KR20120071235A - 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법 - Google Patents

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KR20120071235A
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Abstract

본 발명은 마그네틱 비드를 이용하여 인간을 제외한 척추동물의 정자를 성에 따라 분리하는 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 ⅰ) 인간을 제외한 척추동물의 신선한 정액 혹은 동결보존된 정액에 철을 함유한 나노 크기의 마그네틱 비드(magnetic bead)를 첨가하여 X- 또는 Y-염색체, 또는 W- 또는 Z-염색체의 정자 중 하나에만 상기 마그네틱 비드를 특이적으로 결합시키는 단계; 및 ⅱ) 상기 마그네틱 비드가 특이적으로 결합된 정자를 자기장 또는 자석을 이용하여 분리하는 단계;를 포함하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법에 관한 것이다. 본 발명은 정자의 성에 따라 세포막의 전위가 다름을 이용하여, 각각 다른 성을 갖는 정자를 간편하고 효율적으로 선별할 수 있어 경제적이므로, 이를 활용하여 보다 저렴하게 축산업 등에 활용할 수 있다.

Description

마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법{Sperm Sexing Method Based on Magnetic Beads}
본 발명은 마그네틱 비드를 이용한 인간을 제외한 척추동물의 정자 성을 분리하는 방법에 관한 것이다.
포유동물, 어류, 조류 등의 난자 또는 정자를 이용한 수정란 생산을 위한 여러 가지 생체 외 프로토콜, 인공수정과 같은 여러 가지 생체 내 프로토콜 등에 있어서, X- 또는 Y-염색체 중 하나를 함유하는 세포를 선택하는 것이 생산 효율적 측면, 관리적 측면, 상업적 측면 등에서 필요성이 더욱 커지고 있다. 지금까지의 출원된 정자 성 분리의 통상적인 방법은, 정자의 크기, 질량, 밀도에 근거하여, 원심분리, 구슬(bead)층, 여러 재질의 칼럼 등을 통과시켜 정자의 유영에 따른 이동속도에 기초하여(미합중국 특허 제5,135,759호, 제4,474,875호, 제5,514,537호, 제4,605,558, 제4,009,260호의 게시내용 참조) 분리하는 방법 등이 소개되어 왔지만 이런 방법으로는 고 순도의 성 분리된 정자를 얻기가 쉽지 않다.
최근 들어 유세포 분리기(flowcytometer)를 이용하는 방법이 소개되어 비교적 많은 수의 정자 집단을 각각의 정자세포의, 질량, 체적, DNA 함량, 밀도 차이에 근거하여 분류하는 방법이 소개되었지만(PCT/US2001/15150), 각 동물마다 각기 다른 정자의 모양, 크기 등 정자 생리학적 특성이 고려되지 않았으며, 출원 청구된 정자의 분리 속도, 분리 정확도 및 분리된 정자를 이용하여 동물을 수정시켰을 때 수태율에 의문점이 제기되어 오고 있으며, 국내외의 여러 연구자들이 유세포 분석기를 이용하여 전방산란(Forward scatter, FSC)과 측방산란(Side scatter, SSC) 만을 사용하여 정자 세포의 성 분리를 시도하였지만 기존에 소개된 방법으로는 명확히 분별 되지않는 부분이 많아 분리된 정자의 순도에 있어 의문점을 제기하고 있다.
본 발명자들은 2008년 10월 10일에 유세포 분석기를 이용하여 X 염색체를 갖는 정자세포와 Y 염색체를 갖는 정자세포를 분리하는 방법(제목: 정자의 고순도 성 분리방법, 등록번호:제10-0864138호)을 등록받은 바 있다. 그러나, 상기 방법은 X 염색체를 갖는 정자세포와 Y 염색체를 갖는 정자세포의 분리되는 순도가 매우 높은 장점이 있으나, 상당한 시간이 소요되고 장비가 고가인 문제점이 있었다. 또한, 이러한 기계를 사용하기 위해서는 항시 상당히 숙련된 기술자(operator)가 필요하였다. 따라서, 실제로 이를 활용하는 축산업자 등에게는 상당한 경제적 부담으로 작용하는 문제가 있어서, 현장 적용 가능성이 떨어지는 문제점이 있어 왔다.
포유류의 성숙 정자 세포막(cell membrane)의 전위(electric charge)는 대체로 -16 ~ -24 mV (Ishijima SA, Okuno M. Mohri H., Int. J. Androl., 1991;14:340-7)를 띄고 있고, 정자 생식능력(capacitation) (Focarelli R, Rosati F, Terana B., J. Androl., 1990;11;97-104 ; Della Giovampaola C., et al., Mol. Reprod. Dev., 2001;60:89-96) 이 진행되면서 점차 전위가 약해지고, 또한 자궁내 유라미니다제(uraminidase) 효소나 난자의 난포액(follicular fluid)에 의해서도 정자 세포막 전위가 변하는 것으로 알려져 있다 (rivastava PN and Faroogui AA., Bio. Reprod., 1980;22:858-63).
X-염색체를 가진 정자의 세포막 전위는 음극(negative charge)을 띄고 있고, 반대로 Y-염색체를 가진 정자는 X-정자에 비해 적은 음극을(less negative charge) 띄고 있는 것으로 지금까지 보고되었다 (Ishijima SA, Okuno M. Mohri H., Int. J. Androl., 1991;14:340-7 ; Artwright EJ, Harrington PM, Cowin A, Mol. Reprod Dev., 1993:34:323-8 ; Manger M, Bostedt H, Schill WB, Mileham AJ., Andrologia., 1997;29;9-15).
이에, 본 발명자들은 보다 경제적이며 손쉽게 가축들의 정자의 성을 분리하는 방법을 강구하던 중, X 염색체를 갖는 정자세포와 Y 염색체를 갖는 정자 세포의 세포막 전하의 크기나 종류가 각각 다름을 이용하여 특정 전하를 갖는 정자세포에만 특이적으로 철이 함유된 비드(bead)를 결합시킬 수 있음을 활용하여 상기 비드가 결합된 정자만을 자석을 이용하여 분리할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 마그네틱 비드를 이용하여 인간을 제외한 척추동물의 정자를 성에 따라 분리하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 ⅰ) 인간을 제외한 척추동물의 신선한 정액 혹은 동결보존된 정액에 철을 함유한 나노 크기의 마그네틱 비드(magnetic bead)를 첨가하여 X- 또는 Y-염색체(포유류), 또는 W- 또는 Z-염색체(조류)의 정자 중 하나에만 상기 마그네틱 비드를 특이적으로 결합시키는 단계; 및 ⅱ) 상기 마그네틱 비드가 특이적으로 결합된 정자를 자기장 또는 자석을 이용하여 분리하는 단계;를 포함하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 정자 성 분리방법에 있어서, 상기 ⅱ) 단계 이후에 정자의 분리된 정도를 확인하는 단계가 추가되는 것이 바람직하며, 상기 ⅰ) 단계 전에 정액을 보존하기 위하여 주로 영양 성분으로 사용되는 난황이 마그네틱 비드와의 반응에 영향을 주기 때문에 상기 정액 내 함유된 난황(egg yolk)을 제거하는 단계가 추가되는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 정자 성 분리방법에 있어서, 상기 척추동물은 소, 돼지, 염소, 양, 말, 닭, 오리 및 어류로 이루어진 군중에서 선택된 경제 동물인 것이 바람직하고, 상기 마그네틱 비드는 철 위에 실리카(silica) 또는 폴리스티렌(polystyrene)이 코팅된 형태이고, 비드의 크기는 10~100 ㎚인 것이 바람직하며, 상기 정액내 첨부하는 마그네틱 비드의 개수는 정자 하나에 대하여 1~4개인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 정자 성 분리방법에 있어서, 상기 마그네틱 비드는 음성 전하를 가지며, Y- 또는 Z-염색체를 가진 정자와 결합하는 것이 바람직하고, 상기 철은 감마산화제이철(γ-Fe2O3) 또는 자철석(Fe3O4)인 것이 바람직하다.
성염색체(sex chromosome)는 암수의 분화가 있는 생물에 있어 암수에서 동일한 상염색체에 대해 성에 의해 형태나 수에 차이를 나타나는 염색체이다. 암컷에 2개, 수컷에 1개있는 것을 X, 수컷에만 1개 있는 것을 Y염색체라고 한다. 암컷＝XX, 수컷＝XY로 포유류에서 나타나는 조립이다(수컷 헤테로). 조류, 파충류, 어류 등에서는 암컷 헤테로에서, 암컷을 ZW, 수컷을 ZZ라고 한다.
XY형에서는 자성생식세포(난, 난자)는 1종류이지만, 웅성생식세포(정자, 정충)는 2종류이기 때문에 웅성2배우자형이라고 한다. 한편, ZW형에서는 웅성생식세포는 1종류이고, 자성생식세포는 2종류이기 때문에 자성2배우자형이라고 한다. 결국, 성염색체에 따라 정자에 2종류가 있는 경우와 난자에 2종류가 있는 경우가 있다.
본 발명은 양극을 띄고 있는 철(Fe) 성분이 있는 나노(nano) 사이즈(대략 ~50 ㎚ 전후의 직경)의 비드(superparamagnetic micro beads)를 이용하여 X- 및 Y- 정자가 혼합되어 있는 정액을 비드와 20분정도 반응시킨 후 10분 정도 자석(magnet)에 노출시켜 X- 혹은 Y- 정자를 선택적으로 성에 따라 분리할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 마그네틱 비드는 감마산화제이철(Maghemite ; γ-Fe2O3) 또는 자철석(Magnetite ; Fe3O4) 주위를 단분산성의 폴리스티렌(polystyrene)이 구 형태로 코팅된 형태이다. 본 발명은 보다 구체적으로 Y-정자(spermatozoa)를 자석을 이용하여 수집하는 방법이다.
본 발명의 정자 성 분리 방법의 개념을 도 1에 기재하였다. 일반적으로, Y-정자가 양성전하를 띠므로, 이를 이용한 것이 도 2의 전기장에 의한 X-정자 및 Y-정자의 성 분리의 원리이다. 또한, 도 3은 Y-정자에 결합된 철을 함유한 비드가 자석에 결합되는 성질을 이용하면 대량의 정자를 신속히 분리 가능하므로, 앞으로 산업적으로도 활용 가능함을 나타낸 것이다.
본 발명을 각 단계별로 보다 자세히 설명한다.
제 1 단계: X- 또는 Y-염색체, 또는 W- 또는 Z-염색체 정자 중 하나에만 마그네틱 비드를 특이적으로 결합시키는 단계
먼저, 동결 정액은 35~37℃에서 해동 후 사용하거나 신선하게 채취된 정액을 사용한다. 상기 동결-해동된 정액 또는 신선한 정액을 대략 1분 동안 150 x g 에서 원심분리하여, 정액보존액 내의 난황(egg yolk)을 제거한다. 상기 난황은 마그네틱 비드의 작용을 방해하는 성질이 있다. 상기 원심분리된 정액에서 난황은 침전되므로, 상등액(supernatant) 만을 조심스럽게 분리하여 정자가 대량 함유된 정액을 취하고, 여기에 마그네틱 비드(magnetic bead)를 첨가한다.
일반적으로 50 ㎚ 크기의 비드 1 mg 에는 약 3 x 109 개의 비드가 존재하고, 통상적으로 인공수정 1회분에 사용되는 정액은 대략 2 X 107 (소) ~ 3 X 109 (돼지) 의 정자가 함유되므로 1 ㎎/㎖ 농도를 함유하는 비드 용액의 경우, 정자수와 비드수를 1:1의 비율로 하였을 경우, 사용되는 축종별 정액에 따라서 대략 각각 150 ~1,000 ㎕의 용량을 첨가하는 것이 바람직하다.
비드를 정자가 들어있는 정액에 첨가한 후, 35~37℃에서 대략 20분 간 서로 인큐베이션 시키고, 약 5분 간격으로 부드럽게 흔들어 주어 정자와 비드가 반응이 잘 일어나도록 한다.
제 2 단계: 마그네틱 비드가 결합된 정자를 자기장 또는 자석을 이용하여 분리하는 단계
대략 10~15분 동안 자석에 상기 정자 + 비드 혼합액을 놓아둔다. 비드는 철 이 함유되어 있어, 반응하여 비드에 붙어있는 정자는 용기 벽쪽에 있는 자석 쪽으로 수집되므로, 자석에 반응하지 않은 정액을 새로운 용기에 조심스럽게 옮긴다. 보다 구체적으로 본 발명에 사용된 마그네틱 비드(Y-정자 특이적)는 음성 전하를 띠므로, 상대적으로 양성 전하를 나타내는 정자(통상적으로 Y 염색체를 갖는 정자이다)가 결합되고, 따라서, 상기 비드와 반응하지 않은 X 염색체를 갖는 정자가 다수가 수집된다.
제 3 단계: 분리된 정자를 이용하여 수정시키는 단계
비드를 이용하여 분리된 정자의 성 분리 정확도를 측정하기 위하여 분리되어 수집된 X 염색체를 갖는 정자를 이용하여 난자와 체외수정시켜 배아(Embryo)의 성을 PCR 기법으로 판별하여 분리정확도를 검증하는 방법을 진행한다.
앞에서 언급한 바와 같이, 본 발명은 X 염색체를 갖는 정자세포와 Y 염색체를 갖는 정자세포의 전하적 차이를 이용하는 것이다. 이러한 차이를 이용하는 방법으로, 전하가 차이나는 물질을 분리하는 전기영동과 같은 방법도 고안가능하다. 다만, 본 발명자가 실험한 바로는 상기 전기영동은 이론적으로 정자 세포막 전위에 따라 정자세포를 분리할 수는 있지만, 전기영동 과정 중 정자세포는 다 사멸하게 되고, 한천 젤(agarose gel) 속에 있는 사멸정자세포를 다시 회수하여 인공수정이나 체외수정 등에 사용한다는 것은 현실과는 아주 동 떨어진 개념적 기술에 불과하다 하겠다.
본 발명자들의 목표는 분리된 정자를 축산업 등의 인공수정에 사용하고자 함이므로, 분리된 정자는 반드시 살아 있어야만 한다. 본 발명은 살아 있는 정자 세포에 효과적으로 작용한다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 정자의 분리방법은 살아 있는 정자세포를 신속하고, 저렴하며, 편리하게 분리하는데 사용할 수 있으므로, 이를 활용하여 보다 저렴하게 축산업 등에 활용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 정자 성 분리방법의 개념도이고,
도 2는 전기장에 의한 X-정자 및 Y-정자의 성 분리의 원리이고,
도 3은 Y-정자에 결합된 철을 함유한 비드가 자석에 결합되는 성질을 이용하여 대량의 정자를 신속히 분리가능한 산업적 이용방법의 원리이고,
도 4는 성 분리된 정자로 난자와 체외수정하여 생산된 수정란에서 DNA를 추출한 후, PCR을 실시하고, 그 PCR 산물의 전기영동을 통하여 수정란의 성판별을 시도한 결과를 나타낸 사진으로 2 밴드(141&216 bp)는 XY(male) 배이고, 한 밴드(216 bp)는 XX(female) 배를 나타낸다. 가장 밑의 두꺼운 밴드는 PCR 산물의 밴드가 아니라 프라이머 2량체를 나타낸다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 보다 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 치환 및 균등한 타 실시예로 변경할 수 있음은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.
< 실시예 1> 마그네틱 비드를 이용한 돼지 정자 성 분리
돼지 신선 정액(600억개의 정자 함유)에 1~4배수의 Y 정자와 반응하는 마그네틱 비드를 첨가하고 20분간 혼합하였다. 비드에 흡착된 Y 정자를 자석(SD40, 10,000 가우스)을 이용하여 15분간 분리하였다. 자석에 흡착된 Y 정자로부터 분리된 X 정자 집단(70~80%) 이용하여 AI를 실시하였다(30억/회). 또한, 심부 주입기를 이용하는 경우에는 ~15억개의 정자 수를 주입할 수 있었다.
< 실시예 2> 마그네틱 비드를 이용한 닭 정자 성 분리
닭 신선 정액(10억개의 정자 함유)에 1~4배수의 W 정자와 반응하는 마그네틱 비드를 첨가하고 20분간 혼합하였다. 비드에 흡착된 W 정자를 자석(SD40, 10,000 가우스)을 이용하여 15분간 분리하였다. 자석에 흡착된 W 정자로부터 분리된 Z정자 집단(70~80%) 이용하여 AI를 실시하였다(정자 5천만/회).
< 실시예 3> 마그네틱 비드를 이용한 소 정자 성 분리
신선하게 채취된 소 정액은 (~60억 개) 희석보존액과 1;1의 비율로 1차 희석한후 1~4배수의 Y 정자와 반응하는 마그네틱 비드를 첨가하고 20분간 혼합하였다. 비드에 흡착된 Y 정자를 자석(SD40, 10,000 가우스)을 이용하여 15분간 분리하였다. 분리된 X 정자를 1회 인공수정 적정 정자수(2x107)에 맞추어 난황이 함유된 희석액에 2차 희석 후 4시간 정도 4℃에 정치시킨 후 액체질소에 동결보존하였다.
< 실시예 4> 소 정자 성 분리의 결과 확인
본 발명에서 사용된 소의 올리고머-뉴클레오티드 프라이머(primer)는 다음과 같다. 소에 특이적인(Bovine specific) 프라이머는 216 bp의 단편(fragment) 크기를 갖고 있는데, 구체적으로 5'-TGG AAG CAA AGA AVV CCG CT-3'서열의 프라이머(서열번호 1) 과 5'-TCG TGA GAA ACC GCA CAC TG-3'서열의 프라이머(서열번호 2)를 사용하였다. 한편, 소의 Y-염색체에 특이적인(Bovine Y chromosome-specific) 프라이머는 141 bp의 단편 크기를 갖고 있는데, 구체적으로 5'-GAT CAC TAT ACA TAC ACC ACT-3'서열의 프라이머(서열번호 3) 과 5'-GGC TAT GCT AAC ACA AAT TCT-3'서열의 프라이머(서열번호 4)를 사용하였다.
Y-염색체에 특이적인 프라이머(Sry) 쌍을 사용하여 PCR 기반한 성을 결정하기 위하여, 상실배(morula) 내지 배반포(blastocyst) 시기의 배를 사용하였고, 소에 특이적인 DNA 프라이머는 소에 관한 서열에 기반하여 고안하였다. 상기 프라이머는 각각 유전자 은행 접근번호(gene bank accession number)가 BOV97M & EF057751이었다. 소의 Sry와 소에 특이적인 DNA 프라이머는 각각 특이적 유전자 서열 부근에서 141 및 216 bp를 증폭하였다.
PCR 증폭 결과, 반응 혼합액(0.5 ㎖ 에펜도르프 튜브)은 10X PCR 완충액(Tris-HCL, (NH4)2SO4, 20 mM MgCl2 , Enhancers), 10 mM dNTPs, Taq DNA polymerase, 및 1 ㎕ 프라이머로 구성된다. 소의 배는 94℃에서 5분 동안 변성된 후 35 사이클이 이어진다. 첫 사이클은 94℃에서 50초 동안 변성, 56℃에서 30초 동안 프라이머 아닐링(annealing), 그리고 72℃에서 1분 동안 변성 프라이머 증폭(extension)을 사용한다. 마지막 사이클 이후에, 72℃에서 5분 동안 시료를 증폭한다. PCR이 완료된 이후에, 상기 증폭된 산물을 전기영동 후 UV 조사로 분석한다. 상기 전기영동은 2.5% 아가로스 겔(GIBCO life technology, Rockville, USA)에서 이루어지고, 전기 영동후 에티디움 브로마이드(ethidium bromide) (Sigma Chemical Co., St. Luis, Mo, USA)로 염색하였다.
2가지 또는 3가지 농도의 비드를 사용하여 상기와 같은 방법을 수행하였고, 반복하여 그 결과를 확인하였다. 그 결과를 하기 표 1 내지 표 2에 기재하였다.
비드 (2.3 ㎎/㎖) XX XY
2 ㎕ 58/119 = 48.73 61/119 = 51.26
5 ㎕ 28/36 = 77.77 8/36 = 22.22
10 ㎕ 41/43 = 95.34 2/43 = 4.65
비드 (2.3 ㎎/㎖) XX XY
5 ㎕ 74/99 = 74.74 25/99 = 25.25
10 ㎕ 65/79 = 82.27 14/79 = 17.72
그 결과, 상기 표 1에서 보는바와 같이, 2.3 ㎎/㎖ 농도의 비드를 각각 2-, 5-, 10-㎕를 2 x 107 소 정액과 혼합하여 분리 수집된 X-정자 유래 소 수정란의 성감별 결과, 2 ㎕ 수준에서는 성 분리 효과가 없었음을 알 수 있었고, 5 ㎕ 와 10 ㎕에서 각각 성 분리 정확도가 77~95%로 나타났다. 또한, 표 2는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리 방법에 대한 재현성 여부를 확인하기 위하여, 마그네틱 비드 농도를 재차 5 ㎕ 와 10 ㎕를 사용하여 다른 개체에서 채취된 정액을 이용하여 반복 실험을 실시하였고, 성 분리 정확도가 74~82%로 나타났다. 성 분리 정확도가 표 1과는 달리 10 ㎕ 수준에서 다소 낮게 나타난 것은 (95% vs 82%), 아마도 실험에 사용된 개체의 정자활력 수준에 따라 정자와 비드의 반응에 다소 달리 나타난 것으로 사료된다.
한편, 본 발명의 구체적 범위는 상기 기술한 실시예 보다는 특허청구범위에 의하여 한정지어지며, 특허청구 범위의 의미와 범위 및 그 등가적 개념으로 도출되는 모든 변경 및 변형된 형태를 본 발명의 범위로 포함하여 해석하여야 한다.
<110> NOAH BIOTECH. INC <120> Sperm Sexing Method Based on Magnetic Beads <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bovine specific Forward Primer <400> 1 tggaagcaaa gaavvccgct 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bovine specific Backward Primer <400> 2 tcgtgagaaa ccgcacactg 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bovine Y chromosome-specific Forward Primer <400> 3 gatcactata catacaccac t 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bovine Y chromosome-specific Backward Primer <400> 4 ggctatgcta acacaaattc t 21

Claims (8)

  1. ⅰ) 인간을 제외한 척추동물의 신선한 정액 혹은 동결보존된 정액에 철을 함유한 나노 크기의 마그네틱 비드(magnetic bead)를 첨가하여 X- 또는 Y-염색체, 또는 W- 또는 Z-염색체의 정자 중 하나에만 상기 마그네틱 비드를 특이적으로 결합시키는 단계; 및
    ⅱ) 상기 마그네틱 비드가 특이적으로 결합된 정자를 자기장 또는 자석을 이용하여 분리하는 단계;를 포함하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 ⅱ) 단계 이후에 정자의 분리된 정도를 확인하는 단계가 추가되는 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 ⅰ) 단계 전에 상기 정액내 함유된 난황(egg yolk)을 제거하는 단계가 추가되는 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  4. 상기 척추동물은 소, 돼지, 염소, 양, 말, 닭, 오리 및 어류로 이루어진 군중에서 선택된 경제 동물인 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 마그네틱 비드는 철 위에 실리카(silica) 또는 폴리스티렌(polystyrene)이 코팅된 형태이고, 비드의 크기는 10~100 ㎚인 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 정액내 첨부하는 마그네틱 비드의 개수는 정자 하나에 대하여 1~4개인 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 마그네틱 비드는 음성 전하를 가지며, Y- 또는 Z-염색체를 가진 정자와 결합하는 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 철은 감마산화제이철(γ-Fe2O3) 또는 자철석(Fe3O4)인 것을 특징으로 하는 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101497614B1 (ko) * 2013-12-06 2015-03-03 손중호 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법
KR20180015021A (ko) * 2016-08-02 2018-02-12 이용진 가축 예방주사 접종여부 식별시스템, 그리고 그 시스템에 적용되는 자성체 식별자 접종용 인젝터 및 자력 검출기

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