KR20130063627A

KR20130063627A - Composition for treating rheumatoid arthritis

Info

Publication number: KR20130063627A
Application number: KR1020110130073A
Authority: KR
Inventors: 윤건호; 주지현; 김정득
Original assignee: 가톨릭대학교 산학협력단
Priority date: 2011-12-07
Filing date: 2011-12-07
Publication date: 2013-06-17
Also published as: KR101627630B1

Abstract

PURPOSE: A composition containing marine minerals and essential inorganic salts for treating rheumatoid arthritis is provided to treat and alleviate rheumatoid arthritis. CONSTITUTION: A composition for treating rheumatoid arthritis contains marine mineral water which is collected underground at a depth of 1100 m at a hot spring of the coastal terrace 92-1, Geumjin-ri, Okgye-myeon, Gangneung-si, Ganwon-do in Korea. The mineral water is a concentrate water containing 200-230 mg/L of potassium, 7000-9500 mg/L of sodium, 1400-1700 mg/L of calcium, 900-1100 mg/L of magnesium, 3-9 mg/L of zinc, 25-35 mg/L of strontium, 200-500 Mg/L of selenium, 65-75 Mg/L of vanadium, 0.5-1.5 Mg/L of germanium, 10-40 Mg/L of manganese, 1-3 Mg/L of cobalt, 600-950 Mg/L of titanium, 3-9 Mg/L of copper, 0.02-0.09 mg/L of lithium, 16000-19500 mg/L of chlorine ion, 1.5-3.0 mg/L of fluorine ion, 40-56 mg/L of bromide ion, 3000-4500 mg/L of sulfate ion, 0.8-1.2 mg/L of boron, and 0.5-1.5 mg/L of silicon dioxide. The composition contains 0.5-50 wt% of the concentrate.

Description

Composition for treating rheumatoid arthritis [

본 발명은 광천수를 이용한 류마티스 관절염 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for treating rheumatoid arthritis using mineral water.

류마티스 관절염(rheumatoid arthritis; RA)은 관절이나 힘줄의 활막에 비세균성 염증 반응이 만성적으로 나타나며, 이로 인해 활막이 증식되고 활액의 양이 증가하여 관절의 부종과 동통을 초래하는 질환이다. 류마티스 관절염은 전신성 염증반응으로 인체 내 많은 조직과 기관(피부, 혈관, 심장 폐, 근육)들에 영향을 주며, 특히 관절에 영향을 주어 비가역적인 증식성 활막염을 일으키며 이는 관절연골의 파괴와 관절의 강직으로 진행된다. 류마티스 관절염의 원인은 아직 밝혀지지 않았으나 자가면역반응이 이 질환의 만성화와 진행에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 즉, 염증성 매개체들과 사이토카인(cytokine)의 국소적인 방출과 함께 T 세포가 중요한 역할을 하여 결과적으로 관절을 파괴하는 지속적인 자가면역반응으로서 주요 증상으로는 피로, 무력감, 동통 등이며, 관절염이 진행되면서 발열 및 체력쇠약을 동반한다. 또한 염증이 일어난 관절 부근에 근육강직(muscle atrophy)과 근육경축(muscle spasm)이 나타나 관절의 움직임에 영향을 준다.Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory reaction of the synovial membrane of the joints or tendons, resulting in synovial proliferation and increased synovial fluid resulting in joint edema and pain. Rheumatoid arthritis is a systemic inflammatory reaction that affects many tissues and organs (skin, blood vessels, heart lungs, muscles) in the body and especially affects the joints causing irreversible proliferative synovitis, It goes on rigidly. Although the cause of rheumatoid arthritis has not been elucidated yet, it is known that autoimmune reactions play an important role in the chronicity and progression of this disease. In other words, T cells play an important role in local release of inflammatory mediators and cytokines, resulting in a continuous autoimmune reaction that destroys joints. Major symptoms include fatigue, helplessness, pain, arthritis progression And accompanied by fever and weakness. In addition, muscle atrophy and muscle spasm appear near the inflamed joints, affecting movement of the joints.

따라서 관절염을 치료하기 위한 목적은 관절의 통증과 염증을 감소시키고, 관절의 변형을 방지할 뿐만 아니라 보다 근본적으로는 관절염을 유발하는 세포내 작용 메카니즘을 밝히고 그 기작을 제어하는데 있다. 그러나 류마티스 관절염의 발병 원인 및 기전에 대한 많은 연구와 그 결과를 이용한 다양한 신약개발에도 불구하고 아직까지 완치에 이르게 하는 치료제는 개발되어 있지 않은 상태이다. Therefore, the purpose of treating arthritis is not only to reduce pain and inflammation of joints, but also to prevent deformation of joints, and more fundamentally, to identify and control the mechanism of intracellular action that causes arthritis. However, in spite of many studies on the etiology and mechanism of rheumatoid arthritis and the development of various new drugs using the results, there has not yet been developed a cure to cure.

그나마 지금까지 알려진 관절염 치료제로는 비스테로이드성 항염증 약물(NSAIDs)(아스피린 이부프로펜), 금제제, 페니실라민(penicillamine), 스테로이드(steroid)성 호르몬제 등이 있다. 그러나 이러한 치료제는 장기간 복용시 부작용이 따르는 문제점이 있다. 이에 최근에는 염증 기전의 중심 역할을 하는 TNF(tumor necrosis factor)의 수용성 수용체를 유전자 재조합 기술로 생산하여 치료제로 개발하려는 노력이 있었으나, 염증, 부종, 비정상적인 신혈관 생성, 골 및 연골조직의 침식 등 예상치 못했던 부작용이 발생하는 문제점이 있다. However, known therapies for arthritis include NSAIDs (aspirin ibuprofen), gold medications, penicillamine, and steroid hormones. However, these therapeutic agents have side effects when they are taken for a long time. Recently, attempts have been made to develop a therapeutic agent for TNF (tumor necrosis factor) -resistant receptor that plays a central role in the inflammation mechanism by recombinant DNA technology. However, inflammation, edema, abnormal neovascularization, erosion of bone and cartilage tissue There is a problem that an unexpected side effect occurs.

그리하여 최근 부작용이 적은 천연물 추출물을 유효성분으로 하는 치료제 개발 움직임이 활발하다. 구체적으로, 유럽종 포도의 씨 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물(한국특허공개공보 10-2009-0024647호), 두충 추출물을 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강식품 조성물(한국특허공개공보 10-2011-0066263호) 등 현재 다양한 식물에서 추출한 추출물의 류마티스 관절염 치료효과가 규명되고 있는 실정이다.Thus, the development of a therapeutic agent having an active ingredient of a natural substance extract with a low side effect has been actively developed recently. Specifically, the present invention relates to a method for producing a seed extract of European grape seed and a pharmaceutical composition for preventing or treating rheumatoid arthritis (Korean Patent Publication No. 10-2009-0024647), a method for preventing or treating rheumatoid arthritis, A therapeutic pharmaceutical composition and a health food composition (Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2011-0066263), and the present invention has been investigated for the treatment effect of rheumatoid arthritis.

이러한 맥락에서, 생체 내 부작용이 적으면서도 류마티스 관절염의 제반 증상인 염증, 골 및 연골조직 침식 등의 증상을 완화시킬 수 있는 효과가 뛰어난 새로운 천연 치료제의 개발이 시급한 실정이다.In this context, it is urgent to develop a novel natural remedy that has a low effect on the in vivo side, and is effective in alleviating symptoms such as inflammation, bone and cartilage tissue erosion, which are various symptoms of rheumatoid arthritis.

본 발명의 목적은 해양성 광천수를 함유하는 류마티스 관절염 치료용 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a composition for treating rheumatoid arthritis containing marine mineral water.

또한, 본 발명의 목적은 상기 해양성 광천수을 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 기능성 식품을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a functional food for preventing or treating rheumatoid arthritis containing the above-mentioned marine mineral water.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 대한민국 강원도 강릉시 옥계면 금진3리 92-1번지 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 지점에서 취수한 해양성 광천수를 함유하는 류마티스 관절염 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for treating rheumatoid arthritis, which comprises marine mineral water taken at a location 1100 m underground of a hot spring area in the coastal monsoon area of 92-1, Kejin 3 ridge, Gangneung-myeon, Gangneung- .

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 광천수는 농축물일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the mineral water may be a concentrate.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 광천수는 미네랄 성분으로서, 칼륨 200~230㎎/L, 나트륨 7000~9500㎎/L, 칼슘 1400~1700㎎/L, 마그네슘 900~1100㎎/L, 아연 3~9㎎/L, 스트론튬 25~35㎎/L, 셀레늄 200~500㎍/L, 바나듐 65~75㎍/L, 게르마늄 0.5~1.5㎍/L, 망간 10~40㎍/L, 코발트 1~3㎍/L, 티탄 600~950㎍/L, 구리 3~9㎍/L, 리튬 0.02~0.09㎎/L, 염소이온 16000~19500㎎/L, 불소이온 1.5~3.0㎎/L, 브롬이온 40~56㎎/L, 황산이온 3000~4500㎎/L, 보론 0.8~1.2㎎/L 및 이산화규소 0.5~15㎎/L를 함유할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the mineral water includes minerals such as potassium 200 to 230 mg / L, sodium 7000 to 9500 mg / L, calcium 1400 to 1700 mg / L, magnesium 900 to 1100 mg / L of manganese, 10 to 40 占 퐂 / L of manganese, 1 to 3 mg / L of manganese, 20 to 35 mg / L of strontium, 200 to 500 mu g / L of chlorine, 16000 to 19500 mg / L of chlorine ions, 1.5 to 3.0 mg / L of fluorine ions, 40 to 90 mg / L of bromine ions, 56 mg / L, sulfuric acid ions 3000 to 4500 mg / L, boron 0.8 to 1.2 mg / L and silicon dioxide 0.5 to 15 mg / L.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 농축물은 조성물 총 중량을 기준으로 0.5~50중량% 함유할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the concentrate may contain 0.5 to 50% by weight based on the total weight of the composition.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 농축물은 상기 광천수를 증발, 농축 및 건조시켜 얻은 고형분일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the concentrate may be a solid obtained by evaporating, concentrating and drying the mineral water.

나아가, 본 발명은 대한민국 강원도 강릉시 옥계면 금진3리 92-1번지 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 지점에서 취수한 해양성 광천수을 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 기능성 식품을 제공한다.Further, the present invention provides a functional food for the prevention or treatment of rheumatoid arthritis, which contains marine mineral waters taken at 1100 m underground of a hot spring area in coastal monotone region 92-1, Jinjin 3 ridge, Okgeyeon-myeon, Gangneung-si, Gangwon-do, Korea.

본 발명은 대한민국 강원도 강릉시 옥계면 금진3리 92-1번지 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 지점에서 취수한 해양성 광천수를 이용한 류마티스 관절염 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 광천수는 인체에 필수적인 무기염류 및 해양 미네랄 성분이 풍부하며, 특별히 류마티스 관절염의 치료, 증상 완화 효과가 뛰어나 이를 개선할 수 있는 치료용 조성물 및 기능성 식품의 용도로도 사용할 수 있다.The present invention relates to a composition for the treatment of rheumatoid arthritis using marine mineral waters taken from a site 1100 m underground in a hot spring area of a coastal monotony zone 92-1, Jinjin 3 ridge, Okgye-myeon, Gangneung-myeon, Gangwon-do. The mineral water of the present invention contains inorganic salts and marine It is possible to use the composition as a therapeutic composition and a functional food which are rich in minerals and are particularly effective in the treatment and relief of symptoms of rheumatoid arthritis.

도 1은 본 발명에 따른 광천수 처리에 따른 TNF-α의 발현 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 광천수 처리에 따른 IL-6의 발현 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 광천수 처리에 따른 IL-3β의 발현 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 광천수 처리에 따른 IL-10의 발현 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5은 본 발명에 따른 광천수 처리에 따른 파골세포 분화능 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명에 따른 광천수 처리에 따른 RANKL의 발현 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명에 따른 광천수 처리 이후 in vivo CIA 마우스 군에서의 관절염 발병 정도를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명에 따른 광천수 처리 이후 in vivo CIA 마우스 군에서의 관절 조직의 면역화학염색 결과이다.
도 9은 본 발명에 따른 광천수에 대한 MTT 어세이 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명의 일실시예에 따른 광천수 농축물의 제조방법을 나타낸 도식도이다.FIG. 1 is a graph showing the inhibitory effect of TNF-α on mineral water treatment according to the present invention.
FIG. 2 is a graph showing the inhibitory effect of IL-6 on mineral water treatment according to the present invention. FIG.
FIG. 3 is a graph showing the inhibitory effect of IL-3? On mineral water treatment according to the present invention. FIG.
FIG. 4 is a graph showing the inhibitory effect of IL-10 on mineral water treatment according to the present invention.
FIG. 5 is a graph showing the osteoclast differentiation inhibitory effect according to the mineral water treatment according to the present invention.
6 is a graph showing the inhibitory effect of RANKL on mineral water treatment according to the present invention.
FIG. 7 is a graph showing the degree of onset of arthritis in the in vivo CIA mouse group after mineral water treatment according to the present invention. FIG.
FIG. 8 shows immunochemical staining results of joint tissues in the in vivo CIA mouse group after mineral water treatment according to the present invention.
FIG. 9 is a graph showing an MTT assay result for mineral water according to the present invention. FIG.
10 is a schematic diagram illustrating a method for producing a mineral water concentrate according to an embodiment of the present invention.

본 발명은 대한민국 강원도 강릉시 옥계면 금진3리 92-1번지 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 지점에서 취수한 해양성 광천수을 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention provides a composition for preventing or treating rheumatoid arthritis, which comprises, as an active ingredient, marine mineral water taken at a location 1100 m underground of a hot spring area of coastal monotone area 92-1, Jinjin 3 ridge, Okgye-myeon, Gangneung-si, Gangwon-do, Republic of Korea.

일반적으로 해수는 표층수와 구별하여 해양 심층수라고 불리우고 있는데, 해양 심층수라는 것은 해수 표면으로부터 200미터 이하의 해수를 일컫는 것으로서, 광합성이 일어나지 않아 식물성장에 필요한 질소, 인, 규산 등의 무기영양소를 많이 포함하고 있으며, 대기나 화학물질에 의한 오염 및 태양균이나 일반세균에 오염되지 않으므로 해양성 세균수도 적어 물리적 청정성도 매우 뛰어나다. In general, seawater is called deep sea water by distinguishing it from surface water. Deep sea water refers to seawater less than 200 meters from the sea surface. It does not cause photosynthesis and contains many inorganic nutrients such as nitrogen, phosphorus and silicate And it is not contaminated by air or chemical substances, nor is it contaminated with solar or general bacteria. Therefore, there are few marine bacteria and physical cleanness is excellent.

또한, 일년 내내 저온으로 그 변화가 적고 안정된 낮은 수온성을 갖으며, 필수 미량원소나 다양한 미네랄 성분이 균형있게 포함되어 있어 용존되어 있는 금속이온들의 작용으로 활성 산소에 대한 탁월한 소거작용 효과 등의 특성을 갖고 있다고 알려져 있다.In addition, it has low water temperature change at low temperature throughout the year, stable low water temperature, and contains essential trace elements and various minerals in a balanced manner, so that the effect of dissolved metal ions on the active oxygen is excellent .

따라서, 해양 오염이 심각한 현재의 상태에서 표층수는 식음료로 적합하지 않으나, 해양심층수는 표면층에 비하여 생균수가 그다지 많지 않을뿐더러 병원성 생물이 조금도 포함되어 있지 않기 때문에 의료용 및 식음료로 선택하는 경우에 안전성이 지극히 높다고 할 수 있다. 그리하여, 일전에도 이러한 해양성 심층수를 활용한 음료 조성물에 대한 선행 등록특허(대한민국 등록특허 0482999호)가 존재한 바 있었다.Therefore, surface water is not suitable for food and beverages in the present state of severe marine pollution. However, deep sea water is not much in number compared to the surface layer, and since there is no pathogenic organism, it is very safe High. Thus, a prior registration patent (Korean Patent Registration No. 0482999) for a beverage composition utilizing such marine deep seawater has existed.

이에 본 발명자들은 대한민국 강원도 강릉시 옥계면 금진3리 92-1번지 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 암반층에서 용출되는 해양 심층수인 해양성 광천수가 류마티스 관절염 치료 및 증상 완화 효과가 있는 것을 확인하고, 상기 광천수를 이용한 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.Therefore, the present inventors confirmed that marine mineral water, which is a deep ocean water eluting from the 1100-m rock bed of a hot spring area of coastal monotone region, 92-1, Kyejin-ri 3-ri, Okgye-myeon, Gangneung-myeon, Gangwon-do has an effect of treating and alleviating rheumatoid arthritis, A composition for preventing or treating arthritis is provided.

상기 본 발명에 따른 광천수는 미네랄 성분으로서, 칼륨 200~230㎎/L, 나트륨 7000~9500㎎/L, 칼슘 1400~1700㎎/L, 마그네슘 900~1100㎎/L, 아연 3~9㎎/L, 스트론튬 25~35㎎/L, 셀레늄 200~500㎍/L, 바나듐 65~75㎍/L, 게르마늄 0.5~1.5㎍/L, 망간 10~40㎍/L, 코발트 1~3㎍/L, 티탄 600~950㎍/L, 구리 3~9㎍/L, 리튬 0.02~0.09㎎/L, 염소이온 16000~19500㎎/L, 불소이온 1.5~3.0㎎/L, 브롬이온 40~56㎎/L, 황산이온 3000~4500㎎/L, 보론 0.8~1.2㎎/L 및 이산화규소 0.5~15㎎/L를 함유한다. 이는 한국과학기술연구원(KIST), 한국기초과학지원연구원(KBSI) 및 한국지질자원연구원(KIGAM)에 의뢰한 본 발명에 따른 광천수의 미네랄 성분 분석 결과로, 이러한 상기 미네랄 성분 구성을 지닌 광천수는 지금까지 알려진 바 없는 신규한 것이다.The mineral water according to the present invention is used as a mineral component in an amount of 200 to 230 mg / L of potassium, 7000 to 9500 mg / L of sodium, 1400 to 1700 mg / L of calcium, 900 to 1100 mg / , Strontium 25 to 35 mg / L, selenium 200 to 500 μg / L, vanadium 65 to 75 μg / L, germanium 0.5 to 1.5 μg / L, manganese 10 to 40 μg / L, cobalt 1 to 3 μg / L, 0.02 to 0.09 mg / L of chlorine, 16000 to 19500 mg / L of chlorine ion, 1.5 to 3.0 mg / L of fluorine ion, 40 to 56 mg / L of bromine ion, 3 to 4500 mg / L of sulfuric acid ions, 0.8 to 1.2 mg / L of boron and 0.5 to 15 mg / L of silicon dioxide. As a result of analysis of mineral components of the mineral water according to the present invention commissioned by Korea Institute of Science and Technology (KIST), Korea Basic Science Institute (KBSI) and Korea Institute of Geoscience and Mineral Resources (KIGAM), the mineral water having the above- Is a novelty not known until now.

한편, 류마티스 관절염은 관절의 만성 염증 및 파괴로 이어지는 자가면역 질환이다. TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β) 및 IL-6과 같은 전염증 사이토카인(proinflammatory cytokine)의 지속적 생산이 류마티스 관절염에서 윤활세포 활성화 및 관절염 파괴에 일차적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다(Choy and Panayi, 2001, N. Engl. J. Med. 344, 907-916). 상기 사이토카인과 케모카인, 유도성 질산 신타제(synthase) 및 세포 부착 분자와 같은 면역 및 염증 반응의 매개자들의 발현은 NF-κB(nuclear factor-κB)에 의해 조절된다(Barnes and Karin, 1997, N. Engl. J. Med. 336, 1066-1071; Jue et al. 1999, J. Korean Med. Sci. 14, 231-238). NF-κB 억제는 리간드 RANKL의 결합에 의해 유도되는 RANK(receptor activator of NF-κB)의 신호전달을 약화시킴으로써 파골세포의 전구세포의 분화를 차단하는 것으로 보여진다.On the other hand, rheumatoid arthritis is an autoimmune disease that leads to chronic inflammation and destruction of joints. The sustained production of proinflammatory cytokines such as TNF-α, IL-1β (interleukin-1β) and IL-6 play a primary role in the activation of rheumatoid cells and the destruction of arthritis in rheumatoid arthritis (Choy and Panayi, 2001, N. Engl., J. Med., 344, 907-916). Expression of the mediators of immune and inflammatory responses such as cytokines and chemokines, inducible nitric acid synthases and cell adhesion molecules is regulated by NF-κB (Barnes and Karin, 1997, N J. Eng. J. Med 336, 1066-1071, Jue et al 1999, J. Korean Med. Sci 14, 231-238). NF-κB inhibition appears to block the differentiation of osteoclast precursor cells by attenuating the signaling of RANK (receptor activator of NF-κB) induced by the binding of ligand RANKL.

이에 본 발명자들은 본 발명에 따른 광천수에 대한 신규한 효능을 상기 류마티스 관절염의 매커니즘에 기초하여 분석한 결과, 상기 광천수가 류마티스 관절염에 치료 효과 및 증상 완화 효과가 존재한다는 사실을 처음으로 규명하였다.Accordingly, the present inventors analyzed the novel efficacy of the mineral water according to the present invention on the basis of the mechanism of rheumatoid arthritis, and found that the mineral water has a therapeutic effect and symptom relief effect on rheumatoid arthritis.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명자들은 DBA/1J 마우스에서 Type Ⅱ 콜라겐을 이용한 2차 면역 반응 유도하여 제작한 콜라겐 유도 관절염 마우스 모델(CIA)에서 본 발명에 따른 광천수에 의한 류마티스 관절염 치료 효과를 관찰하였다. 정상군과 비교하여 CIA군과 본 발명에 따른 광천수를 섭취한 군의 경우 모두 관절염이 유도되었고, 본 발명에 따른 광천수를 섭취한 군이 CIA군에 비해 관절염 점수가 감소함을 확인 할 수 있었다(도 7 참조). 또한, 각 군에 속하는 마우스의 관절을 수집하여 조직 염색을 한 결과, 정상군에 비해 CIA군에서 조직의 파괴 정도가 심했고, 염증 세포의 침윤 정도가 높았다. 이에 반해 본 발명에 따른 광천수를 섭취한 군의 경우, CIA군에 비해 조직의 파괴 정도나 염증 세포의 침윤 정도가 현저히 감소해 있었다(도 8 참조).According to one embodiment of the present invention, the inventors of the present invention conducted a therapeutic treatment of rheumatoid arthritis by mineral water according to the present invention in a collagen-induced arthritis mouse model (CIA) prepared by inducing a second-order immune response using Type II collagen in DBA / Respectively. Arthritis was induced in both the CIA group and the mineral water-consuming group according to the present invention compared with the normal group, and the arthritis score was decreased in the mineral water-consuming group according to the present invention compared to the CIA group 7). In addition, the joints of mice belonging to each group were collected and subjected to tissue staining. As a result, the degree of tissue destruction was higher in the CIA group than in the normal group, and the degree of infiltration of inflammatory cells was higher. On the other hand, the group ingesting the mineral water according to the present invention significantly decreased the degree of tissue destruction or infiltration of inflammatory cells compared to the CIA group (see FIG. 8).

또 다른 일실시예에서는, 류마티스 관절염이 염증성 사이토카인을 생산하는 면역 세포에 의해 만성적인 염증반응이 진행되면서 관절 연골조직이 파괴되고 심한 통증을 일으키는 대표적인 자가 면역 질환인 점에 착안하여, 본 발명에 따른 광천수 농축물의 염증성 사이토카인 억제 효과를 테스트 하였다, 이미 많은 연구를 통해 류마티스 관절 및 혈액에서 TNF, IL-1β, IL-6, IL-17과 같은 염증성 사이토카인 발현 증가가 보고되어 있으나, 실험 결과 TNF-α, IL-1β, IL-6과 같은 염증 유발 사이토카인의 발현이 본 발명에 따른 광천수 농축물에 의해 효과적으로 저해되고 있음을 확인 할 수 있었다(도 1 내지 4 참조). In another embodiment, attention is focused on the fact that rheumatoid arthritis is a typical autoimmune disease that causes chronic inflammatory reaction by the immune cells producing inflammatory cytokine, resulting in destruction of articular cartilage tissue and severe pain, Inflammatory cytokines such as TNF, IL-1β, IL-6, and IL-17 have been reported to increase in rheumatoid joints and blood. However, It was confirmed that the expression of inflammatory cytokines such as TNF-α, IL-1β, and IL-6 was effectively inhibited by the mineral water concentrate according to the present invention (see FIGS. 1 to 4).

또 다른 일실시예에서는. 파골 세포 배양 시스템에서 본 발명에 따른 광천수를 추가하여 파골전구세포에서 파골세포로의 분화에 요구되는 사이토카인인 RANKL과 함께 배양한 결과, 파골전구세포에서 파골세포로의 분화능이 본 발명에 따른 광천수에 의해 효과적으로 감소되고 있음을 확인 할 수 있었다(도 5 및 6 참조).In yet another embodiment. When the mineral water according to the present invention was added to the osteoclast culture system and incubated with RANKL, a cytokine required for osteoclast differentiation from the osteoclast precursor cells, the osteoclast-differentiating ability from the osteoclast precursor cells was confirmed by the mineral water (See Figs. 5 and 6).

또한, 본 발명의 일실시예에서는 본 발명에 따른 광천수에 의한 상기 류마티스 관절염 치료 효과가 세포 독성에 의한 결과가 아님을 증명하고자 MTT assay를 진행한 결과, 본 발명에 따른 광천수가 세포 사멸 또는 세포 독성을 가지지 않음을확인할 수 있었다(도 9 참조). In addition, in an embodiment of the present invention, the MTT assay was conducted to demonstrate that the treatment effect of the mineral water according to the present invention on the treatment of rheumatoid arthritis is not due to cytotoxicity. As a result, (See Fig. 9).

그러므로 본 발명은 대한민국 강원도 강릉시 옥계면 금진3리 92-1번지 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 지점에서 취수한 해양성 광천수을 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 조성물을 제공할 수 있다.Therefore, the present invention can provide a composition for preventing or treating rheumatoid arthritis, which comprises, as an active ingredient, marine mineral water taken from a site 1100 m underground in a hot spring area of coastal monotone region 92-1, Jinjin 3 ridge, Okgye-myeon, Gangneung-

한편, 본 발명은 상기 광천수의 농축물을 함유하는 류마티스 관절염 치료용 조성물을 제공할 수 있다. 구체적으로 상기 농축물은 상기 광천수는 증발, 농축 및 건조시켜 얻은 고형분을 포함한다. Meanwhile, the present invention can provide a composition for treating rheumatoid arthritis containing the concentrate of mineral water. Specifically, the concentrate includes the solid component obtained by evaporating, concentrating and drying the mineral water.

즉, 상기 본 발명에 따른 광천수는 자연건조로 증발시키거나, 인공적으로 탈염 혹은 건조시켜 얻은 농축물일 수도 있다. That is, the mineral water according to the present invention may be a concentrate obtained by evaporating naturally dried or artificially desalting or drying.

구체적으로 본 발명의 따른 상기 광천수의 농축물은 하기와 같은 방법으로 제조될 수 있다. 우선 원수(原水)를 필터링하는 필터링 단계를 거친다. 이때 0.2~0.5 마이크로미터 필터를 이용하는 것이 효과적이다. 2단계에서는 탈염 단계 및 건조 단계로 이뤄질 수 있다. 이에 제한되지는 않으나 전기투석기를 이용하여 탈염시킨 후 여과한다. 그 후, 자연건조나 인공건조기를 이용한 건조단계를 거쳐 탈염 파우더를 제조한다. 본 발명의 일실시예에서는 상기 건조를 위해 진공동결건조기를 사용하였다. 마지막 3단계에서는 탈염 파우더를 분쇄하여 포장할 수 있다.Specifically, the concentrate of the mineral water according to the present invention can be produced by the following method. First, a filtering step is performed to filter the raw water. In this case, it is effective to use a 0.2 to 0.5 micrometer filter. In the second step, desalting and drying may be performed. Desalting is performed using an electrodialyzer, though not limited thereto, and filtration is performed. Thereafter, a desalting powder is produced through natural drying or drying using a dry dryer. In one embodiment of the present invention, a vacuum freeze dryer was used for the drying. In the last three steps, desalted powder can be pulverized and packaged.

본 발명에 따른 상기 광천수 농축물은 조성물 총 중량을 기준으로 0.5~50중량% 함유될 수 있으나, 이에 제한되지는 않으며, 상기 본 발명에 따른 광천수 농축물 또한 광천수 자체와 마찬가지로, 류마티스 관절염 치료 효과와 동일한 효과가 있음을 실시예를 통해 확인할 수 있었다.The mineral water concentrate according to the present invention may be contained in an amount of 0.5 to 50% by weight based on the total weight of the composition, but the present invention is not limited thereto. The mineral water concentrate according to the present invention may also be used for treating rheumatoid arthritis, The same effect can be confirmed by the examples.

본 발명의 조성물은 류마티스 관절염의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 사용될 수 있으며, 본 발명에 따른 광천수는 상기 조성물 총 중량에 대하여 0.5~50중량%로 포함할 수 있다. The composition of the present invention can be used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of rheumatoid arthritis, and the mineral water according to the present invention can be contained in an amount of 0.5 to 50% by weight based on the total weight of the composition.

또한, 본 발명에 따른 상기 류마티스 관절염 치료 및 예방용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 본 발명에 따른 광천수 또는 광천수 농축물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 류마티스 관절염을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다. 예컨대, 본 발명에 따른 광천수 농축물의 약학적으로 유효한 양은 0.5~100 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5~5 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 질환의 증상 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.In addition, the composition for treating and preventing rheumatoid arthritis according to the present invention may comprise a pharmaceutically effective amount of the mineral water or mineral water concentrate according to the present invention alone or in combination with one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents . A pharmaceutically effective amount as used herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate, and treat rheumatoid arthritis. For example, the pharmaceutically effective amount of the mineral water concentrate according to the present invention is 0.5 to 100 mg / day / kg body weight, preferably 0.5 to 5 mg / day / kg body weight. However, the pharmaceutically effective amount may be appropriately changed depending on the symptom of the disease, the age, body weight, health condition, sex, administration route and treatment period of the patient.

또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필 하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.The term "pharmaceutically acceptable" as used herein refers to a composition that is physiologically acceptable and does not normally cause an allergic reaction such as gastrointestinal disorder, dizziness, or the like when administered to humans. Examples of the carrier, excipient and diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. Further, it may further include a filler, an anticoagulant, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifying agent and an antiseptic agent.

또한, 본 발명의 류마티스 관절염 치료 및 예방용 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.In addition, the compositions for treating and preventing rheumatoid arthritis of the present invention may be formulated using methods known in the art so as to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to the mammal. The formulations may be in the form of powders, granules, tablets, emulsions, syrups, aerosols, soft or hard gelatine capsules, sterile injectable solutions, sterile powders.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. The composition according to the present invention may be administered through various routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or muscular, and the dose of the active ingredient may be varied depending on various factors such as route of administration, age, sex, And the like.

또한, 본 발명의 조성물은 류마티스 관절염을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.In addition, the composition of the present invention may be administered in combination with a known compound having an effect of preventing, ameliorating or treating rheumatoid arthritis.

따라서 본 발명은 금진리 해안단구 지역 온천지의 지하 1100m 지점에서 취수한 광천수를 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약제를 제공할 수 있다.Accordingly, the present invention can provide a medicament for the prevention or treatment of rheumatoid arthritis, which comprises a composition containing mineral water taken as an active ingredient at 1100 m underground of a hot spring area in the Jinjungri Coastal Area.

나아가 본 발명에 따른 조성물은 상기 우수한 류마티스 관절염 억제 효과를 제공할 뿐만 아니라, 천연 해양 심층수를 원료로 하는 바 기존의 화학적 제제보다 안전성이 높아, 약물에 대한 별다른 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.Furthermore, the composition according to the present invention not only provides the excellent rheumatoid arthritis-suppressing effect but also has a higher safety than conventional chemical preparations using natural deep-sea water as a raw material, and has no toxicity and side effects on drugs, Can be used.

따라서 본 발명의 조성물은 류마티스 관절염에 의해 발생하는 질환의 예방 또는 치료를 목적으로 하는 식품에 첨가할 수 있으므로, 류마티스 관절염으로 인해 발생하는 질환 증상의 예방 및 개선을 위한 식품용 조성물로 사용할 수 있다. Therefore, the composition of the present invention can be added to foods intended for the prevention or treatment of diseases caused by rheumatoid arthritis, and thus can be used as a food composition for preventing and improving symptoms of diseases caused by rheumatoid arthritis.

또한 류마티스 관절염으로 인해 발생하는 질환 증상의 예방 및 개선에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.It can also be easily utilized as a food which is effective for prevention and improvement of disease symptoms caused by rheumatoid arthritis, for example, as a raw material, additives, food additives, functional foods or beverages of foods.

본 발명에서 상기 식품이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.In the present invention, the term " food " means a natural product or a processed product containing one or more nutrients. Preferably, the food is a state in which it can be directly eaten through a certain processing step. Food, food additives, functional foods and beverages.

본 발명에 따른 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.Foods to which the composition according to the present invention can be added include, for example, various foods, beverages, gums, tea, vitamin complexes, and functional foods. In addition, in the present invention, the food may include special nutritive foods (e.g., crude oil, spirits, baby food, etc.), meat products, fish meat products, tofu, mackerel, noodles (Such as soy sauce, soybean paste, kochujang, mixed potatoes), sauces, confectionery (eg, snacks), candies, chocolate, gums, ice cream, milk products (eg, fermented milk, cheese, But are not limited to, pickled foods (various kinds of kimchi, pickles, etc.), beverages (e.g., fruit drinks, vegetable beverages, beverages, fermented beverages and the like) and natural seasonings (e.g. The food, beverage or food additive may be prepared by a conventional production method.

또한, 상기 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물 공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.In addition, the functional food refers to a food group imparted with added value to function and express the function of the food by using physical, biochemical, biotechnological techniques, etc., or to control the biological defense rhythm of the food composition, Means a food which has been designed and processed so as to sufficiently express the body's control function with respect to the living body. Specifically, it may be a health functional food. The functional food may include a food-acceptable food-aid additive, and may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the production of functional foods.

또한, 본원발명에서 상기 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명에 따른 상기 류마티스 관절염 치료 및 예방용 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.In addition, in the present invention, the beverage is a collective term for drinking thirst or for enjoying a taste, and includes a functional beverage. The beverage is not particularly limited as long as it contains the composition for treating and preventing rheumatoid arthritis according to the present invention as an essential ingredient at the indicated ratio, and it is also possible to add various flavors or natural carbohydrates, .

나아가 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.Furthermore, the food containing the composition of the present invention in addition to the above-mentioned composition can be used as a food such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, colorants and fillers (cheese, And carbonates used in alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonated drinks, etc., and these components may be used independently or in combination Can be used.

본원발명의 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 본 발명에 따른 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 90중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 40중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100ml를 기준으로 0.001g 내지 2g, 바람직하게는 0.01g 내지 0.1g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.In the food containing the composition of the present invention, the amount of the composition according to the present invention may be 0.001% by weight to 90% by weight, preferably 0.1% by weight to 40% by weight, And in the case of beverages, it may be contained in a proportion of 0.001 g to 2 g, preferably 0.01 g to 0.1 g based on 100 ml. However, in the case of long-term intake for health and hygiene purposes or for health control purposes, And since the active ingredient has no problem in terms of safety, it can be used in an amount of more than the above range, so it is not limited to the above range.

그러므로 본 발명은 본 발명에 따른 광천수 또는 광천수 농축물을 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료를 위한 건강기능식품을 제공할 수 있으며, 상기 식품의 형태는 이에 제한되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태일 수 있다.
Therefore, the present invention can provide a health functional food for prevention or treatment of rheumatoid arthritis containing the mineral water or mineral water concentrate according to the present invention as an active ingredient, and the form of the food is not limited thereto, , Tablets, capsules or beverages.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples and experimental examples. However, the following Examples and Experimental Examples are merely illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following Experimental Examples.

<< 실시예Example 1> 1>

본 발명에 따른 광천수 The mineral water 농축물의Concentrate 제조 Produce

본 발명에 따른 광천수의 농축물을 제조하기 위하여, 원수(原水)인 강원도 강릉시 옥계면 금진리 해변 해안단구 지역의 지하 110m 암반층에서 취수한 온천수를 0.25 마이크로 미터의 라인필터를 이용하여 필터링한 후, 전기투석기(전압: 5.5~7.5V, 전극액: 3% Na2SO4, CJTTS-2-10 ED, 창조테크노)를 이용하여 탈염하였다. 탈염 과정을 마친 후, 여과하고 진공동결건조기(온도: -40~30℃, 진공도: 5mTorr)를 이용하여 건조 과정을 실시하였다. 그렇게 제조된 탈염 파우더를 핀밀 방식의 분쇄기를 통해 분쇄하여 본 발명에 따른 광천수의 농축물을 제조하였다.
In order to produce the concentrate of the mineral water according to the present invention, the hot water taken from the 110m underground rock in the Kangjinri beach coastal monsoon area of Gangwon-do, Gangneung-si, Gangneung-si, Gangwon-do, was filtered using a line filter of 0.25 micrometer, (Voltage: 5.5 to 7.5 V, electrode solution: 3% Na2SO4, CJTTS-2-10 ED, Creation Techno). After completion of the desalting process, the product was filtered and dried using a vacuum freeze dryer (temperature: -40 to 30 ° C, degree of vacuum: 5 mTorr). The thus-prepared desalted powder was pulverized through a fin-mill grinder to produce a concentrate of mineral water according to the present invention.

<< 실시예Example 2> 2>

콜라겐 유도 관절염의 마우스 모델 제작Mouse model of collagen-induced arthritis

본 발명에 따른 광천수가 in vivo 상에서 류마티스 관절염 치료 효과가 있는지 조사하기 위하여, 6주령의 DBA/1J 수컷 마우스를 Shizuoka Laboratory Center(Shizuoka, Japan)로부터 입수하였다. 모든 마우스는 병원균이 없는 환경에서 사육되었고, 멸균된 표준 마우스 사료(Ralston Purina, St. Louis, MO)와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였다. 동물 실험은 가톨릭대학교 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인하에서 이루어졌다. 콜라겐 유도 관절염은 공지된 바에 따라 실시되었다(Min et al. 2004, Arthritis Res. Ther. 6, R213-219). 6-8주령의 마우스 꼬리 출발부로 완전한 프룬드 애드쥬번트(Arthrogen-CIA, Redmond, WA)에 유화된 소의 II형 콜라겐 (1:1(v/v)) 100㎍을 피내 접종하였다. 14일째에 불완전한 프룬드 애드쥬번트(DIFCO, Detroit, MI)에 용해한 소의 II형 콜라겐 (1:1(v/v)) 100㎍을 추가 접종하하여 CIA 마우스를 제작하였다.
To investigate the effect of mineral water according to the present invention on the treatment of rheumatoid arthritis in vivo, 6-week-old DBA / 1J male mice were obtained from Shizuoka Laboratory Center (Shizuoka, Japan). All mice were housed in a pathogen free environment and allowed free access to sterile standard mouse feed (Ralston Purina, St. Louis, MO) and water. Animal experiments were conducted under the approval of the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) of the Catholic University of Korea. Collagen-induced arthritis was performed according to known methods (Min et al., 2004, Arthritis Res. Ther. 6, R213-219). 100 μg of bovine type II collagen (1: 1 (v / v)) emulsified in a complete Freund's Adjuvant (Arthrogen-CIA, Redmond, WA) was inoculated intradermally with a mouse tail starting portion of 6-8 weeks of age. On day 14, 100 μg of bovine type II collagen (1: 1 (v / v)) dissolved in incomplete Prunde Adjuvant (DIFCO, Detroit, MI) was inoculated to prepare CIA mice.

<< 실시예Example 3> 3>

본 발명에 따른 광천수의 투여 및 관절염의 평가Administration of mineral water and evaluation of arthritis according to the present invention

본 발명에 따른 광천수는 강원도 강릉시 옥계면 금진리 해변 해안단구 지역의 지하 110m 암반층에서 취수한 온천수로서, 실시예 2에서 제작한 CIA 마우스들에게 면역 후, 1주부터 매일 간격으로 8 주일 동안 다양한 농도(10%, 20%, 30%)를 설정하여 구강으로 식수로 섭취시켰다. 원액의 금진광천수에는 미네랄과 나트륨 성분이 과량으로 포함되어 있어 이를 희석하여 사용하였다(상기 10%, 20%, 30% 농도의 광천수는 세포독성이 없음을 확인하였다). 이때 대조군 관절염 동물에는 상기 광천수 대신 일반 식수를 섭취시켰다. 또한 대조군 마우스로서 관절염을 유도시키지 않은 마우스(Normal)도 함께 실험하였다.The mineral water according to the present invention was taken from a 110m underground rocky area of Geumjinri beach coastal area, Gangneung-si, Gangneung-si, Gangwon-do. The CIA mice prepared in Example 2 were inoculated at various concentrations (10 %, 20%, and 30%), respectively. Mineral and sodium components were contained in the crude gold mineral water of the undiluted solution in an excessive amount, and they were diluted (10%, 20%, and 30% of the mineral waters were confirmed to have no cytotoxicity). At this time, the control arthritic animals were fed general drinking water instead of the mineral water. As a control mouse, mice that did not induce arthritis (Normal) were also tested.

9주일 후, 경추탈골로 동물을 희생시키고 관절염 증상 정도 파악을 위해, 각 발의 관절 조직을 분리하였다. 관절염의 활성은 3명의 관찰자에 의해 각 발 별로 4 점 등급을 사용하여 검사되었다(Min et al. 2004, Arthritis Res. Ther. 6, R213-219). 질병 활성에 대한 총 점수는 총 4개의 발을 기준으로 한 것이고, 각 마우스에서 최대 점수는 16점이다(0점 : 관절염 증상이 없음(정상), 1점 : 발목관절이 빨갛고 미비하게 부어오름 , 2점 : 빨갛고 부어오르는 정도가 발목에서 발목뼈까지 조금 확장됨 , 3점 : 빨갛고 부어오르는 정도가 심해지고 발등 전체로 퍼짐 , 4점 : 아주 심하게 빨갛고 부어오르는 증상이 나타나며 다리의 여러 관절의 염증을 동반함).Nine weeks later, the animals were sacrificed by cervical dislocation and the joint tissues of each foot were separated to assess the degree of arthritis symptoms. The activity of arthritis was examined by three observers using a four-point scale for each foot (Min et al., 2004, Arthritis Res. Ther. 6, R213-219). The total score for disease activity is based on a total of 4 feet and the maximum score in each mouse is 16 points (0 point: no arthritis symptoms (normal), 1 point: ankle joint swollen red, 2 points: Red and swollen to a little extent from ankle to ankle bone, 3 points: Deep redness and swelling, spreading to the entire instep, 4 points: Very red and swollen symptoms, inflammation of the joints of the legs Accompanied).

DBA 마우스에서 II형 콜라겐을 이용한 2차 면역 반응 유도 직후부터 본 발명에 따른 본 발명에 따른 광천수에 의한 류마티스 관절염 치료효과를 관찰한 결과, 정상군과 비교하여 CIA군과 본 발명에 따른 광천수를 섭취한 군 모두 관절염이 유도되었으나, 도 7에서와 같이 본 발명에 따른 광천수를 섭취한 군의 경우, 대조군 CIA군에 비해 관절염 점수가 확연히 감소함을 확인할 수 있었다.
As a result of observing the effect of the mineral water according to the present invention on the treatment of rheumatoid arthritis according to the present invention immediately after the induction of the second immunity reaction with the type II collagen in the DBA mouse, the CIA group and the mineral water according to the present invention Arthritis was induced in both groups, but as shown in FIG. 7, the group consuming the mineral water according to the present invention showed a significantly lower score of arthritis than the control group CIA.

<< 실시예Example 4> 4>

본 발명에 따른 광천수의 투여에 따른 관절염의 조직학적 연구Histological study of arthritis according to administration of mineral water according to the present invention

보다 구체적인 관절염에 미치는 광천수의 효과를 확인하기 위해, 관절 조직을 분리하여 그 조직면역화학법을 통해 조직의 모습을 관찰하였다. 이에 본 발명자들은 실시예 1의 9주 째 모든 마우스로부터 뒷발을 회수하고, 10% 인산으로 완충된 포름알데히드에서 고정하였고, 10% EDTA에서 8시간 동안 탈회하고 파라핀에 포매하였다. 조직 절편(7㎛)을 준비하여 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하고, 현미경으로 관찰하고 사진을 촬영하였다.In order to confirm the effect of mineral water on more specific arthritis, the joint tissue was separated and the appearance of the tissue was observed through the tissue immunochemistry. Thus, the hind paws were recovered from all mice at 9 weeks in Example 1, fixed in formaldehyde buffered with 10% phosphoric acid, demineralized in 10% EDTA for 8 hours and embedded in paraffin. Tissue sections (7 mu m) were prepared, stained with hematoxylin and eosin, observed with a microscope and photographed.

그 결과, 도 8에서와 같이, 정상군에 비해 CIA군에서 조직의 파괴 정도가 심했으며, 염증 세포의 침윤 정도가 높았다. 즉 CIA 마우스 유래 발목 관절의 조직은 상당한 면역세포가 침윤된 윤활막의 심각한 증식, 판누스(pannus)의 형성, 연골 손상 및 뼈 침식을 보였다. 이에 반하여 본 발명에 따른 광천수를 섭취한 군의 관절의 경우, CIA군에 비해 조직의 파괴 정도나 염증 세포의 침윤 정도가 현저히 감소하여 판누스의 비형성, 온전한 연골과 뼈의 모습을 보였다.
As a result, as shown in FIG. 8, the degree of tissue destruction was higher in the CIA group than in the normal group, and the infiltration degree of inflammatory cells was higher. In other words, the tissues of the ankle joints derived from the CIA mouse showed significant proliferation of the innervated immune cells, formation of pannus, cartilage damage and bone erosion. On the contrary, in the joints of the group consuming mineral water according to the present invention, the degree of tissue destruction or infiltration of inflammatory cells was significantly reduced compared to the CIA group, indicating the formation of the pannus, the complete cartilage and bone.

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본 발명에 따른 광천수에 따른 비장 세포에서의 사이토카인의 생산 변화Production of cytokines in spleen cells according to mineral water according to the present invention

본 발명자들은 본 발명에 따른 광천수의 농축물의 류마티스 관절염 치료효과를 확인하기 위하여, 상시 실시예 1에서 제조한 농축물을 증류수에 10%, 20%, 30%로 용해시켜 상기 실시예 2에서 제조된 관절염 유도 마우스에 구강을 통해 식수로 섭취시켰다. 이후 실시예 3에서와 동일한 횟수 및 기간으로 마우스를 양육시킨 후, 희생시켜 9주째에 회수된 비장 세포를 이용하여 생체 외(in vitro)에서의 사이토카인 생산량을 측정하였다. In order to confirm the therapeutic effect of the concentrate of mineral water according to the present invention on the treatment of rheumatoid arthritis, the concentrate prepared in Example 1 was dissolved in distilled water at 10%, 20% and 30% Arthritis-induced mice were ingested via drinking water through the mouth. Then, the amount of cytokine production in vitro was measured using the spleen cells collected at the ninth week after raising the mice in the same frequency and period as in Example 3, and sacrificing them.

비장 세포의 현탁액(1×10⁶세포/구)을 Escherichia coli 0111:B4 유래의 리포폴리사카라이드(5㎍/ml; Sigma)와 함께 48시간 동안 정치하였다. 상층액을 회수하고, TNF-α, IL-6, IL-1β 및 IL-10 양은 상업적으로 이용 가능한 사이토메트릭 비드 어레이 키트(Mouse inflammation kit, BD Bioscience, San Diego, CA)를 이용하여 제조업자의 프로토콜에 따라 측정되었다. 염증성 사이토카인이 류마티스성 관절염에서 주요한 병원성 역할을 하는 알려져 있으므로 사이토메트릭 비드 어레이 방법에 의해 비장세포의 배양물 상층액에서 전염증성 사이토카인 TNF-α, IL-6, IL-1β 및 IL-10의 생산을 측정하였다. A suspension of splenocytes (1 x 10 ⁶ cells / well) was incubated with lipopolysaccharide from Escherichia coli 0111: B4 (5 μg / ml; Sigma) for 48 hours. The supernatants were harvested and the amounts of TNF-a, IL-6, IL-l [beta] and IL-10 were measured using a commercially available cytomegatric bead array kit (BD Bioscience, San Diego, Calif. Lt; / RTI > Since inflammatory cytokines are known to play a major pathogenic role in rheumatoid arthritis, cytotoxic cytotoxic TNF-a, IL-6, IL-1β and IL-10 in cultured supernatants of splenocytes by cytometric bead array method Production was measured.

생체 외에서 LPS에 의해 유도된 TNF-α, IL-6, IL-1β 및 IL-10의 생산은 아무것도 처리하지 않은 대조군 관절염 마우스 유래의 비장세포와 비교하였을 때 본 발명에 따른 광천수 농축물을 섭취한 마우스 유래의 비장세포에서 모두 유의적으로 감소되었다(도 1 내지 4 참조). 특히 상기 사이토카인 모두 본 발명에 따른 광천수 농축물의 용량 의존적으로 발현이 감소되었으며, 10% 농도에서도 대조군과 비교하여 확연한 발현 감소효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
The production of TNF-α, IL-6, IL-1β and IL-10 induced in vitro by LPS was significantly inhibited by ingesting the mineral water concentrate according to the present invention when compared to the splenocytes from control- All of which were significantly reduced in mouse-derived splenocytes (see Figs. 1 to 4). In particular, the expression of the above cytokines was dose-dependently reduced in the mineral water concentrate according to the present invention, and it was confirmed that even at the concentration of 10%, the expression was remarkably reduced as compared with the control.

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본 발명에 따른 광천수의 투여에 따른 파골세포 분화 Osteoclast differentiation according to administration of mineral water according to the present invention 어세이Assay

파골세포 형성에 대한 본 발명에 따른 광천수의 영향은 이미 공지된 방법을 약간 수정하여 마우스 골수 세포를 MCSF(macrophage colony-stimulating factor) 및 용해성 RANKL의 존재 하에서 분화하도록 유도하여 확인하였다(Sugatani et al. 2003, J. Cell. Biochem. 90, 59-67). The influence of the mineral water according to the present invention on osteoclast formation was confirmed by slightly modifying the known method to induce differentiation of mouse bone marrow cells in the presence of MCSF (macrophage colony-stimulating factor) and soluble RANKL (Sugatani et al. 2003, J. Cell. Biochem., 90, 59-67).

골수세포는 6주령의 DBA/1J 마우스의 대퇴골 및 경골로부터 준비하였고, 37℃에서 8구 챔버 슬라이드(3×10⁵세포/구; Nalge Nunc International, Naperville, IL)에 M-CSF(30ng/ml:R&D Systems, Minneapolis, MN)의 존재하에서 정치되었다. 3일 후에 림프구를 포함한 비접착성 세포를 제거하고, 접착성 파골세포 전구세포를 M-CSF(30ng/ml) 및 RANKL(100ng/ml; Strathmann, Hamburg, Germany)의 존재하에서 추가로 4일 동안 배양하여 파골세포를 생산하였다. 배지는 M-CSF 및 RANKL로의 정치 동안에 1차례 교환하였다. Bone marrow cells were prepared from the femur and tibia of 6-week-old DBA / 1J mice, and M-CSF (30 ng / ml) was added to 8 chamber slides (3 × 10 ⁵ cells / well; Nalge Nunc International, Naperville, IL) : R & D Systems, Minneapolis, MN). After 3 days, non-adherent cells including lymphocytes were removed and adherent osteoclast precursor cells were further cultured for 4 days in the presence of M-CSF (30 ng / ml) and RANKL (100 ng / ml; Strathmann, Hamburg, Germany) And cultured to produce osteoclasts. The medium was exchanged once during the incubation with M-CSF and RANKL.

이후 본 발명자들은 상기 세포에 상기 실시예 1에서 제조한 본 발명에 따른 광천수 농축물 1%, 5%, 10%, 15%를 2일에 한 번씩 배지에 첨가하고, 대조군에는 일반 식수를 처리하였다.Then, the present inventors added 1%, 5%, 10%, and 15% of the mineral water concentrate according to the present invention prepared in Example 1 to the culture medium to the medium every two days, and treated with normal drinking water .

세포를 고정하고 TRAP(tartrate-resistant acid phosphatase)에 대하여 염색 키트(sigma)를 이용하여 제조업자의 프로토콜에 따라 염색을 실시하였다(도 5 참조). 각 챔버에서 현미경으로 (40배율) 관찰한 결과 3개 이상의 핵을 포함하는 TRAP 양성 다핵세포는 파골세포로서 계수되었다(Sugatani. et al. 2003, J. Cell. biochem. 90, 59-67). Cells were fixed and stained with TRAP (tartrate-resistant acid phosphatase) using a staining kit (Sigma) according to the manufacturer's protocol (see FIG. 5). Microscopic examination of each chamber (40 magnification) showed that TRAP-positive polynuclear cells containing at least three nuclei were counted as osteoclasts (Sugatani et al., 2003, J. Cell. Biochem., 90, 59-67).

당업계에 파골세포가 관절염 관절의 뼈 파괴에서 상당한 역할을 하는 것으로 알려져 있으므로 골수 마크로파지의 파골세포로의 분화에 대한 본 발명에 따른 광천수의 영향을 확인하였다. 그 결과, 도 6에서와 같이 M-CSF 및 RANKL에 의해 유도된 TRAP 양성인 다핵 파골세포의 형성은 본 발명에 따른 광천수 농축물 1%, 5%, 10%, 15% 첨가군에서 모두 유의적으로 파골세포의 분화를 억제하는 효능이 있음을 확인하였다. 이러한 파골세포로의 분화 억제 결과는 도 5에서도 확인할 수 있었다.
Since osteoclasts are known to play a significant role in bone destruction of arthritic joints in the art, the influence of the mineral water according to the present invention on osteoclast differentiation into osteoclasts was confirmed. As a result, as shown in FIG. 6, formation of TRAP-positive polynuclear osteoclasts induced by M-CSF and RANKL was significantly increased in the 1%, 5%, 10%, and 15% addition groups of the mineral water concentrate according to the present invention It was confirmed that there is an effect of inhibiting osteoclast differentiation. The results of inhibition of osteoclast differentiation were also confirmed in Fig.

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본 발명에 따른 광천수의 투여에 따른 세포독성 분석Cytotoxicity analysis by administration of mineral water according to the present invention

본 발명에 따른 광천수에 의한 염증성 사이토카인의 발현 저해 효과와 파골 세포 분화 억제와 같은 효과가 세포 사멸이나 세포 독성에 의한 결과가 아님을 증명하고자 MTT 어세이를 진행하였다.MTT assays were conducted to demonstrate that the effects of inhibiting the expression of inflammatory cytokines and inhibiting osteoclast differentiation by mineral water according to the present invention are not caused by apoptosis or cytotoxicity.

MTT assay는 살아있는 세포에서의 미토콘드리아 탈수소효소에 의한 테트라졸리넘염(tetrazolium salt)의 감소에 기초한 것이다. 세포는 중파장자외선과 함께 다양한 농도(10%, 15%, 20%, 30%)의 금친 광천수를 처리하였다. 48시간 후에, 96 well에 cell 5 X 10³개를 넣고 10의 MTT 저장용액(2mg/ml)을 각각의 웰에 첨가하였다. 4시간 동안 배양한 후에, 상청액(supernatants)를 흡인하고, 플레이트를 5분 동안 800g에서 원심분리하였다. 각각의 웰에 있는 포마잔 크리스탈(formazan crystal)을 150의 DMSO로 용해시키고 스캐닝 멀티 웰(scanning multi-well) 분광광도계(spectrophotometer)로 540nm에서의 흡광도를 측정하였다.The MTT assay is based on the reduction of tetrazolium salt by mitochondrial dehydrogenase in living cells. Cells were treated with various concentrations (10%, 15%, 20%, 30%) of inhaled mineral waters along with medium wave ultraviolet light. After 48 hours, ³ × 5 × 10 5 cells were added to 96 wells and 10 MTT storage solutions (2 mg / ml) were added to each well. After incubation for 4 h, the supernatants were aspirated and the plates were centrifuged at 800 g for 5 min. The formazan crystal in each well was dissolved in 150 DMSO and the absorbance at 540 nm was measured with a scanning multi-well spectrophotometer.

그 결과, 도 9에 나와 있는 것과 같이, 본 발명에 따른 광천수를 처리한 모든 군에서 크게 감소된 흡광도를 보여, 지금까지 실험을 통해 확인하였던 염증성 사이토카인의 발현 저해와 파골세포 분화 억제는 본 발명에 따른 광천수에 의한 세포 사멸 또는 세포 독성에 의한 결과가 아니라는 사실을 증명할 수 있었다.
As a result, as shown in Fig. 9, the absorbance significantly decreased in all the groups treated with the mineral water according to the present invention. Inhibition of the expression of inflammatory cytokines and inhibition of osteoclast differentiation, which have been confirmed through experiments, And the results are not due to cell death or cytotoxicity caused by mineral waters.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시 예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다. The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

Claims

Composition for the treatment of rheumatoid arthritis containing marine mineral waters taken from 1100m underground of a hot spring area in coastal area of Gangneung-ri, Gangneung-si, Gangneung-gun, Republic of Korea.

The method according to claim 1,
Wherein the mineral water is a concentrate.

The method according to claim 1,
The mineral water contains 200 to 230 mg / L of potassium, 7000 to 9500 mg / L of sodium, 1400 to 1700 mg / L of calcium, 900 to 1100 mg / L of magnesium, 3 to 9 mg / L of manganese, 1 to 3 mu g / L of cobalt, 600 to 950 mu g / L of cobalt, 200 to 500 mu g / L of selenium, 65 to 75 mu g / L, copper 3 to 9 占 퐂 / liter, lithium 0.02 to 0.09 mg / liter, chlorine ion 16000 to 19500 mg / liter, fluorine ion 1.5 to 3.0 mg / liter, bromine ion 40 to 56 mg / L, boron of 0.8 to 1.2 mg / L, and silicon dioxide of 0.5 to 15 mg / L.

3. The method of claim 2,
Wherein the concentrate comprises 0.5 to 50% by weight based on the total weight of the composition.

3. The method of claim 2,
Wherein the concentrate is obtained by evaporating, concentrating and drying the mineral water.

Functional food for the prevention or treatment of rheumatoid arthritis containing marine mineral water taken from 1100m underground of hot spring area in 92-1, Kyeongjin 3 ridge, Gyeonggi-do, Gangneung-si, Gangneung-gun, Korea.