KR20120127758A - 신균주 린박터 사르코도니아 엠케이1과 이 균주가 생산하는 거식세포 자극활성을 지닌 체외다당류성 물질 - Google Patents

신균주 린박터 사르코도니아 엠케이1과 이 균주가 생산하는 거식세포 자극활성을 지닌 체외다당류성 물질 Download PDF

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Abstract

본 발명은 자연산 능이버섯(Sarcodon aspratus)의 무름병 부위에서 분리한 신속의 세균 린박터 사르코도니아(Lynbacter sarcodonia)에 관한 것으로 본 발명의 주체인 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP)와 이 균주가 생산하는 체외다당류성 물질에 관한 것이다. 린박터 사르코도니아 균은 새로운 속(genus)의 세균이며 30℃에서 매우 잘 자라는 중온성 타가영양세균으로 다량의 체외다당류 (exopolysaccharides)를 생산한다. 엠케이1 균주가 생산하는 체외다당류물질은 구르코즈, 람노즈, 만노즈, 갈락토즈, 구르코사민, 푸코즈, 후락토즈, 갈락투론산 등을 함유하는 즉 중성당, 산성당, 아미노당으로 구성된 이종다당류성 물질(heteropolysaccharide of neutral/acidic sugar/amino sugar)이다. 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodoniaMK1)균이 생산하는 이종다당류성 물질은 거식세포(macrophage)의 탐식능을 높여 면역계의 기능을 항진시키는 생리활성을 갖고 있다. 따라서 이 균주는 신속의 세균으로 거식세포 자극 활성을 지닌 생리활성물질의 생산균주로 개발될 수 있다.

Description

신균주 린박터 사르코도니아 엠케이1과 이 균주가 생산하는 거식세포 자극활성을 지닌 체외다당류성 물질{Lynbacter sarcodonia MK1 and exopolysaccharides produced by Lynbacter sarcodonia MK1}
본 발명은 자연산 능이버섯(Sarcodon aspratus)의 무름병소에서 분리한 린박터 사르코도니아(Lynbacter sarcodonia)균주에 관한 것으로 본 발명의 주체인 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BPP)와 이 균주가 생산하는 체외다당류성 물질에 관한 것이다. 린박터 사르코도니아 균은 새로운 속(genus)의 균이며 30℃에서 잘 자라는 중온성 타가영양세균으로 다량의 체외다당류(exopolysaccharides)를 생산하는 균주이다. 이 균주가 생산하는 체외다당류물질은 구르코즈, 람노즈, 만노즈, 갈락토즈, 구르코사민, 푸코즈, 후락토즈, 갈락투론산 등을 함유하는 즉 중성당, 산성당, 아미노당으로 구성된 이종다당류성 물질(heteropolysaccharide of neutral/acidic sugar/amino sugar)이다. 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1)균이 생산하는 이종다당류성 물질은 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)의 니트로옥사이드(nitric oxide), 인테페론-1베타(interferon 1-β), 티엔에푸-알파(TNF-α)와 같은 생리활성물질의 생성을 유도하며 거식세포(macrophage)의 탐식능을 높여준다. 따라서 이 균주는 신속의 세균으로 거식세포 자극 활성을 지닌 생리활성물질의 생산균주로 개발될 수 있다.
구체적으로 본 발명은, 충북 월악산의 참나무 식생지에서 채집한 능이버섯을 실온에서 보관하던 중 발생한 무름병소에서 분리한 점성 물질을 많이 생산하는 세균 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP)와 로 264.7 세포의 탐식능을 높여 면역계의 기능을 항진시키는 성질을 지닌 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1)가 생산하는 체외다당류성 물질에 관한 것이다.
본 발명의 내용은 대한면역학회지인 Immune Network에 2010년 12월 6일자에 Activation of Macrophages by Exopolysaccharide Produced by MK1 Bacterial Strain Isolated from Neungee Mushroom, Sarcodon aspratus 제하의 논문으로 발표되었다.
미생물은 자연생태계의 없어서는 안 될 아주 중요한 구성원이다. 모든 미생물들은 생명활동을 영위하기 위하여 다양한 생화학 반응을 진행하며 생명 활동의 결과로 여러 가지 대사산물들을 만들어 낸다.
자연 생태계에는 매우 다양한 종류의 미생물이 서식하고 있는데 현재 사람에게 그 존재와 성질이 파악된 미생물은 극히 일부에 지나지 않는다고 한다. 따라서 신종 미생물에 대한 탐색은 부단히 계속되고 있는데 신종의 미생물을 탐색하는 목적의 하나는 유용한 미생물 자원의 확보이다. 특히 1992년 '생물의 종 다양성'에 대한 리우(Reo) 협약 이후 생물 자원의 확보는 과학선진국의 치열한 관심사이다. 특히 미생물은 생물 산업(biotechnology) 분야에 주축이 되는 것으로 중요성이 인식되면서 신종의 미생물을 찾으려는 노력이 일층 심화되고 있다. 따라서 우리도 다양한 자연 생태계에서 이용 가치가 있는 미생물을 찾아내어 생물자원으로 확보하고 산업 신소재로 개발하는 것에 보다 많은 관심을 쏟고 있다.
미생물의 대사산물 가운데 체외다당류성 물질은 오래 전부터 알려져 있다(9, 47, 48, 51, 52, 54). 미생물의 체외 다당류 물질은 균체와 다당류성 물질의 물리적 결합 성상에 따라 균체의 벽에 단단히 결합된 협막 다당류(capsular polysaccharide)와 균체 표면에 느슨하게 부착되어 균체로 부터 쉽게 유리되는 점액성 다당류(slime polysaccharide)로 구분된다(4, 5, 6, 24, 35, 36). 미생물 체외다당류은 미생물을 건조, 자외선, 독성물질, 항생물질 등으로부터 보호하는 등 미생물 생존에 매우 중요하다(5, 50, 53). 뿐만 아니라, 자연계에서 생물막(biofilm)을 형성하기도하고(27,49), 동. 식물의 병을 야기하는 인자로 작용하기도 한다(7, 29, 46). 한편, 체외다당류 물질은 수분 흡수제, 접착제, 안정제, 유화제, 현탁제, 점증제, 겔 형성제, 응집제, 피막제, 중금속 흡착제로 사용되어 향장, 식품, 의료 제약, 화학, 농업, 기계, 환경정화 등 각종 분야에 높은 가치를 지닌 소재이다(3, 16, 22, 24, 27, 28, 31, 40, 50, 56, 57). 바다에서 분리한 내열성 Bacillus licheniformis의 체외다당류는 면역조절기능 및 항바이러스활성을 보이며, Gluconoacetobacter xylinus 등 수종의 세균이 생산하는 레반은 항종양활성을 지닌 것으로 보고되어(2, 38, 39, 57) 미생물의 체외다당류가 생리활성물질로도 높은 가치를 지닌다. 한편 Angelica sinensis(55)나 Aloe vera(30)에서 분리한 다당류가 거식세포를 활성하는 것처럼 Lactobacillus 속 세균에서 분리한 미생물 유래 체외다당류도 니트릭옥사이드(nitric oxide), 시토카인(cytokine) 같은 면역조절물질의 생산을 유도하며 거식세포의 탐식력을 높여 면역활성을 증강하는 것이 다수 보고되었다(8, 18, 19, 20, 21, 37). 미생물의 체외다당류는 식물의 체외다당류보다 정제하기 쉬우며 순도가 높은 것을 단시간에 다량 확보할 수 있는 장점이 있다.
본 발명의 주체는 자연산 능이버섯(Sarcodon aspratus)의 무름병소에서 분리한 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP)와 면역생리활성을 지닌 이 균주가 생산하는 체외다당류성 물질에 관한 것이다. 린박터 사르코도니아 균은 새로운 속(genus)의 균으로 다량의 체외다당류(exopolysaccharides)를 생산하는 균주며, 이 균주의 대사산물인 체외다당류물질은 중성당, 산성당, 아미노당으로 구성된 이종다당류성 물질(heteropolysaccharide of neutral/acidic sugar/amino sugar)로 거식세포(macrophage)의 탐식능을 높여 면역계의 기능을 항진시키는 생리활성을 갖고 있다. 따라서 이 균주는 거식세포 자극 활성을 지닌 생리활성물질의 생산하는 신속 미생물 균주의 용도를 제공하고자 한다.
따라서, 본 발명의 목적은
1) 능이버섯 무름병소에서 분리한 신속 미생물 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP)를 제공하는 것이다.
2) 본 발명의 다른 목적은, 상기 균주가 생산하는 체외다당류물질을 제공하는 것이다.
3) 또 다른 본 발명의 목적은 상기 균주가 생산하는 체외다당류물질을 거식세포 자극 활성을 지닌 생리활성물질의 용도로 제공하는 것이다.
본 발명의 주체인 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국과학생명공학원, 수탁일: 2010년 11 월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP)는 자연에서 채취한 능이버섯을 보관중 버섯의 갓 뒷면 바늘부위에 발생한 무름병소에서 분리한 신속, 신종의 세균으로 절대 호기성, 그람 음성 방추형 간균, 중온성 세균이다. 이 균은 유백색 체외 다당류 물질을 생산하는 데 균이 생산하는 체외다당류물질은 면역조절물질의 생산성 높여 거식세포의 탐식능을 강화하는 면역생리활성을 보여준다. 따라서 이 균주는 면역활성을 높여주는 세균 체외다당류물질의 생산균주로 그 가치를 지니고 있다.
도면 1a는 자연에서 채취한 신선한 능이버섯의 사진이며,
도면 1b는 본 발명의 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주를 분리한 무름병에 걸린 능이버섯의 사진이며,
도면 2a는 본 발명의 균주 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주를 감자 전분 덱스트로스 한천 배지에서 자란 균 집락의 사진이며,
도면 2b는 본 발명의 균주 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주의 주사전자현미경도이다.
도면 3은 본 발명의 균주인 린박터 사르코도니아 엠케이1이 생산한 체외다당류물질을 정제한 사진이며,
도면 4는 린박터 사르코도니아 엠케이1이 생산한 체외다당류를 정제하여 분자량을 구한 것이며,
도면 5는 린박터 사르코도니아 엠케이1이 생산한 체외다당류의 구성 당을 분석한 그림이며,
도면 6a, 6b, 6c는 각기 본 발명의 정제한 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주의 체외다당류 물질을 처리한 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)의 니트릭옥사이드 (NO-), 인터페론-1베타(IL-1β), 티엔에프-알파(TNF-α)의 생성능의 증대를 보여주는 도표이다.
도면 7은 본 발명의 정제한 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주의 체외다당류 물질을 처리한 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)에서 활성화여부를 인식하는데 관여하는 보조 자극분자(co-stimulatory molecules)가 발현되고 있음을 알 수 있는 도표이며,
도면 8은 본 발명의 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주가 생산한 체외다당류 물질을 정제하여 마우스 거식세포의 탐식능의 증대를 보여주는 도표이다.
본 발명은 자연에서 채취한 능이버섯의 무름병소에서 분리한 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP)에 관한 것으로 본 발명의 주체인 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1) 균주(KCTC 11802BP)는 30℃가 최적 생장온도인 중온성 세균으로 감자 전분 덱스트로스 배지 같은 복합영양배지는 물론 구르코즈, 갈락토즈, 후락토즈, 수크로즈 등이 첨가된 무기염배지에서도 잘 생육하며 점성 체외다당류(slime exopolysaccharide)의 생산성이 우수한 균주이다(43). 이하 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1)의 분리방법, 세균학적 특성에 근거한 균의 동정에 관한 설명과 이 균주가 생산하는 체외다당류물질의 구성원소, 구성당, 분자량, 점성과 체외다당류에 의한 거식세포의 활성에 대한 설명이다.
<균의 분리 및 동정>
1. 균의 분리. 충북 제원군 월악산의 참나무 군락지에서 채집하여 보관하던 능이버섯(도면 1a)에 발생한 무름병 부위의 끈끈한 점액물질(도면 1b)을 멸균 백금이로 소량 떼어내어 이를 감자 전분 덱스트로스 한천 배지에(potato starch dextrose, 1.5% agar)에 골고루 도말하고 30℃에서 24 ~ 72 시간 배양하고는 유백색- 또는 미황색 점성물질(milky white mucoid substance)을 많이 생산하는 균의 집락을 골라 수 차례 동종의 배지에서 계대 배양하여 순수한 균주를 확보하였다(26, 42, 43).
2. 엘.비.영양 한천 배지, 감자 전분 덱스트로스 한천 배지에서 자란 균의 집락을 관찰하고 그람 염색으로 세균의 형태를 살펴보았다.
3. 바이텍 시스템을 활용하여 균의 생화학적 성질을 하였다.
4. 주사전자현미경(SEM)으로 균체의 형태를 관찰을 하였다.
5. 균체 지방산을 사포니케이숀-메칠화(saponication-methylation)하여 추출한 후 가스크로마토그래프로 분석하였다.
6. 코엔자멤 큐(Coenzyme Q)를 추출하여 아세톤-아세토니트릴(acetone-acetonitrile) (80:20)을 전개 용매로 사용하여 HPLC로 분석하였다.
7. 세균의 16에스 리보소말알엔에(bacterial 16S rRNA) 유전자를 피씨알(PCR)로 증폭시켜 다량의 엠케이1(MK1) 균주의 16에스 리보소말디엔에(16S rDNA)를 얻은 후, 16에스 리보소말디엔에(16S rDNA)의 염기서열을 분석하고 기존 장내세균과 세균들과의 16에스 리보소말알엔에(16s RNA)의 유연관계를 분석 비교하였다.
8. 균주의 형태적, 생리적 그리고 생화학적 특성을 조사한 후 버기스 지침서(Bergey's Manual of Determative Bacteriology)와 16에스 리보소말디엔에(16S-rDNA)의 염기서열을 분석하여 그린 계통수(phylogenetic tree)에 따라서 균주를 동정하였다.
9. 균체의 체외 다당류의 정제는 15 분간 고속원심분리(25,000×g)로 상등액을 모은 후 상등액에 냉 무수에타놀을 3배(v/v) 첨가하고, 4℃에서 하루 밤 정치하여 생긴 침전을 15분간 고속원심분리로(8,870×g)로 모아 적정량의 증류수(약 2 ml)에 녹였다. 냉 에타놀 침전을 2 ~ 3 회 반복하여 체외다당류를 얻어 -50℃에서 동결 건조하였다. 동결 건조한 체외다당류를 증류수에 다시 녹인 후 2일간 15 리터의 증류수에서 투석(분자량 1,000 달톤 이하는 통과하는 투석막을 사용)한 후 투석액 속의 균체다당류를 다시 냉무수 에타놀로 침전하여 모아 다시 동결 건조하였다(1, 23). 이와 같이 얻은 균체다당류로 형태관찰, 구성당 분석, 점도, 분자량 측정을 하였다 균체다당류의 쿠르코스로 표현되는 다당류의 정량(glucose equivalent EPS quantitation)은 페놀-황산(phenol-sulfuric) 법(12, 33)으로, 산성당으로 표현되는 당 정량(acid glucose equivalent EPS quantitation)은 알시안블루염료결합(alcian blue binding)법으로 측정하였다(41, 43, 45).
10. 균체다당류의 원소 분석은 충북대학교 공공실험실습관에서 탄소, 수소, 질소, 황, 산소 원소분석기로(EA 1110, CE Instruments), 구성당 분석은 세종대학교 탄수화물연구소에서 바이오 에치비엘씨(Bio-HPLC)로 수행하였다(11, 30, 44).
11.체외다당의 분자량은 에스디에스-폴리아크릴아마이드겔 전기영동(SDS-polyacrylamide gel elctrophoresis)로 측정하였다(14, 17, 24).
12. 균체외 다당류의 점도는 우베로데 모세관 점도계로 25℃±0.3℃ 의 수조에서 증류수의 유속 시간과 비교하여 측정하였다(13, 50, 56).
13. 체외다당류에 오염물질로 존재할 수도 있는 세균 체내독소(endotoxin)를 제거하기 위하여 정제된 체외다당류물질을 Affi-Prep Polymyxin Matrix(Bio-Rad)로 충진된 Bio-spin column를 통과시켰다(58).
14. 세균내독소가 없는 체외당류(endotoxin-free EPS)의 면역활성 증강 여부는 둘베코 배지(Dulbecco's medium)에서 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)를 48 시간 배양한 후 배양 상등액 속의 티엔에프-알파(TNF-α), 인터페론-1베타(IL-1β)같은 씨토카인과 니트릭산 량의 측정으로 알아보았다(15).
15. 체외다당류 처리한 거식세포의 표면인식인자들(surface markers)의 분석은 단세포에서 만들어진 CD40, ICAM-2, I-A, B7-1의 단세포 항체를 이용하여 체외다당류를 처리한 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)에서 상기 인식인자들의 발현정도를 확인하였다(15).
16. 거식세포의 탐식력은 체외다당류를 넣은 세포배양액에서 로 264.7 세포 (Raw 264.7 cell)를 2일 간 배양한 후 생분해 가능한 오발부민과 형광-이소티오시아나이트(FITC, fluoresecin iso-thiocynate)가 포함된 미세소구(microspheres)를 거식세포 배양액에 첨가하고는 2 시간 동안 세포 배양액을 정치하였다. 배양 액속의 미탐식 미세소구를 제거하기 위하여 세포를 미리 따스하게 준비한 생리식염수로 씻은 후 세포를 모아 파라폼알데히드로 세포를 고정하고는 flow cytometry 로 세포를 분석하였다(15).
<균주의 특성>
1. 분리 균주 엠케이1는 여러 가지의 영양복합(Luria-Bertani) 배지, 감자 전분 텍스트로스 배지(potato starch dextrose agar)에서 잘 자라며 집락 주변에 유백색 점액성 물질이 많다. 이는 첨부된 도면 2a에 나타내었다.
엠케이1(MK1) 균주는 절대호기성 세균으로, 20 ~ 30℃에서 성장하며 최적 성장온도는 30℃며 37℃에서는 자라지 않는다. 한편 pH 6 ~ 8에서 성장하고 최적 성장 pH는 7.0 부근이었다. 엠케이1 균주는 그람 음성간균으로 중간은 통통하고 양끝이 가느다란 방추형이다. 크기는 0.7 ~ 1.0 × 1.8 ~ 2.5㎛로 균의 형태는 첨부된 도면 2b에 나타내었다.
2. 엠케이1 균주의 생리 및 생화학적 특성은 다음과 같다.
* 산소의존도: 절대 호기성
* 카타라제: 양성, * 옥시다제: 음성, * 운동성: 있음
* 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주의 생화학적 특성은 다음의 표1과 같다.
린박터 사르코도니아 엠케이1의 생화학적 특성
Characteristic MK1
H2S production -
Utilization of
Adonitol -
L-Arabitol -
D-Manitol +
D-Sorbitol -
D-Cellobiose -
D-Glucose +
D-Maltose -
D-Mannose +
Sucrose -
D-Tagatose -
D-Trehalose +
Citrate (sodium) +
Malonate +
5-Keto-D-Gluconate -
Coumarate +
Fermentataion glucose +
Enzyme activity
Lipase +
Urease -
Phosphatase +
α-Galactosidase -
β-Galactosidase -
α-Glucosidase +
β-Glucosidase -
β-Xylosidase -
γ-Glutamyl-transferase -
β-N-Acetyl-glucosiminidase +
β-N-Acetyl-galactosaminidase +
Ornithine decarbosylase -
Lysine decarboxylase -
Tyrosine arylamidase -
L-Proline arylamidase +
L-Lactate alkalinisation +
3. 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주는 탄소원으로 구르코즈, 갈락토즈, 후락토즈(과당), 수크로즈(서당) 등 첨가된 최소무기염배지(증류수 1 리터 당 Na2HPO4 4.8g, KHPO4 4.4g, (NH4)2SO4 0.5 ~ 2.0g, MgSO4 7H2O 500mg, CaCl2 50mg, FeCl3 5mg)에서도 자라지만 감자전분, 텍스트린 같은 고분자 탄소화물은 탄소원으로 사용하지 못한다.
4. 린박터 사르코도니아 엠케이1의 코엔자엠 큐(Coenzyme Q)는 엠케이-8(MK-8)형이다.
5. 균주의 세포구성 지방산 분포는 아래 표 2와 같으며 C16:0, C17 cyclo 지방산이 주종이며, 불포화지방산이 거의 없다. 유의 있는 유사계수를 보이는 균주가 없다.
린박터 사르코도니아 MK1의 세포지방산
Fatty acid %
C12:0 5.17
C14:0 5.52
C14:0 2OH 5.47
C15:0 1.19
C16:0 29.72
C17:0 0.69
C17:0 cyclo 27.79
C17:0 3OH 0.52
C19:0 cyclo w8c 3.72
C18:1 w7c 0.67
iso-C16:0 0.28
iso-C19:0 0.29
6. 린박터 사르코도니아 엠케이1의 16S rRNA 염기서열과 기존 세균들과의 16에스 리보소말알엔에(16S rRNA)의 유연관계를 보여주는 계통분석도는 다음의 표 3과 같다.
Figure pat00001
7. 린 박터 사르코도니아 엠케이1과 가까이 위치한 곳의 세균들의 16에스 리보소말알엔에(16S rRNA)의 염기서열의 유사성은 아래 표 4와 같다.
린박터 사르코도니아 엠케이1의 16에스 리보소말알엔에(16S rRNA)의 염기서열의 유사성.
Species Accession number Similarity (%)
Serratia grimesii DSM30063(T) AJ233430 98.031
Serratia entomophila DSM 12358(T) AJ233427 97.044
Serratia ficaria DSM4569(T) AJ233428 97.044
Rahnella aquatilis DSM 4594(T) AY253921 96.481
8. 린박터 사르코도니아 엠케이1의 세균학적 특성(형태, 생화학적 성상, GC%)는 다음의 표 5와 같다.
린박터 사르코도니아 엠케이1의 세균학적 특성(형태, 생화학적 성상, GC%)
Characteristic MK1
Gram staining Gram (-)
Cell shape Tapered-end rod
Cell size 0.8 x 2.0 ㎛
Colony morphology White, mucoid, yellow center
Optimal growth temp 30 °C
Oxygen requirement Aerobic
Motility +
Catalase +
Oxydase -
Voges-Proskauer test +
Acid production from
Cellobiose -
Lactose +
D-Rhamnose +
L-Rhamnose ?
Sucrose +
Adonitol +
m-Inositol +
D-Sorbitol +
Gelatin hydrolysis +
Hydrolysis of Tween 80 +
ONPG test(β-galactosidase) -
Mol% G+C of DNA 47.9
9. 본 발명의 린박터 사르코도니아 엠케이1과 16에스 리보소말알엔에의 염기 서열에 유사성을 보여주는 세균들의 생화학적 성상을 아래 표 6에서 비교한 바 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주는 Serratia 속 세균이나 Rahnella 속 세균과는 다른 세균이다.
린박터 사르코도니아 엠케이1과 16에스 리보소말알엔에의 유연성을 보이는 세균들 특성(형태,생화학적 성상, GC % ) 비교
Characteristics MK1 R. aquatilis S. grimesii
Gram staining Gram (-) Gram (-) Gram (-)
Cell shape Tapered-end rod Round-end rod Round-end rod
Cell size 0.8 x 2.0 ㎛ 0.4 x 1.5 ㎛ 0.5-0.8 x 0.9-2.0 ㎛
Colony morphology White, mucoid, yellow center White, smooth White, smooth
Optimal growth temp 30 °C 30 ℃ 28 ℃
Oxygen requirement Aerobic Aerobic Facultatively aerobic
Motility + + +
Catalase + + +
Oxydase - - -
Voges-Proskauer test + + +
Acid production from
Cellobiose - + +
Lactose + + +
D-Rhamnose + ? ?
L-Rhamnose ? + -
Sucrose + + +
Adonitol + - -
m-Inositol + - +
D-Sorbitol + + +
Gelatin hydrolysis + - +
Hydrolysis of Tween 80 + - +
ONPG test
(β-galactosidase) 		- + +
Mol% G+C of DNA 47.9 51-56 53-54
<균주의 동정>
이상의 실험 결과에 근거하여 엠케이1(MK1) 균주는 신속(new genus)의 균으로 동정하며 따라서 속명을 린박터(Lynbacter), 종명을 사르코도니아(sarcodonia)로 정하고 Lynbacter sarcodonia 의 특허 균주로 기탁 등록하였다(기탁기관: 한국생명공학연구원, 수탁일: 2010년 11월 15일, 수탁번호: KCTC 11802BP).
<린박터 사르코도니아 엠케이1의 체외다당류의 정제와 물리화학적 특성>
1. 체외다당류의 정제
균 배양액을 25,000×g 에서 15분간 원심분리하여 얻은 상등액에 냉 무수에타놀을 3배(v/v) 첨가하고 하루 밤 4℃에서 정치하였다. 에타놀로 침전된 체외다당류를 고속원심분리(8,870×g, 15분간)로 모아 약 2ml 의 증류수에 녹였다. 냉 에타놀 침전을 2-3 회 반복하여 체외다당류를 얻어 -50℃에서 동결건조하였다. 동결건조한 체외다당류를 증류수에 다시 녹인 후 2일간 15 리터의 증류수에서 투석(분자량 1,000 달톤 이하는 통과하는 투석막을 사용)한 후 투석액 속의 균체다당류를 다시 냉 무수에타놀로 침전하여 모아 다시 동결건조하였다. 이와 같이 얻은 균체다당류로 형태관찰, 구성당 분석, 점도, 분자량 측정을 하였다.
2. 체외다당류의 물리화학적 특성
가)냉 무수에타놀 침전법으로 정제된 린박터 사르코도니아 MK1의 체외다당류는 백색의 고운 가루로 이들의 형태는 도면 3에 나타내었다.
나) 물에 비교적 잘 녹으며 수용액은 다소 점성을 띠는데 0.5 % 및 1.0 % 수용액의 상대 점도는(ηrel) 각기 1, 25 및 1.19 이다.
다) 충북대학교 공공실험실습관에서 탄소, 수소, 질소, 황, 산소 원소분석기로(EA 1110, CE Instruments), 린박터 사르코도니아 엠케이1의 체외다당류의 원소를 분석한 바 탄소(C), 질소(N), 산소(O), 수소(H)은 확인되었으나 황은 발견되지 않았다.
라) 세종대학교 탄수화물연구소에서 바이오 에치비엘씨(Bio-HPLC)로 구성당을 분석한 바 아래 표7과 같았다. 구르코즈(1), 람노즈(0.8), 만노즈(0.71), 갈락토즈(0.29), 구르코사민(0.21)과 약간의 후코즈, 후락토즈. 갈락투론산으로 구성된 중성당, 아미노당, 산성당으로 된 이종다당류(hetero neural-animo-acidic-polysaccharide) 이다. 이를 도면 5와 표 7에 나타내었다. 다음의 표 7은 린반터 사르코도니아 엠케이1이 생산한 체외 다당류의 구성을 나타낸 표이다.
린박터 사르코도니아 엠케이1이 생산한 체외다당류의 구성
당 구르코즈 람노즈 만노즈 갈락토즈 구르코사민 후코즈 후락토즈 갈락투론산
구성몰비 1 0.8 0.71 0.29 0.21 약간(tr) 약간(tr) 약간(tr)
마) 에디에스-폴이아크릴아마이드겔 전기영동(SDS-polyacrylamide gel elctrophoresis)로 측정한 체외다당류의 분자량은 55.0 ~ 10.6 kda 정도로 크기가 다른 것들이 혼재한다. 이를 도면 4에 나타내었다.
3. 체외다당류의 거식세포 활성화
가). 세균내독소(bacterial endotoxin)가 없는 체외당류(endotoxin-free EPS)의 용량을 달리하여 첨가한 둘베코 배지(Dulbecco's medium)에서 48시간 배양한 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)의 배양 상등액 속의 티엔에프-알파(TNF-α), 인터페론-1베타(IL-1β) 같은 씨토카인과 니트릭산(nitric acid)의 량은 체외다당류를 첨가하지 않은 대조군에 비하여 월등히 증가하였으며 이들 생리활성 물질의 증가는 용량의존적(dose-dependent)이다. 이를 도면 6에 나타내었다.
나). 체외다당류 처리한 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell) 경우 CD40, ICAM-2, I-A, B7-1 같은 표면인식인자들(surface markers)의 발현이 현저하게 증폭되었다. 이를 도면 7에 나타내었다.
다). 체외다당류를 넣은 세포배양액에서 로 264.7 세포(Raw 264.7 cell)를 2일 간 배양한 후 생분해 가능한 오발부민과 형광-이소티오시아나이트(FITC, fluoresecin iso-thiocynate) (Im et al ., 2010)가 포함된 미세소구(microspheres)를 거식세포 배양액에 첨가하고는 2 시간 동안 세포를 배양한 후 배양액 속의 미탐식 미세소구를 제거하기 위하여 세포를 미리 따스하게 준비한 생리식염수로 씻은 후 세포를 모아 파라폼알데히드(paraformaldehyde) 로 세포를 고정하고는 flow cytometry 로 세포를 분석한 바(15), 린박터 사르코도니아 체외다당류로 자극된 경우, 미처리 대조군에 비하여 탐식력이 현저하게 항진 되었다. 폴리믹신 칼럼을 통과하여 오염되어 있을 수도 있는 세균 내독소를 제거한 린박터 사르코도니아 체외다당류시료에서도 같은 결과를 얻어 거식세포의 탐식능 항진은 체외다당류에 의한 것임을 확인하였다. 이를 첨부된 도면 8에 나타내었다.
따라서 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주가 생산한 체외다당류 물질은 거식세포의 탐식력을 고양하여 면역계를 활성하는 면역생리활성물임을 확인하였고 린박터 사르코도니아 엠케이1 균주는 새로운 생리활성물질을 개발할 수 있는 새로운 미생물자원임을 제시했다.
본 발명에서 인용된 참고문헌들은 다음에 예시된 1 ~ 58 문헌들이다.
1. Andaloussi , S. A., H. Talbaoui , R. Marczak , and R. Bonaly . 1995. Isolation and characterization of exocellular polysaccharides produced by Bifidobacterium longum . Appl . Microbiol . Biotechnol . 43, 995-1000.
2. Arena, A., T. L. Maugeri, B. Pavone, D. Iannello, C. Gugliandolo, and G. Bisignano. 2006. Antivial and immunoregulatory effect of a novel exopolysaccharide from a marine thermotolerant Bacillus licheniformis. Int . Immunopharm. 6, 8-13.
3. Arisa , S., A. del Moral , M. R. Ferrer , R. Tallon , E. Quesada , and V. Bejar. 2003. Mauran, an exopolysaccharide produced by the halophilic bacterium Halomonas maura, with a novel composition and interesting properties for biotechnology. Extremophiles 7, 319-326.
4. Bejar, V., I. Llamas, C. Calvo, and E. Quesada. 1998. Characterization of exopolysaccharides produced by 19 halophilic strains included in the species Halomonas eurihalina. J. Biotechnol . 61, 135-141.
5. Cadwell, D. R. 1995. Microbial physiology and metabolism. p.102-103. Wm. C. Brown Communications, Inc. Dubuque, USA.
6. Cerning, T., C. Bouillanne, and M. Landon. 1992. Isolation and characterization of exopolysaccharides from slime-forming mesophilic lactic acid bacteria. J. Dairy Sci. 75, 692-699.
7. Cescutti, P., G. Impallomeni, D. Garozzo, L. Sturiale, Y. Herasimenka, C. Lagatolla, and R. Rizzo . 2003. Exopolysaccharides produced by a clinical strain of Burkholderia cepacia isolated from a cystic fibrosis patient. Carbohydr. Res . 338, 2687-2695.
8. Chabot, S., H. L. Yu, L. D. Leseleuc, D. Cloitier, M. R. Van Calsteren, M. Lessard, D. Roy , M. Lacroix , and D. Oth . 2001. Exopolysaccharides from Lactobacillus rhamnosus RW-9595M stimulate TNF, IL-6 and IL-12 in human and mouse cultured immunocompetent cells and IFN-γ in mouse splenocytes. Le Lait 81, 683-697.
9. Cote, G. L and J. F. Robyt. 1982. Isolation and partial characterization of an extracellular glucansucrase from Leuconostoc mesenteroides NRRLB-1355 that synthesizes an alternating (1-6), (1-3)-a-D-glucan. Carbohydr . Res . 101, 57-74.
10. De Vuyst, L., F. Vanderveken, S. Van de Ven, and B. Degeest. 1998. Production by and isolation of exopolysaccharides from Streptococcus thermophilus grown in milk medium and evidence for their growth-associated biosynthesis. J. Appl . Microbiol . 84, 1095-1098.
11. Faber, E. J., J. P. Kamerling, and J. F.G. Vliegenthart. 2001. Structure of the extracellular polysaccharide produced by Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 291. Carbohydr . Res . 331, 183-194.
12. Grobben, G. J., J. Sikkema, M. R. Smith, and J. A. M. de Bont. 1995. Production of extracellular polysaccharides by Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus NCFB2772 grown in a chemically defined medium. J. Appl . Bacteriol . 79, 103-107.
13. Harding , L. P., V. M. Marshall , Y. Hernandez , Y. Gu , M. Maqsood , N. Mclay, and A. P. Laws . 2005. Structural characterization of a highly branched exopolysaccharide produced by Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus NCFB2074. Carbohydr . Res . 304, 1107-1111.
14. Hedrick, J. L. and A. J. Smith. 1968. Size and charge isomer separation and estimation of molecular weights of proteins by disc gel electrophoresis. Arch. Biochem . Biophys. 126, 155-164.
15. Im , S-A., W. Wang , C-K. Lee , and Y. N. Lee . 2010. Activation of macrophages by exopolysaccharide produced by MK1 bacterial strain isolated from Neugee mushroom, Sarcodon aspratus, Immune Network 10, 230-238.
16. Kalogiannis, S., G. Iakovidou, M. Liakopoulou-Kyriakides, D. A. Kyriakidis, and G. N. Skaracis. 2003. Optimization of xanthan gum production by Xanthomonas campestris grown in molasses. Process Biochem . 39, 249-256.
17. Kim , J. B. and J. H. Ahn. 1993. The modification of the silver stain method in sodium dodecyl sulfate-polyamide gels for detecting lipopolysaccharides. J. Kor . Soc . Microbiol. 28, 193-198.
18. Kitazawa, H., T. Harata, J. Uemura, T. Saito, T. Kaneko, and T. Itoh. 1998. Phosphate group requirement for mitogenic activation of lymphocytes by an extracellular phosphopolysaccharide from Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. Int . J. Food Microbiol. 40, 169-175.
19. Kitazawa, H., Y. Ishii, J. Uemura, Y. Kawai, T. Saito, T. Kaneko, K. Noda, and T. Itoh. 2000. Argumentation of macrophage functions by an extracellular phosphopolysaccharide from Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. Food Microbiol. 17, 109-118.
20. Kitazawa , H., T. Yamaguchi , M. Miura , T. Saito , and T. Itoh . 1993. B-cell mitogen produced by slime forming, encapsulated Lactococcus lactis ssp. cremoris isolated from ropy sour milk, viili. J. Dairy Sci. 76, 1514-1519.
21. Kitazawa, H., T. Itoh, Y. Tomioka, M. Mizugaki, and T. Yamaguchi. 1996. Induction of IFN-γ and IL-1a production in macrophages stimulated with phosphopolysaccharide produced by Lactococcus lactis ssp. cremoris. Int . J. Food Microbiol . 31, 99-106.
22. Kong , J., H. Lee , J. Hong , Y. Kang , J. Kim , M. Chang , and S. Bae. 1998. Utilization of a cell-bound polysaccharide produced by the marine bacterium Zooglea sp.: New biomaterial for metal adsorption and enzyme immobilization. J. Mar . Biotechnol. 6, 99-103.
23. Kumar , C. G., H. S. Joo , J. W. Choi , Y. M. Koo , and C. S. Chang . 2004. Purification and characterization of an extracellular polysaccharide from haloalkalophilic Bacillus sp. I-450. Enz . Microbial. Techno . 34, 673-681.
24. Kumar , A., K. Mody , and B. Jha. 2007. Bacterial polysaccharide-a perception. J. Basic Microbiol . 47, 103-117.
25. Laemmli , E. K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature . 227, 680.
26. Lee , Y. N. and C. D. Koo . 2007. Identification of bacterial isolated from diseased Neung-ee mushroom, Sarcodon aspratus . J. Basic Microbiol . 47, 31-39.
27. Li , B. and B. E. Logan.2004. Bacterial adhesion to glass and metal-oxide surfaces. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 36, 81-90.
28. Lin , C. C. and L. E. Casida . 1984. Gelrite as a gelling agent in media for the growth of thermophilic microorganisms. Appl . Environ . Microbiol. 47, 427-42.
29. Linker , A., L. R. Evans , and G. Impallomeni . 2001. The structure of a polysaccharide from infectious strains of Burkholderia cepacia. Carbohydr . Res . 335, 45-54.
30. Liu , C., M. Y. K. Leung , J. C. M. Koon , L. F. Zhu , Y. Z. Hui , B. Yu , and K. P. Fung . 2006. Macrophage activation by polysaccharide biological response modifier isolated from Aloe vera L. var. chinensis (Haw.) Berg. Int . Immunopharmacol. 6, 1634-1641.
31. Loac , M., R. Olier , and J. Guezennec. 1997. Uptake of lead, cadmium, and zinc by a novel bacterial exopolysacchidrie. Wat. Res. 31, 1171-1179.
32. Marshall , V. M., H. Dunn , M. Elvin , N. McLay , Y. Gu , and A. P. Laws . 2001. Structural characterization of the exopolysaccharide produced by Streptococcus thermophilus EU20. Carbohyd . Res . 331, 413-422.
33. Masuko , T., A. Minami , N. Iwasaki , T. Majima , S. I. Nishimura , and Y. C. Lee. 2005. Carbohydrate analysis by a phenol-sulfuric and method in microplate format. Anal . Biochem. 339, 69-72.
34. McKeller , R.C., J. van Geest and W. Cui . 2003. Influence of culture and environmental conditions on the compositiom of exopolysaccharide produced by Agrobacterium radiobacter. Food Hydrocolloides 17, 429-437
35. Morin . A. 1998. Screening of polysaccharide-producing microorganism, factors influencing the production and recovery of microbial polysaccharides. In: Polysaccharides-Structural Diversity and Functional Versatility. Dumitriu, S. (Ed.), Marcel Dekker Inc. Publication, New York, p. 275-296.
36. Nakajima , H., S. Toyoda , T. Toda , T. Itoh , T. Mukai , H. Kitazawa , and S. Adachi . 1990. A novel phosphopolysaccharide from slime-forming Lactococcus lactis subspecies cremoris SBT 0495. J. Dairy Sci. 73, 1472-1477.
37. Nishimura (- Uemura ), J., H. Kitazawa , Y. Kawai ., T. Itoh , M. Oda , and T. Saito . 2003. Functional alteration of murine macrophages stimulated with extracellular polysaccharides from Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus OLL1073R-1. Food Microbiol . 20, 267-273.
38. Okutani , K. 1984. Antitumor and immunostimulant activities of polysaccharides produced by a marine bacterium of the genus Vibrio. Bull . Jap . Soc . Sci . Fish. 50, 1035-1037.
39. Okutani , K. 1992. Antiviral activities of sulfated derivatives of a fucosamine-containing polysaccharide of marine bacterial origin. Nippon Suisan Gakkaishi 58, 927-930.
40. Ozdemir , G., N. Ceyhan , and E. Manav . 2005. Utilization of an exopolysaccharide produced by Chryseomonas luteola TEM05 in alginate beads for adsorption of cadmium and cobalt ions. Biores . Technol. 96, 1677-1682.
41. Ramus , J. 1977. Alcian blue: A quantitative aqueous assay for algal and sulfated polysaccharides. J. Phycol. 13, 345-348.
42. Roberts , C. M., W. F. Fett , S. F. Osman , C. Wijey , J. V. O'Connor , and D. G. Hoover . 1995. Exopolysaccharide production by Bifidobacterium longum BB-79. J. Appl . Bacteriol. 78, 463-468.
43. Ryu , J. E. and Y. N. Lee . 2009. Optimizing culture condition of MK1 strain isolated from soft-rotten tissue of Neungee mushroom and its exopolysaccharide. Kor . J. Microbiol . 45, 324-331.
44. Sanchez - Medina , I., G. J. Gerwig , Z. L. Urshev , and J. P. Kamerling . 2007. Structure of a neutral exopolysaccharide produced by Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus LBB.B26. Carbohydr . Res . 342, 2430-2439.
45. Shimada , A., H. Nakata , and I. Nakamura . 1997. Acidic exopolysaccharide produced by Enterobacter sp. J. Ferment . Bioeng . 84 , 113-118.
46. Silva , F. R. A. L. Vettore , E. L. Kemper , A. Leite , P. Arruda . 2001. Fastidian gum: the Xylella fastidiosa exopolysaccharide possibly involved in bacterial pathogenicity. FEMS Microbiol . Lett. 203, 165-171.
47. Sutherland , I. W. 1972. Bacterial exopolysaccharides. Adv . Microbiol . Physiol . 8, 143-213.
48. Sutherland , I. W. 1998. Novel and established applications of microbial polysaccharides. Tibtech . 16, 41-46.
49. Sutherland , I. W. 2001. Biofilm exopolysaccharides: A strong and sticky framework. Microbiology 147, 3-9.
50. Tallon , R., P. Bressollier , and M. C. Urdaci. 2003. Isolation and characterization of two exopolysaccharides produced by Lactobacillus plantarum EP56. Res . Microbiol . 154, 705-712.
51. Van den Berg , D. J. C., G.W. Robijn , A. C. Janssen , M. L. F. Giuseppin , R. Vreeker , J. P. Kamerling , J. F. G. Vliegenthart , A. M. Ledeboer , and C. T. Verrips . 1995. Production of a novel extracellular polysaccharide by Lactobacillus sake 0-1 and characterization of the polysaccharide. Appl . Environ . Microbiol. 61, 2840-2844.
52. Vermani , M. V., S. M. Kelkar , and M. Y. Kamat . 1995. Production and optimization of certain growth parameters for an exopolysaccharide from Azotobacter vinelandii MTCC 2460 isolated from a plant rhizosphere. J. Ferment. Bioeng . 80, 599-602.
53. Wang , H., X. Jiang , H. Mu , X. Liang , and H. Guan . 2007. Structure and protective effect of exopolysaccharide from P. Agglomerans strain KFS-9 against UV radiation. Microbiol . Res . 162, 124-129.
54. Welman , A. D. and I. S. Maddox . 2003. Exopolysaccharides from lactic acid bacteria: perspectives and challenges. Trends Biotechol . 21, 269-274
55. Yang , T., M. Jia , J. Meng , H. Wu , and Q. Mei . 2006. Immunomodulatory activity of polysaccharide isolated from Angelica sinensis. Int . J. Biol . Macromol . 39, 179-184.
56. Yim , J. H., S. J. Kim , S. H. An , and H. K. Lee . 2004. Physicochemical and rheological properties of a novel emulsifier, EPS-R, produced by the marine bacterium Hahella chejuenesis. Biotech . Biopro . Eng . 9, 405-413.
57. Yoo , S. H., E. J. Yoon , J. Cha , and H. G. Lee . 2004. Antitumor activity of levan polysaccharides from selected microorganisms. Int . J. Biol . Macromol. 34, 37-41.
58. 왕문하. 능이버섯 무름병소에서 분리한 MK1 균주의 체외다당류 특성. 충북대학교 이학석사학위 논문. 2010. 8.
한국생명공학연구원 KCTC11802BP 20101115

Claims (3)

  1. 다음과 같은 세균학적 특성
    Gram Staining Gram (-)
    Cell Shape Tapered-end rod
    Cell Size 0.8 × 2.0 ㎛
    Colony morphology White, mocoid, yellow center
    Optimal growth temp 30℃
    Oxygen requirement Aerobic
    Motility +
    Catalase +
    Oxidase _
    Voges-Proskauer test +
    Acid production from
    Cellobiose -
    Lactose +
    D-Rhamnose +
    L-Rhamnose ?
    Sucrose +
    Adonitol +
    m-Inositol +
    D-Sorbitol +
    Gelatin hydrolysis +
    Hydrolysis of Tween 80 +
    ONPG text(β-glactosidase) _
    Mol% G+C of DNA 47.9

    및 다음의 생화학적 특성을 가지며,

    H2S Production _
    Utilization of
    Adonitol -
    L-Arabitol -
    D-Manitol +
    D-Sorbitol -
    D-Cellobiose -
    D-Glucose +
    D-Maltose -
    D-Mannose +
    Sucrose -
    D-Tagatose -
    D-Trehalose +
    Citrate(Sodium) +
    Malonate +
    5-Keto-D-Glucnate -
    Coumarate +
    Fermentation glucose +
    Enzyme activity
    Lipase +
    Urease -
    Phosphatase +
    α-Galactosidase -
    β-Galactosidase -
    α-Glucosidase +
    β-Glucosidase -
    β-Xylosidase -
    γ-Glutamyl-transferase -
    β-N-Acetyl-glucosiminidase +
    β-N-Acetyl-galactosaminidase +
    Ornithine decarbosylase -
    Lysine decarboxylase -
    Tyrosine arylmidase -
    L-Proline arylamidase +
    L-Lactate alkalinisation +

    거식세포의 면역조절 생리활성을 항진하는 체외 다당류 물질을 생산하는 것을 특징으로 하며 수탁번호 KCTC 11802BP호로 한국과학생명공학원에 기탁된 신균주 린박터 사르코도니아 엠케이1(Lynbacter sarcodonia MK1).
  2. 린박터 사르코도니아 MK1(Lynbacter sarcordonia MK1) 균주(수탁번호: KCTC 11802BP)를 배양하고, 이 균주가 생산하여 체외로 분비하는 체외다당류 물질을 분리 및 정제하는 방법.
  3. 린박터 사르코도니아 MK1(Lynbacter sarcordonia MK1) 균주(수탁번호: KCTC 11802BP)가 생산한 체외다당류의 면역조절 기능으로서의 용도.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109133356A (zh) * 2018-09-12 2019-01-04 浙江海洋大学 一种利用滤食生物除藻的方法

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CN109133356A (zh) * 2018-09-12 2019-01-04 浙江海洋大学 一种利用滤食生物除藻的方法

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