KR20150096357A - Agrochemical composition for controlling scale insect pest comprising Quisqualis indica extract - Google Patents

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    • A01N65/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08Magnoliopsida [dicotyledons]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C11ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11BPRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
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    • C11B9/025Recovery by solvent extraction

Abstract

The present invention relates to a pesticide composition for controlling scale insects wherein the composition comprises a polar solvent extract of Quisqualis indica which is safe to humans, animals and environment, and exhibits an excellent effect of controlling the scale insects by spraying or applying the composition to crops during a generation period of the scale insects.

Description

사군자 추출물을 함유하는 깍지벌레류 방제용 농약 조성물{Agrochemical composition for controlling scale insect pest comprising Quisqualis indica extract}BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a pesticidal composition for controlling pest insects,

본 발명은 깍지벌레류 방제용 농약조성물에 관한 것으로 더욱 상세하게는 사군자로부터 추출한 사군자 식물의 극성용매 추출물을 함유하는 깍지벌레류 방제용 살충제 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pesticide composition for controlling insect pests, and more particularly, to a pesticide composition for insect pest insect control containing a polar solvent extract of a pest insect plant extracted from a mushroom.

깍지벌레류는 과수, 화훼류, 인삼 등의 특용작물은 물론이고 수목, 정원수 등에 직,간접적인 피해를 유발하는 해충군이다. 깍지벌레류는 전 세계적으로 7,000여종이 기록되어 있으며 우리나라에서는 159종이 보고되어 있다. 깍지벌레상과 (Coccoidea)에는 20개의 과(科)가 포함되어 있으며 깍지벌레과(Diaspididae), 밀깍지벌레과(Coccidae), 가루깍지벌레과 (Pseudococcidae), 주머니깍지벌레과 (Eriococcidae), 이세리아깍지벌레과(Margarodidae) 등이 일반적인 과들이다. Pest bugs are pests that directly or indirectly cause damage to trees, trees, as well as special crops such as fruit trees, flowers, and ginseng. There are more than 7,000 species of pod bugs in the world and 159 species in Korea. Coccoidea contains 20 families and is divided into two groups : Diaspididae , Coccidae , Pseudococcidae , Eriococcidae , Ischeliaceae , Margarodidae ) are common.

이들 중 깍지벌레과는 전 세계적으로 2500여종이 알려져 있는데 주로 수목에 조개껍데기 모양의 깍지를 만들어 서식하면서 피해를 주며 우리나라에는 72종이 기록되어 있다. Among them, about 2,500 species of pod bugworm are known all over the world. They produce shells with shell-shaped pods in the trees and damage them, and 72 species are recorded in our country.

밀깍지벌레과는 전 세계적으로 1200여종이 알려져 있으며 일부 종들이 국제간 교역으로 인하여 세계적으로 문제를 일으키고 있고 우리나라에서는 거북밀깍지벌레(Ceroplastes japonicus)를 비롯하여 31종이 알려져 있다. There are more than 1,200 varieties of wheat beetles worldwide. Some species are causing problems worldwide due to international trade. In Korea, 31 species are known, including Ceroplastes japonicus .

가루깍지벌레과는 전 세계적으로 2000여종이 알려져 있으며 이 과의 종들은 암컷이 면을 싸고 있는 특징을 가지고 있다. 우리나라에는 소나무가루깍지벌레 (Crisicoccus pini)를 비롯하여 25종이 알려져 있다. There are about 2,000 species of insect pests in the world, and this species has the characteristic that females wrap their faces. There are 25 known species in Korea including Crisicoccus pini .

주머니깍지벌레과는 전 세계적으로 500여종이 알려져 있으며 우리나라에는 주머니깍지벌레(Eriococcus lagerstroemiae)를 비롯하여 6종이 알려져 있다. 이세리아깍지벌레과는 전 세계적으로 250여종이 알려져 있고 우리나라에서는 솔껍질깍지벌레(Matsucoccus thunbergianae)를 비롯하여 8종이 알려져 있다.
There are more than 500 species of pod intervertebrata worldwide , and six species are known in Korea, including Eriococcus lagerstroemiae . There are more than 250 species of Isseeridae in the world and 8 species are known in Korea including Matsucoccus thunbergianae .

깍지벌레류는 대부분 산림의 수목과 노지 및 시설재배지의 각종 과수류, 화훼류는 물론이고, 정원수, 가로수, 각종 관엽 식물 등을 흡즙하여 피해를 준다. 우리나라에 발생하여 피해를 주는 주요 종들로는 이세리아깍지벌레과(Margarodidae)에 속하는 솔껍질깍지벌레(Matsucoccus thunbergianae), 주머니깍지벌레과 (Eriococcidae)의 주머니깍지벌레(Eriococcus lagerstroemiae), 밀깍지벌레과 (Coccidae)에 속하는 거북밀깍지벌레(Ceroplastes japonicus), 가루깍지벌레과 (Pseudococcidae)에 속하는 소나무가루깍지벌레(Crisicoccus pini)와 귤가루깍지벌레(Planococcus citri)가 있다.
The larvae of the pods are most commonly affected by nutrients such as trees, trees, trees and trees, as well as various kinds of flowering and flowering trees. The main species that damage to occur in the country include yiseri Oh pod beolregwa (Margarodidae) Sol peel pod worm (Matsucoccus thunbergianae) belonging to the pocket pod worms pocket pod beolregwa (Eriococcidae) (Eriococcus lagerstroemiae), wheat pod beolregwa (Coccidae) Ceroplastes japonicus belonging to the genus Pseudococcidae, Crisicoccus pini belonging to the Pseudococcidae and Planococcus citri .

깍지벌레류는 다양한 형태의 왁스 물질(깍지)로 몸을 덮고 나무의 수피 틈이나 잎에 몸을 고착시켜 그 속에서 수액을 흡즙하면서 생활하므로 약제를 살포하여도 충체에 직접 접촉되지 않아 농약으로는 약제방제효과가 낮고 방제가 어려운 해충이다. 이로 인한 농약의 남용으로 천적이 급격히 감소하여 깍지벌레류들이 대발생하고 있으며 특히 약제를 자주 살포하는 가로수와 조경수에는 더욱 피해가 심한 실정이다. 또한 흡즙하면서 바이러스를 매개하고 충체에서 분비하는 감로로 인해 2차적으로 그을음병을 발생시켜 광합성 작용을 저해시키고 상품의 가치를 하락시키기도 하며 수입 식물의 검역 과정에서도 검출빈도가 높은 해충이다.
Intertwine worms cover the body with various types of wax materials (pods) and fix the body to the bark of leaves or leaves of the tree. Since they live in sucking the sap in them, they do not come into direct contact with the body of the worms It is a pest which has a low effect of controlling the medicine and is difficult to control. As a result of abuse of pesticides due to this, the natural enemies are rapidly decreasing due to the abrupt decrease of natural enemies. Especially, the damage to roadside trees and landscaping trees frequently spraying medicines is more serious. In addition, it is a pest which has a high frequency of detection even in the process of quarantine of imported plants because it inhibits photosynthesis and damages the product by generating secondary soot disease due to nectar, virus-mediated and secretory secretion from juvenile.

깍지벌레류의 방제는 주로 화학적 방제를 이용해 왔으나 인축(人畜)에 대한 위험성과 비 표적 생물체에 대한 위해성, 잔류독성 및 생태계 교란 등의 환경 위해성, 저항성 개체의 출현 등의 부작용을 초래하였다. 따라서 깍지벌레류를 방제하기 위한 화학농약을 대체할 수 있는 방제제의 개발이 요구되고 있다.
The control of pod bugs has mainly used chemical control, but it has caused side effects such as danger to human life, environmental risks such as risks to non - target organisms, residual toxicity and ecosystem disturbance, and appearance of resistant individuals. Therefore, it is required to develop a control agent that can replace chemical pesticides to control insect pests.

최근에 환경친화적으로 관리되면서 품질이 우수한 농산물을 요구하는 소비자들과 고품질의 안전농산물을 생산하여 부가가치를 창출하고자 하는 농임업인의 요구가 증가하고 있는 실정이다. 이런 요구에 부합하기 위한 대체방법의 하나로서 식물체 추출물은 자연유래 물질이면서 식약용 소재로 예전부터 이용되어 왔기 때문에 인축이나 환경에 안전하면서도 깍지벌레류 방제에 효과적으로 이용할 수 있다. 또, 식물체 추출물은 식물체의 종류나 대상해충에 따라 상이한 효과를 나타낼 수 있다.
In recent years, there has been a growing demand from farmers who demand quality agricultural products and produce high-quality safe agricultural products to create added value. As an alternative method to meet this demand, plant extracts have been used as food materials for a long period of time because they are naturally derived materials and can be effectively used for control of insect pests and insects. In addition, plant extracts may exhibit different effects depending on the kind of plant and target insect pests.

지금까지 병해충 방제용 조성물로 사용되는 천연 식물 추출물에 대하여 기재된 특허는 등록특허 제10-0971314호에서 베이, 캐라웨이시드, 카르다몬 실론, 레몬그래스, 라임 디스 5F, 오레가노 등의 식물정유 및 그 식물 유래 화합물을 포함하는 난방제 병해충에 대한 천연 방제제가 개시된 바 있다. 등록특허 제10-0679661호에는 정향, 계피, 겨자, 양고추냉이 등에서 선택된 식물알콜 추출물을 포함하는 친환경 털진드기 방제제가 개시되었다. 등록특허 제10-0596622호에는 웜우드 오일, 페퍼민트 오일,페니로얄 오일, 스피아민트 오일 등의 식물추출물을 유효성분으로 포함하는 머릿니 방제용 조성물이 개시된 바 있다. 상기 문헌들에는 깍지벌레류 방제제, 나아가 사군자추출물을 이용한 곤충방제에 대하여는 전혀 개시된 바 없다. The patents disclosed on the natural plant extracts used as compositions for controlling pests have heretofore been disclosed in Korean Patent No. 10-0971314 as plant essential oils such as bay, caraway seed, cardamon ceylon, lemongrass, lime disc 5F, oregano, Natural control agents have been disclosed for heating pests comprising the resulting compounds. EP 10-0679661 discloses an environmentally friendly mite control agent comprising a plant alcohol extract selected from cloves, cinnamon, mustard, horseradish, and the like. Patent No. 10-0596622 discloses a composition for controlling head lice comprising a plant extract such as warmwood oil, peppermint oil, penny royal oil, and spearmint oil as an effective ingredient. None of the above documents discloses an insect control agent using an insect pest insect control agent or a further insect pest control agent.

따라서 본 발명의 목적은 깍지벌레류에 대한 화학농약을 대체할 수 있는 친환경 깍지벌레류 방제용 신규한 천연 농약 조성물을 제공하는 데 있다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a novel natural pesticide composition for environmentally friendly insect pest control that can replace chemical pesticides against interstitial pest insects.

본 발명의 다른 목적은 상기 농약을 이용하여 작물에 직,간접적인 피해를 유발하는 해충군인 깍지벌레류 방제방법을 제공하는 데 있다.
Another object of the present invention is to provide a method for controlling pest insects, which directly or indirectly causes damages to crops using the pesticide.

본 발명의 상기 목적은 사군자 열수추출물을 제조하는 단계와; 상기 열수추출물을 실내 또는 야외에서 솔껍질깍지벌레에 살포 후 살충효과를 측정하고 평가하는 단계와; 사군자를 메탄올로 추출하여 추출용매별로 분획,제조하는 단계와; 상기 용매분획별 추출물을 귤가루깍지벌레와 주머니깍지벌레에 살포한 후 살충효과를 측정하고 평가하는 단계와; 사군자 헥산분획물을 농도별로 소나무깍지벌레에 살포한 후 살충효과를 측정하고 평가하는 단계와; 상기 헥산분획물을 정제 및 성분분석함으로써 달성하였다.
The above object of the present invention can be achieved by a method for producing a hot water extract, Measuring and evaluating the insecticidal effect after spraying the hot-water extract on a brush bark worm, indoors or outdoors; Extracting methanol with methanol and fractionating the methanol by extraction solvent; Measuring and evaluating the insecticidal effect after spraying the extract of the solvent fraction on mandarin pod worms and pocket worm worms; Measuring and evaluating the insecticidal effect of Spearman hexane fraction sprayed on pine worms at different concentrations; This hexane fraction was obtained by purification and component analysis.

본 발명에 따른 상기 사군자 추출물의 추출부위는 특별히 한정되어 있는 것은 아니며 바람직하게는 사군자로부터 선택된 식물의 전체 부위, 또는 사군자의 뿌리, 줄기, 잎, 과육, 꽃, 열매, 종자 및 껍질로 이루어진 군으로부터 선택된 사군자의 일부분일 수 있다.The extraction site of the Shiitake mushroom extract according to the present invention is not particularly limited and is preferably selected from the group consisting of the entire plant selected from Shiitake, or the root, stem, leaf, flesh, flower, fruit, seed and skin of Shiitake It may be a part of the chosen sage.

또한, 상기 추출물은 사군자의 열수추출물, 온수추출물, 냉수추출물 및 유기용매 추출물 또는 사군자 정유일 수 있으며 가장 바람직하게는 사군자의 헥산추출물을 말한다.The extract may be a hot water extract, a hot water extract, a cold water extract, an organic solvent extract, or a sanguinea essential oil of Sagunja, and most preferably a hexane extract of Sagunja.

상기 사군자 유기용매 추출물은 통상적인 식물추출방법으로 제조될 수 있으며 바람직하게는 사군자의 건체 또는 생체를 부위별로 마쇄하거나 전체를 마쇄하여 알콜, 알콜 희석수 또는 유기용매 등의 추출용매에 혼합하고 여과하여 용매를 건조시켜 제조할 수 있다. 상기 알콜은 탄소수 1(C1) 내지 4(C4)의 저가 알콜이며 바람직하게는 에탄올, 메탄올, 프로판올 또는 부탄올이며, 가장 바람직하게는 에탄올 또는 메탄올이다. 상기 알콜 희석수는 물에 알콜을 20 내지 90 부피%로 혼합하여 사용할 수 있고 상기 유기용매는 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 등일 수 있으며 상기 유기용매의 극성에 따라 순차적으로 분획하여 사용할 수 있다.Preferably, the dried or organic matter of the seedlings is ground or ground, and the whole is ground and mixed with an extraction solvent such as alcohol, alcohol diluted water or an organic solvent, and filtered. And drying the solvent. The alcohol is a lower alcohol having a carbon number of 1 to 4 (C4), preferably ethanol, methanol, propanol or butanol, and most preferably ethanol or methanol. The alcohol diluted water may be used by mixing 20 to 90% by volume of alcohol with water. The organic solvent may be hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, etc., and may be sequentially fractionated according to the polarity of the organic solvent.

상기 사군자 정유는 통상의 추출, 증류 또는 압착을 통하여 제조할 수 있으며, 사군자 전체 또는 사군자 부위별 예컨대, 뿌리, 줄기, 잎, 과육, 꽃, 열매, 종자 및 껍질 각각에 따라 제조하거나 구입하여 사용할 수 있다.The saccharide essential oil may be prepared by conventional extraction, distillation or compression, and may be manufactured or purchased according to the whole or part of the sari, such as root, stem, leaf, flesh, flower, fruit, seed and skin have.

본 발명에 따른 상기 추출물의 깍지벌레류에 대한 활성 유효량은 0.1 내지 100,000 ppm 농도 범위일 수 있고, 보다 바람직하게는 1 내지 10,000 ppm 농도 범위인 것이 좋다. 상기 농도 범위보다 낮을 경우는 깍지벌레류를 완전하게 방제할 수 없으며 상기 농도 범위보다 높은 경우는 경제성이 떨어진다.
The active ingredient of the extract according to the present invention may be in a concentration range of 0.1 to 100,000 ppm, more preferably in a concentration range of 1 to 10,000 ppm. If the concentration range is lower than the above range, the insect worms can not be completely controlled. If the concentration range is higher than the above range, the economical efficiency is lowered.

본 발명의 방제용 제제는 상기 식물체 추출물, 식물 정유 또는 화합물을 유효성분으로 포함하며 단독 또는 2종 이상의 유효성분을 포함할 수 있다. 상기 방제제는 상기 유효성분 이외에도 제형 및/또는 사용목적에 따라 적절한 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 부형제는 제형에 따라 통상의 물질을 사용할 수 있으며, 제제화할 경우 충진제, 증량제, 습윤제, 붕괴제 또는 계면활성제 등을 사용할 수 있다. 대표적으로 사용되는 희석제 또는 부형제로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수 등을 포함할 수 있으며 보다 바람직하게는 리터(L)당 0.1 %의 Tween 80을 첨가한 2차 증류수를 사용할 수 있다.The controlling agent of the present invention contains the above-mentioned plant extract, plant essential oil or compound as an active ingredient, and may contain one or more kinds of active ingredients. In addition to the active ingredient, the controlling agent may further comprise a suitable diluent or excipient depending on the formulation and / or purpose of use. The excipient may be a conventional material according to the formulation, and when formulated, a filler, an extender, a wetting agent, a disintegrant, a surfactant, or the like may be used. The diluent or excipient typically used may include water, dextrin, calcium carbonate, lactose, propylene glycol, liquid paraffin, physiological saline and the like, more preferably 0.1% Tween 80 per liter (L) Tea distilled water can be used.

상기 방제용 제제의 제형은 사용목적에 따라 과립제(GRANULES), 로션제 (LPTIONS), 방향수제(AROMATIC WATERS), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 액제 (LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제 (OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 정제(TABLETS), 주정제(SPIRITS), 캅셀제(CAPSULES) 또는 크림제(CREAMS)일 수 있으며 바람직하게는 현탁제로 적용하여 사용할 수 있다.The formulations for controlling agents may be formulated into granules, powders, aerosols, powders, syrups, liquids and solutions, aerosols, EXTRACTS, OINTMENTS, FLUIDEXTRACTS, EMULSIONS, SUSPESIONS, TABLETS, SPIRITS, CAPSULES or Creams CREAMS), and it is preferably used as a suspension agent.

상기 농약 조성물 또는 살충제의 사용용량은 대상작물, 깍지벌레류 생육 단계, 깍지벌레류 종류 등에 따라 적용할 수 있으며 바람직하게는 10 내지 10,000 ppm 농도로 희석하여 피해 작물에 약액이 흘러내릴 정도로 충분히 분무하는 것이 좋고 가장 바람직하게는 10 내지 1,000 ppm 농도 범위로 처리하는 것이 좋다.The dosage of the pesticidal composition or the insecticide can be applied according to the target crop, the step of growing the pod bug, the kind of the pod bug, or the like, and preferably is diluted to a concentration of 10 to 10,000 ppm to spray the damaged crop sufficiently And most preferably in a concentration range of 10 to 1,000 ppm.

본 발명은 신규한 사군자 극성용매 추출물을 함유한 깍지벌레류 방제용 살충제 조성물을 제공하는 효과가 있으며, 인축이나 환경에 안전하면서도 깍지벌레류 방제에 효과적으로 사용할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.The present invention has an effect of providing a novel insecticidal composition for controlling insect pest insecticides containing a polar solvent extract, and has an excellent effect that it can be effectively used for pest insect control while being safe for human or animal environments.

도 1은 사군자 열수 추출물의 솔껍질깍지벌레 방제를 위한 야외실험 모급을 나타낸 사진이고,
도 2는 사군자 메탄올 추출물을 용매분획별로 감압농축하는 사진이고,
도 3은 사군자 메탄올 추출물을 배롱나무주머니깍지벌레에 처리하는 실내실험 사진이고,
도 4는 사군자 메탄올 추출물의 헥산층 처리에 의해 치사된 주머니깍지벌레(왼쪽)와 무처리구의 깍지벌레(오른쪽)를 나타낸 사진이고,
도 5는 알파피넨의 GC-MS 크로마토그램을 나타낸 도이다.
FIG. 1 is a photograph showing an outdoor experimental work for the control of a brush shell scouring beetle of Sawny hot-water extract,
FIG. 2 is a photograph showing the methanol extract of Sajungja obtained under reduced pressure for each solvent fraction,
FIG. 3 is a photograph of a laboratory experiment in which a methanol extract of Sajungja is treated on a bamboo pod pod worm,
FIG. 4 is a photograph showing the pod bug worm (left) killed by the hexane layer treatment of the methanol extract of Shiitake mushroom and the pod bug (right)
5 is a graph showing a GC-MS chromatogram of alpha pinene.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples. However, the following examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present invention.

실시예 1: 솔껍질깍지벌레에 대한 사군자 열수추출물의 살충활성 분석Example 1: Analysis of insecticidal activity of the hot water extract of Sajungja on the brush bark worm

1-1: 사군자 열수 추출물의 준비1-1: Preparation of hot water extract

본 발명에 사용된 사군자는 한약재상에서 구입하여 실험실 내에서 1주 동안 음건하여 건조시킨 뒤, 분쇄기(Hanil HMF370, Korea)를 사용하여 고운 분말이 될 때까지 분쇄하였다. 분쇄된 분말은 1,000 mL 삼각 플라스크에 시료 40 g과 1차 증류수 400 mL를 넣고 고압멸균기(JEIO Tech AC-12, Korea)를 사용하여 121℃, 1.5기압 조건에서 20분간 멸균시켜 온수추출 하였다. 추출한 후 직경 150 ㎜ Sanyo filter paper(No 2, Japan)를 사용하여 고형물을 걸러낸 다음 액상물만을 500 mL 세포배양플라스크에 담아 냉장 보관하여 사용하였다.
The seedlings used in the present invention were purchased from herbal medicines, dried for one week in a laboratory in a shade, and then pulverized to a fine powder using a pulverizer (Hanil HMF370, Korea). The pulverized powder was sterilized at 121 ° C and 1.5 atm for 20 minutes using a high-pressure sterilizer (JEIO Tech AC-12, Korea) in a 1,000 mL Erlenmeyer flask, and 40 g of the sample and 400 mL of the first distilled water were placed. After extracting, the solids were filtered using a 150 mm diameter Sanyo filter paper (No 2, Japan), and then the liquid material was stored in a 500 mL cell culture flask and refrigerated.

1-2: 솔껍질깍지벌레 준비1-2: Preparation of brush shell pod bug

본 발명의 실시예에서는 솔껍질깍지벌레를 이용하였으며 경상남도 남해군 창선면 일대의 솔껍질깍지벌레 곰솔 피해목에서 채집하여 실험에 이용하였다. In the examples of the present invention, the pine bark worms were used and collected from the neck of the pine bark worms in Changseon-myeon, Namhae-gun, Gyeongsangnam-do.

상기에서 준비된 사군자 추출물의 솔껍질깍지벌레에 대한 방제 효능을 측정하기 위하여 하기와 같은 방법으로 각각의 사군자 추출물을 솔껍질깍지벌레에 살포하여 이들의 생사유무를 통하여 검정하였다.
In order to determine the control efficacy of the Salicornia japonica extract prepared from the above-mentioned Salicornia spp., The extracts of Salvia officinalis were sprayed on the salivary gill worms according to the following method.

실험예 1: 솔껍질깍지벌레에 대한 사군자 열수 추출물의 실내 살충활성 분석Experimental Example 1: Analysis of insecticidal activity of hot water extracts of Sawna japonica on the brush bark worms

솔껍질깍지벌레에 대한 사군자 추출물의 실내활성 검증은 2차에 걸쳐 수행하였다. 1차 실험은 가정원예용 500 mL 소형 분무기를 이용하여 실험을 수행하였다. 사군자 추출물은 온수추출 후 냉장 보관 중이던 것을 10,000ppm 농도로 처리하였으며 대조약제로 fenitrothion 50% EC 1,000배액을 사용하였다. 처리는 솔껍질깍지벌레가 자연발생한 경남 남해의 자연 발생지 곰솔림에서 솔껍질깍지벌레의 서식 밀도가 높은 가지를 20-30㎝ 길이로 전정가위로 절단하여 실험실에 가져와서 각각의 추출물을 약액이 충분히 흘러내리도록 살포하였다. 살포 후 처리한 가지들은 신문지 위에서 30분 동안 음건시킨 후, 5-7㎝ 길이로 절단하여 Incu Tissue (65.4x65.4x98.2 ㎜, SPL, Korea)에 넣은 다음 항온항습기(25±1℃, 70~80%)(JEIO Tech GC-1000 TLH, Korea)에 보관하였다. 실험은 4반복으로 처리하였으며 무처리는 살균수만 살포하였다. 처리 30일 후 솔껍질깍지벌레의 치사유무를 해부현미경 (Nikon SMZ-1000, Japan)하에서 조사하였는데 깍지벌레가 우화(羽化) 후 탈피각이 붙어 있는 경우는 살아있는 것으로 판정하였으며 우화하지 못하고 딱딱하게 굳어 있는 경우는 죽은 것으로 판정하였다.Indoor activity assays of Sorghum extracts on brush bark worms were carried out two times. The first experiment was carried out using a 500 mL small sprayer for home gardening. Sagunja extract was treated with 10,000ppm concentration of fenitrothion 50% EC 1,000 times in the cold storage after hot water extraction. In the natural occurrence of the pine bark worm, which occurs naturally in the southern sea of Gyeongsangnam-do, the high-density branches of the pine bark worms are cut into 20-30 cm length by pruning shears and brought to the laboratory. I sprayed it down. After shaking, the branches were cut on a newspaper for 30 minutes, cut into 5-7㎝ length, placed in Incu Tissue (65.4x65.4x98.2 ㎜, SPL, Korea) ~ 80%) (JEIO Tech GC-1000 TLH, Korea). The experiment was carried out with 4 repetitions. Thirty days after the treatment, the presence or absence of lethal bark worms was examined under a dissecting microscope (Nikon SMZ-1000, Japan). When the bug worms emerged after emergence, they were determined to be alive. In the case where it is determined that it is dead.

2차 실험은 약제살포탑(Potter spray tower; Burkard Manufacturing Ltd., Rickmansworth, UK)을 이용하여 수행하였다. 후약충이 서식하고 있는 곰솔 가지를 야외에서 채취한 후 5-7㎝ 길이로 잘라 Insect breeding dish(90 x 40 ㎜)에 직경 90 ㎜ filter paper(Advantec No 2, Japan) 1장을 깔고, 길이방향으로 놓아두었다. Insect breeding dish를 약제살포탑 내에 넣은 다음 사군자 온수추출물 10,000ppm을 1 mL씩 살포하였다. 무처리는 살균수 1 mL만을 처리하였다. 실험은 한 개의 Insect breeding dish를 한 반복으로 3반복 실시하였으며 14일 후 생사 유무를 조사하였는데 조사방법은 1차 실험과 동일하게 하였다. 결과는 하기 [표 1]에 나타내었다.The second experiment was carried out using a Potter spray tower (Burkard Manufacturing Ltd., Rickmansworth, UK). After harvesting the larvae, they were cut into 5-7㎝ lengths. One 90 mm filter paper (Advantec No 2, Japan) was placed on an insect breeding dish (90 x 40 ㎜) . The insect breeding dish was placed in a drug spraying tower and sprayed with 1 ml of 10,000 ppm of Sajunja hot water extract. In the untreated treatment, only 1 mL of sterilized water was treated. The experiment was repeated three times with one repetition of one insect breeding dish. After 14 days, the presence or absence of life was investigated. The results are shown in Table 1 below.

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실험예 2: 솔껍질깍지벌레에 대한 사군자 열수 추출물의 야외 살충활성 분석Experimental Example 2: Analysis of outdoor insecticidal activity of the hot water extract of Sa-kunja on the brush bark worm

솔껍질깍지벌레에 대한 사군자 추출물 활성검정을 위한 야외 실험은 경상남도 남해군 창선면의 솔껍질깍지벌레 자연 발생 임분에서 후약충을 대상으로 실험을 수행하였다. 실험은 5년생 이내의 수고(樹高)가 2 m이내의 곰솔을 대상으로 시기를 달리하여 두 차례 수행하였다.Experiments were carried out on the nymphs in the naturally occurring stands of brush shell pod worms in Changseon - myeon, Namhae - gun, Kyungsangnam - do, South Korea. The experiment was carried out two times with different timings for the seeds of less than 2 m in height within 5 years.

1차 실험은 2012년 2월 16일 실시하였고 사군자 온수추출물 1,000ppm과 대조약제인 페니트로티온(50%)유제 1,000배액을 처리하였다. 처리는 솔껍질깍지벌레의 서식밀도가 높은 가지를 대상으로 비닐 테이프로 표식을 한 다음 가정원예용 분무기를 이용하여 약액이 흘러내릴 정도로 살포하였다. 효과 조사는 5월 12일에 하였는데 처리 부분의 가지를 20-30 ㎝ 길이로 전정가위를 이용하여 절단한 뒤 지퍼팩에 넣어 실험실로 운반 후 해부현미경 하에서 치사유무를 조사하였다. 치사유무는 우화 후 탈피각만 남은 개체는 살아있는 것으로 판정하였으며 우화하지 못하고 딱딱하게 굳어 있는 것은 죽은 것으로 판정하였다. 처리는 한 개의 가지를 한 반복으로 4반복 수행하였으며 무처리는 물만 살포하였다. The first experiment was carried out on February 16, 2012, and 1,000 ppm of hot water extract of Sagunja and 1,000 times of penitrothion (50%) emulsion, which is a comparative agent, were treated. The treatments were labeled with vinyl tape for high density branches of brush shell pod worms, and then sprayed with a home gardening sprayer to the extent that the chemical solution flowed down. The effect was investigated on May 12th. Branches of the treated part were cut using vestibular scissors 20-30cm long, and then put into a zipper pack, and transported to the laboratory, and examined for deaths under a dissecting microscope. The lethal occurrence was determined to be alive after the allegation, and the remaining individual was judged to be alive. The alienated and hardened ones were judged to be dead. The treatments were repeated four times with one branch, and only the water was sprayed without treatment.

2차 실험은 3월 26일 처리하였으며 처리방법은 1차 실험과 동일하였고 조사도 5월 12일 동일한 날짜에 동일한 방법으로 수행하였다. 결과는 하기 [표 2]에 나타내었다.The second experiment was carried out on March 26, and the treatment method was the same as the first experiment, and the investigation was conducted on the same date on May 12th. The results are shown in Table 2 below.

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[표 1] 및 [표 2]에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 사군자 열수추출물은 1,000 ppm 농도 범위에서 솔껍질깍지벌레에 대한 높은 사충율(실내 후약충 대상:95.9 %, 야외 겨울철 처리:71.7%, 야외 봄철 처리:79.6%)을 보였다.As can be seen in [Table 1] and [Table 2], in the concentration range of 1,000 ppm of the present invention, the high extractability rate (pest insect target: 95.9%, outdoor winter treatment: 71.7 %, Outdoor spring treatment: 79.6%).

따라서, 본 발명에 따른 사군자 열수 추출물은 솔껍질깍지벌레에 대하여 실내 및 야외에서 모두 효과가 있었다.
Therefore, the water extract of Saengunja according to the present invention was effective both indoors and outdoors against the brush bark worm.

실시예 2: 깍지벌레류에 대한 사군자 메탄올추출물의 분획별 살충활성 분석 Example 2: Analysis of the insecticidal activity of the methanol extract of Sagunja on fractional worms

실시예 1의 결과를 토대로 하여 본 발명의 실시예에서는 사군자를 메탄올로 추출하여 추출 용매별에 따른 살충활성을 조사하였다.Based on the results of Example 1, the insecticidal activity of each of the extractants was examined by extracting methanol with methanol.

2-1: 사군자 메탄올 추출물의 준비2-1: Preparation of methanol extract of Sajungja

본 발명에 사용된 사군자 메탄올 추출물은 건고(乾固)한 MeOH 추출물을 증류수(1000 mL)로 현탁시켜 단계적으로 용매의 극성을 높여가면서 용매 분획하였다. 현탁액을 깔때기(separation funnel)에 옮기고 1,000 mL의 n-헥산을 가하여 충분히 혼합하고 정치시킨 후 상등액의 n-헥산층을 분리하였고 이 같은 분획을 2회 더 실시하였다. n-헥산 분획을 회전감압 농축기로 농축 건조시켰다. 이와 같은 방법으로 클로로포름(CHCl3, 1,000 mL), 에틸 아세테이트(EtOAc, 1,000 mL), n-부탄올(BuOH, 1,000 mL)로 각각 3회씩 순차적으로 분획한 다음, 각각의 분획물을 1,000 mL 라운드 플라스크에 받아 회전감압 농축기(Rotary vacuum evaporator N-1000, Japan)로 농축 건조시켰다. 헥산분획에서 91.8 ㎎의 추출물을 얻었고 CHCl3분획에서는 84 ㎎, EtOAc분획에서는 80.3 ㎎, BuOH분획에서는 57.2 ㎎을 얻었으며, H2O분획에서는 89.5 ㎎의 분획물을 얻었다. 용매 분획하여 얻은 5개의 분획물을 1 ㎎ 당 1 mL의 MeOH을 첨가하여 유리병(glass vial)에 1,000 ppm의 검정시료를 만들고, 시험관 혼합기(vortex mixer)로 균질화하였다.
The methanol extracts of the seedlings used in the present invention were prepared by suspending a dry MeOH extract in distilled water (1000 mL) and performing solvent fractionation while gradually increasing the polarity of the solvent. The suspension was transferred to a separation funnel, 1,000 mL of n-hexane was added, mixed thoroughly and allowed to stand, then the n-hexane layer of the supernatant was separated and this fraction was applied two more times. The n-hexane fraction was concentrated to dryness using a rotary evaporator. This procedure was repeated three times with chloroform (CHCl 3 , 1,000 mL), ethyl acetate (EtOAc, 1,000 mL) and n-butanol (BuOH, 1,000 mL) three times and each fraction was added to a 1,000 mL round- And then concentrated and dried with a rotary vacuum evaporator (N-1000, Japan). 91.8 ㎎ of the extract was obtained from hexane fraction, and 84 ㎎ of CHCl 3 fraction, 80.3 ㎎ of EtOAc fraction and 57.2 ㎎ of BuOH fraction, and 89.5 ㎎ fraction of H 2 O fraction were obtained. Five fractions obtained by solvent fraction were added 1 mL of MeOH per 1 mg, and 1,000 ppm of a black sample was prepared in a glass vial and homogenized with a vortex mixer.

2-2: 깍지벌레류의 준비2-2: Preparation of interspecies

본 발명에 사용된 귤가루깍지벌레는 경상남도 남해군 이동면의 피라칸타 (Pyracantha angustifoila (Franch.)) 재배 하우스에서 8월에 채집하여 이용하였으며 채집은 깍지벌레류의 피해가 심한 가지를 전정가위로 잘라 지퍼팩에 넣은 다음 실험실로 가져와 수행하였다. 깍지벌레류의 충태는 부화 직후의 1령약충을 이용하였다.The tangerine pod bug beetle used in the present invention was collected in Pyracantha angustifoila (Franch.)) Growing house of the Namhae-gun, Gyeongsangnam-do, South Korea and used in the collection. The pickled beetle was cut with pruning shears And then taken to the laboratory. The first instar larvae immediately after hatching were used.

주머니깍지벌레는 경상남도 진주의 경상대학교 캠퍼스 주변 배롱나무 (Lagerstroemia indica)에 서식하는 것을 7월에 채집하였으며 1령충을 이용하였다. 채집은 깍지벌레류의 피해가 심한 가지를 전정가위로 잘라 지퍼팩에 넣은 다음 실험실로 가져와 수행하였다. 또, 소나무가루깍지벌레는 경남 진주의 경상대학교 교내 반송(Pinus densiflora Siebold & Zuccarini)에서 8월에 채집하여 실험에 사용하였으며 충태는 1-2령충을 이용하였다. 채집은 깍지벌레류의 피해가 심한 가지를 전정가위로 잘라 지퍼팩에 넣은 다음 실험실로 가져와 수행하였다.The pod intertwining worms were collected in July at the Lagerstroemia indica around Gyeongsang University campus in Jinju, Gyeongsangnam - do. The harvesting was carried out by cutting the damaged branches of the insect worms with pruning shears into the zipper pack and bringing them to the laboratory. In addition, Pinus densiflora Siebold & Zuccarini, Gyeongsang National University pearl pine worms were collected in August and used in experiments. The harvesting was carried out by cutting the damaged branches of the insect worms with pruning shears into the zipper pack and bringing them to the laboratory.

상기에서 준비된 사군자 메탄올추출물의 깍지벌레류에 대한 방제 효능을 측정하기 위하여 하기와 같은 방법으로 각각의 사군자 추출물을 귤가루깍지벌레와 주머니깍지벌레에 살포하여 이들의 생사유무를 통하여 검정하였다.In order to determine the control efficacy of the methanol extracts of Shiitake mushroom prepared above, each of the Shiitake mushroom extracts was sprayed on the orange mushroom worms and pod worm worms according to the following method,

실험예 3: 귤가루깍지벌레와 주머니깍지벌레에 대한 사군자 메탄올 추출물의 용매분획별 살충활성 분석Experimental Example 3: Analysis of the insecticidal activities of methanol extracts of Sajungja methanol extracts against the tangerine powdery moth pods and pestle worms

야외에서 채집한 피라칸타의 귤가루깍지벌레와 배롱나무의 주머니깍지벌레는 Insect breeding dish(90 x 40 ㎜)에 90 ㎜ Advantec filter paper(No 2, Japan)를 2장씩 깔고 증류수 2 mL을 처리한 후 미세한 붓으로 부화약충 15마리씩 접종하였다. 그 다음 각각의 깍지벌레류에 대하여 500 mL 가정원예용 분무기를 이용하여 사군자 추출물 분획별로 각각 100 ppm 농도로 처리하였다. 무처리는 살균수만 처리하였으며 용매에 의한 영향을 알아보기 위하여 살균수에 MeOH 100 ppm을 혼합한 처리도 하였다. 대조약제로는 메티다티온(40%) 유제를 처리하였다. Two pills of 90 mm Advantec filter paper (No 2, Japan) were placed on Insect breeding dish (90 x 40 mm) and 2 mL of distilled water was applied to the piranha tangerine pod worms and bongo tree pod worms collected outdoors Fifteen hatching nymphs were inoculated with a fine brush. Then, each of the insect pests was treated with a 500 mL domestic gardening sprayer at a concentration of 100 ppm for each of the Sajunga extract fractions. In order to investigate the effect of solvent, 100 ppm of MeOH was added to sterilized water. As a control agent, methidathion (40%) emulsion was treated.

귤가루깍지벌레, 주머니깍지벌레는 처리 24, 48 ,72시간 후 치사유무를 해부현미경상에서 확인하였다. 생사유무는 붓으로 각 개체에 자극을 주어 반응이 없는 것은 죽은 것으로 간주하였으며 딱딱하게 굳거나 체액이 나오지 않는 것은 죽은 것으로 판정하였다. 모든 처리는 4반복으로 수행하였다. 결과는 하기 [표 3]과 [표 4]에 나타내었다.Tangerine powdery mildew worms and pocket worm worms were examined on a dissecting microscope for 24, 48 and 72 hours after the treatment. The presence or absence of life or death was stimulated by each brush with a brush. Anything without reaction was deemed dead, and those that were hard or hardly fluid were judged dead. All treatments were performed in 4 replicates. The results are shown in [Table 3] and [Table 4] below.

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따라서, 본 발명에 따른 사군자 메탄올 추출물은 모든 용매층에서 깍지벌레류에 대한 활성을 나타내었으며 특히 헥산층의 활성이 높았다. 메탄올 추출물의 용매 분획별 활성도는 배롱나무깍지벌레와 귤나무가루깍지벌레에 대하여 헥산층 분획에서 94.9%(표 3)와 95.1%(표 4)의 살충율을 보였다.
Therefore, the methanol extract of Shiitake mushroom according to the present invention exhibited activity against intergrowth worms in all the solvent layers, and especially the activity of the hexane layer was high. The activity of the methanol extracts by solvent fraction was 94.9% (Table 3) and 95.1% (Table 4) in the hexane fraction of balsam pod and tangerine pod worms.

실험예 4: 소나무가루깍지벌레에 대한 사군자 메탄올 추출물의 헥산 분획물의 농도별 살충활성 분석Experimental Example 4: Analysis of insecticidal activities of methanol extracts of Sajungja on the pine woody beetle by concentration of hexane fraction

헥산분획물을 반송의 소나무가루깍지벌레 부화약충을 대상으로 각각 200 ppm과 100 ppm, 50 ppm, 25 ppm으로 농도를 달리하여 처리하였다. Insect breeding dish(90 x 40 ㎜)에 90 ㎜ filter paper(Advantec No 2, Japan) 2장을 깔고 증류수 2 mL을 처리하였다. 여기에 미세한 붓으로 부화약충 15마리씩을 접종한 후 500 mL 가정원예용 분무기를 이용하여 농도별로 살포하였다. 무처리는 살균수만을 처리 하였으며 한 개의 용기를 한 반복으로 4반복 처리하였다. 처리 후 24, 48 ,72시간 후에 소나무가루깍지벌레 부화약충의 치사유무를 해부현미경하에서 확인하였다. 생사유무는 붓으로 각 개체에 자극을 주어 반응이 없는 것은 죽은 것으로 간주하였다. 결과는 하기 [표 5]과 같았다.Hexane fractions were treated with 200 ppm and 100 ppm, 50 ppm and 25 ppm, respectively, for the pine flounder, Two 90 - mm filter papers (Advantec No 2, Japan) were placed on an insect breeding dish (90 x 40 mm) and treated with 2 mL of distilled water. Fifteen hatching eggs were inoculated with a fine brush and sprayed at a concentration of 500 mL using a home garden sprayer. Untreated was treated only with sterilized water and one container was repeated 4 times with one iteration. After 24, 48, and 72 hours after treatment, the presence or absence of lethality of the pine weevil hatching larvae was confirmed under a dissecting microscope. The presence or absence of life or death was stimulated by each individual with a brush, and those without reaction were regarded as dead. The results are shown in Table 5 below.

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[표 5]에서 사군자 메탄올추출물의 헥산분획층은 25ppm에서 73.3%의 소나무가루깍지벌레에 대한 살충효과를 나타내었으며 50ppm이상에서는 82.2% 이상의 활성을 나타내었다.
In Table 5, the hexane fraction of the methanol extracts of Sajungja showed insecticidal effect against 73.3% of pine worms at 25 ppm and more than 82.2% at over 50 ppm.

실시예 3: 깍지벌레류에 대한 사군자 헥산 분획물의 살충활성 분석 Example 3: Analysis of the insecticidal activity of the fractions of Sajunga hexane against the insect pests

실시예 2의 결과를 토대로 하여 본 발명의 실시예에서는 사군자 메탄올 추출물의 헥산 분획물을 전개하여 그들의 살충활성을 조사하였다.On the basis of the results of Example 2, the hexane fractions of the methanol extract of Sagitta mushroom were expanded in the examples of the present invention to investigate their insecticidal activity.

3-1: 사군자 헥산 분획물의 정제3-1: Purification of Safflower hexane fraction

본 발명의 위해 사용된 헥산 분획물의 정제를 위하여 사군자의 메탄올 추출물을 실리카 겔(Merck 7734, 200g)에 glass column(3㎝ x 98㎝)을 충진시킨 후 n-헥산 분획을 n-헥산에 용해시켜서 column chromatograph에 loading하였다. In order to purify the hexane fraction used for the present invention, a methanol column (Merck 7734, 200 g) of methanol extract of Sagunja was filled with a glass column (3 cm x 98 cm) and the n-hexane fraction was dissolved in n-hexane column chromatograph.

n-hexane-chloroform(CHCl3)의 용매계로 순차용출(step-wise)시켜 얻은 1024개의 활성분획을 silica gel TLC(Thin Layer Chromatography) plate에 hexane-EtOAc(8:2)를 전개용매로 얇은 유리관을 이용해 spotting 하였다. UV spectrum을 통해 TLC plate상에서 활성이 강한 부분에 UV흡수 또는 발색 spot이 생기거나, 염색제로 H2SO4을 분무하여 태웠을 때 발색 spot 발생유무를 조사하였다. 1024 active fractions obtained by step-wise elution with a solvent system of n-hexane-chloroform (CHCl 3 ) were eluted with hexane-EtOAc (8: 2) on silica gel TLC (thin layer chromatography) Lt; / RTI > The presence or absence of a coloring spot was observed when a UV-absorbing or coloring spot was formed on the active region on the TLC plate through the UV spectrum, or when H 2 SO 4 was sprayed as a dye.

이에 따라 총 10개의 그룹으로 활성분획으로 나누어 500 mL 라운드 플라스크에 옮기고 회전감압 농축기로 농축 건조시켰다. Hexane층(fr.)으로부터 각각 HS1(50 ㎎), HS2(10 ㎎), HS3(60 ㎎), HS4(330 ㎎), HS5(600 ㎎), HS6(190 ㎎), HS7(240 ㎎), HS8(70 ㎎), HS9(240 ㎎), HS10(350 ㎎) 10개의 subfraction을 얻었다.
Thus, a total of 10 groups were divided into active fractions, transferred to a 500 mL round-bottomed flask, and concentrated to dryness using a rotary vacuum concentrator. HS6 (60 mg), HS4 (330 mg), HS5 (600 mg), HS6 (190 mg), HS7 (240 mg), and HS7 (50 mg) Ten subfractions of HS8 (70 mg), HS9 (240 mg) and HS10 (350 mg) were obtained.

3-2: 깍지벌레류의 준비3-2: Preparation of interspecies

본 발명의 실험에 사용된 귤가루깍지벌레는 실험예 3에서 사용한 것과 동일한 곳에서 채집하여 실험을 수행하였다.The tangerine powder scarab beetle used in the experiment of the present invention was collected at the same place as that used in Experimental Example 3 and the experiment was conducted.

상기에서 준비된 사군자 헥산 분획물의 깍지벌레류에 대한 방제 효능을 측정하기 위하여 하기와 같은 방법으로 각각의 사군자 추출물을 소나무가루깍지벌레에 살포하여 이들의 생사유무를 통하여 검정하였다.
In order to determine the control efficacy against the insect pests of the above-prepared Sanguinehexane fractions, each of the mushroom extracts was sprayed on the pine worm pod worms in the following manner, and the presence or absence of their survival was determined.

실험예 5: 소나무가루깍지벌레에 대한 사군자 헥산 분획물 분획별 살충활성 분석Experimental Example 5: Analysis of the insecticidal activity of the fractions of Saccharomyces hexane fractions against the pine worms

Hexane 분획을 실리카 겔 크로마토그래피로 분리 정제하여 각 분획을 대상으로 깍지벌레류에 대한 살충활성을 검정하였다. 1 ㎎ 당 1 mL의 MeOH를 첨가하여 유리병에 1000 ppm의 검정시료를 만들고, vortex mixer로 균질화하였다. Hexane fractions were separated and purified by silica gel chromatography, and the insecticidal activity against the insect pests of each fraction was examined. 1 mL of MeOH per 1 mg was added to the vial to make a 1000 ppm assay sample and homogenized with a vortex mixer.

피라칸타의 귤가루깍지벌레 부화약충을 대상으로 모든 처리는 Insect breeding dish(90 x 40 ㎜)에 증류수 2 mL를 묻힌 90 ㎜ filter paper(Advantec No 2, Japan) 2장씩을 깔고, 미세한 붓으로 부화약충 15마리씩을 접종한 뒤 500 mL 가정원예용 분무기를 이용하여 100 ppm 농도로 살포하였다. 처리 24, 48 ,72시간 후에 귤가루깍지벌레 부화약충의 치사유무를 해부현미경하에서 조사하였으며 한 개의 용기를 한 반복으로 4반복으로 수행하였다. 결과는 하기 [표 6]과 같았다.All treatments were carried out on insect breeding dish (90 x 40 ㎜) of piranha of the tangerine flounder, 2 sheets of 90 mm filter paper (Advantec No 2, Japan) containing 2 mL of distilled water, Fifteen of them were inoculated and sprayed at a concentration of 100 ppm using a 500 mL domestic gardening atomizer. After 24, 48, and 72 hours of treatment, the presence or absence of lethal hatching larvae was examined under a dissecting microscope, and one vessel was repeated four times with one repetition. The results are shown in Table 6 below.

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헥산층의 10개 하위분획(sub fraction) 모두 귤가루깍지벌레에 대하여 80% 이상의 치사율을 나타내었다(표 6). 그리고 각각의 sub fraction에는 알파피넨(α-pinene), 유게놀(eugenol), 메칠팔미테이트(methyl-palmitate), 메칠미리스테이트(methyl-myristate), 팔미틱에시드(plmitic acid), 피탈릭에시드모노에스테르 (phthalic acid mono(2-ethylhexyl)ester) 등의 물질이 분리되었으며 이들 중 알파피넨의 주머니각지벌레에 대한 반수치사농도는 0.0114ppm이었다(표 6).The 10 subfractions of the hexane layer showed a mortality rate of over 80% for the orange mite worms (Table 6). And each subfraction contains alpha-pinene, eugenol, methyl-palmitate, methyl-myristate, plmitic acid, phthalic acid mono And phthalic acid mono (2-ethylhexyl) ester were isolated. Among them, the half-lethal concentration of insect pests was 0.0114 ppm (Table 6).

따라서, 사군자 메탄올추출물의 헥산층 소분획별 깍지벌레류에 대한 살충활성은 모든 분획에서 높게 나타났다.Therefore, the insecticidal activity against the insecticidal insecticides of the lower fraction of the hexane layer of the methanol extract of Sajungja was higher in all fractions.

상기의 화합물 중 어느 하나 이상의 유효성분을 함유하는 사군자 헥산층 분획물에 희석제 또는 부형제를 더 첨가하여 제조된 제제의 살충활성을 분석한 결과는 상기결과와 거의 유사한 효과를 나타냈으며, 이에 대한 실험결과는 그 기재를 생략하였다..The insecticidal activity of the preparations prepared by further adding a diluent or excipient to the fractions of the herringbone hexane containing the active ingredient of any one of the above compounds showed almost the same effect as the above results. The description is omitted.

따라서, 본 발명의 조성물은 깍지벌레류를 생물학적으로 방제할 수 있는 살충제 조성물로 유용하게 사용될 수 있음이 확인되었다.
Accordingly, it has been confirmed that the composition of the present invention can be usefully used as a pesticide composition capable of biologically controlling an insect pest.

실시예 4: 사군자 헥산층의 성분분석 Example 4: Analysis of constituents of saccharide hexane layer

실시예 3의 결과를 토대로 하여 본 발명의 실시예에서는 사군자 메탄올 추출물의 헥산 분획물 내에서 활성물질을 조사하였다.
Based on the results of Example 3, the active substance was investigated in the hexane fraction of the methanol extract of Sajungja in the examples of the present invention.

4-1: 사군자 헥산층의 성분 분석4-1: Analysis of constituents of the saccharide hexane layer

본 발명에 사용된 헥산층의 성분을 분석하기 위하여 Agilent 7890A Gas chromatography-Mass spectrometry(GC-MS)를 사용하였다. Column은 Agilent HP-5MS capillary를 사용하였으며 Library는 Wiley DB를 사용하였다. Detector는 Agilent 5975C를 사용하여 Full scan하였고 Flow rate는 He으로 유속은 0.9ml/min.으로 하였다. Oven의 온도는 [표 7]과 같았으며 측정시 시료는 HPLC용 hexane에 희석하여 auto sampler를 사용하여 sample당 1㎕씩 주입하였다. Agilent 7890A Gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) was used to analyze the components of the hexane layer used in the present invention. The column used Agilent HP-5MS capillary and the library used Wiley DB. Detector was full scan using Agilent 5975C, flow rate was He and flow rate was 0.9 ml / min. The temperature of the oven was as shown in Table 7. In the measurement, samples were diluted in hexane for HPLC and injected with 1 μl per sample using auto sampler.

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실험결과 사군자 헥산층에는 알파피넨(α-pinene,화합물Ⅰ)을 비롯하여 유게놀(eugenol,화합물Ⅱ), 메칠팔미테이트(methyl-palmitate,화합물Ⅲ), 메칠미리스테이트(methyl-myristate,화합물Ⅳ), 팔미틱에시드(plmitic acid,화합물Ⅴ), 피탈릭에시드모노에스테르(phthalic acid mono(2-ethylhexyl)ester,화합물Ⅵ)등의 물질이 분리되었다.
As a result of the experiment, it was found that the eugenol, compound Ⅱ, methyl-palmitate, methyl-myristate (compound Ⅳ), α-pinene (compound Ⅰ) , Plmitic acid (compound V), phthalic acid mono (2-ethylhexyl) ester, and compound VI were isolated.

Figure pat00008
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실험예 6: 주머니깍지벌레에 대한 사군자 헥산 분획물층으로부터 분리된 물질의 깍지벌레에 대한 살충활성 분석Experimental Example 6: Analysis of insecticidal activity against intertwined insects of a substance isolated from the fractional layer of Saccharomyces hexane against a pod intertwining worm

본 발명에서 사군자 MeOH추출물의 모든 hexane subfraction에서 분리, 동정된 α-pinene의 살충활성 검정을 위해 주머니깍지벌레를 대상으로 α-pinene을 농도별로 처리하였다. 검정 시료는 98% α-pinene(Sigma-Aldrich, USA)을 EtOH에 희석하여 100 ppm을 만든 후 증류수에 희석하여 10 ppm, 5 ppm, 1 ppm, 0.5 ppm, 0.1 ppm 을 제조하였다. Insect breeding dish(90 x 40 ㎜)에 90 ㎜ filter paper (Advantec No 2, Japan) 2장씩 깔고 검정시료 1 mL을 처리하였으며 무처리는 살균수에 EtOH 100 ppm을 혼합한 처리를 한 후 미세한 붓으로 부화약충 15마리씩을 접종하였다. 처리 24, 48 ,72시간 후에 주머니깍지벌레 부화약충의 치사유무를 해부현미경하에서 조사하였으며 한 개의 용기를 한 반복으로 4반복 수행하였다. In the present invention, α-pinene was treated by pestle worms in order to test the insecticidal activity of α-pinene isolated from all the hexane subfractions of the Sagunja MeOH extract. The test samples were diluted in EtOH to 100 ppm with 98% α-pinene (Sigma-Aldrich, USA) and diluted with distilled water to prepare 10 ppm, 5 ppm, 1 ppm, 0.5 ppm and 0.1 ppm. Two sheets of 90 mm filter paper (Advantec No 2, Japan) were placed on an insect breeding dish (90 x 40 mm) and treated with 1 mL of a test sample. Untreated was treated with a mixture of 100 ppm EtOH and a fine brush Fifteen hatching birds were inoculated. After 24, 48, and 72 hours of treatment, the presence or absence of lethal nematode hatching larvae was examined under a microscope and four replicates were performed in one container.

실험의 결과는 하기 [표 8]과 같았다. 알파피넨의 주머니각지벌레에 대한 반수치사농도는 0.0114ppm으로 활성이 매우 높았다. 도 5에 알파피넨의 GC-MS 크로마토그램을 나타내었다. The results of the experiment are shown in Table 8 below. The half - life mortality for the insect pests of the alpininen was 0.0114 ppm, which was very high. Figure 5 shows the GC-MS chromatogram of the alpha pinene.

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Claims (9)

사군자식물(Quisqualis indica) 알콜추출물에 증류수를 가한 현탁액의 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, n-부탄올의 순차적 극성용매 추출분획물.Of a plant of the genus Quisqualis ( Quisqualis indica) Sequential polar solvent extraction fractions of n-hexane, chloroform, ethyl acetate and n-butanol in a suspension of distilled water in alcohol extract. 제1항의 사군자식물의 극성용매 추출분획물 중 어느 하나를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 깍지벌레류 방제용 살충제조성물.An insecticidal composition for controlling insect pest weeds, characterized in that it contains any one of the polar solvent extract fractions of the plant of claim 1 as an active ingredient. 제1항의 사군자식물의 극성용매 추출분획물은 알파피넨, 유게놀, 메칠팔미테이트, 메칠미리스테이트, 팔미틱에시드 및 피탈릭에시드모노에스테르 중 어느 하나이상을 유효성분으로 함유하는 것이 특징인 깍지벌레류 방제용 살충제조성물.The polar solvent extract fraction of a plant of claim 1, wherein the extract fraction contains at least one of alpha pinene, yugenol, methyl palmitate, methyl myristate, palmitic acid and phthalic acid monoester as an active ingredient, Pesticide composition for controlling. 제3항에 있어서, 깍지벌레류 방제용 살충제조성물은 적어도 약학적으로 허용가능한 하나 이상의 희석제 또는 부형제를 포함하는 것이 특징인 깍지벌레류 방제용 살충제조성물.The insecticidal composition according to claim 3, wherein the insecticidal composition for controlling insect pest is comprised of at least one pharmaceutically acceptable diluent or excipient. 제4항에 있어서, 상기 희석제 또는 부형제는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수 중에서 선택되는 어느 하나이상인 것이 특징인 깍지벌레류 방제용 살충제조성물.[Claim 5] The insecticidal composition according to claim 4, wherein the diluent or excipient is at least one selected from the group consisting of water, dextrin, calcium carbonate, lactose, propylene glycol, liquid paraffin, and physiological saline. 제 5항에 있어서, 상기 조성물은 과립제(GRANULES), 로션제(LPTIONS), 방향수제(AROMATIC WATERS), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제 (OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 정제(TABLETS), 주정제(SPIRITS), 캅셀제(CAPSULES) 또는 크림제(CREAMS) 중에서 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것이 특징인 깍지벌레류 방제용 살충제조성물.6. The composition of claim 5, wherein the composition is selected from the group consisting of GRANULES, LPTIONS, AROMATIC WATERS, POWDERS, SYRUPS, LIQUIDS AND SOLUTIONS, AEROSOLS, EXTRACTS, OINTMENTS, FLUIDEXTRACTS, EMULSIONS, SUSPESIONS, TABLETS, SPIRITS, CAPSULES or CREAMS. The insecticidal composition for controlling insect pest weeds. 제1항의 추출분획물 또는 제2항의 조성물을 깍지벌레류와 접촉시키는 것을 특징으로 하는 깍지벌레류의 생물학적 방제방법.A method for biological control of an insect pest, characterized in that the extract fraction of claim 1 or the composition of claim 2 is contacted with an insect pest. 제7항에 있어서, 상기 접촉은 깍지벌레류 발생기에 상기 추출물 또는 조성물을 살포하거나 작물에 도포하는 것을 특징으로 하는 깍지벌레류의 생물학적 방제방법.8. The method according to claim 7, wherein the contact is sprayed with the extract or the composition or applied to crops to an insect insect generator. 제7항에 있어서, 상기 깍지벌레류는 깍지벌레과(Diaspididae), 밀깍지벌레과 (Coccidae), 가루깍지벌레과(Pseudococcidae), 주머니깍지벌레과(Eriococcidae), 이세리아깍지벌레과(Margarodidae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 특징인 방제방법.
The method of claim 7, wherein the pod worm acids are selected from the group consisting of pods beolregwa (Diaspididae), wheat pod beolregwa (Coccidae), powder pod beolregwa (Pseudococcidae), pocket pod beolregwa (Eriococcidae), yiseri Oh pod beolregwa (Margarodidae) . ≪ / RTI >
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