KR20130014840A

KR20130014840A - ｍｉＲ-636을 이용한 간암 치료 및 진단 방법

Info

Publication number: KR20130014840A
Application number: KR1020110076545A
Authority: KR
Inventors: 김철우; 장지영; 이영신
Original assignee: 주식회사 바이오인프라
Priority date: 2011-08-01
Filing date: 2011-08-01
Publication date: 2013-02-12

Abstract

본 발명은 miR-636(micro RNA)을 조절하여 간암을 치료하는 방법 및 miR-636의 발현분석을 통해서 간암을 진단하는 방법 등에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 miR-636 발현 조절제를 포함하는 간암 치료용 약학적 조성물, miR-636을 포함하는 간암 진단용 마커 등을 제공한다. 본 발명의 miR-636 발현 조절제는 간암세포에서 종양 억제 및 세포사멸 기능을 수행한다. 따라서 본 발명은 간암세포의 사멸이 유도되고 간암세포주의 종양 형성 및 성장이 지연되는 우수한 효능을 가지는 간암 치료제 개발에 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

ｍｉＲ-636을 이용한 간암 치료 및 진단 방법{Method for treating and diagnosing liver cancer using miR-636}

본 발명은 miR-636(micro RNA)을 조절하여 간암을 치료하는 방법 및 miR-636의 발현분석을 통해서 간암을 진단하는 방법 등에 관한 것이다.

간암은 세계적으로 가장 흔한 종양 중의 하나로써, 일 년에 50만 명 이상의 환자가 발생하고 있으며 우리나라에서는 폐암, 위암에 이어 세 번째로 발생 빈도가 높은 악성 종양으로 남성 암 사망 원인 중 두 번째, 여성 암 사망 원인 중 세 번째를 차지하고 있다. 간암의 발생과 관련된 위험 인자로는 B 및 C형 간염 바이러스 감염, 알코올 유전 질환에 의한 간질환, 아플라톡신 B1 섭취, 비알콜성 지방 간 질환 및 흡연 등이 알려져 있다. 이 중 B형 간염 바이러스에 의한 간암은 우리나라뿐만 아니라 전 세계적으로도 70% 이상을 차지하고 있다.

또한, 다른 암과 마찬가지로 간암은 암 유전자의 과 발현 혹은 종양 억제 유전자의 발현 억제와 같은 여러 가지 유전자의 변화가 종양의 발생, 진행 및 전이에 지대한 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 특히, 대부분의 종양 억제유전자의 5’-CpG 섬 (CpG islands) 부위의 과메틸화 (hypermethylation)는 유전자의 결손이나 점 돌연 변이(point mutation) 등에 의한 구조적 변화에 기인한다. 이는 염기 서열의 변화 없이도 유전자의 전사 기능을 억제 (silencing) 함으로써 종양 억제 능력을 감소시키는 것으로 후성학적(epigenetic)변화이며, 암 발생과 연관된 유전자의 메틸화는 주로 CpG 섬 (islands)의 시토신 (cytosine)에서 발생하고 이들의 50-60%는 유전자의 촉진자에 위치하고 있다. 이러한 메틸화는 DNA methyltransferases (DNMTs)에 의해서 매개되며 세포의 비정상적인 증식과 종양 발생 진행 정도에 영향이 있는 것으로 잘 알려져 있다.

한편, MicroRNA (miRNA)는 18-24개의 뉴클레오타이드로 구성된 작은 단일가닥 RNA로서, 직접 단백질을 coding하지는 않지만 상보적인 mRNA의 translation을 억제하고 degradation을 유도함으로써 해당 유전자의 발현을 조절하는 기능을 담당한다. 현재까지 약 700 여 종의 인간 miRNA 서열이 알려져 있으며, miRNA에 의한 유전자 발현 조절은 정상 조직의 발생, 바이러스 감염, 각종 만성 질환 및 발암 과정에서 중요한 역할을 담당할 것으로 보고되고 있다. 암 세포에서 miRNAs는 정상세포와 profile이 현저히 다르기 때문에, 최근 miRNA의 암의 진단 마커로서의 가능성에 대한 많은 보고가 있으며, 또한 종양형성 (tumorigenesis), 전이(metastasis), 신생혈관 형성(angiogenesis) 등의 기작에 있어 중요한 역할을 하고 있다는 보고가 있다. 특히 miRNA는 종양형성/세포증식에 관여하는 onco-miR과 종양억제/세포사멸 기능을 하는 tumor suppressor miR로 나뉘며, 대부분의 암세포에서는 onco-miR가 높게 발현되고 있는 반면 tumor suppressor miR가 현저히 낮게 발현되고 있다.

이와 관련하여, microRNAs 발현이 간암의 발병 및 경과에 미치는 영향에 대해 활발한 연구가 이루어지고 있으며, 특정 miRNAs가 간암의 생존률과 치료효과를 예측할 수 있다는 연구결과들이 보고되고 있다. 이러한 배경에 기초하여, 본 발명자들은 miRNA를 이용하여 간암을 치료하는 방법 및 간암을 진단하는 방법을 개발하고자 연구하여 왔다.

본 발명자들은 miR-636이 간암환자의 간 조직과 간암세포에서 감소되어 있으며, miR-636 유사체를 이용하여 과발현시키는 경우 간암세포의 사멸이 유도되고 종양의 형성이 지연됨을 발견하여 본 발명에 이르게 되었다. 따라서 본 발명의 목적은 miR-636의 발현수준 분석을 이용한 간암 진단 방법과 miR-636 발현 조절제를 유효성분으로 함유하는 간암 치료용 조성물 및 간암 치료방법 등을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명은 miR-636 발현 조절제를 유효성분으로 함유하는 간암 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 miR-636 발현 조절제는 miR-636의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하며, ANT2 shRNA, ANT2 siRNA, 및 miR-636 유사체를 포함한다.

본 발명의 다른 구현예로 상기 ANT2 siRNA 또는 ANT2 shRNA는 서열번호 3으로 기재된 안티센스 (anti-sense) 서열이 서열번호 1로 기재된 센스 (sense) 서열과 결합하여 ANT2 mRNA의 분해를 유도하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 miR-636 유사체는 서열번호 4로 표시되는 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 구현예로 상기 조성물은 종양 억제 miRNA (tumor supperssor miRNA)의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 구현예로 상기 조성물은 K-ras와 H-ras의 전사 수준을 감소시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 구현예로 상기 조성물은 간암 세포의 성장억제 또는 사멸을 유도하는 것을 특징으로 한다.

또한 본 발명은 miR-636 발현 조절제를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 약제학적 유효량을 개체에 투여하여 간암을 치료하는 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 miR-636을 포함하는 간암 진단용 마커를 제공한다.

또한 본 발명은 검체에서 miR-636의 발현 수준을 측정하여 간암의 발병 여부를 예측하는 방법을 제공한다. 바람직하게는 상기 검체는 혈액 또는 혈청일 수 있다.

또한 본 발명은 miR-636을 포함하는 간암 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 miR-636 발현 조절제는 간암세포에서 종양 억제 및 세포사멸 기능을 수행한다. 따라서 본 발명은 간암세포의 사멸이 유도되고 간암세포주의 종양 형성 및 성장이 지연되는 우수한 효능을 가지는 간암 치료제 개발에 이용될 수 있을 것으로 기대된다. 또한, 본 발명의 miR-636은 매우 유용한 간암 진단 마커로서의 역할이 기대된다.

도 1은 간암 세포에 ANT2 shRNA를 도입하면 miR-636이 증가한다는 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 간암 세포에 ANT2 shRNA를 도입하면 miR-636 프로모터의 과메틸화가 감소된다는 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 간암 세포에 ANT2 shRNA 또는 miR-636 유사체를 도입하면 K-ras와 H-ras의 전사 수준이 감소된다는 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 간암 세포에 miR-636 유사체를 도입하면 세포수준(in vitro)에서 간암 세포주의 증식이 억제된다는 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 간암세포에 ANT2 shRNA를 도입하면 간암 세포주의 증식이 감소되는데, miR-636을 도입하면 증식 감소가 부분 회복된다는 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 간암 세포를 이식한 쥐에 miR-636 유사체를 도입하면 종양의 형성이 억제된다는 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 간암 환자의 정상 간 조직에 비해 간암 조직에서 miR-636의 발현이 감소되어 있음을 나타낸 것이다.

본 발명자들은 ANT2 siRNA(Adenine nucleotide translocator 2 small interfering RNA)는 ANT2 shRNA(Adenine nucleotide translocator 2 short hairpin RNA)에 의해 암 세포 내의 ANT2 발현 수준을 감소시키는 경우, 암 세포 내의 miRNA 발현 조절 양상을 miRNA microarray를 이용하여 확인하였다. 그 결과, ANT2 siRNA 또는 ANT2 shRNA에 의해 기존에 보고된 몇몇 onco-miR의 감소와 tumor suppressor miR의 증가가 관찰되었다.

또한, 본 발명자들은 ANT2 siRNA 또는 ANT2 shRNA에 의해 증가되는 miRNA 가운데 암 세포에서 기능이 보고되지 않은 miR-636을 대상으로 기능을 규명하고 miR-636 유사체를 이용한 간암치료 가능성을 확인하였다. miR-636 유사체(miR-636 mimics)는 miR-636을 합성한 올리고머이다. 그 결과, ANT2 siRNA 또는 ANT2 shRNA에 의해 miR-636의 발현증가가 재현성이 있음을 발견하였다.

이에 더하여, miR-636은 간암 세포에서 감소되어 있음을 발견하였고, miR-636 유사체를 이용하여 과발현시키는 경우 간암세포의 사멸이 유도되며, 동물모델에서 miR-636이 증가되어 있는 간암세포의 종양의 형성이 지연됨을 확인하였다.

또한 본 발명자들은 정상 간 조직에 비해 간암 조직에서 miR-636이 현저히 감소되어 있음을 관찰하였다.

상기의 결과를 종합하면, 본 발명자들은 ANT2 siRNA 또는 ANT2 shRNA에 의한 간암세포 치료효과가 miR-636의 발현증가를 통한 것이라는 것을 규명하였고, miR-636이 간암세포에서 종양억제/세포사멸 기능을 수행함을 세계 최초로 밝혔으며, 궁극적으로 miR-636 유사체를 이용한 간암치료 가능성을 확인하였다. 또한 본 발명자들은 miR-636의 간암 진단 마커로써의 가능성을 확인하였다.

본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용 가능한 담체는 생리식염수, 폴리에틸렌글리콜, 에탄올, 식물성 오일, 및 이소프로필미리스테이트 등을 포함할 수 있으며, 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 다른 측면은 miR-636 발현 조절제를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물의 약제학적 유효량을 개체에 투여하여 간암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간, 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 쥐(rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다. 또한, 본 발명에서 “약제학적 유효량”은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하게 조절될 수 있음은 당업자에게 명백하다.

본 발명의 miR-636 발현 조절제의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로, 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직하게는, 1일 0.001 내지 100 mg/체중kg으로, 보다 바람직하게는 0.01 내지 30 mg/체중kg으로 투여한다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 여러 번 나누어 투여할 수 있다. 본 발명의 miR-636 발현 조절제는 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여방법에는 제한이 없으며, 예를 들면, 경구, 직장, 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막, 또는 뇌혈관(intra cerbroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

ANT2 shRNA 의 발현벡터 제작

미국 국립생명공학정보센터(Nationanl Center for Biotechnology Information, NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)로부터 입수한 ANT2 mRNA 염기서열은 Genebank Accession No. NM_001152이다. 이 염기서열을 siRNA 예측 프로그램(http://www.ambion.com/technical, resources/siRNA target finder)에 대입하여 적합한 ANT2 siRNA 후보 염기서열을 확보하였고, 여러 후보 염기서열 가운데 ANT2 mRNA의 두 번째 엑손에 해당하는 염기서열인 5' GCAGAUCACUGCAGAUAAG 3'에 결합하는 siRNA를 제작하여 ANT2 siRNA에 의한 ANT2 mRNA의 감소 (silencing)효과를 세포 수준에서 (in vitro) 확인하였다 [이 때 ANT2 siRNA 제작은 Bioneer(한국)에 의뢰하였다].

이 결과를 토대로 shRNA를 제작하기 위하여 다음과 같은 염기서열의 올리고머 두 가닥을 합성하고[이 때 ANT2 siRNA 제작은 Bioneer(한국)에 의뢰하였다],

상기 두 가닥의 올리고머를 결합 (annealing) 시킨 후, pSilencer 3.1-H1 puro 플라스미드 벡터(Ambion사)의 MCS(multi-cloning site)내 BamH I과 Hind III 부위에 클로닝하여 제작하였다. 이 때 상기 센스서열에 이어 siRNA 발현유도의 효율을 증가시키도록 TT를 첨가하였다. 또한, ANT2 shRNA의 효과를 확인하기 위해 진행한 모든 실험에는 ANT2 발현을 차단하지 못하면서, 세포 내 특정 mRNA의 발현에는 영향을 끼치지 않는 스크램블(scrambled) shRNA를 음성 대조군으로 사용하였으며, 이는 동일한 조건을 제공해주는 역할을 하는 것으로 Ambion사에서 구입하여 사용하였다.

상기 벡터로부터 발현이 되는 shRNA의 염기서열은 서열번호 1 내지 3으로 서열목록에 별도로 기재하였다.

miR -636 유사체의 합성

miR-636 을 간암세포주 내에서 과발현 시키기 위해서 miR-636 유사체를 도입하였다. 이 때 사용한 miR-636 유사체는 miR-636의 mature form의 염기 서열을 double strand 형태로 합성한 것이다. 이때 사용한 염기 서열 accession은 MIMAT0003306 이고 염기서열은 5'-ugugcuugcucgucccgcccgca-3' (서열번호 4로 기재)이며 아무런 modification도 하지 않았다. 상기 miR-636 유사체의 합성은 Genolution (서울 송파구 풍남동 388-1 아산교육연구관 8층 소재)에서 진행하였다.

서열번호 4: 5'-ugugcuugcucgucccgcccgca-3'

실시예 1. 간암 세포의 miR -636 발현에 미치는 ANT2 shRNA 도입의 효과

본 발명자들은 ANT2 shRNA 도입으로 인해 조절되는 miRNAs를 확인하기 위하여, 간암 세포주인 Hep3B에 ANT2 shRNA와 어떤 유전자의 발현에도 영향을 끼치지 않는 scrambled miRNA (negative control)을 도입한 후, total RNAs를 추출한 다음에, micro RNA micro-array를 진행하였다.

그 결과, 표 1에 나타난 바와 같이, ANT2 shRNA 도입으로 인해 조절(증가 또는 감소)되는 몇몇 후보 miRNAs를 얻었고, 그 가운데 1.5배의 증가를 보이는 miR-636을 확인하였다.

이 결과를 재확인하기 위하여 real time-PCR (RT-qPCR)을 진행하였다. 그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, ANT2 shRNA을 도입한 경우에 재현성 있게 miR-636이 증가함을 확인하였다.

실시예 2. miR -636 프로모터의 과메틸화에 미치는 ANT2 shRNA 도입의 효과

본 발명자들은 ANT2 shRNA 도입으로 인한 종양 억제 인자인 miR-636의 증가 기전으로, 평소 간암세포에서는 miR-636의 발현을 조절하는 프로모터(promoter)의 CpG islands의 과메틸화 (hypermethylation)로 인한 발현이 감소되어 있음을 발견하였고, 이로 인하여 ANT2 shRNA가 도입될 경우 과메틸화가 억제될 것이라 예상하여 이를 확인하는 실험을 진행하였다.

구체적으로, 간암 세포주인 Hep3B에 ANT2 shRNA와 어떤 유전자의 발현에도 영향을 끼치지 않는 scrambled miRNA (negative control)을 도입한 후, genomic DNAs를 추출한 다음에, methylation-speicifc PCR (MSP)를 진행하였다. positive control로는 메틸화 억제제인 5-azadC를 사용하였다. 한편, 5-azadC의 용매가 DMSO이므로 5-azadC의 negative control로 DMSO를 사용하였다. 이 때 메틸화가 일어난 부위를 증폭시키는 프라이머(M primer) 및 메틸화가 일어나지 않은 부위를 증폭시키는 프라이머(U primer)를 사용하였으며 염기서열은 다음과 같다.

Left M primer 5' TTATTATTTTTTTAAGAGGATATCGT 3'

Right M primer 5' GAAATCGTTCCAAATCTCGC 3'

Left U primer 5' TATTATTTTTTTAAGAGGATATTGT 3'

Right U primer 5' AAATCAAAATCATTCCAAATCTCAC 3'

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, ANT2 shRNA를 도입할 경우 miR-636 프로모터의 과메틸화가 감소됨을 확인하였다.

실시예 3. K- ras 및 H- ras 의 전사 수준에 미치는 ANT2 shRNA 및 miR -636 유사체의 효과

본 발명자들은 간암 세포주에서 ANT2 shRNA의 도입으로 증가된 miR-636에 의해 조절되는 mRNA의 타겟(target)을 프로그램을 이용하여 검색하였고, 후보 타겟으로 간암 세포주의 증식에 중요한 역할을 하는 oncogene인 Ras가 검색되었다.

간암 세포주인 Hep3B에 ANT2 shRNA와 어떤 유전자의 발현에도 영향을 끼치지 않는 scrambled miRNA (negative control)을 도입한 후, real time-RT-PCR (RT-qPCR)을 이용해서 확인하였다.

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, ANT2 shRNA를 도입한 경우에 K-ras와 Hpras의 transcripts 수준이 감소됨을 확인하였고, miR-636 유사체(miR-636 mimics)를 도입한 경우도 동일한 현상을 관찰할 수 있었다. 즉, miR-636의 발현이 증가되면 K-ras와 H-ras의 transcripts의 수준이 감소된다는 결과를 얻었다.

실시예 4. miR -636의 증가시 세포 수준( in vitro )에서 간암세포에 미치는 효과

본 발명자들은 간암세포에서, ANT2 shRNA의 도입으로 인한 miR-636의 증가 또는 miR-636 유사체 도입으로 인한 miR-636의 증가가 간암세포에 미치는 효과를 확인하기 위해서, 즉 간암세포에서 miR-636의 기능을 규명하고자, 간암 세포주에 miR-636 유사체를 도입하여 세포의 증식정도를 CCK8 assay를 통해서 확인하였다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, miR-636 유사체의 도입이 간암 세포주의 증식을 억제함을 세포 수준에서(in vitro) 확인하였다.

본 발명자들은 ANT2 shRNA의 도입으로 인한 간암 세포주 증식의 억제가 miR-636을 통한 것이라는 것을 확인하기 위해서 miR-636 억제제를 도입하여 비교 관찰하였다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, ANT2 shRNA의 도입으로 감소된 세포 증식이 miR-636 억제제에 의해서 부분 회복됨을 세포 수준(in vitro)에서 관찰하였다. 이 결과는 간암 세포주에서 miR-636의 기능이 간암세포주의 증식억제자로서의 역할을 한다는 것을 세계 최초로 실험적으로 확인한 것이다. 다만, 부분 회복은 miR-636뿐만 아니라 다른 인자도 관여한다고 것을 시사하는 것으로 여겨진다.

실시예 5. ANT2 shRNA 또는 miR -636 유사체의 도입으로 인한 miR -636의 증가시 동물 모델( in vivo )에서 간암 세포주의 종양형성 및 성장 억제 효과

본 발명자들은 동물 모델(in vivo)에서 miR-636의 효과를 확인하고자, 면역기능이 억제된 Balb/c nude mice에 간암 세포주인 Hep3B 세포를 2x10⁶씩 이식하였다. 이 때 왼쪽 대퇴부에는 negative control 유사체가 도입된 Hep3B 세포주를 주입하고, 오른쪽 대퇴부에는 miR-636 유사체가 도입된 Hep3B 세포주를 주입하여 종양의 성장을 측정하였다.

그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, miR-636 유사체가 도입된 Hep3B 세포주가 negative control 유사체가 도입된 Hep3B 세포주에 비해서 종양의 형성 및 크기 성장이 현저히 감소됨을 관찰하였고, 이로써, 동물모델에서 miR-636이 간암 세포주에 의한 종양형성 및 성장을 지연시킨다는 결과를 확인하였다.

실시예 6. 동일인의 정상 간 조직 및 간암 조직에서 miR -636 발현 수준 확인

본 발명자들은 정상 간 조직에 비해 간암 조직에서 miR-636의 발현이 감소되어 있음을 확인하고자, 임상시험위원회 (IRB: Institutional Review Board)를 통과한 간암 환자의 조직에서 miRNA를 추출하여 miR-636의 발현 수준을 확인하였다. 동일인의 정상 간 조직을 비교군으로 사용하였고 역전사-실시간 증폭법 (RT-qPCR: real-time PCR)을 이용하여 miR-636의 발현 수준을 측정하였다. 이 때 miRNA 농도를 보정하기 위해서 U6를 housekeeping gene(HK)으로 사용하였으며, RT-qPCR 실험결과는 정상 간 조직과 간암 조직 간의 상대적인 miR-636 발현 수준으로 분석하였다. 데이터 분석은 student's t test를 사용하였고, p<0.005인 경우 매우 의미 있는 차이라고 판단한다.

그 결과 도 7에서 나타난 바와 같이, 정상 조직에 비해 간암 조직의 경우 miR-636의 발현이 현저히 감소되어 있음을 관찰하였고, 이는 miR-636의 간암 진단마커로써의 가능성을 제시해 준다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.

<110> BioInfra Inc. <120> Method for treating liver cancer by regulating the expression of miR-636 mimics <130> PB11-09302 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 shRNA <400> 1 gcagaucacu gcagauaagu u 21 <210> 2 <211> 9 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop sequence of ANT2 shRNA <400> 2 uucaagaga 9 <210> 3 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 shRNA <400> 3 aacuuaucug cagugaucug c 21 <210> 4 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-636 mimics <400> 4 ugugcuugcu cgucccgccc gca 23

Claims

miR(micro RNA)-636 발현 조절제를 유효성분으로 포함하는 간암 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 miR-636 발현 조절제는 miR-636의 발현을 증가시키는 것인, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 miR-636 발현 조절제는 miR-636 유사체, ANT2 siRNA(Adenine nucleotide translocator 2 small interfering RNA) 또는 ANT2 shRNA(Adenine nucleotide translocator 2 short hairpin RNA)인, 조성물.
제 3항에 있어서,
상기 ANT2 siRNA 또는 ANT2 shRNA 는 서열번호 3으로 기재된 안티센스 (anti-sense) 서열이 서열번호 1로 기재된 센스 (sense) 서열과 결합하여 ANT2 mRNA의 분해를 유도하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
제 3항에 있어서,
상기 miR-636 유사체는 서열번호 4로 표시되는 염기서열을 포함하는 것인, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 종양 억제 miRNA(tumor supperssor miRNA)의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 K-ras와 H-ras의 전사수준을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 간암 세포의 성장억제 또는 사멸을 유도하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
miR-636 발현 조절제를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물의 약제학적 유효량을 개체에 투여하여 간암을 치료하는 방법.
miR(micro RNA)-636을 포함하는 간암 진단용 마커.
검체에서 miR(micro RNA)-636의 발현 수준을 측정하여 간암의 발병 여부를 측정하는 방법.
제 11항에 있어서,
상기 검체는 혈액 또는 혈청인 것을 특징으로 하는, 방법.
miR(micro RNA)-636을 포함하는 간암 진단용 키트.