KR20120092531A - Composition for improving allergy disease using wheat bran - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A composition for treating allergic diseases using wheat bran extract is provided to suppress beta-hexosaminidase generation and to ensure anti-allergic effect. CONSTITUTION: A composition for treating allergic diseases contains wheat bran extract as an active ingredient. A method for preparing the wheat bran extract comprises a step of dipping wheat bran in water, alcohol of 1-4 carbon atoms, or a mixture solvent thereof or a step o f fractioning the extract with two or more solvents among water, alcohol of 1-4 carbon atoms, or a mixture solvent thereof. The composition is a pharmaceutical or food composition. The daily dose of the pharmaceutical composition is 0.001-150 mg/kg(body weight).

Description

밀겨 추출물을 이용한 알러지성 질환의 개선제 조성물{Composition for Improving Allergy Disease Using Wheat Bran}Composition for improving allergic diseases using wheat bran extract {Composition for Improving Allergy Disease Using Wheat Bran}

본 발명은 밀겨 추출물을 이용한 알러지성 질환의 개선제 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for improving allergic diseases using wheat bran extract.

알러지(allergy)란 일반적으로 이물질인 알러지원(allergen)에 의해 면역학적 기전을 통해 야기되는 반응으로 신체에 해로운 손상을 유발하는 현상을 말한다.Allergy is a reaction caused by immunological mechanisms caused by allergen, which is a foreign substance, which generally causes harmful damage to the body.

알러지 반응은 비만세포를 매개로 일어나는데, 비만세포는 피부, 호흡기, 위장관의 점막, 임파관 주위, 혈관 주위, 뇌 등 전신의 장기에 널리 분포하며, 알러지 반응의 원인 세포로서 알려져 있다.Allergic reactions are mediated by mast cells, which are widely distributed in organs of the whole body such as the skin, respiratory organs, mucous membranes of the gastrointestinal tract, around lymphatic vessels, around blood vessels, and in the brain, and are known as cells causing allergic reactions.

알러지 반응은 집먼지진드기, 꽃가루, 동물 비듬, 곰팡이, 난알부민, 우유단백질, 땅콩 등의 알러지원에 대항하기 위하여 생성된 IgE가 비만세포에 작용함으로써 야기된다(Wills-Karp M., et al., Science, 282, pp 2258-61, 1998; Grunig G., et al., Science, 282, pp 2261-2263, 1998). The allergic reaction is caused by the action of IgE on mast cells against house dust mites, pollen, animal dander, mold, egg albumin, milk proteins, and peanuts (Wills-Karp M., et al., Science, 282, pp 2258-61, 1998; Grunig G., et al., Science, 282, pp 2261-2263, 1998).

이를 구체적으로 살펴보면, 알러지원이 생체에 침입하면 알러지원은 먼저 항원제시세포에 의해 인지되며, 이 항원제시세포는 IL-4 존재하에서 알러지원 제시를 통해 Th0를 Th2 세포로 분화시켰다. 이렇게 분화된 Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-13와 같은 사이토카인을 분비하는데, IL-4, IL-5 등이 B세포에 작용하여 IgE의 생성을 유도한다.Specifically, when allergens invade a living body, allergens are first recognized by antigen-presenting cells, and these antigen-presenting cells differentiated Th0 into Th2 cells by presenting allergens in the presence of IL-4. These differentiated Th2 cells secrete cytokines such as IL-4, IL-5, IL-13, IL-4, IL-5 and the like act on B cells to induce the production of IgE.

이렇게 생성된 IgE는 비만세포의 고친화도 IgE 수용체인 FcεRⅠ에 결합하는데, 이후 동일한 알러지원에 재차 노출되면 알러지원이 비만세포의 FcεRⅠ와 결합된 IgE에 결합하여 이들 수용체들의 교차결합을 일으키고, 이것이 신호로서 작용하여 일련의 신호전달 반응이 진행되게 된다.The generated IgE binds to the high-affinity IgE receptor FcεRⅠ of mast cells, and then, when exposed to the same allergen, allergens bind to IgE bound to the mast cells' FcεRⅠ and cause cross-linking of these receptors. It acts as a series of signaling reactions.

이 신호전달 반응을 통해서 활성화된 비만세포는 히스타민(histamine), 프로테오글리칸, 프로테아제, 루코트리엔(Leukotrien), 프로스타클라딘(Prostaglandin), 사이토카인 등을 탈과립에 의하여 분비하거나 새로 합성하여 분비함으로써 혈관 확장이나 투과성의 항진, 신경종말의 자극, 점액 분비의 항진, 평활근의 수축 등 일련의 알러지 반응을 매개한다.Mast cells activated through this signaling reaction secrete histamine, proteoglycans, proteases, leukotrien, prostaglandin, and cytokines by degranulation or newly synthesized It mediates a series of allergic reactions, such as vasodilation, permeability hyperstimulation, nerve ending stimulation, mucus secretion, and smooth muscle contraction.

항히스타민제, 류코트리엔 길항제, 항-IgE 항체, IgE의 합성과 분비를 저해하는 물질(예컨대 미국 특허 제6,369,091호가 개시하는 디아실벤지미다졸 동족체 등) 등이 알러지성 증상을 개선할 수 있다는 사실이 상기 기작을 뒷받침한다. The fact that antihistamines, leukotriene antagonists, anti-IgE antibodies, substances that inhibit the synthesis and secretion of IgE (such as diacylbenzimidazole homologues disclosed in US Pat. No. 6,369,091, etc.) may improve allergic symptoms. Support the mechanism.

이처럼 알러지 반응이 비만세포의 탈과립 등 비만세포의 활성화에 의해 야기되므로, 비만세포의 활성화를 억제하는 물질은 알러지성 질환의 치료제로 활용될 수 있다(J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 48(4), 315-321 (2005)).Since the allergic reaction is caused by activation of mast cells such as degranulation of mast cells, a substance that inhibits activation of mast cells can be used as a therapeutic agent for allergic diseases (J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 48 (4), 315-321 (2005)).

본 발명은 밀겨 추출물이 비만세포의 활성화를 억제함을 확인함으로써 완성된 것이다.The present invention is completed by confirming that wheat bran extract inhibits the activation of mast cells.

본 발명의 목적은 알러지성 질환의 개선제 조성물을 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to provide a composition for improving allergic diseases.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.Other and specific objects of the present invention will be presented below.

본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 밀겨 추출물을 IgE 및 항원(DNP-BSA)으로 활성화시킨 비만세포주 RBL-2H3(rat basophilic leukemia)에 처리한 결과, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 생성이 억제됨을 확인할 수 있었다. 상기 비만세포주인 RBL-2H3는 그 표면에 IgE 항체의 수용체(FcεRI)를 갖고 있어 IgE와 항원으로 활성화되면 탈과립 등에 의하여 히스타민 등의 알러지 반응의 매개물질을 분비하는 것으로 알려져 있는 세포이며, 베타-헥소사미니다아제는 탈과립의 지표 물질로 알려져 있는 물질이다(J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 48(4), 315-321 (2005)). The inventors of the present invention, as confirmed in the following Examples and Experimental Examples, after treatment with mast cell line RBL-2H3 (rat basophilic leukemia) activated with IgE and antigen (DNP-BSA), beta- hexosamini It was confirmed that the production of the enzyme (β-hexosaminidase) is inhibited. The mast cell line RBL-2H3 has a receptor of IgE antibody (FcεRI) on its surface, and when activated with IgE and antigen, it is a cell known to secrete allergic mediators such as histamine by degranulation. Sosaminidase is a substance known as an indicator of degranulation (J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 48 (4), 315-321 (2005)).

특히 밀겨 추출물은 알러지 치료제의 개발에 자주 이용되는 수동 피부 과민증(Passive Cutaneous Anaphylaxis, PCA) 동물실험에 있어서도 농도 의존적으로 항알러지 활성을 나타내었다.In particular, wheat bran extract showed anti-allergic activity in a dose-dependent manner in passive cutaneous anaphylaxis (PCA) animal experiments, which are frequently used for the development of allergic drugs.

본 발명의 알러지성 질환의 개선제 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 완성된 것으로서, 밀겨 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.The allergic disease improver composition of the present invention is completed based on the results of these experiments, and is characterized by including wheat bran extract as an active ingredient.

본 명세서에서, 상기 "밀겨"은 밀(wheat)을 도정하는 과정에서 얻어지는 부산물을 의미한다. 이러한 부산물은 통상 밀가루가 되는 배유를 제외하고 과피와 배아로 구성되게 된다.In the present specification, the "branch" means a by-product obtained in the process of milling wheat. These by-products usually consist of the rind and the embryo, except for the endosperm, which becomes flour.

또 본 명세서에서, 상기 "추출물"이란 추출 방법을 불문하고 추출 대상인 밀겨를 증류수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합 용매에 침지시켜 추출하여 얻어진 조추출물과 그 조추출물을 상기 열거된 용매로 분획된 추출물을 포함하는 의미로서 이해된다. 추출 방법을 불문하므로, 추출 대상을 추출 용매에 침지시키는 단계를 통하여 추출되는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 조추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 다른 극성의 용매와 혼합?정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 소수성 레진이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 상기 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 사용될 수 있는 소수성 레진은 예컨대 Amberlite XAD-2™, 아래의 실시예에 사용된 Diaion HP-20™ 등 시판되는 것 중에서 적절히 선택될 수 있다. 상기 추출물의 의미에는 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. In the present specification, regardless of the extraction method, the "extract" is obtained by immersing the wheat bran to be extracted by immersing it in water containing distilled water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, butanol, or a mixed solvent thereof. Crude extracts and their crude extracts are understood as meaning including extracts fractionated with the solvents listed above. Regardless of the extraction method, as long as the extraction object is extracted through the step of immersing in the extraction solvent, the extraction method may be any method such as cooling, refluxing, heating, ultrasonic radiation, and the like. In the case of the fractionated extract, the crude extract is suspended in a specific solvent, mixed with the solvent of different polarity and fixed, and the crude extract is adsorbed onto a column filled with hydrophobic resin. It is meant to include. Hydrophobic resins that can be used can be appropriately selected from among commercially available products such as Amberlite XAD-2 ™, Diaion HP-20 ™ used in the examples below. The meaning of the extract includes a concentrated liquid extract or solid extract from which the extraction solvent is removed.

또 본 명세서에서, 상기 "유효성분"의 의미는 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.In addition, in the present specification, the meaning of the "active ingredient" means a component that can exhibit activity alone or in combination with a carrier that is not active alone.

또 본 명세서에서, 상기 "알러지성 질환"은 비만세포의 탈과립 등 비만세포의 활성화에 의하여 야기되는 알러지 반응으로 인하여 초래되는 임상적 증상을 의미하는데, 이러한 임상적 증상에는 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 습진, 소양(搔痒), 화분증, 천식, 기관지염, 두드러기, 혈관염, 비염, 위장증, 설사, 간질성 폐렴, 관절염, 안염, 결막염, 신경염, 중이염, 육아종증, 뇌척수염, 방광염, 후두염, 자반병(紫斑病), 음식물 알러지, 곤충 알러지, 약물 알러지, 금속 알러지, 아나필락시성 쇼크(anaphylactic shock) 등이 포함된다(Bierman CW, et al. (eds.) Allergy, asthma, and immunology from infancy to adulthood. page xvii, Saunders, Philadelphia, 1996).In the present specification, the "allergic disease" is caused by activation of mast cells such as degranulation of mast cells. Refers to clinical symptoms caused by allergic reactions, which may include contact dermatitis, atopic dermatitis, eczema, pruritus, hay fever, asthma, bronchitis, urticaria, vasculitis, rhinitis, gastroenteritis, diarrhea, Interstitial pneumonia, arthritis, ophthalmitis, conjunctivitis, neuritis, otitis media, granulomatosis, encephalomyelitis, cystitis, laryngitis, purpura, food allergy, insect allergy, drug allergy, metal allergy, anaphylactic shock (Bierman CW, et al. (Eds.) Allergy, asthma, and immunology from infancy to adulthood. Page xvii, Saunders, Philadelphia, 1996).

또 본 명세서에서, 상기 "개선"이란 병리적 증상의 예방, 치료, 발병 억제, 또는 지연을 의미한다.In addition, in the present specification, the "improvement" means the prevention, treatment, inhibition of onset, or delay of pathological symptoms.

한편 본 발명의 조성물은 그 유효성분인 밀겨 추출물을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 알러지성 질환의 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게서, 알러지성 질환의 개선, 치료, 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
Meanwhile, the composition of the present invention may include wheat bran extract as an active ingredient in any amount (effective amount) as long as it can exhibit improvement activity of allergic diseases intended to be treated according to use, formulation, formulation purpose, etc. Effective amounts will be determined within the range of 0.001% to 15% by weight, based on the total weight of the composition. An "effective amount" as used herein refers to an amount of an active ingredient in a mammal, preferably a human subject to which it is applied, that can induce improvement, treatment, or suppression / delay of the development of such pathological symptoms. Such effective amounts can be determined experimentally within the range of ordinary skill in the art.

*다른 측면에 있어서, 본 발명은 밀겨 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 개선제 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to an inflammatory disease improving composition comprising wheat bran extract as an active ingredient.

IgE 및 그것의 항원에 의하여 활성화된 비만세포는 탈과립에 의하여 알러지 반응을 일으키는 히스타민 등을 분비할 뿐만 아니라 TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, INF-γ 등의 사이토카인을 합성하고 분비한다. TNF-α, IL-1β, IL-6 등은 대표적인 염증성 사이토카인이다. 이 염증성 사이토카인은 세포 독성과 각종 염증 반응을 일으키는 NO를 생성하는 iNOS의 발현과 염증과 통증에 관여하는 COX-2의 발현을 유도한다. 또한 IL-3, IL-5, IL-13 등은 만성 알러지성 염증을 매개하는 호산구의 침윤과 활성화를 일으키는 것으로 알려져 있다(Erb KJ., Immunol. Today, 20, pp 317-322, 1999; Rothenberg ME., Eosinophilia., N. Engl. Med. , 338, pp 1592-1600, 1998).IgE and its antigen-activated mast cells not only secrete histamine, which causes allergic reactions by degranulation, but also TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, Cytokines such as INF-γ are synthesized and secreted. TNF-α, IL-1β, IL-6 and the like are representative inflammatory cytokines. This inflammatory cytokine induces the expression of iNOS, which produces NO that causes cytotoxicity and various inflammatory responses, and the expression of COX-2, which is involved in inflammation and pain. IL-3, IL-5 and IL-13 are also known to cause infiltration and activation of eosinophils that mediate chronic allergic inflammation (Erb KJ., Immunol. Today, 20, pp 317-322, 1999; Rothenberg ME., Eosinophilia., N. Engl. Med., 338, pp 1592-1600, 1998).

아래의 실험예는 밀겨 추출물이 활성화된 비만세포의 염증성 사이토카인의 생성을 억제할 뿐만 아니라 iNOS 발현과 COX-2의 발현을 억제함을 보여준다. 그리고 염증성 사이토카인의 전사인자인 NF-κB의 생성 억제 활성과 NF-κB의 활성화에 관여하는 MAPK(mitogen-activated protein kinase)(ERK, JNK 및 p-38)의 생성 억제 활성을 보여준다.The following experimental example shows that wheat bran extract not only inhibits the production of inflammatory cytokines in activated mast cells but also inhibits iNOS expression and COX-2 expression. In addition, the inhibitory activity of NF-κB, an inflammatory cytokine transcription factor, and the inhibitory activity of mitogen-activated protein kinase (MAPK) (ERK, JNK and p-38), which are involved in the activation of NF-κB, are shown.

이러한 실험 결과는 밀겨 추출물이 염증성 질환의 개선제로서도 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이라 할 수 있다.These experimental results show that wheat bran extract can be usefully used as an inflammatory disease ameliorator.

본 명세서에서, 상기 "염증성 질환"이란 외부의 물리?화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알러지 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 어떠한 상태로서 정의될 있다. 이러한 반응은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(예컨대 iNOS, COX-2 등) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(예컨대, NO, TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE2의 분비), 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알러지성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알러지성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로 상기 염증성 질환에는 천식, 알러지성 및 비-알러지성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두퐁, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염(아토피성 피부염 포함), 습진, 다발성 경화증 등이 포함될 것이다. In the present specification, the "inflammatory disease" may be defined as any condition specified by a local or systemic biological defense response against external physical and chemical stimuli or infection of an external infectious agent such as bacteria, fungi, viruses, and various allergens. This response activates various inflammatory mediators and enzymes associated with immune cells (eg iNOS, COX-2, etc.), secretion of inflammatory mediators (eg NO, TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE 2) . ), Accompanied by a series of complex physiological reactions such as fluid infiltration, cell migration, tissue destruction, etc., and are manifested externally by symptoms such as erythema, pain, edema, fever, deterioration or loss of certain functions of the body. The inflammatory disease may be acute, chronic, ulcerative, allergic or necrotic, so as long as any disease is included in the definition of such inflammatory disease it is acute, chronic, ulcerative, allergic or Irrespective of necrosis Specifically, the inflammatory diseases include asthma, allergic and non-allergic rhinitis, chronic and acute rhinitis, chronic and acute gastritis or enteritis, ulcerative gastritis, acute and chronic nephritis, acute and chronic hepatitis, chronic obstructive pulmonary disease, pulmonary fibrosis Irritable bowel syndrome, inflammatory pain, migraines, headache, back pain, fibromyalgia, fascia disease, viral infections (eg, type C infections), bacterial infections, fungal infections, burns, surgical or dental wounds, Prostaglandin E excess syndrome, atherosclerosis, gout, arthritis, rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, Hodgkin's disease, pancreatitis, conjunctivitis, irisitis, scleritis, uveitis, dermatitis (including atopic dermatitis), eczema, multiple sclerosis, etc. Will be included.

본 발명의 염증성 질환의 개선제 조성물에 있어서, 밀겨 추출물의 의미, 유효량 등과 관련하여서는 상기 본 발명의 알러지성 질환의 개선제 조성물과 관련하여 설명한 바가 그대로 유효하다. In the improving composition of the inflammatory disease of the present invention, the meaning, effective amount, etc. of the extract of wheat bran is effective as it is described with respect to the improving composition of the allergic disease of the present invention.

본 발명의 알러지성 질환의 개선제 조성물과 염증성 질환의 개선제 조성물(이하 "본 발명의 조성물")은 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.The allergic disease improver composition of the present invention and the inflammatory disease improver composition (hereinafter “composition of the present invention”) may be used as pharmaceutical compositions in specific embodiments.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분인 밀겨 추출물을 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention includes oral formulations (tablets, suspensions, granules, emulsions, capsules, syrups, etc.), parenteral formulations (sterile), in addition to bran extract, which is an active ingredient, in addition to pharmaceutically acceptable carriers, excipients, and the like. Aqueous or oily suspensions for injection), topical formulations (solutions, creams, ointments, gels, lotions, patches) and the like.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다 의미이다.As used herein, "pharmaceutically acceptable" means that the subject of application (prescription) does not have more toxicity (adequately low toxicity) to which the subject of application (prescription) is adaptable without inhibiting the activity of the active ingredient.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등) 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.Examples of pharmaceutically acceptable carriers include lactose, glucose, sucrose, starch (such as corn starch, potato starch, etc.), cellulose, derivatives thereof (such as sodium carboxymethyl cellulose, ethylcellulose, etc.) malt, gelatin, talc, solids Lubricants (e.g. stearic acid, magnesium stearate, etc.), calcium sulfate, vegetable oils (e.g. peanut oil, cottonseed oil, sesame oil, olive oil, etc.), polyols (e.g. propylene glycol, glycerin, etc.), alginic acid, emulsifiers (e.g. TWEENS), wetting agents (e.g. Sodium lauryl sulfate), colorants, flavoring agents, tableting agents, stabilizers, antioxidants, preservatives, water, saline, phosphate buffer solutions and the like. The carrier may be selected from one or more of suitable pharmaceutical formulations according to the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.Excipients may be selected and used according to the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention, for example, when the pharmaceutical composition of the present invention is prepared with an aqueous suspending agent, suitable excipients are sodium carboxymethyl cellulose, methyl cellulose, hydropropylmethylcellulose And suspending agents and dispersing agents such as sodium alginate and polyvinylpyrrolidone. Suitable excipients when prepared from injection solutions include Ringer's solution, isotonic sodium chloride, and the like.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 경우에 따라서는 국소적으로 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and in some cases, can be administered topically.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다. The daily dose of the pharmaceutical composition of the present invention is usually 0.001 to 150 mg / kg body weight, and may be administered once or several times. However, since the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is determined in view of various related factors such as the route of administration, the age, sex, weight of the patient, the severity of the patient and the like, the dosage may limit the scope of the present invention in any aspect. It should not be understood as.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.The composition of this invention can be grasped | ascertained as a food composition in another specific aspect.

본 발명의 식품 조성물은 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등으로 제조될 수 있다.The food composition of the present invention may be prepared as a dietary supplement, a special nutritional supplement, a functional beverage, and the like.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.The food composition of the present invention may include sweeteners, flavoring agents, bioactive ingredients, minerals, etc. in addition to the active ingredients.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다. Sweeteners may be used in amounts that give the food a suitable sweet taste, and may be natural or synthetic. Preferably, natural sweeteners are used. Examples of natural sweeteners include sugar sweeteners such as corn syrup solids, honey, sucrose, fructose, lactose and maltose.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다. Flavoring agents can be used to enhance the taste or aroma, both natural and synthetic. Preferably, a natural one is used. When using natural ones, the purpose of nutritional fortification can be performed in addition to the flavor. The natural flavor may be obtained from apples, lemons, citrus fruits, grapes, strawberries, peaches, and the like, or may be obtained from green tea leaves, round leaves, jujube leaves, cinnamon, chrysanthemum leaves, jasmine and the like. Also, those obtained from ginseng (red ginseng), bamboo shoots, aloe vera, banks and the like can be used. The natural flavoring agent may be a liquid concentrate or a solid form of extract. In some cases, synthetic flavoring agents may be used, and synthetic flavoring agents may include esters, alcohols, aldehydes, terpenes, and the like.

생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.As the physiologically active substance, catechins such as catechin, epicatechin, gallocatechin, epigallocatechin, vitamins such as retinol, ascorbic acid, tocopherol, calciferol, thiamine, riboflavin, and the like can be used.

미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.As minerals, calcium, magnesium, chromium, cobalt, copper, fluoride, germanium, iodine, iron, lithium, magnesium, manganese, molybdenum, phosphorus, potassium, selenium, silicon, sodium, sulfur, vanadium, zinc and the like can be used.

또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다. In addition, the food composition of the present invention may contain a preservative, an emulsifier, an acidulant, a thickener, and the like, in addition to the sweetener.

이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.Such preservatives, emulsifiers and the like are preferably added and used in very small amounts as long as the use to which they are added can be achieved. By trace amount is meant numerically expressed in the range of 0.0005% to about 0.5% by weight based on the total weight of the food composition.

사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다. Examples of preservatives that can be used include sodium sorbate, sodium sorbate, potassium sorbate, calcium benzoate, sodium benzoate, potassium benzoate, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), and the like.

사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.Emulsifiers that can be used include acacia gum, carboxymethylcellulose, xanthan gum, pectin and the like.

사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.Examples of acidulants that may be used include lead acid, malic acid, fumaric acid, adipic acid, phosphoric acid, gluconic acid, tartaric acid, ascorbic acid, acetic acid, phosphoric acid, and the like. Such acidulant may be added so that the food composition is at an appropriate acidity for the purpose of inhibiting the growth of microorganisms in addition to the purpose of enhancing taste.

사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.Thickeners that can be used include suspending implements, sedimenters, gel formers, swelling agents and the like.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 알러지성 질환의 개선제 조성물을 제공할 수 있다. 또한 본 발명에 따르면 염증성 질환의 개선제 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 알러지성 질환의 개선제 조성물과 염증성 질환의 개선제 조성물은 약품이나 기능성 식품으로 제품화될 수 있다. As described above, according to the present invention, it is possible to provide a composition for improving allergic diseases. In addition, according to the present invention can provide a composition for improving inflammatory diseases. The allergic disease improving composition and the inflammatory disease improving composition of the present invention can be commercialized as a drug or functional food.

도 1은 밀겨 추출물의 비만세포의 탈과립 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 2는 밀겨 추출물의 동물실험에서의 항알러지 활성을 보여주는 결과이다.
도 3은 밀겨 추출물의 비만세포에서의 사이토카인 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 4는 밀겨 추출물이 사이토카인의 전사 인자인 NF-κB의 발현을 억제함을 보여주는 결과이다.
도 5는 밀겨 추출물이 NF-κB의 활성화를 조절하는 MAPK 발현 억제 활성을 보여주는 결과이다.1 is a result showing the degranulation inhibitory activity of mast cells of wheat bran extract.
Figure 2 is a result showing the anti-allergic activity in animal experiments of wheat bran extract.
Figure 3 is a result showing the cytokine production inhibitory activity in mast cells of wheat bran extract.
Figure 4 shows that wheat bran extract inhibits the expression of NF-κB transcription factor of cytokines.
5 is a result showing that the wheat bran extract MAPK expression inhibitory activity that regulates the activation of NF-κB.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples and Experimental Examples. However, the scope of the present invention is not limited to these examples and experimental examples.

<< 실시예Example > > 밀겨Push 추출물의 제조 Preparation of extract

밀겨(Red-dog) 200g을 2ℓ물에 넣고 6시간 열수 추출하였다. 열수 추출물을 여과시키고 그 여과액을 Diaion HP-20 레진이 충진된 칼럼에 넣고 100% 에탄올과 물을 이동상으로 하여 100% 에탄올을 통과한 샘플을 Red-dog A라 하였고, 물을 통과한 샘플을 Red-dog B라 명명하여 실험에 사용하였다.
200 g of Red-dog was placed in 2 L of water and extracted with hot water for 6 hours. The hot water extract was filtered and the filtrate was placed in a column filled with Diaion HP-20 resin, and 100% ethanol and water were used as the mobile phase, and the sample passed through 100% ethanol was called Red-dog A. Red-dog B was used for the experiment.

<< 실험예Experimental Example > > 항알러지Anti-allergy 활성 및 항염증 활성 실험 Activity and anti-inflammatory activity experiment

<< 실험예Experimental Example 1>  1> 비만세포주의 Mast cell 탈과립Degranulation 억제 활성 실험 - β- Inhibitory Activity Experiment-β- HexosaminidaseHexosaminidase assayassay

Rat basophlic leukemia 셀 라인인 RBL-2H3 세포주를 15% FBS, 100unit/ml의 페니실린과 스트렙토마이신을 포함하는 MEM 배지와 37℃, 5% CO2 조건에서 2X105/well의 세포수로 24시간 배양하였다. RBL-2H3 cell line, a rat basophlic leukemia cell line, was incubated with MEM medium containing 15% FBS, 100unit / ml penicillin and streptomycin for 24 hours at 2X10 5 / well at 37 ° C and 5% CO 2. .

상등액을 제거 후 25 ng/ml anti-DNP IgE 가 포함된 MEM 배지를 넣고 4시간 배양하였다. 배양 후 PIPES buffer (25mM PIPES, 119mM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl2, 0.4mM MgCl2, 40mM NaOH, 5.6mM glucose, 0.1% BSA)로 세척하고 10분 동안 전 배양하였다. 전 배양 후 실시예의 시료를 25, 50, 100 ㎍/ml의 농도로 20분간 처리 후 50ng/ml DNP-BSA 20분간 반응시켰다. 4℃에서 반응을 종결시킨 후 상등액을 25 ㎕씩 96 웰 플레이트에 넣고, 1mM P-니트로페닐-아세틸-β-D-글루코사미니드를 25 ㎕ 넣은 후 37℃에서 1시간 반응시켰다. 0.1M citrate buffer를 넣고 반응을 종결시킨 후 405 nm 파장대에서 ELISA 리더로 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다.After removing the supernatant, MEM medium containing 25 ng / ml anti-DNP IgE was added and incubated for 4 hours. After incubation, washed with PIPES buffer (25mM PIPES, 119mM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl 2 , 0.4mM MgCl 2 , 40mM NaOH, 5.6mM glucose, 0.1% BSA) and incubated for 10 minutes. After pre-culture, the sample of Example was treated for 20 minutes at a concentration of 25, 50, 100 μg / ml, and reacted for 20 minutes at 50 ng / ml DNP-BSA. After the reaction was terminated at 4 ° C., 25 μl of the supernatant was put in a 96 well plate, and 25 μl of 1 mM P-nitrophenyl-acetyl-β-D-glucosamide was added and reacted at 37 ° C. for 1 hour. 0.1M citrate buffer was added to terminate the reaction, and the absorbance was measured with an ELISA reader at 405 nm wavelength. Ketotifen (100 μg / ml) was used as a positive control.

결과를 <도 1>에 나타내었는데, 실시예의 시료는 모두 농도 의존적으로 탈과립을 억제함을 알 수 있으며, 동일한 처리 농도에서 양성대조군인 ketotifen과 유사한 활성을 보였다. The results are shown in FIG. 1, and all of the samples of Example showed inhibition of degranulation in a concentration-dependent manner, and showed similar activity to ketotifen, a positive control group, at the same treatment concentration.

< 실험예 2> 알러지 동물 모델을 이용한 항알러지 활성 실험 - 수동 피부 과 민증(PCA) 실험 <Experiment 2>, wherein the allergy animal model using experimental allergic activity - Passive Cutaneous and minjeung (PCA) test

수동적인 피부 알러지 반응은 anti-DNP IgE (0.5 ㎍/site)를 ICR mouse 피내 주입하여 피부를 감작시킨 후 48시간 후 실시예의 시료(Red-dog A)를 경구 투여하고 대조군인 ketotifen (100 mg/kg)은 복강 투여하였다. 1시간 후 4% Evans blue와 DNP-BSA를 1:1로 섞은 용액을 쥐의 꼬리 정맥을 통하여 주사하였다. 1시간 후 실험동물을 촬영하여 <도 2>에 나타내었다. <도 2>를 참조하여 보면 육안으로도 실시예의 시료의 투여 용량에 따라 알러지를 일으키는 물질과 반응하는 색소의 양이 감소함을 알 수 있다. Passive skin allergic reaction was performed by intradermal injection of anti-DNP IgE (0.5 μg / site) into ICR mouse sensitized skin 48 hours after oral administration of the sample (Red-dog A) of the example and the control ketotifen (100 mg / kg) was administered intraperitoneally. After 1 hour, a 1: 1 mixture of 4% Evans blue and DNP-BSA was injected through the tail vein of the rat. After 1 hour, the experimental animals were photographed and shown in FIG. 2. Referring to FIG. 2, it can be seen that the amount of pigment reacting with the substance causing allergy decreases with the naked eye according to the dose of the sample of the example.

<< 실험예Experimental Example 3>  3> 사이토카인의 생성 억제 활성 실험 - Inhibitory Activity of Cytokine Production- RTRT PCRPCR

RBL-2H3 세포를 1X106/well로 6 well plate에 배양 후 25 ng/ml IgE를 넣은 후 4시간 반응시켰다. 그 이후 실시예의 시료 처리 후 50ng/ml DNP-BSA를 첨가하여 각각 37℃에서 20분씩 반응시켰다. PBS로 2번 세척 후 Trizol(Invitrogen)과 chloroform(Sigma)를 넣고 반응시켜 RNA를 분리하였다. 추출한 RNA를 이용하여 정량한 후 역전사 효소인 SuperscriptⅢ (Invitrogen)를 사용하여 역전사 연쇄중합반응에 의해 cDNA를 합성하였다. PCR 조건은 94℃ 45초, 55℃ 45초, 72℃ 1분 30초를 35 cycle 반응시켜 DNA를 증폭시켰다. 유전자의 발현 억제 효과를 agarose gel 상에서 비교하였다. 사용한 primer는 아래의 [표 2]와 같고 대조군 유전자는 GAPDH를 사용하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다.RBL-2H3 cells were incubated in 6 well plates at 1 × 10 6 / well and then 25 ng / ml IgE was added for 4 hours. Thereafter, 50 ng / ml DNP-BSA was added after the sample treatment in Example to react at 37 ° C. for 20 minutes. After washing twice with PBS, Trizol (Invitrogen) and chloroform (Sigma) were added and reacted to separate RNA. After quantification using extracted RNA, cDNA was synthesized by reverse transcriptase chain polymerization using Superscript III (Invitrogen), a reverse transcriptase enzyme. PCR conditions were amplified DNA by 35 cycles of 94 ℃ 45 seconds, 55 ℃ 45 seconds, 72 ℃ 1 minutes 30 seconds. Gene expression inhibition was compared on agarose gel. The primers used are shown in [Table 2] below, and the control gene was GAPDH. Ketotifen (100 μg / ml) was used as a positive control.

프라이머primer rTNF-αrTNF-α F: 5' CAC CAC GCT CTT CTG TCT ACT GAA C 3'(서열번호 1)F: 5 'CAC CAC GCT CTT CTG TCT ACT GAA C 3' (SEQ ID NO: 1) R: 5' CCG GAC TCC GTG ATG TCT AAG TAC T 3'(서열번호 2)R: 5 'CCG GAC TCC GTG ATG TCT AAG TAC T 3' (SEQ ID NO: 2) rIL-1brIL-1b F: 5' CAC CTC TCA AGC AGA GCA CAG 3'(서열번호 3)F: 5 'CAC CTC TCA AGC AGA GCA CAG 3' (SEQ ID NO: 3) R: 5' GGG TTC CAT GGT GAA GTC AAC 3'(서열번호 4)R: 5 'GGG TTC CAT GGT GAA GTC AAC 3' (SEQ ID NO: 4) rIL-4rIL-4 F: 5' ACC TTG CTT CAC CCT GTT C 3'(서열번호 5)F: 5 'ACC TTG CTT CAC CCT GTT C 3' (SEQ ID NO: 5) R: 5' TTG TGA GCG TGG ACT CAT TC 3'(서열번호 6)R: 5 'TTG TGA GCG TGG ACT CAT TC 3' (SEQ ID NO: 6) rIL-5rIL-5 F: 5' TGA GCA CAG TGG TGA AAG AGA C 3'(서열번호 7)F: 5 'TGA GCA CAG TGG TGA AAG AGA C 3' (SEQ ID NO: 7) R: 5' AAT CCA GGA AAT GCC TGG TC 3'(서열번호 8)R: 5 'AAT CCA GGA AAT GCC TGG TC 3' (SEQ ID NO: 8) rIL-6rIL-6 F: 5' GCC CTT CAG GAA CAG CTA TGA 3'(서열번호 9)F: 5 'GCC CTT CAG GAA CAG CTA TGA 3' (SEQ ID NO: 9) R: 5' TGT CAA CAA CAT CAG TCC CAA GA 3'(서열번호 10)R: 5 'TGT CAA CAA CAT CAG TCC CAA GA 3' (SEQ ID NO: 10) rIL-10rIL-10 F: 5' TAG AAG TGA TGC CCC AGG 3'(서열번호 11)F: 5 'TAG AAG TGA TGC CCC AGG 3' (SEQ ID NO: 11) R: 5' TCA TCC TCC ACC TGC TCC ACT GC 3'(서열번호 12)R: 5 'TCA TCC TCC ACC TGC TCC ACT GC 3' (SEQ ID NO: 12) rIL-11rIL-11 F: 5' TTG GTA CTT GGA GCG G 3'(서열번호 13)F: 5 'TTG GTA CTT GGA GCG G 3' (SEQ ID NO: 13) R: 5' CAC TGT GAA TAG ACT TCG T 3'(서열번호 14)R: 5 'CAC TGT GAA TAG ACT TCG T 3' (SEQ ID NO: 14) rIL-13rIL-13 F: 5' ACA GCT CCC TGG TTC TCT CA 3'(서열번호 15)F: 5 'ACA GCT CCC TGG TTC TCT CA 3' (SEQ ID NO: 15) R: 5' CCC CCA TTC ACT ACA CAT CA 3'(서열번호 16)R: 5 'CCC CCA TTC ACT ACA CAT CA 3' (SEQ ID NO: 16) rIFN-γrIFN-γ F: 5' AGG ACG GTA ACA CGA AA 3'(서열번호 17)F: 5 'AGG ACG GTA ACA CGA AA 3' (SEQ ID NO: 17) R: 5' CTG TGG TTG TTC ACC TC 3'(서열번호 18)R: 5 'CTG TGG TTG TTC ACC TC 3' (SEQ ID NO: 18) rCOX-2rCOX-2 F: 5' TGT ATG CTA CCA TCT GGC TTC GG 3'(서열번호 19)F: 5 'TGT ATG CTA CCA TCT GGC TTC GG 3' (SEQ ID NO: 19) R: 5' GTT TGG AAC AGT CGC TCG TCA TC 3'(서열번호 20)R: 5 'GTT TGG AAC AGT CGC TCG TCA TC 3' (SEQ ID NO: 20) rNOSrNOS F: 5' CAT TGG AAG TGA AGC GTT TCG 3'(서열번호 21)F: 5 'CAT TGG AAG TGA AGC GTT TCG 3' (SEQ ID NO: 21) R: 5' CAG CTG GGC TGT ACA AAC CTT 3'(서열번호 22)R: 5 'CAG CTG GGC TGT ACA AAC CTT 3' (SEQ ID NO: 22) GAPDHGAPDH F-GAGTCAACGGATTTGGTCGT(서열번호 23) F- GAGTCAACGGATTTGGTCGT (SEQ ID NO: 23) R-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG(서열번호 24)R-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG (SEQ ID NO: 24)

결과를 <도 3>에 나타내었다. <도 3>를 참조하여 보면 실시예의 시료는 농도 의존적으로 사이토카인의 생성을 억제함을 알 수 있으며, 처리 농도가 같을 경우 양성대조군(PC)과 유사한 정도의 활성을 보이고 있다.The results are shown in FIG. 3. Referring to FIG. 3, it can be seen that the sample of the example inhibits the production of cytokines in a concentration-dependent manner, and the treatment concentration is the same as that of the positive control group (PC).

<< 실험예Experimental Example 4>  4> 사이토카인 생성의 작용 기전 조사Investigation of the mechanism of action of cytokine production

<실험예 4-1> NF -κB 발현 억제 활성 실험 - luciferase assay Experimental Example 4-1 NF- κB Expression Inhibitory Activity Experiment- luciferase assay

HEK 293T 세포를 5X104/well로 24 well plate에 배양 후 pGL3-basic luciferase expression 벡터(Promega)에 NF-κB 유전자를 삽입하여 얻은 재조합 벡터와 control reporter로서 Renilla luciferase의 cDNA를 가지는 pRL-SV-40 프라스미드(Promega)를 HEK 293T cell에 lipofectamine(Invitrogen)을 사용하여 co-transfection 하였다. 24시간 후 실시예의 시료를 처리한 후 세포를 lysis시켜 발광효소의 활성화를 luciferase assay system (Promega)으로 측정하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다. Renilla is a recombinant vector and control reporter obtained by incubating HEK 293T cells in 24 well plates at 5X10 4 / well and inserting the NF-κB gene into the pGL3-basic luciferase expression vector (Promega). pRL-SV-40 Pramide (Promega) with luciferase cDNA was co-transfected into HEK 293T cells using lipofectamine (Invitrogen). After 24 hours, the samples of the Example were treated, and the cells were lysed to measure the activation of the luminase by luciferase assay system (Promega). Ketotifen (100 μg / ml) was used as a positive control.

결과를 <도 4>에 나타내었다. 실시예의 시료는 모두 농도 의존적으로 NF-κB의 발현을 억제함을 보여주고 있다. The results are shown in FIG. 4. All of the samples in the example showed that the concentration-dependent inhibition of the expression of NF-κB.

<실험예 4-2> MAPK 생성 억제 활성 실험 - western blot Experimental Example 4-2 MAPK Production Inhibition Activity Experiment- western blot

IgE와 그것의 항원으로 활성되고 실시예의 시료가 처리된 상기 <실험예 3>의 RBL-2H3 세포를 PBS로 세척 후 lysis buffer (50mM Tris-HCl, pH 8.0 with 150mM sodium chloride, 1% NP40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% sodium dodecyl s㎕fate)에 용해시켰다. 13000rpm으로 20분간 원심 분리하여 단백질을 추출하여 정량하였다. 정량된 단백질을 SDS-PAGE (sodium dodecyl s㎕fate polyacrylamide gel electrophoresis) 를 이용하여 전기 영동 후 polyvinylidene difluoride membrane으로 이동시켰다. membrane은 0.1% Tween 20과 5% 탈지 건조된 우유를 포함하고 있는 phosphate buffered saline으로 blocking 하였다. membrane은 0.1% Tween 20과 5% 탈지 건조된 우유를 포함하고 있는 phosphate buffered saline으로 blocking 하였다. membrane의 단백질은 1차 항체 (1:1000)(Cell signaling) 와 horseradish peroxidase와 복합된 2차 항체 (1:10000)(SantaCruz)에 반응시킨 후 ECL western detection 시약(Thermo scientific)으로 MAPK(ERK, JNK 및 p38)의 발현 정도를 β-actin의 발현 정도와 비교하여 평가하였다.RBL-2H3 cells of Example 3, which were activated with IgE and its antigen and treated with the sample of Example, were washed with PBS, followed by lysis buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0 with 150 mM sodium chloride, 1% NP40, 0.5). % sodium deoxycholate, 0.1% sodium dodecyl sμl). Protein was extracted and quantified by centrifugation at 13000 rpm for 20 minutes. Quantified proteins were transferred to polyvinylidene difluoride membrane after electrophoresis using SDS-PAGE (sodium dodecyl sμlFate polyacrylamide gel electrophoresis). The membrane was blocked with phosphate buffered saline containing 0.1% Tween 20 and 5% skim dried milk. The membrane was blocked with phosphate buffered saline containing 0.1% Tween 20 and 5% skim dried milk. Membrane proteins were reacted with primary antibody (1: 1000) (Cell signaling) and secondary antibody (1: 10000) (SantaCruz) complexed with horseradish peroxidase, followed by ECL western detection reagent (Thermo scientific). The expression level of JNK and p38) was evaluated by comparison with the expression level of β-actin.

결과를 <도 5>에 나타내었는데, 실시예의 시료는 모두 농도 의존적으로 MAPK의 발현을 억제함을 알 수 있다.
The results are shown in <Figure 5>, it can be seen that all the samples of the example inhibit the expression of MAPK in a concentration-dependent manner.

Claims (5)

밀겨 추출물을 유효성분으로 포함하되, 상기 밀겨 추출물은 아래의 (Ⅰ) 또는 (Ⅱ)인 것을 특징으로 하는 알러지성 질환 개선제 조성물
(Ⅰ) 밀겨를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합 용매에 침지시켜 추출하여 얻어진 추출물,
(Ⅱ) 상기 (Ⅰ) 추출물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 및 이들의 혼합 용매 중 2 가지 이상의 용매를 이용하여 분획하여 얻어진 추출물, 및
Including the bran extract as an active ingredient, the bran extract is an allergic disease improving composition, characterized in that (I) or (II) below
(I) an extract obtained by extracting wheat bran by immersion in water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof;
(II) an extract obtained by fractionating the extract of (I) using two or more solvents among water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, and a mixed solvent thereof; and
제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 알러지성 질환 개선제 조성물.
The method of claim 1,
The composition is an allergic disease improving composition, characterized in that the pharmaceutical composition.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 알러지성 질환 개선제 조성물.
The method of claim 1,
The composition is an allergic disease improving composition, characterized in that the food composition.
밀겨 추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 밀겨 추출물은 아래의 (Ⅰ) 또는 (Ⅱ)인 것을 특징으로 하는
알러지원과 IgE에 의하여 유발된 히스타민 방출 차단용 조성물.
(Ⅰ) 밀겨를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합 용매에 침지시켜 추출하여 얻어진 추출물,
(Ⅱ) 상기 (Ⅰ) 추출물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 및 이들의 혼합 용매 중 2 가지 이상의 용매를 이용하여 분획하여 얻어진 추출물, 및
Contains wheat bran extract as an active ingredient,
The wheat bran extract is characterized in that (I) or (II) below
A composition for blocking histamine release induced by allergen and IgE.
(I) an extract obtained by extracting wheat bran by immersion in water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof;
(II) an extract obtained by fractionating the extract of (I) using two or more solvents among water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, and a mixed solvent thereof; and
제4항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물 또는 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 알러지원과 IgE에 의하여 유발된 히스타민 방출 차단용 조성물.The method of claim 4, wherein
The composition is a composition for preventing histamine release induced by allergens and IgE, characterized in that the pharmaceutical composition or food composition.
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