) 또는 -Abu⁴-S-Ala⁷- (화학식 I: R¹, R³ 및 R⁴는 -H이고 R²는 -CH₃임)에 의해 형성된 티오에테르 연결을 가질 수 있다. 시클릭 유사체의 구체적 예는 -Abu⁴-S-Ala⁷- 또는 -Ala⁴-S-Ala⁷- 연결을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 하기 구조 다이어그램에 의해 나타내어지는, 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Val³-Abu⁴-Ile⁵-His⁶-Ala⁷ (서열 15) 또는 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Val³-Ala⁴-Ile⁵-His⁶-Ala⁷ (서열 16)을 갖는, 위치 4 및 위치 7 사이에 티오에테르-가교를 갖는 Ang-(1-7) 유사체를 제공한다:

특정 실시양태에서, 본 발명의 Ang 유사체 또는 유도체는 하기 화학식 V에 의해 나타내어진다:

Xaa¹-Xaa²-Nle³-Cyc⁴-Xaa⁵-Xaa⁶-Cyc⁷-Xaa⁸-Xaa⁹-Xaa¹⁰ (V, 서열 17)

상기 논의된 바와 같이, 특정 실시양태에서 Xaa¹, Xaa², Xaa⁸, Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰ 중 1개 이상이 부재한다. 예를 들어, (1) Xaa¹⁰이 부재하거나, (2) Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, (3) Xaa⁸, Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, (4) Xaa¹이 부재하거나, (5) Xaa¹ 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, (6) Xaa¹, Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, (7) Xaa¹, Xaa⁸, Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, (8) Xaa¹ 및 Xaa²가 부재하거나, (9) Xaa¹, Xaa² 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, (10) Xaa¹, Xaa², Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰이 부재하거나, 또는 (11) Xaa¹, Xaa², Xaa⁸, Xaa⁹ 및 Xaa¹⁰이 부재한다. 이들 각각의 실시양태의 경우에, 나머지 아미노산은 하기 기재된 값을 갖는다.

Xaa¹은 존재하는 경우에 임의의 아미노산이지만, 전형적으로는 음으로 하전된 아미노산, 예컨대 Glu 또는 Asp, 보다 전형적으로는 Asp이다.

Xaa²는 존재하는 경우에 양으로 하전된 아미노산, 예컨대 Arg 또는 Lys, 전형적으로 Arg이다.

Nle³은 노르류신이다.

Xaa⁵는 지방족 아미노산, 예컨대 Leu, Nle, Ile 또는 Val, 전형적으로 Ile이다.

Xaa⁶은 His이다.

Xaa⁸은 존재하는 경우에 Pro 이외의 아미노산, 전형적으로 Phe 또는 Ile이다. 특정 실시양태에서, Ile는 Ang(1-8)의 억제제를 생성한다. 특정 실시양태에서, Phe는 Ang(1-8) 또는 Ang(1-10)의 생물학적 활성을 유지한다.

Xaa⁹는 존재하는 경우에 His이다.

Xaa¹⁰은 존재하는 경우에 지방족 잔기, 예를 들어 Ile, Val 또는 Leu, 전형적으로 Leu이다.

특정 실시양태에서, (Nle³, Cyc⁴ 및 Cyc⁷을 제외하고) Xaa¹-Xaa¹⁰ 중 1개 이상은 자연-발생 Ang (Ang-(1-7), Ang(1-8), Ang(1-9), Ang(1-10), Ang(2-7), Ang(2-8), Ang(2-9), Ang(2-10), Ang(3-8), Ang(3-9) 및 Ang(3-10) 포함) 내의 상응하는 아미노산과 동일하다. 특정의 이러한 실시양태에서, Xaa¹-Xaa¹⁰ 중 1 또는 2개를 제외하고 모두 (존재하는 것에 대해) 자연-발생 Ang 내의 상응하는 아미노산과 동일하다. 다른 실시양태에서, Xaa¹-Xaa¹⁰은 모두 (존재하는 것에 대해) 자연-발생 Ang 내의 상응하는 아미노산과 동일하다.

특정 실시양태에서, Cyc⁴ 및 Cyc⁷은 독립적으로 Abu (2-아미노부티르산) 및 Ala (알라닌)로부터 선택되며, 여기서 Ala는 적어도 하나의 위치에 존재한다. 따라서, -Ala⁴-S-Ala⁷- (화학식 I, 여기서 R¹-R⁴는 각각 -H임); -Ala⁴-S-Abu⁷- (화학식 I: R¹-R³은 -H이고 R⁴는 -CH₃임) 또는 -Abu⁴-S-Ala⁷- (화학식 I: R¹, R³ 및 R⁴는 -H이고 R²는 -CH₃임)에 의해 형성된 티오에테르 연결을 포함하는 시클릭 유사체가 포괄된다. 특정한 시클릭 유사체는 -Abu⁴-S-Ala⁷- 또는 -Ala⁴-S-Ala⁷- 연결을 포함한다.

특히, 본 발명은 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Nle³-Abu⁴-Ile⁵-His⁶-Ala⁷ (서열 18) 또는 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Nle³-Ala⁴-Ile⁵-His⁶-Ala⁷ (서열 19)을 갖는, 위치 4 및 위치 7 사이에 티오에테르-가교를 갖는 Ang-(l-7) 유사체 또는 유도체를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 Ang-(l-8) 길항 활성을 갖는, 위치 4 및 위치 7 사이에 티오에테르-가교를 갖는 Ang-(l-8) 유사체 또는 유도체, 특히 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Nle³-Abu⁴-Ile⁵-His⁶-Ala⁷-Ile⁸ (서열 20) 또는 아미노산 서열 Asp¹-Arg²-Nle³-Ala⁴-Ile⁵-His⁶-Ala⁷-Ile⁸ (서열 21)을 갖는 Ang(l-8) 유사체 또는 유도체를 제공한다.

Ang (1-7) 수용체 효능제

일부 실시양태에서, 본 발명은 근육 이영양증을 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 투여하는 것을 포함하는, 근육 이영양증을 치료하는 방법을 제공한다. 본원에 사용된 용어 "안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제"는 안지오텐신-(1-7) 수용체, 특히 G-단백질 커플링된 Mas 수용체의 기능에 긍정적인 영향을 갖는 임의의 분자를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제는 안지오텐신-(1-7) 수용체 (즉, Mas 수용체) 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 증진, 강화, 활성화, 및/또는 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제는 안지오텐신-(1-7) 수용체 (즉, Mas 수용체)와 직접적으로 상호작용한다. 이러한 효능제는, 예를 들어 단백질, 화학적 화합물, 소분자, 핵산, 항체, 약물, 리간드, 또는 다른 작용제를 비롯하여, 펩티드성 또는 비-펩티드성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 비-펩티드성 효능제이다.

안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제의 예시적인 부류는 1-(p-티에닐벤질)이미다졸이다. 이들 비-펩티드 안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제의 예는 하기 구조 화학식 VI 또는 그의 제약상 허용되는 염에 의해 나타내어진다.

<화학식 VI>

상기 식에서,

R¹은 할로겐, 히드록실, (C₁-C₄)-알콕시, (C₁-C₈)-알콕시 (여기서 1 내지 6개의 탄소 원자는 헤테로원자 O, S 또는 NH (바람직하게는 O)에 의해 대체됨), 포화 시클릭 에테르에 의해 치환된 (C₁-C₄)-알콕시, 예컨대 테트라히드로피란 또는 테트라히드로푸란, O-(C₁-C₄)-알케닐, O-(C₁-C₄)-알킬아릴, 또는 비치환되거나 할로겐, (C₁-C₃)-알킬, (C₁-C₃)-알콕시 및 트리플루오로메틸로부터 선택된 치환기에 의해 치환된 아릴옥시이고;

R²는 CHO, COOH 또는 (3) CO-O-(C₁-C₄)-알킬이고;

R³은 (C₁-C₄)-알킬 또는 아릴이고;

R⁴는 수소, 할로겐 (클로로, 브로모, 플루오로), 또는 (C₁-C₄)-알킬이고;

X는 산소 또는 황이고;

Y는 산소 또는 -NH-이고;

R⁵는 수소, (C₁-C₆)-알킬; 또는 (C₁-C₄)-알킬아릴이고, 여기서 Y가 -NH-인 경우에 R⁵는 수소이고;

R⁶은 (C₁-C₅)-알킬이다.

특정 실시양태에서, R²가 COOH 또는 CO-O-(C₁-C₄)-알킬인 경우에 R¹은 할로겐이 아니다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제는 하기 구조에 의해 나타내어지는 AVE 0991, 5-포르밀-4-메톡시-2-페닐-1[[4-[2-(에틸아미노카르보닐술폰아미도)-5-이소부틸-3-티에닐]-페닐]-메틸]-이미다졸이다.

안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제의 또 다른 예시적인 부류는 p-티에닐벤질아미드이다. 이들 비-펩티드 안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제의 예는 하기 구조 화학식 VII 또는 그의 제약상 허용되는 염에 의해 나타내어진다.

<화학식 VII>

상기 식에서,

R¹은 비치환되거나 NH₂, 할로겐, O-(C₁-C₃)-알킬, CO-O-(C₁-C₃)-알킬 및 CO₂H로부터 선택된 라디칼에 의해 치환된 (C₁-C₅)-알킬, (C₃-C₈)-시클로알킬, (C₁-C₃)-알킬-(C₃-C₈)-시클로알킬, 비치환되거나 할로겐 및 O-(C₁-C₃)-알킬로부터 선택된 라디칼에 의해 치환된 (C₆-C₁₀)-아릴, 아릴 라디칼이 비치환되거나 할로겐 및 O-(C₁-C₃)-알킬로부터 선택된 라디칼에 의해 치환된 (C₁-C₃)-알킬-(C₆-C₁₀)-아릴, (C₁-C₅)-헤테로아릴, 또는 (C₁-C₃)-알킬-(C₁-C₅)-헤테로아릴이고;

R²는 수소, 비치환되거나 할로겐 및 O-(C₁-C₃)-알킬로부터 선택된 라디칼에 의해 치환된 (C₁-C₆)-알킬, (C₃-C₈)-시클로알킬, (C₁-C₃)-알킬-(C₃-C₈)-시클로알킬, 비치환되거나 할로겐, O-(C₁-C₃)-알킬 및 CO-O-(C₁-C₃)-알킬로부터 선택된 라디칼에 의해 치환된 (C₆-C₁₀)-아릴, 또는 비치환되거나 할로겐 및 O-(C₁-C₃)-알킬로부터 선택된 라디칼에 의해 치환된 (C₁-C₃)-알킬-(C₆-C₁₀)-아릴이고;

R³은 수소, COOH 또는 COO-(C₁-C₄)-알킬이고;

R⁴는 수소, 할로겐; 또는 (C₁-C₄)-알킬이고;

R⁵는 수소 또는 (C₁-C₆)-알킬이고;

R⁶은 수소, (C₁-C₆)-알킬, (C₁-C₃)-알킬-(C₃-C₈)-시클로알킬 또는 (C₂-C₆)-알케닐이고;

X는 산소 또는 NH이다.

안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제의 추가의 예는 미국 특허 번호 6,235,766에 기재되어 있고, 그의 내용은 본원에 참조로 포함된다.

상기 기재된 다양한 안지오텐신-(1-7) 수용체 효능제는 제약상 허용되는 염으로서 존재할 수 있다. 본원에 사용된 "제약상 허용되는 염"은 펩티드 또는 등가 화합물의 목적 활성을 보유하지만, 바람직하게는 펩티드, 또는 펩티드를 사용하는 시스템의 다른 성분의 활성에는 불리하게 영향을 미치지 않는 염을 지칭한다. 이러한 염의 예는 무기 산, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 인산, 질산 등에 의해 형성된 산 부가염이다. 염은 또한 유기 산, 예컨대 예를 들어 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 글루콘산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 탄닌산, 파모산, 알긴산, 폴리글루탐산 등에 의해 형성될 수 있다. 양이온성 물질로부터 형성되는 염은 이들 무기 및 유기 산의 짝염기를 사용할 수 있다. 염은 또한 다가 금속 양이온, 예컨대 아연, 칼슘, 비스무트, 바륨, 마그네슘, 알루미늄, 구리, 코발트, 니켈 등에 의해, 또는 N,N'-디벤질에틸렌디아민 또는 에틸렌디아민으로부터 형성된 유기 양이온에 의해, 또는 그의 조합 (예를 들어, 탄닌산 아연 염)에 의해 형성될 수 있다. 비-독성, 생리학상 허용되는 염이 바람직하다.

염은 통상의 수단에 의해, 예컨대 염이 불용성인 용매 또는 매질 중에서 또는 이후 진공 하에서 또는 동결 건조에 의해 제거되는 물과 같은 용매 중에서 유리 산 또는 유리 염기 형태의 생성물을 1 이상의 당량의 적절한 산 또는 염기와 반응시키거나, 또는 적합한 이온 교환 수지 상에서 존재하는 염의 양이온을 또 다른 양이온으로 교환하는 것에 의해 형성될 수 있다.

알킬 기는 완전히 포화된, 직쇄형 또는 분지형 비-방향족 탄화수소이다. 전형적으로, 직쇄형 또는 분지형 알킬 기는 1 내지 약 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 약 10개를 갖는다. 직쇄형 및 분지형 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 펜틸 및 옥틸을 포함한다. C1-C4 직쇄형 또는 분지형 알킬 기는 또한 "저급 알킬" 기로 지칭된다.

알케닐 기는 1개 이상의 이중 결합을 포함하는 직쇄형 또는 분지형 비-방향족 탄화수소이다. 전형적으로, 직쇄형 또는 분지형 알케닐 기는 2 내지 약 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 약 10개를 갖는다. 직쇄형 및 분지형 알케닐 기의 예는 에테닐, n-프로페닐 및 n-부테닐을 포함한다.

방향족 (아릴) 기는 카르보시클릭 방향족 기, 예컨대 페닐, 나프틸 및 안트라실, 및 헤테로아릴 기, 예컨대 이미다졸릴, 티에닐, 푸릴, 피리딜, 피리미딜, 피라닐, 피라졸릴, 피롤릴, 피라지닐, 티아졸릴, 옥사졸릴 및 테트라졸릴을 포함한다. 방향족 기는 또한 카르보시클릭 방향족 고리 또는 헤테로아릴 고리가 1개 이상의 다른 헤테로아릴 고리에 융합되어 있는 융합된 폴리시클릭 방향족 고리계를 포함한다. 예는 벤조티에닐, 벤조푸릴, 인돌릴, 퀴놀리닐, 벤조티아졸, 벤족사졸, 벤즈이미다졸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐 및 이소인돌릴을 포함한다.

아르알킬 기는 아릴 기에 의해 치환된 알킬 기이다. 방향족 (아릴) 기는 카르보시클릭 방향족 기, 예컨대 페닐, 나프틸 및 안트라실, 및 헤테로아릴 기, 예컨대 이미다졸릴, 티에닐, 푸릴, 피리딜, 피리미딜, 피라닐, 피라졸릴, 피롤릴, 피라지닐, 티아졸릴, 옥사졸릴 및 테트라졸릴을 포함한다. 방향족 기는 또한 카르보시클릭 방향족 고리 또는 헤테로아릴 고리가 1개 이상의 다른 헤테로아릴 고리에 융합되어 있는 융합된 폴리시클릭 방향족 고리계를 포함한다. 예는 벤조티에닐, 벤조푸릴, 인돌릴, 퀴놀리닐, 벤조티아졸, 벤족사졸, 벤즈이미다졸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐 및 이소인돌릴을 포함한다.

제약 조성물

본 발명의 방법에 따르면, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 본원에 기재된 바와 같이, 대상체에게 단독으로 (예를 들어, 정제된 펩티드 또는 화합물로서), 또는 조성물 또는 의약의 성분으로서 (예를 들어, 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서) 투여될 수 있다. 조성물은 제약 조성물의 제조를 위해 생리학상 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 제제화될 수 있다. 담체 및 조성물은 멸균일 수 있다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다. 조성물을 제제화하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceuticals Sciences, 17^th Edition, Mack Publishing Co., (Alfonso R. Gennaro, editor) (1989)] 참조).

적합한 제약상 허용되는 담체는 물, 염 용액 (예를 들어, NaCl), 염수, 완충 염수, 알콜, 글리세롤, 에탄올, 아라비아 검, 식물성 오일, 벤질 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 탄수화물, 예컨대 락토스, 아밀로스 또는 전분, 당, 예컨대 만니톨, 수크로스 등, 덱스트로스, 스테아르산마그네슘, 활석, 규산, 점성 파라핀, 퍼퓸 오일, 지방산 에스테르, 히드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈 등, 뿐만 아니라 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 제약 제제는, 원하는 경우에, 활성 화합물과 유해하게 반응하지 않거나 또는 그의 활성을 간섭하지 않는 보조제 (예를 들어, 윤활제, 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치는 염, 완충제, 착색제, 향미제 및/또는 방향족 물질 등)와 혼합될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 정맥내 투여에 적합한 수용성 담체가 사용된다.

조성물 또는 의약은, 원하는 경우에, 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있고, 그 중 일부가 하기에 추가로 논의된다. 조성물은 액체 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 지속 방출 제제 또는 분말일 수 있다. 조성물은 전통적인 결합제 및 담체, 예컨대 트리글리세리드와 함께 좌제로서 또한 제제화될 수 있다. 경구 제제는 표준 담체, 예컨대 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 소듐 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다.

조성물 또는 의약은 상용 절차에 따라 인간에 대한 투여에 적합화된 제약 조성물로서 제제화될 수 있다. 예를 들어, 바람직한 실시양태에서, 정맥 투여를 위한 조성물은 전형적으로 멸균 등장성 수성 완충제 중의 용액이다. 필요한 경우에, 조성물은 가용화제 및 주사 부위에서 통증을 완화하기 위한 국부 마취제를 또한 포함할 수 있다. 일반적으로, 성분은 기밀식으로 밀봉된 용기, 예컨대 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 사쉐 내에, 예를 들어 건조 동결건조 분말 또는 무수 농축물로서 단위 투여 형태로 개별적으로 또는 함께 혼합되어 공급된다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우에, 이는 멸균 제약 등급의 물, 염수 또는 덱스트로스/물을 함유하는 주입 병으로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우에, 투여 전에 성분이 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플이 제공될 수 있다.

일부 실시양태에서, 제약 제제로서 제공되는 것을 비롯하여 제공되는 조성물은 액체 담체, 예컨대 이에 제한되지는 않는 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 혈청-함유 용액, 행크 용액, 다른 수성 생리학상 균형 용액, 오일, 에스테르 및 글리콜을 포함한다.

본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 중성 또는 염 형태로 제제화될 수 있다. 제약상 허용되는 염은 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유래된 것과 같은 유리 아미노 기에 의해 형성된 것, 및 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 제2철 히드록시드, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래된 것과 같은 유리 카르복실 기에 의해 형성된 것을 포함한다.

경구 제제

일부 실시양태에서, 적합한 제약 조성물은 경구 제제이다. 임의의 의학상 허용되는 경구 제제가 본 발명의 범위 내에서 사용될 수 있는 것으로 고려된다.

일부 실시양태에서, 제공되는 조성물은 적어도 1종의 pH-강하제를 포함한다. 본 발명의 일부 실시양태에서 사용하기에 적합한 pH-강하제는 a) 위장관에 대해 독성이지 않고/거나, b) 수소 이온을 전달할 수 있거나 국부 환경으로부터 더 높은 수소 이온 함량을 유도할 수 있고/거나 c) 국부 장 pH를 그곳에서 발견되는 프로테아제에 대해 최적인 pH 미만으로 강하시키는데 충분한 양으로 경구 투여될 수 있는 임의의 제약상 허용되는 pH-강하제 또는 pH-강하제의 조합을 포함하는 것으로 고려된다. pH-강하제가 본 발명에 적합한지 여부 및 어느 정도의 양이 적절한지를 결정하기 위해 다양한 시험을 사용할 수 있다. 예를 들어, pH-강하제 또는 pH-강하제의 조합은, 특정한 양을 10 밀리리터의 0.1M 중탄산나트륨 용액에 첨가했을 때 용액의 pH를 5.5, 4.7, 또는 3.5 이하로 강하시킨다면, 본 발명에 적합하다. 일부 실시양태에서, pH-강하제 또는 작용제의 양은 10 밀리리터의 0.1M 중탄산나트륨의 용액 중 pH를 3.4, 3.2, 3.0, 또는 2.8 이하로 강하시키도록 첨가될 수 있다.

일부 실시양태에서, 적합한 pH-강하제 또는 작용제는 4.2 이하 (예를 들어, 4.0, 3.8, 3.6, 3.4, 3.2, 3.0 또는 2.8 이하)의 pKa를 갖는 적어도 1종의 pH-강하제를 포함한다. 본 발명에 적합한 예시적인 pH-강하제는 카르복실산, 예컨대 아세틸살리실산, 아세트산, 아스코르브산, 시트르산, 푸마르산, 글루쿠론산, 글루타르산, 글리세르산, 글리코콜산, 글리옥실산, 이소시트르산, 이소발레르산, 락트산, 말레산, 옥살로아세트산, 옥살로숙신산, 프로피온산, 피루브산, 숙신산, 타르타르산 및 발레르산; 염화알루미늄; 염화아연; 아세틸글루탐산, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 베타인, 카르니틴, 카르노신, 시트룰린, 크레아틴, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 히드록시리신, 히드록시프롤린, 하이포타우린, 이소류신, 류신, 리신, 메틸히스티딘, 노르류신, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 사르코신, 세린, 타우린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린의 산 염을 비롯한, 아미노산의 산 염 (또는 그의 유도체)를 포함하나 이에 제한되지 않고; 프룩토스 1,6 디포스페이트 및 글루코스 1,6 디포스페이트를 비롯한 특정 포스페이트 에스테르가 또한 특정 실시양태에서 적절한 pH-강하제일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 시트르산 또는 타르타르산이 pH-강하제로서 사용된다.

임의의 특정한 pH-강하제 또는 pH-강하제의 조합의 필요한 양은 달라질 수 있다. 전형적으로, 적합한 양은 관련 기술분야에 공지되어 있고 본원에 기재되어 있는 다양한 시험을 사용하여 결정될 수 있다 (예를 들어, 상기 기재되어 있는 10 밀리리터의 0.1M 중탄산나트륨 용액 중에서의 pH-강하 시험 사용). 비-제한적 예로서, 본 발명에 따른 제제에 사용되는 pH 강하제의 적합한 양은 약 100 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 425 mg, 450 mg, 475 mg, 500 mg, 525 mg, 550 mg, 575 mg, 600 mg, 625 mg, 650 mg, 675, mg, 700 mg, 725 mg, 750 mg, 775 mg, 800 mg, 825 mg, 850 mg, 875 mg, 900 mg, 925 mg, 950 mg, 975 mg, 또는 1,000 mg의 양 또는 그 초과의 양일 수 있다. 다른 실시양태에서, 사용되는 시트르산의 양은 1,000 mg을 초과할 수 있다.

일부 실시양태에서, 사용되는 pH 강하제 (예를 들어, 시트르산 또는 타르타르산)의 적합한 양은 특정한 투여 형태의 총 중량의 퍼센트로서 측정될 수 있다. 비-제한적 예로서, 사용되는 pH 강하제의 적합한 양은 고체 투여 형태의 총 중량의 약 10%의 양 또는 그 초과의 양 (예를 들어, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 양 또는 그 초과의 양)일 수 있다.

다양한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 1종 이상의 흡수 증진제를 포함한다. 본원에 사용된 흡수 증진제는 수성 또는 친지성 환경에서 다른 성분의 용해도를 증가시켜 그것이 방출되게 하고/거나 장벽을 가로질러 활성 펩티드 (예를 들어, 안지오텐신 (1-7) 펩티드)의 섭취를 증진시키는 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 흡수 증진제는 용해도 증진제 및/또는 섭취 증진제로 지칭된다.

일부 실시양태에서, 일부는 증진된 용해도를 제공하고, 일부는 증진된 섭취를 제공하고, 일부는 둘 다를 제공하는 흡수 증진제의 혼합물을 갖는 것이 가능하다. 주어진 실시양태에서, 제한 없이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10종의 흡수 증진제를 비롯하여 다양한 수의 흡수 증진제를 갖는 것이 가능하다.

표면 활성제는 용해도 증진제 및 섭취 증진제 둘 다의 특성을 갖는 유용한 흡수 증진제의 예이다. 일부 실시양태에서, 표면 활성제가 흡수 증진제로서 사용되는 경우에, 이는 제조 공정 동안 혼합 및 캡슐 로딩을 용이하게 하는 자유 유동 분말일 수 있다. 다른 실시양태에서 표면 활성제가 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 생체이용률을 증가시키기 위해 사용되는 경우에, 표면 활성제는 (a) 음이온성 표면 활성제, 예컨대 콜레스테롤 유도체 (예를 들어, 담즙산), (b) 양이온성 표면 작용제 (예를 들어, 아실 카르니틴, 인지질 등), (c) 비-이온성 표면 활성제, 및 (d) 음이온성 표면 활성제와 음전하 중화제의 혼합물, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 음전하 중화제는 아실 카르니틴, 세틸 피리디늄 클로라이드 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, 산 가용성 담즙산 및 양이온성 표면 활성제가 흡수 증진제로서 함께 사용될 수 있다. 아실 카르니틴 (예컨대 라우로일 카르니틴), 인지질 및 담즙산은 일부 실시양태에서 특히 효과적인 흡수 증진제일 수 있다.

다양한 흡수 증진제가 다양한 실시양태에서 사용하는데 적합하지만, 하기 예시적인 목록이 본 발명의 일부 실시양태를 예시하기 위해 의도된다. 제한 없이, 일부 적합한 흡수 증진제는 (a) 살리실레이트, 예컨대 살리실산나트륨, 3-메톡시살리실레이트, 5-메톡시살리실레이트 및 호모바닐레이트; (b) 담즙산, 예컨대 타우로콜산, 타우로데옥시콜산, 데옥시콜산, 콜산, 글리콜산, 리토콜레이트, 케노데옥시콜산, 우르소데옥시콜산, 우르소콜산, 데히드로콜산, 푸시드산, 등; (c) 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리옥시에틸렌 에테르 (예를 들어, 브리즈(Brij) 36T, 브리즈 52, 브리즈 56, 브리즈 76, 브리즈 96, 텍사포르(Texaphor) A6, 텍사포르 A14, 텍사포르 A60 등), p-t-옥틸 페놀 폴리옥시에틸렌 (트리톤(Triton) X-45, 트리톤 X-100, 트리톤 X-114, 트리톤 X-305 등) 노닐페녹시폴리옥시에틸렌 (예를 들어, 이게팔(Igepal) CO 시리즈), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 (예를 들어, 트윈(Tween)-20, 트윈-80 등); (d) 음이온성 계면활성제, 예컨대 디옥틸 소듐 술포숙시네이트; (e) 리소-인지질, 예컨대 리소레시틴 및 리소포스파티딜에탄올아민; (f) 아실카르니틴, 아실콜린 및 아실 아미노산, 예컨대 라우로일카르니틴, 미리스토일카르니틴, 팔미토일카르니틴, 라우로일콜린, 미리스토일콜린, 팔미토일콜린, 헥사데실리신, N-아실페닐알라닌, N-아실글리신 등; (g) 수용성 인지질, 예컨대 디펩타노일포스파티딜콜린, 디옥틸포스파티딜콜린 등; (h) 중쇄-길이 지방산 (카프릴산, 카프르산 및 라우르산)을 함유하는 모노-, 디- 및 트리글리세리드의 혼합물인 중쇄 글리세리드; (i) 에틸렌-디아민테트라아세트산; (j) 양이온성 계면활성제, 예컨대 세틸피리디늄 클로라이드; (k) 폴리에틸렌 글리콜의 지방산 유도체, 예컨대 라브라솔(Labrasol), 라브라팍(Labrafac) 등; 및 (l) 알킬사카라이드, 예컨대 라우로일 말토시드, 라우로일 수크로스, 미리스토일 수크로스, 팔미토일 수크로스 등을 포함한다.

일부 실시양태에서, 흡수 증진제(들)는 제약 조성물의 전체 중량 (전형적으로 장용 코팅 제외) 대비 중량%로서 측정된 양으로 존재할 것이다. 추가의 비-제한적인 예로서, 실시양태에서 존재하는 흡수 증진제의 양은 0.1 내지 20 중량%; 0.5 내지 20 중량%; 1.0 내지 20 중량%, 2.0 내지 20 중량%, 3.0 내지 20 중량%, 4.0 내지 20 중량%, 5.0 내지 20 중량%, 5.0 내지 15 중량%, 5.0 내지 14 중량%, 5.0 내지 13 중량%, 5.0 내지 12 중량%, 5.0 내지 12 중량%, 5.0 내지 11 중량%, 5.0 내지 10 중량%, 6.0 내지 10 중량%, 7.0 내지 10 중량%, 8.0 내지 10 중량%, 9.0 내지 10 중량%, 5.0 내지 9.0 중량%, 5.0 내지 8.0 중량%, 5.0 내지 7.0 중량%, 및 5.0 내지 6.0 중량% 범위일 수 있다.

일부 실시양태에서, pH-강하제(들) 대 흡수 증진제(들)의 중량비는 약 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14:1, 15:1, 16:1, 17:1, 18:1, 19:1, 20:1 또는 상기 예시적인 비 중 임의의 2개 사이일 수 있다. 주어진 제약 조성물 내의 모든 pH-강하제의 총 중량 및 모든 흡수 증진제의 총 중량은 상기 예시적인 비 내에 포함된다. 예를 들어, 제약 조성물이 2종의 pH-강하제 및 3종의 흡수 증진제를 포함하는 경우에, 상기 비는 둘 다의 pH-강하제의 총 합 중량 및 모든 3종의 흡수 증진제의 총 합 중량에 대해 계산될 것이다.

일부 실시양태에서, 흡수 증진제(들)는 산성 pH, 예컨대 pH 5.5 미만, 및 특히 pH 3.0 내지 pH 5.0에서 가용성일 것이다.

일부 실시양태에서, 제공되는 조성물은 1종 이상의 보호 비히클을 포함한다. 본원에 사용된 보호 비히클은 활성 펩티드 (예를 들어, 안지오텐신 (1-7) 펩티드)를 위 프로테아제로부터 보호하는 임의의 보호 성분 및/또는 구조, 예컨대 담체, 층, 코팅 또는 다른 비히클을 지칭한다. 전형적으로, 보호 비히클은 특정한 투여 형태 내의 활성 및 다른 성분이 방출될 수 있도록 결국 용해된다. 보호 비히클의 통상적인 형태는 장용 코팅이다. 일부 실시양태에서, 적합한 장용 코팅은 0.1N HCl 중에서의 본 발명의 제약 조성물의 파괴를 적어도 2시간 동안 방지할 수 있고, 이어서 상기 조성물이 분당 100회 회전으로 회전하는 용해조 내에서 pH가 6.3으로 증가된 후 30분 내에 제약 조성물의 모든 내용물의 완전한 방출을 가능하게 할 수 있다.

많은 장용 코팅이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 하나 이상의 실시양태에서 유용하다. 장용 코팅의 비-제한적 예는 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 히드록시프로필 메틸에틸셀룰로스 숙시네이트, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 프탈레이트, 카르복실 메틸에틸셀룰로스 및 메타크릴산-메틸 메타크릴레이트 공중합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 흡수 증진제, 예컨대 용해도 및/또는 섭취 증진제(들), 및 pH-강하제(들)는 위를 통한 실시양태의 성분의 보호된 통과를 가능하게 하기 위해 충분히 점성인 보호 시럽 중에 포함된다.

적합한 장용 코팅은, 예를 들어 본 발명의 활성 및 다른 성분이 캡슐 내에 로딩된 후 캡슐에 적용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 장용 코팅은 정제의 외부 상에 코팅되거나, 또는 활성 성분 입자의 외부 표면 상에 코팅된 다음 정제 형태로 압축되거나 캡슐 내에 로딩된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 모든 성분이 담체 또는 비히클로부터 방출되고, 장 환경에서 가능한 한 동시에 용해되는 것이 바람직할 수 있다. 또한 일부 실시양태에서 비히클 또는 담체는 소장에서 활성 성분을 방출하는 것이 바람직할 수 있으며, 여기서 경세포 또는 세포주위 수송을 증가시키는 섭취 증진제는 동일한 섭취 증진제가 이후에 결장에서 방출되는 경우보다 바람직하지 않은 부작용을 유발할 가능성이 더 낮다. 그러나, 본 발명은 소장 뿐만 아니라 결장에서도 효과적인 것으로 여겨진다는 것이 인식될 것이다. 상기에서 논의된 것에 더하여 수많은 비히클 또는 담체가 관련 기술분야에 공지되어 있다.

일부 실시양태에서, (특히 본 발명의 성분을 동시에 방출되게 하는 방법을 최적화하는데 있어서) 장용 코팅의 양을 낮게 유지하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 장용 코팅은 고체 투여 형태와 같은 나머지 제약 조성물의 중량에 대해 30% 이하로 첨가된다 ("나머지"는 장용 코팅 그 자체를 제외한 제약 조성물임). 다른 실시양태에서, 장용 코팅은 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 또는 10% 미만으로 첨가된다. 일부 실시양태에서, 장용 코팅과 같은 보호 비히클은 제약 조성물 (예를 들어, 고체 투여 형태)의 총 중량의 대략 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%의 양 또는 그 미만의 양을 구성한다.

투여 경로

본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제 (또는 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 함유하는 조성물 또는 의약)는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 비경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 비경구 투여는 정맥내, 피내, 흡입, 경피 (국소), 안내, 근육내, 피하, 근육내 및/또는 경점막 투여로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 피하로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "피하 조직"은 피부 바로 아래의 느슨하고 불규칙한 결합 조직의 층으로서 정의된다. 예를 들어, 피하 투여는 넓적다리부, 복부, 둔부, 또는 견갑부를 포함하나 이에 제한되지는 않는 영역에 조성물을 주사하는 것에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 정맥내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 표적 조직, 예컨대 심장 또는 근육 (예를 들어, 근육내), 종양 (종양내), 신경계에의 직접 주사 (예를 들어, 뇌; 뇌실내; 척수강내로의 직접 주사)에 의해 투여된다. 대안적으로, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제 (또는 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 함유하는 조성물 또는 의약)은 흡입에 의해, 비경구로, 피내로, 경피로, 또는 경점막으로 (예를 들어, 경구로 또는 비강으로) 투여될 수 있다. 원하는 경우에, 하나 초과의 경로를 공동으로 사용할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (a) 안지오텐신 (1-7) 펩티드, (b) 적어도 1종의 제약상 허용되는 pH-강하제, (c) 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 생체이용률을 촉진하는데 효과적인 적어도 1종의 흡수 증진제, 및 (d) 보호 비히클을 포함하는, 경구 투여를 위한 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 고체 투여 형태를 제공한다. 일부 실시양태에서, 고체 투여 형태는 캡슐 또는 정제이다. 경구 제제의 제조를 위한 다양한 방법 및 성분이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 통상의 기술자는 이들 방법 및 성분 중에서 본 명세서 및/또는 2012년 9월 17일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 61/701,972 (그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 발명과 상용성인 것을 결정할 수 있을 것으로 예상된다. 이러한 방법 및 성분은 또한 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려된다.

투약

일부 실시양태에서, 조성물은 치료 유효량으로 및/또는 특정한 목적하는 결과와 (예를 들어, 근육 이영양증의 치료 또는 그의 위험의 감소와) 관련된 투약 요법에 따라 투여된다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상이 강도, 중증도, 지속기간 또는 빈도에서 감소되거나 또는 발병 지연되도록 하는 투여 간격으로 주기적으로 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상은 근육 소모, 근육 약화, 근육 취약성, 근육 가성비대, 관절 구축, 골격 변형, 심근병증, 연하 장애, 장 및 방광 기능 장애, 근육 허혈, 인지 장애, 행동 기능장애, 사회화 장애, 척추측만증, 및 호흡 기능 장애로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 포함하는 제제는 단일 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 포함하는 제제는 규칙적 간격으로 투여된다. 본원에 사용된 "간격"으로의 투여는 치료 유효량이 주기적으로 투여되는 것을 나타낸다 (1-회 용량과 구별됨). 간격은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 포함하는 제제는 격월, 매월, 매월 2회, 3주마다, 격주, 매주, 매주 2회, 매주 3회, 매일, 매일 2회, 또는 6시간마다 투여된다. 단일 개체에 대한 투여 간격은 고정 간격일 필요는 없지만, 개체의 필요에 따라 시간의 경과에 따라 달라질 수 있다.

본원에 사용된 용어 "격월"은 2개월에 1회 (즉, 2개월마다 1회) 투여를 의미하고; 용어 "매월"은 1개월에 1회 투여를 의미하고; 용어 "3주마다"는 3주에 1회 (즉, 3주마다 1회) 투여를 의미하고; 용어 "격주"는 2주에 1회 (즉, 2주마다 1회) 투여를 의미하고; 용어 "매주"는 1주에 1회 투여를 의미하고; 용어 "매일"은 1일에 1회 투여를 의미한다. 일부 실시양태에서, 반복 용량은 하루 중 동일한 시간 (예를 들어, 10am)에 제공된다. 일부 실시양태에서, 반복 용량은 하루 중 상이한 시간에 제공된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 포함하는 제제는 규칙적 간격으로 무기한 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 포함하는 제제는 규칙적 간격으로 규정된 기간 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 포함하는 제제는 규칙적 간격으로 5년, 4년, 3년, 2년, 1년, 11개월, 10개월, 9개월, 8개월, 7개월, 6개월, 5개월, 4개월, 3개월, 2개월, 1개월, 3주, 2주, 1주, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 동안 투여된다.

본 발명에 따라 투여되는 특정한 용량 또는 양은 예를 들어 목적하는 결과의 속성 및/또는 정도, 특정한 투여 경로 및/또는 시기, 및/또는 하나 이상의 특징 (예를 들어, 체중, 연령, 개인 병력, 유전적 특징, 생활방식 파라미터, 심장 결손의 중증도 및/또는 심장 결손의 위험 수준 등, 또는 그의 조합)에 따라 달라질 수 있다. 이러한 용량 또는 양은 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 적절한 용량 또는 양은 표준 임상 기술에 따라 결정된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 적절한 용량 또는 양은 근육 질량을 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100% 또는 그 초과만큼 증가시키는데 충분한 용량 또는 양이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 적절한 용량 또는 양은 근육 허혈의 발생률 또는 중증도를 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100%만큼 감소시키는데 충분한 용량 또는 양이다. 대안적으로 또는 추가로, 일부 실시양태에서, 적절한 용량 또는 양은 투여되는 바람직한 또는 최적의 투여량 범위 또는 양의 확인을 돕는 하나 이상의 시험관내 또는 생체내 검정의 사용을 통해 결정된다.

다양한 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 치료 유효량으로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "치료 유효량"은 본 발명의 치료 조성물 중에 함유된 치료제의 총량에 기초하여 주로 결정된다. 일반적으로, 치료 유효량은 대상체에 대해 의미있는 이익 (예를 들어, 기저 질환 또는 상태의 치료, 조절, 치유, 예방 및/또는 개선)을 달성하는데 충분하다. 일부 특정한 실시양태에서, 투여되는 적절한 용량 또는 양은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 추정될 수 있다

유도체, 유사체, 및/또는 염을 비롯한 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 치료 유효 투여량은 다양한 실시양태에서 다양한 양으로 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 예를 들어 약 1-10,000 μg/kg, 약 5-1,500 μg/kg, 약 100-1,000 μg/kg, 또는 400-500 μg/kg일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 예를 들어 약 1 μg/kg, 2.5 μg/kg, 5 μg/kg, 10 μg/kg, 20 μg/kg, 30 μg/kg, 40 μg/kg, 50 μg/kg, 60 μg/kg, 70 μg/kg, 80 μg/kg, 90 μg/kg, 100 μg/kg, 150 μg/kg, 200 μg/kg, 250 μg/kg, 300 μg/kg, 400 μg/kg, 500 μg/kg, 600 μg/kg, 700 μg/kg, 800 μg/kg, 900 μg/kg, 1000 μg/kg, 또는 1500 μg/kg일 수 있다. 특정한 개체에 대한 유효 용량은 개체의 필요에 따라 시간의 경과에 따라 달라질 (예를 들어, 증가 또는 감소될) 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하나의 용량으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하루에 제공된다.

다른 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 예를 들어 약 0.001 mg/kg 체중 내지 500 mg/kg 체중, 예를 들어 약 0.001 mg/kg 체중 내지 400 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 300 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 200 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 100 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 90 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 80 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 70 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 60 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 50 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 40 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 30 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 25 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 20 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 15 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 10 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하나의 용량으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하루에 제공된다.

다른 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 예를 들어 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중, 예를 들어 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 0.9 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 0.7 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 0.6 mg/kg 체중, 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 0.5 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 0.9 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 0.7 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 0.6 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 0.5 mg/kg 체중, 약 0.02 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중, 약 0.02 mg/kg 체중 내지 약 0.9 mg/kg 체중, 약 0.02 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.02 mg/kg 체중 내지 약 0.7 mg/kg 체중, 약 0.02 mg/kg 체중 내지 약 0.6 mg/kg 체중, 약 0.02 mg/kg 체중 내지 약 0.5 mg/kg 체중, 약 0.03 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중, 약 0.03 mg/kg 체중 내지 약 0.9 mg/kg 체중, 약 0.03 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.03 mg/kg 체중 내지 약 0.7 mg/kg 체중, 약 0.03 mg/kg 체중 내지 약 0.6 mg/kg 체중, 약 0.03 mg/kg 체중 내지 약 0.5 mg/kg 체중, 약 0.04 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중, 약 0.04 mg/kg 체중 내지 약 0.9 mg/kg 체중, 약 0.04 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.04 mg/kg 체중 내지 약 0.7 mg/kg 체중, 약 0.04 mg/kg 체중 내지 약 0.6 mg/kg 체중, 약 0.04 mg/kg 체중 내지 약 0.5 mg/kg 체중, 약 0.05 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중, 약 0.05 mg/kg 체중 내지 약 0.9 mg/kg 체중, 약 0.05 mg/kg 체중 내지 약 0.8 mg/kg 체중, 약 0.05 mg/kg 체중 내지 약 0.7 mg/kg 체중, 약 0.05 mg/kg 체중 내지 약 0.6 mg/kg 체중, 약 0.05 mg/kg 체중 내지 약 0.5 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하나의 용량으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하루에 제공된다.

다른 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 예를 들어 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.1 mg/kg 체중, 예를 들어 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.09 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.08 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.07 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.06 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.05 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 약 0.04 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.03 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.02 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.019 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.018 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.017 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.016 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.015 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.014 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.013 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.012 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.011 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.01 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.009 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.008 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.007 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.006 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.005 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.004 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.003 mg/kg 체중, 약 0.0001 mg/kg 체중 내지 0.002 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 용량은 0.0001 mg/kg 체중, 0.0002 mg/kg 체중, 0.0003 mg/kg 체중, 0.0004 mg/kg 체중, 0.0005 mg/kg 체중, 0.0006 mg/kg 체중, 0.0007 mg/kg 체중, 0.0008 mg/kg 체중, 0.0009 mg/kg 체중, 0.001 mg/kg 체중, 0.002 mg/kg 체중, 0.003 mg/kg 체중, 0.004 mg/kg 체중, 0.005 mg/kg 체중, 0.006 mg/kg 체중, 0.007 mg/kg 체중, 0.008 mg/kg 체중, 0.009 mg/kg 체중, 0.01 mg/kg 체중, 0.02 mg/kg 체중, 0.03 mg/kg 체중, 0.04 mg/kg 체중, 0.05 mg/kg 체중, 0.06 mg/kg 체중, 0.07 mg/kg 체중, 0.08 mg/kg 체중, 0.09 mg/kg 체중, 또는 0.1 mg/kg 체중일 수 있다. 특정한 개체에 대한 유효 용량은 개체의 필요에 따라 시간의 경과에 따라 달라질 (예를 들어, 증가 또는 감소될) 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하나의 용량으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 유효량은 하루에 제공된다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 약 1-1,000 μg/kg/일 범위 (예를 들어, 약 1-900 μg/kg/일, 1-800 μg/kg/일, 1-700 μg/kg/일, 1-600 μg/kg/일, 1-500 μg/kg/일, 1-400 μg/kg/일, 1-300 μg/kg/일, 1-200 μg/kg/일, 1-100 μg/kg/일, 1-90 μg/kg/일, 1-80 μg/kg/일, 1-70 μg/kg/일, 1-60 μg/kg/일, 1-50 μg/kg/일, 1-40 μg/kg/일, 1-30 μg/kg/일, 1-20 μg/kg/일, 1-10 μg/kg/일 범위)의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 약 1-500 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 약 400-500 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 약 1-100 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 약 1-60 μg/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 약 1, 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 또는 1,000 ug/kg/일로부터 선택된 유효 용량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 제공되는 조성물은 제약 제제로서 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상의 강도, 중증도, 지속기간, 빈도에서의 감소, 또는 발병에서의 지연의 달성과 관련된 투약 요법에 따른, 투여를 위한 단위 용량 양이거나 또는 이를 포함한다.

조합 요법

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 근육 이영양증 예방 및/또는 치료를 위해 현재 사용되는 1종 이상의 공지된 치료제 (예를 들어, 항-근육 이영양증 의약)와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 공지된 치료제(들)는 그의 표준 또는 승인된 투약 요법 및/또는 스케쥴에 따라 투여된다. 일부 실시양태에서, 공지된 치료제(들)는 그의 표준 또는 승인된 투약 요법 및/또는 스케쥴과 비교하여 변경된 요법에 따라 투여된다. 일부 실시양태에서, 이러한 변경된 요법은 하나 이상의 단위 용량이 양에서 변경 (예를 들어, 감소 또는 증가)되는 것 및/또는 투약이 빈도에서 변경되는 것 (예를 들어, 단위 용량 사이의 하나 이상의 간격이 확장되어 더 낮은 빈도가 되거나, 또는 감소되어 더 높은 빈도가 되는 것)에서 표준 또는 승인된 투약 요법과 상이하다.

일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드는 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약과 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약은 글루코코르티코이드 (예를 들어, 프레드니손 또는 VBP15), 포스포디에스테라제 제5형 (pde5) 억제제, 또는 다른 요법, 예컨대 산화질소 부스팅 의약 (예를 들어, HCT 1026 또는 NCX 320), 드리사페르센, 안티센스 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, AVI-4658) 등이다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약은 에테플러센 (AVI-4658), HCT 1026, NCX 320 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 아바나필, 아이오데나필, 미로데나필, 우데나필, 자프리나스트, 코르티코스테로이드, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제는 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약과 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제 및 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약은 순차적으로 투여된다.

키트

본 발명은 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제, 또는 그를 함유하는 제제를 함유하고, (동결 건조된 경우) 그의 재구성 및/또는 사용에 대한 지침서를 제공하는 키트 또는 다른 제조 물품을 추가로 제공한다. 키트 또는 다른 제조 물품은 용기, 시린지, 바이알 및 (예를 들어, 피하, 경구, 흡입에 의한) 투여에 유용한 임의의 다른 물품, 장치, 또는 장비를 포함할 수 있다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 시린지 (예를 들어, 사전-충전 시린지), 앰플, 카트리지, 저장소 또는 리오-젝트를 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용기는 사전-충전 시린지이다. 적합한 사전-충전 시린지는 베이킹된 실리콘 코팅이 있는 보로실리케이트 유리 시린지, 분무된 실리콘이 있는 보로실리케이트 유리 시린지, 또는 실리콘이 없는 플라스틱 수지 시린지를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

전형적으로, 용기는 제제, 및 재구성 및/또는 사용에 대한 지침이 표시되어 있을 수 있는 용기 상의 또는 그에 결합된 라벨을 수용할 수 있다. 예를 들어, 라벨에는 제제가 상기 기재된 바와 같은 농도로 재구성된다는 것이 표시되어 있을 수 있다. 라벨에는 제제가 예를 들어 피하 투여에 유용하거나 피하 투여용이라는 것이 추가로 표시되어 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 용기는 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 함유하는 단일 용량의 안정한 제제를 함유할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 단일 용량의 안정한 제제는 약 15 ml, 10 ml, 5.0 ml, 4.0 ml, 3.5 ml, 3.0 ml, 2.5 ml, 2.0 ml, 1.5 ml, 1.0 ml, 또는 0.5 ml 미만의 부피로 존재한다. 대안적으로, 제제를 수용하는 용기는 제제의 반복 투여 (예를 들어, 2-6회 투여)를 가능하게 하는 다중-사용 바이알일 수 있다. 키트 또는 다른 제조 물품은 적합한 희석제 (예를 들어, BWFI, 염수, 완충 염수)를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 희석제와 제제를 혼합할 때, 재구성된 제제 중 최종 단백질 농도는 일반적으로 적어도 1 mg/ml (예를 들어, 적어도 5 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 20 mg/ml, 적어도 30 mg/ml, 적어도 40 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 75 mg/ml, 적어도 100 mg/ml)일 것이다. 키트 또는 다른 제조 물품은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 사용 지침서가 담긴 포장 삽입물을 비롯한, 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트 또는 다른 제조 물품은 자가 투여를 위한 지침서를 포함할 수 있다.

실시예

실시예 1 - 뒤시엔느 근육 이영양증의 mdx 마우스 모델에서 안지오텐신 (1-7), 팬사이트 또는 선형 팬사이트의 투여

본 실시예에서, 뒤시엔느 근육 이영양증 (DMD)의 공지되고 허용되는 모델인 mdx 마우스를 사용하여 DMD 환자에서 전형적으로 관찰되는 근육 변성에 대한 여러 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제, AVE0991의 효과를 평가하였다. 문헌 [Dangain and Vrbova, Muscle development in mdx mutant mice, 1984, Muscle Nerve 7: 700-704]을 참조하고; 또한 문헌 [Tanabe et al., Skeletal muscle pathology in X-chromosome-linked muscular dystrophy (mdx) mouse, 1986, Acta Neuropathol, 69:91-95; Kobayashi et al., Endpoint measures in the mdx mouse relevant for muscular dystrophy pre-clinical studies, 2012, Acta Materialia, 22: 34-42]을 참조한다. 구체적으로, mdx 마우스는 그의 디스트로핀 유전자 내에 점 돌연변이를 가지며, 이는 디스트로핀 생산의 파괴로 이어지고, 마우스에 존재하는 기능적 디스트로핀이 거의 없게 만든다. 기능적 디스트로핀의 결여는 결국 유의한 섬유증의 형성 및 횡경막을 비롯한 많은 근육에 걸친 유의한 약화로 이어지고, 전형적으로 사망을 야기한다.

본 실시예에서는, 3종의 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 즉 안지오텐신 (1-7) (서열 1), 팬사이트 (서열 22), 및 선형 팬사이트 ("TXA301"로도 지칭됨; 서열 2) 및 소분자 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제 AVE0991을 사용하여 시간의 경과에 따른 근육 소모의 진행에 대한 그의 효과를 검사하였다. 구체적으로, 110마리의 mdx 마우스 (군당 10마리)를 하기 표 1에 요약된 군 중 하나로 배치하였다.

<표 1> 연구 설계

본 실시예에서, 선형 팬사이트, 팬사이트, 및 AVE0991을 염수 중에서 제조하고, 28일 동안 매일 100 μl/마우스의 용량 부피로 견갑골하 주사를 통해 피하로 투여하였다. 투약 용액은 3일마다 새롭게 제조하였다.

최종 주사 1주 후에, 각 동물을 희생시키고, 여러 근육을 떼어내고 칭량하여, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 투여가 대조군 동물과 비교하여 처리된 mdx 마우스의 근육 질량을 증가시키는데 충분한지 여부를 결정하였다. 본 연구에서, 검사된 근육은 횡경막, 비복근, 사두근 및 삼두근이었다.

근섬유 크기를 또한 처리군 및 대조군 마우스 둘 다에서 표준 조직학 및 면역조직화학 방법을 사용하여 결정하였다. 공지된 방법에 따른 조직병리학 (예를 들어, 헤마톡실린 & 에오신 염색)을 또한 사용하여 근육 질량이 건강한 섬유로 구성되어 있는지 여부를 결정하였다. 건강한 근육 조직의 지표는 원형 섬유 및 집중화된 핵의 존재를 포함한다. 근육 조직을 분석하는 예시적인 방법은 문헌 [Meola G, "Advanced microscopic and histochemical techniques: Diagnostic tools in the molecular era of myology," 2005, Eur J Histochem 49(1):93-96, 및 Karpati et al., "Tracer and marker techniques in the microscopic study of skeletal muscles," 1981, Methods Achiev Exp Pathol, 10:101-137]에 기재되어 있는 것을 포함하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.

안지오텐신 (1-7) 펩티드의 투여는 mdx 마우스에서 근육 질량을 증가시킬 것으로 예상된다. 비대는 다양한 조직에서 관찰될 것이다. 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 투여는 또한 mdx 마우스에서 건강한 근육 질량을 증가시킬 것이다.

실시예 2 - 근육 이영양증의 Sgcd-/- 마우스 모델에서 Ang (1-7)의 투여

본 실시예에서, 지대 근육 이영양증의 공지된 모델인 Sgcd -/- 마우스를 사용하여 골격근 섬유증, 혈압, 심박수, 심장 활동, 압력반사 감수성, 산화성 스트레스, AT₁R 수용체 발현, 및 안정시 심장 및 미주교감신경 긴장에 대한 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 효과를 평가하였다. Sgcd -/- 마우스에는 사르코글리칸 복합체의 주요 성분이 결실되어 있고, 구체적으로 F-액틴 세포골격과 세포외 매트릭스 사이의 연결이 결실되어 있다. 이러한 결손은 근섬유 완전성에서의 감소로 인한 근육 소모 및 약화, 및 근육 세포 내 세포 신호전달에서의 조절이상을 유발한다. 앞서 이러한 결손은 어린 연령에서 운동 활성의 감소 및 자율신경성 기능장애를 야기하는 것으로 밝혀졌다. 자율신경성 기능장애는 말년의 심장 기능장애로 이어지는 것으로 여겨진다.

Sgcd -/- 마우스에서 정상 운동 활성의 파괴에 대한 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 효과를 검사하기 위해, 의식있는 어린 (10-15주) Sgcd-/- 및 대조군 C57BL6 마우스를 무선 원격측정에 의해 분석하였다. 마우스가 10주령일 때 케타민-크실라진 마취 하에 좌측 경동맥을 통해 무선 원격측정기를 대동맥에 이식하였다. 회복 후에, 혈압, 심박수 및 운동 활성을 24시간/일로 측정하였다. 혈압 측정치를 1시간 동안 2000 Hz에서 샘플링하여 수축기 동맥압 및 펄스 간격 (PI)의 박동-대-박동을 측정할 수 있었다. 심박수의 압력반사 제어는 공지된 순서 기술을 사용하여 수축기 혈압 및 펄스 간격에서의 자발적 변동으로부터 평가하였다.

압력반사 감수성은 순서 기술을 사용하여 수축기 혈압 및 펄스 간격에서의 자발적 변동으로부터 계산하였다. 구체적으로, 압력반사 감수성은 혈압 및 펄스 간격에서의 변화가 양의 상관관계인 경우에 (r² >0.85), 4 이상의 연속 혈압 펄스의 순서의 평균 기울기로서 계산하였다.

심장 교감신경 긴장 및 부교감신경 긴장은 β-아드레날린성 수용체 차단제 프로프라놀롤 및 무스카린성 콜린성 수용체 차단제 메틸아트로핀 각각에 대한 심박수 반응으로부터 계산하였다. 구체적으로, 안정시 심장 교감신경 및 부교감신경 (미주신경) 긴장을 프로프라놀롤 (1 μg/g, IP) 및 메틸아트로핀 (1 μg/g, IP) 각각에 대한 심박수 반응으로부터 추정하였다. 혈관운동 교감신경 긴장은 신경절 차단제 클로리손다민의 주사 (12 μg/g, IP)에 반응하여 평균 동맥 혈압에서의 감소로부터 계산하였다.

삼투성 미니펌프 (알젯(Alzet))를 3주령의 마우스 새끼에 케타민-크실라진 마취 하에 Ang (1-7) ("TXA127"로도 지칭됨) 또는 비히클과 함께 이식하였다.

2-3일에 걸쳐 데이터를 수집하고, 24시간 평균을 계산하였다. 대조군 및 Sgcd-/- 마우스의 개별 군에 3주령에서 시작하여 8주 동안 Ang-(1-7) (300 ng/kg/분)을 주입하였다. 상기 기재된 것과 동일한 프로토콜을 사용하여 이들 마우스에서 측정치를 수득하였다. 도 1A는 이러한 실시예에 적용된 데이터 수집 기술 중 일부의 도면을 제시하고, 도 1B는 이러한 연구를 위한 실험을 제시한다.

골격근 표현형을 평가하기 위해, 골격근 (사두근)의 파라핀 절편을 마송 트리크롬으로 염색하여 조직병리학 및 섬유증을 평가하였다. 골격근의 동결 절편을 폴리클로날 항-δ 및 항-β 사르코글리칸 1차 항체, 핵 염료, 및 알렉사 플루오르 488과 함께 인큐베이션하였다. AT₁R (Ang 제1형 수용체) 및 Mas (Ang(1-7) 수용체)를 토끼 항-AT₁R, 및 항-Mas 핵 염료, 및 2차 항체 염소 항-토끼 IgG를 사용하여 검출하였다. 산화성 스트레스 (O2^·-)는 디히드로에티듐 (DHE) 형광에 의해 측정하였다.

본 실시예에서의 데이터를 ± SE로 제공한다. 결과를 ANOVA, 및 대응표본 및 독립표본 t-검정에 의해 적절하게 분석하고, 유의성은 p<0.05에서 결정하였다.

도 2A 및 2B는 비처리 및 Ang (1-7)-처리 대조군 및 Sgcd -/- 마우스에서의 평균 동맥 혈압 및 심박수의 수준을 제시한다. 패널 A는 Sgcd -/- 마우스에서 전형적으로 관찰되는 보다 낮은 혈압이 Ang (1-7) 처리에 의해 유의하게 영향을 받지 않음을 제시한다. 패널 B는 Sgcd -/- 마우스의 Ang (1-7) 처리가 비처리 Sgcd -/- 마우스에 비하여 동물의 심박수를 온화하게 감소시키는 것으로 보임을 제시한다.

도 3에 제시된 바와 같이, 운동 활성은 예상된 바와 같이 Sgcd -/- 마우스에서 유의하게 감소되었다. 그러나, 운동 활성에서의 이러한 감소는 Ang (1-7)을 사용한 처리에 의해 현저하게 감소되었다. 실제로, 처리 Sgcd -/- 마우스에서의 이동 수준은 대조군 C57BL6 마우스와 유의하게 다르지 않았다.

도 4는 대조군과 Sgcd -/- 마우스 사이 뿐만 아니라 비처리 및 Ang (1-7)-처리 동물 사이의 4A) 압력반사 감수성, 4B) 심장 미주신경 긴장, 4C) 심장 교감신경 긴장, 및 4D) 혈관운동 교감신경 긴장의 비교를 제시한다. 패널 A 및 B에 제시된 바와 같이, 정상 마우스와 비교하여 Sgcd -/- 마우스에서의 압력반사 감수성 및 심장 미주신경 긴장에서의 감소는 Ang (1-7)의 처리에 의해 본질적으로 사라진다. 패널 C 및 D는 Sgcd -/- 마우스에서 전형적으로 관찰되는 심장 교감신경 긴장 및 혈관운동 교감신경 긴장에서의 증가가 또한 Ang (1-7)을 사용한 처리에 의해 본질적으로 사라짐을 제시한다.

도 5는 골격근, 여기서는 사두근의 섬유증에 관한 조직병리학적 (패널 5A) 및 정량적 (패널 5B) 데이터 둘 다를 제시한다. 둘 다의 패널에서 관찰할 수 있는 바와 같이, Sgcd -/- 마우스에서 관찰되는 유의한 섬유증은 Ang (1-7)을 사용한 처리에 의해 현저하게 감소되었다. 실제로, 패널 5B는 Ang (1-7)을 사용하여 처리된 Sgcd -/- 마우스에서 관찰되는 섬유증의 수준이 대조군 C57BL6 마우스와 비슷함을 제시한다.

Sgcd -/- 마우스에서, 안지오텐신 제1형 수용체 (AT₁R)의 증가가 관찰되고, 이는 감소된 운동 활성 및 자율신경성 기능장애와 상관관계가 있다 (문헌 [Sabharwal et al., Receptor activity-modifying protein 1 increases baroreflex sensitivity and attenuates Angiotensin-induced hypertension, 2010, Hypertension, 55(3): 627-635] 참조). 도 6은 Ang (1-7)을 사용한 처리가 비처리 Sgcd -/- 마우스에서 관찰되는 AT₁R의 증가를 본질적으로 사라지게 함을 제시한다.

예컨대 증가된 수준의 슈퍼옥시드로 인한 증가된 수준의 산화성 스트레스는 근육 이영양증의 다양한 증상과 상관관계가 있다 (문헌 [Terrill et al., Oxidative stress and pathology in muscular dystrophies: focus on protein thiol oxidation and dysferlinopathies, 2013, FEBS Journal doi: 10.1111/febs. 12142] 참조; 또한 문헌 [Murphy and Kehrer, Oxidative stress and muscular dystrophy, 1989, Chem Biol Interact, 69(2-3): 101-173] 참조). 유사한 현상이 Sgcd -/- 마우스에서 전형적으로 관찰되고, 이는 이러한 모델에서 관찰되는 운동 활성 및 자율신경성 기능에서의 곤란과 상관관계가 있는 것으로 여겨진다. 도 7A 및 7B는 비처리 Sgcd -/- 마우스에서 관찰되는 현저하게 증가된 수준의 슈퍼옥시드가 Ang (1-7)을 사용한 처리에 의해 강력하게 감쇠됨을 제시한다. 패널 A는 샘플의 디히드로에티듐 형광을 제시하고, 패널 B는 각각의 군에서의 슈퍼옥시드의 수준의 정량적 평가를 제시한다.

Ang(1-7) 펩티드가 Sgcd -/- 마우스에서 혈압을 낮추지 않으면서 골격근 섬유증을 감소시키고 운동 활성 및 교감미주신경 균형을 복원시키는 능력은 Ang(1-7) 펩티드가 근육 이영양증에 대한 치료로서 유의한 치료 잠재력을 가짐을 제시한다. 본 실시예에 제시된 바와 같이, Ang (1-7) 펩티드는 비처리 Sgcd -/- 마우스와 비교하여 Sgcd -/- 마우스에서 모든 관찰된 기능장애 측정을 개선시켰다. 이러한 발견에 기초하여, 상기 실시예에 의해 예시된 바와 같이, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제의 투여는 근육 이영양증의 치료를 위한 강력하고 신규한 접근법을 제공할 수 있다.

실시예 3 - mdx 마우스에 대한 팬사이트 및 선형 팬사이트 조성물의 경구 투여

본 실시예에서, mdx 마우스의 상태에 대한 경구 투여의 효과를 평가하기 위해 특정 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 즉 팬사이트 (서열 22) 및 선형 팬사이트 ("TXA301"로도 지칭됨; 서열 2)를 예시적인 경구 제제에 사용하였다. 본 실시예에서, 경구 위관영양을 사용하여 공지된 방법에 따라 작용제를 투여하였고, 팬사이트 및 선형 팬사이트의 개별 수성 제제는 각각 2012년 9월 17일에 출원된 미국 특허 가출원 61/701,972에 기재된 방법에 따라 시트르산, 라우로일 카르니틴 및 히드록시프로필 메틸셀룰로스 프탈레이트를 사용하여 제조하였다.

PBS 대조군 및 네이키드 안지오텐신 (1-7) 펩티드 대조군을 포함하여 8개의 군으로 분리한 총 80마리의 mdx 마우스를 하기 표 2에 제시된 설계에 따라 본 실시예에서 사용하였다.

<표 2> 연구 설계

실시예 1에서와 같이, 최종 투여 1주 후에 각 동물을 희생시키고, 여러 근육을 떼어내고 칭량하여, 안지오텐신 (1-7) 펩티드 및/또는 팬사이트 또는 선형 팬사이트를 포함하는 조성물의 경구 투여가 대조군 동물과 비교하여 처리된 mdx 마우스의 근육 질량을 증가시키는데 충분한지 여부를 결정하였다. 본 연구에서, 검사된 근육은 횡경막, 비복근, 사두근 및 삼두근이었다.

근섬유 크기를 또한 처리군 및 대조군 마우스 둘 다에서 표준 조직학 및 면역조직화학 방법을 사용하여 결정하였다. 공지된 방법에 따른 조직병리학 (예를 들어, 헤마톡실린 & 에오신 염색)을 또한 사용하여, 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 근육 질량이 건강한 섬유로 구성되어 있는지 여부를 결정하였다. 건강한 근육 조직의 지표는 원형 섬유 및 집중화된 핵의 존재를 포함한다.

팬사이트 또는 선형 팬사이트를 포함하는 조성물의 경구 투여는 mdx 마우스에서 근육 질량을 증가시키는데 충분할 것으로 예상된다. 비대는 다양한 조직에서 관찰될 것이다. 팬사이트 또는 선형 팬사이트를 포함하는 조성물의 경구 투여는 또한 mdx 마우스에서 건강한 근육 질량을 증가시킬 것이다.

실시예 4 - 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 사용한 처리 후 근육 이영양증의 Sgcd-/- 마우스 모델에서의 기능적 성능 및 섬유증 정도

본 실시예에서, 지대 근육 이영양증-2F (LGMD-2F)의 확립된 마우스 모델인 사르코글리칸 델타 결핍 마우스 (Sgcd-/-)를 사용하여 상기 질환을 앓는 마우스에서 기능적 손상 및 섬유증의 진행에 대한 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 효과를 검사하였다. 일반적으로 Sgcd-/- 마우스는 어린 연령에서 감소된 운동 활성 및 골격근에서의 이영양 표현형을 나타내는 것으로 공지되어 있고, 본 실시예는 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 사용한 처리가 운동 활성을 개선시키고 섬유증의 속도를 감소시킴을 제시한다.

총 32마리의 Sgcd -/- 마우스를 4개의 처리 군 중 하나로 무작위 할당하였다 (각각에서 n = 8): 염수 군 (비히클), TXA127 군, 팬사이트 군, 및 TXA301 군. 투여되는 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 용량은 TXA127의 경우에 500 μg/kg/일, 팬사이트의 경우에 50 μg/kg/일, 및 TXA301의 경우에 50 μg/kg/일이었다. 처리물을 함유하는 삼투성 미니펌프를 28-35주령의 마우스에게 이식하고, 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 8주 동안 주입하였다. 처리 마지막 3주 동안, 마우스를 러닝 휠이 부착되어 있는 케이지에 넣어 각 동물에 의해 수행된 수의적 운동의 양을 계산하였다. 총 휠 회전수 (달린 거리)를 매일 수집하였다. 8주 처리의 말미에, 마우스로부터 사두근 근육을 수거하여 조직병리학 및 산화성 스트레스를 분석하였다.

도 8은 제6주, 제7주 및 제8주 동안 러닝 휠에서 각각의 처리 군의 마우스에 의해 이루어진 평균 회전을 제시한다. TXA127 및 TXA301을 사용한 처리 둘 다는 염수 대조군의 마우스와 비교하여 수행된 수의적 운동의 양에서 유의한 개선을 생성하였고, TXA127은 가장 큰 개선 정도를 제시하였다. 도 9는 도 8과 동일한 데이터를 제시하며, 단지 3주 시험 기간 (제6주, 제7주, 및 제8주)에 걸쳐 처리 군당 축적된 합계로서 도시한다. 역시, TXA127 및 TXA301을 사용한 처리 둘 다는 염수 대조군 동물과 비교하여 이들 군에 의해 수행된 운동의 양에서 유의한 증가를 제시하였다. 주목할 것은, TXA127을 사용한 처리가 염수 대조군 동물과 비교하여 6배 더 큰 개선을 생성하였다는 것이다.

H&E 염색을 사용하여 마우스의 사두근 근육의 이영양 형태학을 검사하였다. 도 10A는 처리된 마우스로부터의 예시적인 H&E (상단 열) 및 마송 (하단 열) 염색을 제시한다. 도 10A 및 10B에 제시된 바와 같이, 염수-처리된 Sgcd-/- 마우스는 증가된 집중화된 핵, 지방산 침윤, 및 콜라겐 침착을 나타낸 반면에, TXA127을 사용한 처리는 Sgcd-/- 마우스의 골격근에서 섬유증을 유의하게 감소시켰다. 또한, TXA301을 사용하여 처리된 마우스도 또한 일부 개선을 나타난 반면에, 팬사이트-처리된 마우스에서는 섬유증에서 어떠한 감소도 관찰되지 않았다.

디히드로에티듐 (DHE)을 사용하여 처리된 Sgcd-/- 마우스에서의 산화성 스트레스의 정도를 검사하였다. 간략하게, DHE 용액을 골격근 절편에 도포하고, 공초점 현미경 상에서 이미지를 포착하였다 (적색이 산화성 스트레스를 나타냄). 예시적인 공초점 영상을 도 11A에 제시한다. 섬유증의 정도를 정량화하기 위해, 각각의 마우스로부터 골격 사두근 근육의 6개-절편의 평균을 수득하였다. 각각의 마우스에 대한 형광 강도를 NIH 이미지J 소프트웨어를 사용하여 정량화하고, 염수-처리된 Sgcd-/- 마우스에서 측정된 평균 형광 강도의 백분율에 대해 정규화하였다. 도 11A 및 11B에 제시된 바와 같이, 염수-처리된 Sgcd-/- 마우스는 증가된 산화성 스트레스를 나타내었고, 이는 TXA127에 의해 유의하게 감쇠되었다.

본 실시예는 안지오텐신 (1-7) 펩티드, 예컨대 TXA127 및/또는 TXA301을 사용한 처리가, 본 실시예에서 섬유증의 정도, 산화성 스트레스의 정도, 및 기능적 근육 손상의 정도와 같은 증상을 포함하여, 근육 이영양증을 치료하는데 유의한 효과를 갖는다는 것을 분명하게 제시한다.

등가물 및 범위

통상의 기술자는 상용의 범위를 넘지 않는 실험을 사용하여, 본원에 기재된 본 발명의 구체적 실시양태에 대한 다수의 등가물을 인식하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 상기 설명으로 제한되는 것으로 의도되지 않고, 오히려 첨부된 청구범위에 기재된 바와 같다.

SEQUENCE LISTING <110> UNIVERSITY OF IOWA RESEARCH FOUNDATION <120> ANGIOTENSINS IN MUSCULAR DYSTROPHY <130> 2009912-0093 <140> PCT/US2014/034615 <141> 2014-04-18 <150> 61/818,307 <151> 2013-05-01 <150> 61/813,929 <151> 2013-04-19 <160> 33 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asp Arg Val Tyr Ile His Pro 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Asp Arg Val Ser Ile His Cys 1 5 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Asp Arg Val Tyr Ile His Pro Phe His Leu Val Ile 1 5 10 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Any amino acid or dicarboxylic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Arg, Lys, Ala, Cit, Orn, acetylated Ser, Sar, D-Arg or D-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Val, Ala, Leu, Nle, Ile, Gly, Lys, Pro, HydroxyPro, Aib, Acpc or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Tyr, Tyr(PO3), Thr, Ser, homoSer, azaTyr or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Ile, Ala, Leu, norLeu, Val or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> His, Arg or 6-NH2-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Cys, Pro or Ala <220> <223> see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 4 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <400> 5 Asp Arg Leu Tyr Ile His Pro 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Asp Arg Val Ser Ile His Cys 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <400> 7 Asp Arg Val Xaa Ile His Xaa 1 5 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <400> 8 Asp Arg Leu Xaa Ile His Xaa Phe His Leu 1 5 10 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <400> 9 Asp Arg Leu Xaa Ile His Xaa Phe 1 5 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Any cross-linked amino acid <400> 10 Arg Leu Xaa Ile His Xaa Phe 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (2)..(5) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Any cross-linked amino acid <400> 11 Leu Xaa Ile His Xaa Phe 1 5 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <400> 12 Asp Arg Leu Xaa Ile His Xaa 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <400> 13 Asp Arg Leu Xaa Ile His Xaa Phe His 1 5 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Any positively-charged amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any aliphatic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Thioether bridge between residues <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Any aliphatic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <400> 14 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa His Xaa 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Abu <400> 15 Asp Arg Val Ala Ile His Ala 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 16 Asp Arg Val Ala Ile His Ala 1 5 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Any amino acid or absent <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Any positively charged amino acid or absent <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Thioether bridge between residues <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Any aliphatic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Any cross-linked amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Any amino acid other than Pro or absent <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> May or may not be present <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Any aliphatic residue or absent <220> <223> see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 17 Xaa Xaa Leu Xaa Xaa His Xaa Xaa His Xaa 1 5 10 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Abu <400> 18 Asp Arg Leu Ala Ile His Ala 1 5 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <400> 19 Asp Arg Leu Ala Ile His Ala 1 5 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Abu <400> 20 Asp Arg Leu Ala Ile His Ala Ile 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Nle <400> 21 Asp Arg Leu Ala Ile His Ala Ile 1 5 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <400> 22 Asp Arg Val Ser Ile His Cys 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Asp Arg Val Tyr Ile His Pro Phe 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Asp Arg Val Tyr Ile His Pro Phe His 1 5 <210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Arg Val Tyr Ile His Pro Phe His Leu 1 5 10 <210> 26 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Arg Val Tyr Ile His Pro 1 5 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Arg Val Tyr Ile His Pro Phe 1 5 <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Arg Val Tyr Ile His Pro Phe His 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Arg Val Tyr Ile His Pro Phe His Leu 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Val Tyr Ile His Pro Phe 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Val Tyr Ile His Pro Phe His 1 5 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Val Tyr Ile His Pro Phe His Leu 1 5 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Cross link between residues <220> <223> see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 33 Asp Arg Val Tyr Ile His Pro 1 5

Claims

근육 이영양증을 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 안지오텐신 (1-7) 펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 근육 이영양증을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상이 강도, 중증도, 지속기간 또는 빈도에서 감소되거나 또는 발병 지연되도록 하는 투여 간격으로 주기적으로 유효 용량으로 투여되는 것인 방법.
제2항에 있어서, 근육 이영양증의 적어도 하나의 증상 또는 양상이 근육 소모, 근육 약화, 근육 취약성, 관절 구축, 골격 변형, 심근병증, 연하 장애, 근육 가성비대, 장 및 방광 기능 장애, 근육 허혈, 인지 장애, 행동 기능장애, 사회화 장애, 척추측만증, 및 호흡 기능 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드의 투여가 근육 재생, 섬유증 감소, 증가된 근육 강도, 증가된 유연성, 증가된 운동 범위, 증가된 스태미나, 감소된 피로감, 증가된 혈류, 개선된 인지, 개선된 폐 기능, 및/또는 염증 억제를 생성하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 근육 이영양증이 뒤시엔느 근육 이영양증, 베커 근육 이영양증, 에머리-드레이푸스 근육 이영양증, 지대 근육 이영양증, 미요시 근병증, 선천성 근육 이영양증, 안면견갑상완 근육 이영양증, 안인두 근육 이영양증, 원발성 측삭 경화증, 척수성 근육 위축, 다발근염, 길랑-바레 증후군, 및 근긴장성 근육 이영양증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제5항에 있어서, 선천성 근육 이영양증이 라미닌-α2-결핍 선천성 근육 이영양증, 울리히 선천성 근육 이영양증, 워커-워버그 증후군, 후쿠야마 선천성 근육 이영양증, 및 정신 지체 및 뇌회비대 동반 선천성 근육 이영양증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 비경구로 투여되는 것인 방법.
제7항에 있어서, 비경구 투여가 정맥내, 피내, 흡입, 경피 (국소), 안내, 근육내, 피하, 근육내 및/또는 경점막 투여로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 경구로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 매월, 매주, 매일 또는 가변 간격으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 약 1-1,000ug/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 약 50-500ug/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 약 400-500ug/kg/일 범위의 유효 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약과 조합되어 투여되는 것인 방법.
제14항에 있어서, 1종 이상의 항-근육 이영양증 의약이 에테플러센 (AVI-4658), HCT 1026, NCX 320, 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 아바나필, 아이오데나필, 미로데나필, 우데나필, 자프리나스트, 코르티코스테로이드, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)의 자연-발생 안지오텐신 (1-7) 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 서열 1의 기능적 등가물인 방법.
제17항에 있어서, 기능적 등가물이 선형 펩티드인 방법.
제18항에 있어서, 선형 펩티드가 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에 나타나는 7개의 아미노산으로부터의 적어도 4개의 아미노산을 포함하며, 여기서 적어도 4개의 아미노산이 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에 나타나는 것과 같은 그의 상대 위치를 유지하는 것인 방법.
제18항에 있어서, 선형 펩티드가 4-25개의 아미노산을 함유하는 것인 방법.
제18항에 있어서, 선형 펩티드가 자연-발생 안지오텐신 (1-7)의 단편인 방법.
제18항에 있어서, 선형 펩티드가 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에서 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 함유하는 것인 방법.
제22항에 있어서, 선형 펩티드가 Asp¹-Arg²-Val³-Ser⁴-Ile⁵-His⁶-Cys⁷ (서열 2)의 아미노산 서열을 갖는 것인 방법.
제17항에 있어서, 기능적 등가물이 시클릭 펩티드인 방법.
제24항에 있어서, 시클릭 펩티드가 아미노산 사이에 연결을 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 연결이 자연-발생 안지오텐신 (1-7)에서 위치 Tyr⁴ 및 Pro⁷에 상응하는 잔기에 위치하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 연결이 티오에테르 가교인 방법.
제24항에 있어서, 시클릭 펩티드가 그 외에는 Asp¹-Arg²-Val³-Tyr⁴-Ile⁵-His⁶-Pro⁷ (서열 1)의 자연-발생 안지오텐신 (1-7) 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
제24항에 있어서, 시클릭 펩티드가 하기 화학식을 갖는 4,7-고리화 안지오텐신 (1-7)인 방법.
제17항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 펩티드가 프로테아제 내성, 혈청 안정성 및/또는 생체이용률을 증가시키는 하나 이상의 화학적 변형을 포함하는 것인 방법.
제30항에 있어서, 하나 이상의 화학적 변형이 PEG화를 포함하는 것인 방법.
근육 이영양증을 앓고 있거나 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제를 투여하는 것을 포함하는, 근육 이영양증을 치료하는 방법.
제32항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제가 비-펩티드성 효능제인 방법.
제33항에 있어서, 비-펩티드성 효능제가 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 (1-7) 수용체 효능제가 경구로 투여되는 것인 방법.