KR20140003203A - 설폰아미드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 ｃ형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 설폰아미드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 설폰아미드계 화합물은 간세포에 대한 독성이 매우 낮으면서도, HCV의 게놈의 복제를 선택적으로 저해하는 효과를 우수하게 나타냄으로써, C형 간염의 예방 또는 치료에 매우 유용하게 사용할 수 있다.

Description

설폰아미드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 Ｃ형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating hepatitis C comprising sulfonamide compound}

본 발명은 설폰아미드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

간암과 간질환은 뇌혈관질환, 심장질환 그리고 호흡기질환과 더불어 한국인 인구 10만 명당 사망자수가 가장 높은 4대 질환 중 하나로, 한국인의 간암과 간질환의 원인은 B형 및 C형 간염 바이러스에 의한 바이러스성 간염이 전체의 83%를 차지한다. 그 중에서도 C형 간염 바이러스는 전 세계적으로 약 1억 7천만 명의 감염자를 가지고 있는 의학적으로 매우 중요한 병원균이다. C형 간염은 1980년대 중반까지 비(非)A형 비(非)B형 수혈 후 연관간염(non-A non-B post-transfusion associated hepatitis, NANB)으로 구분되다가, 1989년도에 비로소 전혀 새로운 종류의 바이러스에 의한 감염에 의해 생기는 질병임이 밝혀지게 되었고, 그 후 이에 대한 활발한 연구와 개발이 진행되어 왔다. C형 간염 바이러스에 의한 간세포의 감염은 대부분의 경우 만성간염으로 진행되고, 15년에서 20년 정도의 장기간에 걸쳐 간경화와 간암과 같은 만성간질환으로 발전하기 때문에 치명적이며, C형 간염 바이러스(HCV, Hepatitis B Virus)에 의한 만성간염, 간경화 및 간암으로 매년 미국에서만 8000명 내지 10000명 정도가 사망하고 있는 것으로 보고된다. 특히, 대부분의 말기 C형 간염환자들의 경우 간이식수술을 기다리다 간이식을 받지 못해 사망하는 경우가 대부분이며, 통계적으로 한국의 경우 전 인구 중 1.5% 정도가 C형 간염 바이러스에 감염되어 있다고 알려져 있다.

현재 C형 간염치료제로 일반적으로 쓰이고 있는 인터페론 알파(interferon-alpha)와 리바비린(ribavirin)은 각각 내재면역증진과 핵산생합성저해를 통해 바이러스를 간접적으로 공격하는 항바이러스제(indirect-acting antivirals, IAAs)로써, 두 약물을 함께 병용하여도 52주간의 정맥주사 및 경구투여를 통한 약물투여 후 치료성공률(sustained virologic response, SVR)이 바이러스의 게놈형(genotype)에 따라서는 50%에도 미치지 못하여 약효가 매우 낮을 뿐만 아니라, 자살충동, 우울증, 빈혈과 같은 심각한 부작용 및 독성을 가지고 있어 많은 C형 간염환자들이 중도에 치료를 포기하고 있는 실정이다. 따라서, 상기와 같은 기존C형 간염 바이러스에 대한 항바이러스 약물들을 대체할, 보다 효과적이면서도 안전한 약물개발의 필요성이 절실히 요구되고 있다.

본 발명자들은 C형 간염의 예방 또는 치료효과를 갖는 물질을 탐색하기 위하여 연구하던 중, 설폰아미드계 화합물이 간세포에 대한 독성이 매우 낮으면서도, HCV의 게놈의 복제를 선택적으로 저해하는 효과를 매우 우수하게 나타내는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 설폰아미드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 설폰아미드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 설폰아미드계 화합물은 간세포에 대한 독성이 매우 낮으면서도, HCV의 게놈의 복제를 선택적으로 저해하는 효과를 우수하게 나타냄으로써, C형 간염의 예방 또는 치료에 매우 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 C형 간염 바이러스의 게놈복제를 측정하기 위해 사용된 FL-J6/JFH-5C19Rluc2AUbi HCV 리포터바이러스의 게놈 구조를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 화학식 1-2의 설폰아미드계 화합물이 C형 간염 바이러스의 RNA 게놈 복제 및 세포생존율에 미치는 영향을 나타낸 도이다(붉은선: 세포생존율, 파란선: 게놈복제율).
도 3은 본 발명의 화학식 1-3의 설폰아미드계 화합물이 C형 간염 바이러스의 RNA 게놈 복제 및 세포생존율에 미치는 영향을 나타낸 도이다(붉은선: 세포생존율, 파란선: 게놈복제율).

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 설폰아미드계 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

상기 화학식 1에서 R₁은 H 또는 할로겐이고, R₂는 C₁~C₁₀의 알킬 또는 C₁~C₁₀의 알콕시이고, R₃는 -SO₂-NH-(C₆H₃)R₄R₅ 또는 -CH₂-A-(C₆~C₂₀의 아릴)이고, 여기서 R₄ 및 R₅는 서로 독립적으로 같거나 다르며 할로겐 또는 CF₃ 이고, A는 S, O, 또는 NH 이다.

바람직하게는, 상기 화학식 1에서 R₁은 H 또는 Cl 이고,

R₂는 CH₃ 또는 OMe 이고, R₃는 SO₂-NH-(C₆H₃)R₄R₅ 또는 -CH₂-A-페닐이고,

여기서 R₄ 및 R₅는 서로 독립적으로 같거나 다르며 Cl 또는 CF₃ 이며, A는 S 이다.

가장 바람직하게는, 상기 화학식 1의 화합물은 하기 화학식 1-1의 화합물 내지 화학식 1-3의 화합물일 수 있다.

[화학식 1-1]

[화학식 1-2]

[화학식 1-3]

본 발명의 설폰아미드계 화합물은 금속염, 유기 염기와의 염, 무기산과의 염, 유기산과의 염, 염기성 또는 산성 아미노산과의 염 등 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있다. 적합한 금속염으로는, 나트륨염, 칼륨염 등과 같은 알칼리 금속염; 칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등과 같은 알칼리 토금속염; 알루미늄염 등이 있고, 적합한 유기 염기와의 염으로는, 예를 들어, 트리메틸아민,

트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 2,6-루티딘, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N,N-디벤질에틸렌디아민 등과의 염이 있다. 또한, 적합한 무기산과의 염의 예로서는, 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과의 염이 있으며, 적합한 유기산과의 염으로는, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등과의 염이 있다. 염기성 아미노산과의 염의 적합한 예로서는, 예를 들어, 알기닌, 라이신, 오르니틴 등과의 염이 있고, 산성 아미노산과의 염의 적합한 예로서는, 예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산 등과의 염이 있다. 특히 바람직한 염으로는, 화합물이 그 내에 산성 관능기를 가지는 경우, 알칼리 금속염 (예컨대, 나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염 (예컨대, 칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등) 등과 같은 무기염, 및 암모늄염과 같은 유기염이 있으며, 화합물이 그 내에 염기성 관능기를 가지는 경우, 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과 같은 무기산과의 염, 아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산 등과 같은 유기산과의 염이 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 조성물의 유효성분인 설폰아미드계 화합물은 간세포에 대한 독성이 매우 낮아 안전성이 높고, HCV의 게놈의 복제를 저해하는 효과가 매우 우수하다.

상기 HCV는 플라비비리데(flaviviridae)군 중 헤파시바이러스(hepacivirus)속으로 분류되는 유일한 바이러스로, 약 9600개의 핵산으로 이루어진 단일가닥(strand)의 RNA를 바이러스게놈으로 가지고 있다. 상기 RNA는 간세포 내에서 약 3000개의 아미노산으로 이루어진 다단백질(polyprotein)로 번역되고, 번역된 다단백질(polyprotein)은 간세포의 소포체에 존재하는 신호 펩티다제(signal peptidase)와 바이러스의 비구조 단백질 중 하나인 NS3 단백질분해효소(protease)에 의해 10가지의 다른 바이러스단백질로 발현된다. 발현된 바이러스단백질 중 외피 당단백질(envelope glycoprotein)인 E1, E2, 그리고 캡시드(capsid) 단백질인 코어(core)와 같은 구조단백질들(structural proteins)은 바이러스의 입자(particle)를 만드는데 쓰이고 NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, 그리고 NS5B와 같은 비구조 단백질들(non-structural proteins)은 바이러스의 게놈을 복제하는데 필요한 바이러스게놈 복제 화합체(virus genome replication complex)를 만드는데 쓰인다. HCV는 소포체(endoplasmic reticulum)에서 발생한 막피(membrane)에서 바이러스게놈 복제화합체를 만들어서 바이러스의 RNA 게놈을 복제한다. 바이러스게놈 복제화합체는 막피에 쌓여 움푹 들어간 형태(invaginated)를 유지함으로써 외부환경에서 분리된 독립적인 구조를 만들고 이 구조 속에 바이러스의 비구조 단백질들을 발현시키고 발현된 비구조 단백질들이 바이러스의 RNA 중합효소인 NS5B 단백질과 함께 바이러스의 게놈복제공장의 역할을 한다. 하지만 이 바이러스게놈 복제화합체가 어떻게 만들어지고 유지되는지에 대해서는 잘 알려져 있지 않다. 바이러스의 비구조 단백질들 중 특히 NS4B 단백질은 간세포 내에서 바이러스의 게놈복제에 꼭 필요한 다소포구조(multi-vesicular structure)인 세포막거미줄(membranous web)을 만드는데 가장 결정적인 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 이 NS4B에 의해서 만들어진 세포막거미줄(membranous web)이라는 구조는 바이러스게놈 복제화합체를 만드는데 필요한 물리적인 구조를 제공한다고 믿어진다. 또한, NS5A 단백질은 바이러스게놈 복제화합체를 다른 바이러스의 비구조 단백질들을 이용하여 조립하고, 만들어진 바이러스게놈을 지방물방울(lipid droplet)이라는 구조로 옮기고, 여기서 바이러스의 코어(core) 단백질을 바이러스 게놈과 결합시킴으로써 실제적인 바이러스입자를 만드는데 중요한 역할을 한다고 알려져있다. 특히 바이러스의 비구조 단백질간의 단백질상호작용(protein-protein interaction)은 바이러스게놈 복제화합체를 만드는데 결정적인 역할을 한다고 알려져 있지만 정확하게 분자수준에서 어떤 역할을 하는지에 대해서는 아직 잘 알려져 있지 않은 상태이다.

바이러스성 질환을 치료할 수 있는 항바이러스제의 종류로는 항바이러스제의 작용메커니즘에 따라 바이러스를 간접적으로 공격하는 항바이러스제(indirect-acting antivirals, IAAs)와 바이러스를 직접적으로 공격하는 항바이러스제(direct-acting antivirals, DAAs)가 있다. 바이러스와 같은 병원성 외부미생물이 체내 침투시 체내에서 분비되는 인터페론알파는 바이러스를 간접적으로 공격하는 대표적인 항바이러스성 내재면역 증강물질로써, 바이러스 자체를 공격하기보다는 바이러스가 기생하고 있는 숙주세포의 면역저항성을 높임으로써 바이러스의 세포 내 증식을 차단하기 때문에, 여러 가지 다른 종류의 바이러스성 질환에 효과가 있고 바이러스가 기생하고 있는 숙주세포의 단백질의 기능을 조절하여 항바이러스 활성을 나타내므로, 내성과 저항성을 가지고 있는 돌연변이 바이러스가 생길 확률이 비교적 적다. 그러나, 특정한 바이러스에 대해서만 항바이러스활성을 나타낼 수 있는 항바이러스 특이성(antiviral specificity)이 현저하게 떨어지기 때문에, 이를 극복하기 위해서 생체 내에서 자연스럽게 분비되는 인터페론의 양보다 훨씬 더 많은 양의 인터페론을 치료목적으로 투여하게 되고, 따라서 자살충동, 우울증, 빈혈 등과 같은 심각한 부작용 및 독성이 나타나게 된다.

한편, 바이러스를 직접적으로 공격하는 항바이러스제의 경우, 인터페론과 달리 바이러스의 생활사에서 꼭 필요한 바이러스단백질들의 특수한 기능만을 선택적으로 저해함으로써 상대적으로 낮은 농도에서도 높은 항바이러스활성을 나타낸다. 또한 바이러스를 간접적으로 공격하는 항바이러스제에 비해, 독성이 적고 안전성이 높은 것이 특징이다. 인간면역결핍바이러스(human immunodeficiency virus, HIV)의 역전사효소 저해제(reverse transcriptase inhibitor)와 단백질분해효소 저해제(protease inhibitor)는 바이러스를 직접적으로 공격하는 대표적인 항바이러스제로써, 각각 바이러스의 생활사에서 필수적인 효소인 역전사효소, 단백질분해효소를 저해하여 바이러스의 세포 내 증식을 억제한다. 그러나, 바이러스가 돌연변이를 통해 항바이러스제의 타겟이 된 바이러스단백질의 아미노산서열을 변화시킴으로써 기존 항바이러스제에 대한 저항성 및 내성을 나타낼 수 있는 가능성이 상대적으로 크며, 특히, C형 간염 바이러스의 RNA 중합효소(polymerase)는 RNA게놈의 복제시 잘못 들어간 핵산을 교정하는 기능을 하는 5‘-3’ 엔도뉴클레아제(endonuclease) 활성이 없으므로, C형 간염 바이러스 게놈인 RNA가 복제되는 과정에서 쉽게 돌연변이 바이러스가 생기게 되어 바이러스를 직접적으로 공격하는 항바이러스제에 대해 저항성과 내성을 갖기가 쉽다.

따라서, 본 발명의 조성물의 유효성분인 설폰아미드계 화합물은 이러한 C형 간염 바이러스의 RNA 게놈복제 단계에서 게놈 복제를 선택적으로 차단하는 효과가 우수하므로, 내성과 저항성을 나타낼 수 있는 돌연변이 바이러스의 발생을 억제하면서도, 적은 부작용 및 독성을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 설폰아미드계 화합물은 안전하면서도 HCV에 작용특이성이 높은 C형 간염의 예방 또는 치료용 의약품으로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 유효성분인 설폰아미드계 화합물과 함께 C형 간염의 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은, 투여를 위하여 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 상기 설폰아미드계 화합물의 일일 투여량은 약 10~100 ㎎/㎏이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물은 C형 간염의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 본 발명의 설폰아미드계 화합물의 간세포 독성의 분석

본 발명의 설폰아미드계 화합물의 간세포 독성 여부를 확인하기 위하여, EZ-Cytox cell viability assay(Daeil Lab Service)를 사용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 상기 설폰아미드계 화합물은 동국대학교 약학대학이 소유하고 있는 소분자라이브러리의 화합물을 이용하였다.

1-1. 화학식 1의 설폰아미드계 화합물의 간세포 독성

96웰-플레이트에 웰당 1.7X10⁴ 내지 2.0X10⁴개의 Huh7.5 인간 간암 세포를 첨가하고 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 대조군으로는 DMSO(dimethyl sulfoxide)를, 실험군으로 여러 농도(0.00001~100 μM)의 화학식 1-1 내지 1-3의 설폰아미드계 화합물을 상기 세포에 처리하고 72시간 동안 배양하였다. 상기 배양액을 버리고, PBS로 세척한 후, 수용성 테트라졸리움 염(tetrazolium salt)이 포함된 EZ-Cytox 시약에 세포배양액을 첨가하여 제조한 1/10(v/v) 희석액을 100μl 첨가하고 3시간 동안 반응시켰다. 반응이 종료된 후 분광광도계를 이용하여 450nm의 파장으로 상기 세포의 흡광도를 계측하였다. DMSO 처리시의 흡광도를 100으로 기준하여, 화학식 1-1 내지 1-3의 화합물 처리시의 상대적인 흡광도를 나타내었다.

결과는 표 1에 나타내었다.

화학식 1의 설폰아미드계 화합물의 농도별 세포생존율

농도(μM)	상대적 세포생존율(%)
	화학식 1-1	화학식 1-2	화학식 1-3
100	-	10.87	72.45
10	62.4	100.34	88.42
8	-	107.22	-
4	-	100.09	-
2	-	102.67	-
1	-	102.90	87.28
0.1	-	97.86	100.83
0.01	-	102.12	114.39
0.001	-	100.04	111.70
0.0001	-	99.57	108.17
0.00001	-	100.44	118.96
대조군(DMSO)	100.00	100.00	100.00

표 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 1의 설폰아미드계 화합물은 0.00001 μM 이상 100μM 미만의 농도에서 매우 우수한 세포생존율을 나타내어 간세포에 대한 독성이 거의 없어 안전성이 높음을 알 수 있다.

실시예 2. 본 발명의 설폰아미드계 화합물의 C형 간염 바이러스 게놈 복제 저해 활성 측정

본 발명의 설폰아미드계 화합물의 C형 간염 바이러스 게놈 복제 저해 활성을 측정하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

2-1. C형 간염 바이러스의 게놈복제를 측정하기 위한 리포터 바이러스의 준비

C 형 간염 바이러스의 게놈복제를 측정하기 위해 유전형(genotype) 2a 에 속하는 FL-J6/JFH-5C19Rluc2AUbi HCV replicon 을 리포터바이러스로 사용하였다. 상기 리포터 바이러스의 게놈 구조도는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 리포터바이러스는 유전형(genotype) 2 에 속하는 C 형 간염 바이러스의 전체 게놈이 cDNA 상태로 포함되어있고, 바이러스의 내부리보솜진입위치(IRES, internal ribosome entry site)와 바이러스의 코어(core)단백질 사이에 레닐라 루시퍼라제와 스스로 잘려나가는(self cleaving) 구족병 바이러스(foot and mouth disease virus) 2A 단백질의 Ubi 시퀀스(sequence)가 부착되어있어, 상기 FL-J6/JFH-5C19Rluc2AUbi 플라스미드를 T7 RNA 중합효소(polymerase)를 사용하여 시험관상(in-vitro)에서 전사(transcription)하여 얻은 HCV RNA 를 간암세포주인 Huh7.5 세포에 주입(transfection)하면, 주입된 바이러스의 RNA가 내부 리보솜 진입위치(IRES)를 사용한 번역을 통해서 다중단백질(polyprotein)을 생산한다. 이때 생산된 다중단백질 중 레닐라 루시퍼라제는 스스로 잘려나가는 구족병 바이러스 2A 단백질의 Ubi 시퀀스의 도움을 받아 바이러스 비구조 단백질들과 분리되고, 분리된 레닐라 루시퍼라제의 활성을 측정함으로써 간접적으로 간세포내의 바이러스 RNA 게놈복제를 측정할 수 있게 된다.

2-2. 화학식 1의 설폰아미드계 화합물의 C형 간염바이러스 게놈 복제 저해 활성의 측정

Huh7.5 인간 간암 세포를 트립신화하여 PBS 용액으로 1.5X10⁷ 개/ml 의 세포 밀도를 갖도록 재현탁시켰다. 총 5μg의 시험관 내(in vitro) 전사된 FL-J6/JFH-5C19Rluc2AUbi RNA를 Huh7.5 간암세포가 포함된 400μl PBS 완충액과 혼합한 후 2-mm-gap cuvette(BTX)에 넣었다. BTX-830 전기천공기로 0.82kV로 99ms 동안 5회 펄스를 가하여 상기 FL-J6/JFH-5C19Rluc2AUbi RNA를 Huh7.5 인간 간암 세포 내로 트랜스펙션하였다. 상기 전기천공을 실시한지 6시간 경과 후, 대조군으로는 DMSO를, 실험군으로는 여러 농도(0.00001~100 μM)의 화학식 1-1 내지 화학식 1-3의 설폰아미드계 화합물을 상기 세포에 처리하고 72시간 동안 배양하였다. 그 다음, 레닐라 루시퍼라아제 분석법을 시행하였다.

먼저 상기 화합물을 처리한 세포의 배양액을 버리고 PBS로 세포가 부착되어 있는 웰을 세척한 다음, 20μl의 세포용해 완충액(cell lysis buffer)을 넣고 얼음 내에서 20분간 방치하였다. 레닐라 루시퍼라아제 기질을 레닐라 루시퍼라아제 완충액으로 100배 희석한 희석액을 준비하고, 상기 희석액 100 μl를 각 웰에 넣어주었다. 인테그레이션 타임을 10초로 하여 레닐라 루시퍼라아제의 발광도를 측정하였다. DMSO 처리시의 발광도를 100으로 기준하여, 화학식 1-1 내지 1-3의 설폰아미드계 화합물 처리시의 상대적인 발광도를 나타내었다.

결과는 표 2에 나타내었다.

화학식 1의 설폰아미드계 화합물의 게놈 복제 저해 활성

농도(μM)	상대적 바이러스 게놈 복제율(%)
	화학식 1-1	화학식 1-2	화학식 1-3
100	-	0.47	25.39
10	38.0	6.59	39.82
8	-	12.50	-
4	-	47.96	-
2	-	68.52	-
1	-	233.87	68.64
0.1	-	220.02	94.36
0.01	-	121.66	98.48
0.001	-	106.55	99.36
0.0001	-	116.79	112.67
0.00001	-	104.49	114.77
대조군(DMSO)	100.00	100.00	100.00

표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 설폰아미드계 화합물은 1~100 μM의 농도에서 HCV 게놈의 복제를 저해하는 활성을 우수하게 나타내어 HCV의 증식을 저해하는 효과가 우수함을 알 수 있다.

실시예 3. 본 발명의 설폰아미드계 화합물의 치료계수의 산정

상기 설폰아미드계 화합물의 C형 간염에 대한 유효성을 확인하기 위하여, 화학식 1-2 및 1-3의 설폰아미드계 화합물의 농도별 세포생존율 및 게놈 복제 저해율을 도 2 및 도 3에 나타내었고, 화학식 1-1 내지 1-3의 설폰아미드계 화합물의 농도별로 하기 수학식 1에 의한 치료계수를 산정하여 표 3에 나타내었다.

[수학식 1]

치료계수=세포생존율(cell viability)/게놈복제정도 (단위: %/%)

화학식 1의 설폰아미드계 화합물의 치료계수

농도 (μM)	치료계수
	화학식 1-1	화학식 1-2	화학식 1-3
100	-	22.92	2.85
10	1.6	15.22	2.22
8	-	8.58	-
4	-	2.09	-
2	-	1.50	-
1	-	0.44	1.27
대조군(DMSO)	1.00	1.00	1.00

도 2, 도3 및 표 3에 나타낸 바와 같이, 화학식 1-1 내지 1-3의 설폰아미드계 화합물을 다양한 농도로 처리시 간세포의 세포생존율은 높게 유지되면서, 게놈 복제정도가 큰 폭으로 감소함을 확인 하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 설폰아미드계 화합물은 안전성이 높으면서도 게놈복제를 선택적으로 저해하는 효과가 우수함을 알 수 있다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

제제예. 약학적 제제의 제조

1. 산제의 제조

화학식 1의 설폰아미드계 화합물 100mg

유당 200mg

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

화학식 1의 설폰아미드계 화합물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

화학식 1의 설폰아미드계 화합물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

Claims (4)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 설폰아미드계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
   [화학식 1]
   

   

   
   상기 화학식 1에서, R₁은 H 또는 할로겐이고,
   R₂는 C₁~C₁₀의 알킬 또는 C₁~C₁₀의 알콕시이고,
   R₃는 -SO₂-NH-(C₆H₃)R₄R₅ 또는 -CH₂-A-(C₆~C₂₀의 아릴)이고,
   여기서 R₄ 및 R₅는 서로 독립적으로 같거나 다르며 할로겐 또는 CF₃ 이고,
   A는 S, O, 또는 NH 이다.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 화학식 1에서 R₁은 H 또는 Cl 이고,
   R₂는 CH₃ 또는 OMe 이고, R₃는 SO₂-NH-(C₆H₃)R₄R₅ 또는 -CH₂-A-페닐이고,
   여기서 R₄ 및 R₅는 서로 독립적으로 같거나 다르며 Cl 또는 CF₃ 이며, A는 S인 것을 특징으로 하는, C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 설폰아미드계 화합물은 하기 화학식 1-1의 화합물 내지 화학식 1-3의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   [화학식 1-1]
   

   

   
   [화학식 1-2]
   

   

   
   [화학식 1-3]
   

   

   
   
4. 제 1항에 있어서, 상기 화학식 1의 설폰아미드계 화합물은 C형 간염 바이러스의 RNA 게놈 복제의 선택적 저해활성을 갖는 것을 특징으로 하는, C형 간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
   

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