KR20150124649A - Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same - Google Patents

Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same Download PDF

Info

Publication number
KR20150124649A
KR20150124649A KR1020140051407A KR20140051407A KR20150124649A KR 20150124649 A KR20150124649 A KR 20150124649A KR 1020140051407 A KR1020140051407 A KR 1020140051407A KR 20140051407 A KR20140051407 A KR 20140051407A KR 20150124649 A KR20150124649 A KR 20150124649A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
oligosaccharide
kochujang
weight
cares
Prior art date
Application number
KR1020140051407A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR101597426B1 (en
Inventor
엄현주
윤향식
송달님
김지원
김상희
노재관
김이기
Original Assignee
충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원) filed Critical 충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원)
Priority to KR1020140051407A priority Critical patent/KR101597426B1/en
Publication of KR20150124649A publication Critical patent/KR20150124649A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101597426B1 publication Critical patent/KR101597426B1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L11/00Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
    • A23L11/70Germinated pulse products, e.g. from soy bean sprouts
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

The present invention relates to a Leuconostoc citreum Cares-1 (microorganism accession No. KACC91931P), and to a red pepper paste comprising the same. The red pepper paste produced by the production method of the present invention includes non-degradable prebiotics and thus exhibits excellent preference and antifungal activities.

Description

신규 류코노스탁 균주 및 상기 균주를 이용한 난분해성 올리고당이 생성되는 고추장 제조방법{Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same}[0001] The present invention relates to a novel koji starch strain and a non-digestive oligosaccharide using the same,

본 발명은 신규 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주(미생물 기탁번호 KACC 91931P) 및 이를 이용하여 항진균 활성이 있고 난분해성 올리고당이 생성되는 고추장을 제조하는 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a novel Leuconostoc citreum Cares-1 strain (microorganism deposit number KACC 91931P) and a method for producing a kochujang in which an antifungal activity and a degradable oligosaccharide are produced using the same.

고추장은 찹쌀 등 전분질, 고춧가루, 메주가루, 소금 등을 혼합하여 발효시킨 우리나라 전통 발효식품이다. 전분질 가수분해로 생성된 당의 단맛, 메주가루의 구수한 맛, 고춧가루의 매운맛, 소금의 짠맛이 잘 조화로운 식품으로 간장 및 된장과 더불어 조미를 목적으로 예로부터 애용되었다. 특히, 고추장의 매운맛 성분인 캡사이신은 식욕 증진 및 소화촉진 작용뿐만 아니라, 조직의 글리코겐 저장량을 감소시켜 비만을 억제하는 능력이 뛰어나 비만으로 야기되는 각종 성인병의 예방에도 효과가 있다. Kochujang is a traditional Korean fermented food which is fermented by mixing starch such as glutinous rice, red pepper powder, meju powder and salt. Sweetness of sugar produced by starch hydrolysis, savory taste of meju powder, spicy taste of red pepper powder and salty taste of salt are well harmonious foods, and they have been used from season for the purpose of seasoning with soy sauce and soybean paste. Especially, capsaicin, which is a hot ingredient of kochujang, is effective not only in improving appetite and promoting digestion but also in preventing various diseases caused by obesity because it has an ability to inhibit obesity by decreasing glycogen storage amount of tissue.

프리바이오틱스(prebiotics)란, 장내의 유용균을 증식시키는 인자로 장내 환경 개선과 사람 등 숙주의 건강 개선에 유의적인 작용을 하는 것으로 올리고당, 식이섬유 및 글루콘산이 있다. 상기 올리고당은 다시 분지올리고당(isomaltooligosaccharides), 갈락토올리고당, 프럭토올리고당 및 대두올리고당 등으로 분류된다.Prebiotics are factors that proliferate the bacillus in the intestines. They are oligosaccharides, dietary fibers and gluconic acid, which have a significant effect on improving the intestinal environment and improving the health of the host such as humans. The oligosaccharides are again classified into isomaltooligosaccharides, galactooligosaccharides, fructooligosaccharides, and soy oligosaccharides.

물엿에도 올리고당이 존재하나 그 구조가 직선 형태의 포도당이 두 개 이상 연결된 것으로, 사람의 가수분해효소로 분해됨으로써 포도당으로 전환되어 에너지원으로 쓰일 수 있다. 그러나 같은 포도당으로 이루어진 분지올리고당은 사람의 가수분해효소로 분해되지 않는다. 대표적으로 판노오스(panose)를 들 수 있다.The oligosaccharide is also present in the starch syrup, but its structure is linked to two or more linear glucose molecules, which can be converted to glucose by decomposition into human hydrolytic enzymes, which can be used as an energy source. However, basal oligosaccharides composed of the same glucose are not degraded by human hydrolytic enzymes. Representative examples include panose.

대한민국 특허등록 제10-1132371호는 바실러스 리케니포미스를 이용한 고추장 제조방법에 대해 개시하고 있다. 그러나 아직까지 미생물을 이용하여 난분해성 올리고당이 생성되는 고추장 제조방법에 대해서는 개시된 바 없다.Korean Patent Registration No. 10-1132371 discloses a process for producing kochujang using Bacillus licheniformis. However, there has not yet been disclosed a production method of kochujang where a degradable oligosaccharide is produced using microorganisms.

이에 본 발명자들은 연구를 계속하여 항진균 활성이 우수하고 난분해성 올리고당이 생성되는 균을 발견하였고 이를 이용하여 고추장을 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors continued their research to find a bacterium having an excellent antifungal activity and producing a deficient oligosaccharide, and by using the bacterium, the present invention was completed.

대한민국 특허등록 제10-1132371호Korean Patent Registration No. 10-1132371

본 발명은 기탁번호 KACC91931P로 수탁된 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주를 제공하기 위한 것이다.The present invention is to provide a Leuconostoc citreum Cares-1 strain deposited with accession number KACC91931P.

본 발명의 다른 목적은 상기 균주를 포함하는 고추장을 제공하기 위한 것이다.Another object of the present invention is to provide a red pepper paste containing the strain.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 균주를 이용한 고추장 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
It is still another object of the present invention to provide a method for manufacturing a kochujang using the strain.

본 발명은 기탁번호 KACC91931P로 수탁된 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주를 제공한다.The present invention provides Leuconostoc citreum Cares-1 strain deposited with accession number KACC91931P.

상기 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주는 난분해성 프리바이오틱 중 하나인 분지형 올리고당 생성 활성 및 항진균 활성을 가지는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 균주는 당전이효소(glucansucase)를 생성함으로써 당전이 반응의 부산물인 과당을 생성하여 단맛을 증진시킨다.The Leuconostoc citreum Cares-1 strain is characterized by having a branched oligosaccharide producing activity and an antifungal activity, which are one of the refractory prebiotics. In addition, the strain produces glucansucase, thereby producing fructose, which is a by-product of the sugar chain reaction, thereby enhancing sweetness.

상기 균주는 난분해성 올리고당 생성 활성을 가진다. 상기 "난분해성 올리고당"이란, 가수분해가 되지 않는 분지형 올리고당을 의미하며 프리바이오틱스의 일종이다. 상기 난분해성 올리고당은 판노오스(panose), 이소말토실 말토오스(isomaltosyl maltose) 및 이소말토트리오실 말토오스(isomaltotriosyl maltose)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나 반드시 이로 제한되는 것은 아니며, 이 기술분야에 널리 알려진 난분해성 올리고당은 모두 포함될 수 있다.The strain has a degradable oligosaccharide producing activity. The term " degradable oligosaccharide "refers to a branched oligosaccharide which is not hydrolyzed and is a kind of prebiotics. The refractory oligosaccharide may be selected from the group consisting of panose, isomaltosyl maltose and isomaltotriosyl maltose, but is not necessarily limited thereto, and may be any of those well known in the art All degradable oligosaccharides can be included.

상기 균주는 항진균 활성을 가진다.
The strain has antifungal activity.

다른 측면에서 본 발명은 상기 균주를 포함하는 고추장을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a red pepper paste containing the strain.

또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 균주를 포함하는 고추장 제조방법을 제공한다. 상기 고추장 제조방법은 이 기술분야에 널리 알려진 고추장 제조방법은 모두 이용할 수 있다. In another aspect, the present invention provides a method of manufacturing a red pepper paste comprising the strain. The kochujang production method can be applied to any of the kochujang production methods well known in the art.

일 구체예로, 찹쌀가루에 상기 균주를 첨가하여 고추장을 제조할 수 있다. In one embodiment, the strain may be added to glutinous rice flour to produce a red pepper paste.

다른 구체예로, 다음의 방법을 이용하여 고추장을 제조할 수 있다:In another embodiment, a red pepper paste may be prepared using the following method:

찹쌀가루를 엿기름물과 혼합하여 상기 찹쌀가루를 당화시키고; Mixing the glutinous rice flour with maltose water to saccharify the glutinous rice flour;

상기 당화된 찹쌀가루에 제 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(미생물 기탁번호 KACC91931P) 균주와 설탕을 첨가하고 혼합하여 혼합물을 얻고;To the saccharified glutinous rice powder was added a strain of Leuconostoc citreum Cares-1 (microorganism deposit number KACC91931P) and sugar and mixed to obtain a mixture;

상기 혼합물을 가열하고; 그리고Heating said mixture; And

상기 가열된 혼합물에 고춧가루, 메주가루 및 소금을 넣고 혼합한 다음 용기에 담아 숙성하는 단계. The hot mixture is mixed with red pepper powder, meju powder, and salt, and then mixed in a container and aged.

상기 고추장은 상기 엿기름물 100 중량부에 대하여, 상기 찹쌀가루 20 내지 70 중량부, 상기 균주 0.0001 내지 1 중량부, 상기 설탕 2 내지 10 중량부, 상기 고춧가루 20 내지 70 중량부, 상기 메주가루 20 내지 70 중량부 및 상기 소금 1 내지 10 중량부를 첨가할 수 있으나, 반드시 이 수치로 한정되는 것은 아니며 이 기술분야에서 허용 가능한 범위 내에서 첨가량을 조절할 수 있다.The kochujang contains 20 to 70 parts by weight of the glutinous rice powder, 0.0001 to 1 part by weight of the strain, 2 to 10 parts by weight of the sugar, 20 to 70 parts by weight of the red pepper powder, 20 to 70 parts by weight of the red pepper powder, And 1 to 10 parts by weight of the salt may be added. However, the amount of the salt is not necessarily limited to this value, and the amount of the additive may be adjusted within a range that is acceptable in the art.

상기 숙성하는 단계에서, 숙성 기간은 1일 내지 90일 수 있으나 이로 제한되는 것은 아니며, 통상의 고추장 숙성 기간은 모두 포함할 수 있다.In the aging step, the aging period may be from 1 day to 90 days, but is not limited thereto, and may include all of the usual duration of the aging of red pepper paste.

상기 고추장은 난분해성 올리고당을 포함할 수 있다. The kochujang may contain a refractory oligosaccharide.

상기 난분해성 올리고당은 판노오스(panose), 이소말토실 말토오스(isomaltosyl maltose) 및 이소말토트리오실 말토오스(isomaltotriosyl maltose)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나 반드시 이로 제한되는 것은 아니며, 이 기술분야에 널리 알려진 난분해성 올리고당은 모두 포함될 수 있다.The refractory oligosaccharide may be selected from the group consisting of panose, isomaltosyl maltose and isomaltotriosyl maltose, but is not necessarily limited thereto, and may be any of those well known in the art All degradable oligosaccharides can be included.

상기 고추장은 항진균 활성을 가질 수 있다.
The kochujang may have antifungal activity.

본 발명에 따른 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주를 이용하여 제조된 고추장은 곰팡이의 생육을 저해하는 항진균 활성이 우수하다. 또한 본 발명에 따른 고추장은 프리바이오틱스의 일종인 난분해성 올리고당을 생성하고 단맛이 좋다.
The kochujang prepared using the Leuconostoc citreum Cares-1 strain according to the present invention is excellent in antifungal activity inhibiting the growth of the fungus. In addition, the kochujang according to the present invention produces refractory oligosaccharide, which is a type of prebiotics, and has a sweet taste.

도 1은 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주(KACC91931P)의 항진균 활성을 나타낸 사진이다:
(A)는 물을 첨가한 대조구이고, (B)는 상기 균주의 상등액을 반으로 희석한 것, 그리고 (C)는 상기 균주의 배양액 원액이다.
도 2는 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주(KACC91931P)를 첨가하여 제조한 고추장의 올리고당 함량을 분석한 결과이다:
std(standard): 당용액, 0.5% Fru + glc : 0.5% 프룩토오스 + 0.5% 글루코오스, 0.5% suc + mal : 0.5% 수크로오스 + 0.5% 말토오스, 0.5% Pan : 0.5% 판노오스,
A(당화액) : 찹쌀가루를 엿기름물로 3 시간 당화시킨 용액,
B, C, D, E, F 및 G: 실시예 2의 표 1에 기재된 실험구-1, 2 및 3의 성분 함량으로 찹쌀가루, 엿기름물 및 설탕과 Cares-1 균주를 첨가한 것(고춧가루, 메주가루 및 소금 무첨가)
H, I, J K 및 L: 실시예 2의 표 1에 기재된 실험구-1, 2 및 3의 성분 함량으로 바로 제조된 고추장
M, N, O P 및 Q: 실시예 2의 표 1에 기재된 실험구-1, 2 및 3의 성분 함량으로 고추장 제조 후 2주 경과된 후의 고추장.
도 3은 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주(KACC91931P)를 첨가하여 제조한 고추장의 올리고당 함량 분석 결과이다:
Suc : 수크로오스, Mal : 말토오스, Pan : 판노오스 DP4 : 이소말토실 말토오스,
(A): 실험구 2의 성분 함량으로 찹쌀가루, 엿기름물 및 설탕과 Cares-1 균주를 첨가한 직후(고춧가루, 메주가루 및 소금 무첨가)
(B): 실험구 2의 성분 함량으로 찹쌀가루, 엿기름물 및 설탕과 Cares-1 균주를 첨가한 후 1일 배양(고춧가루, 메주가루 및 소금 무첨가)
1 is a picture showing the antifungal activity of Leuconostoc citreum Cares-1 strain (KACC91931P)
(A) is a control in which water is added, (B) is a half of the supernatant of the strain, and (C) is a stock solution of the culture.
Figure 2 shows the results of analysis of the oligosaccharide content of kochujang prepared by adding Leuconostoc citreum Cares-1 strain (KACC91931P).
0.5% Fructose + 0.5% glucose, 0.5% suc + mal: 0.5% sucrose + 0.5% maltose, 0.5% Pan: 0.5%
A (saccharified liquid): A solution obtained by saccharifying glutinous rice powder with malt-water for 3 hours,
B, C, D, E, F, and G: The components of Experiments-1, 2 and 3 shown in Table 1 of Example 2 were prepared by adding glutinous rice flour, maltose and sugar and Cares- , Meju powder and no salt)
H, I, JK and L: The red pepper paste prepared directly with the ingredient contents of Experiments -1, 2 and 3 shown in Table 1 of Example 2
M, N, OP and Q: Kochujang after 2 weeks from the production of red pepper paste by the ingredient contents of Experiments -1, 2 and 3 shown in Table 1 of Example 2.
Figure 3 is a graphical representation of leuconostocis citreum ) Cares-1 strain (KACC91931P) were added:
Suc: sucrose, Mal: maltose, Pan: pannocose DP4: isomaltosyl maltose,
(A): Immediately after addition of glutinous rice flour, malt wax, sugar and Cares-1 strain (red pepper powder, meju powder, and no salt)
(B): glutinous rice flour, malt sugar, and Cares-1 were added to Experiment 2, followed by culture for 1 day (red pepper powder, meju powder and no salt)

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 이 기술분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples. However, the following examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. Embodiments of the present invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.

본 발명자들은 엿기름의 가수분해 효소를 이용하여 찹쌀 내 전분질을 최대한 가수분해하여 맥아당으로 전환시켰다. 이후 김치로부터 분리한 고활성 당전이능을 가지는 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1 균주를 첨가하는 동시에, 당전이 반응의 공여체인 설탕을 첨가하여 발효하였다. 그 뒤 메주가루, 고춧가루, 식염 등의 재료를 넣어 숙성시킨 결과, 난분해 프리바이오틱 중 하나인 분지형 올리고당을 포함하고 곰팡이의 생육을 저해하는 항진균 활성을 가질 뿐만 아니라 당전이 반응의 부산물인 과당으로 인해 단맛이 증진된 고추장을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.
The present inventors hydrolyzed the starch in glutinous rice using hydrolytic enzyme of malt to maximize hydrolysis to maltose. Then, Leuconostoc citreum Cares-1 strain having a high activity sugar transfer ability separated from kimchi was added, and sugar, which is a donor of donor reaction, was added and fermented. As a result of the fermentation of meju powder, red pepper powder, salt and other ingredients, it was found that it contains a branched oligosaccharide, which is one of the prebiotics, and has an antifungal activity which inhibits the growth of the fungus. The present inventors have completed the present invention by developing a sweet pepper paste having improved sweetness.

<실시예 1> 균주의 분리 및 동정Example 1 Isolation and Identification of Strain

김치에서 유산균을 분리하기 위해 페닐에탄올 아가(phenlyethanol agar)(Difco co., NJ, USA) 한천배지에 2% 설탕을 첨가한 PES 배지를 제조하고 김치액을 단계별로 희석하여 도말하였다. 여기서 가장 빨리 점질물을 형성한 콜로니들을 탄소원이 설탕만 들어있는 액체배지에 배양하여 DNS 환원당분석을 하였다. 분리한 유산균 중 덱스트란수크레이즈 활성이 우수한 균을 분리하여 "Cares-1"이라 명명하였고 균주의 동정을 위하여 16S rRNA 유전자 염기서열을 이용한 분석법을 사용하였다. 통상적인 16S rRNA 유전자의 증폭은 유니버셜 프라이머[27F:AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG(서열번호 1)/1492R: GGT TAC CTT GTT ACG ACT T(서열번호 2)])를 이용하였고, 염기서열의 분석은 국내 생명공학회사(솔젠트)에 의뢰하여 수행하였다. Cares-1 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열은 서열번호 3에 나타내었다. GenBank 염기서열 데이터베이스를 이용하여 Cares-1의 16S rRNA 염기서열의 상동성(homology)을 분석한 결과 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum)와 가장 높은 일치율(상동성 99.9%)을 보여 본 발명자는 Cares-1 균주를 " 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1"으로 명명하였고, 2014년 1월 23일자로 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁번호 KACC 91931P로 기탁하였다.
In order to separate the lactic acid bacteria from Kimchi, PES medium supplemented with 2% sugar in phenyleethanol agar (Difco co., NJ, USA) agar medium was prepared, and the kimchi liquid was diluted stepwise. Here, colonies that formed the clumps were cultivated in a liquid medium containing only sugar and analyzed by DNS reducing sugar. Among the isolated lactic acid bacteria, the strains having excellent dextran sphaeresis activity were separated and named "Cares-1". For the identification of strains, 16S rRNA gene sequences were used. The amplification of a conventional 16S rRNA gene was performed using a universal primer [27F: AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG (SEQ ID NO: 1) / 1492R: GGT TAC CTT GTT ACG ACT T Was conducted by a domestic biotechnology company (Solgent). The 16S rRNA gene sequence of the Cares-1 strain is shown in SEQ ID NO: 3. The homology of the 16S rRNA sequence of Cares-1 was analyzed using the GenBank sequence database. As a result, the highest concordance (99.9% homology) with Leuconostoc citreum was found. 1 strain was designated as " Leuconostoc citreum Cares-1 &quot;, and deposited with Accession No. KACC 91931P on Jan. 23, 2014 to the National Institute of Agricultural Science and Technology.

<실시예 2> 류코노스톡 시트리움(&Lt; Example 2 > Leuconostoc citreumLeuconostoc citreum ) Cares-1 균주를 이용한 고추장 제조) Production of Kochujang using Cares-1 strain

<2-1> 류코노스톡 시트리움(&Lt; 2-1 > Leuconostocitrium ( Leuconostoc citreumLeuconostoc citreum ) Cares-1 균주 배양) Culture of Cares-1 strain

실시예 1의 균주를 고추장 제조에 이용하기 위하여 MRS 배지(Merck, Darmstadt, Germany)에 전배양 하였다. 24 시간 후, 최종적으로 고추장에 107 CFU/g이 되도록 본 배양액을 준비하여 원심분리하고 염분(saline)으로 셀을세척한 후 다시 원심분리하여 셀만 고추장 제조 시 당화 반응이 끝난 후 첨가하였다.
The strain of Example 1 was pre-cultured in MRS medium (Merck, Darmstadt, Germany) for use in the manufacture of red pepper paste. After 24 hours, the culture was finally prepared to have a concentration of 10 7 CFU / g in kochujang, centrifuged, washed with saline, centrifuged again, and added at the end of the saccharification reaction.

<2-1> 실험구 고추장 제조<2-1> Experimental kochujang production

류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 포함하는 실험구 1, 2 및 3 고추장을 제조하였다. 고추장의 원료 배합비는 하기 표 1과 같다.Kono flow to prepare a stock sheet Solarium (Leuconostoc citreum) Cares-1 experimental group 1, 2 and 3 comprising the (KACC 91931P) strain pepper paste. The raw material blending ratio of kochujang is as shown in Table 1 below.

구체적으로, 고추장 제조 하루 전, 엿기름 150g을 60℃의 물 1.44L에 1 시간 동안 침지한 후 주물러 망에 넣고 걸러 찌꺼기를 버리고 웃물만 사용하였다(엿기름물). 상기 엿기름물 100 중량부에 찹쌀가루 40 중량부를 넣고 골고루 혼합한 후 60℃ 인큐베이터에서 3 시간 동안 가끔 저어주면서 당화시켰다. 이때, 상기 엿기름물 100 중량부에 대하여 5, 10 및 15 중량부의 설탕을 첨가하고 (대조구-2의 경우는 물엿을 10 중량부 첨가) 상기 실시예 1의 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 0.0001 중량부 접종하였다. 이후, 올리고당이 많이 생성되도록 하루 동안 25℃에서 배양하였고, 그뒤 가열하였으며, 거품 내면서 끊기 시작한 후로 5분간 더 가열함으로써 완전히 가열 살균하였다. 살균 후 고춧가루, 메주가루 및 소금을 넣고 혼합하였고 용기에 담아 2개월간 숙성시켰다. 이 과정을 통해 메주가루에 포함된 국균 및 엿기름물이 효소 등에 의하여 당화되고 단백질이 가수분해되어 아미노산이 생성되면서 실험구 고추장이 제조되었다.
Specifically, 150 g of malt was immersed in 1.44 L of water at 60 ° C for 1 hour, and then put into a sieve net, and the sludge was discarded, and only the sludge was used (malt waters). 40 parts by weight of glutinous rice powder was added to 100 parts by weight of the above maltooligosaccharide, mixed evenly, and saccharified by occasionally stirring for 3 hours at 60 ° C in an incubator. At this time, 5, 10 and 15 parts by weight of sugar were added to 100 parts by weight of the malt (in the case of Control-2, 10 parts by weight of starch syrup was added), and the mixture of Leuconostoc citreum Cares -1 (KACC 91931P) was inoculated 0.0001 part by weight. Thereafter, the cells were incubated at 25 ° C. for one day to produce a large amount of oligosaccharide. Then, the cells were heated and then completely heat-sterilized by heating for 5 minutes after starting to bubble. After sterilization, red pepper powder, meju powder and salt were added and mixed. The mixture was aged for 2 months. Through this process, kerosine and fermented water contained in meju powder were saccharified by enzymes, and protein was hydrolyzed to produce amino acid.

 성분ingredient 대조구-1Control-1 대조구-2Control-2 실험구-1Experiment group -1 실험구-2Experiment 2 실험구-3Experiment 3 찹쌀가루Glutinous rice flour 4040 4040 4040 4040 4040 엿기름물Malt 100100 100100 100100 100100 100100 고춧가루chili powder 3030 3030 3030 3030 3030 메주가루Meju flour 1010 1010 1010 1010 1010 소금Salt 1515 1515 1515 1515 1515 물엿corn syrup 00 1010 00 00 00 설탕Sugar 00 00 55 1010 1515 Cares-1 균주Cares-1 strain 00 00 0.00010.0001 0.00010.0001 0.00010.0001

(단위: 중량부)
(Unit: parts by weight)

<2-3> 대조구 고추장 제조<2-3> Preparation of Controlled Kochujang

실험구와 비교 실험하기 위하여 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 포함하지 않는 대조구 1 및 2의 고추장을 제조하였다. 고추장의 원료 배합비는 상기 표 1과 같고 고추장 제조방법은 실시예 2-1과 같다. 이 때, 실험구와 비교 실험하기 위하여 일반적으로 고추장 제조 시 첨가하는 물엿을 첨가하지 않았으며, 또한 설탕과 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주로 인한 효과를 알아보고자 설탕, 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 첨가하지 않았다. 이후, 하루 동안 25℃에서 배양하고 가열하였으며, 거품 내면서 끊기 시작한 후로 5분간 더 가열함으로써 완전히 가열 살균하였다. 살균 후 고춧가루, 메줏가루, 소금을 넣고 혼합하였고 용기에 담아 2개월간 숙성시켰다. 이 과정을 통해 메주가루에 포함된 국균 및 엿기름물이 효소 등에 의하여 당화되고 단백질이 가수분해되어 아미노산이 생성되면서 대조구 고추장이 제조되었다.
For comparison with experimental groups, control 1 and 2 kochujangs without Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) strain were prepared. The raw material blending ratio of the kochujang is as shown in Table 1, and the kochujang preparation method is the same as that in Example 2-1. To investigate the effect of sugar and leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) strain in the production of koji paste, , And Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) were not added. Then, it was incubated at 25 캜 for one day, heated, completely heat-sterilized by heating for 5 minutes after starting to bubble out. After sterilization, red pepper powder, fermented powder and salt were added and mixed. The mixture was aged for 2 months. Through this process, the kerosine and malt waters contained in Meju flour were glycosylated by enzymes and the protein was hydrolyzed to produce amino acids, and the control kojujang was prepared.

<실험예 1> 제조한 고추장의 pH 및 총산 분석<Experimental Example 1> pH and total acid analysis of the prepared kochujang

제조한 고추장의 pH 및 총산을 분석하기 위하여, 고추장 시료 5g를 채취하여 45 mL 증류수에 넣어 교반하고 8000 rpm에서 15분간 원심분리한 후 여과함으로써 추출 시료를 준비하였다. pH는 추출 시료 10 mL을 취하여 pH 미터(Sartorius, Goettingen, Germany)로 측정하였고, 총산은 추출 시료 10 mL에 1% 페놀프탈레인 2~3 방울을 첨가하고 0.1N 수산화나트륨으로 미홍색(pH 8.2~8.3)이 될 때까지 적정하였다. 적정에 소비된 수산화나트륨 소비량은 젖산에 상당하는 유기산 계수를 이용하여 총산으로 환산하여 나타내었다. In order to analyze the pH and total acid content of the prepared kochujang, 5 g of kochujang sample was collected, mixed with 45 mL of distilled water, stirred, centrifuged at 8000 rpm for 15 minutes, and then filtered to prepare an extraction sample. The pH was measured with a pH meter (Sartorius, Goettingen, Germany) by taking 10 mL of the extracted sample, and 2 ~ 3 drops of 1% phenolphthalein was added to 10 mL of the extracted sample. ). The consumption of sodium hydroxide consumed in titration was expressed as total acid by using the organic acid coefficient corresponding to lactic acid.

그 결과, pH의 경우 하기 표 2와 같이 모든 고추장에서 낮았다. 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 첨가한 실험구 1, 2 및 3은 더 낮은 pH 경향을 나타내었으나, 대조구와 비교 시 큰 차이는 확인할 수 없었다.
As a result, the pH was lower in all of the red pepper paste as shown in Table 2 below. Experimental groups 1, 2 and 3 with Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) showed lower pH tendency, but no significant difference was observed in comparison with the control.

발효기간Fermentation period 대조구-1 Control-1 대조구-2Control-2 실험구-1Experiment group -1 실험구-2Experiment 2 실험구-3Experiment 3 0주0 weeks 4.564.56 4.594.59 4.274.27 4.284.28 4.304.30 2주2 weeks 4.624.62 4.674.67 4.404.40 4.434.43 4.454.45 4주4 weeks 4.644.64 4.684.68 4.414.41 4.424.42 4.454.45 8주8 weeks 4.304.30 4.324.32 4.114.11 4.124.12 4.164.16

또한, 총산의 경우 하기 표 3과 같이 모든 고추장의 총산은 발효 기간이 지날수록 꾸준히 증가하였다. 유산균을 첨가한 실험구 1, 2 및 3은 약간 높은 총산 경향을 나타내었으며 특히, 실험구 1의 경우 반복되는 실험에서 가장 높은 총산 함량을 나타내었다.
As shown in Table 3 below, the total acid content of all the kochujangs increased steadily after the fermentation period. Experimental groups 1, 2 and 3 with lactic acid bacteria showed slightly higher total acidity, and in Experiment 1, the highest total acid content was shown in repeated experiments.

발효기간Fermentation period 대조구-1 Control-1 대조구-2Control-2 실험구-1Experiment group -1 실험구-2Experiment 2 실험구-3Experiment 3 0주0 weeks 0.480.48 0.460.46 0.600.60 0.590.59 0.550.55 2주2 weeks 0.520.52 0.450.45 0.640.64 0.600.60 0.560.56 4주4 weeks 0.510.51 0.480.48 0.630.63 0.610.61 0.580.58 8주8 weeks 0.540.54 0.600.60 0.720.72 0.710.71 0.710.71

(단위: %)
(unit: %)

<실험예 2> 제조한 고추장의 미생물 분석<Experimental Example 2> Microbial analysis of the prepared kochujang

제조한 고추장의 일반세균수를 측정하기 위하여, 추출 시료를 0.85% 멸균 생리식염수에 단계적으로 희석하여 플레이트 카운트 아가 배지(Difco, Sparks, MD, USA)에 도말하여 37 ℃에서 24시간 동안 배양한 후, 결과를 계수하였다. In order to measure the number of general bacteria in the prepared kochujang, the extracted sample was gradually diluted with 0.85% sterilized physiological saline, plated on a plate count agar medium (Difco, Sparks, MD, USA) and cultured at 37 ° C for 24 hours , And the results were counted.

곰팡이의 형성은 육안으로 관찰함과 동시에 10배 연속희석법으로 희석한 시료를 효모 및 곰팡이 카운트 플레이트(3M 페트리필름)에 도말하여 30℃에서 48시간 동안 배양한 후, 나타난 콜로니 수를 계수하였다. Formation of the mold was visualized and at the same time, a sample diluted by 10 times serial dilution was applied to a yeast and mold count plate (3M Petri film) and incubated at 30 ° C for 48 hours, and the number of colonies counted.

그 결과, 일반 세균의 경우 하기 표 4와 같이 0주부터 12주까지 모든 처리구에서 대체적으로 8 log CFU/1g의 값을 나타내어 대조구와 처리구 사이에 큰 차이는 없었으며, 세 달 동안 일반 세균의 수는 크게 증가하지 않았다.
As a result, general bacteria showed 8 log CFU / 1g value in all treatments from 0 to 12 weeks as shown in Table 4 below. There was no significant difference between the control and the treatments, and the number of general bacteria Did not increase significantly.

발효기간Fermentation period 대조구-1 Control-1 대조구-2Control-2 실험구-1Experiment group -1 실험구-2Experiment 2 실험구-3Experiment 3 0주0 weeks 8.448.44 8.048.04 8.458.45 7.977.97 8.138.13 2주2 weeks 8.108.10 8.138.13 8.128.12 8.068.06 8.028.02 4주4 weeks 8.058.05 8.188.18 8.438.43 8.008.00 8.018.01 8주8 weeks 8.508.50 8.548.54 8.408.40 8.398.39 8.378.37 12주12 weeks 8.968.96 8.968.96 8.508.50 8.548.54 8.638.63

(단위: log CFU/1g 고추장)
(Unit: log CFU / 1 g hot pepper paste)

그러나, 곰팡이의 경우 대조구와 실험구 사이에 큰 차이를 나타내었다. 하기 표 5와 같이 대조구 1과 2의 경우 8주간은 곰팡이의 수가 감소하였으나 이후에는 증가하였다. 반면, 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 첨가한 실험구 1, 2 및 3은 4주간은 곰팡이의 수가 감소하고 8주와 12주가 지난 시점에는 증가하였으나, 대조구와 비교하였을 때 약 2 log 이상 감소하는 것으로 확인되었다. 이는 본 고추장 제조 시 첨가한 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주의 항진균 활성에 의한 것으로 생각된다. 더욱 정밀한 실험을 위하여 이하 실험예 3에서 공시 곰팡이를 이용하여 항진균 실험을 수행하였다.
However, there was a large difference between the control and experimental groups in molds. As shown in Table 5 below, the number of fungi in the control 1 and 2 decreased for 8 weeks, but then increased. On the other hand, Experiments 1, 2 and 3 in which Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) was added showed a decrease in the number of fungi during 4 weeks and increased at 8 and 12 weeks, , It was confirmed that it decreased by about 2 log or more. This is thought to be due to the antifungal activity of Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) added in the production of the present koji. For more precise experiment, the experiment of the fungus was carried out using the fungus in Experimental Example 3 below.

발효기간Fermentation period 대조구-1 Control-1 대조구-2Control-2 실험구-1Experiment group -1 실험구-2Experiment 2 실험구-3Experiment 3 0주0 weeks 6.366.36 6.26.2 6.16.1 66 6.46.4 2주2 weeks 4.464.46 4.534.53 3.913.91 3.833.83 3.893.89 4주4 weeks 4.44.4 4.784.78 3.853.85 3.723.72 3.863.86 8주8 weeks 5.295.29 5.255.25 3.833.83 3.923.92 3.883.88 12주12 weeks 6.266.26 5.165.16 3.783.78 3.93.9 4.014.01

(단위: 단위: log CFU/1g 고추장)
(Unit: unit: log CFU / 1 g hot pepper paste)

<실험예 3> 제조한 고추장의 항진균 활성 분석<Experimental Example 3> Analysis of antifungal activity of the prepared kochujang

제조한 고추장의 항진균 활성을 조사하기 위하여, 곰팡이 2 종에 대한 확산 한천법(paper disk method)를 이용하였다. 항진균 스펙트럼 실험에 사용한 미생물은 아스퍼질러스 오크라세우스(Aspergillus ochraceus)(KACC41810)과 클라도스포리움 고시피콜라(Cladosporium gossypiicola)(KACC43795)로서 토양, 된장, 메주 등에서 분리된다고 보고된 바 있다. 상기 두 종의 감수성 곰팡이는 맥아 추출물 아가(malt extract agar, MEA) 또는 감자 포도당 아가(potato dextrose agar, PDA) 평판배지에 1×106 CFU/mL로 도말하였다. 확산 한천법은 감수성 균주가 도말된 평판배지 위에 8mm 직경의 한천(Advantec, Toyo Roshi Kaisha, Ltd., Japan)를 놓고 항균물질을 100uL씩 일정하게 가한 뒤, 25℃에서 24 ~ 72시간 동안 배양하여 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주 및 추출 시료의 항진균 활성을 측정하였다. 항진균 활성은 다이아메틱 캘리퍼(diamatic caliper)(CD-15CPX, Mitutoyo, Japan)를 사용하여 생육저지환의 지름을 계측함으로써 분석하였다.To investigate the antifungal activity of the prepared kochujang, a diffusion disk method was used for two fungi. Microorganisms used in the antifungal spectrum experiments have been reported to be isolated from soil, soybean paste, and meju as Aspergillus ochraceus (KACC41810) and Cladosporium gossypiicola (KACC43795). The two species of susceptible fungi were plated on malt extract agar (MEA) or potato dextrose agar (PDA) plate medium at 1 × 10 6 CFU / mL. In the diffusion agar method, agar (8 ml) agar (Advantec, Toyo Roshi Kaisha, Ltd., Japan) was placed on a flat plate culture medium on which susceptible strains were plated, 100 μl of antimicrobial material was uniformly added, and cultured at 25 ° C. for 24 to 72 hours Antifungal activity of Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) strain and extracted samples was measured. Antifungal activity was analyzed by measuring diameters of growth inhibition rings using a diamatic caliper (CD-15CPX, Mitutoyo, Japan).

그 결과, 도 1과 같이 상등액과 희석액에서부터 항진균 활성을 나타내었으며 특히 아스퍼질러스 오크라세우스(Aspergillus ochraceus)(KACC41810)에 대하여 높은 항진균 활성을 나타내었다(도 1의 (B) 및 (C)). 또한, 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 첨가하여 제조한 고추장도 동일한 결과를 나타내었다.
As a result, the antifungal activity was shown from the supernatant and the diluted solution as shown in FIG. 1, and the antifungal activity was high especially against Aspergillus ochraceus (KACC41810) (FIGS. 1B and 1C) . Also, the same results were obtained with the addition of Kochujang prepared by adding Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) strain.

<실험예 4> 제조한 고추장의 올리고당 분석<Experimental Example 4> Oligosaccharide analysis of the prepared kochujang

제조한 고추장의 올리고당 함량을 분석하기 위하여 박층크로마토그라피(Thin layer chromatography, TLC) 분석을 수행하였다. 찹쌀가루가 당화된 시료에 설탕)과 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 접종하여 실시예 1과 동일한 방법으로 고추장을 제조하였다. 0주 및 2주 뒤 고추장으로부터 추출 시료를 수득하고 5배 희석한 추출 시료 1uL를 머크 K5 박층크로마토그라피 플레이트(Merck K5 TLC plate)에 점적하고 에틸아세테이트 : 아세트산 : 증류수 = 2:1:1(V/V/V)가 충분히 포화되어 있는 전개조에서 1번 전개하였다. 분리된 당의 성분은 메탄올에 0.5% 알파 나프톨(α-naphthol)(w/v)과 5% 황산(v/v)을 함유한 시약으로 발색한 후 110℃에서 10분간 건조하였다. Thin layer chromatography (TLC) analysis was performed to analyze the oligosaccharide content of the prepared kochujang. (KACC 91931P) and Leuconostoc citreum (KACC 91931P) were inoculated in a sample of glutinous rice flour obtained in Example 1, and a kochujang was prepared in the same manner as in Example 1. After 0 and 2 weeks, extracted samples were taken from Kochujang and 1 μL of 5-fold diluted extract samples were spotted on Merck K5 thin layer chromatography plate (Merck K5 TLC plate) and eluted with ethyl acetate: acetic acid: distilled water = 2: 1: 1 / V / V) was sufficiently saturated. The separated sugar components were developed with methanol containing 0.5% α-naphthol (w / v) and 5% sulfuric acid (v / v) and dried at 110 ° C. for 10 minutes.

그 결과, 도 2에서와 같이 찹쌀가루의 전분은 엿기름에 의해 대부분 맥아당(글루코오스 2분자) 형태로 가수분해됨을 알 수 있었고, 설탕과 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 첨가한 실험구의 경우 판노오스 올리고당을 가장 많이 생성하였으며, 다른 다양한 올리고당 또한 생성하였음을 확인하였다. As a result, as shown in FIG. 2, starch of glutinous rice powder was hydrolyzed in the form of maltose (two molecules of glucose) by malt, and sugar and Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) In the case of the strain added with strain, it was confirmed that pancoose oligosaccharide was most produced and various oligosaccharides were also produced.

제조 후 5배 희석한 고추장을 분석한 결과, 대조구 1 및 2에서는 곰팡이에 의해 가수분해된 물질이 존재하는 것으로 확인하였으나 그 양이 미비하였고, 실험구 고추장에서는 다량의 난분해 올리고당, 즉 판노오스를 비롯한 이소말토실 말토오스(isomaltosyl maltose, DP(중합도(degrees of polymerization, DP))4), 이소말토트리오실 말토오스(isomaltotriosyl maltose, DP5)가 생성되었음을 확인하였다. Analysis of 5 times diluted kochujang after the preparation showed that the substances hydrolyzed by the fungi existed in the control 1 and 2, but the amount thereof was insufficient. In the experimental kochujang, a large amount of oligosaccharide, It was confirmed that isomaltosyl maltose (DP) (degree of polymerization (DP)) 4) and isomaltotriosyl maltose (DP5) were produced.

더욱 정밀한 올리고당 정량 분석을 위하여, 카보팩 PA-1(CarboPac PA-1) 칼럼(Dionex)을 이용하여 이온교환 고속 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography, HPLC)(HPIC, Dionex corp.)를 수행하였다. 칼럼을 150 mM 수산화나트륨 용액으로 채운 후 전처리한 시료 50 ㎕를 1 ㎖/분의 속도로 흘리고, GP40 농도구배 펌프(Dionex)를 이용하여 150mM 수산화나트륨용액으로 농도구배된 600mM 나트륨-아세테이트 용액으로 칼럼을 세척하였다. 칼럼으로부터 분리된 당은 전기화학검출기(Electrochemical Detector, ED) 40을 이용하여 분석하였고, 정석 및 정량 분석을 위해 기기에 설치된 크로메이트 윈도우(Chromate Window) v.3.0(인터페이스 엔지니어링) 프로그램을 이용하였다.For more precise oligosaccharide quantitative analysis, high performance liquid chromatography (HPLC) (HPIC, Dionex Corp.) was performed using a CarboPac PA-1 column (Dionex) . The column was filled with 150 mM sodium hydroxide solution, and 50 μl of the pretreated sample was flowed at a rate of 1 ml / min. Using a GP40 concentration gradient pump (Dionex), a 600 mM sodium- Lt; / RTI &gt; The sugar separated from the column was analyzed using an electrochemical detector (ED) 40, and Chromate Window v.3.0 (Interface Engineering) program installed in the apparatus was used for crystallization and quantitative analysis.

그 결과, 맥아당 형태 가수분해 당화액에 설탕과 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주를 첨가 시, 발효 전에는 설탕과 맥아당이 검출되었으나, 판노오스 등 이소말토올리고당은 생성되지 않았다(도 3, (A)). 그러나, 발효가 진행됨에 따라 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주가 생성하는 효소에 의해 설탕이 가수분해되어 맥아당으로 전이하고 지속적으로 DP3, DP4의 이소말토올리고당이 생성됨을 확인하였다(도 3, (B)).
As a result, when sucrose and Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) were added to the maltose-form hydrolyzate, sugar and maltose were detected before fermentation, but isomaltooligosaccharide (Fig. 3, (A)). However, as the fermentation progresses, the sugar is hydrolyzed by the enzyme produced by the Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) strain and transformed into maltose and continuously produced isomaltooligosaccharides of DP3 and DP4 (Fig. 3, (B)).

<실험예 5> 제조한 고추장의 아미노태 질소 분석<Experimental Example 5> Amino nitrogen analysis of prepared kochujang

제조한 고추장의 아미노태 질소를 분석하기 위하여, 추출 시료를 5배 희석하여 실험에 사용하였다. 시료 5 mL, 중성 포르말린 용액 10 mL, 증류수 10 mL을 넣은 플라스크에 0.5% 페놀프탈레인 용액을 2 ~ 3 방울 가한 후, 0.05 N 수산화나트륨으로 미홍색이 될 때까지의 적정량과 시료 5mL, 증류수 20mL을 넣은 플라스크에 0.5% 페놀프탈레인 용액을 2~3방울 가한 후, 0.05 N 수산화나트륨으로 미홍색이 될 때까지의 적정량을 이용하여 아미노태 질소 함량을 산출하였다. In order to analyze the amino nitrogen of the prepared kochujang, the extracted samples were diluted five times and used in the experiment. Add 2 to 3 drops of 0.5% phenolphthalein solution to 5 mL of sample, 10 mL of neutral formalin solution and 10 mL of distilled water, add 5 mL of sample and 20 mL of distilled water to 0.05 mL of sodium hydroxide. After 2 ~ 3 drops of a 0.5% phenolphthalein solution was added to the flask, the amino nitrogen content was calculated using an appropriate amount from 0.05 N sodium hydroxide to a deep red color.

그 결과, 하기 표 6에서와 같이 발효 후 4주까지는 대조구 1 및 2의 아미노태 질소 함량이 실험구들에 비해 높았으나, 8주에서는 실험구에서 높은 아미노태 질소 함량을 나타내었다.
As a result, as shown in Table 6, the amino nitrogen content of the control 1 and 2 was higher than that of the experimental groups at the 4th week after fermentation, but the amino nitrogen content at the 8th week was higher in the experimental group.

발효기간Fermentation period 대조구-1 Control-1 대조구-2Control-2 실험구-1Experiment group -1 실험구-2Experiment 2 실험구-3Experiment 3 0주0 weeks 120.87120.87 140.00140.00 118.07118.07 110.60110.60 115.73115.73 2주2 weeks 164.73164.73 140.47140.47 132.29132.29 120.87120.87 134.40134.40 4주4 weeks 132.07132.07 122.27122.27 122.73122.73 152.13152.13 147.47147.47 8주8 weeks 143.27143.27 159.60159.60 182.93182.93 185.27185.27 174.07174.07

<실험예 7> 고추장의 관능 검사 및 통계 분석<Experimental Example 7> Sensory evaluation and statistical analysis of kochujang

고추장의 관능 검사를 위하여, 피험자 8명을 대상으로 색, 향, 단맛, 짠맛, 매운맛, 전반적인 기호도를 1점에서 9점까지 9점 기호도 척도법을 이용하여 검사하였다. 모든 실험은 3회 이상 반복하였고, 통계 분석 시스템(v8.1, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) 프로그램을 이용하여 통계 분석하였으며, 결과의 유의성을 검정하기 위하여 분산분석(analysis of variance, ANOVA)을 행한 후 시료 간 차이의 유무를 던컨의 다중검정법(Duncan's multiple range test)으로 비교하였다(p < 0.05).For the sensory evaluation of kochujang, color, flavor, sweetness, salty taste, hot taste, and general preference were examined by using 9 point likelihood scale method from 1 point to 9 point. Statistical analysis was performed using a statistical analysis system (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Statistical analysis was performed to determine the significance of the results. Analysis of variance, ANOVA) and the presence or absence of differences between samples was compared using Duncan's multiple range test (p <0.05).

그 결과, 하기 표 7에서와 같이 고추장의 색은 대조구 2와 실험구 2 고추장이, 향은 대조구 1, 단맛은 실험구 2가 우수하다고 평가되었으며, 마지막으로 전반적인 기호도는 실험구 2 고추장이 가장 우수하다고 평가되었다. 따라서 아미노태 질소 함량, 항산화성 그리고 기호도 등을 고려할 때, 당화액에 류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(KACC 91931P) 균주와 설탕을 첨가한 실험구 2 고추장을 제조하는 것이 가장 우수한 것으로 나타났다.
As a result, as shown in Table 7, the color of the kochujang was evaluated to be excellent in the control 2 and the kochujang 2 in the experimental group, the fragrance in the control 1 and the sweetness in the experimental 2, Respectively. Therefore, considering the amino acid nitrogen content, antioxidant properties and preference, it is best to prepare 2 kochujang prepared by adding Leuconostoc citreum Cares-1 (KACC 91931P) and sugar to the saccharification solution. Respectively.

처리구Treatment color incense 단맛sweetness 짠맛Salty taste 매운맛Hot 전반적인기호도Overall likelihood 대조구-1Control-1 6.33b6.33b 7.00a7.00a 5.67d5.67d 5.50c5.50c 5.67c5.67c 5.67c5.67c 대조구-2Control-2 6.83a6.83a 6.83a6.83a 6.33c6.33c 6.50b6.50b 6.50b6.50b 6.50b6.50b 실험구-1Experiment group -1 6.33b6.33b 6.17b6.17b 6.50b6.50b 6.33b6.33b 6.33b6.33b 6.67b6.67b 실험구-2Experiment 2 6.67a6.67a 6.00b6.00b 7.00a7.00a 7.00a7.00a 7.00a7.00a 7.33a7.33a 실험구-3Experiment 3 6.33b6.33b 5.67c5.67c 6.67b6.67b 6.17b6.17b 6.33b6.33b 6.50b6.50b

국립농업과학원 농업유전자원센터National Institute of Agricultural Science KACC91931PKACC91931P 2014012320140123

<110> Chungdheongbuk-do <120> Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same <130> P14G10D0216 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer <400> 1 aaaaa 5 <210> 2 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer <400> 2 ttttt 5 <210> 3 <211> 1432 <212> DNA <213> Leuconostoc citreum <400> 3 atacatgcaa gtcgaacgcg cagcgagagg tgcttgcacc tttcaagcga gtggcgaacg 60 ggtgagtaac acgtggataa cctgcctcaa ggctggggat aacatttgga aacagatgct 120 aataccgaat aaaacttagt atcgcatgat atcaagttaa aaggcgctac ggcgtcacct 180 agagatggat ccgcggtgca ttagttagtt ggtggggtaa aggcttacca agacaatgat 240 gcatagccga gttgagagac tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct 300 acgggaggct gcagtaggga atcttccaca atgggcgcaa gcctgatgga gcaacgccgc 360 gtgtgtgatg aaggctttcg ggtcgtaaag cactgttgta tgggaagaaa tgctaaaata 420 gggaatgatt ttagtttgac ggtaccatac cagaaaggga cggctaaata cgtgccagca 480 gccgcggtaa tacgtatgtc ccgagcgtta tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca 540 gacggttgat taagtctgat gtgaaagccc ggagctcaac tccggaatgg cattggaaac 600 tggttaactt gagtgttgta gaggtaagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag 660 atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gcttactgga caacaactga cgttgaggct 720 cgaaagtgtg ggtagcaaac aggattagat accctggtag tccacaccgt aaacgatgaa 780 tactaggtgt taggaggttt ccgcctctta gtgccgaagc taacgcatta agtattccgc 840 ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg 900 tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccttt 960 gaagctttta gagatagaag tgttctcttc ggagacaaag tgacaggtgg tgcatggtcg 1020 tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttattgt 1080 tagttgccag cattcagttg ggcactctag cgagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg 1140 cggggacgac gtcagatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg 1200 cgtatacaac gagttgccaa cctgcgaagg tgagctaatc tcttaaagta cgtctcagtt 1260 cggactgcag tctgcaactc gactgcacga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1320 acgccgcggt gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagttt 1380 gtaatgccca aagccggtgg cctaaccttc gggagggagc cgtctaagtc ag 1432 <110> Chungdheongbuk-do <120> Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste          with non-digestive oligosaccharide using the same <130> P14G10D0216 <160> 3 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer <400> 1 aaaaa 5 <210> 2 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer <400> 2 ttttt 5 <210> 3 <211> 1432 <212> DNA <213> Leuconostoc citreum <400> 3 atacatgcaa gtcgaacgcg cagcgagagg tgcttgcacc tttcaagcga gtgggagaacg 60 ggtgagtaac acgtggataa cctgcctcaa ggctggggat aacatttgga aacagatgct 120 aataccgaat aaaacttagt atcgcatgat atcaagttaa aaggcgctac ggcgtcacct 180 agagatggat ccgcggtgca ttagttagtt ggtggggtaa aggcttacca agacaatgat 240 gcatagccga gttgagagac tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct 300 acgggaggct gcagtaggga atcttccaca atgggcgcaa gcctgatgga gcaacgccgc 360 gtgtgtgatg aaggctttcg ggtcgtaaag cactgttgta tgggaagaaa tgctaaaata 420 gggaatgatt ttagtttgac ggtaccatac cagaaaggga cggctaaata cgtgccagca 480 gccgcggtaa tacgtatgtc ccgagcgtta tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca 540 gacggttgat taagtctgat gtgaaagccc ggagctcaac tccggaatgg cattggaaac 600 tggttaactt gagtgttgta gaggtaagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag 660 atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gcttactgga caacaactga cgttgaggct 720 cgaaagtgtg ggtagcaaac aggattagat accctggtag tccacaccgt aaacgatgaa 780 tactaggtgt taggaggttt ccgcctctta gtgccgaagc taacgcatta agtattccgc 840 ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg 900 tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccttt 960 gaagctttta gagatagaag tgttctcttc ggagacaaag tgacaggtgg tgcatggtcg 1020 tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttattgt 1080 tagttgccag cattcagttg ggcactctag cgagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg 1140 cggggacgac gtcagatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg 1200 cgtatacaac gagttgccaa cctgcgaagg tgagctaatc tcttaaagta cgtctcagtt 1260 cggactgcag tctgcaactc gactgcacga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1320 acgccgcggt gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagttt 1380 gtaatgccca aagccggtgg cctaaccttc gggagggagc cgtctaagtc ag 1432

Claims (11)

류코노스톡 시트리움(Leuconostoc citreum) Cares-1(미생물 기탁번호 KACC91931P) 균주.
Leuconostoc citreum Cares-1 (microorganism deposit number KACC91931P) strain.
제 1항에 있어서, 상기 균주는 난분해성 올리고당 생성 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 균주.
The strain according to claim 1, wherein the strain has a degradable oligosaccharide-forming activity.
제 2항에 있어서, 상기 난분해성 올리고당은 판노오스(panose), 이소말토실 말토오스(isomaltosyl maltose) 및 이소말토트리오실 말토오스(isomaltotriosyl maltose)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 균주.
The strain according to claim 2, wherein the refractory oligosaccharide is selected from the group consisting of panose, isomaltosyl maltose and isomaltotriosyl maltose.
제 1항에 있어서, 상기 균주는 항진균 활성을 가지는 것을 특징으로 균주.
The strain according to claim 1, wherein the strain has an antifungal activity.
제 1항의 균주를 포함하는 고추장.
A red pepper paste containing the strain of claim 1.
찹쌀가루에 제1항의 균주를 첨가하는 단계를 포함하는 고추장 제조방법.
And adding the strain of claim 1 to glutinous rice flour.
찹쌀가루를 엿기름물과 혼합하여 상기 찹쌀가루를 당화시키고;
상기 당화된 찹쌀가루에 제 1항의 균주와 설탕을 첨가하고 혼합하여 혼합물을 얻고;
상기 혼합물을 가열하고; 그리고
상기 가열된 혼합물에 고춧가루, 메주가루 및 소금을 넣고 혼합한 다음 용기에 담아 숙성하는;
단계를 포함하는 고추장 제조방법.
Mixing the glutinous rice flour with maltose water to saccharify the glutinous rice flour;
Adding the strain and the sugar of claim 1 to the saccharified glutinous rice flour and mixing to obtain a mixture;
Heating said mixture; And
Adding the red pepper powder, meju powder, and salt to the heated mixture, mixing and aging the mixture in a container;
&Lt; / RTI &gt;
제7항에 있어서, 상기 고추장은 상기 엿기름물 100 중량부에 대하여, 상기 찹쌀가루 20 내지 70 중량부, 상기 균주 0.0001 내지 1 중량부, 상기 설탕 2 내지 20 중량부, 상기 고춧가루 20 내지 70 중량부, 상기 메주가루 20 내지 70 중량부 및 상기 소금 1 내지 20 중량부를 첨가하는 것을 특징으로 하는 고추장 제조방법.
[7] The soybean curd according to claim 7, wherein the soybean paste comprises 20 to 70 parts by weight of the glutinous rice powder, 0.0001 to 1 part by weight of the strain, 2 to 20 parts by weight of the sugar, 20 to 70 parts by weight of the red pepper powder, 20 to 70 parts by weight of the meju powder and 1 to 20 parts by weight of the salt are added.
제 5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고추장은 난분해성 올리고당을 포함하는 것을 특징으로 하는 고추장 제조방법.
9. The process according to any one of claims 5 to 8, wherein the koji paste contains a refractory oligosaccharide.
제 9항에 있어서, 상기 난분해성 올리고당은 판노오스(panose), 이소말토실 말토오스(isomaltosyl maltose) 및 이소말토트리오실 말토오스(isomaltotriosyl maltose)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 고추장 제조방법.
10. The method of claim 9, wherein the degradable oligosaccharide is selected from the group consisting of panose, isomaltosyl maltose, and isomaltotriosyl maltose.
제 5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고추장은 항진균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 고추장 제조방법.9. The process according to any one of claims 5 to 8, wherein the koji paste has an antifungal activity.
KR1020140051407A 2014-04-29 2014-04-29 Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same KR101597426B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140051407A KR101597426B1 (en) 2014-04-29 2014-04-29 Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140051407A KR101597426B1 (en) 2014-04-29 2014-04-29 Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150124649A true KR20150124649A (en) 2015-11-06
KR101597426B1 KR101597426B1 (en) 2016-03-07

Family

ID=54600952

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140051407A KR101597426B1 (en) 2014-04-29 2014-04-29 Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101597426B1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021080355A1 (en) * 2019-10-22 2021-04-29 씨제이제일제당 (주) Novel leuconostoc citreum and method for producing glucose-transferred saccharides by using same

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050033747A (en) * 2003-10-07 2005-04-13 충청남도 부여군 Thick soypaste mixed with red pepper containing lentinus edodes
KR20090054280A (en) * 2007-11-26 2009-05-29 이화여자대학교 산학협력단 Beverage fermented by leuconostoc lactic bacteria
KR20100020120A (en) * 2008-08-12 2010-02-22 두두원발효(주) Korean hot pepper paste fermented with kimchi lactic acid bacteria containing low salt and high vitamins, and production method thereof
KR20110123601A (en) * 2010-05-07 2011-11-15 미 혜 김 Korean hot pepper paste comprising a aloe, and manufacturing method thereof
KR101132371B1 (en) 2010-08-30 2012-04-03 순창군 Non-toxic new microbes having inhibitory activity growing for Bacillus cereus and sauce including them

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050033747A (en) * 2003-10-07 2005-04-13 충청남도 부여군 Thick soypaste mixed with red pepper containing lentinus edodes
KR20090054280A (en) * 2007-11-26 2009-05-29 이화여자대학교 산학협력단 Beverage fermented by leuconostoc lactic bacteria
KR20100020120A (en) * 2008-08-12 2010-02-22 두두원발효(주) Korean hot pepper paste fermented with kimchi lactic acid bacteria containing low salt and high vitamins, and production method thereof
KR20110123601A (en) * 2010-05-07 2011-11-15 미 혜 김 Korean hot pepper paste comprising a aloe, and manufacturing method thereof
KR101132371B1 (en) 2010-08-30 2012-04-03 순창군 Non-toxic new microbes having inhibitory activity growing for Bacillus cereus and sauce including them

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021080355A1 (en) * 2019-10-22 2021-04-29 씨제이제일제당 (주) Novel leuconostoc citreum and method for producing glucose-transferred saccharides by using same

Also Published As

Publication number Publication date
KR101597426B1 (en) 2016-03-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101750154B1 (en) Rice bread and rice fermented composition having superior effect of aging-retardation and manufacturing method thereof
KR101832387B1 (en) Method for producing fermented korean cultivated wild ginseng with enhanced specific ginsenoside content using lactic acid bacteria
CN104522803A (en) Tartary buckwheat germ and oat germ composite fermented beverage and preparation method thereof
CN107488600B (en) Aspergillus niger capable of producing oxidation-resistant low-temperature glucose oxidase with high yield
CN108175015A (en) A kind of preparation method of plants probiotics fermentation apple pulp
CA2811390C (en) Method of production of fermented, pro-healthy, cereal beverages
CN106520642B (en) Bacillus amyloliquefaciens and application thereof
KR101753372B1 (en) Method for producing steamed rice cake with improved volume and flavor using functional strain
Umeta et al. The effect of fermentation on the carbohydrates in tef (Eragrostis tef)
KR101193634B1 (en) The Method of Manufacturing Barley Doenjang
KR102074895B1 (en) Novel lactobacillus paracasei and food using the same
KR101733990B1 (en) Brown rice containing GABA coated with rice flour fermentation products and the manufacturing method thereof
KR101597426B1 (en) Novel Leuconostoc strain and method of preparing pepper paste with non-digestive oligosaccharide using the same
KR101848230B1 (en) Prebiotics composition for Lactobacillus with improved stability, and method for stabilization using thereof
KR101753374B1 (en) Mixture of Saccharomyces cerevisiae and Lactobacillus brevis strain for making steamed rice-cake having excellent flavor and volume expansion ability
KR101424167B1 (en) The fermentation method for mixed grains using novel lactic acid bacteria isolated from grains and its production methods
CN102860453A (en) Waxy corn flour and preparation process thereof
KR20150125836A (en) Lactobacillus plantarum js1 and synbiotics functional makgeolli prepared therewith
JP2017509353A (en) Dextran manufacturing method
KR20160088496A (en) Optimized manufacture method of the GABA and mucilage in the Orostachys japonicus sugar extract
CN110037152A (en) A kind of preparation method for the hawthorn ferment maltose food adjusting intestinal flora
CN109722408A (en) Promote the method for producing bacillus subtilis gemma
JP4434927B2 (en) Method for producing γ-aminobutyric acid-containing food, and yeast having high γ-aminobutyric acid production ability
KR101513014B1 (en) Obtained from Kimchi Lactobacillus plantarum K-1 using Functional food radish kimchi prepared using the method of functional
KR101629074B1 (en) Method for manufacturing lactic acid fermented pudding using sweet pumpkin powder containing lactic acid fermented tumeric

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20200122

Year of fee payment: 5