KR20140098708A - Novel starter strain and method functional fermentation foods containing kimchi use thereof - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) or Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) which is a novel starter strain and a use thereof. The novel strain according to the present invention has excellent anti-oxidant, anti-obesity, and anti-cancer activities. When a fermented foods is produced using the same as a starter strain, the produced food has excellent functionality and quality, and the number of lactobacillus contained in the food is increased. Accordingly, the strain of the present invention can be usefully used as an intestinal drug, a probiotic, a food additive, and an anti-cancer agent.

Description

신규한 스타터 균주 및 이를 이용한 김치를 포함하는 기능성 발효식품의 제조방법{Novel starter strain and method functional fermentation foods containing kimchi use thereof}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to novel starter strains and methods for producing functional fermented foods including kimchi using the novel starter strains,

신규한 스타터 균주 및 이를 이용한 김치를 포함하는 기능성 발효식품의 제조방법{Novel starter strain and method functional fermentation foods containing kimchi use thereof}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to novel starter strains and methods for producing functional fermented foods including kimchi using the novel starter strains,

여러 가지 사망원인 중 암에 의한 사망자의 증가가 두드러지고 있는데, 이의 가장 큰 원인은 식이변화를 들 수 있고, 그 중에서도 육식의 비중이 높아지고 상대적으로 채식의 비중이 낮아지는 것을 들 수 있다.Among the various causes of death, the increase in deaths due to cancer has become prominent. The most common cause of death is dietary changes, among which the proportion of carnivorous is higher and the proportion of vegetarians is relatively lower.

또한, 고지방, 고단백 식이는 담즙과 콜레스테롤의 대사에 변화를 가져올 뿐만 아니라 이들의 대사물로부터 발암인자를 생산해내는 박테리아의 대사활동을 강화시키는 것으로 알려져 있고, 육류의 섭취가 늘어나면 장내 pH의 변화로 인해 유해 세균들의 생장을 높이게 되고 발암에 관련된 효소인 베타-글루쿠로니다제, 베타-글루코시다제, 아조레턱타제, 니트로레덕타제, 트립토판나제 등을 유도하는 것으로도 알려져 있다. 그리고 상대적으로 식이 섬유소의 섭취가 줄어들게 됨으로써 이러한 유해 세균들의 배출이 원활하지 못하게 되어 장내 질병을 유발하고 더 나아가 암과 같은 심각한 상황까지 이르게 한다.In addition, high-fat and high-protein diets are known to not only alter the metabolism of bile and cholesterol, but also enhance the metabolic activity of bacteria that produce carcinogens from their metabolites. When meat intake increases, changes in intestinal pH It is known that it induces the growth of harmful bacteria and induces the carcinogenic enzymes beta-glucuronidase, beta-glucosidase, azo-tactase, nitroreducase, tryptophanase and the like. In addition, as the intake of dietary fiber is relatively reduced, the release of these harmful bacteria becomes ineffective, leading to intestinal diseases and further to serious conditions such as cancer.

한편, 최근 보고되고 있는 연구 결과에 따르면, 많은 유럽 국가 중 일부 국가에서 암의 발생 수치가 현저하게 낮은 국가들이 있었는데, 이들 국가의 공통점을 보면 일반적으로 발효식품들을 많이 섭취하는 국가들이었으며, 특히 핀란드, 불가리아의 경우 요구르트 등 발표식품의 섭취가 많기 때문에 암 발생률이 현저하게 낮아진다는 보고가 있었다.On the other hand, according to the results of a recent study, there were countries where the incidence of cancer was remarkably low in some of the European countries. In common, these countries generally consumed a large amount of fermented foods, , And in Bulgaria it is reported that the incidence of cancer is significantly lowered because of the high intake of foods such as yogurt.

또한, 우리나라의 경우도 대표적인 젖산균 발효 식품인 김치를 국민의 대부분이 섭취하고 있어 다른 나라에 비해 암 발생율이 낮은 것으로 보고된 바 있으며,이러한 김치에는 류코노스톡, 락토바실러스, 스트렙토코커스, 페디오코커스 등과 같은 젖산균이 함유되어 있다. 이러한 유익한 젖산균은 장내 pH를 낮춰 유해 미생물 및 병원성 미생물의 성장을 억제하는 정장 효과를 가지고 있는 것으로 알려져 있고, 발암성 전구물질을 발암성 물질로 전환시키는 효소들의 활성을 억제하는 효과가 있다는 사실도 보고되고 있다.In Korea, most of the people consumed kimchi, which is a typical fermented lactic acid bacteria fermented food, and it has been reported that the incidence of cancer is lower than those of other countries. Such kimchi includes luchonostock, lactobacillus, streptococcus, And lactic acid bacteria are contained. These beneficial lactic acid bacteria have been known to have a sweetening effect that suppresses the growth of harmful microorganisms and pathogenic microorganisms by lowering the pH of the intestines. It is also reported that the effect of inhibiting the activity of enzymes that convert carcinogenic precursors to carcinogenic substances .

비만(肥滿, obesity) 또는 비만증이란 사람의 몸무게가 지나치게 나가는 것을 통틀어 부르는 낱말로서 병리학적으로는 세계 보건 기구 (WHO)에서 정한 체질량 지수(BMI: Body Mass Index)가 30 이상인 경우에 비만증이라고 일컫는다. 비만은 그 자체로는 문제가 되지 않는다. 그러나 문제는 비만으로부터 야기될 수 있는 사회적 장애와, 과다한 지방으로 생기는 2차적인 합병증이다. 비만은 고지혈증, 고혈압, 동맥경화, 당뇨병, 지방간, 관절 이상의 발생비율을 현저하게 증가시킨다.Obesity or obesity is a term that refers to overweighting a person's body weight. It is pathologically referred to as obesity if the Body Mass Index (BMI) defined by the World Health Organization is over 30 . Obesity is not a problem in itself. However, the problem is the social obstacles that can result from obesity and the secondary complications of excessive fat. Obesity significantly increases the incidence of hyperlipidemia, hypertension, arteriosclerosis, diabetes, fatty liver and joints.

비만의 원인은 다인성으로 이해되고 있으며, 과도한 지방 조직의 존재하는 경우는 영양의 이용율과 에너지 소비의 불균형으로 초래되는 것이 가장 큰 원인이 된다. 중추 신경계 (CNS)는 에너지 균형을 제어하고, 동물의 대사 상태에 적절한 다양한 행동, 자율신경 및 내분비 활성을 조정하게 되며, 항비만제의 주된 조절 작용점이 된다.The cause of obesity is understood to be multifactorial, and in the presence of excessive fat tissue, it is caused by the imbalance of nutrient utilization and energy consumption. The central nervous system (CNS) regulates energy balance, modulates various behaviors, autonomic and endocrine activities appropriate to the metabolic state of an animal, and is a major regulatory point of action for anti-obesity agents.

따라서 최근에는 이러한 젖산균을 이용하여 생체 유용한 기능을 갖는 기능성발효식품을 개발하려는 연구가 시도되고 있다.Therefore, in recent years, studies have been made to develop functional fermented foods having useful functions in vivo using such lactic acid bacteria.

대한민국 특허출원 2007-0030016Korea patent application 2007-0030016

이에 본 발명자들은 김치를 포함하는 발효식품의 제조 시 스타터 균주로 사용할 경우, 항산화 활성, 항비만 활성 및 항암 활성이 우수할 뿐만 아니라 관능미가 우수한 기능성 발효식품을 제조할 수 있는 신규한 유산균을 분리 및 동정한 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have found that when a fermented food including kimchi is used as a starter strain, the novel lactic acid bacteria capable of producing a functional fermented food having excellent antioxidative activity, anti-obesity activity and anticancer activity, The present invention has been accomplished by ascertaining the facts identified.

따라서 본 발명의 목적은 발효 식품의 스타터로 사용할 수 있는 신규한 균주인 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 또는 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)를 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel strain Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) or Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) which can be used as a starter of fermented food.

본 발명의 다른 목적은 상기 신균주를 포함하는 발효식품 제조를 위한 스타터를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a starter for producing fermented food including the new strain.

본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 스타터를 이용하여 발효식품을제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 발효식품을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for producing a fermented food using the starter according to the present invention and a fermented food prepared by the method.

본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명에 따른 신균주 또는 이의 배양물을 함유하는 식품첨가용 조성물 또는 프로바이오틱스, 또는 상기 프로바이오틱스를 포함하는 유산균 제제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a food additive composition or a probiotic containing the novel strain or the culture thereof according to the present invention, or a lactic acid bacterial preparation containing the probiotic.

본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명에 따른 신균주 또는 이의 배양물을 함유하는 비만 또는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing and treating obesity or cancer containing the novel strain or the culture thereof according to the present invention.

본 발명의 다른 목적은 절인배추 100에 대해 고춧가루 3.0~4.0중량부, 마늘 1.0~2.0중량부, 생강 0.3~10중량부, 젓갈 2.0~2.5중량부, 무 10~15중량부, 설탕 0.5~1.5중량부, 파 1.5~2.5중량부 및 배 2.0~3.5중량부를 포함하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a Chinese cabbage which comprises 3.0 to 4.0 parts by weight of red pepper powder, 1.0 to 2.0 parts by weight of garlic, 0.3 to 10 parts by weight of ginger, 2.0 to 2.5 parts by weight of salted fish, 10 to 15 parts by weight, And 1.5 to 2.5 parts by weight of parasites and 2.0 to 3.5 parts by weight of pears.

본 발명의 다른 목적은 절인배추 100에 대해 고춧가루 2.0~3.0중량부, 마늘 2.5~3.5중량부, 생강 0.3~10중량부, 무 8~15중량부, 설탕 0.5~1.5중량부, 파 1.5~2.5중량부, 녹차 6.0~8.5중량부, 산초 0.5~1.5중량부, 배 2.0~3.5중량부, 버섯다시마물 25~45중량부 및 겨우살이 추출물 0.025~0.075중량부를 포함하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치. Another object of the present invention is to provide a Chinese cabbage which comprises 2.0 to 3.0 parts by weight of red pepper powder, 2.5 to 3.5 parts by weight of garlic, 0.3 to 10 parts by weight of ginger, 8 to 15 parts by weight of sugar, 0.5 to 1.5 parts by weight of sugar, Which has an anticancer activity or an anti-obesity activity comprising 6.0 to 8.5 parts by weight of a green tea, 0.5 to 1.5 parts by weight of an acidic sieve, 2.0 to 3.5 parts by weight of a pear, 25 to 45 parts by weight of a mushroom remnant and 0.025 to 0.075 part by weight of a mistletoe extract Kimchi.

나아가 본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명에 따른 신균주로부터 프로바이오틱스를 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
It is another object of the present invention to provide a method for producing probiotics from the novel strains according to the present invention.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 신균주인 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P)를 제공한다. To achieve the above object, the present invention provides a novel strain, Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P).

또한 본 발명은 신균주인 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)를 제공한다.The present invention also provides a novel strain, Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P).

또한 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 발효식품 제조를 위한 스타터를 제공한다. The present invention also provides a starter for fermented food product comprising at least one selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) and Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) to provide.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 스타터는 분말형태일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the starter may be in powder form.

또한 본 발명은 상기 본 발명에 따른 스타터를 이용하여 발효식품을 제조하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing a fermented food using the starter according to the present invention.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 발효식품은 김치, 오이, 무, 당근, 양파, 마늘, 고추 또는 갓일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the fermented food may be kimchi, cucumber, radish, carrot, onion, garlic, pepper or mustard.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 발효식품은 녹차를 더욱 포함하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the fermented food may further comprise green tea.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 방법으로 제조된 발효식품을 제공한다.The present invention also provides a fermented food prepared by the method of the present invention.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 발효식품은 항산화 활성, 항비만 활성 및 항암 활성을 갖는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the fermented food may have an antioxidant activity, an anti-obesity activity and an anticancer activity.

또한 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 또는 이의 배양물을 함유하는 식품첨가용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a food additive composition containing Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) or a culture thereof.

또한 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 또는 이의 배양물을 함유하는 프로바이오틱스(probiotics)를 제공한다.The present invention also provides probiotics containing Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) or a culture thereof.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 프로바이오틱스(probiotics)를 유효성분으로 포함하는 유산균 제제를 제공한다.The present invention also provides a lactic acid bacterial preparation comprising the probiotics of the present invention as an active ingredient.

또한 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 및 이의 배양물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 함유하는 비만 또는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also relates to a method for the treatment or prophylaxis of obesity or cancer which comprises any one or more selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 녹차를 더욱 포함하는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the composition may further comprise green tea.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 암은 결장암일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the cancer may be colon cancer.

또한 본 발명은 절인배추 100에 대해 고춧가루 3.0~4.0중량부, 마늘 1.0~2.0중량부, 생강 0.3~10중량부, 젓갈 2.0~2.5중량부, 무 10~15중량부, 설탕 0.5~1.5중량부, 파 1.5~2.5중량부 및 배 2.0~3.5중량부를 포함하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치를 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a Chinese cabbage, comprising the steps of: 3.0 to 4.0 parts by weight of red pepper powder, 1.0 to 2.0 parts by weight of garlic, 0.3 to 10 parts by weight of ginger, 2.0 to 2.5 parts by weight of salted fish, 10 to 15 parts by weight, , 1.5 to 2.5 parts by weight of a safflower, and 2.0 to 3.5 parts by weight of a pear, with an anticancer activity or an anti-obesity activity.

또한 본 발명은 절인배추 100에 대해 고춧가루 2.0~3.0중량부, 마늘 2.5~3.5중량부, 생강 0.3~10중량부, 무 8~15중량부, 설탕 0.5~1.5중량부, 파 1.5~2.5중량부, 녹차 6.0~8.5중량부, 산초 0.5~1.5중량부, 배 2.0~3.5중량부, 버섯다시마물 25~45중량부 및 겨우살이 추출물 0.025~0.075중량부를 포함하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치를 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a Chinese cabbage, comprising the step of adding 2.0 to 3.0 parts by weight of red pepper powder, 2.5 to 3.5 parts by weight of garlic, 0.3 to 10 parts by weight of ginger, 0.5 to 1.5 parts by weight of sugar, 1.5 to 2.5 parts by weight of sugar, , Green tea 6.0 to 8.5 parts by weight, acidulant 0.5 to 1.5 parts by weight, pear 2.0 to 3.5 parts by weight, mushroom remnant 25 to 45 parts by weight and mistletoe extract 0.025 to 0.075 part by weight. to provide.

나아가 본 발명은, 상기 본 발명에 따른 신균주를 배양하는 단계; 및 배양한 상기 균주가 생산하는 프로바이오틱스를 수득하는 단계를 포함하는 프로바이오틱스를 생산하는 방법을 제공한다. Further, the present invention provides a method for culturing a new strain according to the present invention; And obtaining probiotics produced by the cultivated strains. The present invention also provides a method for producing probiotics.

본 발명에 따른 상기 신규한 균주인 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 또는 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)는 항산화 활성이 우수하고 항암 활성이 우수할 뿐만 아니라, 이를 스타터 균주로 사용하여 발효식품을 제조할 경우, 제조된 식품의 관능미 및 품질이 우수하고, 식품 내 함유된 유산균수를 증가시키는 효과가 있어, 정장제, 생균제, 식품첨가제 및 항암제의 용도로 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다. The novel strain Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) or Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) according to the present invention has excellent antioxidant activity and excellent anticancer activity, When the fermented food is prepared using the starter as a starter strain, the produced food is excellent in sensuality and quality, and has an effect of increasing the number of lactic acid bacteria contained in the food. Therefore, the fermented food is useful as a formulating agent, a probiotic agent, a food additive and an anticancer agent There is an effect that can be used.

도 1은 각각의 스타터 균주를 사용하여 제조된 김치를 대상으로 저장 시간 별 김치의 pH 변화를 측정한 것을 그래프로 나타낸 것으로서, K-Standard 는 스타터 균주를 첨가하지 않고 제조된 김치를 나타낸 것이며, 도 1을 포함한 모든 도면에서 각 처리군에 대한 표기 사항이 의미하는 바는 다음과 같다.
“K - LP PNU” : Lactobacillus plantarum PNU을 스타터로 첨가하여 제조한 김치
“K - LP 3099”: Lactobacillus plantarum 3099을 스타터로 첨가하여 제조한 김치
“K - LM PNU” : Leuconostoc mesenteroides을 스타터로 첨가하여 제조한 김치
“K - LP PNU/LM PNU” : Lactobacillus plantarum PNU와 Leuconostoc mesenteroides을 혼합하여 스타터로 첨가하여 제조한 김치
“K - LP 3099/LM PNU” : Lactobacillus plantarum 3099와 Leuconostoc mesenteroides을 혼합하여 스타터로 첨가하여 제조한 김치
“K- Standard” : 스타터를 첨가하지 않고 제조한 김치(대조군)
도 2는 각각의 스타터 균주를 사용하여 제조된 항암스타터김치를 대상으로 저장 시간 별 산도의 변화를 측정한 것을 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 각각의 스타터 균주를 사용하여 제조된 항암스타터김치를 대상으로 저장 시간 별 탄력성의 변화를 측정한 것을 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 각각의 스타터 균주를 사용하여 제조된 항암스타터김치의 관능미를 각 항목당 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치 내에 함유된 총 균수를 저장 시간에 따라 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치 내에 함유된 젖산균 중 락토바실러스 속 균수를 저장 시간에 따라 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치 내에 함유된 젖산균 중 류코노스톡 속 균수를 저장 시간에 따라 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치의 DPPH 라디칼 소거능 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치의 메탄올 추출물을 대장암 세포주인 HT-29 세포에 처리한 후, 염증 관련 유전자인 iNOS 유전자의 발현 억제 정도를 RT-PCR을 수행하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치의 메탄올 추출물을 대장암 세포주인 HT-29 세포에 처리한 후, 염증 관련 유전자인 COX-2 유전자의 발현 억제 정도를 RT-PCR을 수행하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치의 항암 활성을 확인하기 위해 마우스 동물모델을 대상으로 한 실험진행 일정을 나타낸 것이다.
도 12는 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치를 섭취하게 한 후, 마우스 동물모델을 대상으로 대장을 적출한 후, 종양 수를 측정하여 분석한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 13은 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치에 의해 지방세포 분화를 저해하는 정도를 알아보기 위하여 Oil-red O 염색을 한 후 염색된 세포를 현미경으로 관찰한 결과이다.
도 14는 각각의 스타터 균주를 사용하여 발효시켜 제조된 항암스타터김치가 지방세포에 미치는 영향을 확인하기 위해 처리된 지방세포의 크기 및 수를 계측한 결과이다.
도 15는 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 pH 및 산도를 측정하기 위해 pH 메터로 측정한 결과이다.
도 16은 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 총균 및 유산균 수를 평판계수법(plate count technique)을 이용하여 측정한 결과이다.
도 17은 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 관능성을 평가한 결과이다.
도 18은 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 DPPH radical 소거능을 측정한 결과이다.
도 19는 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항암효과를 확인하기 위해 HT-29 인체 대장암 세포배양에서 효과를 측정한 결과이다.
도 20은 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만효과를 확인하기 위해 Oil-red O 염색법을 이용하여 3T3-L1 지방세포의 크기를 측정한 결과이다.
도 21은 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만효과를 확인하기 위해 트리글리세라이드(triglyceride)의 축적을 저해하는 효과를 측정한 결과이다.
도 22는 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만 효과를 확인하기 위해 C57BL/6J 마우스에서 동물실험을 진행한 결과로서, C57BL/6J 마우스의 체중을 측정한 결과이다.
도 23은 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만 효과를 확인하기 위해 C57BL/6J 마우스에서 지방세포를 적출하여 지방무게를 측정한 결과이다.
도 24는 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만 효과를 확인하기 위해 혈청에서 TC, TG, LDL, glucose의 농도를 측정한 결과이다.
도 25는 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만 효과를 확인하기 위해 혈청에서 adiponectin과 Leptin을 측정한 결과이다.
도 26은 산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK) 및 항암녹차스타터김치(AKS)의 항비만 효과를 확인하기 위해 간 조직에서 SREBP-1c, C/EBPα 및 PPARγ의 mRNA를 분석한 결과이다.FIG. 1 is a graph showing a change in the pH of kimchi measured at different storage times for kimchi prepared using each starter strain. K-Standard shows a kimchi prepared without starter strain, The notation for each treatment group in all the drawings including 1 implies the following.
"K - LP PNU": Lactobacillus plantarum PNU as starter
&Quot; K-LP 3099 ": A kimchi prepared by adding Lactobacillus plantarum 3099 as a starter
"K - LM PNU": Leuconostoc mesenteroides as a starter
"K - LP PNU / LM PNU": A mixture of Lactobacillus plantarum PNU and Leuconostoc mesenteroides,
"K-LP 3099 / LM PNU": A mixture of Lactobacillus plantarum 3099 and Leuconostoc mesenteroides as a starter
&Quot; K-Standard ": Kimchi prepared without starter (control group)
FIG. 2 is a graph showing changes in acidity by storage time of anti-cancer starter kimchi prepared using each starter strain.
FIG. 3 is a graph showing changes in resilience according to storage time of anticancer starter kimchi prepared using each starter strain.
Fig. 4 shows the results of evaluating the sensuality of the anti-cancer starter kimchi manufactured using each starter strain per item.
5 shows the results of measurement of the total number of bacteria contained in the anti-cancer starter kimchi prepared by fermentation using each starter strain according to storage time.
6 shows the results of measurement of the number of lactobacillus bacteria in the lactic acid bacteria contained in the anti-cancer starter kimchi prepared by fermentation using each starter strain.
FIG. 7 shows the results of measurement of the number of bacteria in the genus Lukono Stokes among the lactic acid bacteria contained in the anti-cancer starter kimchi prepared by fermentation using the respective starter strains.
FIG. 8 shows the results of measurement of DPPH radical scavenging activity of anti-cancer starter kimchi prepared by fermentation using each starter strain.
9 is a graph showing the results of the RT-PCR of the methanol extract of anti-cancer starter kimchi fermented by using each starter strain on the HT-29 cells as a colorectal cancer cell line, The results are shown in FIG.
10 is a graph showing the degree of suppression of the expression of COX-2 gene, an inflammation-related gene, by RT-PCR after HT-29 cells, which are colon cancer cell lines, were treated with methanol extract of anti-cancer starter kimchi prepared by fermentation using each starter strain The results are shown in Fig.
Fig. 11 shows the schedule of the experiment for the mouse animal model to confirm the anticancer activity of the anti-cancer starter kimchi prepared by fermentation using each starter strain.
Fig. 12 is a graph showing the results of analysis of tumor counts after ingesting anticancer starter kimchi prepared by fermentation using each starter strain, and then collecting large intestine from a mouse animal model.
FIG. 13 shows results of microscopic observation of stained cells after oil-red O staining in order to examine the extent of inhibition of adipocyte differentiation by anti-cancer starter kimchi fermented using each starter strain.
FIG. 14 shows the results of measurement of the size and number of the treated fat cells in order to confirm the effect of the anti-cancer starter kimchi fermented using each starter strain on adipocytes.
FIG. 15 is a result of pH meter measurement to measure pH and acidity of standardized Kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University.
FIG. 16 shows the results of measurement of the number of germs and lactic acid bacteria of the standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University using the plate count technique.
FIG. 17 shows the results of evaluating the sensory properties of standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University.
18 shows the results of measurement of DPPH radical scavenging activity of standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University.
FIG. 19 shows the results of measuring the effect of HT-29 human colon cancer cell culture in order to confirm anticancer effects of standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starter kimchi (AKS) of Pusan National University.
20 shows the measurement of the size of 3T3-L1 adipocytes using Oil-red O staining method to confirm the anti-obesity effect of standardized kimchi (SK), cancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) This is a result.
21 shows the results of measuring the effect of inhibiting the accumulation of triglyceride in order to confirm the anti-obesity effect of standardized Kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University.
22 shows the results of animal experiments in C57BL / 6J mice to confirm anti-obesity effects of standardized kimchi (SK), cancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) Of body weight.
FIG. 23 is a result of measuring fat mass by extracting adipocytes from C57BL / 6J mice to confirm anti-obesity effects of standardized Kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) .
24 shows the results of measurement of TC, TG, LDL and glucose concentrations in serum to confirm anti-obesity effects of standardized kimchi (SK), cancer green tea kimchi (AK) and cancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University.
25 shows the results of measurement of adiponectin and Leptin in serum to confirm anti-obesity effect of standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) of Pusan National University.
26 shows the results of analysis of mRNA of SREBP-1c, C / EBPa and PPARγ in liver tissues in order to confirm anti-obesity effects of Kimchi (SK), cancer green tea kimchi (AK) and cancer green tea starch kimchi Results.

본 발명은 발효식품 제조시 사용할 수 있는 스타터 균주로서 신균주인 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)를 제공함에 그 특징이 있다.The present invention is characterized by providing Lactobacillus plantarum PNU (KCCM 11352P) and Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM 11353P) as starter strains which can be used in fermented food production .

본 발명에서 제공하는 신균주인 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 또는 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 균주는 발효식품의 제조시 스타터로 사용할 경우, 발효 초기부터 유산균이 풍부하여 숙성 과정에서 발효가 적절하게 일어나도록 하는 효과를 갖는다.The new strain Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) or Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P), which is a new strain provided in the present invention, can be used as a starter in the production of fermented foods from the beginning of fermentation It is rich in lactic acid bacteria, so that fermentation can be appropriately performed in the fermentation process.

본 발명의 일실시예에 따르면, 대표적인 발효식품 중 하나인 김치의 제조에 본 발명의 상기 균주를 스타터로 사용한 결과, 제조된 김치의 pH의 감소 속도와 산도 증가 속도가 스타터를 사용하지 않은 군 및 다른 종류의 스타터를 사용한 군에 비해 발효가 빠르게 진행되는 것으로 나타났다(도 1 및 도 2 참조). 뿐만 아니라, 이렇게 빠른 발효 과정에도 불구하고 본 발명의 스타터 균주로 제조된 김치의 경우 다른 군들에 비해 탄력성이 우수하고, 관능미가 우수한 것으로 나타났다(도 3 및 도 4 참조).According to one embodiment of the present invention, as a result of using the strain of the present invention as a starter in the production of kimchi, which is one of the representative fermented foods, the rate of decrease in pH and the rate of increase in acidity of the prepared kimchi, The fermentation speed was faster than that in the group using other kinds of starters (see Fig. 1 and Fig. 2). In addition, despite the rapid fermentation process, kimchi prepared with the starter strain of the present invention exhibited superior elasticity and superior sensuality than the other groups (see FIGS. 3 and 4).

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명에서 분리 및 동정한 상기 균주들을 발효식품의 제조에 스타터로 사용하여 발효시킬 경우, 관능미가 개선된 우수한 품질의 식품을 제조할 수 있다는 것을 알 수 있었다.Accordingly, the inventors of the present invention have found that when the above strains isolated and identified in the present invention are fermented by using them as a starter in the production of fermented foods, excellent quality foods with improved sensuality can be produced.

참고로 본 발명에서 용어 “스타터(starter)"란 식품의 발효에 관여하는 미생물을 포함하는 제제로, 발효식품 제조 시 첨가함으로써 숙성된 식품에서 지배적으로 생장하는 미생물을 말하며, 본 발명의 목적상 스타터란, 발효 식품의 맛을 일정하게 조절하게 할 뿐만 아니라 우수한 관능미를 가질 수 있도록 제공하는 미생물, 즉, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 또는 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)를 필수적으로 포함하는 제제를 의미한다.In the present invention, the term " starter " refers to a microorganism that participates in the fermentation of food, and refers to a microorganism that predominantly grows in the fermented food by adding it to the fermented food. Refers to microorganisms such as Lactobacillus plantarum PNU (KCCM 11352P) or Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM 11352P) which provide not only a constant control of the taste of the fermented food but also an excellent sensuality, (KCCM11353P). ≪ / RTI >

또한, 본 발명에 따른 상기 스타터는 액상 제제, 분말 제제 등으로 제형화 할 수 있으며, 바람직하게는 분말제제로 사용할 수 있다. 이는 스타터 미생물 균주를 발효 식품에 첨가하는 경우 균 배양액에서 분리한 젖은 형태의 균체를 첨가하는 것이 일반적이지만 액상 제형은 보관이 어렵고 유통 중 품질유지가 어려워 이를 상품으로 유통시키기 어려운 단점이 있으나, 분말 제제는 공급, 품질 유지 및 사용이 용이하다는 장점이 있다. 따라서 이러한 분말 제제는 배양된 각각의 균주를 원심분리 등의 방법으로 수집하여 동결 건조시켜 수득할 수 있다. In addition, the starter according to the present invention can be formulated into a liquid preparation, a powder preparation and the like, and can be preferably used as a powder preparation. When the starter microorganism strain is added to the fermented food, it is common to add wetted cells separated from the bacterial culture liquid. However, since the liquid formulation is difficult to maintain and difficult to maintain its quality during distribution, Has the advantage of being easy to supply, maintain and use. Therefore, these powder preparations can be obtained by collecting the cultured strains by centrifugation or the like and lyophilizing them.

또한, 본 발명에서 제공하는 신균주는 이를 이용하여 제조된 발효식품 내에서 체내 유용한 유산균의 수를 증가시키는 활성을 갖는 특징이 있다.In addition, the novel strain provided by the present invention has an activity of increasing the number of lactic acid bacteria useful in the fermented food produced by using the novel strain.

본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 균주를 이용하여 제조된 김치 내에서 유산균으로 알려진 락토바실러스 속 균주와 류코노스톡속 균주의 총수가 대조군에 비해 유의적으로 증가한 것으로 나타났다.According to one embodiment of the present invention, the total number of Lactobacillus sp. And L. cannabis strains known as lactic acid bacteria in the kimchi prepared using the strain of the present invention was significantly increased as compared with the control.

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명의 신균주는 정장용 조성물의 용도로도 유용하게 사용할 수 있는 특징이 있다.Therefore, the novel strain of the present invention can be advantageously used as a composition for a dressing.

나아가 본 발명에 따른 상기 신균주는 우수한 항산화 활성을 갖는 특징이 있는데, 즉 본 발명의 일실시예에 따르면 본 발명의 신균주를 사용하여 제조된 김치 추출물이 다른 종류의 스타터 균주 및 스타터 균주를 사용하지 않고 제조된 김치 추출물 보다 DPPH 라디칼 및 히드록실 라디칼 소거 활성이 우수한 것으로 나타났다(도 8 및 표 1 참조).Furthermore, the novel strain according to the present invention has an excellent antioxidative activity. That is, according to one embodiment of the present invention, the kimchi extract prepared using the novel strain of the present invention can be used as a starter strain or a starter strain The DPPH radical and the hydroxyl radical scavenging activity were superior to those of the Kimchi extract prepared without the enzyme (see FIG. 8 and Table 1).

일반적으로 활성산소는 호기성 생물이 이용하는 산소분자가 산화과정에 이용되면서 여러 대사과정에서 생성되어 조직을 공격하고 세포를 손상시키는 산화력이 강한 산소를 말하는 것으로서, 혈액순환 장애, 환경오염, 스트레스 등이 원인으로 추정된다. 수퍼옥시드음이온, 과산화효소, 히드록실라디칼, 일중항산소등이 활성산소종에 포함되며, 이중 히드록실 라디칼은 화학적 반응이 크며 생체 내의 산화원인이 되어 DNA에 손상을 주거나 돌연변이를 유발하는 물질로 알려져 있다.In general, active oxygen is oxygen that is used in the oxidation process of aerobic organisms, which is generated in various metabolic processes, attacking tissues and damaging cells. Oxygen is a strong oxidative energy. It is caused by blood circulation disorder, environmental pollution, stress Respectively. Hydroxyl radicals, and singlet oxygen are included in the active oxygen species, and hydroxyl radicals are chemical reactions that cause oxidation in the living body and cause DNA damage or mutagenesis. It is known.

따라서 이들 활성산소를 소거하는 물질의 경우, 활성 산소로 인해 유발되는 각종 질환을 예방 및 치료할 수 있는 의약품의 소재로 개발될 수 있다.Therefore, in the case of a substance scavenging these active oxygen, it can be developed as a material for pharmaceuticals which can prevent and treat various diseases caused by active oxygen.

이러한 점에서 볼 때 본 발명에서 동정한 신균주는 활성산소 소거능이 우수하여 상기 신균주를 식품의 제조에 사용할 경우, 항산화 활성이 우수한 발효식품을 제조할 수 있다.From this point of view, the new strain identified in the present invention has excellent ability to scavenge active oxygen, so that when the new strain is used for the production of food, a fermented food having excellent antioxidative activity can be produced.

또한 본 발명에서 제공하는 상기 신균주는 우수한 항암 활성을 갖는 특징이 있다. 본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 신균주를 이용하여 제조된 김치 추출물을 인간 결장암 세포주에 농도별로 처리한 결과, 처리 농도에 비례하여 암 세포의 성장이 저해되는 것으로 나타났고(표 2 참조), 나아가 염증 관련 유전자인 iNOS 및 COX-2의 유전자 발현도 저해하는 것으로 나타났다(도 9 및 도 10 참조).In addition, the new strain provided by the present invention has an excellent anticancer activity. According to one embodiment of the present invention, the kimchi extract prepared by using the new strain was treated by concentration in human colon cancer cell line, and the cancer cell growth was inhibited in proportion to the treatment concentration (see Table 2) , And further inhibited gene expression of inflammation-related genes iNOS and COX-2 (see FIGS. 9 and 10).

참고로 염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어목적으로 나타나는 상처나 질병에 반응하는 인체의 면역 반응으로, 자외선이나 활성산소, 스트레스 등이 염증성 인자를 활성화시켜 각종 질병 및 피부의 노화를 일으킨다. Inflammation is an immune response in the body that responds to a wound or disease that is caused by a series of defenses that minimize the reaction of a cell or tissue to any cause and restore the damaged area to its original state. Stress and the like activate inflammatory factors and cause various diseases and skin aging.

염증의 특징 중 하나는 프로스타글란딘을 생성하는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase; COX) 및 류코트리엔(leukotriene)을 생성하는 5-리폭시게나제(5-lipoxygenase) 경로에 의해 대사되는 아라키돈산(arachidonic acid)의 산소첨가반응의 증가이다. 프로스타글란딘 및 류코트리엔은 염증의 매개체이다. 따라서 COX 또는 리폭시게나제 활성 억제는 큰 관심사이다. COX 효소는 COX-1 및 COX-2의 2개의 형태가 있으며 COX-2가 염증 진행에 중요한 역할을 하는 것으로 보고되고 있다. One of the features of inflammation is the oxygen of the arachidonic acid metabolized by the 5-lipoxygenase pathway, which produces cyclooxygenase (COX) and leukotriene to produce prostaglandins It is an increase of addition reaction. Prostaglandins and leukotrienes are mediators of inflammation. Thus inhibition of COX or lipoxygenase activity is of great concern. The COX enzyme has two forms, COX-1 and COX-2, and COX-2 has been reported to play an important role in the progression of inflammation.

따라서 COX-2 효소를 억제하는 것이 비가역적인 COX-1 억제와 관련된 부작용 없이 염증을 감소시킬 수 있는 효과적인 방법일 수 있다[Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 2003 Nov;69(5):329-37, Neurosurgery. 2005 Mar;56(3):590-604]. Thus, inhibition of COX-2 enzymes can be an effective way to reduce inflammation without the side effects associated with irreversible COX-1 inhibition [Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 2003 Nov; 69 (5): 329-37, Neurosurgery. 2005 Mar; 56 (3): 590-604).

또한, 다른 하나의 강력한 염증 매개물인 나이트릭옥사이드(Nitric Oxide; NO)는 NO 합성 효소인 나이트릭옥사이드신타제(Nitric Oxide synthase; NOS)에 의해 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 생성되며 UV와 같은 스트레스나 엔도톡신, 사이토카인에 의해 많은 타입의 세포에서 발생된다. 이러한 염증 자극들은 세포내의 유도성 NOS(inducible NOS; iNOS)의 발현을 증가시킴으로 NO를 발생시키고 대식세포를 활성화시켜 염증 반응을 일으키며 이러한 염증 반응은 암의 진행을 가속화 시킨다.Another powerful inflammatory mediator, nitric oxide (NO), is produced from L-arginine by Nitric Oxide synthase (NOS), the NO synthase, It occurs in many types of cells by the same stress or endotoxin, cytokine. These inflammatory stimuli increase the expression of inducible NOS (iNOS) in the cell, thereby inducing NO, activating macrophages, causing an inflammatory reaction, which accelerates the progression of cancer.

이러한 점에서 볼 때 본 발명은 본 발명에서 분리 및 동정한 상기 신균주들을 스타터로 이용하여 발효식품을 제조하는 방법을 제공할 수 있으며, 이러한 방법으로 제조된 발효식품은 항산화 활성, 항비만 활성 및 항암 활성을 가지고 있는 기능성 식품일 수 있다. From this point of view, the present invention can provide a method for producing a fermented food using the new strains isolated and identified in the present invention as a starter, and the fermented food produced by this method has antioxidant activity, It may be a functional food having anticancer activity.

본 발명에서 상기 발효식품은 이에 제한되지는 않으나, 김치, 오이, 무, 당근, 양파, 마늘, 고추 또는 갓 일 수 있다.In the present invention, the fermented food may be, but not limited to, kimchi, cucumber, radish, carrot, onion, garlic, pepper or mustard.

따라서 본 발명의 신균주는 인간 및 동물의 건강증진을 위한 용도, 즉 정장용 조성물, 생균제(프로바이오틱스) 조성물 또는 유산균 제제로 사용될 수 있다. 상기 조성물 또는 제제는 본 발명의 신균주의 파쇄된 세포벽 분획, 생균, 사균, 건조균 또는 배양물을 유효성분으로 포함할 수 있으며, 부형제 또는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기 배양물은 액체배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균주를 제거한 여액(원심분리한 상등액)등을 포함한다. 조성물 내 신균주의 함량은 조성물의 용도 및 제형에 따라 달라질 수 있다. 본 발명에 따른 정장용 또는 생균제 조성물은 다양한 제형과 방법으로 제조 및 투여될 수 있다. 예를 들어, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 또는 이의 배양물을 약제학적 분야에서 통상적으로 사용하는 담체 및 향료와 혼합하여 정제(tablet), 트로키(troche), 캡슐(capsule), 엘릭실(elixir), 시럽(syrup), 산제(powder), 현탁제(suspension) 또는 과립제(granule) 등의 형태로 제조 및 투여될 수 있다. 상기 담체로는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제 등을 사용할 수 있다. 투여방식은 경구, 비경구 또는 도포법을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 경구투여하는 것이 바람직하다. 또한, 투여용량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 피투여자의 연령, 성별, 상태 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. Therefore, the novel strain of the present invention can be used for the health promotion of humans and animals, that is, as a composition for a dressing, a probiotics composition or a lactic acid bacterial preparation. The composition or preparation may contain a crushed cell wall fraction, a live cell, a dead cell, a dried bacterium or a culture of the novel strain of the present invention as an active ingredient, and may further include an excipient or a carrier. The culture includes a culture medium itself cultured in a liquid medium, a filtrate (centrifuged supernatant) obtained by removing the strain by filtration or centrifugation of the culture medium, and the like. The content of the new strain in the composition may vary depending on the use of the composition and the formulation. The dressing or probiotic composition according to the present invention can be manufactured and administered in a variety of formulations and methods. For example, Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) or cultures thereof are mixed with carriers and flavoring agents commonly used in the pharmaceutical field May be prepared and administered in the form of tablets, troches, capsules, elixirs, syrups, powders, suspensions or granules, and the like. . Examples of the carrier include binders, lubricants, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents and the like. The administration method may be oral, parenteral or application, but is preferably orally administered. The dose may be appropriately selected depending on the degree of absorption, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, age, sex, condition, etc. of the subject.

또한 본 발명은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 또는 이의 배양물을 함유하는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다. The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of cancer comprising Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) or a culture thereof .

또한, 본 발명에 따른 상기 신균주 또는 이의 배양물은 김치, 음료, 이유식, 유제품 등의 식품에 대한 식품첨가제로 사용될 수 있으며, 본 발명의 신균주를 이용한 발효식품은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다. 예컨대, 발효식품 중 하나인 김치를 제조하는데 사용할 수 있는데, 바람직하게는 소금으로 절인 배추에 고춧가루, 마늘, 생강, 대파, 무채, 설탕과 같은 일반적인 김치 양념들을 혼합한 후, 본 발명의 신균주를 첨가하여 김치를 제조할 수 있다. 상기 본 발명의 신균주의 첨가량은 김치 1g에 대하여 106 CFU 로 첨가하는 것이 가장 바람직하다. In addition, the new strain or the culture thereof according to the present invention can be used as a food additive for foods such as kimchi, beverages, infant formula, and dairy products, and the fermented food using the new strain of the present invention can be produced by a conventional method Can be prepared according to the method. For example, it can be used for producing kimchi, which is one of the fermented foods. Preferably, the common kimchi seasonings such as red pepper powder, garlic, ginger, green onion, rice wine and sugar are mixed with salted cabbage, To prepare a kimchi. The amount of the new strain of the present invention added is preferably 10 6 CFU to 1 g of the kimchi.

본 발명은 비만 및 비만 관련 용태, 장애, 및 질환의 제어, 치료 및 예방에 유용한 방법 및 조성물을 제공하며, 2가지 이상의 항비만제를 비만 및 비만 관련 용태, 장애 및 질환을 제어, 치료 및 예방하는데 효과적인 양으로 대상에게 투여하는 것을 포함하며, 일실시예로서 투여 대상에서 영양의 이용율을 감소시켜 비만을 예방 또는 치료하는 효과를 발생시킨다. 또한 체중을 감소시키는 효과와 다른 항비만제와 병용투여하는 경우 상승적인 항비만 효과를 유도할 수 있다.The present invention provides methods and compositions useful for the control, treatment, and prevention of obesity and obesity-related conditions, disorders, and diseases, and is useful for controlling, treating and preventing obesity and obesity-related conditions, disorders and diseases. As an example, to reduce the utilization of nutrition in an administration subject and to prevent or treat obesity. In addition, weight loss and other anti - obesity agents combined with the synergistic anti - obesity effect can be induced.

일 실시예에서, 이러한 방법은 비만, 비만 관련 장애, 비만 관련 질환, 비만 관련 용태, 당뇨병, 인슐린 저항성 증후군, 지방이영양증, 비알콜성 지방간염, 심혈관 질환, 다낭성 난소 증후군, 대사 증후군을 앓고 있거나 체중을 줄이려는 욕구가 있는 대상에게 지시된다.In one embodiment, the method is for the treatment of obesity, obesity related disorders, obesity related disorders, obesity related conditions, diabetes, insulin resistance syndrome, fatty dystrophy, nonalcoholic fatty liver disease, cardiovascular disease, polycystic ovary syndrome, metabolic syndrome, Is directed to a person who has a desire to reduce it.

일 실시예에서, 항비만제들의 조합 투여는 동시 투여, 공동 투여, 또는 순차적 투여일 수 있다.In one embodiment, the combined administration of anti-obesity agents can be co-administration, co-administration, or sequential administration.

또한 본 발명은 비만 및 비만 관련 용태, 장애 및 질환의 치료, 및 이러한 용태의 치료에 유용한 약제의 제조를 위한 본 발명의 항비만제 및 조성물의 용도에 관한 것이다.The present invention also relates to the use of the anti-obesity agents and compositions of the present invention for the treatment of obesity and obesity-related conditions, disorders and diseases, and the manufacture of medicaments useful for the treatment of such conditions.

나아가 본 발명은 본 발명에 따른 상기 신균주를 배양하는 단계; 및 배양한 상기 균주가 생산하는 프로바이오틱스를 수득하는 단계를 포함하는 프로바이오틱스를 생산하는 방법을 제공할 수 있다.
Further, the present invention provides a method for producing a microorganism, which comprises culturing the new strain according to the present invention; And a step of obtaining a probiotic produced by the cultivated strain.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It will be apparent to those skilled in the art that the following examples are merely illustrative of the present invention and that the scope of the present invention is not limited to these examples.

<< 실시예Example 1> 1>

신균주의New strain 분리 및 동정 Isolation and identification

<1-1> 균주의 분리<1-1> Isolation of strain

김치즙을 멸균 증류수에 희석하여 MRS 배지에 배양하여 배양된 유산균을 분리 동정하였는데, 1개의 균주(일명 ‘LP PNU’)는 전라북도 전주에서 김치 전문인에 의해 제조된 맛있는 김치에서 유산균을 분리 동정하는 방법에 의해 분리하였고, 다른 1개의 균주(일명 ‘LM PNU’)는 부산대학교 박건영 교수님 연구실의 항암 레시피로 조제된 김치에서 분리 및 동정하였다.
Kimchi juice was diluted in sterilized distilled water and cultured in MRS medium to isolate and isolate the cultured lactic acid bacteria. One strain (aka 'LP PNU') was prepared by isolating and identifying lactic acid bacteria from delicious kimchi manufactured by Kimchi experts in Jeonju, (LM PNU) was isolated and identified from kimchi prepared by the anti - cancer recipe of professor Park, Kun - Young of Pusan National University.

<1-2> 분리한 균주의 분자생물학적 동정<1-2> Molecular biology identification of isolated strains

실시예 <1-1>에서 분리한 2개 균주의 분자생물학적 특징을 조사하기 위해 균주 배양액으로부터 Chromosomal DNA를 분리한 후, 유니버설 프라이머인 27F와 1492R 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하여 PCR 산물을 수득하였고, 이렇게 얻어진 염색체 DNA는 미생물 동정을 위하여 16s rRNA gene의 전체 염기서열 분석을 수행하였다. In order to investigate the molecular biological characteristics of the two strains isolated in Example <1-1>, Chromosomal DNA was isolated from the culture broth and PCR was performed using universal primers 27F and 1492R pairs to obtain PCR products The chromosomal DNA obtained was analyzed for the full sequence of the 16s rRNA gene for microbial identification.

그 결과, 동정한 균주 중 하나의 균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)에 속하는 균주인 것으로 나타났으며, 다른 균주는 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides)에 속하는 균주인 것으로 조사되었고, 상기 동정한 균주들의 염기서열(16s rRNA 서열)을 서열번호 1(락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P)) 및 서열번호 2(류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P))에 각각 나타내었으며, 이러한 염기서열을 갖는 균주는 기존에 존재하지 않는 신규한 균주임을 확인하였다. 따라서 본 발명자들은 이들 균주들을 2013년 1월 22일자로 한국종균협회(KCCM)에 기탁하여 하기와 같은 각각의 기탁번호를 부여받았다.
As a result, it was found that one of the strains identified was a strain belonging to Lactobacillus plantarum and the other strain was a strain belonging to Leuconostoc mesenteroides, The nucleotide sequence (16s rRNA sequence) of the identified strains is shown in SEQ ID NO: 1 (Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P)) and SEQ ID NO: 2 (Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P)) Respectively, and it was confirmed that the strain having such a nucleotide sequence is a novel strain that does not exist in the past. Therefore, the present inventors deposited these strains with the KCCM on Jan. 22, 2013, and received the respective accession numbers as follows.

(1) 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)PNU - 기탁번호 KCCM11352P(일명 "LP PNU”라고 명명함)(1) Lactobacillus plantarum PNU - Accession number KCCM11352P (aka "LP PNU")

(2) 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides)PNU - 기탁번호 KCCM11353P(일명 "LM PNU" 이라고 명명함)
(2) Leuconostoc mesenteroides PNU - Accession number KCCM11353P (aka "LM PNU")

<< 실시예Example 2> 2>

본 발명에서 분리 및 동정한 균주를 이용한 김치의 제조Preparation of Kimchi Using Strain Isolated and Identified in the Present Invention

<2-1> 스타터의 준비<2-1> Preparation of Starter

상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 2개의 유산균을 각각 평판배지에 도말하여 48시간 동안 37℃ 배양기에서 배양하여 단일 콜로니를 분리하였다. 분리한 콜로니를 채취하여 액체 MRS 배지에 37℃, 80rpm 조건에서 24시간 동안 배양하여 유산균을 활성화시켰다.
Two lactic acid bacteria isolated and identified in Example 1 were each plated on a plate medium and cultured in a 37 ° C incubator for 48 hours to separate single colonies. The isolated colonies were harvested and cultured in liquid MRS medium at 37 ° C and 80 rpm for 24 hours to activate the lactic acid bacteria.

<2-2> 스타터의 첨가<2-2> Addition of starter

각 유산균을 김치 1g당 106 CFU으로 조절하여 첨가하였다. 준비한 유산균 스타터를 3000rpm에서 10분간 원심분리하고 액체배지를 제거하여 생성된 펠렛을 생리식염수로 2회 세척(washing)하여 양념소에 첨가하였다. 김치 1g당 106 CFU에 해당하는 유산균을 첨가하기 위하여 김치 1kg당 108 CFU 으로 조절한 유산균을 첨가하였다.
Each lactic acid bacterium was adjusted to 10 6 CFU per 1 g of kimchi. The prepared lactic acid bacteria starter was centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes, the liquid medium was removed, and the resulting pellet was washed twice with physiological saline and added to the sauce. To add 10 6 CFU lactic acid bacteria per 1 g of kimchi, lactic acid bacteria adjusted to 10 8 CFU per 1 kg of kimchi were added.

<2-3> <2-3> 절임배추Pickled cabbage

배추 무게의 2배의 해당하는 물에 10%의 소금을 계랑하여 첨가하였는데, 이때 사용된 소금은 간수를 뺀 천일염으로 소금의 1/3은 배추의 줄기 사이에 켜켜이 뿌리고 2/3은 물에 녹여 염수를 준비하였다. 준비한 염수에 배추를 2절하여 10시간 동안 절였고. 10시간 후 배추를 건져 흐르는 물에 3회 세척하고, 세척한 배추를 3시간동안 탈수시켰다.
10% of the salt was added to the water equivalent to twice the weight of the Chinese cabbage. The salt used was salted sea salt. One-third of salt was sprinkled between the stem of Chinese cabbage and 2/3 was dissolved in water Saline was prepared. I prepared two salted Chinese cabbages and fried for 10 hours. After 10 hours, the Chinese cabbage was washed three times in running water, and the washed Chinese cabbage was dehydrated for 3 hours.

<2-4> 항암스타터김치 제조<2-4> Production of chemotherapeutic starter kimchi

본 발명자들은 상기 실시예 1이 스타터를 이용하여 항암효과가 있는 김치를 개발하였으며, 본 발명에서 이하 “항암스타터김치”라고 한다.The inventors of the present invention have developed a kimchi having anticancer effect using the starter in the above Example 1, and hereinafter referred to as &quot; anticancer starter kimchi &quot; in the present invention.

항암스타터김치란 부산대학교 항암김치에 실시예 1의 스타터를 이용하여 제조한 김치를 의미하는 것으로서, “K - LP PNU” : Lactobacillus plantarum PNU을 스타터로 첨가하여 제조한 김치로서 이하의 김치를 포함한다."K - LP PNU": A kimchi prepared by adding Lactobacillus plantarum PNU as a starter, and includes the following kimchi. The term "K - LP PNU" refers to a kimchi prepared by using the starter of Example 1 in anticancer Kimchi of Pusan National University.

“K - LP 3099”: Lactobacillus plantarum 3099을 스타터로 첨가하여 제조한 김치&Quot; K-LP 3099 &quot;: A kimchi prepared by adding Lactobacillus plantarum 3099 as a starter

“K - LM PNU” : Leuconostoc mesenteroides을 스타터로 첨가하여 제조한 김치"K - LM PNU": Leuconostoc mesenteroides as a starter

“K - LP PNU/LM PNU” : Lactobacillus plantarum PNU와 Leuconostoc mesenteroides을 혼합하여 스타터로 첨가하여 제조한 김치"K - LP PNU / LM PNU": A mixture of Lactobacillus plantarum PNU and Leuconostoc mesenteroides,

“K - LP 3099/LM PNU” : Lactobacillus plantarum 3099와 Leuconostoc mesenteroides을 혼합하여 스타터로 첨가하여 제조한 김치
"K-LP 3099 / LM PNU": A mixture of Lactobacillus plantarum 3099 and Leuconostoc mesenteroides as a starter

항암스타터김치는 부산대학교의 항암김치 레시피를 사용하여 김치를 제조하였다. 항암김치는 절인배추 100(중량g)에 대해 고춧가루 2.5g, 마늘 2.8g 생강 0.6g 무 11g, 설탕 1g, 파 2g, 갓 7.5g, 산초 0.1g, 배 2.8g, 버섯다시마물 32.8g, 겨우살이 추출물 0.05g의 비율로 혼합하여 양념을 만들었다. 무와 파, 배는 3-4cm 길이로 채썰고 무채에 고춧가루 갠 것을 넣어 버무린 다음 나머지 양념을 넣어 죽염을 첨가하여 최종 염도를 2.2%로 조절하였고 혼합한 양념소를 배추에 버무려 김치를 제조하였다.The anticancer starter kimchi was prepared by using the anticancer kimchi recipe of Pusan National University. The anticancer kimchi contains about 2.5g of red pepper powder, 2.8g of garlic, 0.6g of radish, 11g of sugar, 1g of sugar, 2g of green onion, 7.5g of fresh persimmon, 0.1g of ginseng, 2.8g of pear, And 0.05g of the extract. The radishes and radishes were cut into 3-4cm lengths, and red pepper powder was added to the radishes. The remaining sauce was added to add bamboo salt. The final salinity was adjusted to 2.2% and the mixed sauce was added to Chinese cabbage to make kimchi.

부산대학교의 항암김치 레시피를 사용하여 김치를 제조하였다. 항암김치는 절인배추 100(중량g)에 대해 고춧가루 2.5g, 마늘 2.8g 생강 0.6g 무 11g, 설탕 1g, 파 2g, 갓 7.5g, 산초 0.1g, 배 2.8g, 버섯다시마물 32.8g, 겨우살이 추출물 0.05g의 비율로 혼합하여 양념을 만들었다. 무와 파, 배는 3-4cm 길이로 채썰고 무채에 고춧가루 갠 것을 넣어 버무린 다음 나머지 양념을 넣어 죽염을 첨가하여 최종 염도를 2.2%로 조절하였고 혼합한 양념소를 배추에 버무려 김치를 제조하였다.Kimchi was prepared using anticancer kimchi recipe of Pusan National University. The anticancer kimchi contains about 2.5g of red pepper powder, 2.8g of garlic, 0.6g of radish, 11g of sugar, 1g of sugar, 2g of green onion, 7.5g of fresh persimmon, 0.1g of ginseng, 2.8g of pear, And 0.05g of the extract. The radishes and radishes were cut into 3-4cm lengths, and red pepper powder was added to the radishes. The remaining sauce was added to add bamboo salt. The final salinity was adjusted to 2.2% and the mixed sauce was added to Chinese cabbage to make kimchi.

이상과 같은 김치 제조과정에서 대조군으로는 스타터 균주로 알려진 락토바실러스 플란타룸 KCTC 3099 균주를 스타터 균주로 사용한 군 및 스타터 균주를 첨가하지 않은 군을 사용하였고 그 외 다른 방법은 상기 기술된 방법과 동일한 과정으로 김치를 제조하였다.
As a control group in the above-mentioned kimchi manufacturing process, Lactobacillus planta KCTC 3099 strain known as a starter strain was used as a starter strain and a group not added with a starter strain was used, and other methods were the same as those described above Kimchi was prepared by the process.

<2-5> 부산대학교 <2-5> Pusan National University 표준화김치Standardized kimchi (( SKSK ) 제조) Produce

부산대학교 표준화김치(SK)란 일반 배추와 부산대학교 표준화 레시피를 이용하여 제조한 김치를 의미한다.Standardization Kimchi (SK) at Pusan National University means kimchi prepared using standard Chinese cabbage and Pusan National University standardization recipe.

본 발명자들은 부산대학교 표준김치(SK)를 제조하기 위해 절인배추 100g에 대해 고춧가루 3.5g, 마늘 1.4g, 생강 0.6g, 젓갈 2.2g, 무 13g, 설탕 1g, 파 2g의 중량비율로 혼합하여 양념소를 만들었다. 무와 파, 배는 3-4cm 길이로 채썰고 무채에 고춧가루 갠 것을 넣어 버무린 다음 나머지 양념을 넣어 제간수 천일염을 첨가하여 최종 염도를 2.5 중량%로 조절하였고 혼합한 양념소를 배추에 버무려 김치를 제조하였다.
The present inventors mixed 100 g of pickled Chinese cabbage with 100 g of pickled Chinese cabbage in a weight ratio of 3.5 g of red pepper powder, 1.4 g of garlic, 0.6 g of ginger, 2.2 g of salted ginger, 13 g of radish, 1 g of sugar, I made cattle. The radishes and pears were cut into 3-4cm lengths, and red pepper powder was added to the radish, and then the remaining sauce was added. The final salinity was adjusted to 2.5 wt% by adding the safflower salt, and the mixed sauce was added to the cabbage Respectively.

<2-6> <2-6> 항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ) 제조) Produce

항암녹차김치(AK)란 유기농 배추와 부산대학교 항암김치에 레시피에 녹차를 첨가하여 제조한 김치를 의미한다.Anticancer Green Tea Kimchi (AK) means organic kimchi prepared by adding green tea to organic cabbage and anticancer kimchi of Pusan National University.

본 발명자들은 항암녹차김치를 제조하기 위해 절인 배추 100g에 대해 고춧가루 2.5g, 마늘 2.8g, 생강 0.6g, 무 11g, 설탕 1g, 파 2g, 녹차 7.5g, 산초 0.1g, 배 2.8g, 버섯·다시마물 32.8g, 겨우살이 추출물 0.05g의 중량비율로 혼합하여 양념소를 만들었다. 무와 파, 배는 3-4cm 길이로 채썰고 무채에 고춧가루 갠 것을 넣어 버무린 다음 나머지 양념을 넣어 죽염을 첨가하여 최종 염도를 2.2 중량%로 조절하였고 혼합한 양념소를 배추에 버무려 김치를 제조하였다.
The inventors of the present invention conducted a study to determine the antioxidative activity of the antimycotic green tea kimchi by the following methods: 2.5 g of red pepper powder, 2.8 g of garlic, 0.6 g of ginger, 11 g of radish, 1 g of sugar, 2 g of green tea, 7.5 g of green tea, 32.8 g, and 0.05 g of mistletoe extract were mixed at a weight ratio of 1: 1 to prepare safflower. The radishes and pears were cut into 3-4 cm lengths, and red pepper powder was added to the leaves. The rest of the condiments were added and bamboo salt was added to adjust the final salinity to 2.2 wt%. The mixed sauce was added to Chinese cabbage to make kimchi.

<2-7> <2-7> 항암녹차스타터김치Green tea starter Kimchi (( AKSAKS ) 제조) Produce

항암녹차스타터김치(AKS)란 항암녹차김치에 유산균 스타터를 첨가하여 제조한 김치를 의미한다.Anticancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) means Kimchi prepared by adding lactic acid bacteria starter to the anticancer green tea kimchi.

본 발명자들은 항암녹차김치를 제조하기 위해 두 가지 starter를 1:1의 비율로 혼합하여 첨가한 김치(AKS)가 제조되었다. 이때, 유산균 starter는 106 CFU/g의 농도로 조절하여 양념소에 첨가하였으며 이를 배추에 버무려 김치를 제조하였다. The present inventors prepared kimchi (AKS) which was prepared by mixing two kinds of starters at a ratio of 1: 1 in order to prepare anticancer green tea kimchi. At this time, the lactic acid starter was added to the sauce at a concentration of 106 CFU / g and the kimchi was prepared with Chinese cabbage.

Starter로 이용한 유산균은 Lactobacillus plantarum PNU(KCCM 11352P)와 Leuconostoc mesenteroides PNU(KCCM 11353P)로 각각 전라북도 전주지역 김치 제조 전문인에 의해 제조된 김치와 부산대학교 김치연구소의 항암김치 레시피로 조제 된 김치에서 분리·동정하였다. 분리 및 동정한 유산균을 각각 MRS(de Man, Rogosa andSharpe, Difco Laboratories Inc., Detroit, MI, USA) 고체평판배지에 도말하여 37°C 배양기에서 48시간 배양하며 단일 콜로니로 계대배양하며 실험에 사용하였다. 각 균주는 MRS(Difco Laboratories Inc.) 액체배지에 37°C 조건에서 24시간 동안 배양하여 활성화시킨 후, 3,000 rpm에서 10분간 원심분리 하여 배지를 제거하고, 생성된 pellet은 생리식염수로 2회 세척하여 김치 제조 시 양념소에 starter로 첨가하였다.
The lactic acid bacteria used in the starter were Lactobacillus plantarum PNU (KCCM 11352P) and Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM 11353P), respectively. Kimchi, which was prepared by Kimchi manufacturer in Jeonju, Jeonju, and Kimchi, Respectively. The isolated and identified lactic acid bacteria were plated on a MRS (DeMan, Rogosa and Sharpe, Difco Laboratories Inc., Detroit, MI, USA) solid plate culture medium and incubated in a 37 ° C incubator for 48 hours and subcultured in a single colony. Respectively. Each strain was activated by incubation in MRS (Difco Laboratories Inc.) liquid medium at 37 ° C for 24 hours and then centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes to remove the medium. The resulting pellet was washed twice with physiological saline Kimchi was added as a starter to sauce.

<< 실시예Example 3> 3>

항암스타터김치의Cancer starter Kimchi pHpH 및 산도 측정 And pH measurement

본 발명자들은 본 발명의 실시예 2에 따른 항암스타터김치의 pH 및 산도를 측정하기 위해 하기와 같은 실험을 실시하였다.
The present inventors conducted the following experiments to measure the pH and acidity of the anti-cancer starter kimchi according to Example 2 of the present invention.

<3-1> <3-1> 항암스타터김치의Cancer starter Kimchi pHpH 및 산도 측정 And pH measurement

상기 항암스타터김치를 포함하는 실시예 <2-4>에서 제조된 각각의 김치들을 대상으로 김치의 pH 및 산도를 측정하였다. pH는 실온에서 pH meter(M220, Corming, MA, USA)로 측정하였고, 산도는 AOAC 표준시험법에 따라 김치 즙을 20배 희석하여 이 시료에 0.1N NaOH를 가하여 pH 8.4가 될 때까지 소비된 0.1N NaOH mL 수로 측정하였다. 적정한 값은 젖산(lactic acid)의 함량 %(중량 %)로 환산하여 나타내었으며, 그 수식을 하기에 기재된 바와 같다.
The pH and acidity of each of the kimchi prepared in Example <2-4> including the anti-cancer starter kimchi were measured. The pH was measured with a pH meter (M220, Corming, MA, USA) at room temperature. The pH of the kimchi juice was diluted 20 times according to the AOAC standard test method and 0.1N NaOH was added to the sample to obtain a pH of 8.4 0.1 N NaOH. The appropriate value is expressed in terms of the content (% by weight) of lactic acid, and the formula is as described below.

산도(Acidity ( acidityasitity %)=  %) =

[([( mLmL ofof 0.1 N  0.1 N NaOHNaOH ×  × normalitynormality ofof NaOHNaOH ×0.09)/ 시료의 중량(g)]×100 × 0.09) / weight of sample (g)] × 100

그 결과, 스타터를 첨가하여 발효시킨 항암스타터김치가 스타터를 첨가하지 않은 김치보다 pH의 감소 속도가 더 빠르게 나타나는 것으로 확인되었고(도 1 참조), 산도의 증가도 스타터를 첨가한 항암스타터김치가 스타터를 첨가하지 않은 김치에 비해 속도가 빠르게 나타나 발효가 빨리 진행되는 것으로 나타났다(도 2 참조).
As a result, it was confirmed that the anticancer starter kimchi fermented with starter added showed a decrease rate of pH more rapidly than kimchi without starter (see FIG. 1) The fermentation speed was faster than that of the non-fermented kimchi (see FIG. 2).

이러한 결과를 토대로 본 발명자들은 본 발명에서 규명한 신균주가 발효식품의 제조 과정에서 발효의 진행을 빠르게 진행시켜 발효 시간을 단축시킬 수 있는 효과가 있다는 것을 알 수 있었다.
Based on these results, the inventors of the present invention have found that the new strain identified in the present invention has an effect of rapidly advancing the fermentation process in the process of producing the fermented food product, thereby shortening the fermentation time.

<3-2> <3-2> 항암녹차스타터김치Green tea starter Kimchi (( AKAK )의 )of pHpH 및 산도 측정 And pH measurement

실시예 <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치의 pH 및 산도를 측정하기 위해 상기 3-1과 같은 방법으로 측정하였으며, 5℃에서 5주 동안, 실시예 <2-5>, <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치(AKS) 3종류 김치의 pH 및 산도 변화를 측정하였다.The measurement of the pH and acidity of the anticancer green tea kimchi (AK), anticancer green tea starter kimchi prepared in Examples <2-6> and <2-7> was carried out by the same method as the above 3-1, (SK), anticancer green tea kimchi (AK), anticancer green tea starter kimchi (AKS), 3 kinds of kimchi prepared in Examples <2-5>, <2-6> and <2-7> Were measured for pH and acidity.

pH에 대한 실험결과는 도 15 좌측 그래프에 나타내었으며, SK의 pH는 1주까지는 증가하였으나, 1주 이후로 지속적으로 감소하였으며, AK는 2주까지 지속적으로 증가후에 감소하였고, 다시 4주 후에 증가하는 모습을 보였다. AKS는 2주까지 감소한 후에 정상상태를 유지하는 것으로 나타났다. The results of the experiment on the pH are shown in the left graph of FIG. 15, and the pH of SK increased until 1 week, but it decreased continuously after 1 week, AK decreased continuously after 2 weeks, I have seen them. AKS showed steady state after decreasing to 2 weeks.

산도에 대한 실험결과실험결과는 도 15 우측 그래프에 나타내었으며, SK의 산도는 실험개시 후에 지속적으로 증가하였으며, AK는 1주 후에 감소하였다가 2주부터 다시 지속적으로 증가하였으며, AKS는 1주 이후에 지속적으로 증가한 후 2주부터 약간 감소 후 증가하는 모습을 보였다.
Experimental results on the acidity The experimental results are shown in the right graph of FIG. 15, and the acidity of SK was continuously increased after the initiation of the experiment. The AK decreased after 1 week and continuously increased from 2 weeks, , And increased slightly after 2 weeks.

<< 실시예Example 4> 4>

항암스타터김치의Cancer starter Kimchi 탄력성 측정 Elasticity measurement

또한, 본 발명자들은 상기 실시예 <2-4>에서 제조한 항암스타터김치를 대상으로, 김치 조직의 탄성을 조사하였는데, 탄성 정도는 rheometer(CR-100, Sun Scientific Co., Japan)을 이용하여 측정하였다. 탄력성 측정에 사용된 시료는 김치 밑동으로부터 5cm 아래의 두께가 0.5cm가 되는 부분을 3 cm × 4 cm의 크기로 썰어 사용하였고, 각 시료마다 5회 반복 측정하여 이 값의 평균값을 구하였다.
The present inventors also investigated the elasticity of kimchi tissues in the anticancer starter kimchi prepared in Example <2-4>. The degree of elasticity was measured using a rheometer (CR-100, Sun Scientific Co., Japan) Respectively. For the elasticity measurement, the portion of 5 cm below the base of the kimchi was cut into a size of 3 cm × 4 cm, and the average value of these values was obtained by repeating the measurement five times for each sample.

탄력성 측정 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 각 김치별 탄성 정도는 서로 유의적인 차이는 없었으나 스타터를 첨가하지 않은 김치에 비해 스타터를 첨가한 김치가 빨리 숙성한 것에 비해 탄력성의 감소가 적어 조직의 물러짐이 감소한 것으로 나타났다.As shown in FIG. 3, the degree of elasticity of each kimchi was not significantly different from that of starch-added kimchi, but the elasticity of the kimchi was less than that of starch-added kimchi And the backwardness decreased.

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명에 따른 신균주의 경우 발효 식품의 탄력성을 좋은 상태로 오래 동안 유지시킬 수 있어 보다 식감이 좋은 식품을 제조할 수 있다는 것을 알 수 있었다.Accordingly, the inventors of the present invention have found that, in the case of the new strain according to the present invention, the elasticity of the fermented food can be maintained in a good state for a long period of time, so that a food having better texture can be produced.

<< 실시예Example 5> 5>

<5-1> <5-1> 항암스타터김치의Cancer starter Kimchi 관능 평가 Sensory evaluation

항암스타터김치의 관능성을 평가하기 위해 실시예 <2-4>의 방법으로 제조한 김치들의 관능 평가를 실시하였다. To evaluate the sensory properties of the anticancer starter kimchi, the sensory evaluation of the kimchi prepared in Example <2-4> was carried out.

김치의 관능 평가는 반복된 램덤화 완전 블록 계획(replicated randomized complete block design)에 따라서 훈련된 15명의 관능요원이 평가하였다. 평가 내용은 정량적 묘사분석 방법(quantitative descriptive analysis)을 사용하여 주관적 항목으로 종합적 외관(overall appearance), 종합적 평가(overall acceptability), 냄새(smell), 조직감(texture)을 평가하고, 객관적 항목으로 미각적 지각인 짠맛(salty flavor), 쓴맛(bitter flavor), 신맛(sour flavor), 군덕맛(mold flavor), 탄산맛(refresh flavor)을 평가하였다. 그 정도는 1에 가까울수록 감지 불가능한 것으로 평가하였고, 9에 가까울수록 극도로 강하게 감지하는 것으로 나타내었다.
Sensory evaluation of kimchi was evaluated by 15 sensory workers trained according to a replicated randomized complete block design. The evaluation contents were evaluated by using quantitative descriptive analysis to evaluate the overall appearance, overall acceptability, smell and texture as subjective items, Salty flavor, bitter flavor, sour flavor, mold flavor, and refresh flavor were evaluated. The closer to 1, the more undetectable, and the closer to 9, the more intense the perception.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 스타터를 첨가한 항암스타터김치가 스타터를 첨가하지 않은 김치보다 종합적 평가와 조직감이 더 높은 점수로 평가되었다.
As a result, as shown in Fig. 4, the anti-cancer starter kimchi containing starter was evaluated to have a higher score of comprehensive evaluation and texture than kimchi without starter.

<5-2> <5-2> 항암녹차김치의Cancer green tea kimchi 관능 평가 Sensory evaluation

항암항암김치의 관능성을 평가하기 위해 실시예 <2-5>, <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치의 관능 평가를 실시하였다.To evaluate the sensory properties of anticancer chemotactic kimchi, the standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK), and anticancer green tea starter prepared in Examples <2-5>, <2-6> and <2-7> Sensory evaluation of kimchi was carried out.

반복된 램덤화 완전 블록 계획(replicated randomized complete block design)에 따라서 훈련된 10명의 관능요원이 평가하였으며, 평가 내용 상기 실시예 <5-1>과 같이 평가하였다.The 10 functionalists trained according to the replicated randomized complete block design were evaluated, and the evaluation contents were evaluated as in the above Example <5-1>.

평가 결과는 도 17에 나타내었으며, 스타터를 첨가한 항암녹차스타터김치(AKS)에서 스타터를 첨가하지 않은 김치보다 종합적 평가와 조직감이 긍정적으로 평가되었다. 또한 표준김치에서 레시피를 달리하여 유기농배추를 이용한 김치에서 종합적 평가가 높았다. The evaluation results are shown in FIG. 17. The synthetic evaluation and texture of the starch-added anticancer green tea starter kimchi (AKS) were evaluated to be more positive than those of the starch-free kimchi. Also, the kimchi using organic cabbage was different from the standard kimchi by recipe.

따라서 항암녹차스타터김치(AKS)의 관능성이 매우 뛰어난 것을 알 수 있었으며, 스타터를 처리하는 것이 김치의 관능성 면에서 유리하다는 것을 확인하였다.
Therefore, it was found that the anticancer green tea starch kimchi (AKS) is highly functional, and it is confirmed that starch treatment is advantageous in terms of the sensory properties of kimchi.

<< 실시예Example 6> 6>

<6-1> <6-1> 항암스타터김치의Cancer starter Kimchi 총균Germ 및 젖산균 수 측정 And lactic acid bacteria count

본 발명자들은 실시예 <2-4>의 방법으로 제조된 김치의 총균 및 젖산균의 수를 측정하기 위해 다음과 같은 실험을 실시하였다.The present inventors conducted the following experiments to measure the number of germ bacteria and lactic acid bacteria produced by the method of Example < 2-4 >.

총균수의 측정은 평판계수법(plate count technique)을 이용하여 측정하였는데, 상기 실시예 2-4에서 제조한 각 김치를 착즙하여 얻은 김치액을 멸균한 증류수로 단계별로 희석하여, 미리 가열 용해하고 냉각한 플레이트 카운트 아가(plate count agar; Difco, Detroit, MI, USA)에 0.1mL 씩 분주하여 도말하였다. 37°C에서 24-48시간 동안 배양기에서 호기 배양하고, 배양된 균의 colony 수를 계수하여 생성 콜로니 개수(colony forming units per gram, CFU/g)로 총균수를 측정하였다.The total number of bacteria was measured using a plate count technique. The kimchi liquid obtained by juicing each of the kimchi prepared in Example 2-4 was diluted stepwise with sterilized distilled water, Plate count agar (Difco, Detroit, MI, USA) was dispensed in 0.1 ml aliquots. The cultures were aerobically cultured in an incubator at 37 ° C for 24-48 hours, and the number of colonies of the cultured bacteria was counted and the total number of bacteria was measured by the number of colony forming units per gram (CFU / g).

또한, 젖산균수의 측정은 총균수 측정과 동일한 방법으로 Leuconostoc sp.는 Leuconostoc 선택배지로 페닐에틸 알콜(phenylethyl alcohol)과 수크로스를 첨가한 PES medium(phenylethyl alcohol sucrose agar medium)를 사용하여 20°C에서 3-4일간 평판 배양하였다. 또한, Lactobacillus sp. 는 Lactobacillus 선택용 배지(LBS medium)에 Pediococcus의 생육을 억제하기 위하여 아세트산과 소듐 아세테이트를 첨가한 modified LBS agar medium(m-LBS medium)을 사용하여 37°C에서 3-4일간 평판 배양하여 나타난 colony수를 계수하였다.
In addition, Leuconostoc sp. Was used to measure the number of lactic acid bacteria in the same manner as the total number of bacteria. PES medium (phenylethyl alcohol and sucrose agar medium) supplemented with phenylethyl alcohol and sucrose as a selection medium For 3-4 days. In addition, Lactobacillus sp. Was cultured in LBS medium for 3 to 4 days at 37 ° C using modified LBS agar medium (m-LBS medium) supplemented with acetic acid and sodium acetate to inhibit the growth of Pediococcus. The number was counted.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 총균수는 모두 발효 6일차에서 108 CFU/g로 상승한 것으로 나타났고, 스타터를 첨가한 김치와 첨가하지 않은 김치가 비슷한 양상으로 변화하는 것을 알 수 있었다. 또한, 스타터를 첨가하지 않은 김치는 제조 즉시에는 가장 낮은 총균수를 보였으나 이후 스타터를 첨가한 김치와 비슷하게 성장하여 빠른 증가율을 보였다.As a result, as shown in FIG. 5, the total number of bacteria was increased to 10 8 CFU / g from the 6th day of fermentation, and it was found that the kimchi added with starter and the kimchi not added changed in a similar manner. In addition, kimchi without starter showed the lowest total number of bacteria immediately after the production, but then showed a rapid growth rate similar to that of kimchi added with starter.

또한, 김치의 신맛과 시원한 탄산맛을 내는 숙성에 관여하는 젖산균인 Lactobacillus sp. 및 Leuconostoc sp.의 경우, 김치가 숙성되면서 균수가 증가하는 것으로 나타났다(도 6 및 도 7 참조). In addition, lactic acid bacteria Lactobacillus sp., Which is involved in maturing to produce a sour taste and a cool acid taste of kimchi. And Leuconostoc sp., The number of bacteria was increased as the kimchi was aged (see Figs. 6 and 7).

특히, 젖산균수의 측정 결과, 발효 4일차에 Lactobacillus sp.의 수는 스타터를 첨가하지 않은 김치보다 스타터를 첨가한 김치에서 10배 가량 높게 함유되어 있는 것으로 나타났으며, Leuconostoc sp.의 수는 스타터를 첨가하지 않은 김치보다 102배 이상 많이 함유되어 있다는 것이 나타나, 궁극적으로 본 발명에서 규명한 신균주의 사용으로 김치의 맛과 기능성을 개선시킬 수 있다는 것을 알 수 있었다.
The number of Lactobacillus sp. Was found to be 10 times higher than that of kimchi containing no starter. The number of Leuconostoc sp. Was 10 2 times or more higher than that of the kimchi without added Kimchi. As a result, it was found that the taste and functionality of kimchi could be improved by using the new strain identified in the present invention.

<6-2> <6-2> 항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ) 및 ) And 항암녹차스타터김치(AKS)의Cancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) 총균Germ 및 젖산균 수 측정 And lactic acid bacteria count

상기 실시예 <2-5>, <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치의 종균 및 유산균 수를 측정하기 위해 상기 실시예 <6-1>의 방법과 같이 실험을 실시하였다. (SK), anticancer green tea kimchi (AK), anticancer green tea starter Kimchi manufactured by Pusan National University manufactured in the above Examples <2-5>, <2-6> and <2-7> The experiment was carried out in the same manner as in the above Example <6-1>.

도 16에 나타낸 것과 같이 총균수는 제조 당일에는 항암녹차스타터김치(AKS)에서 높은 것으로 나타났으나 발효가 진행되면서 다른 김치와 비슷한 수준으로 확인되었다. 특히 발효 3주와 4주차에 표준김치(SK)나 스타터를 첨가하지 않은 김치에 비해 총균수가 낮은 것으로 나타났다.As shown in FIG. 16, the total number of bacteria was higher in the anticancer green tea starter kimchi (AKS) on the day of manufacture, but the fermentation progressed to be similar to other kimchi. Especially, at 3 weeks and 4 weeks of fermentation, the total number of bacteria was lower than that of standard kimchi (SK) or kimchi without starter.

김치의 총유산균수 측정 결과 항암녹차스타터김치(AKS)에서는 제조일부터 발효 5주차까지 가장 높은 유산균수를 보였다. 따라서 김치 제조시에 starter를 첨가하면 김치에 유산균이 많이 함유되어 있다는 것이 나타나 김치의 맛과 기능성에 바람직한 영향을 미칠 것으로 사료된다.
The results of total lactic acid bacteria count of Kimchi showed the highest number of lactic acid bacteria in the antioxidant green tea starter kimchi (AKS) from the date of manufacture to the 5th week of fermentation. Therefore, the addition of starter during kimchi production may have a favorable effect on the taste and functionality of kimchi.

<< 실시예Example 7> 7>

본 발명에서 분리 및 동정한 In the present invention, 신균주의New strain 항산화 활성 분석 Antioxidant activity analysis

<7-1> <7-1> DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 분석 analysis

상기 실시예 <2-4>에서 제조한 항암스타터김치들을 대상으로 착즙하여 3,000 rpm에서 10분간 원심 분리하여 상층액을 5%, 2% 농도로 각각 희석한 후 다음의 실험에 사용하였다. 김치착즙 시료 100 μL와 1.5 × 104 M DPPH (1,1-diphenyl-2-pic rylhydrazul) 메탄올 용액 100 μL 를 96-well plate에 혼합하여 빛이 차단된 상태에서 30분간 방치 한 후 분광광도계(UV.VIS Spectrophotometer, Jasco, Japan)을 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 또한, 이때 스타터 균주를 첨가하지 않은 대조군과 스타터 균주를 첨가한 실험군과의 흡광도 차이를 백분율(%)로 나타내었다. 한편, DPPH는 free radical을 가지고 있어 항산화 능력이 있는 물질과 반응하게 되면 안정한 형태로 돌아가면서 흡광도가 감소하게 된다.
The anti-cancer starter kimchi prepared in Example <2-4> was juiced and centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes to dilute the supernatant to 5% and 2%, respectively, and then used in the following experiment. 100 μL of Kimchi juice sample and 100 μL of 1.5 × 10 4 DPPH (1, 1-diphenyl-2-picylhydrazol) methanol solution were mixed in a 96-well plate and allowed to stand for 30 minutes in a light- Absorbance was measured at 540 nm using UV.VIS Spectrophotometer, Jasco, Japan). In addition, the difference in absorbance between the control group to which the starter strain was not added and the test group to which the starter strain was added was expressed as a percentage (%). On the other hand, DPPH has a free radical, and when it reacts with a substance having antioxidant ability, it returns to a stable form and its absorbance decreases.

측정 결과, 다른 종류의 스타터를 첨가한 김치와 스타터를 첨가하지 않은 김치의 DPPH radical 소거 효과는 K - LP PNU의 경우 60.63%, K - LP 3099는 61.45%, K - LM PNU는 59.91%, K - LP PNU/LM PNU는 54.53%, K - LP 3099/LM PNU는 51.32%의 DPPH 소거능을 보인 반면, 스타터를 첨가하지 않은 김치(도면에서 K - Standard의 막대 그래프)는 35%의 DPPH 소거능만을 보여 스타터를 첨가한 항암스타터김치가 유의적으로 높은 항산화 효과를 나타낸다는 것을 알 수 있었으며, 특히 LP PNU를 스타터로 첨가한 항암스타터김치가 다른 김치에 비해 유의적으로 높은 DPPH 라디칼 소거능을 가지고 있었고, 스타터를 첨가하지 않은 김치에 비해 약 1.7배 정도 높은 효과가 있음을 알 수 있었다(도 8 참조). 나아가 본 발명에서 분리 및 동정한 2가지 균주를 혼합하여 사용하는 경우 단독 균주 사용에 비해서는 라디칼 소거능이 조금 감소하긴 하였으나, 스타터를 첨가하지 않은 군에 비해 유의적으로 라디칼 소거능이 있는 것으로 확인됨에 따라 상기 균주를 혼합하여 사용할 수도 있다는 것을 알 수 있었다.
The results showed that the DPPH radical scavenging effect of Kimchi with and without starter was 60.63% for K - LP PNU, 61.45% for K - LP 3099, 59.91% for K - LM PNU, and K The DPPH elimination ability of the LP PNU / LM PNU was 54.53% and the K - LP 3099 / LM PNU showed 51.32% DPPH elimination, while the K - Standard bar graph without the starter added showed only 35% DPPH scavenging ability The anti - cancer starter kimchi supplemented with starter showed significantly higher antioxidative effect. Especially, the anti - cancer starter kimchi containing LP PNU as a starter had significantly higher DPPH radical scavenging ability than the other kimchi, It was found that the effect was about 1.7 times higher than that of the starch-free kimchi (see FIG. 8). In addition, when the two strains isolated and identified in the present invention were used in combination, the radical scavenging ability was slightly lower than that of the single strain but the radical scavenging ability was found to be significantly higher than that of the group without the starter It was found that the above strains could be mixed and used.

<7-2> <7-2> 항암스타터김치의Cancer starter Kimchi 히드록시  Hydroxy 라디칼Radical 소거능Scatters 분석 analysis

항암스타터김치의 히드록시 라디칼 소거능을 분석하기 위해 실시예 2-4에서 제조한 김치들에 대해 다음과 같은 실험을 실시하였다.In order to analyze the hydroxy radical scavenging ability of the anticancer starter kimchi, the following experiment was conducted on the kimchi prepared in Example 2-4.

400 μM FeCl3, 400 μM ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA), 400 μM ascorbic acid, 6 mM deoxyribose, 20 mM phosphate buffer(pH 7.4)와 상기 실시예 <7-1>에서 사용한 농도별 시료용액을 각각 0.2 mL씩 혼합하여 1.4 mL 반응 용액을 만든 다음, 3 mM H2O2 0.2 mL 첨가하여 Fenton 반응에 따라 37°C에서 1시간 동안 반응시켰다. 이 혼합액에 2.8% trichloroacetic acid(TCA) 1.0 mL와 1.0% thiobarbituric acid(TBA) 1.0 mL를 첨가하여 끓는 물에서 20분간 반응시킨 후 냉각시켜 540 nm에서 UV-VIS spectrophotometer를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
400 μM FeCl 3, 400 μM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 400 μM ascorbic acid, 6 mM deoxyribose, 20 mM phosphate buffer (pH 7.4) and 0.2 mL of each sample solution according to the concentration used in Example <7-1> The reaction mixture was incubated at 37 ° C for 1 hour in the presence of Fenton's reagent (0.2 mL, 3 mM H 2 O 2 ). 1.0 mL of 2.8% trichloroacetic acid (TCA) and 1.0 mL of 1.0% thiobarbituric acid (TBA) were added to the mixture, and the mixture was reacted for 20 minutes in boiling water, cooled, and absorbance was measured at 540 nm using a UV-VIS spectrophotometer.

히드록시 Hydroxy 라디칼Radical 소거능Scatters (%)=(1-(%) = (1- 실험군흡광도Experiment group absorbance // 대조군흡광도Control absorbance ) x 100) x 100

참고로, 히드록시 라디칼(Hydroxyl radical)은 활성산소 중에서 화학적으로 반응성이 가장 크며 생체내의 산화원인이 되며 DNA 손상을 주거나 돌연변이를 유발하는 물질로 알려져 있다. 첨가한 스타터 종류에 따른 김치의 히드록시 라디칼 소거효과를 측정한 결과는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다. For reference, hydroxyl radicals are the most chemically reactive in active oxygen, cause oxidation in vivo, and are known to cause DNA damage or mutagenesis. The results of measuring the hydroxy radical scavenging effect of the kimchi according to the type of the added starter are shown in Table 1 below.

Figure pat00001
Figure pat00001

a-c Duncan’s 다중 범위 테스트에 의해 p<0.05 인 것을 유의미한 것으로 본다. ac Duncan's multiple-range test is considered to be significant at p <0.05.

이러한 결과를 통해, 스타터를 첨가하지 않은 김치에 비해 스타터를 첨가한 김치에서 과산화수소 소거능이 유의적으로 높게 나타났고, LP PNU를 스타터로 하여 제조한 김치가 다른 김치에 비해 높은 소거 효과를 갖는 것으로 나타났다.
From these results, it was found that the hydrogen peroxide scavenging ability was significantly higher in the kimchi added with starter than in the starter - added kimchi, and the kimchi prepared with LP PNU as a starter showed a higher eradication effect than the other kimchi .

<< 실시예Example 8> 8>

본 발명에서 분리 및 동정한 In the present invention, 신균주의New strain 항암 활성 분석 Analysis of antitumor activity

상기 실시예 1에서 분리한 본 발명의 2개의 신균주가 항암 활성을 갖는지 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.
The following experiment was conducted to confirm whether the two new strains of the present invention isolated in Example 1 had anticancer activity.

(1) 사용시약 및 기기(1) Reagents and equipment for use

세포배양을 위해 RPMI 1640, fetal bovine serum(FBS), 0.05% trypsin-0.02% EDTA 및 penicillin-streptomycin(100 units/mL)은 GIBCO사(USA)로부터 구입하여 사용하였고, 세포배양은 CO2 incubator(Forma, model MCO 96, Japan)를 사용하였다.
RPMI 1640 to a cell culture, fetal bovine serum (FBS), 0.05% trypsin-0.02% EDTA , and penicillin-streptomycin (100 units / mL ) was purchased from GIBCO Inc. (USA), the cell culture is a CO 2 incubator ( Forma, model MCO 96, Japan) was used.

(2) 세포주((2) cell line ( CellCell lineline )와 세포의 배양) And cell culture

HT-29 인체 결장암세포(HT-29 human colon carcinoma cell)는 한국세포주은행(서울의대)으로부터 분양 받아 실험에 사용하였다. 100 units/mL의 penicillin-streptomycin과 10%의 FBS가 함유된 RPMI 1640을 사용하여 37°C, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 배양된 각각의 암세포는 일주일에 2-3회 refeeding하고 6-7일 만에 PBS로 세척한 후 0.05% trypsin-0.02% EDTA로 부착된 세포를 분리하여 원심분리한 후 집적된 암세포에 배지를 넣고 피펫으로 암세포가 골고루 분산되도록 잘 혼합하여 6-7일 마다 계대배양하면서 실험에 사용하였다. 계대배양시 각각의 passage number로 기록하였고 passage number가 10회 이상일 때는 새로운 암세포를 액체질소 탱크로부터 꺼내어 다시 배양하여 실험하였다.HT-29 human colon carcinoma cells were purchased from the Korean Cell Line Bank (Seoul National University) and used for the experiment. And cultured in RPMI 1640 medium containing 100 units / mL penicillin-streptomycin and 10% FBS at 37 ° C in a 5% CO 2 incubator. Each cultured cancer cell was refeeded 2-3 times a week, washed with PBS in 6-7 days, and then the cells adhered with 0.05% trypsin-0.02% EDTA were separated, centrifuged, and the culture medium was added to the integrated cancer cells The mixture was well mixed to uniformly disperse the cancer cells with a pipette, and the cells were subcultured every 6-7 days. When the passage number was 10 or more, new cancer cells were taken out from the liquid nitrogen tank and cultured again.

(3) (3) MTTMTT assayassay

배양된 암세포를 96well plate에 well당 2×104 cells/mL이 되도록 분주하고 24시간 동안 배양하였다. 이후 96 well plate의 배지를 제거하고, 상기 실시예 <7-1>에서 수득한 김치 착즙액(시료)와 김치의 메탄올 추출물을 농도별로 희석하여 100 μL씩 첨가한 다음, 37°C, 5% CO2 배양기에서 48시간 배양하였다. 48시간 후 시료를 제거한 다음 phosphate buffered saline(PBS)에 5 mg/mL의 농도로 제조한 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide(MTT) 용액과 배지를 혼합하여 100 μL를 첨가하여 동일한 배양 조건에서 4시간 동안 배양하였다. 이때 생성된 포르마잔 결정은 DMSO에 녹여 ELISA reader(model 680, Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 540 nm에서 흡광도를 측정하였고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.The cultured cancer cells were plated at a density of 2 × 10 4 cells / mL per 96 well plate and cultured for 24 hours. Then, the medium of the 96-well plate was removed, and the methanol extract of the kimchi juice (sample) obtained in the above Example <7-1> and the methanol extract of Kimchi were diluted by the concentration, and 100 μL was added thereto. CO 2 incubator for 48 hours. After 48 hours, the sample was removed and a solution of 3- (4,5-dimethyl-thiazol-2-yl) -2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) in phosphate buffered saline (PBS) And medium were mixed and 100 μL was added and cultured for 4 hours under the same culture condition. The resulting formazan crystals were dissolved in DMSO and absorbance was measured at 540 nm using an ELISA reader (model 680, Bio-Rad, Hercules, CA, USA). The results are shown in Table 2 below.

Figure pat00002
Figure pat00002

a-d 는 Duncan’s 다중 범위 테스트를 통해 유의적인 차이가 있음을 나타낸 것이다. (p<0.05)
Ad indicates significant differences through Duncan's multiple range test. (p &lt; 0.05)

분석 결과, 각기 다른 종류의 스타터를 첨가한 김치와 스타터를 첨가하지 않은 김치로부터 수득한 착즙액 및 김치 메탄올 추출물을 농도에 따라 in vitro HT-29 인체 결장암세포에 처리한 결과, 스타터를 첨가하지 않은 김치에 비해 스타터를 첨가한 김치가 유의적으로 높은 암세포 성장 저해율을 나타내었으며 여러 스타터 첨가 김치 중에 본 발명의 신균주인 LP PNU 균주는 가장 높은 암세포 성장 저해율을 나타내었다.
Analysis, respectively along a liquid juice and sauerkraut methanol extract obtained from kimchi, a group without addition of different kinds of kimchi starters and starter added in concentration in vitro HT-29 human colon cancer cells treated with starter showed a significantly higher inhibition rate of cancer cell growth than starter-added kimchi. In the starter-added kimchi, the novel strain, LP PNU strain, Showed the highest cancer cell growth inhibition rate.

<< 실시예Example 9> 9>

본 발명에서 분리 동정한 In the present invention, 신균주의New strain 염증 관련 유전자 발현 억제 효과 분석 Analysis of inhibitory effect of inflammation related gene expression

나아가 본 발명자들은 상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 신균주가 암 세포에서 발현되고 있는 염증 관련 유전자의 발현을 억제하는 활성이 있는지 조사하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다. 유전자 발현은 ExiCycler((Bioneer, Daejeon, Korea)를 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)으로 측정하였는데, 이를 위해 배양한 암세포를 6well plate에 well당 2×106 cells/mL이 되도록 분주하고 37°C, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양한 후 배지를 제거하고, 새 배지에 김치의 메탄올 추출물을 5 mg/mL 농도로 첨가한 다음, 동일한 조건에서 48시간 배양하였다. 48시간 후 PBS로 1회 세척한 다음 trizol로 6 well plate에 부착된 cell을 모아 1,200 rpm에서 3분간 원심분리한 다음 cell을 모아 RT-PCR을 수행하여 iNOS와 COX-2의 mRNA 발현을 측정하였다.
Furthermore, the present inventors conducted the following experiment to investigate whether the new strain isolated and identified in Example 1 had an activity of suppressing the expression of an inflammation-related gene expressed in cancer cells. Gene expression was measured by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) using ExiCycler (Bioneer, Daejeon, Korea). For this, the cancer cells were cultured in a 6- well plate at a density of 2 × 10 6 cells / mL, and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 24 hours. The medium was removed, and the methanol extract of Kimchi was added to the fresh medium at a concentration of 5 mg / mL. After 48 hours, the cells were washed once with PBS, and the cells adhered to the 6 well plate were collected with trizol, centrifuged at 1,200 rpm for 3 minutes, and the cells were collected and RT-PCR was performed to measure the mRNA expression of iNOS and COX-2 Were measured.

그 결과, 염증유발 단백질로 알려진 iNOS과 COX-2의 유전자 발현은 스타터 균주를 사용한 김치의 경우, 스타터 균주를 사용하지 않은 대조군에 배해 iNOS와 COX-2의 발현이 억제되는 것으로 나타났는데, 특히 본 발명의 LP PNU 균주는 이들 단백질의 발현을 가장 효과적으로 억제시키는 활성이 있는 것으로 나타났다(도 9 및 도 10 참조).
As a result, expression of iNOS and COX-2 gene, known as inflammation-inducing proteins, was inhibited in the case of Kimchi using starter strain by inhibition of iNOS and COX-2 expression in control group without starter strain, The LP PNU strain of the present invention was found to have the activity of suppressing the expression of these proteins most effectively (see FIGS. 9 and 10).

<< 실시예Example 10> 10>

항암스타터김치의Cancer starter Kimchi 대장암 예방 효과 분석 Colon cancer prevention effect analysis

실시예 <2-4>의 방법으로 제조한 김치들을 Balb/c 마우스(mouse)에 투여하여 항암스타터김치의 항암효과를 분석하였다.
Kimchi prepared by the method of Example <2-4> was administered to Balb / c mouse to analyze anticancer effect of anti-cancer starter kimchi.

통상적으로 대장암에 대한 실험에 이용되는 실험방법으로 Balb/c mouse 6주령을 윤리적으로 이용하여 스타터 첨가 김치의 대장암의 예방효과를 실험하였다. 즉, 이를 위해 실험 시작일에 AOM을 투여하고 2주 후에 2% DSS를 1주일간 음수로 자유 섭취하도록 하였다. 또한 2주간 휴식기를 가진 후에 1주간 DSS를 자유섭취한 후 다시 2주간의 휴식기를 가지도록 하였다. 이후 실시예 <2-4>의 방법으로 제조한 김치 시료는 DSS를 처음 투여하는 시점(실험 시작 2주 후)부터 실험 시작 6주까지 경구투여하였다. 이상과 같은 마우스 모델을 대상으로 진행한 상기 실험 진행 모델은 도 11에 나타내었다.
As a test method for colon cancer, 6-week-old Balb / c mouse was used ethically to test the preventive effect of starter-added kimchi against colon cancer. For this purpose, AOM was administered at the start of the experiment and 2% DSS was given 2 weeks after the start of the experiment. After 2 weeks of rest, the subjects were free to eat DSS for 1 week and then had a rest for 2 weeks. The kimchi samples prepared by the method of Example <2-4> were orally administered from the time of the first administration of DSS (2 weeks after the start of the experiment) to 6 weeks of the experiment. FIG. 11 shows the experimental progress model of the mouse model.

분석 결과, 도 12에 나타낸 바와 같이 대장암을 유도시킨 동물의 대장을 적출한 후 대장의 tumor 수를 관찰한 결과, 스타터를 첨가한 김치가 스타터를 첨가하지 않은 김치보다 종양의 발생 수가 적었고, 특히 본 발명의 신균주인 LP PNU를 첨가한 김치에서 유의적으로 종양의 생성수가 낮은 것을 관찰되었다. 또한 LM PNU과 함께 LP PNU를 첨가한 경우 LM PNU과 LP 3099를 첨가하였을 때보다 종양의 발생이 적은 것으로 나타났다.
As a result of the analysis, as shown in Fig. 12, when the colon of an animal induced by colorectal cancer was excised, the number of tumors in the large intestine was observed. As a result, the number of tumors was smaller than that of kimchi without starter It was observed that the number of tumor production was significantly lower in the kimchi supplemented with LP PNU, the new strain of the present invention. In addition, the addition of LP PNU together with LM PNU showed less occurrence of tumor than when LM PNU and LP 3099 were added.

<< 실시예Example 11> 11>

항암스타터김치의Cancer starter Kimchi 항비만Anti-obesity 효과 분석 Effect analysis

본 발명자들은 실시예 <2-4>의 방법으로 제조된 각각의 김치가 항비만 활성을 가지는지 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.
The present inventors conducted the following experiment to determine whether each of the kimchi prepared by the method of Example <2-4> had anti-obesity activity.

먼저, 10% BCS를 첨가한 DMEM으로 Mouse 3T3-L1 지방선구세포(pre-adipocyte)를 37℃ 5% 탄산가스로 충진된 배양기에 넣었으며, 포화상태에 이른 것을 확인한 다음 IBMX(0.5mM)와 덱사메타손(dexamethasone, 1.25mM), 인슐린(insulin, 4mg/mL), 10% FBS를 첨가한 DMEM(분화배지)으로 교체해 2일간 배양하였다. 이후에는 10% FBS만 첨가한 DMEM을 사용해 2일 간격으로 교체하며 배양하였으며, 분화배지를 첨가해 분화 유도를 시작한 지 8일차에 각 김치의 메탄올 추출물을 첨가하였으며, 이후 24시간을 추가로 배양하였다.First, mouse 3T3-L1 preadipocytes were placed in an incubator filled with 5% carbonic acid gas at 37 ° C in DMEM supplemented with 10% BCS. After confirming saturation, IBMX (0.5 mM) and (DMEM) supplemented with dexamethasone (1.25 mM), insulin (4 mg / mL) and 10% FBS (differentiation medium) for 2 days. Thereafter, the medium was replaced with DMEM supplemented with 10% FBS at 2 days intervals. The methanol extract of each kimchi was added on the eighth day after the induction of differentiation by adding the differentiation medium, and then 24 hours was further cultured .

본 발명자들은 상기와 같이 배양한 지방세포를 Oil-red O 염색법을 실시해 지질의 축적을 조사하였다. 배양액을 흡인해 낸 후 PBS로 3회 세척하고 3.8% 포름알데히드(formaldehyde)로 4시간 이상 고정하였으며, 이후 PBS로 3회 세척하고 미리 조제된 Oil-red O 염색약으로 1시간 염색을 실시하였다. 염색된 세포를 현미경으로 관찰하며 촬영한 후 이소프로판올(isopropanol)로 30분간 탈염을 실시하고 염색약을 회수해 540nm의 파장을 조사해 OD값을 측정하였다. 또한 Oil-red O로 염색하여 1시간 내에 지방세포를 촬영하였다.
The present inventors examined the accumulation of lipids by performing oil-red O staining method on the adipocytes cultured as described above. The culture was aspirated, washed 3 times with PBS, fixed with 3.8% formaldehyde for 4 hours or more, washed three times with PBS, and stained with Oil-red O dye for 1 hour. The stained cells were observed with a microscope, and then desalted with isopropanol for 30 minutes. The dye was recovered and the OD value was measured by irradiating a wavelength of 540 nm. In addition, staining with Oil-red O stained fat cells within 1 hour.

그 결과, 스타터를 첨가하지 않은 NK군에 비해 스타터를 첨가한 LP전주군, LM전주군, LP+LM 혼합군에서 지방구의 크기 및 수가 감소하여 항 비만 효과가 좋음을 알 수 있었고, 이들 각각을 비교하였을 때는 LP전주군은 0.45, LM전주군은 0.52로 대조군의 0.53과 비교하였을 때, LP전주군에서 대조군과 유의적인 차이를 보였다. 또한, 혼합 스타터를 첨가한 LP+LM 군은 0.32로 대조군(control)과 비교하였을 때 항 비만 효과가 가장 좋음을 알 수 있었다(도 13 및 14 참조).
As a result, it was found that the anti-obesity effect was better because the size and number of fat spheres were decreased in LP group, LM electrophoresis group and LP + LM mixed group with starter compared with NK group without starter, Compared with the control group, the LP electrophoresis group showed a significant difference from the control group when compared with the control group (0.45, LM electrophoresis group, 0.52). In addition, the LP + LM group to which the mixed starter was added had a value of 0.32, indicating that the anti-obesity effect was the best when compared with the control (see FIGS. 13 and 14).

<< 실시예Example 12> 12>

항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ), ), 항암녹차스타터김치(AKS)의Cancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) InIn vitrovitro 항산화효과 Antioxidative effect

상기 실시예 <2-6> 및 <2-7>에서 제조한 김치의 항산화 효과를 확인하기 위해 DPPH radical 소거능을 갖는지 다음과 같은 실험을 실시하였다.
In order to confirm the antioxidative effect of the kimchi prepared in the above Examples <2-6> and <2-7>, the following experiment was carried out with DPPH radical scavenging ability.

실시예 <2-5>, <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치(AKS)를 동결건조하여 파우더로 만든 후 이 파우더를 20배의 메탄올로 추출하여 얻은 메탄올 추출물을 실험에 이용하였다. 김치 시료 100 μL와 1.5 × 104 M DPPH (1,1-diphenyl-2-pic rylhydrazul) methanol solution 100 μL 를 96-well plate에 혼합하여 빛을 차단하여 30분간 방치 한 후 분광광도계(UV.VIS Spectrophotometer, Jasco, Japan)을 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 시료를 첨가한 실험군과의 흡광도 차이를 백분율(%)로 나타내었다. DPPH는 free radical을 가지고 있어 항산화 능력이 있는 물질과 반응하게 되면 안정한 형태로 돌아가면서 흡광도가 감소하게 된다. Standardized Kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK) and anticancer green tea starch kimchi (AKS) prepared in Examples <2-5>, <2-6> and <2-7> After making this powder, the methanol extract obtained by extracting 20 times of methanol was used for the experiment. 100 μL of Kimchi samples and 100 μL of 1.5 × 10 4 DPPH (1, 1-diphenyl-2-picylhydrazol) methanol solution were mixed in a 96-well plate and allowed to stand for 30 minutes with light blocking. , Jasco, Japan) was used to measure the absorbance at 540 nm. The difference in absorbance between the control group to which no sample was added and the experimental group to which the sample was added was expressed as a percentage (%). DPPH has free radicals, and when it reacts with antioxidant substances, the absorbance decreases as it returns to a stable form.

실험결과는 도 18에 나타내었으며, 3가지 김치의 DPPH radical 소거 효과를 측정한 결과, SK는 64%의 항산화효과를 보인 반면 AK는 70%, AK-S는 76%의 높은 항산화효과를 보였다. 이를 통해 스타터를 첨가하면 유의적으로 항산화 효과가 증진된다는 것을 알 수 있었다.
The results of the experiment are shown in FIG. 18. As a result of measuring DPPH radical scavenging effect of the three kimchi, SK showed antioxidative effect of 64%, whereas AK showed a high antioxidative effect of 70% and AK-S had a high antioxidative effect. It was found that the antioxidative effect was significantly enhanced by adding starter.

<< 실시예Example 13> 13>

항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ) 및 ) And 항암녹차스타터김치(AKS)의Cancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) InIn vitrovitro 항암 효과 실험 Anti-cancer effect experiment

상기 실시예 <2-6> 및 <2-7>에서 제조한 김치의 항암효과를 확인하기 위해 대장암 세포에서 다음과 같은 실험을 실시하였다.
In order to confirm the anticancer effect of the kimchi prepared in the above Examples <2-6> and <2-7>, the following experiment was conducted on colon cancer cells.

<13-1> <13-1> HTHT -29 인체 대장암 세포배양-29 Human colon cancer cell culture

HT-29 인체 결장암세포(HT-29 human colon carcinoma cell)는 한국세포주은행(서울의대)으로부터 분양 받아 실험에 사용하였다. 100units/mL의 penicillin-streptomycin과 10%의 FBS가 함유된 RPMI 1640을 사용하여 37°C, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 배양된 각각의 암세포는 일주일에 2-3회 refeeding하고 6-7일 만에 PBS로 세척한 후 0.05% trypsin-0.02% EDTA로 부착된 세포를 분리하여 원심분리한 후 집적된 암세포에 배지를 넣고 피펫으로 암세포가 골고루 분산되도록 잘 혼합하여 6-7일 마다 계대배양하면서 실험에 사용하였다. 계대배양시 각각의 passage number로 기록하였고 passage number가 10회 이상일 때는 새로운 암세포를 액체질소 탱크로부터 꺼내어 다시 배양하여 실험하였다.
HT-29 human colon carcinoma cells were purchased from the Korean Cell Line Bank (Seoul National University) and used for the experiment. And cultured in RPMI 1640 medium containing 100 units / mL penicillin-streptomycin and 10% FBS at 37 ° C in a 5% CO2 incubator. Each cultured cancer cell was refeeded 2-3 times a week, washed with PBS in 6-7 days, and then the cells adhered with 0.05% trypsin-0.02% EDTA were separated, centrifuged, and the culture medium was added to the integrated cancer cells The mixture was well mixed to uniformly disperse the cancer cells with a pipette, and the cells were subcultured every 6-7 days. When the passage number was 10 or more, new cancer cells were taken out from the liquid nitrogen tank and cultured again.

<13-2> <13-2> MTTMTT assayassay

배양된 암세포를 96well plate에 well당 2×104 cells/mL이 되도록 분주하고 24시간 배양하였다. 96 well plate의 배지를 제거하고, 시료를 농도별로 희석하여 100 μL씩 첨가한 다음, 37°C, 5% CO2 incubator에서 48시간 배양하였다. 48시간 후 시료를 제거한 다음 phosphate buffered saline(PBS)에 5 mg/mL의 농도로 제조한 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide(MTT) 용액과 배지를 혼합하여 100μL를 첨가하여 동일한 배양 조건에서 4시간 동안 배양하였다. 이때 생성된 formazan 결정을 DMSO에 녹여 ELISA reader(model 680, Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
The cultured cancer cells were plated at a density of 2 × 10 4 cells / mL per 96 well plate and cultured for 24 hours. The medium was removed from the 96-well plate, and 100 μL of the diluted samples was added to each well. The cells were incubated at 37 ° C in a 5% CO 2 incubator for 48 hours. After 48 hours, the sample was removed and a solution of 3- (4,5-dimethyl-thiazol-2-yl) -2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) in phosphate buffered saline (PBS) And medium were mixed and 100 μL was added and cultured for 4 hours under the same culture conditions. The resulting formazan crystals were dissolved in DMSO and absorbance was measured at 540 nm using an ELISA reader (model 680, Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

실험결과는 도 19에 나타내었으며, 실시예 <2-5>, <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치(AKS)의 메탄올 추출물을 HT-29 인체 결장암세포에서의 성장 억제 효과를 관찰한 결과, 가장 높은 암세포 성장 저해 효과를 보인 것은 AKS이었다. AKS는 57.6%의 암세포 성장 저해 효과를 보였으며 AK(46.4%) 보다 높아 김치 제조시에 첨가된 starter가 항암효과를 증진시키는 것을 확인하였다. 반면 표준김치는 37.9%로 가장 낮은 암세포 성장 저해 효과를 보였다.
The results of the experiment are shown in FIG. 19. The results are shown in FIG. 19, and the standardized kimchi (SK), anticancer green tea kimchi (AK), anticancer green tea starch kimchi (AKS) inhibited the growth of HT-29 human colon cancer cells. The highest inhibitory effect of AKS on the growth of cancer cells was observed in HT-29 human colon cancer cells. AKS inhibited the growth of cancer cells by 57.6% and higher than that of AK (46.4%). On the other hand, standard kimchi showed the lowest inhibition effect on cancer cell growth as 37.9%.

<< 실시예Example 14> 14>

항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ) 및 ) And 항암녹차스타터김치(AKS)의Cancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) InIn vitrovitro 항비만Anti-obesity 효과 실험 Effect experiment

본 발명자들은 실시예 <2-6> 및 <2-7>에서 제조한 김치의 항비만 효과를 확인하기 위해 3T3-L1 지방세포에서 실험을 실시하였다.
The present inventors conducted experiments on 3T3-L1 adipocytes to confirm the anti-obesity effect of the kimchi prepared in Examples <2-6> and <2-7>.

<14-1> 3<14-1> 3 T3T3 -- L1L1 지방세포 배양 Adipocyte culture

10% BCS를 첨가한 DMEM으로 Mouse 3T3-L1 pre-adipocyte를 37℃ 5% 탄산가스로 충진된 배양기에 넣었으며, 포화상태에 이른 것을 확인한 다음 IBMX(0.5mM)와 dexamethasone(1.25mM), insulin (4mg/mL), 10% FBS를 첨가한 DMEM(분화배지)으로 교체해 2일간 배양하였다. 이후에는 10% FBS만 첨가한 DMEM을 사용해 2일 간격으로 교체하며 배양하였다. 분화배지를 첨가해 분화 유도를 시작한 지 8일차에 각 김치의 메탄올 추출물을 첨가하였으며, 이후 24시간을 추가로 배양하였다.
Mouse 3T3-L1 pre-adipocyte was inoculated into DMEM supplemented with 10% BCS in an incubator filled with 5% carbonic acid gas at 37 ° C. After confirming that the cells reached saturation, they were incubated with IBMX (0.5 mM), dexamethasone (1.25 mM) (4 mg / mL), DMEM supplemented with 10% FBS (differentiation medium) and cultured for 2 days. The cells were then cultured in DMEM supplemented with 10% FBS at 2-day intervals. The methanol extract of each kimchi was added on the eighth day after induction of differentiation by adding differentiation medium, and then 24 hours was further cultured.

<14-2> <14-2> OilOil -- redred O 염색법 및 지방세포 크기 계측 O staining and fat cell size measurement

배양한 지방세포를 Oil-red O 염색법을 실시해 지질이 축적을 조사하였다. 배양액을 흡인해 낸 후 PBS로 3회 세척하고 3.8% formaldehyde로 4시간 이상 고정하였다. 이후 PBS로 3회 세척하고 미리 조제된 Oil-red O 염색약으로 1시간 염색을 실시하였다. 염색된 세포를 현미경으로 관찰하며 촬영한 후 isopropanol로 30분간 탈염을 실시하고 염색약을 회수해 540nm의 파장을 조사해 OD값을 측정하였다. 또한 Oil-red O로 염색하여 1시간 내에 지방세포를 촬영하였다.
Cultured adipocytes were stained with Oil-red O and their accumulation was examined. The culture was aspirated, washed three times with PBS and fixed with 3.8% formaldehyde for at least 4 hours. The cells were then washed three times with PBS and stained for one hour with the oil-red O dye previously prepared. The stained cells were observed with a microscope, and then desalted with isopropanol for 30 minutes. The dye was recovered and the OD value was measured by irradiating a wavelength of 540 nm. In addition, staining with Oil-red O stained fat cells within 1 hour.

실험 결과는 도 20 및 도 21에 나타내었으며, 실시예 <2-5>, <2-6> 및 <2-7> 에서 제조한 부산대학교 표준화김치(SK), 항암녹차김치(AK), 항암녹차스타터김치(AKS)를 사용하였으며, 실험결과 SK, AK, AKS를 처리한 실험군에서 미처리군인 control 보다 지방구의 크기 및 수가 감소함을 확인하였다. 김치 간 효과를 비교하였을 때, SK 보다 AK 및 AKS 처리구에서 그 효과가 높았으며 특히 AKS 처리구에서 가장 높은 효과가 나타났다(도 20 참조). OD값 측정 결과 SK는 control에 비해 약 29.6%, Ak는 43.6%, AKS는 48.6%의 억제 효과를 보여 AKS 처리구에서 가장 지방의 축적이 적은 것을 확인하였다(도 21 참조).
The results of the experiment are shown in Figs. 20 and 21, and the standardized Kimchi (Kimchi) of Pusan National University produced in Examples <2-5>, <2-6> and <2-7>, cancer green tea kimchi (AK) Green tea starter kimchi (AKS) was used. The experimental results showed that the size and number of lipids decreased in the experimental group treated with SK, AK, AKS. When the effects of kimchi were compared, the effects of AK and AKS treatment were higher than those of SK treatment, and AKS treated treatment showed the highest effect (see FIG. 20). As a result of measuring the OD value, SK showed an inhibitory effect of about 29.6%, 43.6% of AK, and 48.6% of AKS compared with the control, and it was confirmed that the accumulation of fat was the least in AKS treatment (see FIG.

<< 실시예Example 15> 15>

항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ) 및 ) And 항암녹차스타터김치(AKS)의Cancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) 동물실험 Animal experiment

본 발명자들은 실시예 2-6 및 2-7에서 제조한 김치의 항비만 효과를 확인하기 위해 C57BL/6J 마우스 모델에서 다음과 같은 실험을 실시하였다.
The present inventors conducted the following experiments in a C57BL / 6J mouse model to confirm the anti-obesity effect of the kimchi prepared in Examples 2-6 and 2-7.

<15-1> 실험동물 및 &Lt; 15-1 > 실험군의Experimental group 설정 Set

실험동물은 6주령의 C57BL/6계 수컷 마우스를 샘타코에서 구매하여 1주간 적응시킨 후 체중이 평균 21.5±0.52 g 정도 되는 것을 본 실험에 사용하였다. 실험군의 설정은 일반식이(AIN-93G)를 섭취한 정상대조군(STD군), 45% HFD(high fat diet)가 함유된 고지방식이를 섭취한 비만대조군(HFD군), 45% HFD와 일반김치 추출물이 3% 함유된 식이를 섭취한 HFD+NK군, 45% HFD와 항비만 및 항암 기능성을 가지는 김치(AK) 추출물이 3% 함유된 식이를 섭취한 HFD+AK군, 45% HFD와 AK에 starter를 첨가한 김치(AKS) 추출물이 3% 함유된 식이를 섭취한 HFD+AKS군으로 총 5군으로 나누어 각 군당 마리수를 8마리씩 배정하였고 8주동안 실험하였다.
Experimental animals were divided into two groups. C57BL / 6 male mice were purchased from Samtaco at 6 weeks of age and weighed 21.5 ± 0.52g after 1 week of adaptation. The experimental group was composed of a normal control group (STD group), 45% HFD (high fat diet), 45% HFD group, HFD + AK group, 45% HFD, which consumed diet containing 3% Kimchi extract, 45% HFD, and HFD + AK group, which consumed diet containing 3% Kimchi (AK) AKS (HFD + AKS) diet containing 3% of Kimchi (AKS) extract added with starter was divided into 5 groups and 8 rats were assigned to each group.

<15-2> 식이 공급<15-2> Dietary Supply

일반식이는 AIN-93G를, 고지방식이는 AIN-93G에 HFD를 45% 함유한 식이를 사용하였다. 김치 추출물은 각 3%를 첨가하여 자유섭취하도록 하였다. 각 실험동물에게 제공한 사료의 성분함량은 표 3과 같다.
A diet containing AIN-93G as a regular diet and AIN-93G and 45% HFD in a high fat diet was used. Kimchi extracts were supplemented with 3% each. Table 3 shows the contents of the feed provided to each experimental animal.

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<15-3> 체중 변화<15-3> Weight change

실험동물의 체중은 4일마다 1회 일정시간에 동일한 저울로 측정하였다. 8주 동안 실험동물의 체중을 측정한 결과는 도 22와 같이 HFD군이 STD군과 비교해 체중이 유의하게 높게 측정되어 비만의 유발을 확인할 수 있었다. 실험시작 후 8일째부터 비만유발군과 유발하지 않은 군간 유의적인 차이가 나타났으며 이후 지속적으로 유의적인 차이를 보였다(p<0.05). 8주간 가장 높은 체중을 보인 것은 비만유발군인 HFD군이었으며, STD군, HFD+AK군, HFD+AKS군 간에는 유의적인 차이가 없이 다른 군과 비교하여 낮은 체중이 낮았다. 이로써 AK 및 AKS를 섭취에 따른 체중 증가 억제를 확인하였다.
The body weights of the experimental animals were measured once every four days with the same balance at constant time. The body weight of the experimental animals was measured for 8 weeks. As shown in FIG. 22, the weight of the HFD group was significantly higher than that of the STD group and the induction of obesity was confirmed. From 8 days after the start of the experiment, there was a significant difference between the obese group and non-obese group (p <0.05). There was no significant difference between STD group, HFD + AK group and HFD + AKS group, and the lowest body weight was lower than the other groups. This confirmed the inhibition of weight gain due to AK and AKS ingestion.

<15-4> 지방의 무게<15-4> Weight of fat

실험결과는 도 23에 나타내었으며, 각 군별로 해부한 실험동물의 부고환 지방(epididymal fat) 및 신장 주위 지방(perirenal fat)을 적출하여 무게를 측정한 결과 STD를 섭취한 군에 비하여 HFD를 섭취한 군에서 유의적으로 지방 조직의 무게가 증가하여 HFD 섭취에 의한 비만의 유도를 확인하였다(p<0.05). 3가지 김치 섭취군에서 모두 HFD군에 비하여 유의적으로 부고환 지방 및 신장 주위 지방의 무게가 감소하여 김치가 지방을 감소시키는 효과가 있는 것으로 나타났다. 또한 일반김치를 섭취한 HFD+NK군에 비해 HFD+AK 및 HFD+AKS군에서 지방 축적이 낮았고 특히 HFD+AKS군에서 가장 지방 축적이 작아 김치에 starter 첨가에 따른 항비만 효과의 증진을 확인하였다.
The results of the experiment are shown in FIG. 23. The epididymal fat and perirenal fat of the experimental animals that were dissected by each group were measured and the weight was measured. As a result, the HFD was higher than the STD group The weight of adipose tissue was significantly increased in the group and the induction of obesity by HFD ingestion was confirmed (p <0.05). In the three kimchi intake groups, the weight of epididymal fat and peripheral fat was significantly decreased compared to the HFD group, indicating that kimchi had the effect of reducing fat. In addition, fat accumulation was low in HFD + AK and HFD + AKS group compared with HFD + NK group in general kimchi. Especially in HFD + AKS group, fat accumulation was small, .

<15-5> 혈청 분석<15-5> Serum analysis

각 실험군별로 모은 혈액을 3000 rpm에서 15분간 원심분리해서 혈청을 분리한 후, 분리된 혈청 중에서 총콜레스테롤(Total Cholesterol : TC), 총글리세롤(Total Glycerol : TG), LDL(low density lipoprotein), 글루코스(glucose) 등의 수준을 측정하기 위해서 혈청 분석 Kits (Asan Pharm, Seoul, South Korea)를 사용하였다. HDL은 HDL=[TC-(HDL+TG/5)]에 따라 계산하였다.Total blood cholesterol (TC), Total Glycerol (TG), low density lipoprotein (LDL), and glucose were measured by centrifugation at 3000 rpm for 15 minutes. (Asan Pharm, Seoul, South Korea) were used to measure the levels of glucose and the like. HDL was calculated according to HDL = [TC- (HDL + TG / 5)].

혈청 중 leptin 및 adiponectin은 R & D System 사(R&D Systems, Minnesota, USA)의 ELISA kit을 이용하여 제조사에서 제시한 방법에 따라 분석하였다.
Serum leptin and adiponectin were analyzed by ELISA kit (R & D Systems, Minnesota, USA) according to the manufacturer 's method.

혈청을 분석한 실험결과는 도 24 및 도 25에 나타내었으며, 혈청에서 TC, TG, LDL, glucose의 농도는 정상대조군(STD)군과 비교하여 고지방식(HFD)군에서 유의적으로 증가되어 HFD 섭취로 인한 비만이 유발됨을 확인하였다. TC, TG, LDL, glucose 모두에서 김치 투여에 따라 HFD군과 비교하여 유의적으로 감소됨을 확인하였고 그 효과는 SK보다 AK, AKS에서 높았다. 특히 HFD+AKS군은 HFD군과 비교하여 TG의 농도를 50% 이상 감소시키는 효과가 있는 것을 확인하였다. 조직세포에 존재하는 과잉의 콜레스테롤을 제거하는 기능이 있는 HDL은 HFD+AK군과 HFD+AKS군에서 STD군과 비슷하게 높은 것으로 나타났으며 HFD+AKS군에서 더 효과가 높았다(도 24 참조).
24 and 25, the concentrations of TC, TG, LDL, and glucose in the serum were significantly increased in the high fat diet (HFD) group compared to the normal control group (STD) Obesity was induced by ingestion. TC, TG, LDL, and glucose were significantly decreased compared to the HFD group according to the administration of kimchi. The effect was higher in AK and AKS than in SK. In particular, it was confirmed that the HFD + AKS group had an effect of reducing the concentration of TG by 50% or more as compared with the HFD group. HDL, which has the ability to remove excess cholesterol present in tissue cells, was found to be higher in the HFD + AK and HFD + AKS groups than in the STD group and was more effective in the HFD + AKS group (see FIG. 24).

지방세포에서 분비되는 adiponectin은 지방대사와 인슐린 민감성을 증가시키며 비만, 제2형 당뇨병 및 인슐린저항성이 심할수록 감소되고, 혈관 내피세포에 대해 항 염증작용을 함으로써 대사질환과 심혈관질환에 중요한 인자로 작용한다. Leptin 역시 지방세포에서 분비되어 주로 식욕조절과 포만감을 느끼게 하는 호르몬으로서 인슐린저항성과도 관련이 있으나 체지방량과 체중 증가와 관련이 큰 것으로 알려지고 있는데, leptin 농도의 증가는 혈관 기능의 손상과 관련이 있는 것으로 보고되고 있다.Adiponectin secreted from adipocytes increases lipid metabolism and insulin sensitivity. It decreases with increasing severity of obesity, type 2 diabetes and insulin resistance, and plays an important role in metabolic diseases and cardiovascular diseases by anti-inflammatory action on vascular endothelial cells do. Leptin is also known to be secreted from adipocytes and mainly controlling appetite and satiety. It is also associated with insulin resistance, but it is known to be associated with body fat and weight gain. Increased leptin levels are associated with impaired vascular function .

마우스의 혈청을 이용하여 adiponectin과 leptin의 분비량을 측정한 결과 모든 김치 투여군에서 adiponectin이 증가하고, leptin이 감소하여 김치가 비만을 억제하는 효과가 있다는 것을 확인하였다. 김치 투여군 중 특히 HFD+AKS군은 adiponectin의 농도가 높고, leptin의 농도가 낮은 것으로 나타나 비만을 억제하는 효과가 큰 것으로 나타났다(p<0.05)(도 25 참조).
The serum levels of adiponectin and leptin were measured by using mouse serum. As a result, it was confirmed that adiponectin was increased and leptin was decreased in all the kimchi treatment groups, and kimchi had an effect of inhibiting obesity. The concentration of adiponectin and the concentration of leptin were low in the HFD + AKS group (p <0.05) (FIG. 25).

<< 실시예Example 16> 16>

항암녹차김치Cancer green tea kimchi (( AKAK ) 및 ) And 항암녹차스타터김치(AKS)의Cancer Green Tea Starter Kimchi (AKS) 간 조직  Liver tissue mRNAmRNA 분석 analysis

본 발명자들은 실시예 2-6 및 2-7에서 제조한 김치의 항비만 효과를 확인하기 위해 간 조직에서의 mRNA 분석을 실시하였다.
The present inventors performed mRNA analysis in liver tissues to confirm the anti-obesity effect of the kimchi prepared in Examples 2-6 and 2-7.

각 실험군에서 실험동물의 간 조직을 임의로 선정하고, 이를 PBS로 세척하여 trizol을 이용하여 total RNA를 분리하였다. Oligo dT primer를 사용하면 분리한 RNA 중 mRNA가 모두 cDNA로 만들어지기 때문에 분리된 RNA를 정량한 후, oligo dT primer와 AMV reverse transcriptase를 이용하여 2 μg의 RNA에서 mRNA에 상보적인 ss cDNA로 역전사 시켰다. 이 cDNA를 template로 사용하여 SREBP-1c, CEPB/α, PPARγ 유전자를 polymerase chain reaction (PCR) 방법으로 특정 유전자 부위를 증폭하였다. 이때 internal control로 housekeeping 유전자인 β-actin을 사용하였다. 각 PCR 산물들을 2% agarose gel을 이용하여 전기영동하고 ethidium bromide (EtBr, Sigma, USA)를 이용하여 염색한 후 UV 하에서 확인하였다.In each experimental group, the liver tissue of the experimental animals was randomly selected, and the total RNA was isolated using trizol by washing with PBS. Since Oligo dT primer is used to isolate all of the mRNAs from the isolated RNA, the isolated RNA was quantitated and reverse transcribed to ss cDNA complementary to mRNA in 2 μg of RNA using oligo dT primer and AMV reverse transcriptase . Using this cDNA as a template, specific gene regions were amplified by polymerase chain reaction (PCR) of SREBP-1c, CEPB / α, and PPARγ genes. The housekeeping gene, β-actin, was used as an internal control. Each PCR product was electrophoresed using 2% agarose gel and stained with ethidium bromide (EtBr, Sigma, USA).

중성지방의 형성은 SREBPs(sterol regulatory element binding proteins), C/EBPs (CCAAT/enhancer binding proteins), PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ)와 같은 여러 transcription factors에 의해 조절된다. The formation of triglycerides is regulated by several transcription factors such as sterol regulatory element binding proteins (SREBPs), C / EBPs (CCAAT / enhancer binding proteins) and PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ).

SREBPs는 인슐린의 역할을 매개하여 지방산과 콜레스테롤의 생합성 경로에 관련되는 효소를 활성화하여 간에서 지방산과 콜레스테롤 합성을 유도하는 중요한 전사활성인자이며 그 중 간조직에서 SREBP-1c의 발현이 우세한 것으로 알려져 있다. C/EBPα는 지방세포의 전사조절분자 중의 하나로 지방세포의 후기 분화과정에 주요 전사인자이다. 다양한 섬유아세포에서 과다 발현하게 되면 adipogenesis를 유도한다고 보고되어 있다. PPAR-γ는 preadipocyte에서 지방 세포로 분화되는 과정 중 지방생성의 관여에 가장 중요한 역할을 하며 특히 후기 분화의 주요 전사인자로 알려져 있다. 이들은 지방세포의 분화와 관련된 여러 가지 enzyme들의 발현에 영향을 미치는 것으로 알려져 있으며 인슐린에 의해 활성화되는 C/EBPs나 SREBPs와 함께 지방합성과 저장에 관여하는 효소들의 발현을 조절하는 역할을 한다.SREBPs are important transcription factors that induce fatty acid and cholesterol synthesis in the liver by activating enzymes involved in the biosynthetic pathway of fatty acids and cholesterol by mediating the role of insulin, among which SREBP-1c is predominantly expressed in liver tissue . C / EBPα is one of the transcriptional regulatory molecules of adipocytes and is a major transcription factor in the late differentiation process of adipocytes. Overexpression in various fibroblasts has been reported to induce adipogenesis. PPAR-γ plays a major role in the involvement of lipogenesis during the differentiation process from preadipocyte to adipocyte, and is known to be a major transcription factor in late differentiation. They are known to affect the expression of various enzymes involved in the differentiation of adipocytes and play a role in regulating the expression of enzymes involved in lipid synthesis and storage, together with insulin-activated C / EBPs and SREBPs.

실험결과는 도 26에 나타내었으며, 실험동물의 간조직을 이용하여 SREBP-1c, C/EBPα 및 PPARγ의 mRNA 발현을 측정한 결과 HFD군, HFD+NK, HFD+AK, HFD+AKS군에서 STD군 보다 그 발현이 증가하여 비만 유도에 따라 발현이 증가됨을 확인하였다. 그러나 김치시료를 혼합한 사료를 제공한 HFD+SK, HFD+AK, HFD+AKS군에서 그 발현이 감소됨을 확인하였다(p<0.05). 특히 SK, AK를 섭취한 실험군 보다 AKS를 섭취한 군에서 가장 그 발현이 낮아 비만 억제 효과가 큰 것으로 나타났다.
The mRNA expression of SREBP-1c, C / EBPα and PPARγ was measured using the liver tissue of the experimental animals. The results were as follows: STDs in the HFD, HFD + NK, HFD + AK and HFD + And that the expression was increased by induction of obesity. However, the expression of HFD + SK, HFD + AK, and HFD + AKS in kimchi samples was decreased (p <0.05). In particular, AKS intake was lower in the group that received SK and AK than in the experimental group.

이상 본 발명의 실시예들을 통한 실험 결과를 토대로 볼 때, 본 발명에서 분리 및 동정한 신균주인 (1) 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)PNU - 기탁번호 KCCM11352P(일명 "LP PNU”라고 명명함)과 (2) 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides)PNU - 기탁번호 KCCM11353P(일명 "LM PNU" 이라고 명명함)는 우수한 항산화 활성, 항비만 활성 및 항암 활성 을 가지고 있을 뿐만 아니라, 발효 식품의 제조에 스타터로 사용할 경우, 상기와 같은 기능성 및 관능미가 우수한 발효 식품을 제조할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.
(1) Lactobacillus plantarum PNU-Deposit No. KCCM 11352P (also referred to as "LP PNU", hereinafter referred to as "LP PNU"), which is a new strain isolated and identified in the present invention, (2) Leuconostoc mesenteroides PNU - Accession No. KCCM11353P (also known as "LM PNU") not only has excellent antioxidant activity, anti-obesity activity and anticancer activity, It has been found that a fermented food having excellent functional and sensory properties as described above can be produced when it is used as a starter in manufacturing.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에 대한 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that the present invention may be embodied in various other forms without departing from the spirit or essential characteristics thereof. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

한국미생물보존센터(국외)Korea Microorganism Conservation Center (overseas) KCCM11352PKCCM11352P 2013012220130122 한국미생물보존센터(국외)Korea Microorganism Conservation Center (overseas) KCCM11353PKCCM11353P 2013012220130122

<110> Industry Academic Cooperation Foundation of Pusan University <120> Novel starter strain and method functional fermentation foods containing kimchi use thereof <130> pn1301-011 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1409 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LP PNU strain 16s rRNA sequence <400> 1 tcgaacgaac tctggtattg attggtgctt gcatcatgat ttacatttga gtgagtggcg 60 aactggtgag taacacgtgg gaaacctgcc cagaagtggg ggataacacc tggaaacaga 120 tgctaatacc gcataacaac ttggaccgca tggtccgagt ttgaaagatg gcttcggcta 180 tcacttttgg atggtcccgc ggcgtattag ctagatggtg gggtaacggc tcaccatggc 240 aatgatacgt agccgacctg agagggtaat cggccacatt gggactgaga cacggcccaa 300 actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg acgaaagtct gatggagcaa 360 cgccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaaactct gttgttaaag aagaacatat 420 ctgagagtaa ctgttcaggt attgacggta tttaaccaga aagccacggc taactacgtg 480 ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gatttattgg gcgtaaagcg 540 agcgcaggcg gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg 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<212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LM PNU strain 16s rRNA sequence <400> 2 tgcagtcgac gcacagcgaa aggtgcttgc acctttcaag tgagtggcga acgggtgagt 60 aacacgtgga caacctgcct caaggctggg gataacattt ggaaacagat gctaataccg 120 aataaaactt agtgtcgcat gacacaaagt taaaaggcgc ttcggcgtca cctagagatg 180 gatccgcggt gcattagtta gttggtgggg taaaggccta ccaagacaat gatgcatagc 240 cgagttgaga gactgatcgg ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag 300 gctgcagtag ggaatcttcc acaatgggcg aaagcctgat ggagcaacgc cgcgtgtgtg 360 atgaaggctt tcgggtcgta aagcactgtt gtatgggaag aacagctaga ataggaaatg 420 attttagttt gacggtacca taccagaaag ggacggctaa atacgtgcca gcagccgcgg 480 taatacgtat gtcccgagcg ttatccggat ttattgggcg taaagcgagc gcagacggtt 540 tattaagtct gatgtgaaag cccggagctc aactccggaa tggcattgga aactggttaa 600 cttgagtgca gtagaggtaa gtggaactcc atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg 660 gaagaacacc agtggcgaag gcggcttact ggactgcaac tgacgttgag gctcgaaagt 720 gtgggtagca aacaggatta gataccctgg tagtccacac cgtaaacgat gaacactagg 780 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Artificial Sequence <220> <223> LP PNU strain 16s rRNA sequence <400> 1 tcgaacgaac tctggtattg attggtgctt gcatcatgat ttacatttga gtgagtggcg 60 aactggtgag taacacgtgg gaaacctgcc cagaagtggg ggataacacc tggaaacaga 120 tgctaatacc gcataacaac ttggaccgca tggtccgagt ttgaaagatg gcttcggcta 180 tcacttttgg atggtcccgc ggcgtattag ctagatggtg gggtaacggc tcaccatggc 240 aatgatacgt agccgacctg agagggtaat cggccacatt gggactgaga cacggcccaa 300 actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg acgaaagtct gatggagcaa 360 cgccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaaactct gttgttaaag aagaacatat 420 ctgagagtaa ctgttcaggt attgacggta tttaaccaga aagccacggc taactacgtg 480 ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gatttattgg gcgtaaagcg 540 agcgcaggcg gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa gaagtgcatc 600 ggaaactggg aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtgaaat 660 gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt aactgacgct 720 gaggctcgaa agtatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca taccgtaaac 780 gatgaatgct 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Claims (19)

락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P). Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P). 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P).Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P). 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 발효식품 제조를 위한 스타터. A starter for the production of a fermented food comprising at least one selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) and Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P). 제3항에 있어서,
상기 스타터는 분말형태인 것을 특징으로 하는 스타터. The method of claim 3,
Wherein the starter is in powder form. 제3항의 스타터를 이용하여 발효식품을 제조하는 방법.A method for producing a fermented food using the starter of claim 3. 제5항에 있어서,
상기 발효식품은 김치, 오이, 무, 당근, 양파, 마늘, 고추 또는 갓 인 것을 특징으로 하는 발효식품을 제조하는 방법.6. The method of claim 5,
Wherein the fermented food comprises kimchi, cucumber, radish, carrot, onion, garlic, pepper or mustard. 제5항에 있어서,
상기 제조방법은 녹차를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 발효식품을 제조하는 방법.6. The method of claim 5,
Wherein the preparation method further comprises a green tea. 제5항의 방법으로 제조된 발효식품.A fermented food produced by the method of claim 5. 제8항에 있어서,
상기 발효식품은 항산화 활성, 항비만 활성 및 항암 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 발효식품.9. The method of claim 8,
Wherein the fermented food has an antioxidant activity, an anti-obesity activity and an anticancer activity. 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 또는 이의 배양물을 함유하는 식품첨가용 조성물.A composition for food addition containing Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) or a culture thereof. 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 또는 이의 배양물을 함유하는 프로바이오틱스(probiotics).Probiotics containing Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) or a culture thereof. 제11항의 프로바이오틱스(probiotics)를 유효성분으로 포함하는 유산균 제제.11. A lactic acid bacterial preparation comprising the probiotics of claim 11 as an active ingredient. 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P) 및 이의 배양물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 함유하는 비만 또는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물. Prevention and treatment of obesity or cancer containing one or more selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P), Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P) and cultures thereof A pharmaceutical composition. 제13항에 있어서,
상기 조성물은 녹차를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.14. The method of claim 13,
Wherein the composition further comprises green tea. 제13항에 있어서,
상기 암은 대장암인 것을 특징으로 하는 조성물.14. The method of claim 13,
Wherein the cancer is a colon cancer. 절인배추 100 중량부 대비 고춧가루 3.0~4.0중량부, 마늘 1.0~2.0중량부, 생강 0.3~10중량부, 젓갈 2.0~2.5중량부, 무 10~15중량부, 설탕 0.5~1.5중량부, 파 1.5~2.5중량부 및 배 2.0~3.5중량부를 포함하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치. 3.0 to 4.0 parts by weight of red pepper powder, 1.0 to 2.0 parts by weight of garlic, 0.3 to 10 parts by weight of ginger, 2.0 to 2.5 parts by weight of salted seaweed, 10 to 15 parts by weight of silage, 0.5 to 1.5 parts by weight of sugar, ~ 2.5 parts by weight, and 2.0 ~ 3.5 parts by weight of pear, having anticancer activity or anti-obesity activity. 절인배추 100중량부 대비 고춧가루 2.0~3.0중량부, 마늘 2.5~3.5중량부, 생강 0.3~10중량부, 무 8~15중량부, 설탕 0.5~1.5중량부, 파 1.5~2.5중량부, 녹차 6.0~8.5중량부, 산초 0.5~1.5중량부, 배 2.0~3.5중량부, 버섯다시마물 25~45중량부 및 겨우살이 추출물 0.025~0.075중량부를 포함하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치. 2.0 to 3.0 parts by weight of red pepper powder, 2.5 to 3.5 parts by weight of garlic, 0.3 to 10 parts by weight of ginger, 0.5 to 1.5 parts by weight of sugar, 1.5 to 2.5 parts by weight of persimmon, To about 8.5 parts by weight, 0.5 to 1.5 parts by weight of anthocyanins, 2.0 to 3.5 parts by weight of pears, 25 to 45 parts by weight of mushroom remnants and 0.025 to 0.075 parts by weight of mistletoe extract. 제 17항에 있어서,
락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) PNU (KCCM11352P) 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) PNU (KCCM11353P)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 항암활성 또는 항비만활성을 갖는 김치.18. The method of claim 17,
Wherein the composition further comprises at least one selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum PNU (KCCM11352P) and Leuconostoc mesenteroides PNU (KCCM11353P). Kimchi with. 제1항 또는 제2항의 균주를 배양하는 단계; 및
배양한 상기 균주가 생산하는 프로바이오틱스를 수득하는 단계를 포함하는 프로바이오틱스를 생산하는 방법.
Culturing the strain of claim 1 or 2; And
Thereby obtaining a probiotic produced by the cultivated strain.
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