KR20140050260A - 원심 분리된 층들을 구분하여 추출하는 방법 및 키트 - Google Patents

Abstract

지방,골수,제대혈,말초혈액과 같은 생체조직으로부터 비중을 이용한 원심분리를 통하여 목적물을 (예:Platelet Rich Plasma, Platelet Poor Plasma , 지방세포,줄기세포등)얻기 위한 밀폐 및 일체형 원심분리형 키트로서 지방이나 골수 또는 혈액을 넣을 수 있는 내부공간을 갖는 원형의 3단 튜브(Tube)와 상단 튜브 내에 두 개의 복합 및 개별작동형 피스톤(가장 넓은 직경의 상단 튜브내의 목적물을 이동시킬 때 사용하는 피스톤 과 그 다음 크기 직경의 아래 튜브내의 목적물을 이동시킬 때 사용하는 피스톤) 과 원심 분리 후 피스톤과 결합하여 목적물에 압력을 가하기 위한 피스톤 막대로 이루어졌으며 3단 튜브의 맨 하단의 모세관은 PRP(Platelet Rich Plasma) 또는 줄기 세포같이 생체조직에 극미량 들어 있어 원심분리 후 그 목적물이 아주 엷은 층으로 분포되어 있어 그 층을 모세관으로 이동시키게 되면 목적물 층은 모세관에서 아주 두텁게 되어 그 층을 확연히 구분 및 추출할 수가 있고 다른 목적물과 이지 않고 정확하게 목적물만을 추출하기 위하여 하단부에는 원심분리 전 목적물을 넣거나 원심 분리 후 공기에 노출 없이 목적물을 추출해 낼 수 있는 회전형 분배 및 밀폐 밸브이다.

Description

원심 분리된 층들을 구분하여 추출하는 방법 및 키트{Extraction kit to get platelet rich plasma ,stem cells from fat or a material }

본 발명은 생체조직으로부터 원심분리를 통하여 목적물을 추출할 경우에 대기노출 오염(air contamination)을 막고 원심분리를 통하여 분리된 각각의 목적물들을 원심분리 후 이동시나 취급시에 다시 이게 되는 문제를 해결하여 고순도와 고농축의 목적물을 얻는 원심분리용 키트에 관한 것이다.

줄기세포란 스스로 증식하며 여러 가지 방향으로 분화할 수 있는 능력을 가진 세포를 말한다. 한편 성인의 몸은 대부분 분화된 세포로 구성되어 있다고 생각하지만 어느 정도 수준의 줄기세포가 존재한다. 따라서 성인의 몸에 있는 줄기세포는 생리적 병적 자극에 의해서 증식-분화하여 세포의 소실을 보충하는 역할을 한다.( Vasculogenesis with Adult Stem cell ,김효수,2003년 학술지). 줄기세포는 크게 성체 줄기세포와 배아줄기세포로 나뉘게 되며 성체 줄기 세포에는 조혈모 세포(Hematopoietic stem cell),신경분화세포(Neural stem cell,간 줄기세포(Hepatic stem cell),중간엽 줄기세포(MesenChymal stem cell)등을 포함하고 있어(The evolving concept of a stem cell: H.M. Blau,1 T.R. Brazelton, and J.M. Weimann,Department of Molecular Pharmacology,Stanford University School of Medicine Stanford, California 94305: Cell, Vol. 105, 829-841, June 29, 2001, Copyright .2001 by Cell Pres)근래의 세포치료에 활용되고 있다.성체 줄기세포는 인체 여러 조직에 포함되어 있고 가능한 부분은 혈액,지방,골수이며 혈액에 포함된 PRP( 혈소판 풍부 혈장),지방에 포함된 지방유래 줄기세포(Adipose derived stem cell)에 있어 혈액은 크게 적혈구, 백혈구 그리고 혈소판이 포함된 혈장으로 나눌수 있으며 혈소판에는 혈소판유래 성장인자(platelet-derived growth factor(PDGF)),형질변환 성장인자(transforming growth factor (TGF)), 혈소판 인자 4( platelet factor 4(PF4)), PDAF, VEGF, EGF, PDEGF,ECGF,IGF,등과 같은 성장 단백질을 갖고 있어서 상처 치료 와 지혈작용하는 역활을한다.(Platelet-Rich Plasma: A Review of Biology andApplications in Plastic Surgery;From the Division of Plastic Surgery, Indiana University School of Medicine; Biomet, Inc.; and Department of Bioengineering,University of Illinois at Chicago.Received for publication May 31, 2005; accepted January 5,2006.)혈액을 원심분리 하였을 경우 세 개의 층으로 나누게 되는데 비중에 따라 맨 하단에 적혈구 층이 그리고 맨 상단에 혈장층이 중간 에 혈액에서 약 1% 정도 차지 하는 버피코트(Buffy Coat)가 형성되는데 여기에는 백혈구 와 혈소판이 집중되어 있으며 백혈구의 일부를 줄기세포라 하며 혈소판유래 성장인자가 이 줄기 세포를 자극 및 활성화 시키는 것으로 알려져 있다.지방유래 줄기세포(Adipose-derived Stem Cells: ADSC)는 비교적 위험성이 적은 간단한 지방흡인술로 쉽게 얻을수 있으며 그 양 또한 풍부하다는 점이 장점이다. ADSC가 시험관실험(in vitro) 및 생체실험(in vivo)에서 피부의 재생 (Wound healing)을 촉진하며 콜라겐 생성을 촉진함을 이미 확인한 바 있으며, 이에는 ADSC에서 나온 다양한 성장인자가 작용한다는 사실을 밝힌 바 있다(Journal of Dermatological Science 2007;48(1):15-24).

혈액,지방 또는 골수 등에서 줄기세포를 추출할 경우 샘플 생체조직의 전체중에서 차지하는 줄기세포의 비율은 아주 미량이다. 따라서 그러한 미량을 집적해서 추출해서 사용해야 줄기세포치료의 성공률을 높일수 있다. 또한 줄기세포만을 추출해야지 다른 목적물과 이게 되면 부작용이 발생하게 된다. 혈액으로부터 줄기세포가 포함된 버피코트(Buffy Coat)를 추출하는 경우 혈액구성에 있어 적혈구의 양은 남자의 경우 혈장과 혈구의 비율이 대략 5.5:4.5이고 여성의 경우 6:4로 알려져 있으나 이 비율은 일반적인 사항으로서 그 편차가 크다. 개인도 신체조건에 따라 그 비율이 변화가 있다. 그래서 버피코트를 추출하는 경우 적혈구와 혈장의 중간에 위치하는 버피코트는 어느 부위에 위치할지를 전혀 예측할 수가 없다. 그래서 종래의 개발된 키트들은 키트내에 병목구간( 키트의 직경보다 아주 적은 직경)을 만들어 버피코트를 위쪽이나 아래쪽으로 이동시켜 줄기세포를 추출하게 되는데 버피코트를 위 아래로 움직이게 하는 장치인 키트의 마개를 돌려 전진시키거나 후진시키거나 하고 병목구간을 막대로 막아 재차 원심분리하는 경우들이 대부분이다. 이 경우 캡을 회전시켜 버피코트를 전후진을 하게 되면 키트자체가 흔들리게 되고 버피코트의 상하이동중 극미량(혈액의 경우 약 1%)의 버피코트는 적혈구와 이게 되는 것을 피할수 없다. 적혈구와 이게 되면 원심분리를 두번하는 경우가 있고 이 경우 줄기세포가 원심분리 과정에서 파손되어 그 효능이 떨어지게 된다.원심분리는 물질의 비중을 이용해서 각각의 물질을 분리하는 것인바 버피코트는 적혈구와 맞닿아 있고 적혈구 층과 가장 가까운 곳에 가장 많은 PRP가 들어있음은 자명한 사실이다.따라서 PRP층만을 완전히 분리해 내는 것이 기술의 핵심이라 할수 있다.

지방으로부터 줄기 세포를 추출하는 경우에는 더욱 복잡한 과정을 거치게 되는데 전체 지방으로부터 줄기세포의 포집양은 생리식염수포함 0.5%도 안되기 때문에 원심분리를 거치고 목적물을 취득시 정밀하게 목적물만을 취득할 수 있는 구조이어야 고순도의 줄기세포를 추출할 수가 있다.지방의 경우 최초 인체로부터 지방을 흡입한 경우 지방,투머센트용액,RBC,등의 물질이 혼합되어지는데 최초 원심분리시 맨상층에는 오일이 중간부위에는 순수 지방이 그리고 하부에는 RBC 와 투머센트용액등이 위치하게 된다. 이 경우에도 키트에서 순수지방만을 추출 해내야 시술 후 생착율이 극대화되고 부작용이 없게 된다.

아울러 또 다른 매우 중요한 사항은 대기중에 노출되어 발생되는 2차 감염이다.KS I ISO 14644-1[변경전 : KSMISO14644-1]:클린룸 및 관련된 제어환경-제1부: 공기청정도 등급 분류 표준에서 규정하고 있는 청정도 Class 1000이상에서 상기 작업을 수행하여야 하는데 대개의 병의원은 그러한 설비를 갖추고 있지 않다. 종래의 키트들은 최초 목적물을 키트에 넣는 과정,원심분리과정,원심분리가 끝나고 대상물을 분리하는 과정에서 대기에 노출되는 문제가 있다.따라서 원심분리 전이나 후에도 밀폐된 상태에서 상기 작업들이 반드시 이루어져야 된다.

튜브(14)는 세 개의 서로 다른 직경을 갖는 삼단 일체형 튜브로 구성되어 있고 아래 부분의 세관은 목적물을 확대 및 구분해 내기 위한 구조이며 세관 하단부에는 목적물이 빠져 나올수 있는 구멍이 튜브 길이 방향의 90도 방향에 설치 되어 있다. 혈액중에 있는 PRP의 경우 목적물중 1%만 존재하므로 튜브작경에 비하면 1mm도 안되는 매우 엷은층으로 되어 있어 이층을 아래 모세관으로 이동시키게 되면 버피코트층은 10mm이상 높이의 층을 이루게 되어 있어 손쉽게 PRP를 적혈구 층으로부터 분리해 낼 수 있다.튜브의 상부에는 두 개의 피스톤 고무(13,15)가 두 개의 플라스틱 하우징(11,12) 바깥면에 씌어져 있고 이들 결합체들은 튜브 상브캡에 걸림턱에 의하여 고정되어 있으며 원심분리시 원심력에 의하여 아래로 빠져 나가는 것을 방지하기 위함이다. 원심분리가 끝나면 튜브내의 분리된 목적물들을 회전형 분배 밸브를 통하여 추출하기 위하여 아래 모세관 방향으로 이동시켜야 되는데 두 개의 피스톤 고무 결합체들은 분리해 놓은 막대(18)를 고무 결합체와 결합시켜 회전시키면 걸림턱으로부터 걸린것이 해제가 되어 아래로 눌러 압력을 가해 목적물들을 흔들림 없이 이동시킬수가 있다. 두 개의 피스톤 고무중 직경이 큰 피스톤은 튜브의 상단부 큰직경에 사용되는데 이때 두 개의 피스톤들이 이 큰 직경 끝까지 내려오게 되고 그 끝단에서는 작은 직경의 피스톤고무가 압력을 가하며 아래로 이동하며 가압할 수가 있다.튜브의 하단 모세관 끝단에는 세방향 회전밸브(17)가 일체형으로 결합되어 있고 이 회전밸브는 원심분리후 연결될 3개의 시린지로 각각의 목적물을 밀페 상태에서 분배 이동시키는 역할을 하게 된다.세방형 회전밸브는 나사구조의 마개로 막을수 있는 구조로서 시린지를 연결하기 전에는 마개(16)로 닫혀있다.원심분리전에는 분리되어 있고 분리후에는 결합시킬수 있는 피스톤 막대(Push rod)(18)가있는데 이것을 일체형으로 하게 되면 너무 길어 원심분리기에 사용할 수가 없어 분리 및 결합구조로 되어 있다. 이 막대는 두 개의 피스톤 고무를 상부 캡(19)에 걸림턱에 걸려 있는것을 해제시키는 역할을 하며 아울러 튜브내의 목적물에 가압을 하여 분배밸브를 거쳐 시린지로 이송시키는 역할을 한다. 튜브의 상부캡(19)은 걸림턱 형상을 갖고 피스톤 고무가 아랫 방향으로 원심분리시 이탈하지 않도록 잡아주는 역할을 하게 된다

종래의 발명들은 튜브내의 막대를 이용하여 분리층을 막거나 튜브내의 또 다른 튜브를 이용하여 압력을 주어 원심분리된 층을 분리하는데 있어 목적물이 가장 응집된 층을 정확히 분리하여야 고순도의 목적물을 얻게 되는데 반하여 그 경계면이 서로 이거나 일부만 분리가 되는 문제가 있고 또 아울러 원심분리를 두 번하게 되므로 세포파괴 등의 문제를 수반 할수 가 있다. 그리고 원심분리 후 목적물을 추출하는 경우에도 목적물이 대기에 노출되거나 하여 2차 감염의 문제가 있다. 하지만 본 발명은 전체적으로 밀폐구조이면서 목적물을 튜브에 넣을 경우에도 하단 세방향 밸브를 통하여 밀폐상태에서 넣을 수 있고 또는 상부 피스톤 고무를 통하여 바늘을 통하여 목적물을 넣을 수 있다. 더욱이 원심분리 후 종래의 발명들은 목적물을 추출과정에서 버피코트를 위아래로의 조정과정에서 또는 니들로 버피코트를 추출과정에서 대기노출이 있게 되는데 본 발명은 세방향 분배밸브에 연결된 주사기를 밀폐상태에서 정확한 계량을 하여 추출할 수 있다.줄기세포는 생체조직에 미량 포함되어 있고 이 미량을 정확히 추출하여만 고순도의 줄기세포를 사용할 수가 있다. 아울러 줄기세포 이외의 물질이 이게 되면 부작용 등의 문제가 발생 할수 있으므로 목적물에서 정확히 줄기세포만을 추출하여야 되는데 전체 목적물중 줄기세포가 미량이므로 튜브의 직경이 크면 분포된 층이 매우 얇아 추출에 어려움이나 이게 되는 문제가 있고 그렇다고 튜브를 적게 만들면 적은 양만 처리를 할 수 있어 효율성에 문제가 있다. 따라서 본발명은 3단 튜브로 고안하여 충분한 양을 처리 할수 있게 하였고 충분한 양의 생체조직에 포함된 있는 미량의 줄기세포를 정확히 추출할 수 있는 긴 세관을 하단에 구비하여 버피코트나 줄기세포층을 충분히 두텁게 하여 손실 없이 정확한 양을 추출 할수 있도록 하였으며 더욱이 세관에는 세방향 밸브가 일체형 및 회전형으로 연결되어 있어 튜브내의 층으로 나누어진 목적물을 정확하게 손쉽게 구분 추출해 낼 수가 있다.

도면 1은 본 발명의 조립체 및 구성품의 사시도 및 단면도
도면 2는 3단튜브 의 사시도
도면 3은 3단튜브 하단에 조립될 3way 밸브의 사시도
도면 4는 3단튜브와 3way밸브 조립체 그리고 회전 작동을 나타낸 사시도
도면 5는 2개의 개별 피스톤 헤드가 결합된 사시도
도면 6은 2개의 개별 피스톤 헤드의 작동된 상태를 나타낸 사시도
도면 7은 걸림턱이 구비된 튜브의 마개
도면 8은 2개의 개별피스톤 헤드를 걸림턱으로부터 해제하거나 작동시키기 위한 피 스톤 막대
도면 9는 원심분리된후 튜브의 내부를 보여주는 단면도 및 사시도
도면10은 원심분리된후 층으로 나누어진 목적물들을 시린지로 각각 구분 이동 시키
기 위한 피스톤 막대와 시린지들을 결합시킨 사시도
도면11은 원심분리된후 층으로 나누어진 목적물들을 시린지로 각각 구분 이동시키
는 과정을 나타낸 사시도

첨부도면들과 함께 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용을 설명한다.도1은 본 발명의 구성품들을 나타낸다. 3단튜브(14)는 세 개의 서로 다른 직경을 갖고 있는데 목적물을 충분히 담을 수 있기 위하여 상부는 넓은 직경이고 중간의 직경은 원심분리 했을 때 혈액의 경우 PRP가 지방의 경우 순수지방이 중간튜브에서 층으로 나뉘어 지도록 하였으며 하단의 가장 적은 직경의 모세관은 줄기세포층이나 PRP층이 아주 미량임으로 넓은 직경에서는 그 대상물들을 추출할 경우 이게 되는 문제 또는 인 것을 다시 2차원심 분리하므로서 세포손상과 추가시간 소요의 문제가 있어 튜브의 맨 하단부를 세관으로 하여 줄기세포나 PRP층이 충분한 길이 만큼 두텁게 되어 시각적으로 정확히 그 대상물만을 추출하도록 하였다. 만일 3단튜브가 아닌 직경이 같은 튜브인 경우 직경이 작으면 생체로부터 취득한 목적물의 양을 소량만 처리할 수가 있어 효율성과 대기시간에 문제가 있고 큰 직경의 경우 추출 대상 물중 버피코트 또는 줄기 세포를 추출할 경우 그 경계면이 넓고 얇게 분포되어 있어 추출에 문제가 발생한다. 앞서 설명하였듯이 혈액의 경우 PRP에 적혈구가 포함될 경우 피시술자에 부작용이 있고 지방의 경우 오일이나 파괴된 지방세포가 줄기세포에 이게 되어도 마찬가지의 부작용이 있게 된다. 종래의 발명들은 이러한 문제를 해결하기 위하여 버피코트를 이동시키기 위한 마개를 회전 시키거나 병목구간을 만들거나 하여 병목구간을 막대를 이용하여 막아 층을 분리하여 PRP를 추출하거나 또는 2차원심 분리과정을 거치게 되는데 빠른 시간에 단 한번의 원심분리로 정확히 그 대상만을 추출해 낼 수 있어야 고순도의 목적물을 얻을수 있다. 도 4에서 보이듯이 3단튜브의 맨하단부 모세관 끝단에는 회전하여 목적물을 분리해 낼수 있는 회전형 3-way 밸브(도3)가 붙어있다. 3단튜브에서 원심분리된 목적물들 특히 혈액의 경우 버피코트를 추출할 때 도 9의 단면도와 같이 버피코트는 중간 튜브에 위치하게 되고 그 아래에는 적혈구가 모여 있게 된다. 따라서 원심분리 후 적혈구 층을 따로 먼저 분리해야 되는데 도10과 같이 피스톤막대를 연결하고 밀폐상태에서 3-way밸브의 각 입구쪽에 있는 나사형 마개를 빼고 그곳에 시린지를 각각 연결 시킨다 .그리고 시린지가 달려있는 3way밸브를 90도 회전시키게 되면 3개의 시린지중 하나에 통로로서 연결이 되고 이때 피스톤 막대(도 8)를 누르게 되면 튜브내의 전체 목적물에 양압이 발생하여 목적물은 시린지로 이동하게 되는데 이때 시린지를 잡아 당겨 음압을 이용해도 목적물은 이동할 수가 있다.이때 시린지는 루어락 구조로 되어 있고 원하는 용량의 시린지를 연결할 수가 있고 연결된 시린지를 통하여 원하는 양 만큼의 계량된 목적물을 얻을수 있다.예를 들어 혈액의 경우 버피코트(PRP)를 추출하고 상부에 있는 혈장(PPP)을 어서 쓰게 되는데 실린지를 통하여 정확히 버피코트를 추출하고 거기에 필요한 양만큼을 시린지 눈금을 보면서 혈장성분을 추출할수 있게 되는것이다. 3단튜브 와 3way 밸브는 투명해서 목적물들의 층과 이동을 육안으로 관찰할 수가 있고 도11과 같이 3단튜브의 모세관 맨 하단부 까지 층이 내려 온 것을 육안으로 확인되면 이때 3way밸브를 다시 90도 회전하여 다른 시린지로 통로로 연결시키고 이때 도11과 같이 혈액의 경우 모세관에서 두텁게 형성된 버피코트를 다른 시린지로 이동 시킬수가 있다. 여기서 중요한 것은 목적물들(순수지방,PRP,또는 적혈구)이 모세관의 맨 하단끝 까지 이동되면 그때 3way밸브를 회전시킴으로 어떤 임 현상없이 그 대상 목적물만을 정확히 추출해 낼수 있고 그 대상 목적물이 연결된 시린지로 양압 이나 음압으로 대기 노출 없이 밀폐상태에서 그대로 시린지로 이동 시킬 수가 있는 것이다.원심분리후 3단튜브의 상부 끝에 있는 걸림턱이 있는 마개(도7)를 90도 회전시키게 되면 튜브상단 내부에 있는 두 개의 개별작동 피스톤헤드 조립체(도5)가 걸림턱으로 부터 해제가 되어 상하로 움직일수 있게 된다. 이때 피스톤막대(도8)를 피스톤 헤드 조립체 (도5)상부 중간에 끼어 넣어 목적 대상물들을 아래로 이동시키기 위한 가압수단으로 사용하고 피스톤헤드 조립체가 3단튜브의 가장 직경이 넓은 부위로 이동이 끝나게 되면 도6과같이 바깥쪽 피스톤헤드 조립체는 정지해 있게 되고 가운데에 있는 조립체가 그 다음 직경의 중간튜브로 이동하게 되면서 가압을 시킬 수가 있다. 바깥쪽 피스톤 헤드 조립체에도 역시 중간부분의 피스톤 헤드를 고정 시키기 위한 걸림턱을 갖고 있고 중간 부분의 피스톤 헤드를 걸림턱으로 부터 해제 시킬 경우 피스톤 막대를 90톤 회전하면 손쉽게 해제가 되어 아랫 방향으로 이동시킬 수 있는 것이다. 피스톤이 반드시 움직여야 되는 중요성은 피스톤을 이용하여 가압하거나 연결된시린지로 음압을 발생하여 목적을을 추출할경우 튜븐내에는 양압이 시린지에는 음압이 되어야 외부공기의 유입이 차단되기 때문이다.

부호의 설명
11 : 중간 피스톤고무 지지대
15: 중간 피스톤 고무
12: 큰직경 피스톤고무 지지대
13: 큰직경 피스톤고무
19: 삼단 튜브 마개
14: 3단튜브
16: 3way 밸브 마개
17: 3way 밸브
18: 피스톤 막대

Claims (8)

1. 튜브의 직경이 서로 다른 일체형 3단튜브 ,튜브 상단에는 두 개의 피스톤이 결합된 일체형 그리고 개별작동형으로 걸림턱 구조의 튜브마개에 걸려 있고 튜브내의 목적물을 이동시키기 위한 탈,부착형 피스톤막대,튜브 하단에는 3단튜브와 결합되어 회전할수 있고 아울러 시린지들에 연결된 밀폐 상태에서 목적물을 분리 이동시킬수 있는 회전형 방향 밸브이고 회전형 방향밸브를 막는 나사형 마개,지방,골수,제대혈,말초혈액과 같은 생체조직으로부터 비중을 이용한 원심분리를 통하여 목적물을 (예:Platelet Rich Plasma, Platelet Poor Plasma 와 지방세포,줄기세포 )얻기 위한 밀폐 및 일체형 원심분리형 키트
2. 제 1항에 있어 상단 직경이 가장 넓은 부분은 비중이 가장 적은 물질(예: 오일,혈장 등)이 위치하고 그 다음 직경의 튜브에는 추출목적물 (예: 줄기세포가 포함된 버피코트(buffy coat))이 위치하는 부분이고 마지막 가장 좁은 직경의 튜브는 미량의 목적물( 예:버피코트, 순수 지방 등)층을 세관에서 확장시켜 육안으로 확인가능하여 목적물을 다른 물질과 이지 않고 쉽게 추출할 수 있는 3단 일체형 튜브.
3. 제1항에 있어서 튜브 상단 부위에는 튜브 내에 있는 목적물을 아래로 이동시키기 위한 2개의 피스톤이 결합 되어 있고 바깥쪽 피스톤은 가장 넓은 직경 에서 작동하며 가운데 피스톤은 중간크기의 튜브에서 작동되는 데 있어 서로 결합 되어 작동되기도 하고 분리해서 작동되는 구조의 개별 및 복합작동의 피스톤
4. 제 1 항에 있어서 원심분리시 원심력에 의하여 피스톤이 아래로 이동하지 않도록 걸림턱이 형성된 3단튜브의 마개
5. 제3항에 있어서 피스톤을 이동시키기 위한 막대로서 원심분리시에는 분리하고 원심분리후 목적물을 이동시킬 경우 부착할수 있는 탈,부착형 피스톤 막대
6. 제1항에 있어서 맨 하단에 위치한 밸브는 튜브자체를 회전시키거나 밸브자체를 회전시킴으로 목적물을 구분해서 밀폐구조에서 시린지등 타용기로 목적물을 이동시킬 수 있는 회전형 세 방향 밸브.
7. 청구항6 에 있어서 회전형 세방향 밸브는 각각의 입구에 시린지를 연결하여 목적물을 구분하여 시린지에 밀폐상태에서 담을 수 있는 구조.
8. 청구항 1에 있어서 원심분리후 목적물을 구분하여 하단에 있는 튜브와의 일체형,회전형 방향 밸브를 통하여 연결된 시린지들로 이동시키는 데 있어 상부에서 피스톤 막대로 누르는 양압 또는 시린지의 음압으로 목적물을 시린지로 이동시키는 목적물들의 분리 방법
   

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