KR20160006124A

KR20160006124A - 상피 기능장애 치료에서의 아델미드롤의 용도

Info

Publication number: KR20160006124A
Application number: KR1020150097205A
Authority: KR
Inventors: 페데리카 델라 발레; 프란체스코 델라 발레; 빈센조 디 마르조; 스테파니아 페트로시노; 바바라 코스타; 가브리엘 마르코롱고; 다니엘 그라시
Original assignee: 에피테크 그룹 에스.알.엘.
Priority date: 2014-07-08
Filing date: 2015-07-08
Publication date: 2016-01-18
Also published as: DK2965765T3; CN105250252A; US20160008301A1; PL2965765T3; EP2965765B1; BR102015016445A2; HK1217913A1; HUE044801T2; CA2896435A1; EP2965765A1; PT2965765T; AU2015203809A1; ES2740928T3; US20190224145A1; KR102490825B1; CY1121957T1; AU2015203809B2; JP6752001B2; US20170209395A1; CA2896435C

Abstract

본 발명의 대상은 상피 기능장애 치료에서의 아델미드롤의 용도이다. 특히, 본 발명은 인간 또는 동물의 상피 조직 기능장애의 치료에서의 사용을 위한 아델미드롤에 관한 것이고, 여기서, 상기 아델미드롤은 팔미토일에탄올라마이드를 분해하는 faah 및 naaa 효소의 활성을 억제함이 없이, 팔미토일에탄올라마이드의 내생 수치의 증가를 야기한다.

Description

상피 기능장애 치료에서의 아델미드롤의 용도 {USE OF ADELMIDROL IN THE TREATMENT OF EPITHELIAL DYSFUNCTIONS}

본 발명의 목적은 상피 기능장애의 치료에서의 아델미드롤이다.

팔미토일에탄올아미드 (palmitoylethanolamide: PEA) 는 신경염증 및 통증에 대한 효과가 널리 증명된 내생 지질 N-아실아미드 물질이다 [Calignano A. et al Europ. J. Pharmacol. 2001; 419: 191-198; Skaper S.D. et al Mol Neurobiol. 2013; 48: 340-352; Skaper S.D. et al. Inflammopharmacology . 2014; 22: 79-94]. 약리학적 수준에서, PEA 의 내생 수준의 증가는, 상이한 원인병인론적 원인에 기인하는 신경염증 및 통증 메커니즘의 조절을 결정하는데 중요한 것으로 현재 고려되며, 인간과 동물 둘 다의 다수의 질환과 관련되어 있다 [Petrosino S. et al WSAVA/FECAVA World Small Animal Congress 2008; Richardson D. et al. Arthritis Research & Therapy 2008; 10 (2); R43; Ghafouri N. et al PLoS ONE 2011; 6(11); Naccarato M. et al Lipids in Health and Disease 2010; 9: 47]. 2 개의 상이한 약리학적 방법이 현재 이러한 증가를 수득하기 위해 제안되었다.

제 1 방법은 PEA 의 전신 경구 또는 설하 투여를 기반으로 하며: 이러한 경우, PEA 는 지질 분자의 높은 수불용성으로 인해 미분화 (2 마이크론과 10 마이크론 사이의 범위의 입자 크기) 또는 초미분화 (0.8 마이크론과 6 마이크론 사이의 범위의 입자 크기) 형태로 투여되어야 한다 [EP 1207870 B1; WO 2011/027373 A1].

다른 한편으로, 제 2 방법은 특정 PEA-분해 효소, 즉, FAAH (지방산 아미드 하이드롤라아제) 및 NAAA (N-아실에탄올아민 산 아미다아제) 의 활성의 억제를 기반으로 하며; 이러한 억제는 PEA 의 분해를 차단할 수 있는 상기 하이드롤라아제의 합성 억제제의 전신 투여로 수득되었다 [Piomelli D. et al CNS Drug Reviews 2006; 12: 21-38; Fiasella A. ChemMedChem 2014 Epub of Print]. 그러나, 이러한 방법은 심각한 문제를 내포하는데, 이는 특정 분해 효소의 차단을 통한 PEA 의 분해의 차단이 "요구에 따라" PEA 가 생물학적으로 합성되는 인지질을 인지질 합성을 통해 세포로 돌려보내는데 필요한 PEA 성분, 에탄올아민 및 팔미트산의 필수적인 재사용 방지와 일치하기 때문이다. 미분화 또는 초미분화 형태의 PEA 의 전신 경구 투여는 효과적이고 안전한 것으로 밝혀진 반면 [Skaper S.D. et al Inflammopharmacol. 2014; 22: 79-94; Esposito E. et al., Mini Rev Med Chem. 2013; 13: 237-55], 크림 또는 용액 형태의 국소 사용은 이러한 중요한 지질 분자의 높은 소수성의 결과로서 약리학적 유효량의 PEA 를 이러한 방식으로 제조하는 어려움 때문에 매우 어렵고 효과가 불량하다는 문제가 또한 존재한다.

아델미드롤은 지질에서의 양호한 용해도로서 뿐만 아니라 물에서의 높은 용해도를 가지는 합성 N-아실아미드 분자 및 (N,N'-비스(2-하이드록시에틸)노난디아미드) 이다.

본 출원의 발명자들은, 놀랍게도, 아델미드롤이 각질세포와 같은 상피 세포와 접촉할 때 PEA-분해 효소 (FAAH 및/또는 NAAA) 의 활성을 방해하지 않으면서 PEA 의 내생 수준의 중요한 증가를 야기할 수 있는 것을 밝혀냈다. 이러한 발견은, 인간과 동물 둘 다에서 상이한 기관의 상피 질환에 대해, 다양한 사용을 위한 적합한 약제학적 형태로, 외부 상피 (피부, 점막피부의 생식기 조직, 구강 점막) 및/또는 내부 상피 (방광 요로상피, 요관 점막, 정낭의 점막, 소화계의 점막, 윤활막의 내피층, 기도의 점막) 에 대해 효과적인 약리 작용을 가능하게 한다.

그러므로, 본 발명의 목적은 인간 또는 동물에서 상피 조직 기능장애의 치료에 사용하기 위한 아델미드롤이다.

본 발명의 추가의 목적은 인간 또는 동물에서 상피 조직 기능장애의 치료에서 사용하기 위한 약제학적 제형으로서, 상기 제형은 아델미드롤을, 임의로 팔미토일에탄올아미드의 옥사졸린 유도체, 항미생물제, 트랜스-트라우마틴산, 및 히알루론산 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 유효 성분과 함께 함유한다.

본 발명은 첨부한 특허청구범위에 의해 정의된다.

본 발명의 추가의 특징 및 장점은 비제한적인 실시예에 의해 제공되는 이의 바람직한 실시형태의 하기 설명으로부터 명백해질 것이다.

PEA-분해 효소의 활성을 조절 (차단이 아님) 할 수 있는 물질과 동일한 아델미드롤을 결합시킴으로써 팔미토일에탄올아미드의 국소 수준의 증가에 대한 아델미드롤의 활성을 높이는 것도 또한 유용할 수 있다. 특히, 번호 WO 2013/121449 A1 로 공개된 국제 출원에서 개시된 PEA 옥사졸린을 사용할 수 있다.

도 1 은 10 μM 아델미드롤로 24 시간 동안 자극된 HaCaT 세포에서 AEA, 2-AG, PEA 및 OEA 의 내생 수준을 도시한 것이고;
도 2 는 디지털 캘리퍼를 사용하는 무릎 부종의 평가 - 좌측부터 우측으로: 비 OA: OA + 식염수; OA + 아델미드롤 1.5 μg/25 μL; OA + 아델미드롤 15 μg/25 μL; OA + 아델미드롤 150 μg/25 μL - 를 도시한 것이고;
도 3 은 윤활액에서 생화학적 마커 TNF-α 의 평가를 도시한 것이다.

본 발명은 인간 또는 동물에서 상피 조직 기능장애의 치료에 사용하기 위한 아델미드롤에 관한 것이다.

아델미드롤은 천연 포화 디카복실산인 아젤라산의 합성 유도체의 국제 일반명 (International Non-proprietary Name: INN) 이다. 사실상, 아젤라산은 인체에서 발견되었으며, 이의 혈장 수준은 20-80 ng/ml 의 범위이다.

화학적으로, 아델미드롤은 N,N'-비스(2-하이드록시에틸)노난디아미드이며; 이 분자는 양친매성 거동을 가지는데, 이는 이것이 물과 유기 용매 둘 다에서 가용성을 촉진시킬 수 있는 친수성 특성과 친지성 특성을 가지기 때문이다. 아델미드롤을 함유하는 고온 멸균 용액의 가능성과 조합된 이들 특징은, 상기 분자를 외부 표면 및 내부 상피에 대한 국소 적용에 매우 적합하도록 한다.

본 발명에 따른 아델미드롤로 치료되는 상피 기능장애는 바람직하게는 상이한 병인을 가지는 구강인두 및 식도 연하곤란; 위식도 역류; 윤상인두 이완불능증; 식도 이완불능증; 상이한 병인을 가지는 구내염; 노인에서의 연하장애(Presbiphagia); 고양이 치은구내염; 치내요법학/치과교정학 및 치과 임플란트학 수술과 또한 관련된 치주 질환; 구강 작열감 증후군 (Burning Mouth Syndrome: BMS); 안검 부종; 안검염, 안검결막염; 안검의 내향 회전 (안검내반) 및 외번 (안검외반); 상이한 병인을 가지는 각막염 및 각막결막염(keratitoconjunctivitis) (예를 들면, 표층 점상 각막결막염); 상이한 병인을 가지는 각막 병변; 눈물막의 질적-양적 변화; 누낭염; 포도막염; 녹내장; 귀의 귀지샘 질환; 개 및 고양이에서의 귀 혈종; 개 및 고양이에서의 파리 중독 자극(fly strike irritations); 족피부염; 비염, 비기관염(Rhinotracheites), 급성 및 만성 비인두염; 급성 및 만성 인두염; 급성 및 만성 기관지염; 부비동염, 비부비동염(Rinosinusites); 기관지 천식; 탈모증; 개 및 고양이에서의 코 피부병; 급성 및 만성 타액선염(sialadenites); 신경병증성 소양증; 요로상피의 변화에 기인하는 상이한 병인을 가지는 방광 통증 증후군, 특히 간질성 방광염, 전신 화학요법제에 기인하는 방광염, 에피루비신 또는 미토마이신과 같은 국소 화학요법제의 방광 점적주입에 기인하는 방광염, 골반 방사선요법에 기인하는 방광염; 만성 및 / 또는 재발 방광염; 상피의 변화에 기인하는 위장 장애; 항문-직장 분절의 질환, 특히 후방 직장류, 직장염, 점막-직장 탈출증, 치질, 항문 균열, 항문주위 소양증, 개에서의 항문낭 질환 및 기타 회음부 기능장애; 중소 혈관 혈관염, 특히 육아종성 혈관염, 면역 복합체에 기인하는 혈관염; 이차 성선, 특히 정낭 및 정관의 염증; 인간 및 수의학 분야에서의 구강안면 통증 증후군; 류마티스 관절염 및 골관절염과 관련된 윤활막염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

인간 및 동물에서 사용하도록 의도되는 국소 적용을 위한 약제학적 형태 (크림, 젤, 패치) 중 아델미드롤의 농도는 0.2% 와 7.0% 사이의 범위이다.

내부 상피에 적용하기 위한 용액 (방광내 점적주입액, 정낭 내로의 주입액, 관절강 내로의 도입액, 네뷸라이저 용액) 에서, 아델미드롤은 0.3% 와 5.0% 사이의 범위의 농도로 사용되어야 한다.

인간과 동물 둘 다에서 사용하기 위한 국소 적용을 위한 약제학적 형태 (크림, 젤, 패치) 의 양은 1 cm² 의 상피 (예를 들면, 피부, 점막) 당 0.01 ml 와 0.5 ml 사이의 범위이고; 이로 인해, 아델미드롤의 투여 용량은 분자의 LD₅₀ 을 10% 보다 더 초과하지 않으며, 이것은 실험 동물에서 2-3 g/kg 체중의 경구 투여로 계산된다.

내부 상피를 위해 의도되는 용액 (방광내 점적주입액, 정낭 내로의 주입액, 관절강 내로의 도입액, 네뷸라이저 용액) 의 형태로 투여되는 아델미드롤의 양은, 0.5 mg/Kg 체중과 20 mg/Kg 체중 사이의 범위이다.

환자의 나이 및 체중과 처리될 상태의 임상적 중증도에 따라 복용량에서 지속적 변화를 만드는 것이 필요할 수 있음을 고려해야 한다. 마지막으로, 정확한 복용량 및 투여 경로는 치료 의사 또는 수의사의 재량에 달려 있을 것이다.

아델미드롤은 팔미토일에탄올아미드의 옥사졸린 유도체, 항미생물제, 트랜스-트라우마틴산, 및 히알루론산 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 유효 성분과 병용하여 투여될 수 있다.

항미생물제는 바람직하게는 에키나세아 푸르푸레아 (Echinacea purpurea) 추출물, 우스네아 바르바타 (Usnea barbata) 추출물, 우슨산, 피토스핑고신, 브로노폴 및 이들의 혼합물로부터 선택된다.

아델미드롤과 히알루론산 및 트랜스-트라우마틴산의 병용의 경우, 바람직하게는 마지막 2 개의 유효 성분은 나트륨 히알루로네이트 트랜스-트라우마테이트 이중 염 형태로 존재할 것이다.

아델미드롤이 상기에서 정의된 바와 같은 유효 물질과 병용하여 투여될 때, 공동 (즉, 동일 약제학적 제형으로), 별도 또는 순차 투여가 제공될 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 제형은 하기 조성을 중량 기준으로 가지며, 잔량은 유효 성분에 관해서만 상대적이다 (따라서, 담체 및 부형제를 배제함):

아델미드롤 50-100%

PEA 의 옥사졸린 유도체 0-5%

히알루론산 또는 이의 유도체 0-5%

트랜스-트라우마틴산 0-5%

항미생물제 0-1%

아델미드롤에 의한 치료는 (외부 상피 또는 내부 상피에) 국소적이다.

따라서, 본 발명의 제형은 용매, 점성 담체, 점착부여제 (아크릴 폴리머), 완충제, 보존제, 항산화제, 겔화제, 증점제 등과 같은, 약제학적 형태에 따라 선택되는, 약제학적으로 허용가능한 첨가제 및 부형제를 함유할 수 있다.

인간과 수의사 둘 다의 용도에 적합한 약제학적 제형은 바람직하게는 점적주입 용액, 관절낭 중의 함유물을 위한 용액, 내부 또는 외부 용도를 위한 젤, 스프레이 용액, 점안약, 크림, 살베 (salve), 패치 및 연고로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 따르면, 화합물은 또한 직장 제형, 예를 들면, 좌약, 정체 관장제 또는 마이크로-관장제, 예를 들면, 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드와 같은 일반적 좌약의 기본 성분을 함유하는 것들로서 제형화될 수 있다.

상기에서 기재된 제형에 추가하여, 화합물은 또한 침착 제제로서 제형화될 수 있다. 이러한 장기 작용 제형은 이식으로 (예를 들면, 피하로 또는 경피로 또는 근육내 경로로) 투여될 수 있다. 그러므로, 예를 들면, 본 발명에 따른 화합물은 적절한 소수성 또는 폴리머성 물질 (예를 들면, 적합한 오일 중의 유화액의 형태) 또는 이온 교환 수지와 함께 또는 최소 가용성 유도체로서, 예를 들면, 최소 가용성 염으로서 제형화될 수 있다.

상기에서 기재된 제형은 문헌 [Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. Co., N.Y., USA.] 에 기재된 방법과 같은 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

실험 부분

단리된 세포에 대한 시험관 내( In vitro ) 테스트

방법

배양된 인간 각질세포 HaCaT 를 글루타민 (2 mM), 페니실린 (400 U/ml), 스트렙토마이신 (50 mg/ml), 10% FBS (우 태아 혈청) 으로 보충된 DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) 에서 5% CO₂ 의 존재 하에 37℃ 에서 성장시켰다. 이후, 일단 70% 의 밀집도에 도달하면, 6-웰 다중-웰 (9x10⁵/웰) 에 도말된 세포를 5% CO₂ 의 존재 하에 37℃ 에서 24 시간 동안 10 μM 아델미드롤 또는 담체 (대조군, 0.05% 메탄올) 로 자극하였다. 24 시간 후, 10 pmol 의 [²H]₈아난다미드 (AEA) 및 50 pmol 의 [²H]₅2-아라키도노일글리세롤 (2-AG), [²H]₄팔미토일에탄올아미드 (PEA) 및 [²H]₂올레오일에탄올아미드 (OEA) 를 함유하는 5 용적의 클로로포름/메탄올 TRIS-HCl 50 mM pH 7.4 (2:1:1) 용액 중에 균질화하였다 [Bisogno et al., 1997]. 클로로포름에 의한 4번의 추출물로부터 수득된 유기-지질상을, 클로로포름 중의 메탄올의 농도를 증가시킴으로써 용출되는 실리카 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. AEA, 2-AG, PEA 및 OEA 를 함유하는 클로로포름/메탄올 90:10 분획을, 대기압에서 화학적 이온화를 사용하는 질량 분광법 (LC-APCI-MS) 과 결합된 액체 크로마토그래피로 분석하였다 [Marsicano et al., 2002]. 사용된 장비는 Shimadzu APCI 인터페이스를 통해 Shimadzu 분광계 (LCMS-2010) 와 결합된 Shimadzu HPLC (LC-10ADVP) 를 포함한다. 이온화 공급 온도는 400℃ 이고, Phenomenex 역상 HPLC 컬럼 (C-18, 5 마이크론, 150 x 4.6 mm) 을 사용한다. 메탄올/물/아세트산 (85/15/0.1%) 의 혼합물로 이루어진 이동상을 1 ml/분의 속도로 컬럼을 통과시킨다. 선택된 이온 모니터링 (selected ion monitoring: SIM) 에 따라 질량 스펙트럼 측정을 수행한다 [Di Marzo et al. Nature 2001; 410: 822-825]. 선택된 이온은 356 및 348 (중수소화 및 비-중수소화 AEA 의 분자 이온), 384.35 및 379.35 (중수소화 및 비-중수소화 2-AG 의 분자 이온), 304 및 300 (중수소화 및 비-중수소화 PEA 의 분자 이온), 328 및 326 (중수소화 및 비-중수소화 OEA 의 분자 이온) 의 질량/전하 값 (m/z) 에 상응한다. 지질 추출물의 pmol/mg 으로 표현된 양은 ANOVA 에 이어서, Student-Newman-Keuls 테스트를 사용하여 비교하였다.

팔미토일에탄올아미드-분해 효소 (NAAA 및 FAAH) 의 활성의 최대 감소는 또한 래트 뇌막 균질물을 사용하여 측정하였다 [Ueda N et al Chem Phys Lipids. 2000 Nov; 108(1-2): 107-21; Tsuboi K. Et al J Biol Chem. 2005 Mar 25; 280(12): 11082-92]

결과

수득된 결과는 카나비노유사물(cannabinomimetic) PEA의 수준이 기준값 (31.6±5.6) 과 비교하여 10 μM 아델미드롤 (66.4±9.6) 로 자극된 HaCaT 세포에서 현저하게 더 높다는 것을 나타낸다 (도 1 참조).

엔도카나비노이드 (AEA, 2-AG) 및 다른 카나비노유사물 (OEA) 의 수준에서 어떠한 현저한 변화도 관찰되지 않는다 (도 1 참조).

아델미드롤은 PEA (FAAH 및 NAAA) 에 대한 이화 효소의 활성을 억제하지 못한다.

효소 활성의 최대 억제 ( IC ₅₀ 으로 표현)	대조군	50 μM 아델미드롤에 의한 처리
효소 FAAH	21.22±3.18%	20.15±4.12%
효소 NAAA	11.43±1.72%	11.35±2.26%

동물에서의 생체 내( In vivo ) 테스트

나트륨 모노요오도아세테이트에 의해 유도된 골관절염

방법

실험에 사용되기 전에 표준 식이 및 환경 조건 (온도 21±1℃, 습도 60±10%, 하루 빛 12 시간 및 물 및 음식 무제한) 에서 1 주일 동안 울타리에 넣어진, Harlan Italy 에 의해 공급된 Wistar 계통의 성인 수컷 래트 (체중 200-250 g) 를 사용하여 실험을 수행하였다. Kolbhen 에 의해 제안된 방법에 기초하여 우측 무릎의 슬개하 영역에 모노나트륨 요오도아세테이트 (MIA) 를 2 mg/25 μL 의 용량으로 1 회 관절내 주입함으로써 래트에 무릎 골관절염을 유도하였지만, 재주입하였다 (revisited). MIA 는 해당(glycolysis)작용을 억제하고 연골세포의 대사를 파괴하고 연골 변성을 초래함으로써 국소적으로 작용한다. 골관절염의 유도시, MIA 를 멸균 식염수에 용해시켰다. 관절내 투여를 수행하기 전에, 60 mg/kg 의 용량으로 식염수 중에 용해된 펜토바르비탈 나트륨을 0.2 ml/hg 의 복강내 (i.p.) 투여 용적으로 사용하여 래트를 마취시켰다. 우측 무릎에 MIA 주사를 맞은 동물은 골관절염 (OA) 군을 나타낸다. 동일한 우측 무릎에 단지 용매의 관절내 주사를 맞은 제 2 군의 래트는 대신 대조군이다.

통증의 거동 평가

기계적 이질통의 평가

기계적 이질통 (일반적인 무통증 자극에 대한 통증 반응) 의 측정을 위해서, Von Frey 테스트 (Ugo Basile, Varese, Italy) 를 사용하며, 기구는 베이스 Perspex 플랫폼 상에서 이동될 수 있는 촉각 자극기, 상기 베이스 플랫폼 코너에 배치되어 있는 4 개의 컬럼에 의해 지지되는 금속 격자, 동물이 측정 전 적어도 15-30 분 놓여지는 추가로 세분화된 2 개의 격실, 및 전자 마이크로 프로세서로 이루어져 있다. 작동자가 상기 플랫폼 상에서 이동시킬 수 있도록 하는 핸들이 제공된 알루미늄 실린더 내부에 촉각 자극기를 위치시킨다. 실린더 내부에는 실린더 위에 위치하는 0.5 mm 직경의 스틸 필라멘트를 리프팅시키는 전자 방아쇠가 존재하며; 이러한 메커니즘의 활성화 버튼은 핸들의 양측에 위치되어 있다. 필라멘트와 함께, 실린더 위에 위치하는 거울 덕분에, 발바닥 표면의 정확한 지점에 자극을 적용할 수 있고, 발의 움직임을 모니터링할 수 있다. 마이크로프로세서에는 기계적 자극으로부터 앞발의 제거까지의 대기 시간 (초) 및 앞발에 대해 필라멘트에 의해 가해진 힘 (g) 을 보여주는 LCD 디스플레이가 제공되어 있다. 마우스에서의 측정을 위해서, 20 초의 최대 대기 시간 및 5 g 에 상응하는 최대 힘을 설정하였다.

디지털 캘리퍼를 통한 무릎 부종의 평가

MIA 주사 후 동물의 우측 무릎에서 부종의 형성을 평가하기 위해서, 디지털 수동 슬라이드 캘리퍼 (측정 능력 0-150 mm; 해상도: 0.01 mm; ROHS Compliant Electronic Digital Caliper - 2 Biological Instruments SNC, Italy) 를 사용하였다. 슬개골에서 각각의 동물의 좌측 무릎 및 우측 무릎의 직경 (mm 로 표현) 을 평가함으로써 측정을 수동적으로 수행하였다. 부종을 우측 무릎과 좌측 무릎의 용적 차이로서 산출하였다. 데이터를 도 2 에 나타낸다.

생화학적 마커의 평가

척수에서의 종양 괴사 인자 ( TNF -α) 수준의 측정

Biosource International Inc 사로부터의 시판용 키트를 사용하는 ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent-Assay) 면역효소 분석법을 사용하여 윤활액 중 TNF-α 수준을 측정하였다. 상기 방법은 항원이 2 개 층의 항체 사이에 포획되는 절차를 사용하며, 이러한 이유로 인해, 이것은 ELISA 샌드위치로 호칭된다. 샘플 및 비오틴화 항체를, TNF-α 에 대해 특이적인 항체로 코팅된 미세적정 플레이트의 웰에 첨가하고, 제 1 항온처리를 수행하고, 그 동안 샘플 중의 특정 사이토카인은 상기 플레이트 상에 고정된 항체에 의해 노출된 항원 결합 부위와, 용액 중에 존재하는 비오틴화 항체의 부위와 상호작용한다. 일련의 세척으로 미결합 물질을 제거한 후, 비오틴화 항체에 결합하는 스트렙타아비딘 퍼옥시다아제 효소를 첨가한다. 제 2 항온처리 및 미결합 효소를 제거하기 위한 후속적인 세척 후, 기질 (Stabilized Chromogen) 을 함유하는 용액을 첨가한다. 효소 반응에 이은 후, 염색 강도가 분광학적으로 측정되고 샘플 중 TNF-α 의 농도에 직접 비례하는 생성물이 생성된다.

결과

처리

0 일 (T0) 에서의 MIA 의 관절내 투여

1 일, 8 일, 15 일에서의 아델미드롤의 관절내 투여. 3 개의 복용량의 아델미드롤을 채택하였다: 1.5 μg/주사; 15 μg/주사; 및 150 μg/주사.

염증 및 통증 파라미터의 평가

파라미터 자체에 관하여 각종 파라미터를 상이한 시간에서 측정한다 (예를 들면, 염증 파라미터는 첫 주에만 평가되는데, 이는 MIA 통증이 아델미드롤의 투여 전 및 투여 후 60 분에서 평가되기 때문이다).

수득된 결과는 아델미드롤이 강력한 항염증 효과를 가지며, 그 효과는 솔직히 용량-의존적이고 모든 분석 시간에서 분명한 것을 보여준다. 사용된 각각의 복용량에 대한 곡선 아래의 면적을 사용하여 복용량 반응의 평가에 대한 회귀 분석을 수행하였다.

윤활액에서의 생화학적 마커 TNF -α 의 평가

부종에 대한 효과는 윤활액에서 TNF-α 의 수준 감소를 수반한다 (도 3 참조).

인간에서의 생체내 테스트

방광 통증 증후군 (BPS) 을 가진 환자에서의 방광내 점적주입

방법

방광 자체를 완전히 비운 후 카테터를 사용하여, 2% 아델미드롤 및 0.1% 히알루론산 나트륨 염을 함유하는 멸균 용액을 7 명의 여성 환자의 방광에 주입하였다. 모든 환자는 BPS (방광 통증 증후군) 으로 확진되었다. 대부분의 시간에서, 환자들은 다른 골반 질환과 동반질환을 가지고 있었다 (외음부 전정염 4/7; IBS (irritable bowel syndrome: 과민성 대장 증후군) 2/7; 섬유근통 증후군 1/7, 재발성 요로 감염 (Recurrent Urinary Tract Infection: RUTI) 3/7).

공격 요법 (8 주 동안 1 주 당 1 회의 방광내 점적주입) 에 이어서, 유지 요법 (6 개월 동안 1 개월 당 1 회의 점적주입) 으로서 치료를 수행하였다.

전용 일기장을 사용하여, 낮과 밤 동안 배뇨의 빈도 (12 시간 내의 배뇨의 회수로서 측정함) 및 충만한 방광에 의한 불쾌감을 조절하고, 통증, 중량감 및 골반 영역에서의 작열감을 분석하였다 (3개의 모든 파라미터는 치료 전, 공격 요법 말기에서 및 유지 요법의 말기에서 수치 척도 VAS 에 의해 측정하였다).

결과

결과를 하기 표에 나타낸다.

평가된 모든 파라미터는 아델미드롤에 의한 처리 후의 표시된 개선을 나타냈다.

			Pat 01	Pat 02	Pat 03	Pat 04	Pat 05	Pat 06	Pat 07
환자 나이			35세	27세	28세	45세	72세	39세	46세
치료	공격 단계		1 회 점적주입/주 × 8 주	1 회 점적주입/주 × 8 주	1 회 점적주입/주 × 8 주	1 회 점적주입/주 × 8 주	1 회 점적주입/주 × 8 주	1 회 점적주입/주 × 8 주	1 회 점적주입/주 × 8 주
치료	유지 단계		1회 점적주입/월 × 6개월	1회 점적주입/월 × 6개월	1회 점적주입/월 × 6개월	1회 점적주입/월 × 6개월	1회 점적주입/월 × 6개월	1회 점적주입/월 × 6개월	1회 점적주입/월 × 6개월
배뇨 빈도	치료 전	낮	8×	7×	7×	8×	10×	18×	12×
	치료 전	밤	2×	0×	1×	0×	1×	6×	2×
	공격 단계의 말기	낮	6×	6×	6×	7×	7×	7×	7×
	공격 단계의 말기	밤	0×	0×	0×	0×	0×	1×	1×
	유지 단계의 말기	낮	4×	5×	4×	5×	5×	5×	5×
	유지 단계의 말기	밤	0×	0×	0×	0×	0×	0×	0×
충만한 방광에 의한 불쾌감	골반 영역에서의 통증	치료 전	9	10	9	7.5	9	9	8.5
		공격 단계의 말기	4	2	5	2.5	3	3	2
		유지 단계의 말기	3	1	4	2	2	2	1
	골반 영역에서의 중량감	치료 전	6	8	7	7	6	9	9
		공격 단계의 말기	3	1	4	3	4	4	5
		유지 단계의 말기	1	1	2	1	3	2	3
	골반 영역에서의 작열감	치료 전	6	7	6	6	7	9	9
		공격 단계의 말기	3	0	3	3	4	5	5
		유지 단계의 말기	2	0	1	0	2	1	1

제형의 실시예

실시예 1 - 방광내 점적주입을 위한 멸균 용액

각각의 50 ml 의 바이알은 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 1000 mg

- 팔미토일에탄올아미드 옥사졸린 500 mg

- 히알루론산 나트륨 염 50 mg

- 트랜스-트라우마틴산 50 mg

- 증류수 50 ml 까지 필요한 만큼

실시예 2 - 내부 사용을 위한 멸균 접착 방지 젤

500 ml 의 튜브는 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 15,000 mg

- 히알루론산 나트륨 염 2,500 mg

- 비발열성 증류수 500 ml 까지 필요한 만큼

실시예 3 - 직장 사용을 위한 고밀도 용액

10 ml 의 마이크로-관장제는 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 200 mg

- 토코페롤 아세테이트 5,000 mg

- 트란스큐톨 5,000 mg

실시예 4 - 점성 요도내 용액

10 ml 의 단일 복용량의 압착가능한 용기는 하기를 포함한다:

- 아델미드롤 200 mg

- 히알루론산 나트륨 염 10 mg

- 트랜스-트라우마틴산 10 mg

- 피토스핑고신 10 mg

- 우슨산 10 mg

- 폴리비닐 알코올 20 mg

- 노베온 AA1 15 mg

- 비오틴 1 mg

실시예 5 - 관절내 침윤을 위한 멸균 용액

2 ml 의 바이알은 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 30 mg

- 팔미토일에탄올아미드 옥사졸린 15 mg

- 히알루론산 나트륨 염 10 mg

- 포스페이트 버퍼 pH 7.0 2 ml 까지 필요한 만큼

실시예 6 - 수의학적 사용을 위한 신경병증성 항-소양증 스프레이 용액

100 ml 의 스프레이 병은 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 2000 mg

- 피토스핑고신 20 mg

- 트랜스-트라우마틴산 15 mg

- 트란스큐톨 100 ml 까지 필요한 만큼

실시예 7 - 각막 찰과상에 적용하기 위한 점안약

각각의 1 ml 의 단일 복용량의 압착가능한 용기는 하기를 포함한다:

- 아델미드롤 25 mg

- 히알루론산 나트륨 염 2.0 mg

- 트랜스-트라우마틴산 2.5 mg

- 염화나트륨 3.5 mg

- 제 1 인산칼륨 0.5 mg

- 물 1 ml 까지 필요한 만큼

실시예 8 - 구강인두 점막에 적용하기 위한 젤

각각의 250 ml 의 용기는 하기를 포함한다:

- 아델미드롤 6,000 mg

- 팔미토일에탄올아미드 옥사졸린 2,500 mg

- 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 5,000 mg

- 노베온 AA1 500 mg

- 보존제를 첨가한 물 250 ml 까지 필요한 만큼

실시예 9 - 각막 적용을 위한 젤

각각의 10 ml 의 튜브는 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 100 mg

- 히알루론산 나트륨 염 100 mg

- 트랜스-트라우마틴산 10 mg

- 노베온 AA1 100 mg

- 카보머 Ultrez 10 NF 20 mg

- 제 1 인산칼륨 5 mg

- 티메로살 1 mg

- 증류수 10 ml 까지 필요한 만큼

실시예 10 - 에어로졸로 스프레이하기 위한 용액

각각의 5 ml 의 멸균 바이알은 하기를 함유한다:

- 아델미드롤 150 mg

- 증류수 5 ml 까지 필요한 만큼

Claims

인간 또는 동물에서 상피 조직 기능장애의 치료에 사용하기 위한 아델미드롤로서,
상기 아델미드롤은 팔미토일에탄올아미드-분해 FAAH 및 NAAA 효소의 활성을 억제하지 않고 팔미토일에탄올아미드의 내생 수준의 증가를 야기하는 것인 아델미드롤.
청구항 1 에 있어서, 인간 또는 동물에서의 상기 상피 조직 기능장애는 상이한 병인을 가지는 구강인두 및 식도 연하곤란; 위식도 역류; 윤상인두 이완불능증; 식도 이완불능증; 상이한 병인을 가지는 구내염; 노인에서의 연하장애(Presbiphagia); 고양이 치은구내염; 치내요법학/치과교정학 및 치과 임플란트학 수술과 또한 관련된 치주 질환; 구강 작열감 증후군 (Burning Mouth Syndrome: BMS); 안검 부종; 안검염, 안검결막염; 안검의 내향 회전 (안검내반) 및 외번 (안검외반); 상이한 병인을 가지는 각막염 및 각막결막염(keratitoconjunctivitis) (예를 들면, 표층 점상 각막결막염); 상이한 병인을 가지는 각막 병변; 눈물막의 질적-양적 변화; 누낭염; 포도막염; 녹내장; 귀의 귀지샘 질환; 개 및 고양이에서의 귀 혈종; 개 및 고양이에서의 파리 중독 자극(fly strike irritations); 족피부염; 비염, 비기관염(Rhinotracheites), 급성 및 만성 비인두염; 급성 및 만성 인두염; 급성 및 만성 기관지염; 부비동염, 비부비동염(Rinosinusites); 기관지 천식; 탈모증; 개 및 고양이에서의 코 피부병; 급성 및 만성 타액선염(sialadenites); 신경병증성 소양증; 요로상피의 변화에 기인하는 상이한 병인을 가지는 방광 통증 증후군, 특히 간질성 방광염, 전신 화학요법제에 기인하는 방광염, 에피루비신 또는 미토마이신과 같은 국소 화학요법제의 방광 점적주입에 기인하는 방광염, 골반 방사선요법에 기인하는 방광염; 만성 및 / 또는 재발 방광염; 상피의 변화에 기인하는 위장 장애; 항문-직장 분절의 질환, 특히 후방 직장류, 직장염, 점막-직장 탈출증, 치질, 항문 균열, 항문주위 소양증, 개에서의 항문낭 질환 및 기타 회음부 기능장애; 중소 혈관 혈관염, 특히 육아종성 혈관염, 면역 복합체에 기인하는 혈관염; 이차 성선, 특히 정낭 및 정관의 염증; 인간 및 수의학 분야에서의 구강안면 통증 증후군; 류마티스 관절염 및 골관절염과 관련된 윤활막염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 아델미드롤.
청구항 1 또는 청구항 2 에 있어서, 상기 아델미드롤은 팔미토일에탄올아미드의 옥사졸린 유도체, 항미생물제, 트랜스-트라우마틴산, 및 히알루론산 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 유효 성분과 병용하여 조합, 순차 또는 별도 방식으로 투여되는 것인, 아델미드롤.
청구항 3 에 있어서, 상기 항미생물제는 에키나세아 푸르푸레아 (Echinacea purpurea) 추출물, 우스네아 바르바타 (Usnea barbata) 추출물, 우슨산, 피토스핑고신, 브로노폴 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것인, 아델미드롤.
청구항 4 에 있어서, 히알루론산 및 트랜스-트라우마틴산은 나트륨 히알루로네이트 트랜스-트라우마테이트 이중 염 형태로 존재하는 것인, 아델미드롤.
청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 상피에 의도되는 용액의 형태로 투여될 아델미드롤의 양은 0.5 mg/Kg 체중과 20 mg/Kg 체중 사이의 범위인 것인, 아델미드롤.
인간 또는 동물에서 상피 조직 및 점막 조직 기능장애의 치료에서 사용하기 위한 약제학적 제형으로서,
상기 약제학적 제형은 팔미토일에탄올아미드의 옥사졸린 유도체, 항미생물제, 트랜스-트라우마틴산, 및 히알루론산 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 유효 성분 및 아델미드롤을 함유하는 것인 약제학적 제형.
청구항 7 에 있어서, 인간 또는 동물에서의 상기 상피 조직 기능장애는 청구항 2 에서 정의한 바와 같은 것인, 약제학적 제형.
청구항 7 또는 청구항 8 에 있어서, 상기 제형은 하기 중량 조성을 가지며, 잔량은 유효 성분에 대해서만 상대적인 것인, 약제학적 제형:
아델미드롤 50-100%
PEA 의 옥사졸린 유도체 0-5%
히알루론산 또는 이의 유도체 0-5%
트랜스-트라우마틴산 0-5%
항미생물제 0-1%.
청구항 7 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항미생물제는 에키나세아 푸르푸레아(Echinacea purpurea) 추출물, 우스네아 바르바타(Usnea barbata) 추출물, 우슨산, 피토스핑고신, 브로노폴 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것인, 약제학적 제형.
청구항 7 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, 히알루론산 및 트랜스-트라우마틴산은 나트륨 히알루로네이트 트랜스-트라우마테이트 이중 염 형태로 존재하는 것인, 약제학적 제형.
청구항 7 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서, 인간과 동물 둘 다에서 사용하도록 의도되는 국소 적용하기 위한 약제학적 형태 중 아델미드롤의 중량 농도는 0.2% 와 7.0% 사이의 범위이고, 내부 상피에 적용하기 위한 용액 중 아델미드롤의 중량 농도는 0.3% 와 5.0% 사이의 범위인 것인, 약제학적 제형.