KR20130143139A

KR20130143139A - Method for manufacturing refined vegetable squalene and refined vegetable squalene

Info

Publication number: KR20130143139A
Application number: KR1020137030907A
Authority: KR
Inventors: 토시유키 타카하시; 히데타다 나가이; 미츠토시 아즈마
Original assignee: 제이엑스 닛코닛세키에너지주식회사
Priority date: 2011-06-06
Filing date: 2012-06-01
Publication date: 2013-12-30
Also published as: WO2012169443A1; JPWO2012169443A1; TW201307278A

Abstract

고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 간편하게 수득할 수 있는 새로운 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조방법 및 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌의 제공.
농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 헥산(hexane) 및/또는 헵탄(heptane) 용액의 실리카 컬럼에 공급하여, 정제된 스쿠알렌을 통과된 입자로서 수득하는 크로마토그래피 공정을 적어도 포함하는, 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조 방법.A process for preparing a new purified vegetable squalene which can easily obtain a high purity purified vegetable squalene, and the provision of a high purity purified vegetable squalene.
Purified vegetable squalene comprising at least a chromatographic process for feeding the vegetable fat containing concentrated squalene to a silica column of hexane and / or heptane solution to obtain purified squalene as passed particles. Method of preparation.

Description

Method for manufacturing refined vegetable squalene and refined vegetable squalene

본 발명은 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌(squalene)의 제조 방법 및 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌에 관한다.
The present invention relates to a process for producing vegetable squalene purified with high purity and to vegetable squalene purified with high purity.

스쿠알렌(squalene)은, 터페노이드(terpenoid)에 속한 유지(油脂)로서, 무색, 무취, 무미의 저휘발성 유상 액체로, 비교적 가벼운 유성의 감촉을 가지며, 피부에 대하여 침투성, 윤활성이 우수하고, 또한 매우 퍼짐도가 좋은 동시에, 유화되기 쉽다는 등의 특징을 가지는 것으로부터, 현재, 각종 화장품, 의약품 등의 유성 기제로서 폭넓게 사용되고 있다.Squalene is a colorant, odorless, and tasteless, low-volatile oily liquid belonging to a terpenoid, which has a relatively light oily texture, and has excellent permeability and lubricity to the skin. It is widely used as an oily base such as various cosmetics and medicines because of its characteristics such as good spreadability and easy emulsification.

종래에 사용되어온 천연 스쿠알렌은 주로 아이자메(Aizame)로 대표되는 심해상어를 출발 원료로 하는 동물성 스쿠알렌이었다. 그러나, 환경 변화 및 남획(濫獲) 등의 요인으로 인해 심해상어의 어획량이 감소하여, 천연 스쿠알렌의 공급이 곤란해지고 있다.The natural squalene used in the past was an animal squalene mainly derived from a deep sea shark represented by Aizame. However, due to factors such as environmental changes and overfishing, the catches of deep sea sharks decrease, making supplying natural squalene difficult.

따라서, 동물성 스쿠알렌을 대신하는 새로운 천연 스쿠알렌으로써, 식물성 스쿠알렌이 주목받고 있다.Therefore, vegetable squalene attracts attention as a new natural squalene instead of animal squalene.

그러나, 식물성 스쿠알렌은 주로 식물의 과실 또는 종자에서 얻을 수 있는 식물성 유지에 포함되어 있음에도, 그 함유량이 높아도 수천 ppm 정도일 뿐이다. 따라서, 목적하는 식물성 스쿠알렌을 얻기 위해서는 식물성 유지 중에 있는 스쿠알렌의 함유량을 높은 배율로 증가시키는 농축 처리가 필요하다. 또한, 상기 농축 처리에서, 식물성 유지 중에 포함된, 스쿠알렌과 끓는 점 등의 물성이 유사한 다른 소량/미량 성분, 예를 들어 노르말 파라핀(normal paraffin) 또는 다양한 극성물질도 농축되므로, 목적하는 식물성 스쿠알렌의 순도를 높이기 위하여, 이들 스쿠알렌 이외의 소량/미량 성분을 스쿠알렌으로부터 분리 및 제거하는 정제 처리 역시 필요로 한다.However, even though vegetable squalene is mainly contained in the vegetable fats and oils obtained from the fruit or the seed of a plant, even if its content is high, it is only about several thousand ppm. Therefore, in order to obtain desired vegetable squalene, the concentration process which increases content of squalene in vegetable fats and oils at high magnification is needed. In addition, in the concentration treatment, other small and minor components, such as normal paraffin or various polar substances similar in physical properties such as boiling point and squalene contained in the vegetable oil, are also concentrated. In order to increase the purity, a purification treatment for separating and removing small amounts / trace components other than these squalene from the squalene is also required.

종래에, 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 또는 그 수소화물로부터, 스쿠알렌 또는 그 수소화물인 스쿠알란(Squalane)을 농축·정제하여, 식물성 스쿠알렌 또는 식물성 스쿠알란을 제조하는 방법이 알려져 있다(예를 들면 특허문헌 1 내지 8을 참고.). 그러나, 이러한 방법은 공정이 번잡한 것, 또는 수득된 식물성 스쿠알렌 또는 스쿠알란의 순도가 충분히 높지 않다고 하는 문제를 여전히 포함하고 있어, 해당 성분에 있어서 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 간편하게 제조하는 것이 가능한 새로운 방법, 및 이러한 방법으로 제조되어 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌이 매우 요구되고 있다.
Background Art Conventionally, a method for producing vegetable squalene or vegetable squalane by concentrating and purifying squalane or squalene which is a hydride from vegetable oils or hydrides containing squalene is known (for example, Patent Document 1). To 8). However, this method still involves the problem that the process is complicated, or that the obtained vegetable squalene or the purity of squalane is not sufficiently high, and thus a new method capable of easily producing high purity purified vegetable squalene for the component. There is a great need for vegetable squalene prepared in this manner and purified to high purity.

특개평 9-176057호 공보Japanese Patent Application Laid-Open No. 9-176057 특개평 6-306387호 공보Japanese Patent Application Laid-Open No. 6-306387 특개평 6-306388호 공보Japanese Patent Laid-Open No. 6-306388 특허제 3484227 호 공보Patent No. 3484227 특표 2004-502657 호 공보Publication 2004-502657 특개 2008-13477호 공보Japanese Patent Laid-Open No. 2008-13477 특허 제 4642341 호 공보Patent No. 4642341 특허 제 4424939 호 공보Patent No. 4424939

따라서, 본 발명은 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 간편하게 수득할 수 있는 새로운 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조 방법, 및 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 제공하는 것을 목적으로 한다.
Accordingly, it is an object of the present invention to provide a new method for producing purified vegetable squalene, which can easily obtain purified vegetable squalene with high purity, and a vegetable squalene purified with high purity.

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의검토를 거듭한 결과, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 실리카 컬럼(silica column)을 사용하는 크로마토그래피(chromatography)로부터 정제하는 것을 통해, 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 수득할 수 있도록 하는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.The present inventors have made extensive studies to solve the above problems, and as a result, the vegetable oil containing concentrated squalene is purified from chromatography using a silica column, thereby purifying the vegetable with high purity. It has been found that squalene can be obtained, and the present invention has been completed.

본 발명은 이하를 포함한다.
The present invention includes the following.

[1] 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 헥산(hexane) 및/또는 헵탄(heptane) 용액으로써 실리카 컬럼에 공급하여, 정제된 스쿠알렌을 통과된 입자로서 수득하는 크로마토그래피 공정을 적어도 포함하는, 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조 방법.[1] Purification comprising at least a chromatography step of feeding a vegetable fat containing concentrated squalene to a silica column as a hexane and / or heptane solution to obtain purified squalene as passed particles. Method of prepared vegetable squalene.

[2] 정제된 식물성 스쿠알렌의 가스 크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정된 순도가 적어도 93%인, [1]의 제조 방법.[2] The production method of [1], wherein the purity of the purified vegetable squalene is at least 93% measured by the gas chromatography internal standard method.

[3] 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지가 조(粗)정제된 것이며, 그것의 노르말 파라핀(normal paraffin) 함량이 1 질량% 미만인, [1] 또는 [2]의 제조방법.[3] The method of producing [1] or [2], wherein the vegetable oil containing concentrated squalene is crudely purified and its normal paraffin content is less than 1% by mass.

[4] 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지가 조정제된 것이며, 그것의 가스 크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정된 순도가 적어도 90%인, [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 제조방법.[4] The method according to any one of [1] to [3], wherein the vegetable oil containing concentrated squalene has been adjusted, and the purity measured by its gas chromatography internal standard method is at least 90%.

[5] 상기 크로마토그래피 공정에 있어서 처리 온도가 -10 내지 15℃인, [1] 내지 [4] 중 어느 하나의 제조방법.[5] The method according to any one of [1] to [4], wherein the treatment temperature in the chromatography step is -10 to 15 ° C.

[6] 상기 크로마토그래피 공정으로부터 얻을 수 있는 통과된 입자에 아세톤을 더한 균일 용액을 얻고, 그 다음으로 물을 더해 혼합하여, 정치한 것으로 이층 분획하여, 아세톤 및 물을 포함하는 층을 제거하는 것을 통해, 해당하는 통과 입자를 포함하는 수용성 분획을 제거하는 세척 공정을 다시 포함하는, [1] 내지 [5] 중 어느 하나의 제조방법.[6] removing a layer containing acetone and water by obtaining a homogeneous solution obtained by adding acetone to the passed particles obtained from the above chromatography step, then adding water and mixing the mixture, and then dividing the mixture into two layers. Through, the method of any one of [1] to [5], further comprising a washing step of removing the water-soluble fraction containing the corresponding passing particles.

[7] 상기 세척 공정을 거쳐서 얻을 수 있는 정제된 식물성 스쿠알렌의 가스 크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정된 순도가 적어도 96%인, [6]의 제조방법.[7] The production method according to [6], wherein the purity of the purified vegetable squalene obtained by the washing step is at least 96% measured by the internal standard gas chromatography method.

[8] 적어도 상기 크로마토그래피 공정을 불활성 기체 분위기(雰圍氣) 하에 두어 수행하는. [1] 내지 [7] 중 어느 하나의 제조방법.[8] carrying out at least the chromatography process under an inert gas atmosphere. The manufacturing method in any one of [1]-[7].

[9] 정제된 식물성 스쿠알렌이 불순물 1을 포함하며, 그(該) 정제된 식물성 스쿠알렌의 가스 크로마토그랩에 있어서, 불순물 1 피크(peak)의 머무름 시간(保持時間, retension time) RT₁과 스쿠알렌 주 피크의 머무름 시간 RT_S와의 비율인 RT₁/RT_S가 1.01 내지 1.07의 범위에 있고, 머무름 시간 RT₁의 불순물 1의 피크 면적과 전체 피크의 면적 비율이 0.0005 내지 0.0020인, [1] 내지 [8] 중 어느 하나의 제조 방법.[9] Purified vegetable squalene contains impurity 1, and in gas chromatogram of purified vegetable squalene, retention time of impurity 1 peak RT ₁ and squalene strains. [1] to [1], wherein the ratio of peak retention time RT _S to RT ₁ / RT _S is in the range of 1.01 to 1.07, and the ratio of the peak area of impurity 1 and the total peak of retention time RT ₁ is 0.0005 to 0.0020. 8] the production method of any one.

[10] 가스 크로마토그래피 내부 표준법에 의해서 측정되는 순도가 적어도 96%인, 정제된 식물성 스쿠알렌.[10] Purified vegetable squalene having a purity of at least 96% as determined by gas chromatography internal standard method.

[11] 이하의 불순물 1을 포함하는, [10]의 정제된 식물성 스쿠알렌: 그 정제된 식물성스쿠알렌의 가스 크로마토그래피 분석에 있어서, 불순물 1 피크(peak)의 머무름 시간 RT₁과 스쿠알렌 주 피크의 머무름 시간 RT_S와의 비율인 RT₁/RT_S가 1.01 내지 1.07의 범위에 있고, 머무름 시간 RT₁의 불순물 1의 피크 면적과, 전체 피크의 면적 비율인 0.0005 내지 0.0020인 동시에, [11] The purified vegetable squalene of [10], comprising the following impurity 1: in the gas chromatography analysis of the purified vegetable squalene, the retention time of the impurity 1 peak RT ₁ and the retention of the squalene main peak RT ₁ / RT _{S which} is a ratio with time RT _S is in the range of 1.01 to 1.07, and the peak area of impurity 1 of retention time RT ₁ and the area ratio of the total peaks are 0.0005 to 0.0020,

GC/MS 분석에 있어서, 상기 크로마토그래피 분석에 따른 머무름 시간 RT₁의 불순물 1 피크가 질량수(質量數) 392, 253 및 199인 피크를 나타낸다.
In GC / MS analysis, peaks of impurity 1 at retention time RT ₁ according to the chromatographic analysis show peaks having a mass number of 392, 253, and 199.

본 명세서는 본원의 우선권의 기초인 일본국 특허출원 2011-126699호의 명세서에 기재된 내용을 포함한다.
This specification includes the contents of the specification of Japanese Patent Application No. 2011-126699, which is a priority document of the present application.

본 발명에 따르면, 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 간편하게 수득할 수 있는, 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조 방법, 및 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌이 제공된다. 이로 인해서, 고순도의 식물성 스쿠알렌을 공업적 규모에서 제조하여, 공급하는 것이 가능하다.
According to the present invention, there is provided a process for preparing purified vegetable squalene, and a vegetable squalene purified with high purity, which can easily obtain highly purified vegetable squalene. For this reason, it is possible to manufacture and supply high purity vegetable squalene on an industrial scale.

도 1은 실시예로 수득된 아세톤 처리물(5)의 가스 크로마토그램을 나타낸다.
도 2-1은 올리브 스쿠알렌(박막 원심 증류 처리 및 요소 처리를 수행하기 전)의 가스크로마토그램을 나타낸다.
도 2-2는 올리브 스쿠알렌(박막 원심 증류 처리 및 요소 처리를 수행하기 전)의 가스크로마토그램을 나타낸다.
도 3-1은 시판되는 심해상어 유래의 정제된 스쿠알렌의 가스크로마토그램을 나타낸다.
도 3-2는 시판되는 심해상어 유래의 정제된 스쿠알렌의 가스크로마토그램을 나타낸다.
도 4-1은 실시예로 수득된 아세톤 처리품(5)의 GC 성분의 해석 결과를 나타낸다. 머무름 시간(保持時間, retension time)이 43.567 분인 피크는 정제된 식물성 스쿠알렌 안에 포함된 “불순물 1”에 해당한다.
도 4-2는 불순물 1의 GC/MS 분석의 해석(解析) 결과를 나타낸다. 질량수(質量數)(m/z) 392의 분자 이온으로 추정(推定)되는 피크, m/z 253, 199, 69, 및 그 외의 피크가 나타난다.
도 5-1은 시판되는 심해상어 유래의 정제된 스쿠알렌의 GC 분석의 해석 결과를 나타낸다.
도 5-2는 시판되는 심해상어 유래의 정체된 스쿠알렌의 GC 분석에 있어서, 머무름 시간 42.181 분의 피크에 해당하는 불순물(코프로스탄(coprostane)에 귀속됨)의 GC/MS 분석의 해석 결과를 나타낸다.1 shows a gas chromatogram of the acetone treated product 5 obtained in the example.
2-1 shows a gas chromatogram of olive squalene (prior to thin film centrifugal distillation and urea treatment).
2-2 shows the gas chromatogram of olive squalene (prior to thin film centrifugal distillation and urea treatment).
3-1 shows gas chromatograms of purified squalene derived from commercial deep sea sharks.
Figure 3-2 shows a gas chromatogram of purified squalene derived from commercial deep sea sharks.
4-1 shows the analysis results of the GC component of the acetone treated product 5 obtained in the example. A peak with a retension time of 43.567 minutes corresponds to “Impurity 1” contained in the purified vegetable squalene.
4-2 shows the analysis results of the GC / MS analysis of impurity 1. FIG. Peaks estimated with molecular ions of mass number (m / z) 392, m / z 253, 199, 69, and other peaks appear.
5-1 shows the analysis results of GC analysis of purified squalene derived from commercial deep sea sharks.
Fig. 5-2 shows the analysis results of GC / MS analysis of impurities (corresponding to coprostane) corresponding to the peak of retention time 42.181 minutes in GC analysis of commercially available deep sea shark-derived squalene. .

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다. 이하 실시의 형태는, 본 발명을 설명하기 위한 예시이며, 본 발명을 그 실시의 형태로만 한정하는 취지는 아니며, 본 발명은, 그 요지를 벗어나지 않는 한, 다양한 형태로 실시할 수 있다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail. The following embodiments are examples for explaining the present invention, and the present invention is not limited only to the embodiments, and the present invention can be implemented in various forms without departing from the gist of the present invention.

본 발명의 첫번째 태양은, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 헥산 및/또는 헵탄 용액의 실리카 컬럼에 공급하여, 정제된 스쿠알렌을 통과된 입자로서 수득하는 크로마토그래피 공정을 적어도 포함하는, 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조 방법에 관한다.A first aspect of the invention comprises at least a chromatographic process wherein a vegetable fat containing concentrated squalene is fed to a silica column of hexane and / or heptane solution to obtain purified squalene as passed particles. It relates to the manufacturing method of squalene.

본 발명의 제조방법을 사용하면, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지로부터, 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 간편하게 수득하는 것이 가능하다.
Using the production method of the present invention, it is possible to simply obtain a highly purified vegetable squalene from vegetable fats and oils containing concentrated squalene.

이하, 본 발명은 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조 방법에 있어서, 바람직한 실시형태에 따라 상세하게 설명한다.
EMBODIMENT OF THE INVENTION Hereinafter, this invention is demonstrated in detail according to preferable embodiment in the manufacturing method of the refined vegetable squalene.

본 실시 형태의 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조방법에 따라 사용된 “농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지”는, 출발 원료인 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지로부터 수득할 수 있다. 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지는 스쿠알렌을 함유하는 한에서 구체적으로 한정되지 않으나, 올리브 유(olive oil), 옥수수유(corn oil), 대두유(soybean oil), 홍화유(紅花油), 미강유(Rice Bran Oil), 소맥 배아유(Wheatgerm Oil), 팜유(palm oil) 등이 예시가 될 수 있다. 이러한 식물성 유지 중의 스쿠알렌 함유량은, 높은 것이라도 수천 ppm 정도이다. 본 실시 형태의 제조방법에 사용되는 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지는, 상기 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 농축처리하여 수득될 수 있는, 스쿠알렌 함유량이 상승된 식물성 유지이다."Vegetable fat containing concentrated squalene" used according to the method for producing purified vegetable squalene of the present embodiment can be obtained from vegetable fat containing squalene as a starting material. Vegetable oils containing squalene are not specifically limited as long as they contain squalene, but olive oil, corn oil, soybean oil, safflower oil, and rice bran oil ), Wheat germ oil, palm oil and the like can be exemplified. The squalene content in such vegetable fats and oils is about several thousand ppm even if it is high. The vegetable fats and oils containing the concentrated squalene used for the manufacturing method of this embodiment are vegetable fats with an increased squalene content which can be obtained by concentrating the said vegetable fats and oils containing the said squalene.

스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 농축 처리하는 때에, 스쿠알렌 뿐만이 아닌, 물성(예를 들면 끓는점)이 스쿠알렌과 유사한, 식물성 유지 중에 포함되는 다른 소량/미량 성분도 함께 농축되는 경우가 있다. 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지가 이러한 성분을 많이 함유하는 경우에는, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 중에서 해당 성분의 함유량을 저감시키기 위한 조(粗) 정제 처리를 수행하는 것이 바람직하다. 이 조정제 처리는 스쿠알렌의 농축 처리와 별개로 수행하는 것이 바람직하며, 또한, 동일한 공정에서 농축 처리와 조정체 저리를 수행하는 것이 바람직하다.When concentrating the vegetable oil containing squalene, not only squalene but also other small amount / trace components included in the vegetable fat, in which physical properties (for example, boiling point) are similar to squalene, may be concentrated together. In the case where the vegetable oil containing concentrated squalene contains many of these components, it is preferable to perform a crude refining treatment for reducing the content of the component in the vegetable oil containing concentrated squalene. This modifier treatment is preferably carried out separately from the concentrated treatment of squalene, and it is also preferable to carry out the concentration treatment and adjuster separation in the same process.

스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 농축 처리, 또는 농축 처리와 함께 조 정제 처리한 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 수득하는 방법에 대하여는 한정하지 않으며, 공지된 방법을 사용할 수 있다. 이러한 방법으로는, 예를 들면 단증류법(單蒸留法), 박막원심증류법(薄膜遠心蒸留法), 박막다단원심증류법(薄膜多段遠心蒸留法), 및 단공정원심법(短工程蒸留法) 또는 식물성 유지 중에 포함된 지방산 글리세린(Glycerin fatty acid) 또는 유리지방산(free fatty acid)을 메틸 에스테르(methyl ester) 또는 에틸 에스테르(ethyl ester)로 치환한 후에, 상기 증류를 수행하는 방법이 사용될 수 있다. 또한, 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지로부터 식용유 등을 제조하는 때에 일반적으로 수행되는 탈산 탈취 처리로부터의 증류물은 스쿠알렌이 농축된 형태를 포함하므로, 이러한 탈산 탈취 처리는 스쿠알렌의 농축 처리 또는 농축 및 조정제 처리로 간주할 수 있으며, 탈산 탈취 증류물은 바람직하게는 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지로서 이용될 수 있다. 또한, 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지의 켄화(sapinification) 처리에 있어서, 스쿠알렌은 비켄화물 입자에 포함되므로, 이 비켄화물분획을 회수하여, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지로서 이용할 수 있다.
The method for obtaining vegetable oils containing concentrated squalene obtained by treating the vegetable fats and oils containing squalene with the concentrated treatment or the crude purification with the concentration treatment is not limited, and a known method can be used. As such a method, for example, a single distillation method, a thin film centrifugal distillation method, a thin film multi-stage centrifugal distillation method, and a simple process centrifugal method or a vegetable method After the fatty acid glycerin or free fatty acid contained in the fat or oil is replaced with methyl ester or ethyl ester, a method of performing the distillation may be used. In addition, since the distillate from the deoxidation deodorization treatment which is generally carried out when preparing edible oil or the like from vegetable oils containing squalene includes a form in which squalene is concentrated, such deoxidation deodorization treatment is concentrated treatment or concentration and adjusting agent treatment of squalene. Can be considered, and deoxidized deodorant distillates can be used as vegetable oils, preferably containing concentrated squalene. In addition, in the sapinification treatment of vegetable fats and oils containing squalene, squalene is contained in the akenide particles, and thus, the vikenide fraction can be recovered and used as a vegetable fat containing concentrated squalene.

또한, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 다시 조정제 처리하는 경우에는, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지에 포함된, 식물성 유지 유래의 불순물, 구체적으로 노르말 파라핀 또는 각종 극성물질을 제거하여 그 함유량을 저감한다. 이러한 경우의 조정제 방법으로는, 예를 들면 요소(尿素) 및 티오요소(thiourea) 처리를 사용하는 것이 가능하다(특개평 9-176057 호 공보).In addition, in the case of adjusting the vegetable oil containing concentrated squalene again, the content of the vegetable oil contained in the concentrated vegetable squalene containing impurities, specifically, normal paraffin or various polar substances, is removed. Reduce. As a regulator method in this case, it is possible to use, for example, urea and thiourea treatment (Japanese Patent Laid-Open No. 9-176057).

또한, 요소 또는 티오요소 처리는, 식물성 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를, 요소 또는 티오요소를 함유하는 유기 용매와 혼합하여, 40 내지 120 ℃에서 가열하고, 그런 다음 0 내지 35 ℃에서 2 내지 15 시간에 걸쳐 서서히 냉각하여, 냉각 후, 요소 또는 티오요소의 결정 및 상기 유기용매를 제거하는 것으로, 수행할 수 있다.In addition, the urea or thiourea treatment may be performed by mixing a vegetable fat or oil containing vegetable squalene with an organic solvent containing urea or thiourea, heating at 40 to 120 ° C., and then at 0 to 35 ° C. for 2 to 15 hours. By cooling slowly over, after cooling, crystallization of the urea or thiourea and removing the organic solvent.

상기 요소 또는 티오요소 처리에 사용하는 유기용매의 예로는, 탄소수 2 내지 4 정도의 저급 알코올을 들 수 있다. 이러한 저급 알코올로는, 예를 들면, 이소프로판올(isopropanol), 에탄올(구체적으로 한정하지 않는다)을 들 수 있다. 또한, 목적으로 하는 정제된 식물성 스쿠알렌의 용도가 식품, 의약, 화장품 등인 경우에는, 제품에 혼합하는 것에서 안전성이 우려되는 메탄올 등의 용매의 사용은 바람직하지 않다. 요소 또는 티오요소 처리에 대하여 유기용매의 사용량은, 식물성 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지의 중량에 대하여 0.2 내지 100 배로 사용하는 것이 적당하며, 구체적으로 0.3 내지 10 배 정도의 사용이 바람직하다.Examples of the organic solvent used for the urea or thiourea treatment include lower alcohols having about 2 to 4 carbon atoms. As such a lower alcohol, isopropanol and ethanol (not specifically limited) are mentioned, for example. In addition, when the intended use of purified vegetable squalene is food, medicine, cosmetics, etc., it is not preferable to use a solvent such as methanol, which is a safety concern in mixing with the product. The amount of the organic solvent used for the treatment of urea or thiourea is preferably 0.2 to 100 times the weight of the vegetable fat or oil containing vegetable squalene, and specifically 0.3 to 10 times is preferable.

요소 또는 티오요소로는, 시판되는 JIS 규격에 적합한 공업용 요소 및 공업용 티오요소가 사용될 수 있다. 그 사용량은, 원료 중량에 대하여 0.2 내지 20 배, 구체적으로 0.3 내지 5 배 정도인 것이 바람직하다.
As urea or thiourea, industrial urea and industrial thiourea complying with commercially available JIS standards can be used. It is preferable that the usage-amount is about 0.2 to 20 times with respect to raw material weight, specifically about 0.3 to 5 times.

스쿠알렌의 농축 처리, 조정제 처리는, 농축 처리 및 조정제 처리를 동시에 수행하는 경우를 포함하여, 상기 방법 중 어느 하나를 사용하는 것이 바람직하며, 두 가지 이상을 함께 합하여 사용하는 것 역시 바람직하다.It is preferable to use any of the above methods, including the case where the concentration treatment and the regulator treatment of squalene are carried out simultaneously, and it is also preferable to use two or more of them in combination.

농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지는, 전술한 조정제 처리를 수행하는 경우라도, 스쿠알렌 외에, 식물성 유지 유래의 노르말파라핀, 극성물질 등의 불순물을 포함한다. 본 실시 형태에 있어서 사용하는 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지에 대한 가스크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정되는 순도는, 적어도 90%인 것이 바람직하다. 또한, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지는 조정제 처리를 거쳐서, 그 노르말파라핀의 함유량이 2 질량% 이하인 것이 바람직하며, 1 질량% 미만인 것이 더욱 바람직하고, 0.9 질량% 미만인 것이 더욱 더 바람직하다. 또한, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지가 2 질량% 이상의 노르말파라핀을 포함하는 경우, 실온의 유동성이 악화되어, 또한 함유량이 증가하는 실온에서 고체화 되어, 원료로서의 사용이 곤란해진다는 문제도 있다.
Vegetable fats and oils containing concentrated squalene contain impurities such as normal paraffins and polar substances derived from vegetable fats and oils, in addition to squalene, even when the above-mentioned adjusting agent treatment is performed. It is preferable that the purity measured by the gas chromatography internal standard method with respect to the vegetable fats and oils containing the concentrated squalene used in this embodiment is at least 90%. Further, the vegetable fats and oils containing the concentrated squalene are treated with a regulator, and the content of the normal paraffin is preferably 2% by mass or less, more preferably less than 1% by mass, even more preferably less than 0.9% by mass. Moreover, when the vegetable fats and oils containing concentrated squalene contain 2 mass% or more of normal paraffins, there exists also a problem that fluidity of room temperature worsens, it solidifies at room temperature which increases content, and it becomes difficult to use as a raw material.

본 실시 형태의 제조 방법에 있어서, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 친유성의 유기용매에 용해하여, 수득되는 용액을 실리카 컬럼(silica cloumn)을 사용한 크로마토그래피 공정에 공급한다. 실리카 컬럼을 사용하는 크로마토그래피 공정에 있어서, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 중에 포함되는 스쿠알렌 이외의 불순물(구체적으로 극성물질)을 실리카에 흡착함으로서 제거하여, 효율이 좋은 스쿠알렌을 정제하는 것이 가능하다.In the production method of the present embodiment, the vegetable oil containing concentrated squalene is dissolved in a lipophilic organic solvent, and the resulting solution is fed to a chromatography step using a silica cloumn. In the chromatographic process using a silica column, it is possible to purify highly efficient squalene by removing impurities (specifically polar substances) other than squalene contained in the vegetable oil containing concentrated squalene by adsorbing on silica. .

여기에서 “친유성 유기용매”로는, 각종 친유성 유기용매를 사용하는 것이 가능하지만, 목적 생성물인 정제된 식물성 스쿠알렌을 각종 화장품이나 식품, 의약 등에 사용하는 것을 고려하여, 헥산 및/또는 헵탄에서 선택하는 것이 바람직하다. 친유성 유기용매의 사용량은, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지의 질량에 대하여 0.25 내지 3.00 배로 사용하는 것이 적합하며, 구체적으로 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지와 동량 정도로 사용하는 것이 바람직하다.
Here, as the "lipophilic organic solvent", it is possible to use various lipophilic organic solvents, but selecting from hexane and / or heptane in consideration of the use of purified vegetable squalene, which is a desired product, in various cosmetics, food, medicine, etc. It is desirable to. The lipophilic organic solvent is preferably used in an amount of 0.25 to 3.00 times with respect to the mass of the vegetable oil containing concentrated squalene, and it is particularly preferable to use the same amount as the vegetable oil containing concentrated squalene.

상기 크로마토그래피 공정에 있어서 사용하는 장치는, 일반적인 가스 크로마토그래피를 수행하기 위한 장치를 사용하여 수행할 수 있으며, 컬럼의 평형화(平衡化) 나 유속은 컬럼의 크기나 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지의 처리량 등에 의해서 적당하게 설정하는 것이 가능하다.The apparatus used in the chromatographic process can be carried out using a device for performing general gas chromatography, and the column equilibrium or flow rate is the size of the column or the vegetable oil containing concentrated squalene. Can be appropriately set depending on the throughput and the like.

실리카 컬럼에 충진되는 실리카로서는, 극성 불순물을 흡착함으로써 제거할 수 있는 한, 구체적으로 한정되지 않으며, 파쇄형(破碎型)의 실리카나 구형(求刑)의 실리카를 사용할 수 있다. 구체적으로 예시한다면, 후지 시리시아 화학사제(製) 실리카 겔 PSQ-100B(제품명) 또는 다이소사제 다이소겔(제품명)(파쇄형), 와코 순약 공업사제 와코겔(제품명)(50 내지 200 um의 구형) 등을 들 수 있다.The silica filled in the silica column is not particularly limited as long as it can be removed by adsorbing polar impurities, and crushed silica or spherical silica can be used. Specifically, silica gel PSQ-100B (product name) or Daiso gel (product name) (fragment type), manufactured by Fuji-Sirisia Chemical Co., Ltd., Wako gel (product name), manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (50 to 200 um) Spherical), and the like.

상기 크로마토그래피 공정에 따라, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 중의 스쿠알렌 이외의 불순물, 특히 극성물질은 실리카 컬럼에 흡착된다. 따라서, 실리카 컬럼을 통과한 입자(통과액)를 수득하는 것에 따라 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 수득하는 것이 가능하다. 따라서, 가스크로마토그래피 상대 순도로서 95% 이상, 바람직하게는 96% 이상, 또는 가스 크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정된 순도로서 93% 이상, 바람직하게는 94% 이상의 순도를 가지는 식물성 스쿠알렌을 수득할 수 있다.According to the chromatography process, impurities other than squalene in vegetable fats and oils containing concentrated squalene, in particular polar substances, are adsorbed onto the silica column. Thus, it is possible to obtain purified vegetable squalene with high purity by obtaining particles (passage) passing through the silica column. Thus, vegetable squalene having a purity of at least 95%, preferably at least 96%, or at least 93%, preferably at least 94%, as a gas chromatographic relative purity can be obtained. have.

또한, 정제된 식물성 스쿠알렌, 또는 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 등에 대한 스쿠알렌의 순도는, 모세관 컬럼(capillary column)을 사용하는 가스크로마토그래피(gas chromatography)(이하, GC로 명명하는 경우도 있다.)에 의해 구할 수 있다. 본 명세서에 있어서, 스쿠알렌의 “가스크로마토그래피 상대 순도”(이하, 간단하게 “상대순도”로 명명하는 경우도 있다)는, 대상으로 하는 스쿠알렌을 포함하는 시료의 GC에 대하여 검출되는 해당 시료 유래의 전체 피크 면적에 대하여 스쿠알렌에 귀속되는 피크 면적의 백분율을 말한다. 또한 여기서, 스쿠알렌에 귀속되는 피크로는, 스쿠알렌의 이성체(異性體) 전체에 귀속되는 피크를 말한다. 또한, 본 명세서에 있어서, 스쿠알렌의 “가스크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정되는 순도”(이하, 간단히 “내부표준법 순도”로 명명하는 경우도 있다.)로는, 이하의 방법으로 구하는 순도를 말한다. 먼저, 표준 스쿠알렌으로써, 시약의 스쿠알렌(표시 순도: 99.5% 이상)에 내부 표준물질로서 시약의 도데칸(dodecane)을 소정의 질량비율로 첨가하여, 다시 이것은 노르말헥산(normal hexane)으로 소정의 농도에 희석하여 GC에 공급한다. 수득된 크로마토그램에서 표준 스쿠알렌의 상대 순도 RP_S 및 스쿠알렌(전체 이성체를 포함함)에 귀속되는 피크 면적과 도데칸 유래의 피크 면적의 비 A_S를 산출한다. 만일, 측정 대상으로 하는 스쿠알렌을 포함하는 시료에 대하여 상기와 동일한 질량비율로의 도데칸의 첨가 및 노르말 헥산에 의한 희석을 수행하여, 그 GC 분석을 수행한다. 수득된 크로마토그램으로부터 스쿠알렌에 귀속되는 피크 면적과 도데칸 유래의 피크 면적과의 비 A를 산출한다. 또한, 해당 시료 중의 스쿠알렌의 내부 표준법 순도를 하기 식에 의해 산출한다.
In addition, the purity of squalene with respect to purified vegetable squalene or vegetable fats and oils containing concentrated squalene is sometimes called gas chromatography (hereinafter referred to as GC) using a capillary column. Can be obtained by In this specification, "gas chromatographic relative purity" of squalene (hereinafter sometimes simply referred to as "relative purity") is derived from the sample that is detected with respect to the GC of the sample containing the target squalene. Refers to the percentage of peak area attributable to squalene relative to the total peak area. Here, the peak belonging to squalene means the peak belonging to the whole isomer of squalene. In addition, in this specification, as "purity measured by the gas chromatographic internal standard method" of squalene (henceforth simply called "internal standard method purity"), the purity calculated | required by the following method is called. First, as the standard squalene, dodecane of the reagent is added at a predetermined mass ratio as an internal standard to squalene (purity: 99.5% or more) of the reagent, and again, it is a predetermined concentration in normal hexane. Dilute to feed to GC. The chromatogram obtained calculates the relative purity RP _S of standard squalene and the ratio A _S of the peak area attributable to squalene (including all isomers) and the peak area derived from dodecane. If the sample containing squalene to be measured is subjected to addition of dodecane at the same mass ratio as above and dilution with normal hexane, the GC analysis is performed. From the obtained chromatogram, the ratio A between the peak area belonging to squalene and the peak area derived from dodecane is calculated. In addition, the internal standard method purity of squalene in the said sample is computed by a following formula.

더욱 구체적인 GC 분석법은 이하와 같다.More specific GC analysis method is as follows.

100 ㎖ 메스 플라스크(measuring flask)에 정칭(精秤)한 20 ㎎의 도데칸(dodecane) 및 50 ㎎의 표준 스쿠알렌(표시 순도 99.5% 이상, 와쿠순약사 제조)을 얻어, HPLC 등급(grade)의 노르말 헥산으로 맞추어(measure up) 표준 스쿠알렌 용액을 조제한다. 한편, 100 ㎖ 메스 플라스크에 정칭한 20 ㎎의 도데칸과 50 ㎎의 시료를 얻어, HPLC 등급의 노르말 헥산으로 맞추어 시료 용액을 조제한다.20 mg of dodecane and 50 mg of standard squalene (purity of 99.5% or more, manufactured by Waku Pure Pharmaceutical Co., Ltd.), which were named in a 100 ml measuring flask, were obtained. A standard squalene solution is prepared by measuring up to normal hexanes. On the other hand, 20 mg of dodecane and 50 mg of samples, which were named in a 100 ml volumetric flask, were obtained, and a sample solution was prepared in accordance with HPLC grade normal hexane.

가스크로마토그래피 장치는 시마즈 제작소 사제 GC-2010(OCI 사양), 검출기는 FID, 분석 컬럼은 애질런트 테크놀로지 사제 J&W Sceinentific DB-5를 사용하며, 컬럼 평형시간은 0 분, 시료주입량은 1 ㎕, 주입 모드는 전량 주입, 운반 기체(carrier gas)은 헬륨(He), 제어 모드는 유량(流量) 15.0 ㎖/분, 퍼지 유량은 1.5 ㎖/분, 전체 분석시간은 35 분, 검출기 온도는 280℃, 보충 기체(make-up) 유량은 20 ㎖/분, 수소 유량은 40 ㎖/분, 공기 유량은 400 ㎖/분, 기화실의 온도 프로그램 및 컬럼 오븐의 온도 프로그램은 각각 [표 1] 및 [표 2]와 같다. 수득된 크로마토그래피에 따른 피크 분리는 기저선(base line)에서 분리(split)하여 수행한다.The gas chromatography device uses GC-2010 (OCI specification) manufactured by Shimadzu Corporation, the FID detector, the J & W Sceinentific DB-5 manufactured by Agilent Technologies Inc., the column equilibration time is 0 minutes, sample injection volume is 1 μl, injection mode. The total amount is injected, the carrier gas is helium (He), the control mode is 15.0 ml / min, the purge flow is 1.5 ml / min, the total analysis time is 35 minutes, the detector temperature is 280 ° C, The make-up flow rate is 20 ml / min, the hydrogen flow rate is 40 ml / min, the air flow rate is 400 ml / min, the temperature program in the vaporization chamber and the temperature program in the column oven are [Table 1] and [Table 2], respectively. Is the same as. Peak separation according to the obtained chromatography is carried out by splitting at a base line.

상기 크로마토그래피 공정에 있어서, 주로 극성물질인 불순물을 실리카에 흡착시켜 제거하나, 노르말파라핀(normal paraffin)으로 대표되는 비극성물질인 불순물은 실리카에 흡착하여 제거하는 것이 곤란하다. 실리카 컬럼에 의한 크로마토그래피 공정을 통과한 입자에 따른 노르말 파라핀의 함유량이 소정의 값보다도 큰 경우에는, 통과한 입자를 포함하는 용액(크로마토그래피 공정의 통과액)을 냉각하여 노르말 파라핀을 고체화하여 석출(析出)하여, 여과에 의해 고형분을 제거하는 공정(냉각·분리공정)을 사용하는 것으로부터, 정제된 식물성 스쿠알렌 내의 노르말 파라핀 함유량을 더욱 저감시킬 수 있다. 구체적으로, 통과된 입자의 GC 분석에 있어서, 전 피크 면적에 대한 스쿠알렌에 귀속된 피크보다도 머무름 시간이 짧은 피크의 합계 면적의 비가 0.0005를 넘는 경우, 상기 냉각·분리공정에 의한 상기 피크 면적비를 0.002 이하로 할 수 있다. 상기 냉각·분리 공정에 있어서 온도는 -10 내지 15℃인 것이 바람직하다.
In the chromatographic process, impurities, which are mainly polar substances, are adsorbed and removed by silica, but impurities, which are nonpolar substances represented by normal paraffin, are difficult to adsorb and remove by silica. If the content of normal paraffins corresponding to the particles passed through the chromatography step by the silica column is larger than the predetermined value, the solution containing the passed particles (passage of the chromatography step) is cooled to solidify the normal paraffins to precipitate. The normal paraffin content in the refined vegetable squalene can be further reduced by using the process (cooling and separation process) which removes solid content by filtration. Specifically, in the GC analysis of the passed particles, when the ratio of the total area of the peaks having a shorter retention time than the peak attributed to squalene to the total peak area exceeds 0.0005, the peak area ratio by the cooling / separating step is 0.002. It can be set as follows. In the cooling and separating step, the temperature is preferably -10 to 15 ° C.

또한, 상기 크로마토그래피 공정과 상기 냉각·분리 공정을 하나의 공정으로 하여 수행할 수 있다. 또한, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 친유성 유기용매에 용해하여 용액을 제거하고, 및/또는 냉각 하에서 상기 용액을 실리카 컬럼을 사용하는 크로마토그래피 공정에 제공하는 것으로서, 상기 용액 내의 극성 불순물을 실리카에 흡착시켜 제거하는 동시에, 상기 용액 내에서 고체화되어 석출된 노르말 파라핀을, 실리카컬럼을 재료로 하여 여과하는 것으로서, 제거할 수 있다. 이런 경우, 냉각·분리 공정을 별개의 공정으로 하여 설치할 필요 없이, 공정의 간략화(簡略化)가 가능하다. 이런 경우의 상기 용액의 냉각 온도 및/또는 크로마토그래피 공정의 처리 온도가 -10 내지 15℃인 것이 바람직하다.In addition, the chromatographic process and the cooling and separation process can be performed as one process. In addition, a vegetable oil containing concentrated squalene is dissolved in a lipophilic organic solvent to remove the solution, and / or the solution is subjected to a chromatographic process using a silica column under cooling, thereby providing polar impurities in the solution. The adsorbed silica is removed, and the normal paraffin solidified and precipitated in the solution can be removed by filtration using a silica column as a material. In this case, it is possible to simplify the process without having to install the cooling / separation process as a separate process. In this case, it is preferable that the cooling temperature of the solution and / or the treatment temperature of the chromatography process is -10 to 15 ° C.

다음으로, 상기 크로마토그래피 공정(경우에 따라 상기 냉각·분리 공정을 포함함)에 의해 수득되는 통과액을, 다시 친수성 유기 용매 및 물에 세척(washing) 처리하는 세척 공정에 제공하는 것에 따라, 수득되는 정제된 식물성 스쿠알렌의 순도를 다시 향상시키는 것이 가능하다. 여기에서 “친수성 유기용매”에는, 각종 친수성 유기 용매가 포함되나, 수득되는 정제된 식물성 스쿠알렌을 각종 화장품, 식품, 의약 용도 등에 사용하는 것을 고려하면, 아세톤이 바람직하다.
Next, the pass-through liquid obtained by the chromatography process (which optionally includes the cooling and separation process) is subjected to the washing process of washing with a hydrophilic organic solvent and water again to obtain It is possible to again improve the purity of the purified vegetable squalene. Here, the "hydrophilic organic solvent" includes various hydrophilic organic solvents, but acetone is preferable in consideration of the use of the purified vegetable squalene obtained in various cosmetics, foods, and pharmaceutical uses.

상기 세척 공정은 이하의 수순으로 수행될 수 있다. 상기 크로마토그래피 공정(경우에 따라 냉각·분리 공정을 포함함)에 의해 수득되는, 정제된 식물성 스쿠알렌 및 친유성 용매를 포함하는 용액으로 이루어진 통과액에 친수성 유기 용매를 더해 혼합하여, 균일한 용액을 얻는다. 다시 이 용액에 소량의 물을 더하여 혼합해 정치하는 것에 의해, 친수성 유기용매 및 물을 포함하는 혼합물의 층과, 스쿠알렌 및 친유성 유기 용매를 포함하는 혼합물의 층으로 2 층 분획시킨다. 그리고, 스쿠알렌 및 친유성 유기 용매를 포함하는 혼합물의 층을 분리 수득하여, 그 층 내에 포함되는 분획을 수득하는 것으로서, 정제된 식물성 스쿠알렌을 수득할 수 있다. 이 세척 공정에 있어서, 상기 통과액 중에 포함된 수용성의 불순물이 친수성 유기 용매 및 물을 포함하는 혼합물의 층에 이행(移行)하여 스쿠알렌 및 친유성의 유기 용매를 포함하는 혼합물로부터 제거시키므로, 다시 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 얻을 수 있다. 또한, 상대 순도로서, 97% 이상, 바람직하게는 98% 이상, 또한 내부 표준법 순도로서, 95% 이상, 바람직하게는 96% 이상의 순도를 가지는 정제된 식물성 스쿠알렌을 얻을 수 있다.The washing process may be performed in the following procedure. A hydrophilic organic solvent is added to the pass-through liquid consisting of a solution containing purified vegetable squalene and a lipophilic solvent, which is obtained by the chromatographic process (including a cooling and separation step in some cases), and a homogeneous solution is obtained. Get Then, a small amount of water is added to the solution, mixed, and allowed to stand, thereby dividing into two layers into a layer of a mixture containing a hydrophilic organic solvent and water and a layer of a mixture containing squalene and a lipophilic organic solvent. The purified vegetable squalene can be obtained by separating and obtaining a layer of a mixture containing squalene and a lipophilic organic solvent to obtain a fraction included in the layer. In this washing step, the water-soluble impurities contained in the flow-through liquid are transferred to the layer of the mixture containing the hydrophilic organic solvent and the water and removed from the mixture containing the squalene and the lipophilic organic solvent. Purified vegetable squalene can be obtained. Further, purified vegetable squalene having a purity of at least 97%, preferably at least 98%, and as an internal standard method purity, at least 95%, preferably at least 96%, can be obtained.

상기 세척 공정에 있어서 사용되는 친수성 유기 용매의 양은, 상기 크로마토그래피 공정에 의해 수득되는 통과액 양의 0.1 배량(倍量) 내지 3 배량, 바람직하게는 0.1 배량 내지 2 배량, 더욱 바람직하게는 0.5 배량 내지 1 배량이다. 또한, 그 후로부터 첨가하는 소량의 물의 양은, 사용하는 친수성 유기 용매의 양에 따라 변화하나, 친수성 유기 용매 양의 0.01 배량 내지 0.5 배량, 바람직하게는 0.1 배량 내지 0.3 배량이다.The amount of the hydrophilic organic solvent used in the washing step is 0.1 to 3 times, preferably 0.1 to 2 times, more preferably 0.5 times the amount of the pass-through liquid obtained by the chromatography process. To 1 times. The amount of the small amount of water to be added thereafter varies depending on the amount of the hydrophilic organic solvent to be used, but is 0.01 to 0.5 times the amount of the hydrophilic organic solvent, preferably 0.1 to 0.3 times the amount.

상기 크로마토그래피 공정(경우에 따라 냉각·분리 공정 및/또는 상기 세척 공정을 포함함)에서 얻어진 통과액으로부터, 친유성 유기 용매를 제거하는 것에 의해, 정제된 식물성 스쿠알렌을 얻을 수 있다. 정기 용매의 제거를 수행하는 방법을 구체적으로 한정하지 않으며, 수증기증류(水蒸氣蒸留), 감압 하에서의 분무 등의 공지된 방법을 사용할 수 있다.
Purified vegetable squalene can be obtained by removing a lipophilic organic solvent from the passage liquid obtained by the said chromatographic process (optionally including a cooling and separation process and / or the said washing process). The method of performing removal of a regular solvent is not specifically limited, A well-known method, such as steam distillation and spraying under reduced pressure, can be used.

또한, 스쿠알렌은 산화되기 쉬운 성질을 가지고 있어, 산화되면 특유의 악취(臭氣)를 발생하게 되므로, 상기 크로마토그래피 공정, 냉각·분리 공정, 세척 공정, 원료로서 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지를 얻기 위한 농축 처리, 조정제 처리, 또한, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 또는 정제된 식물성 스쿠알렌의 저류(貯留)·이송 등을 포함하는, 스쿠알렌이 공기와 접촉하는 가능성을 가지는 공정, 처리 등은 질소 등의 불활성 기체 분위기 하에서 수행되는 것이 바람직하다.In addition, squalene has a property that is easy to oxidize, and when oxidized, it generates a characteristic odor. Processes, treatments, and the like that have a possibility of contacting air with squalene, including concentration treatment, modifier treatment for obtaining, storage and transport of vegetable oils or purified vegetable squalene containing concentrated squalene, and the like are nitrogen. It is preferably performed under an inert gas atmosphere.

상기 크로마토그래피 공정 또는 세척공정을 거쳐 수득되는 정제된 식물성 스쿠알렌은 적어도 특정 불순물(이하, “불순물 1”로 기재)을 포함한다. 불순물 1은, 상기 크로마토그래피 공정 또는 세척 공정을 거쳐 수득되는 정제된 식물성 스쿠알렌의 가스크로마토그램에 있어서, 불순물 1의 머무름 시간 RT₁과 스쿠알렌의 주 피크 머무름 시간 RT_S와의 비 RT₁/RT_S가 1.01 내지 1.07 범위에 있고, 불순물 1 피크의 면적과 전체 피크 면적의 비가 0.0005 내지 0.0020인 것이 바람직하다. 상기의, 가스크로마토그램에 있어서 머무름시간 RT1의 피크가 귀속된 불순물 1의 화학 구조는 특정되지 않으나, GC/MS 분석 및 액체 크로마토그래피에 의해 분리 수득된 후의 NMR 분석 등의 결과로부터, 테르펜(terpene) 모양의 구조를 가지는 물질로 추정된다.Purified vegetable squalene obtained through the above chromatographic process or washing process contains at least certain impurities (hereinafter referred to as “Impurity 1”). The impurity 1 is a gas chromatogram of purified vegetable squalene obtained through the above chromatographic process or washing process, and the ratio RT ₁ / RT _S of the retention time RT ₁ of impurity ₁ and the main peak retention time RT _S of squalene is It is in the range of 1.01 to 1.07, and the ratio of the area of impurity 1 peak to the total peak area is preferably 0.0005 to 0.0020. Although the chemical structure of impurity 1 to which the retention time RT1 peak is attributed in the gas chromatogram is not specified, terpene from the results of NMR analysis after separation and obtaining by GC / MS analysis and liquid chromatography. ) It is assumed to be a material having a shaped structure.

정제된 식물성 스쿠알렌의 가스크로마토그램에 있어서, 상기 불순물 1의 피크 면적과 전체 피크 면적의 비를 0.0020 이하로 하는 것으로, 의약품이나 화장품의 기제 및 식품, 중에서도 의약품으로의 이용에 있어서도 사용이 가능해진다. 한편, 상기 불순물 1의 피크 면적과 전체 피크 면적의 비를 0.0005 미만으로 하는 것은, 본 실시 형태의 제조 방법에 있어서 실리카 컬럼과의 접촉 시간을 극단적으로 길게 할 필요가 있는 등, 목적으로 하는 정제된 식물성 스쿠알렌을 경제합리성을 가지고 제조하는 것이 곤란하게 된다.In the purified gas chromatogram of vegetable squalene, the ratio of the peak area of the impurity 1 to the total peak area is set to 0.0020 or less, which makes it possible to use the product as a medicine, a base of a medicine or a cosmetic, or a food. On the other hand, the ratio of the peak area of the impurity 1 to the total peak area of less than 0.0005 is required to be extremely long in contacting the silica column in the production method of the present embodiment. It is difficult to produce vegetable squalene with economical rationality.

본 실시 형태의 제조방법에 의하면, 농축된 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지에서, 식물성 스쿠알렌을 상대 순도로서 98% 이상, 또는 내부 표준법 순도로서 96% 이상의 고순도로 수득할 수 있어, 의약품이나 화장품의 기제 및 식품으로서, 다양한 용도로 이용하는 것이 가능한 식물성 스쿠알렌을 제조할 수 있다.According to the production method of the present embodiment, in vegetable fats and oils containing concentrated squalene, vegetable squalene can be obtained with a high purity of 98% or higher as a relative purity or 96% or higher as an internal standard method purity, thereby providing a base for medicines and cosmetics, and As a food, the vegetable squalene which can be used for various uses can be manufactured.

또한, 본 실시 형태의 제조방법에 의하여 수득된 정제된 식물성 스쿠알렌을 정법(定法)에 따라 수소화 처리하는 것에 의해, 정제된 식물성 스쿠알렌을 얻을 수 있다. 이렇게 얻어진 정제된 식물성 스쿠알렌은, 본 실시 형태의 제조 방법에 의해서 얻어지는 정제된 식물성 스쿠알렌과 유사하게 높은 순도를 가진다.
Further, purified vegetable squalene can be obtained by subjecting the purified vegetable squalene obtained by the production method of the present embodiment to hydrogenation according to a conventional method. The purified vegetable squalene thus obtained has a high purity similar to the purified vegetable squalene obtained by the production method of the present embodiment.

본 발명의 제 2 태양은, 가스 크로마토그래피 내부 표준법에 의해 측정되는 순도가 적어도 96%인, 정제된 식물성 스쿠알렌에 관한다.A second aspect of the invention relates to purified vegetable squalene having a purity of at least 96% as measured by gas chromatography internal standard method.

본 발명의 정제된 식물성 스쿠알렌에 관하여, 이하, 바람직한 실시 형태를 따라 설명한다.The purified vegetable squalene of the present invention will be described below in accordance with preferred embodiments.

본 실시 형태의 정제된 식물성 스쿠알렌은, 전술한 본 발명의 정제된 식물성 스쿠알렌을 제조하는 방법에 의해 제조될 수 있다.
The purified vegetable squalene of this embodiment can be manufactured by the method of manufacturing the refined vegetable squalene of this invention mentioned above.

심해상어 유래의 동물성 스쿠알렌에 대해서는, 고순도의 스쿠알렌이 제조·공급되고 있다. 그러나, 식물성 스쿠알렌에 대하여는, 출발원료인 스쿠알렌을 함유하는 식물성 유지 중의 스쿠알렌 함유량이 굉장히 낮고, 또한 해당 유지 중에 스쿠알렌과 성질이 유사한 불순물이 많이 포함되어 있으므로, 이를 고도로 농축·정제하여 고순도의 제폼을 얻는 것이 곤란하였다. 이에 본 실시 형태의 정제된 식물성 스쿠알렌은, 종래 알려져있지 않은 고순도의 식물성 스쿠알렌이다.About animal squalene derived from a deep sea shark, high purity squalene is manufactured and supplied. However, since vegetable squalene has a very low squalene content in vegetable fats and oils containing squalene as a starting material, and contains a lot of impurities similar to squalene in the fats and oils, it is highly concentrated and refined to obtain a high purity product. It was difficult. Thus, the purified vegetable squalene of this embodiment is a high purity vegetable squalene which is not known conventionally.

더욱이, 본 실시 형태로 정제된 식물성 스쿠알렌을, 종래 알려져 있는 정제된 동물성 스쿠알렌과 비교하면, 단지 출발 원료가 다르다는 점 뿐만이 아닌, 그 성분 자체가 다르다. 또한, 먼저, 정제된 식물성 스쿠알렌과 정제된 동물성 스쿠알렌에서는, 각자를 구성하는 스쿠알렌 이성체의 조성이 서로 다르다. 스쿠알렌에는 다수의 이성체가 존재하나, 출발 원료가 식물성인지 동물성인지에 따라서, 스쿠알렌을 구성하는 이성체의 조성이 다르다. 또한, 정제된 식물성 스쿠알렌과 정제된 동물성 스쿠알렌에서는, 이들에 포함되는 불순물의 조성이 다르다. 정제된 식물성 스쿠알렌 및 정제된 동물성 스쿠알렌에는 각자 미량의 불순물이 불가피적으로 포함되나, 이러한 불순물의 조성은, 출발원료가 식물성인지 동물성인지에 따라 달라지기 때문이다. 이렇게, 정제된 식물성 스쿠알렌은, 그 주성분의 화학적 조성 및 불순물을 포함하는 조성물로서의 화학적 조성이, 정제된 동물성 스쿠알렌의 그것들과 다르다.
Moreover, when comparing the vegetable squalene refine | purified by this embodiment with the refined animal squalene conventionally known, not only the starting material differs but its component itself is also different. In addition, first, in the purified vegetable squalene and the purified animal squalene, the composition of the squalene isomer which comprises each differs. Although many isomers exist in squalene, the composition of the isomers constituting squalene differs depending on whether the starting material is vegetable or animal. Moreover, in the purified vegetable squalene and the purified animal squalene, the composition of the impurity contained in these differs. Purified vegetable squalene and purified animal squalene inevitably contain trace amounts of impurities, respectively, because the composition of these impurities depends on whether the starting material is vegetable or animal. Thus, the purified vegetable squalene differs from those of the purified animal squalene as the composition containing the chemical composition of the main component and an impurity.

본 실시 형태로 정제된 식물성 스쿠알렌은, 적어도 불순물 1을 포함한다. 불순물 1은, 본 실시 형태로 정제된 식물성 스쿠알렌의 가스크로마토그래피 분석에 있어서, 불순물 1의 머무름 시간 RT₁ 및 스쿠알렌 주 피크의 머무름 시간 RT_S와의 비 RT₁/RT_S가 1.01 내지 1.07의 범위에 있으며, 불순물 1의 피크 면적과, 전체 피크 면적의 비가 0.00050 내지 0.0020인 것에 의해 특징되어진다. 또한, GC/MS 분석에 있어서, 상기 가스크로마토그래피 분석에서 머무름 시간 RT₁인 불순물 1의 피크가, 질량수 392, 253 및 199의 피크에 해당한다.The vegetable squalene refine | purified in this embodiment contains at least impurity 1. Impurity. 1, a gas chromatographic analysis of the vegetable squalene purified in the present embodiment, the range of the impurity 1 with a retention time RT ₁ and squalene main peak with a retention time RT _S ratio RT ₁ / RT _S is 1.01 to 1.07 with the And the ratio between the peak area of impurity 1 and the total peak area is 0.00050 to 0.0020. In the GC / MS analysis, the peak of impurity 1 having retention time RT ₁ in the gas chromatography analysis corresponds to the peaks of 392, 253 and 199.

상기 본 실시 형태로 정제된 식물성 스쿠알렌 중에 포함된, GC 분석 및 GC/MS 분석에 의해 측정되는 상기 불순물 1은, 전술한 바와 같이, 구조가 특정되지 않은 테르펜(terpene) 모양의 화합물이다. 또한, 이러한 불순물 1은 정제된 동물성 스쿠알렌에는 포함되지 않는 것이 확인되고 있다. 또한, 정제된 동물성 스쿠알렌에는, GC 분석에 있어서 상기 불순물 1과 근접한 머무름 시간 비를 가지는 피크에 해당하는 불순물을 다수 포함하나, GC/MS 분석의 결과로부터, 해당 불순물은 어떠한 것도 상기 불순물 1과는 다른 물질인 것이 확인되어 있다. 또한, 상기 불순물 1은, GC/MS 분석에 있어서, 질량수(m/z) 392, 253 및 199에 큰 피크를 나타내나, 정제된 동물성 스쿠알렌 내의 상기 다수의 불순물은, 어떠한 것도 GC/MS 분석에 있어서 상기 세 가지의 질량수의 피크를 동시에 나타내는 것은 아니다.The impurity 1 measured by GC analysis and GC / MS analysis contained in the vegetable squalene purified in the present embodiment is a terpene-shaped compound having no structure specified as described above. In addition, it is confirmed that such impurity 1 is not contained in the purified animal squalene. In addition, the purified animal squalene contains a plurality of impurities corresponding to the peak having a retention time ratio close to the impurity 1 in the GC analysis, but from the results of the GC / MS analysis, none of the impurities is different from the impurity 1 It is confirmed that it is another substance. In the GC / MS analysis, the impurity 1 shows a large peak at mass numbers (m / z) 392, 253, and 199. However, any of the impurities in the purified animal squalene are not included in the GC / MS analysis. The peaks of the three mass numbers are not shown simultaneously.

이상으로, 정제된 스쿠알렌이 상기 불순물 1을 포함하는 것에 의해, 해당 정제된 스쿠알렌은 식물성인 것과 판별된다.As described above, when the purified squalene contains the impurity 1, the purified squalene is determined to be vegetable.

본 실시 형태로 정제된 식물성 스쿠알렌의 GC 분석에 있어서 상기 불순물 1의 피크 면적과 전체 피크 면적의 비가 0.0020을 넘는 경우에는, 특별히 의약용도로의 이용이 곤란하다. 한편, 상기 피크 면적의 비가 0.0005 미만이 되도록 정제를 수행하기 위해서는, 예를 들어 실리카 컬럼에 의한 크로마토그래피에 있어서, 원료인 실리카와의 접촉 시간을 극단적으로 늘리는 것 등이 필요하며, 경제합리성을 가지는 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조를 수행하는 것이 곤란해진다.
In the GC analysis of the vegetable squalene refine | purified in this embodiment, when the ratio of the peak area of the impurity 1 and the total peak area exceeds 0.0020, it is difficult to use for medical use especially. On the other hand, in order to perform the purification so that the ratio of the peak area is less than 0.0005, for example, in chromatography with a silica column, it is necessary to extremely increase the contact time with silica as a raw material, and have economic rationality. It becomes difficult to carry out the preparation of purified vegetable squalene.

본 실시 형태로 정제된 식물성 스쿠알렌은, 상기 성상(性狀)을 갖는 것으로 인해, 종래의 식물성 스쿠알렌에서는 곤란했던 의약품이나 화장품의 기제 및 식품, 중에서도 의약품으로의 이용이 가능하다.
Since the vegetable squalene refine | purified in this embodiment has the said property, it can be used for a medicine, among the bases, foods, and foodstuffs of the medicine and cosmetics which were difficult with the conventional vegetable squalene.

이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명하나, 본 발명의 기술적 범위가 이하 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, although an Example demonstrates this invention in detail, the technical scope of this invention is not limited to a following example.

올리브 스쿠알렌(이하, “OLSQE”로 기재)(입수처: SOS CORPORACION ALIMENTARIA, S.A. 마드리드, 스페인, 내부 표준법 순도를 85%로 함)을 박막원심증류처리 및 요소 처리를 통해, 내부 표준법 순도 90.9%까지 정제하여, 원료로 사용하였다. 또한, 원료의 노르말 파라민 함유량은 0.85% 였다.Olive squalene (hereinafter referred to as “OLSQE”) (obtained from SOS CORPORACION ALIMENTARIA, SA Madrid, Spain, with internal standard method purity of 85%) through thin film centrifugation and urea treatment, up to 90.9% internal standard method purity Purified and used as a raw material. In addition, the normal paramin content of the raw material was 0.85%.

상기 원료(57.7 g)을 동량(57.7 g)의 헥산(HPLC 등급: 이하 기재되는 헥산에 대하여도 같음)에 용해한 후, 실리카 컬럼인 Sep-Pak VAX PS-2(등록 상표)(Waters 사제)로 불순물의 흡착 처리를 수행하였다. 해당 흡착 처리에는, 시마즈 사제의 HPLC 용 펌프 AV-10을 사용하여, 유속 2 ㎖/분에서 처리하였다. 또한, 컬럼 처리는 15℃에서 실시하였다.The raw material (57.7 g) was dissolved in the same amount (57.7 g) of hexane (HPLC grade: the same as for hexane described below), and then a silica column Sep-Pak VAX PS-2 (registered trademark) (manufactured by Waters). Adsorption treatment of impurities was performed. The adsorption treatment was performed at a flow rate of 2 ml / min using an HPLC pump AV-10 manufactured by Shimadzu Corporation. In addition, column treatment was performed at 15 degreeC.

스쿠알렌이 공기에 접촉하는 가능성이 있는 부분에 관하여는, 전부 질소 가스에서 치환을 수행하였다. 또한, 원료 및 정제된 스쿠알렌 중의 스쿠알렌 순도 측정은 전술한 GC에 의한 방법을 사용하여 수행하였다.
Regarding the part where squalene is likely to come into contact with air, the substitutions were all carried out in nitrogen gas. In addition, the measurement of the squalene purity in the raw material and the purified squalene was carried out using the method according to GC described above.

원료 공급(feed) 종료 후, 컬럼의 하부로부터 원료/헥산 용액이 유출되지 않을 때까지 회수한 것(스쿠알렌양: 32.5 g)을 “실리카 여과품(1)”로 하였다.The raw material / hexane solution recovered after completion | finish of a raw material feed until the raw material / hexane solution did not flow out (quantity of squalene: 32.5 g) was made into the "silica filtration product 1".

실리카 여과품(1)의 일부를 수득하여, 농축기(evaporator)에서 40℃, 2 시간 처리한 후, 진공 건조(40℃)으로 3 시간 처리에 의해 용매의 분류거제(留去)를 수행하여, 정제된 식물성 스쿠알렌의 회수량 및 순도를 확인하였다.
A part of the silica filtrate 1 was obtained, treated with an evaporator at 40 ° C. for 2 hours, and then subjected to classification treatment of the solvent by vacuum drying (40 ° C.) for 3 hours, The recovery amount and purity of the purified vegetable squalene were confirmed.

계속해서, 원료와 동량(57.7g)의 헥산으로, 컬럼 내에 남은 0LSQE를 유출시킨 것(스쿠알렌 량: 24.0g)을 “헥산 세척품(2)”로 하였다.Subsequently, 0LSQE remaining in the column was flowed out with the same amount of hexane (57.7g) as the raw material (amount of squalene: 24.0g) as "hexane washing product (2)".

추가로, 헥산 세척품(2)(스쿠알렌량: 15.6g)을, 원료와 동량의 헥산(57.7g)에 용해한 후, 상기 방법과 동일하게, 실리카 컬럼으로 불순물의 흡착 처리를 수행하였다. 헥산 세척품(2)의 일부를 수득하여, 상기 방법과 동일하게 회수량·순도를 확인하였다.
Furthermore, after dissolving the hexane wash product 2 (the amount of squalene: 15.6 g) in the same amount of hexane (57.7 g) as the raw material, the silica column was subjected to adsorption treatment of impurities in the same manner as described above. A part of the hexane washing product 2 was obtained, and the recovery amount and purity were confirmed in the same manner as in the above method.

헥산 세척품(2) 의 공급 종료 후, 컬럼의 하부로부터 헥산 세척품(2)/헥산 용액이 나오지 않을 때까지 회수한 것(스쿠알렌양: 6.3g)을 “실리카 여과품(3)”으로 하였다. 실리카 여과품(3)의 일부를 수득하여, 상기 방법과 동일하게, 회수량·순도를 학인하였다.
After the supply of the hexane washing product 2 was completed, the hexane washing product 2 / hexane solution was recovered from the lower part of the column until the hexane washing product 2 (hexane amount: squalene amount: 6.3 g) was used as the “silica filtered product 3”. . A part of the silica filter article 3 was obtained, and the recovery amount and purity were checked in the same manner as in the above method.

계속해서, 원료와 동량(57.7g)의 헥산으로, 컬럼 내에 남은 0LSQE를 세척회수한 것(스쿠알렌양: 7.8g)을 “헥산 세척품(4)”으로 하였다. 헥산 세척품(4)의 일부를 수득하여, 상기 방법과 동일하게, 회수량·순도를 확인하였다.
Subsequently, what was washed and recovered 0LSQE remaining in the column with the same amount of hexane (57.7g) as the raw material (quantity squalene: 7.8g) was used as "hexane washing product (4)." A part of the hexane washed product 4 was obtained, and the recovery amount and purity were confirmed in the same manner as in the above method.

“실리카 여과품(1)”, “실리카 여과품(3)” 및 “헥산 세척품(4)”을 혼합하여(200 g) 분별 깔때기(Separatory funnel)로 옮겨, 전체 양의 0.2 배량인 40 g의 아세톤을 첨가하여, 질소 가스 치환 후, 100 회 진탕을 수행하였다. 진탕 후 8 g의 물을 첨가하여 다시 100 회 진탕하고, 20 분간 정치하여, 내용액이 헥산층과 아세톤/물층의 두 층으로 분리하였다. 하층의 아세톤/물층을 제거한 후, 상층의 헥산 분획을 수득한 것(스쿠알렌 양: 45.7 g)을 “아세톤 처리품 (5)”로 하였다. 아세톤 처리품 (5)의 일부를 수득하여, 상기 방법과 동일하게 회수량·순도를 확인하였다.“Silica filtrate (1)”, “Silica filtrate (3)” and “hexane washes (4)” were mixed (200 g) and transferred to a separatory funnel, 40 g, 0.2 times the total volume. Acetone was added, followed by 100 times shaking after nitrogen gas replacement. After shaking, 8 g of water was added, followed by shaking for another 100 times, and allowed to stand for 20 minutes to separate the contents into two layers, a hexane layer and an acetone / water layer. After removing the lower layer of acetone / water, the hexane fraction of the upper layer was obtained (squalene amount: 45.7 g) as "acetone treated product (5)". A part of the acetone treated product 5 was obtained, and the recovery amount and purity were confirmed in the same manner as in the above method.

상기 과정(step)에 있어서, 순도(상대 순도 및 내부표준법 순도) 및 과정 회수율은 [표 3]에 나타내었다.
In the above step, purity (relative purity and internal standard method purity) and process recovery are shown in [Table 3].

상기 아세톤 처리품(5)의 GC 분석에 있어서, 불순물 1의 머무름 시간 RT₁과 스쿠알렌 주 피크의 머무름 시간 RT_S와의 비(RT₁/RT_s)가 1.014인 불순물 1의 피크 면적과, 정제된 식물성 스쿠알렌의 전체 피크 면적의 합계 비는 0.00065였다. 또한, 도 1에 대표적인 아세톤 처리품(5)의 GC 크로마토그램을 나타낸다.
In the GC analysis of the acetone treated product (5), and the impurity 1 of a retention time of RT ₁ and a retention time RT _S ratio (RT ₁ / RT _s) with squalene main peak is the peak area of 1.014 the impurity 1 and the purified The total ratio of the total peak areas of vegetable squalene was 0.00065. 1, the GC chromatogram of the typical acetone processed product 5 is shown.

또한, 도 2-1, 2-2에, 참고로서, 사용한 올리브 스쿠알렌(박막원심증류처리 및 요소처리를 수행하기 전)의 가스 크로마토그램을 나타낸다.In addition, in FIG. 2-1 and 2-2, the gas chromatogram of the used olive squalene (before performing thin film centrifugation and urea treatment) is shown.

또한 도 3-1, 3-2에, 참고로서, 시판되는 심해상어 유래의 정제된 스쿠알렌의 가스 크로마토그램을 나타낸다.3-1 and 3-2 show gas chromatograms of purified squalene derived from commercial deep sea sharks, for reference.

또한, 상기 아세톤 처리품(5)의 GC/MS 분석을 수행하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다. 아울러, 이 GC/MS 분석에 있어서 GC 분석의 컬럼 온도 프로그램은, 상기 GC 분석의 경우와는 다르다.In addition, GC / MS analysis of the acetone treated product (5) was performed. The results are shown in Fig. In addition, the column temperature program of GC analysis in this GC / MS analysis differs from the case of said GC analysis.

도 4-1의 GC 크로마토그램에 있어서 머무름 시간이 43.567 분인 피크가 정제된 식물성 스쿠알렌 중에 포함된 “불순물 1”에 해당한다. 따라서 이 불순물 1의 질량 스펙트럼(spectrum)은 도 4-2에 나타난다. 해당 질량 스펙트럼로는, 질량수(m/z) 392에 분자 이온으로 추정되는 피크, m/z 253, 199, 69 및 그 외의 피크가 보여진다.In the GC chromatogram of Fig. 4-1, a peak having a retention time of 43.567 minutes corresponds to “Impurity 1” contained in the purified vegetable squalene. Therefore, the mass spectrum of this impurity 1 is shown in Fig. 4-2. As the mass spectrum, peaks estimated as molecular ions, m / z 253, 199, 69 and other peaks are shown in the mass number (m / z) 392.

또한 비교를 위하여, 시판되는 심해상어 유래의 정제된 스쿠알렌의 GC 분석을 수행하였다. 그 결과를 도 5-1에 나타낸다.Also for comparison, GC analysis of purified squalene from commercial deep sea sharks was performed. The result is shown to FIG. 5-1.

도 4-1에 나타난, 정제된 식물성 스쿠알렌의 GC 크로마토그램에 있어서, 주 피크의 짧은 보존시간 측(보존시간 41.50 내지 41.70 분)에 스쿠알렌의 이성체의 숄더 피크(shoulder peak)가 관측된다. 한편, 도 5-1에 나타난, 정제된 동물성 스쿠알렌의 GC 크로마토그램에 있어서는, 그 스쿠알렌의 이성체에 귀속된 피크가 대부분 관측되지 않는다. 이것으로부터, 정제된 식물성 스쿠알렌과 정제된 동물성 스쿠알렌에서는, 주성분인 스쿠알렌의 이성체 조성이 서로 다른 것을 알 수 있다.In the GC chromatogram of purified vegetable squalene shown in Fig. 4-1, a shoulder peak of the isomer of squalene is observed on the short retention time side (maintain time 41.50 to 41.70 minutes) of the main peak. On the other hand, in the GC chromatogram of the purified animal squalene shown in Fig. 5-1, most of the peaks attributed to the isomer of squalene are not observed. From this, it can be seen that the purified isotonic squalene and the purified animal squalene are different in isomeric composition of squalene as a main component.

도 5-1에 나타난, 정제된 동물성 스쿠알렌의 GC 크로마토그램에는, 정제된 식물성 스쿠알렌에 포함된 불순물 1에 귀속된 피크와 근접한 머무름 시간을 가지는 불순물의 피크가 주요한 것으로 5 개 관측된다. 이러한 피크에 대한 각자의 질량 스펙트럼은, 어떠한 것도 정제된 식물성 스쿠알렌에 포함되는 불순물 1의 질량 스펙스텀과는 다르며, m/z 392, 253 및 199 피크를 동시에 나타내는 것이 아니며, 모두 상기 불순물 1과 다른 물질이 귀속된다. 또한, 정제된 동물성 스쿠알렌의 GC 크로마토그램에 있어서 각 불순물의 피크는, 각자의 질량 스펙트럼과 라이브러리(library)의 비교로부터, [표 4]에 기재된 바로 귀속된다. 이들 중에서, GC 크로마토그램에서 머무름 시간 42.181 분의 피크를 가지는 불순물(코프로스탄(coprostane)에 귀속)의 질량 스펙스럼을 예로서 도 5-2에 나타낸다.
In the GC chromatogram of the purified animal squalene shown in Fig. 5-1, five peaks of impurities having a retention time close to the peak attributed to impurity 1 contained in the purified vegetable squalene are observed. The respective mass spectra for these peaks differ from the mass spectra of impurity 1 contained in the purified vegetable squalene, and do not simultaneously represent m / z 392, 253 and 199 peaks, all different from the impurity 1 above. Matter is attributed. In addition, the peaks of each impurity in the purified GC chromatogram of animal squalene are directly attributed to those shown in Table 4 from the comparison of the respective mass spectra and the library. Among them, the mass spectra of impurities (attributable to coprostane) having a peak of retention time 42.181 minutes in the GC chromatogram are shown in Fig. 5-2 as an example.

이상의 결과에서 밝힌 바로서, 상기의 방법에 의해, 종래 수득되었던 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 얻을 수 있다. 또한, 수득어진 정제된 식물성 스쿠알렌은, 정제된 동물성 스쿠알렌과는 다른 스쿠알렌 이성체 구성 및 불순물 구성을 가지는 것이 밝혀졌다.
As is clear from the above results, the above-mentioned method can obtain a vegetable squalene purified with high purity conventionally obtained. It was also found that the obtained purified vegetable squalene has a squalene isomeric constitution and impurity constitution different from the purified animal squalene.

본 발명에 의한, 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌을 간편하게 수득할 수 있는 정제된 식물성 스쿠알렌의 제조방법, 및 고순도로 정제된 식물성 스쿠알렌이 제공된다. 이에 따라, 각종 화장품이나 의약품, 식품 등의 제조에 있어서 크케 공헌하는 것이 기대된다.According to the present invention, there is provided a method for producing purified vegetable squalene, which can easily obtain highly purified vegetable squalene, and highly purified vegetable squalene. Accordingly, it is expected to greatly contribute in the production of various cosmetics, pharmaceuticals, foods and the like.

본 명세서에서 인용한 전체의 간행물, 특허 및 특허출원을 그대로 참고하여 본 명세서에 도입하는 것으로 한다.All publications, patents, and patent applications cited in this specification are incorporated herein by reference in their entirety.

Claims

Purified vegetable squalene comprising at least a chromatographic process for feeding the vegetable fat containing concentrated squalene into a silica column as a hexane and / or heptane solution to obtain purified squalene as passed particles. Method of preparation.

The process according to claim 1, wherein the purified vegetable squalene has a purity of at least 93% as determined by gas chromatography standard.

The process according to claim 1 or 2, wherein the vegetable oil comprising concentrated squalene is crudely purified and its normal Paraffins content is less than 1% by mass.

The process according to any one of claims 1 to 3, wherein the vegetable oil containing concentrated squalene is a modulated one, and the purity measured by its gas chromatography internal standard method is at least 90%.

The production process according to claim 1, wherein the treatment temperature in the chromatography step is -10 to 15 ° C.

The homogeneous solution which acetone was added to the passed particle | grains obtained from the said chromatographic process is obtained, Next, water is added, mixed, it is made to stand in two layers, and the acetone was separated. And a washing process of removing the water-soluble particles comprising the corresponding passing particles by removing the layer comprising water.

7. The process according to claim 6, wherein the purity measured by gas chromatography internal standard method of purified vegetable squalene obtained through the washing process is at least 96%.

The production method according to any one of claims 1 to 7, wherein at least the chromatography process is performed under an inert gas atmosphere.

The purified vegetable squalene according to any one of claims 1 to 8, wherein the purified vegetable squalene comprises impurity 1, and in the gas chromatogram of the purified vegetable squalene, the retention time of the impurity 1 peak, retension time) of RT ₁ and the main proportion with a retention time RT _S of peaks of squalene RT ₁ / RT _S is in the range of 1.01 to 1.07, with a retention time of the peak area and the area percentage of the total peak of the impurity 1 RT ₁ 0.0005 To 0.0020.

Purified vegetable squalene having a purity of at least 96% as measured by gas chromatography internal standard method.

The purified vegetable squalene according to claim 10, comprising the following impurity 1: in the gas chromatographic analysis of the purified squalene, the retention time RT ₁ of the impurity 1 peak and the retention time RT _S of the main squalene peak RT _S RT ₁ / RT _{S, which} is the ratio of, and is in the range of 1.01 to 1.07, and the impurity peak area of the retention time RT ₁ and the area ratio of the total peaks are 0.0005 to 0.0020.
In GC / MS analysis, impurity 1 peaks of retention time RT1 according to the chromatographic analysis were given peaks having a mass number of 392, 253 and 199.