KR20130059128A - MATERIAL AS AGONIST FOR PPARα, PPARγ AND PPARδ USING DENDROPANAX MORBIFERA LEV. LEAF AND THE EXTRACTING METHOD THEREOF - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: PPAR alpha, gamma, and delta active materials using Dendropanax morbifera Lev. leaves are provided to prevent or treat diseases such as obesity, diabetes, hyperlipidemia, hypertension, atherosclerosis, cardiovascular diseases, metabolic diseases, cancer, and inflammation, and to be used as a main ingredient of a pharmaceutical product, a functional food, and a health food. CONSTITUTION: A method for isolating PPAR alpha, gamma, and delta active materials using Dendropanax morbifera Lev. leaves comprises: a step of extracting Dendropanax morbifera Lev. leaves with hydrous alcohol and preparing concentrate(S101); and a step for fractioning the concentrate with a non-polar solvent(S103). The PPAR alpha, gamma, and delta active materials contain a Dendropanax morbifera Lev. leaf extract and a fraction thereof. The PPAR alpha, gamma, and delta active materials further contains a pharmaceutically acceptable inactive carrier. The inactive carrier is selected from a group consisting of starch and lactose. [Reference numerals] (AA) Start; (BB) End; (S101) Concentration step of extracting Dendropanax morbifera Lev. leaves with hydrous alcohol and preparing concentrate; (S103) Fraction preparing step for fractioning the concentrate obtained from the concentration step with a non-polar solvent

Description

황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법 {MATERIAL AS AGONIST FOR PPARα, PPARγ AND PPARδ USING Dendropanax morbifera Lev. LEAF AND THE EXTRACTING METHOD THEREOF}PARA R, γ, and δ active substances using the leaves of Hilchi chinensis and methods for extracting the same. LEAF AND THE EXTRACTING METHOD THEREOF}

본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.) 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 글루코스의 항상성을 조절하는 PPAR α, γ 및 δ의 활성을 증대시키는 작용이 우수하여 인슐린 저항증 및 당뇨병과 관련된 고혈당증 치료 및 예방을 위한 의약품, 기능성 식품 및 식품첨가물로 유용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법에 관한 것이다.
The present invention relates to PPAR α, γ, and δ active substances using the leaves of Dendropanax morbifera Lev., And a method of extracting the same, and more particularly, to enhance the activity of PPAR α, γ, and δ that regulates homeostasis of glucose. The present invention relates to PPAR α, γ, and δ active substances useful in medicines, functional foods, and food additives for treating and preventing hyperglycemia associated with insulin resistance and diabetes, and extracting methods thereof.

본 발명은 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 글루코스의 항상성을 조절하는 PPAR α, γ 및 δ의 활성을 증대시키는 작용이 우수하여 인슐린 저항증 및 당뇨병과 관련된 고혈당증 치료 및 예방을 위한 의약품, 기능성 식품 및 식품첨가물로 유용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법에 관한 것이다.The present invention relates to a PPAR α, γ and δ active substance using the hwangchil tree leaves and more particularly, the method of extracting the insulin, and more particularly the action of increasing the activity of PPAR α, γ and δ to regulate the homeostasis of glucose The present invention relates to PPAR α, γ and δ active substances useful as medicines, functional foods and food additives for the treatment and prevention of hyperglycemia associated with resistance and diabetes, and methods of extracting the same.

PPAR(peroxisome proliferator activated receptor)은 주로 지방대사에 관여하는 유전자 또는 지방세포(adipocyte)의 분화에 관여하는 유전자의 발현을 조절하는데(J. Invest. Dermatol. 111, 1116-1121, 1998; J. Med. Chem., 43, 527-550, 2000), 퍼옥시좀(peroxisome)의 수를 증가시킬 수 있는 화합물인 퍼옥시좀 증식제(peroxisome proliferator)를 리간드로 하는 핵내 수용체를 말하며, PPARα, PPARδ, PPARγ의 동형체(isoform)가 알려져 있다(J. Steroid Biochem. Molec. Biol., 51, 157, 1994; Gene Expression, 4, 281, 1995; Biochem. Biophys. Res. Commun., 224, 431, 1996).Peroxisome proliferator activated receptors (PPARs) regulate the expression of genes primarily involved in fat metabolism or genes involved in the differentiation of adipocytes (J. Invest. Dermatol. 111, 1116-1121, 1998; J. Med Chem., 43, 527-550, 2000), which refers to an intranuclear receptor whose ligand is a peroxisome proliferator, which is a compound capable of increasing the number of peroxisomes, PPARα, PPARδ, Isoforms of PPARγ are known (J. Steroid Biochem. Molec. Biol., 51, 157, 1994; Gene Expression, 4, 281, 1995; Biochem. Biophys. Res. Commun., 224, 431, 1996 ).

PPAR의 동형체 중 PPARα는 간, 망막(retina) 및 지방조직(adipose tissue)에서 주로 발현되며 지방산의 산화나 독성물질의 중화에 관여하며 염증반응에 관여한다. PPARγ는 지방세포, 면역세포, 부신(adrenal gland), 비장(spleen), 및 소장에서 주로 발현되며, 지방산에 의해 활성화되는 전사인자로 지방세포 분화와 기능에서 중요한 조절인자이다.. PPARγ가 활성화되면, 지방세포의 당 수용능력이 극대화 되며 지방세포 분화가 촉진되고 인슐린 저항성이 감소된다(Tren. Pharmacol. Sci., 25: 331-336, 2004). 또한, PPARγ는 글루코스의 항상성을 조절하는 역할을 하므로, PPARγ 활성화제는 인슐린 저항증(insulin resistance) 및 2형 당뇨병과 관련된 고혈당증(hyperglycemia)을 치료하는 강력한 약물로 개발되어 왔으며 현재 피오글리타존(pioglitazone) 및 로지글리타존(rosiglitazone)과 같은 티아졸리딘디온 약제가 대표적인 PPARγ의 리간드로써 당뇨병 치료제로 사용되고 있다. 즉, PPARγ의 활성화는 근육에서 글루코스의 이용성을 증가시키고 간에서 글루코스의 합성을 저해하며, 대식세포로부터 콜레스테롤 유출을 증가시켜서 결국 인슐린 감작(insulin sensitization), 글루코스 저하, 트리글리세라이드 저하효과를 나타내어 2형 당뇨병을 치료한다.Among the isoforms of PPAR, PPARα is mainly expressed in liver, retina, and adipose tissue, and is involved in fatty acid oxidation or neutralization of toxic substances and in inflammatory reactions. PPARγ is mainly expressed in adipocytes, immune cells, adrenal gland, spleen, and small intestine, and is a transcription factor activated by fatty acids. It is an important regulator of adipocyte differentiation and function. In addition, the glucose tolerance of adipocytes is maximized, adipocyte differentiation is promoted and insulin resistance is reduced (Tren. Pharmacol. Sci., 25: 331-336, 2004). In addition, since PPARγ plays a role in regulating glucose homeostasis, PPARγ activators have been developed as potent drugs for treating insulin resistance and hyperglycemia associated with type 2 diabetes, and are currently pioglitazone and Thiazolidinediones such as rosiglitazone have been used as therapeutic agents for diabetes as a representative ligand of PPARγ. In other words, the activation of PPARγ increases the availability of glucose in the muscle, inhibits the synthesis of glucose in the liver, and increases cholesterol outflow from macrophages, resulting in insulin sensitization, glucose lowering, and triglyceride lowering effects. Treat Diabetes

PPARγ의 활성화제가 인슐린 저항증(insulin resistance) 및 2형 당뇨병과 관련된 고혈당증(hyperglycemia)을 치료하는데 유효한 약효를 나타냄에 대해서는 이미 여러 문헌을 통해 밝혀진 바가 있다 [1) Diabetes 45: 1661-1669, 1996 ; 2) J. Clin. Invest. 106: 467-472, 2000 ; 3) Diabetes 51: 797-802, 2002 ; 4) Diabetologia 48: 83-95, 2005].It has already been found in the literature that PPARγ activators have been shown to be effective in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia associated with type 2 diabetes [1) Diabetes 45: 1661-1669, 1996; 2) J. Clin. Invest. 106: 467-472, 2000; 3) Diabetes 51: 797-802, 2002; 4) Diabetologia 48: 83-95, 2005].

한편, PPARδ는 조직특이적으로 발현하지 않고, 광범위하게 발현되며 그 기능은 확실치 않다고 보고가 있었으나(Endocrinology., 137, 354, 1996), 나중에는 PPARδ 활성이 db/db 생쥐에서 HDL 콜레스테롤의 농도 증가를 이끈다는 사실이 제시되었는데, 특히 PPARδ 활성화제를 현저한 투여 의존성을 유발하는 인슐린 저항 중년 비만 레서스원숭이에게 투여했을 때 저밀도 LDL의 농도를 저하시키고, 트리글리세라이드를 고정하고 또한 인슐린을 고정시킴과 동시에 혈청 HDL 콜레스테롤을 상승시킨다(PNAS 98: 5306- 5311, 2001)고 하였다. 콜레스테롤 항상성에 대한 효과 이외에도, PPARδ 치료는 플라즈마 글루코스를 저하시키고 당뇨병 ob/ob 생쥐 내의 인슐린 감도 및 인슐린 저항 생쥐를 유발하는 고지방식을 개선하는 것으로 관찰됨으로써(PNAS 100: 15924-15929, 2003), 종합적으로 이들 관찰은 PPARδ 활성화가 2형 당뇨병, 및 아테롬성 동맥경화증, 고중성 지방혈증 및 혼합형 이상지혈증을 포함하는 심혈관 질환 및 질병의 치료 및 예방에 유용하다는 것을 시사한다(WO 01/00603).On the other hand, PPARδ is not tissue-specifically expressed, but is widely expressed and its function is unclear (Endocrinology., 137, 354, 1996), but later PPARδ activity increased the concentration of HDL cholesterol in db / db mice. It has been suggested that PPARδ activators, particularly when administered to insulin-resistant middle-aged obese rhesus monkeys that cause significant dose dependence, lower the concentration of low-density LDL, fix triglycerides, and fix insulin at the same time. Raise serum HDL cholesterol (PNAS 98: 5306-5311, 2001). In addition to effects on cholesterol homeostasis, PPARδ treatment has been observed to lower plasma glucose and improve insulin sensitivity in diabetic ob / ob mice and high fat diets that lead to insulin resistance mice (PNAS 100: 15924-15929, 2003). These observations suggest that PPARδ activation is useful for the treatment and prevention of cardiovascular diseases and diseases including type 2 diabetes and atherosclerosis, hypertriglyceridemia and mixed dyslipidemia (WO 01/00603).

단독 접근으로서 글루코스 저하는 2형 당뇨병 및 대사증후군과 관련된 대혈관 합병증을 극복하는데 제한적이라고 사료되며, 따라서 2형 당뇨병 및 대사증후군의 치료는 이들 증후군과 관련된 명백한 고중성지방혈증을 저하할 뿐만 아니라 과혈당증을 완화하는 것을 목적으로 해야한다. 이것은 다양한 PPARδ 활성화도를 나타내는 화합물에 대한 연구가 2형 당뇨병, 이상지질혈증, 및 대사증후군(내당장애, 인슐린 저항, 고중성지방혈증 및/또는 비만을 포함), 심혈관 질환(아테롬성 동맥경화증 포함) 및 과콜레스테롤혈증 등의 질병의 치료에 가능성이 큰 트리글리세라이드 및/또는 콜레스테롤 및/또는 글루코스 저하제의 발견을 이끌 필요가 있다는 것을 나타낸다.As a sole approach, glucose lowering is thought to be limited in overcoming the macrovascular complications associated with type 2 diabetes and metabolic syndrome, so treatment of type 2 diabetes and metabolic syndrome not only lowers the apparent hypertriglyceridemia associated with these syndromes, but also hyperglycemia. Should be aimed at mitigating. This suggests that studies on compounds exhibiting varying levels of PPARδ activity include type 2 diabetes, dyslipidemia, and metabolic syndrome (including glucose tolerance, insulin resistance, hypertriglyceridemia and / or obesity), cardiovascular diseases (including atherosclerosis) And the discovery of triglycerides and / or cholesterol and / or glucose lowering agents that are likely to be used in the treatment of diseases such as hypercholesterolemia.

우리 나라의 당뇨병 유병율은 1970년에 약 1% 미만으로 추정되던 것이 2000년대로 들어서면서 5%에 이르고 있으며 2010년 국민건강보험공단 진료비 자료에 의하면 당뇨병 환자수는 201만 5,180명으로 2006년 163만명의 환자수에서 23.9%가 증가한 것으로 경제발전과 함께 서구화되는 식생활과 고령화 문제로 인한 사회적 문제로 대두되고 있다. The prevalence of diabetes in Korea was estimated to be less than 1% in 1970, reaching 5% in the 2000s. According to the 2010 National Health Insurance Corporation's medical expenses data, the number of diabetes patients was 20,15,180, or 1.63 million in 2006. The number of patients increased by 23.9%, which is emerging as a social problem due to the westernization of dietary and aging problems.

당뇨병은 인슐린이 부족하거나 작용이 안 되어 혈당이 높이 올라가는 질환이며 적극적으로 치료하지 않으면 만성 혈관성 합병증으로 진행하는 병이다. 당뇨병 환자 중에서 특히 과식이나 운동부족과 같은 생활습관과 관련된 2형 당뇨병의 경우 인슐린 분비 장애와 인슐린 저항이 관여되고, 1형의 경우에는 자가면역인자와 췌장 베타세포의 파괴가 관여하는 것으로 밝혀졌다.Diabetes is a disease in which blood sugar rises due to lack of insulin or inoperability, and progresses to chronic vascular complications if not actively treated. Among the diabetic patients, type 2 diabetes related to lifestyle, such as overeating or lack of exercise, is associated with insulin secretion disorder and insulin resistance, and type 1 is associated with autoimmune factor and pancreatic beta cell destruction.

제2형 당뇨병은 인슐린 저항성이 선행하는 형으로 주요 병인으로는 비만, 인슐린 수용체의 감소, tyrosine kinase 활성도 감소, 근육조직과 지방조직의 muscle/adipose tissue type transportor의 감소, insulin receptor substrate-1(IRS-1)의 세포 내 결핍 등 복잡한 원인에 의해 발병하는 것으로 보고되고 있다. 제 2형 당뇨병은 주로 성인에서 발병하는데 전체 당뇨병 중 90%를 차지하고 있다(Drugs, 65: 433-445, 2005).Type 2 diabetes is the leading type of insulin resistance. The main etiologies are obesity, decreased insulin receptors, reduced tyrosine kinase activity, decreased muscle / adipose tissue type transporters in muscle and adipose tissue, and insulin receptor substrate-1 (IRS). -1) has been reported to be caused by complex causes such as intracellular deficiency. Type 2 diabetes occurs mainly in adults and accounts for 90% of all diabetes (Drugs, 65: 433-445, 2005).

한편, 트리글리세라이드와 유리지방산이 많이 함유된 식이는 비만과 2형 당뇨, 심장질환, 고혈압 등의 대사 질환의 원인이 되고 있는 것으로 알려져 있다. 하지만 지방산이 갖는 양면성의 반대편에는 없어서는 안 될 중요한 역할을 하고 있다. 즉, 지방산은 트리글리세라이드로서 지방세포에 저장되는데, 이때 선천적으로 지방세포가 없는 지방이영양증(lipodystrophies) 환자들은 심각한 대사 질환인 인슐린 저항증(insulin resistance), 고혈당(hyperglycemia), 고지혈증(hyperlipidemia) 등을 앓고 있다. 그러므로 지방세포와 지방산은 건강을 유지시키는데 있어서 필수적인 구성성분이라 할 수 있다. 지방세포의 연구는 많은 성과를 이루었으며, 그 중에서도 PPARα, PPARγ 및 PPARδ로서 알려진 핵 호르몬 수용체의 발견은 괄목할 만한 결과이다. On the other hand, a diet rich in triglycerides and free fatty acids is known to be a cause of metabolic diseases such as obesity, type 2 diabetes, heart disease, hypertension. But on the other side of the two-sided fatty acids play an important role. That is, fatty acids are stored in adipocytes as triglycerides.In this case, patients with lipodystrophies who have inherently no adipocytes have severe metabolic diseases such as insulin resistance, hyperglycemia, and hyperlipidemia. I'm sick. Therefore, fat cells and fatty acids are essential components in maintaining health. The study of adipocytes has made many achievements, among which the discovery of nuclear hormone receptors known as PPARα, PPARγ and PPARδ is a remarkable result.

이와 같은 발견에 기초하여 최근에는 천연물 생약으로부터 PPAR류를 활성화하는 연구가 이루어지고 있으며 찔레버섯이나 육두구와 같은 식물에서 PPARγ의 활성을 증대시키는 물질을 보고한 예가 있다(국내 특허등록 10-0760999호, 10-0959557호). 그러나 PPARγ만을 활성화하는 티아졸리딘디온 약제들의 부작용 문제가 제기되면서 로지글리타존과 같은 약물은 시장에서 퇴출되는 등 PPARγ만을 활성화하는 약물에 대한 의문점도 제기되고 있는 실정으로, PPARδ 활성화를 타겟으로하는 연구가 하나의 흐름으로 자리잡고 있으며, 천연물 생약의 경우 다양한 활성물질의 존재를 고려할 때 세종류의 PPAR을 복합적으로 활성화하며 부작용이 없는 약제의 개발은 주목할 만한 개발 방향이 될 것이다.Based on these findings, studies on activating PPARs from natural herbal medicines have recently been made, and there are examples of substances that increase the activity of PPARγ in plants such as brier mushrooms and nutmegs (domestic patent registration 10-0760999, 10-0959557). However, as the side effects of thiazolidinedione drugs that activate only PPARγ have been raised, questions such as rosiglitazone have been withdrawn from the market, raising questions about drugs that activate only PPARγ. In the case of natural herbal medicines, considering the presence of various active substances, the development of drugs without multiple side effects by activating three types of PPARs will be a remarkable development direction.

황칠나무는 두릅나무과에 속하는 우리나라의 전라남도 서남부 해안 지역과 제주도에서만 자생하는 상록활엽교목으로 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피에 상처를 주면 황색의 수지액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라고 한다.Hwangchil-tree is an evergreen broad-leaved arboreous tree that grows only in the southwestern coastal area of Jeollanam-do and Jeju Island, which belongs to the Armenaceae family.

황칠은 삼국시대부터 황제의 갑옷, 투구, 기타 금속 장신구의 황금색을 발하는 진귀한 도료로 이용되어 왔으며, 고려시대에 쓰여진 고려사절요, 중국의 계림유사, 계림지, 해동역사에 황칠의 채취시기, 사용용도 등이 기록되어 있고, 그 이전인 백제의 특산품이었다는 것이 당나라 역사서인 책부원구, 통전에 남아있다. Hwangchil has been used as a rare paint that emits the golden color of emperor's armor, helmets, and other metal ornaments since the Three Kingdoms.It is a Korean envoy, written in the Goryeo Dynasty, and Guilin History, Guilin, and Haedong History. It is written on the back, and it remains in the Tangbu History Book Book District, which is a special product of Baekje.

그러나, 황칠나무 진액 뿐만 아니라 황칠나무는 번열 제거, 술 해독, 안질 및 황달치료, 화상치료, 나병에 효과가 있으며 인체에 무해하다는 기록도 전해지고 있는 한편(이시진, 본초강목, 중국문광도서, 1590), 진정작용과 강장작용을 나타낸다고 알려져 왔다(고유농수산품목 세계화 대상품목의 연구조사(황칠편), 전라남도, 1996). 또한 잎 추출물 분획에서 항암작용과 α-토코페롤보다 다소 약한 항산화작용이 있음이 밝혀져 있다고 알려져 있으나(특허 공개 제 2000-0004499호, 박호근 등, 1998), 수천년 전부터 사용되어 왔다는 고문헌 기록 등 황칠나무에 대한 가치를 고려한다면 약리활성 결과는 매우 부족한 상태이다. However, not only Hwangchil tree extract but also Hwangchil tree are effective in eliminating heat, detoxifying alcohol, treating eye and jaundice, treating burns, and leprosy and are harmless to the human body (Lee, Jin-jin, Herb, Chinese Moonshine Book, 1590). It has been known to exhibit sedation and tonic action (research of unique global agricultural commodities (Hwang Chil-pyeon), Jeollanam-do, 1996). In addition, it is known that the leaf extract fraction has anti-cancer activity and slightly weaker antioxidant activity than α-tocopherol (Patent Publication No. 2000-0004499, Park Ho-geun et al., 1998), but it has been used for thousands of years. Considering the value, the results of pharmacological activity are very poor.

성분연구에 있어서도 덴드로파녹사이드 및 폴리아세틸렌류 화합물이 발견된 일이 있으나(Journal of Ethnopharmacology 90, 403-408 (2004) 박보영 등), 황칠나무의 학명에서 일컬어지듯이 만병통치약이라는 개념하에 민간에서 오래전부터 각종 질환에 사용되어 오고 있는 현실을 감안한다면 이에 대한 과학적 규명 역시 거의 전무하다고 할 수 있다. 다만 최근에 덴드로파녹사이드가 스트렙토조토신으로 유도한 제1형 당뇨병 모델의 동물실험에서 다소간의 효과가 있다는 보고가 있을 뿐으로(Human and Experimental Toxicology (2010)), 구체적인 성분-약리활성의 관계는 거의 이루어지고 있지 않다고 할 수 있다.Dendropanoxide and polyacetylene compounds have also been found in ingredient studies (Journal of Ethnopharmacology 90, 403-408 (2004) Park Bo-young, etc.). Considering the reality that has been used in various diseases, there is almost no scientific explanation. Recently, there have been some reports that dendropanoxide has some effect in animal experiments of streptozotocin-induced type 1 diabetes model (Human and Experimental Toxicology (2010)), and the relationship between specific component-pharmacological activity It can be said that it is not done.

이와 같은 배경에서 본 발명자들은 당뇨병의 주류를 이루고 있는 인슐린 저항증과 제 2형 당뇨에 의한 대사질환을 극복하고자 PPARα, PPARγ 및 PPARδ를 활성화하는 민간에서 당뇨병에 효험이 있다고 알려져 있는 천연물 생약을 수집하여 조사하던 중, 황칠나무 잎 추출물과 그것의 유기용매 분획물이 세종류의 PPAR활성을 증대시키는 사실을 확인하였고, 특히 PPARδ의 활성화에 있어서는 더욱 우수한 효과를 나타냈으며, 이와 같은 황칠나무 잎 추출물의 분획물이 보이는 PPAR류에 대한 복합적 활성은 지금까지 보고된 적이 없는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.Against this background, the present inventors collected natural herbal medicines that are known to be effective in diabetes in folks that activate PPARα, PPARγ, and PPARδ to overcome insulin resistance, which is the mainstream of diabetes, and metabolic diseases caused by type 2 diabetes. During the investigation, it was confirmed that the extract of Hwangchil-tree leaves and its organic solvent fractions increased three kinds of PPAR activity. In particular, the activity of PPARδ showed more excellent effects. The complex activity of the visible PPARs has been accomplished by confirming that no activity has been reported so far.

이와 같이 세가지 PPAR 동형체들이 생체내 혈당강하와 관련하여 지방대사에 중요한 역할을 하기 때문에, 본 발명에서는 황칠나무 유래의 생약 추출물의 혈당강하작용을 검색하기 위해서 이들 PPAR 동형체를 대상으로 활성화 정도를 살펴보며 종합적인 대사 질환의 치료제를 개발하려는 것으로, 상세하게는 글루코스의 항상성을 조절하는 PPARγ 및 PPARδ의 활성을 증대시키는 작용이 우수하여 인슐린 저항증 및 당뇨병과 관련된 고혈당증 치료 및 예방을 위한 의약품, 기능성 식품, 또는 식품첨가물로서 유용한 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법을 제공한다.
As these three PPAR isoforms play an important role in fat metabolism with respect to blood glucose lowering in vivo, in the present invention, the degree of activation of these PPAR isoforms is examined in order to detect the hypoglycemic action of the herbal extracts derived from Hwangchil-tree. Looking to develop a comprehensive treatment for metabolic disorders, in particular, it is excellent in increasing the activity of PPARγ and PPARδ that regulates glucose homeostasis, and thus, drugs and functionalities for treating and preventing hyperglycemia associated with insulin resistance and diabetes. Provided are PPAR α, γ, and δ active substances using yellow lacquer leaves useful as foods or food additives, and methods for extracting the same.

본 발명의 목적은 인슐린 저항증 및 당뇨병과 관련된 혈당강하작용 효과를 나타내는 고혈당증 치료 및 예방용 의약품, 기능성 식품 및 건강식품의 주원료로 사용되는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법을 제공하는 것이다.
An object of the present invention is a PPAR α, γ, and δ active substance using the leaves of Hilchi chinensis which is used as a main raw material for the treatment and prevention of hyperglycemia, functional foods and health foods that exhibit hypoglycemic effects associated with insulin resistance and diabetes. It is to provide an extraction method.

본 발명의 목적은 황칠나무 잎을 함수알코올로 추출하여 농축액을 제조하는 농축단계 및 상기 농축단계에서 얻어진 농축액을 비극성 용매로 분획하는 분획물 제조단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법을 제공함에 의해 달성된다.An object of the present invention is a PPAR α using a yellow lacquer leaves, characterized in that the extract comprises the step of extracting the sulfuric acid leaves with a hydrous alcohol to prepare a concentrate and the fraction obtained in the concentration step fractions with a non-polar solvent, by providing a method for extracting γ and δ actives.

본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 농축단계는 황칠나무 잎을 함수알코올에 투입하고 90 내지 100℃의 온도에서 5 내지 24시간 동안 열탕환류하여 황칠나무 잎 추출물을 제조하고, 상기 황칠나무 추출물을 20 내지 50℃로 냉각한 후에 여과하여 얻어진 여과액의 상층액을 분리한 후에, 분리된 상층액을 증발농축시켜 이루어지는 것으로 한다.According to a preferred feature of the present invention, the step of concentrating is prepared by adding Hwangchil-tree leaves to hydrous alcohol and refluxing for 5 to 24 hours at a temperature of 90 to 100 ° C to produce Hwangchil-tree leaves extract, After cooling to 50 DEG C, the supernatant of the filtrate obtained by filtration is separated, and then the separated supernatant is concentrated by evaporation.

본 발명의 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 농축단계는 황칠나무 잎을 함수알코올에 투입하고 4 내지 20℃의 온도에서 5 내지 7일 동안 냉침시켜 황칠나무 잎 추출물을 제조하고, 상기 황칠나무 잎 추출물을 여과하여 상층액을 분리한 후에, 분리된 상층액을 증발농축시켜 이루어지는 것으로 한다.According to a more preferred feature of the present invention, the concentration step is to add the yellow lacquer leaves to the water-containing alcohol and cold soaked for 5 to 7 days at a temperature of 4 to 20 ℃ to prepare the yellow lacquer leaves extract, After separating the supernatant by filtration, the separated supernatant shall be evaporated and concentrated.

본 발명의 더욱 바람직한 특징에 따르면, 상기 분획단계는 상기 농축단계에서 얻어진 농축액을 분액여두에 넣고 탄소수가 탄소수가 4 내지 6인 비극성용매로 분획하여 이루어지는 것으로 한다.According to a more preferred feature of the invention, the fractionation step is to be made by dividing the concentrate obtained in the concentration step into a separatory filter with a non-polar solvent having 4 to 6 carbon atoms.

본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 비극성 용매는 노르말 헥산인 것으로 한다.
According to a further preferred feature of the invention, the nonpolar solvent is said to be normal hexane.

또한, 본 발명의 목적은 황칠나무 잎 추출물 및 황칠나무 잎 추출물의 분획물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질을 제공함에 의해서도 달성될 수 있다.In addition, the object of the present invention can also be achieved by providing PPAR α, γ and δ active material using the hwangchil leaves, characterized in that consisting of the hwangchil tree leaves extract and the hwangchil tree leaves extract.

본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질에는 약제학적으로 허용되는 불활성 담체가 더 포함되는 것으로 한다.According to a preferred feature of the present invention, the PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer leaves will further include a pharmaceutically acceptable inert carrier.

본 발명의 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 불활성 담체는 전분 및 락토스로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것으로 한다.According to a further preferred feature of the invention, the inert carrier is to be made of one or more selected from the group consisting of starch and lactose.

본 발명의 더욱 바람직한 특징에 따르면, 상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질에는 회석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제 및 붕산제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 첨가제가 더 포함되는 것으로 한다.
According to a more preferable feature of the present invention, the PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer leaves are at least one additive selected from the group consisting of a diluent, a flavoring agent, a solubilizer, a lubricant, a suspending agent, a binder and a boric acid agent. It shall be included more.

본 발명에 따른 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 및 그 추출방법은 비만, 당뇨, 고지혈증, 고혈압, 동맥경화증, 심혈관계 질환, 대사성 질환, 암 및 염증 등의 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 나타내는 의약품, 기능성 식품 및 건강식품의 주원료로 사용될 수 있는 PPAR α, γ 및 δ 활성물질을 제공하는 탁월한 효과를 나타낸다.
PPAR α, γ and δ active substance and extracting method using the Hwangchil leaves according to the present invention prevent or treat diseases such as obesity, diabetes, hyperlipidemia, hypertension, arteriosclerosis, cardiovascular diseases, metabolic diseases, cancer and inflammation It exhibits an excellent effect of providing PPAR α, γ and δ active substances which can be used as main ingredients of medicines, functional foods and health foods.

도 1은 본 발명에 따른 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법을 나타낸 순서도이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 황칠나무 잎 추출물 및 그 분획물의 PPAR α 활성화 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 황칠나무 잎 추출물 및 그 분획물의 PPAR-γ 활성화 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 황칠나무 잎 추출물 및 그 분획물의 PPAR-δ 활성화 효과를 나타낸 그래프이다.
1 is a flow chart illustrating a method of extracting PPAR α, γ and δ active material using the Hwangchil tree leaves according to the present invention.
Figure 2 is a graph showing the PPAR α activation effect of the Hwangchil-tree leaves extract prepared through Examples 1 to 6 of the present invention and its fractions.
Figure 3 is a graph showing the PPAR-γ activation effect of the Hwangchil-tree leaves extract prepared through Examples 1 to 6 of the present invention and fractions thereof.
Figure 4 is a graph showing the PPAR-δ activation effect of the Hwangchil-tree leaves extract prepared through Examples 1 to 6 of the present invention and fractions thereof.

이하에는, 본 발명의 바람직한 실시예와 각 성분의 물성을 상세하게 설명하되, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 발명을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명하기 위한 것이지, 이로 인해 본 발명의 기술적인 사상 및 범주가 한정되는 것을 의미하지는 않는다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention and physical properties of the respective components will be described in detail with reference to the accompanying drawings. However, the present invention is not limited thereto, And this does not mean that the technical idea and scope of the present invention are limited.

본 발명에 따른 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법은 황칠나무 잎을 함수알코올로 추출하여 농축액을 제조하는 농축단계(S101) 및 상기 농축단계(S101)에서 얻어진 농축액을 비극성 용매로 분획하는 분획물제조단계(S103)로 이루어진다.
Extraction method of PPAR α, γ and δ active material using the Hwangchil tree leaves according to the present invention is to extract the Hwangchil tree leaves with water-containing alcohol to prepare a concentrated solution (S101) and the concentrate obtained in the concentrated step (S101) Fraction preparation step of fractionating with a non-polar solvent (S103).

상기 농축단계(S101)는 황칠나무 잎을 함수알코올로 추출하여 농축액을 제조하는 단계로, 황칠나무 잎을 함수알코올에 투입하고 90 내지 100℃의 온도에서 5 내지 24시간 동안 열탕환류하여 황칠나무 잎 추출물을 제조하고, 상기 황칠나무 추출물을 20 내지 50℃로 냉각한 후에 여과하여 얻어진 여과액의 상층액을 분리한 후에, 분리된 상층액을 증발농축시켜 이루어지거나, 황칠나무 잎을 함수알코올에 투입하고 4 내지 20℃의 온도에서 5 내지 7일 동안 냉침시켜 황칠나무 잎 추출물을 제조하고, 상기 황칠나무 잎추출물을 여과하여 상층액을 분리한 후에, 분리된 상층액을 증발농축시켜 이루어지는데, 농축액에 함유된 유효성분의 수율을 높이기 위해서 상기의 농축단계(S101)를 3회 반복하여 각각의 농축단계에서 얻어진 상층액을 합하여 최종적인 농축액으로 모으는 방법을 사용하는 것이 바람직하다.The step of concentrating (S101) is a step of preparing a concentrate by extracting the yellow lacquer tree leaves with water-containing alcohol, by adding hot yellow leaf to water-containing alcohol and refluxing for 5 to 24 hours at a temperature of 90 to 100 ° C. After preparing the extract, and cooling the Hwangchil-tree extract to 20 to 50 ℃ and separating the supernatant of the filtrate obtained by filtration, the separated supernatant is made by evaporation or concentrated, or the Hilchi chile leaves into hydrated alcohol After chilling for 5 to 7 days at a temperature of 4 to 20 ℃ to prepare the Hwangchil-tree leaf extract, and after filtering the Hwangchil-tree leaf extract to separate the supernatant, the separated supernatant is concentrated by evaporation, concentrate In order to increase the yield of the active ingredient contained in the concentrated step (S101) three times by repeating the supernatant obtained in each concentration step to the final concentrated solution It is preferable to use a method to collect.

상기와 같은 두 가지 농축단계(S101)에서는 추출용매로 함수알코올이 사용되는데, 상기 함수알코올 이외에도 물을 이용하여 추출할 수 있으며, 상기 함수알코올에 사용되는 알코올은 농도가 10 내지 100%인 메탄올 또는 에탄올이 사용될 수 있다.In the two concentration steps (S101) as described above, a hydrous alcohol is used as an extraction solvent, which can be extracted using water in addition to the hydrous alcohol, and the alcohol used in the hydrous alcohol has a concentration of 10 to 100% methanol or Ethanol can be used.

상기 농축단계를 통해 얻어진 농축액은 유동성이 있는 액체 상태로 얻어질 수 있으나 동결건조법 등을 이용하여 건조된 분말상태로 얻을 수도 있다.
The concentrate obtained through the concentration step may be obtained in a liquid state with fluidity, but may also be obtained in a dry powder state using a lyophilization method.

상기 분획물제조단계(S103)는 상기 농축단계(S101)에서 얻어진 농축액을 유기용매로 분획하는 단계로, 상기 농축단계(S101)에서 얻어진 농축액을 분액여두에 넣고 용매로 분획하여 이루어지는데, 극성 정도에 따른 분획을 얻기 위해 상기 액상 또는 건조된 분말상태의 농축액을 유기용매로 추출 및 여과하는 조작을 3회 반복하여 실시하고, 3회 반복하여 각각의 추출 및 여과단계에서 얻어진 여과액을 합하여 최종적인 분획물로 모으는 방법을 사용하는 것이 바람직하다.The fraction production step (S103) is a step of fractionating the concentrate obtained in the concentration step (S101) with an organic solvent, the concentrate obtained in the concentration step (S101) is formed by dividing with a solvent in a separatory filter, the degree of polarity In order to obtain a fraction according to the above, the liquid or dried powder concentrate was extracted and filtered with an organic solvent three times, and repeated three times to add the filtrates obtained in each extraction and filtration step to obtain a final fraction. It is preferable to use a collecting method.

이때, 상기 유기용매는 상기 농축단계(S101)에서 얻어진 농축액을 분획할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 등이 사용될 수 있는데, 분획물이 PPAR α, γ 및 δ에 대한 우수한 활성을 갖도록 하기 위해서는 탄소수가 4 내지 10인 알칸류의 비극성 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 노르말 헥산을 사용하는 것이 더욱 바람직하다.
At this time, the organic solvent is not particularly limited as long as it can fractionate the concentrate obtained in the concentration step (S101), hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and water, etc. may be used, the fraction is PPAR α, γ and δ In order to have an excellent activity against, it is preferable to use a nonpolar solvent of alkanes having 4 to 10 carbon atoms, and more preferably to use normal hexane.

본 발명에 따른 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질은 황칠나무 잎 추출물 및 황칠나무 잎 추출물의 분획물로 이루어진다.PPAR α, γ and δ active material using the Hwangchil tree leaves according to the present invention is composed of a fraction of Hwangchil tree leaf extract and Hwangchil tree leaf extract.

이때, 상기 황칠나무 잎 추출물 및 상기 황칠나무 잎 추출물의 분획물은 상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법을 이용하여 추출된 추출물 및 분획물이며, 성분 및 역할이 동일하므로, 이에 대한 설명은 생략하기로 한다.At this time, the fractions of the Hwangchil-tree leaf extract and the Hwangchil-tree leaf extract are extracts and fractions extracted using the method of extracting PPAR α, γ and δ active substances using the yellow-lacquer leaves, and the components and roles are the same. Description thereof will be omitted.

또한, 상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질에는 약제학적으로 허용되는 불활성 담체가 더 포함될 수도 있는데, 상기 불활성 담체는 상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질을 경구투여에 적합한 고체, 반고체 또는 액체 형태의 약제학적 제제로 제형화시키는 역할을 하며, 이러한 목적으로 적합하게 사용할 수 있는 약제학적으로 허용되는 불활성 담체는 고체나 액체일 수 있으며, 전분 및 락토스로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것이 바람직하다.In addition, the PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer tree leaf may further include a pharmaceutically acceptable inert carrier, wherein the inert carrier orally uses the PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer tree leaf. It serves to formulate pharmaceutical preparations in solid, semi-solid or liquid form suitable for administration, and pharmaceutically acceptable inert carriers which can be suitably used for this purpose can be solid or liquid, from the group consisting of starch and lactose It is preferred to consist of one or more selected.

또한, 상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질에는 회석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제 및 붕산제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 첨가제가 더 포함될 수도 있다.In addition, the PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer leaves may further include one or more additives selected from the group consisting of a diluent, a flavoring agent, a solubilizer, a lubricant, a suspending agent, a binder, and a boric acid agent.

이때, 상기 담체가 첨가되어 고체, 반고체 또는 액체 형태의 약제학적 제제로 제형화 된 PPAR α, γ 및 δ 활성물질은 정제, 캡슐제 및 시럽제로 제조될 수 있는데, 정제로 제조할 경우에는 상기 분획물제조단계를 통해 분획된 분획물을 체질하고, 락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전분과 혼합한 후에, 정제수를 첨가하여 분말로 과립화하고, 과립을 건조시킨 후에 스테아르산 마그네슘과 혼합하고 압착하여 얻어지는데, 정제의 바람직한 성분 및 함량은 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 5.0㎎, 락토오스 BP 150.0㎎, 전분 BP 30.0 ㎎, 전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0㎎ 및 스테아르산 마그네슘 1.0㎎이다.In this case, the PPAR α, γ, and δ active material formulated into pharmaceutical preparations in solid, semi-solid or liquid form with the carrier added may be prepared as tablets, capsules, and syrups. It is obtained by sieving the fractions fractionated through the preparation step, mixing with lactose, starch and pregelatinized corn starch, granulating into powder by adding purified water, drying the granules, mixing with magnesium stearate and pressing. Preferred ingredients and contents of the tablet are 5.0 mg of PPAR α, γ and δ actives, 150.0 mg of lactose BP, 30.0 mg of starch BP, 15.0 mg of pregelatinized corn starch BP and 1.0 mg of magnesium stearate.

또한, 캡슐제는 상기 분획물제조단계를 통해 분획된 분획물을 체질한 다음 부형제와 혼합한 후에 젤라틴 캡슐에 충전하여 제조되며, 캡슐제의 바람직한 성분 및 함량은 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 5.0㎎, 전분(1500) 100.0㎎ 및 스테아르산마그네슘 BP 1.0㎎이다.In addition, the capsule is prepared by sieving the fraction fractionated through the fraction production step and then mixed with excipients and filled into gelatin capsules, the preferred components and content of the capsule is PPAR α, γ and δ active material 5.0 mg, 100.0 mg of starch (1500) and 1.0 mg of magnesium stearate BP.

또한, 시럽제는 정제수 500㎖에 백당을 용해시키고, 별도의 용기에 카르복시메틸셀룰로오스나트륨을 정제수 400㎖에 용해시킨 후에, 상기 백당이 용해된 정제수와 메틸셀룰로오스나트륨이 용해된 정제수를 혼합하고, 메틸파라벤과 프로필파라벤을 첨가하여 용해시키고, 에탄올을 첨가한 후에 정제수를 전체 용액의 용량이 1000㎖가 되도록 첨가하고, 여기에 상기 분획물 제조단계를 통해 분획된 PPAR α, γ 및 δ 활성물질을 현탁시켜 제조되며, 시럽제의 바람직한 성분 및 함량은 PPAR α, γ 및 δ 활성물질 5.0g, 백당 637.5g, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨 2.0g, 메틸파라벤 0.28g, 프로필파라벤 0.12g, 에탄올 20㎖, 정제수 잔량이다.
In addition, the syrup is dissolved in sucrose in 500 ml of purified water, and dissolved in carboxymethyl cellulose sodium in 400 ml of purified water in a separate container, and then the purified water in which the white sugar is dissolved and purified water in which methyl cellulose sodium is dissolved are mixed. And propylparaben are added to dissolve, and after adding ethanol, purified water is added so that the total solution has a volume of 1000 ml, and the PPAR α, γ, and δ active substances fractionated through the fraction preparation step are suspended therein. Preferred components and contents of the syrup are 5.0 g of PPAR α, γ and δ active substances, 637.5 g per bag, 2.0 g of sodium carboxymethylcellulose, 0.28 g of methylparaben, 0.12 g of propylparaben, 20 ml of ethanol, and the remaining amount of purified water.

또한, 상기의 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질은 혈당강하작용 효과가 우수하여 당뇨병 치료 목적으로 사용될 경우에는 치료 대상자의 몸무게 1kg 대비 0.0001 내지 0.10g을 투여하는 것이 바람직한데, 이러한 투여량은 특별히 한정되지 않고, 환자의 필요 정도, 치료되어야할 상태의 정도 및 함께 사용되는 혼합물에 성분 및 함량에 따라 변동가능하다.
In addition, the PPAR α, γ and δ active material using the hwangchil tree leaves excellent blood sugar lowering effect when used for the purpose of treating diabetes, it is preferable to administer 0.0001 to 0.10g compared to 1kg of the weight of the subject, The dosage is not particularly limited and may vary depending on the needs of the patient, the extent of the condition to be treated and the components and contents in the mixture used together.

이하에서는, 본 발명에 따른 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법 및 추출된 활성물질의 PPAR α, γ 및 δ에 대한 활성효과를 실시예를 들어 설명하기로 한다.
Hereinafter, the method of extracting PPAR α, γ, and δ active substances using the Hwangchil tree leaves according to the present invention and the effect of PPAR α, γ, and δ of the extracted active substance will be described with reference to Examples.

<실시예 1>&Lt; Example 1 >

황칠나무 잎 100g을 적당한 크기로 세절하여 농도가 80%인 메탄올수용액(메탄올:물=4:1) 500ml에 넣고 실온에서 3일간 냉침한 후에 여러 겹의 거즈로 여과하여 여과액의 상등액을 취하는 과정을 3회 반복하고, 3회의 반복과정을 통해 각각 얻어진 상등액을 합하고, 합해진 상등액을 회전증발장치(rotary evaportor)로 감압하여 물과 메탄올을 완전히 증발시켜 황칠나무 잎 추출물을 분말상태로 추출하였다.
The process of taking 100 g of yellow chile leaves into 500 ml of methanol solution (methanol: water = 4: 1) at a suitable size, cooling them at room temperature for 3 days, and filtering them with multiple layers of gauze to obtain the filtrate supernatant. Repeated three times, the supernatants obtained through three iterations were combined, and the combined supernatants were depressurized with a rotary evaportor to completely evaporate water and methanol to extract the yellow lacquer leaf extract as a powder.

<실시예 2><Example 2>

상기 실시예 1을 통해 제조된 분말상태의 황칠나무 잎 추출물을 분액여두에 넣고 헥산(노르말헥산)으로 상온에서 24시간 동안 추출한 후에 여러 겹의 여과지로 여과하여 상등액을 취하는 과정을 3회 반복한 후에, 3회의 반복과정을 통해 각각 얻어진 상등액을 합하고, 합해진 상등액을 회전증발장치(rotary evaportor)로 감압하여 용매인 헥산을 완전히 제거하여 황칠나무 잎 추출물을 분획하였다.
After extracting the powdered Hwangchil-tree leaf extract prepared in Example 1 into a separatory filter at room temperature with hexane (normal hexane) for 24 hours, filtering the filter with multiple layers of filter paper and then taking the supernatant three times. , And the supernatants obtained through three iterations were combined, and the combined supernatants were decompressed with a rotary evaportor to completely remove the solvent hexane, thereby fractionating the yellow lacquer leaves.

<실시예 3><Example 3>

상기 실시예 2와 동일하게 진행하되, 헥산 대신 클로로포름을 사용하여 황칠나무 잎 추출물을 분획하였다.
Proceed in the same manner as in Example 2, using the chloroform instead of hexane to fractionate the Hwangchil wood leaf extract.

<실시예 4><Example 4>

상기 실시예 2와 동일하게 진행하되, 헥산 대신 에틸아세테이트를 사용하여 황칠나무 잎 추출물을 분획하였다.
Proceed in the same manner as in Example 2, using the ethyl acetate instead of hexane to fractionate the Hwangchil wood leaf extract.

<실시예 5><Example 5>

상기 실시예 2와 동일하게 진행하되, 헥산 대신 부탄올을 사용하여 황칠나무 잎 추출물을 분획하였다.
Proceed in the same manner as in Example 2, butanol instead of hexane was used to fractionate the hwangchil wood leaf extract.

<실시예 6><Example 6>

상기 실시예 2와 동일하게 진행하되, 헥산 대신 물을 사용하여 황칠나무 잎 추출물을 분획하였다.
Proceed in the same manner as in Example 2, using the water instead of hexane to fractionate the yellow lacquer leaves.

<실험예 1><Experimental Example 1>

상기 실시예 1 내지 6을 통해 얻어진 황칠나무 잎 추출물 및 분획물의 PPAR α, γ 및 δ에 대한 활성화 효과를 측정하여 아래 도 2 내지 4에 나타내었다.The activation effects of PPAR α, γ, and δ of the Hwangchil-tree leaf extract and fractions obtained through Examples 1 to 6 were measured and shown in FIGS. 2 to 4 below.

신장세포 CV-1 세포를 5% 이산화탄소, 37℃ 조건에서 10% 송아지 혈청 (FBS)을 포함한 DMEM 배양액으로 배양하였으며, 본 실험에 사용하기 위해 48 웰 플레이트에 웰 당 6×104 개의 세포를 접종하고 24시간 동안 배양하였다. 루시퍼라제(luciferase) 활성을 가진 리포터 DNA(tk-PPREx3-luc)와 PPAR-α(pCMX-mPPARa), PPAR-δ(pCMX-mPPARd), PPAR-γ(pCMX-mPPARg) 각각의 플라스미드 DNA를 Lipofectamine LTX 시약 및 PLUS 시약을 이용하여 37 ℃에서 7 시간 동안 형질전환하였다. 디메틸설폭사이드(DMSO, dimethyl sulfoxide)를 용매로 하여, 상기 실시예 1 내지 4를 통해 얻어진 황칠나무 잎 추출물 및 그 분획물의 농축시료를 1.0 내지 500 μg/ml 농도가 되도록 세포배양계에 400㎕씩 처리하여 40시간 동안 배양한 후에 배양액을 제거하고, 세포용해 완충액 50㎕를 가하여 20분 동안 진탕하면서 세포를 용해시켰다. 세포용해액 20㎕와 루시퍼레이즈 에세이시약 50㎕를 가하여 발광값을 발광계(luminometer)로 측정하였다.Renal cells CV-1 cells were incubated in DMEM medium containing 10% calf serum (FBS) at 5% carbon dioxide, 37 ° C. The cells were inoculated with 6 × 10 4 cells per well in 48 well plates for use in this experiment. Incubated for 24 hours. Lipofectamine plasmid DNA of luciferase activity reporter DNA (tk-PPREx3-luc), PPAR-α (pCMX-mPPARa), PPAR-δ (pCMX-mPPARd) and PPAR-γ (pCMX-mPPARg) Transformation was performed at 37 ° C. for 7 hours using LTX reagent and PLUS reagent. 400 μl each in a cell culture system using dimethyl sulfoxide (DMSO, dimethyl sulfoxide) as a solvent to concentrate 1.0 to 500 μg / ml concentration of the Hwangchil-tree leaf extract obtained through Examples 1 to 4 and the fraction thereof. After treatment and incubation for 40 hours, the culture solution was removed, and 50 µl of lysis buffer was added to lyse the cells while shaking for 20 minutes. 20 μl of cell lysate and 50 μl of luciferase assay reagent were added thereto, and the luminescence value was measured by a luminometer.

이때, 음성대조군으로는 0.1% 디메틸설폭사이드를 사용하였으며, 양성대조군으로 PPARα 효능제 인 GW7647를 10㎛, PPARδ 효능제 GW0742를 10㎛, PPARγ 효능제 피오글리타존(pioglitazone)을 10㎛씩 각각 사용하였다. 실험결과는 양성대조군의 최대값에 대한 시료의 값을 상대적으로 표현한 % Max 값으로 표시하였으며, 상기 % Max 값은 하기 수학식 1에 의해 계산된 값이다.
At this time, 0.1% dimethyl sulfoxide was used as the negative control group, 10 μm for the PPARα agonist GW7647, 10 μm for the PPARδ agonist GW0742, and 10 μg for the PPARγ agonist pioglitazone, respectively. The experimental results were expressed as a% Max value representing the value of the sample relative to the maximum value of the positive control group, the% Max value is calculated by the following equation (1).

<수학식 1>&Quot; (1) &quot;

% Max = 100×(시료활성-음성대조군활성)/(양성대조군활성-음성대조군활성)
% Max = 100 × (sample activity-negative control activity) / (positive control activity-negative control activity)

아래 도 2 내지 4에 나타낸 것처럼 황칠나무 잎 추출물 및 황칠나무 잎 추출물의 분획물은 PPAR α, γ 및 δ에 대해 우수한 활성을 나타내는 것을 알 수 있으며, PPAR α, γ 및 δ에 대해 우수한 활성을 나타내는 황칠나무 잎 추출물 및 황칠나무 잎 추출물의 분획물로 이루어지는 활성물질은 PPAR α, γ 및 δ에 대해 우수한 활성을 나타낸다.As shown in Figures 2 to 4 below, it can be seen that the fractions of the Hwangchil-tree leaf extract and the Hwangchil-tree leaf extract exhibit excellent activity on PPAR α, γ, and δ, and the hwangchil exhibiting excellent activity on PPAR α, γ, and δ The active substance consisting of the fractions of the tree leaf extract and the yellow lacquer tree leaf extract shows excellent activity against PPAR α, γ and δ.

특히, 실시예 2를 통해 분획된 분획물이 PPAR α, γ 및 δ에 대해 가장 우수한 활성을 나타내는 것을 알 수 있다.
In particular, it can be seen that the fraction fractionated through Example 2 shows the best activity against PPAR α, γ and δ.

S101 : 농축단계
S103 : 분획물제조단계
S101: concentration step
S103: fraction production step

Claims (9)

황칠나무 잎을 함수알코올로 추출하여 농축액을 제조하는 농축단계; 및
상기 농축단계에서 얻어진 농축액을 비극성 용매로 분획하는 분획물제조단계;로 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법
Concentrating step of producing a concentrate by extracting the hwangchil tree leaves with a hydrous alcohol; And
A method for extracting PPAR α, γ, and δ active substances using the yellow lacquer leaf, characterized in that the fraction preparation step of fractionating the concentrate obtained in the concentration step with a non-polar solvent;
청구항 1에 있어서,
상기 농축단계는 황칠나무 잎을 함수알코올에 투입하고 90 내지 100℃의 온도에서 5 내지 24시간 동안 열탕환류하여 황칠나무 잎 추출물을 제조하고, 상기 황칠나무 추출물을 20 내지 50℃로 냉각한 후에 여과하여 얻어진 여과액의 상층액을 분리한 후에, 분리된 상층액을 증발농축시켜 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법.
The method according to claim 1,
In the concentration step, the yellow lacquer tree leaves are poured into a hydrous alcohol and heated to reflux for 5 to 24 hours at a temperature of 90 to 100 ° C. to produce a yellow lacquer tree leaf extract, and the yellow lacquer tree extract is cooled to 20 to 50 ° C. and then filtered. And then separating the supernatant of the filtrate obtained by evaporation, followed by evaporating and concentrating the separated supernatant.
청구항 1에 있어서,
상기 농축단계는 황칠나무 잎을 함수알코올에 투입하고 4 내지 20℃의 온도에서 5 내지 7일 동안 냉침시켜 황칠나무 잎 추출물을 제조하고, 상기 황칠나무 잎추출물을 여과하여 상층액을 분리한 후에, 분리된 상층액을 증발농축시켜 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법.
The method according to claim 1,
In the concentration step, the yellow lacquer leaves are added to the hydrous alcohol, and then cooled for 5 to 7 days at a temperature of 4 to 20 ° C. to prepare the yellow lacquer leaves extract, and after filtering the yellow lacquer leaves extract to separate the supernatant, A method for extracting PPAR α, γ, and δ active substances using a yellow lacquer leaf, characterized by evaporating and separating the separated supernatant.
청구항 1에 있어서,
상기 분획단계는 상기 농축단계에서 얻어진 농축액을 분액여두에 넣고 탄소수가 탄소수가 4 내지 6인 비극성용매로 분획하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법.
The method according to claim 1,
The fractionation step is a method for extracting PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer leaves, characterized in that the concentrated solution obtained in the concentration step is put into a separatory filter and fractionated with a non-polar solvent having 4 to 6 carbon atoms.
청구항 1에 있어서,
상기 비극성 용매는 노르말 헥산인 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질의 추출방법.
The method according to claim 1,
The non-polar solvent is a method for extracting PPAR α, γ and δ active material using the hwangchil leaves, characterized in that the normal hexane.
황칠나무 잎 추출물 및 황칠나무 잎 추출물의 분획물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질.
PPAR α, γ and δ active material using the hwangchil leaves, characterized in that consisting of the extract of the Hwangchil-tree leaves and the Hilchi-chile leaves extract.
청구항 6에 있어서,
상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질에는 약제학적으로 허용되는 불활성 담체가 더 포함되는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질.
The method of claim 6,
PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer leaves PPAR α, γ and δ active material using a yellow lacquer tree, characterized in that the pharmaceutically acceptable inert carrier further comprises.
청구항 7에 있어서,
상기 불활성 담체는 전분 및 락토스로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질.
The method of claim 7,
The inert carrier is PPAR α, γ and δ active material using the yellow lacquer tree, characterized in that consisting of one or more selected from the group consisting of starch and lactose.
청구항 6에 있어서,
상기 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질에는 회석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제 및 붕산제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 첨가제가 더 포함되는 것을 특징으로 하는 황칠나무 잎을 이용한 PPAR α, γ 및 δ 활성물질.
The method of claim 6,
PPAR α, γ and δ active material using the hwangchil leaves further comprises one or more additives selected from the group consisting of a diluent, a flavoring agent, a solubilizer, a lubricant, a suspending agent, a binder and a boric acid agent PPAR α, γ and δ active substances using leaves.
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