KR20130136862A - Nucleic acid delivery complex comprising poly nucleic acid and biopolymer - Google Patents

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KR20130136862A
KR20130136862A KR1020120060594A KR20120060594A KR20130136862A KR 20130136862 A KR20130136862 A KR 20130136862A KR 1020120060594 A KR1020120060594 A KR 1020120060594A KR 20120060594 A KR20120060594 A KR 20120060594A KR 20130136862 A KR20130136862 A KR 20130136862A
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김원종
손세진
이두환
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포항공과대학교 산학협력단
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Abstract

The present invention relates to a complex for nucleic acid delivery comprising a biopolymer whereon a target peptide is combined and poly nucleic acid and, more desirably, the provision of the complex for nucleic acid delivery wherein the poly nucleic acid and a biopolymer which is produced by combination of a cationic polymer connected with biodegradable bond and the target peptide are combined. The complex for nucleic acid delivery according to the present invention comprises a biodegradable polymer, a target substance, and the poly nucleic acid, thereby selectively delivering nucleic acid to target cells like cancer cells and being degradable in the cells. Accordingly, the complex for delivering nucleic acid to the cell according to the present invention has useful effect in minimizing toxicity due to degradability in the cells as well as the amount of therapeutic nucleic acid induced into normal cells by the use of poly nucleic acid in case of being used for gene therapies against various diseases, thereby maximizing the utilization rate of the nucleic acid injected into the body.

Description

생체고분자 및 중합된 핵산 복합체를 포함하는 핵산 전달체{Nucleic Acid Delivery Complex Comprising Poly Nucleic Acid and Biopolymer}Nucleic Acid Delivery Complex Comprising Poly Nucleic Acid and Biopolymer

본 발명은 표적용 펩타이드가 결합된 생체고분자 및 중합된 핵산을 포함하는 핵산 전달용 복합체에 관한 것이다.The present invention relates to a nucleic acid delivery complex comprising a biopolymer and a polymerized nucleic acid to which a target peptide is bound.

유전자 치료란 질병을 유발하는 유전자를 대신할 수 있는 정상 유전자를 외부로부터 도입함으로써 유전자가 본래의 기능을 발휘할 수 있도록 하는 것을 일컫는 것으로서, 유전자 치료 방법으로는 본래 결핍되어 있는 유전자를 외부로부터 도입함으로써 목적하는 단백질의 발현을 유도하는 방법, 발현 억제 유전자 등을 이용하여 특정 단백질의 발현을 억제시키는 방법 등이 있다. 최근에는 유전적 질환뿐만 아니라, 암, 에이즈, 심혈관계 질환, 자가면역질환 등 다양한 후천성 질환의 치료 및 예방에 사용하기 위한 연구도 활발하게 이루어지고 있다.Gene therapy refers to the ability of a gene to perform its original function by introducing a normal gene that can substitute for a gene causing a disease. And a method of inducing expression of a protein, a method of inhibiting expression of a specific protein using an expression suppressor gene, and the like. Recently, as well as genetic diseases, studies are being actively conducted for use in the treatment and prevention of various acquired diseases such as cancer, AIDS, cardiovascular diseases and autoimmune diseases.

유전자 치료는 질병의 증상을 치료하는 것이 아니고 질병의 원인을 치료하여 제거하는 방식이기 때문에 일반적인 약물에 의한 치료에 비해서 우수한 선택성을 가질 수 있고, 다른 치료법으로는 조절하기 힘든 질병의 치료율 및 치료 속도를 개선하여 오랜 기간 동안 적용할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 이와 같이 우수한 장점을 가지는 유전자 치료를 보다 효과적으로 하기 위해 치료 유전자를 원하는 표적 세포로 전달하여 높은 발현 효율을 얻을 수 있는 유전자 전달 기술을 개발하는 것이 필수적이다.Gene therapy does not cure the symptoms of the disease, but rather treats and removes the cause of the disease, so it can have better selectivity than the treatment with common drugs. There is an advantage that can be applied for a long time by improving. Therefore, in order to more effectively perform gene therapy having such excellent advantages, it is essential to develop a gene delivery technology capable of obtaining high expression efficiency by delivering a therapeutic gene to a desired target cell.

그러나, 거대분자인 DNA, RNA 등을 수용액 상태로 세포내로 전달하는 경우 특정효소에 의해 급속하게 분해되고, 세포 전달률이 낮아지는 단점이 있어서 이를 개선하기 위한 기술개발 노력이 지속되고 있다.However, when the macromolecules such as DNA, RNA, etc. are delivered into the cells in aqueous solution, they are rapidly degraded by specific enzymes, and the cell transfer rate is lowered.

유전자를 시험관 내(in vitro) 또는 생체 내(in vivo)의 세포로 전달하는 방법은 대표적으로 레트로바이러스, 아데노바이러스 등을 이용하는 바이러스성 벡터법 및 지질, 고분자, 전기충격법 등을 이용하는 비-바이러스성 벡터법이 있는데, 바이러스성 벡터는 비-바이러스성 벡터에 비하여 유전자 전달 효율이 높은 반면, 체내 적용 시 벡터 자체가 유발하는 면역반응이나 암 유발 등이 문제가 되며, 벡터에 삽입할 수 있는 유전자 크기에도 제한이 있다. 또한, 비-바이러스성 벡터는 바이러스성 벡터에 비하여 생물학적 위험성이 낮고, 비면역원성이며, 변형 및 대량생산이 가능하고, 전달할 수 있는 유전자의 크기에도 비교적 제한이 없다는 장점 때문에 최근 많은 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 그러나, 비-바이러스성 벡터는 바이러스성 벡터에 비해 유전자 전달 효율이 현저히 낮기 때문에, 비-바이러스성 벡터의 광범위한 적용을 위해서 상기의 단점을 극복할 수 있는 기술의 개발이 요구되고 있으며, 치료 유전자를 원하는 곳까지 안전하게 전달하는 유전자 전달체 또한 필요한 실정이다.Genes in vitro ( in vitro) or in vivo (in Representative methods for delivery to cells in vivo include a viral vector method using retroviruses and adenoviruses, and a non-viral vector method using lipids, polymers, and electroshock methods. While gene transfer efficiency is higher than that of sex vectors, the immune response or cancer induced by the vector itself is a problem when applied in vivo, and there is a limitation in the size of the gene that can be inserted into the vector. In addition, many studies have been actively conducted in recent years due to the advantages that non-viral vectors have a lower biohazard, non-immunogenicity, modification and mass production, and relatively limited gene sizes compared to viral vectors. It is done. However, since the non-viral vector has a significantly lower gene transfer efficiency than the viral vector, there is a need for the development of a technique capable of overcoming the above disadvantages for the wide range of applications of the non-viral vector. Gene delivery vehicles that safely deliver to the desired place is also necessary.

최근의 항암 요법은 1 세대의 화학 치료 요법의 문제점이 드러남에 따라 새로운 치료요법이나 화학 요법의 단점 극복에 관한 연구 개발을 필요로 하고 있다. 1 세대 화학 치료 요법의 가장 큰 문제점은 화합물의 세포 전달 효율이 낮다는 점과 일단 생체내 안정성과 세포 전달 효율이 높아지더라도 암세포와 정상세포를 구별하지 않은 무차별적인 세포 사멸 기작 때문에 정상 조직에까지 잠재적 독성을 나타내는 점의 두 가지로 요약될 수 있다.Recent anti-cancer therapies require the research and development to overcome the shortcomings of new therapies and chemotherapy as the problems of the first generation of chemotherapy are revealed. The biggest problem with first-generation chemotherapy is the potential toxicity to normal tissues due to the low cell-delivery efficiency of the compound and the indiscriminate cell death mechanism that does not differentiate cancer cells from normal cells, even if the in vivo stability and cell delivery efficiency are high. It can be summarized in two ways.

이에 따라, 유전자의 세포 전달 효율이 높으면서도 치료 유전자를 표적 세포에 선택적으로 전달할 수 있는, 고효율의 세포-특이적 유전자 전달체가 요구되고 있다. 최근에는 암세포의 증식을 효과적으로 억제하기 위하여 길이가 짧은 올리고핵산으로 구성된 간섭 RNA(siRNA)를 사용하는 전달체에 대한 연구가 활발한데, siRNA는 길이가 짧기 때문에 고분자 전달체와의 복합체 형성이 어려워 효과적으로 세포에 전달되기가 힘들다는 문제점을 안고 있다(Sejin Son et al ., Biomaterials, 2010, 31, 6344-6354; Seung-Young Lee et al., Journal of Controlled Release, 141, 339-346, 2010).Accordingly, there is a need for a high-efficiency cell-specific gene carrier capable of selectively delivering a therapeutic gene to a target cell while having high gene transfer efficiency. In recent years, studies have been actively conducted on a carrier using an interference RNA (siRNA) composed of short oligonucleotides in order to effectively inhibit cancer cell proliferation.Since siRNA has a short length, it is difficult to form a complex with a polymer carrier and effectively It is difficult to deliver (Sejin Son et. al . , Biomaterials, 2010, 31, 6344-6354; Seung-Young Lee et al., Journal of Controlled Release, 141, 339-346, 2010).

이에 본 발명자들은 종래기술의 문제점을 극복하기 위하여, 특정 유전자의 발현을 효과적으로 억제할 수 있고 전달 효율이 크게 개선된 생체 고분자-중합된 핵산 복합체를 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.In order to overcome the problems of the prior art, the present inventors completed the present invention by preparing a biopolymer-polymerized nucleic acid complex which can effectively suppress the expression of a specific gene and greatly improve the delivery efficiency.

따라서 본 발명의 목적은 생분해성 결합이 연결된 폴리에틸렌이민에 표적용 펩타이드를 결합시킨 생체 고분자 및 중합된 핵산을 포함하는 핵산 전달용 복합체 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a nucleic acid delivery complex and a method for preparing the same, comprising a biopolymer and a polymerized nucleic acid in which a target peptide is bound to a polyethyleneimine linked to a biodegradable bond.

본 발명의 다른 목적은 상기 핵산 전달용 복합체를 포함하는 신생혈관 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for treating neovascularization comprising the complex for delivering nucleic acids.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be solved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 양이온성 고분자에 생분해성 결합을 연결시켜 생분해성 결합이 연결된 고분자를 얻는 단계; (b) 상기 생분해성 결합이 연결된 고분자에 표적용 펩타이드를 결합시켜 생체고분자(biopolymer)를 얻는 단계; 및 (c) 상기 생체고분자에 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 결합시켜 핵산 전달용 복합체를 제조하는 단계를 포함하는 핵산 전달용 복합체의 제조방법을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention as described above, the present invention comprises the steps of (a) connecting the biodegradable bonds to the cationic polymer to obtain a biodegradable linking polymer; (b) binding a target peptide to the biodegradable linking polymer to obtain a biopolymer; And (c) provides a method for producing a nucleic acid delivery complex comprising the step of preparing a nucleic acid delivery complex by combining a polymerized nucleic acid (poly nucleic acid) to the biopolymer.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 양이온성 고분자는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine, PEI), 가지친 폴리에틸렌이민(branched polyethylenimine, BPEI), 폴리아미도아민 (polyamidoamine, PAA), 및 키토산(chitosan) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cationic polymer is a group consisting of polyethyleneimine (polyethylenimine, PEI), branched polyethyleneimine (BPEI), polyamidoamine (polyamidoamine, PAA), and chitosan (chitosan) It may be selected from.

본 발명의 다른 일실시예에 있어서, 상기 생분해성 결합은 에스테르 결합, 아마이드 결합, 이황화 결합, 인산염 결합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the biodegradable bond may be selected from the group consisting of ester bonds, amide bonds, disulfide bonds, phosphate bonds, and combinations thereof.

본 발명의 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 표적용 펩타이드는 폴리에틸렌글리콜(polyethylenglycol, PEG)에 연결되는 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the target peptide may be linked to polyethylene glycol (polyethylenglycol, PEG).

본 발명의 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 중합된 핵산은 pDNA(plasmid DNA) 또는 siRNA(Small interfering RNA)가 중합된 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the polymerized nucleic acid may be polymerized pDNA (plasmid DNA) or siRNA (Small interfering RNA).

또한, 본 발명은 생분해성 결합을 포함하는 양이온성 고분자에 표적용 펩타이드를 결합시킨 생체고분자(biopolymer), 및 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 포함하는 핵산 전달용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a nucleic acid delivery composition comprising a biopolymer, and a polymerized nucleic acid (polypolymer) in which the target peptide is bound to a cationic polymer containing a biodegradable bond.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 양이온성 고분자는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine, PEI), 가지친 폴리에틸렌이민(branched polyethylenimine, BPEI), 폴리아미도아민 (polyamidoamine, PAA), 및 키토산(chitosan) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cationic polymer is a group consisting of polyethyleneimine (polyethylenimine, PEI), branched polyethyleneimine (BPEI), polyamidoamine (polyamidoamine, PAA), and chitosan (chitosan) It may be selected from.

본 발명의 다른 일실시예에 있어서, 상기 생분해성 결합은 에스테르 결합, 아마이드 결합, 이황화 결합, 인산염 결합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the biodegradable bond may be selected from the group consisting of ester bonds, amide bonds, disulfide bonds, phosphate bonds, and combinations thereof.

본 발명의 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 표적용 펩타이드는 혈관신생을 표적으로 하는 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the targeting peptide may be to target angiogenesis.

본 발명의 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 표적용 펩타이드는 폴리에틸렌글리콜(polyethylenglycol, PEG)에 연결되는 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the target peptide may be linked to polyethylene glycol (polyethylenglycol, PEG).

본 발명의 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 중합된 핵산은 pDNA(plasmid DNA) 또는 siRNA(Small interfering RNA)가 중합된 것일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the polymerized nucleic acid may be polymerized pDNA (plasmid DNA) or siRNA (Small interfering RNA).

이에 더하여, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 혈관신생 억제용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for inhibiting angiogenesis comprising the composition.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 약학적 조성물은 암, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부, 신생혈관 녹내장, 증식성 망막증, 건선, 혈우병성 관절, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 류마티스 관절염, 골관절염, 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증, 아테롬성 동맥경화, 장관 접착, 궤양, 간경병증, 사구체신염, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 기관 이식 거부, 신사구체병증, 당뇨병, 염증, 및 신경퇴행성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 혈관신생 관련 질환의 예방 또는 치료에 이용되는 것일 수 있다.In one embodiment of the invention, the pharmaceutical composition is cancer, diabetic retinopathy, prematurity retinopathy, corneal graft rejection, neovascular glaucoma, proliferative retinopathy, psoriasis, hemophiliac joints, keloids, wound granulation, vascular adhesion, Rheumatoid arthritis, osteoarthritis, autoimmune diseases, Crohn's disease, restenosis, atherosclerosis, intestinal adhesion, ulcers, cirrhosis, glomerulonephritis, diabetic nephropathy, malignant neurosis, organ transplant rejection, renal glomerulopathy, diabetes, inflammation, and It may be used for the prevention or treatment of angiogenesis-related diseases selected from the group consisting of neurodegenerative diseases.

본 발명에 따른 핵산 전달용 복합체는 주요 구성요소로 생분해성 고분자, 표적용 물질, 및 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 포함함으로써, 핵산을 암 세포와 같은 표적 세포에 선택적으로 전달할 수 있으며, 세포 내부에서 분해가 가능한 장점을 지닌다. 이에 따라, 본 발명에 따른 세포내로의 핵산 전달용 복합체는 다양한 유전자를 이용한 질병 치료에 이용되었을 때, 중합된 핵산 사용으로 인해 정상세포로 유입되는 치료용 핵산의 양을 최소화시킬 수 있을 뿐 아니라 세포 내부에서 분해되는 성질로 인해 독성을 최소화할 수 있는 유용한 효과가 있으며, 이로 인해 체내로 투여된 핵산의 이용률을 극대화시킬 수 있는 장점이 있다. 궁극적으로 본 발명은 다양한 중합된 핵산(pDNA, siRNA 등)을 안전하고 효과적인 유전자 치료제로 이용할 수 있는 효과가 있다.The nucleic acid delivery complex according to the present invention includes a biodegradable polymer, a target material, and a polymerized nucleic acid as main components, thereby selectively delivering the nucleic acid to a target cell such as a cancer cell, and the cell It has the advantage of being decomposed internally. Accordingly, the nucleic acid delivery complex into the cell according to the present invention, when used in the treatment of diseases using various genes, can minimize the amount of therapeutic nucleic acid introduced into normal cells due to the use of polymerized nucleic acids as well as cells. There is a useful effect that can minimize the toxicity due to the property of degradation in the interior, thereby maximizing the utilization of the nucleic acid administered into the body. Ultimately, the present invention has the effect of using a variety of polymerized nucleic acids (pDNA, siRNA, etc.) as a safe and effective gene therapy agent.

도 1은 본 발명에 따른 암 표적용 고분자 전달체의 합성 경로를 개략적인 모식도로 나타낸 것이다.
도 2는 암 표적용 고분자(BPEI-SS-PEG-cNGR)의 1H NMR 스펙트럼 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 암 표적용 고분자/poly-siRNA 복합체의 Gel retardation 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 암 조직에서 RFP 발현 억제 효과 영상을 나타낸 것이다.
도 5는 암 표적용 고분자의 표적 능력 확인을 위한 영상을 나타낸 것이다.1 is a schematic diagram showing a synthetic route of a polymer carrier for cancer targeting according to the present invention.
Figure 2 shows the 1 H NMR spectrum of the cancer target polymer (BPEI-SS-PEG-cNGR).
Figure 3 shows the results of the gel retardation analysis of the cancer-targeting polymer / poly-siRNA complex.
Figure 4 shows the image of the RFP expression inhibitory effect in cancer tissue.
Figure 5 shows an image for confirming the target capability of the polymer for cancer target.

본 발명자들은 세포에 독성을 유발하지 않으며, 치료 유전자를 표적 세포에 선택적으로 전달할 수 있는 고효율의 세포-특이적 유전자 전달체를 개발하기 위하여 연구한 결과, 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors have completed the present invention as a result of research to develop high-efficiency cell-specific gene carriers that do not cause toxicity to cells and can selectively deliver therapeutic genes to target cells.

본 발명자들은 길이가 짧아서 고분자 전달체와의 복합체 형성이 어려운 siRNA와 같은 핵산을 중합하여 중합된 핵산(poly nucleic acid)으로 제조함으로써 복합체 형성을 용이하게 하였으며, 전달 효율이 개선되도록 하였다.The present inventors polymerized a nucleic acid such as siRNA, which is difficult to form a complex with a polymer carrier due to its short length, to prepare a polymerized nucleic acid, thereby facilitating complex formation and improving delivery efficiency.

또한, 중합된 핵산을 표적 세포에 특이적으로 전달할 수 있도록 고분자 전달체를 개발하였는데, 즉, 생분해성 결합을 포함하는 양이온성 고분자에 표적용 펩타이드를 컨쥬게이션(conjugation)시켜 생체 고분자(biopolymer)를 제조하였다(실시예 1 참조).In addition, a polymer carrier was developed to specifically deliver the polymerized nucleic acid to a target cell. That is, a biopolymer was prepared by conjugating a target peptide to a cationic polymer including a biodegradable bond. (See Example 1).

상기로부터 본 발명자들은 상기 생체 고분자 및 중합된 핵산을 포함하는 핵산 전달용 복합체를 효과적으로 제작하였다(실시예 3 참조).From the above, the present inventors effectively produced a nucleic acid delivery complex including the biopolymer and polymerized nucleic acid (see Example 3).

이에 더하여, 본 발명자들은 상기 핵산 전달용 복합체가 생체 내에서 유용하게 작동하는지 알아보기 위해 동물 모델을 이용하여 실험한 결과, 표적에 특이적으로 전달되며 전달 효율이 현저히 개선되었음을 확인하였다(실시예 4 참조).In addition, the present inventors conducted experiments using animal models to find out whether the nucleic acid delivery complex works effectively in vivo, and confirmed that it was specifically delivered to a target and the delivery efficiency was remarkably improved (Example 4 Reference).

따라서 본 발명은 하기 단계를 포함하는 핵산 전달용 복합체의 제조방법을 제공할 수 있다:Therefore, the present invention can provide a method for preparing a nucleic acid delivery complex comprising the following steps:

(a) 양이온성 고분자에 생분해성 결합을 연결시켜 생분해성 결합이 연결된 고분자를 얻는 단계;(a) connecting a biodegradable bond to the cationic polymer to obtain a polymer in which the biodegradable bond is linked;

(b) 상기 생분해성 결합이 연결된 고분자에 표적용 펩타이드를 결합시켜 생체고분자(biopolymer)를 얻는 단계; 및(b) binding a target peptide to the biodegradable linking polymer to obtain a biopolymer; And

(c) 상기 생체고분자에 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 결합시켜 핵산 전달용 복합체를 제조하는 단계.(c) preparing a complex for nucleic acid delivery by binding a polymerized nucleic acid to the biopolymer.

또한, 본 발명은 생분해성 결합이 연결된 양이온성 고분자에 표적용 펩타이드를 결합시킨 생체고분자(biopolymer), 및 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 포함하는 핵산 전달용 조성물을 제공할 수 있다.In addition, the present invention can provide a nucleic acid delivery composition comprising a biopolymer, a polymerized nucleic acid, and a biopolymer in which a target peptide is bound to a cationic polymer having a biodegradable bond.

본 발명에서 용어 “양이온성 고분자”는 핵산과 정전기적 인력에 의해 복합체를 형성하고 여분의 양이온성 전하를 이용하여 세포막과의 상호작용을 촉진하여 세포내 유입을 유도할 수 있는 물질로서, 그 종류로는 이에 한정되는 것은 아니나 바람직하게는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine, PEI), 가지친 폴리에틸렌이민(branched polyethylenimine, BPEI), 폴리아미도아민 (polyamidoamine, PAA) 및 키토산(chitosan) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 본 발명의 일실시예에 따른 가지친 폴리에틸렌이민일 수 있다.As used herein, the term “cationic polymer” is a substance capable of inducing cellular inflow by forming a complex by nucleic acid and an electrostatic attraction and promoting interaction with the cell membrane by using an extra cationic charge. But not limited to, but may be preferably selected from the group consisting of polyethylenimine (PEI), branched polyethylenimine (BPEI), polyamidoamine (PAA) and chitosan (chitosan) And, more preferably, it may be a branched polyethyleneimine according to an embodiment of the present invention.

상기 양이온성 고분자에 표적용 펩타이드를 연결시키기 위한 방법으로 생분해성 결합을 양이온성 고분자에 연결할 수 있으며, 용어 “생분해성 결합”이란 세포 내에서 쉽게 분해되기 때문에 양이온성 고분자가 저 분자량으로 분해될 수 있어서 세포 내 독성이 감소되는 결합을 일컫는 것으로서, 생분해성 결합의 종류로는 이에 한정되는 것은 아니나 바람직하게는 에스테르 결합, 아마이드 결합, 이황화 결합, 인산염 결합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 본 발명의 일실시예에 따라 티올기(thiol group)가 도입됨으로써 이루어지는 이황화 결합일 수 있다.As a method for linking the target peptide to the cationic polymer, a biodegradable bond may be linked to the cationic polymer, and the term “biodegradable bond” may be easily decomposed in a cell so that the cationic polymer may be decomposed at low molecular weight. As the term refers to a bond in which cellular toxicity is reduced, the type of biodegradable bond is not limited thereto but is preferably selected from the group consisting of ester bonds, amide bonds, disulfide bonds, phosphate bonds, and combinations thereof. More preferably, it may be a disulfide bond formed by introducing a thiol group according to an embodiment of the present invention.

상기 표적용 펩타이드란 생체 내 특정 세포 또는 조직 등을 표적으로 할 수 있는 펩타이드로서, 바람직하게는 혈관신생을 표적으로 하는 펩타이드 일 수 있으며, 본 발명의 일실시예에 따르면 상기 표적용 펩타이드는 폴리에틸렌글리콜(polyethylenglycol, PEG)에 연결되어 양이온성 고분자와 결합하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The targeting peptide is a peptide capable of targeting a specific cell or tissue in vivo, and preferably may be a peptide targeting angiogenesis. According to an embodiment of the present invention, the targeting peptide is polyethylene glycol. (polyethylenglycol, PEG) may be linked to the cationic polymer, but is not limited thereto.

또한, 본 발명에서 중합된 핵산은 세포 내로의 전달을 목적으로 하는 핵산이라면 모두 중합하여 사용 가능하며, 바람직하게는 데옥시리보뉴클레오티드(DNA), 또는 리보뉴클레오티드(RNA), 및 단일 또는 이중 가닥 형태의 이들의 중합체를 포함하는 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 플라스미드 DNA(plasmid DNA, pDNA), 작은 간섭 리보핵산(Small interfering RNA, siRNA), 안티센스 핵산, 핵산 앱타머(aptamer) 일 수 있으며, 가장 바람직하게는 siRNA일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.In addition, the nucleic acid polymerized in the present invention can be used by polymerizing any nucleic acid for the purpose of delivery into a cell, preferably deoxyribonucleotide (DNA), or ribonucleotide (RNA), and single or double stranded forms. It may be to include a polymer of these, more preferably plasmid DNA (plasmid DNA, pDNA), small interfering RNA (siRNA), antisense nucleic acid, nucleic acid aptamer (aptamer), most Preferably may be siRNA, but is not limited thereto.

또한, 본 발명의 일실시예에 따르면 핵산 전달용 복합체의 형성을 위해 상기 생체고분자 및 핵산은 5:1 이하의 무게비율에서 효과적으로 결합할 수 있으나, 이는 유전자 또는 고분자에 따라 달라지는 수치로서 특정 비율에 한정되지 않는다.In addition, according to an embodiment of the present invention, the biopolymer and nucleic acid may be effectively bound at a weight ratio of 5: 1 or less to form a nucleic acid delivery complex, which is a value depending on a gene or a polymer, depending on a specific ratio. It is not limited.

나아가 본 발명의 조성물은 “혈관신생 억제용 약학적 조성물”로 사용될 수 있으며, 상기 약학적 조성물에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질병, 질환 또는 상태는 혈관신생과 관련된 다양한 질환을 포함한다. 상기 질환의 종류로는 이에 한정되는 것은 아니나 바람직하게는 암, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부, 신생혈관 녹내장, 홍색증, 증식성 망막증, 건선, 혈우병성 관절, 아테롬성 동맥경화 플라크 내에서의 모세혈관 증식, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 류마티스 관절염, 골관절염, 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증, 아테롬성 동맥경화, 장관 접착, 캣 스크래치 질환, 궤양, 간경병증, 사구체신염, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 혈전성 미소혈관증, 기관 이식 거부, 신사구체병증, 당뇨병, 염증 및 신경퇴행성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.Furthermore, the composition of the present invention may be used as a "antiangiogenic pharmaceutical composition", the disease, disease or condition that can be prevented or treated by the pharmaceutical composition includes various diseases associated with angiogenesis. Examples of the disease include, but are not limited to, cancer, diabetic retinopathy, prematurity retinopathy, corneal graft rejection, neovascular glaucoma, melanoma, proliferative retinopathy, psoriasis, hemophiliac joints, atherosclerotic plaques Capillary hyperplasia, keloids, wound granulation, vascular adhesion, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, autoimmune disease, Crohn's disease, restenosis, atherosclerosis, intestinal adhesion, cat scratch disease, ulcers, cirrhosis, glomerulonephritis, diabetic kidney Conditions, malignant neurosis, thrombotic microangiopathy, organ transplant rejection, renal glomerulopathy, diabetes, inflammatory and neurodegenerative diseases.

본 발명에서 사용되는 용어, “예방”이란 본 발명의 조성물의 투여에 의해 혈관신생 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하며, “치료”란 본 발명의 조성물의 투여에 의해 혈관신생 질환에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "prevention" refers to any action that inhibits or delays the onset of angiogenic disease by administration of the composition of the present invention, and "treatment" refers to angiogenesis by administration of the composition of the present invention. It means any activity that improves or beneficially changes the symptoms caused by a disease.

본 발명에 따른 상기 약학적 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있으며, 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함될 수 있으며, 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.When formulating the pharmaceutical composition according to the present invention, it may be prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, etc., which are commonly used, tablets in solid formulations for oral administration , Patients, powders, granules, capsules, troches, and the like, and such solid preparations include at least one excipient in the compositions of the present invention, for example starch, calcium carbonate, sucrose or lactose. Or it may be prepared by mixing gelatin and the like. In addition to the simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc may also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solvents, emulsions, or syrups.In addition to the commonly used simple diluents, water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives, etc. May be included. Preparations for parenteral administration may include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, and the like, and non-aqueous solvents and suspensions include vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol, and olive oil, Injectable esters such as ethyloleate and the like can be used. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerol, gelatin and the like can be used.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.The composition of the present invention may be administered orally or parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) depending on the desired method, and the dose may be determined depending on the condition and weight of the patient, The mode of administration, the route of administration, and the time, but may be suitably selected by those skilled in the art.

본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 환자의 나이, 성별, 체중 등을 고려하여 용이하게 결정될 수 있다.
The composition according to the invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level refers to the type of disease, severity, activity of the drug, drug Sensitivity to, time of administration, route of administration and rate of administration, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts. The composition of the present invention can be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and can be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and can be administered singly or in multiple doses. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect with a minimum amount without side effects, which can be easily determined by a person skilled in the art in consideration of the age, sex, weight, etc. of the patient.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

암세포 특이적 생체고분자 전달체의 합성Synthesis of Cancer Cell Specific Biopolymer Carriers

암세포 표적 지향 생체고분자(biopolymer)를 합성하기 위해, 먼저 Branched polyethylenimine(1g, BPEI)을 물에 녹인 후, 0.1N의 HCl을 첨가하여 pH를 7.2로 조정하고 동결 건조한 다음 물을 제거함으로써 노란색 고체를 얻었다. 얻어진 고체는 30mL의 메탄올에 녹인 뒤 10분 동안 질소 퍼징(purging)을 실시하였다. 그 다음 실린지를 이용하여 BPEI 1.2K의 몰수에 5~10배에 해당하는 propylene sulfide를 용액에 첨가한 다음 60℃에서 24시간 반응을 진행하였다. 반응이 종결된 후 회전증발기를 이용하여 용매를 제거하고, 차가운 Ether를 이용하여 침전물을 2회 수득함으로써 thiol기(-SH)가 도입된 BPEI(BPEI-SH)를 얻었으며, thiol기가 도입된 양은 Ellman's assay를 이용하여 확인할 수 있었다. 다음으로 cNGR 펩타이드 1.2당량 및 NHS-PEG-MAL 1당량을 무수 DMSO에 녹이고 2시간 동안 교반한 후, BPEI-SH를 곧바로 용액에 넣어 반응하도록 상온에서 48시간 방치하여 암을 표적 지향하는 암세포에 특이적인 생체고분자 BPEI-SS-PEG-cNGR을 합성하였다. 합성경로에 대한 개략적인 모식도는 도 1에 나타내었다.
To synthesize cancer cell target-oriented biopolymers, first branched polyethylenimine (1 g, BPEI) was dissolved in water, then 0.1N HCl was added to adjust pH to 7.2, freeze-dried and water to remove yellow solids. Got it. The solid obtained was dissolved in 30 mL of methanol and purged with nitrogen for 10 minutes. Then, propylene sulfide corresponding to 5-10 times the number of moles of BPEI 1.2K was added to the solution using a syringe, and the reaction was performed at 60 ° C. for 24 hours. After the reaction was terminated, the solvent was removed using a rotary evaporator, and the precipitate was obtained twice using cold Ether to obtain BPEI (BPEI-SH) in which thiol group (-SH) was introduced. It was confirmed using Ellman's assay. Next, 1.2 equivalents of cNGR peptide and 1 equivalent of NHS-PEG-MAL were dissolved in anhydrous DMSO and stirred for 2 hours, and then left for 48 hours at room temperature to react by directly adding BPEI-SH to the solution. Biopolymer BPEI-SS-PEG-cNGR was synthesized. A schematic diagram of the synthetic route is shown in FIG. 1.

암세포 특이적 생체고분자의 분석Analysis of Cancer Cell Specific Biopolymers

상기 실시예 1에서 합성한 생체고분자의 구조를 분석하기 위해, 1H NMR를 이용하여 확인하였다. 1H NMR 스펙트럼 측정 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, δ1.2-1.5에서 propylene sulfide의 methyl기에 해당하는 peak가 나타났다. 또한, δ3.6에서는 PEG(polyethylene glycol)의 ethylene proton, δ2.5-3.1에서는 BPEI의 ethylene proton이 나타났고, 상기 두 peak의 면적비를 이용하여 conjugation ratio를 구하였으며, 그 값은 PEG/BPEI1.2K=1:4 이다. 또한, cNGR의 conjugation ratio는 cNGR말단에 달려있는 FITC(Fluorescein isothiocyanate, excitation: 494nm, emission: 520 nm)의 형광세기를 측정함으로써 구하였으며 그 값은 cNGR/BPEI1.2K=1:6.62 이다.
In order to analyze the structure of the biopolymer synthesized in Example 1, it was confirmed using 1 H NMR. As a result of 1 H NMR spectrum measurement, as shown in FIG. 2, a peak corresponding to a methyl group of propylene sulfide was found at δ 1.2-1.5. In addition, δ3.6 showed ethylene protons of polyethylene glycol (PEG), and ethylene protons of BPEI in δ2.5-3.1, and the conjugation ratio was calculated using the area ratio of the two peaks, and the value was PEG / BPEI1. 2K = 1: 4. In addition, the conjugation ratio of cNGR was determined by measuring the fluorescence intensity of FITC (Fluorescein isothiocyanate, excitation: 494 nm, emission: 520 nm) which depends on the cNGR terminal, and the value is cNGR / BPEI1.2K = 1: 6.62.

암세포 특이적 생체고분자/유전자 복합체의 형성Formation of Cancer Cell Specific Biopolymer / Gene Complex

암세포에 특이적인 생체고분자/poly-siRNA 복합체를 제작하기 위하여, 먼저 BPEI-SS, BPEI-SS-PEG, BPEI-SS-PEG-NGR 1mg를 각각 10mM HEPES buffer(PH 8.0) 1ml 에 녹이고, 녹인 BPEI-SS, BPEI-SS-PEG 각각 100μl와 BPEI-SS-PEG-NGR 250μl 각각을 siRNA 50μg/50μl (10mM HEPES uffer) 와 섞어 1:2 및 1:5 비율로 제작한 뒤 상온에서 30분간 반응시켰다. 상기 반응시킨 BPEI-SS-polysiRNA, BPEI-SS-PEG-polysiRNA, BPEI-SS-PEG-cNGR-polysiRNA 각각의 혼합액 3μl에 HEPES buffer 7μl 및 loading dye 2μl 를 섞어주고, SYBR로 염색한 8% acrylamide gel 에 loading하여 Gel retardation 분석을 수행하였다.
To prepare a biopolymer / poly-siRNA complex specific for cancer cells, first, 1 mg of BPEI-SS, BPEI-SS-PEG, and BPEI-SS-PEG-NGR were dissolved in 1 ml of 10 mM HEPES buffer (PH 8.0), and then dissolved BPEI. 100μl each of -SS and BPEI-SS-PEG and 250μl of BPEI-SS-PEG-NGR were mixed with 50μg / 50μl of siRNA (10mM HEPES uffer) at a ratio of 1: 2 and 1: 5, and reacted at room temperature for 30 minutes. . 3μl of each of the reacted BPEI-SS-polysiRNA, BPEI-SS-PEG-polysiRNA, and BPEI-SS-PEG-cNGR-polysiRNA were mixed with 7μl of HEPES buffer and 2μl of loading dye, and stained with SYBR 8% acrylamide gel Gel retardation analysis was performed by loading on.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 합성된 암세포 특이적 생체고분자 및 poly-siRNA 복합체는 5:1 이하의 무게 비율에서 효과적으로 복합체를 형성하는 것을 확인하였다.
As a result, as shown in FIG. 3, it was confirmed that the synthesized cancer cell specific biopolymer and poly-siRNA complex effectively form a complex at a weight ratio of 5: 1 or less.

동물모델에서 암세포 특이적 생체고분자/유전자 복합체의 효능 분석Efficacy analysis of cancer cell specific biopolymer / gene complex in animal model

<4-1> <4-1> RFPRFP 유전자 발현  Gene expression 억제능Inhibition 분석 analysis

상기 실시예 1에서 합성한 생체고분자 및 siRNA(Red Fluorescence Protein: RFP) 를 1:2 무게 비율로 섞어 준 후, RFP-B16/F10 세포 1X106 개가 주입된 쥐에 이틀에 한번 씩 정맥 주사한 후 근 적외선 조사를 실시하여 RFP 발현 영상을 촬영하였다.After mixing the biopolymer synthesized in Example 1 and siRNA (Red Fluorescence Protein: RFP) in a 1: 2 weight ratio, the mice injected with 1 × 10 6 RFP-B16 / F10 cells were injected once every two days. Near-infrared irradiation was performed to photograph RFP expression images.

RFP 발현 영상 분석 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 암세포에 특이적인 생체고분자/poly-siRNA(RFP) 복합체가 암 조직의 RFP 발현을 억제한다는 것을 알 수 있다.
As a result of RFP expression image analysis, it can be seen that the biopolymer / poly-siRNA (RFP) complex specific for cancer cells inhibits RFP expression in cancer tissues.

<4-2> 암 조직에의 표적성 분석<4-2> Target analysis on cancer tissue

본 발명의 복합체가 암 세포에 특이적으로 표적 지향하는지 알아보기 위하여, 우선 편평세포암종(squamous cell carcinoma-7: SCC-7)의 종양 크기가 약 ~300mm3 이 되었을 때 siRNA 50μg을 함유하는 BPEI-SS-PEG-cNGR 생체고분자를 마우스의 꼬리에 정맥주사 하였다. 그리고 살아있는 동물에서 세포 및 장기 수준에서 실시간 분자 영상이 가능한 eXplore Optix 를 이용하여, 시간에 따라 암 조직에 축적되는 정도를 형광의 세기로 관찰하였다. 대조군으로는 siRNA를 함유하는, BPEI-SS 및 BPEI-SS-PEG 고분자를 각각 이용하였다.In order to determine whether the complex of the present invention specifically targets cancer cells, BPEI containing 50 μg of siRNA when the tumor size of squamous cell carcinoma-7 (SCC-7) is about 300 mm 3 SS-PEG-cNGR biopolymers were injected intravenously into the tails of mice. Using eXplore Optix, which enables real-time molecular imaging at the cellular and organ levels in living animals, the degree of accumulation in cancer tissues over time was observed as the intensity of fluorescence. As a control, BPEI-SS and BPEI-SS-PEG polymers containing siRNA were used, respectively.

관찰 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 암특이적 리간드인 NGR 펩타이드를 결합한 BPEI-SS-PEG-cNGR 생체고분자/siRNA 복합체를 투여한 경우, 대조군에 비해 현저하게 많은 양이 암 조직에 전달되고, 오랫동안 암 조직에 축적되는 것으로 나타났다.
As shown in FIG. 5, when the BPEI-SS-PEG-cNGR biopolymer / siRNA complex bound to the NGR peptide, which is a cancer specific ligand, was significantly delivered to cancer tissues as compared to the control group. It has been shown to accumulate in cancer tissues for a long time.

상기로부터, 본 발명의 암세포에 특이적인 생체고분자/poly-siRNA 복합체가 암 세포를 표적으로 하는 전달체로써 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
From the above, it can be seen that the biopolymer / poly-siRNA complex specific for cancer cells of the present invention can be usefully used as a carrier for targeting cancer cells.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.The foregoing description of the present invention is intended for illustration, and it will be understood by those skilled in the art that the present invention may be easily modified in other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, the embodiments described above are to be understood in all respects as illustrative and not restrictive.

Claims (13)

하기 단계를 포함하는 핵산 전달용 복합체의 제조방법:
(a) 양이온성 고분자에 생분해성 결합을 연결시켜 생분해성 결합이 연결된 고분자를 얻는 단계;
(b) 상기 생분해성 결합이 연결된 고분자에 표적용 펩타이드를 결합시켜 생체고분자(biopolymer)를 얻는 단계; 및
(c) 상기 생체고분자에 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 결합시켜 핵산 전달용 복합체를 제조하는 단계.Method for preparing a nucleic acid delivery complex comprising the following steps:
(a) connecting a biodegradable bond to the cationic polymer to obtain a polymer in which the biodegradable bond is linked;
(b) binding a target peptide to the biodegradable linking polymer to obtain a biopolymer; And
(c) preparing a complex for nucleic acid delivery by binding a polymerized nucleic acid to the biopolymer. 제 1 항에 있어서,
상기 양이온성 고분자는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine, PEI), 가지친 폴리에틸렌이민(branched polyethylenimine, BPEI), 폴리아미도아민 (polyamidoamine, PAA), 및 키토산(chitosan)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 제조방법.The method of claim 1,
The cationic polymer is selected from the group consisting of polyethyleneimine (polyethylenimine, PEI), branched polyethylenimine (BPEI), polyamidoamine (polyamidoamine, PAA), and chitosan (chitosan), Way. 제 1 항에 있어서,
상기 생분해성 결합은 에스테르 결합, 아마이드 결합, 이황화 결합, 인산염 결합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 제조방법.The method of claim 1,
The biodegradable bond is characterized in that selected from the group consisting of ester bonds, amide bonds, disulfide bonds, phosphate bonds, and combinations thereof. 제 1 항에 있어서,
상기 표적용 펩타이드는 폴리에틸렌글리콜(polyethylenglycol, PEG)에 연결되는 것을 특징으로 하는, 제조방법.The method of claim 1,
The target peptide is characterized in that connected to polyethylene glycol (polyethylenglycol, PEG), manufacturing method. 제 1 항에 있어서,
상기 중합된 핵산은 pDNA(plasmid DNA) 또는 siRNA(Small interfering RNA)가 중합된 것임을 특징으로 하는, 제조방법.The method of claim 1,
The polymerized nucleic acid is characterized in that the pDNA (plasmid DNA) or siRNA (Small interfering RNA) is polymerized. 생분해성 결합을 포함하는 양이온성 고분자에 표적용 펩타이드를 결합시킨 생체고분자(biopolymer), 및 중합된 핵산(poly nucleic acid)을 포함하는 핵산 전달용 조성물.A nucleic acid delivery composition comprising a biopolymer, in which a target peptide is bound to a cationic polymer including a biodegradable bond, and a polymerized nucleic acid. 제 6 항에 있어서,
상기 양이온성 고분자는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine, PEI), 가지친 폴리에틸렌이민(branched polyethylenimine, BPEI), 폴리아미도아민 (polyamidoamine, PAA), 및 키토산(chitosan) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 조성물.The method according to claim 6,
The cationic polymer is selected from the group consisting of polyethylenimine (PEI), branched polyethylenimine (BPEI), polyamidoamine (polyamidoamine, PAA), and chitosan (chitosan), the composition . 제 6 항에 있어서,
상기 생분해성 결합은 에스테르 결합, 아마이드 결합, 이황화 결합, 인산염 결합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 조성물.The method according to claim 6,
Wherein said biodegradable bond is selected from the group consisting of ester bonds, amide bonds, disulfide bonds, phosphate bonds, and combinations thereof. 제 6 항에 있어서,
상기 표적용 펩타이드는 혈관신생을 표적으로 하는 것을 특징으로 하는, 조성물.The method according to claim 6,
The targeting peptide is characterized in that to target angiogenesis, composition. 제 6 항에 있어서,
상기 표적용 펩타이드는 폴리에틸렌글리콜(polyethylenglycol, PEG)에 연결되는 것을 특징으로 하는, 조성물.The method according to claim 6,
The target peptide is characterized in that connected to polyethylene glycol (polyethylenglycol, PEG), composition. 제 6 항에 있어서,
상기 중합된 핵산은 pDNA(plasmid DNA) 또는 siRNA(Small interfering RNA)가 중합된 것임을 특징으로 하는, 조성물.The method according to claim 6,
The polymerized nucleic acid is characterized in that the polymerized pDNA (plasmid DNA) or siRNA (Small interfering RNA). 제 6 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 혈관신생 억제용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for inhibiting angiogenesis comprising the composition according to any one of claims 6 to 11. 제 12 항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 암, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부, 신생혈관 녹내장, 증식성 망막증, 건선, 혈우병성 관절, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 류마티스 관절염, 골관절염, 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증, 아테롬성 동맥경화, 장관 접착, 궤양, 간경병증, 사구체신염, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 기관 이식 거부, 신사구체병증, 당뇨병, 염증, 및 신경퇴행성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 혈관신생 관련 질환의 예방 또는 치료에 이용되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.13. The method of claim 12,
The pharmaceutical composition may include cancer, diabetic retinopathy, prematurity retinopathy, corneal transplant rejection, neovascular glaucoma, proliferative retinopathy, psoriasis, hemophiliac joints, keloids, wound granulation, vascular adhesion, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, autoimmune diseases, Crohn's disease, restenosis, atherosclerosis, intestinal adhesion, ulcer, liver cirrhosis, glomerulonephritis, diabetic nephropathy, malignant neurosis, organ transplant rejection, renal glomerulopathy, diabetes, inflammation, and neurodegenerative diseases Pharmaceutical composition, characterized in that used for the prevention or treatment of angiogenesis-related diseases.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101990826B1 (en) 2019-03-18 2019-06-19 영화진흥위원회 Viewing Providing system for Deafness
KR20210115528A (en) * 2020-03-13 2021-09-27 가톨릭대학교 산학협력단 A complex consisting of branched DNA dendrimer and reducible polycations, and a composition comprising the complex for enhancing immunity

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