KR20110093858A - 시클로운데카뎁시펩티드 화합물 및 약제로서 상기 화합물의 용도 - Google Patents

시클로운데카뎁시펩티드 화합물 및 약제로서 상기 화합물의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규한 시클로운데카뎁시펩티드 화합물에 관한 것이며, 또한 약제로서, 특히 항바이러스제로서, 더욱 특히 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료를 위한, 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

Description

시클로운데카뎁시펩티드 화합물 및 약제로서 상기 화합물의 용도{CYCLOUNDECADEPSIPEPTIDE COMPOUNDS AND USE OF SAID COMPOUNDS AS A MEDICAMENT}
본 발명은 시클로운데카뎁시펩티드 화합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 약제로서, 특히 항바이러스제로서, 더욱 특히 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료를 위한, 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.
HCV는 Choo와 그의 동료들에 의하여 약 15년 전에 클로닝되고 특징화되었다(Science 244, (1989), 359-362 참조). HCV는 플라비비리다에(Flaviviridae) 과에 속하며, 엔벨로프 뉴클레오캡시드 및 양극의 단일 스트랜드 RNA 게놈을 포함한다(Bartenschlager et al., Antiviral Res. 60, (2003), 91-102 참조). HCV는 혈액, 혈액 제제 및 임신 동안 수직감염에 의하여 전염된다. 혈액 제제를 스크린하기 위한 진단 테스트의 도입에 의하여 새로운 감염의 속도가 유의적으로 감소되었다.
아직도, HCV는 심각한 의료적 문제로 남아 있다. 현재 약 1억 7천만명의 HCV 감염 환자들이 있다. 감염의 최초 경로는 일반적으로 그 정도가 심하지 않다. 그러나, 면역계가 종종 상기 바이러스를 제거할 수 없으며, 지속성 감염을 갖는 사람들은 간경화증 및 간세포암종에 대한 높은 위험에 노출되어 있다(Poynard et al., Lancet 349, (1997), 825-832 참조).
현재 사용가능한 백신이 없으며, 치료를 위한 선택이 매우 제한적이다(Manns et al., Indian J. Gastroenterol. 20 (Suppl. 1), (2001), C47-51; Tan et al., Nat. Rev. Drug Discov. 1, (2002), 867-881 참조).
시클로필린에 강하게 결합하는 화합물이 동정되었으나, 이러한 화합물은 면역억제성이었다(Nakagawa M et al., Biochemical and biophysical research communications, Academic Press Inc. Orlando, FL, US, Vol. 313, N°1, 2004년 1월 2일, 제42-47면, XP004479114).
따라서, 비-면역억제 화합물, 예컨대 NIM 811, 또는 HIV-1 복제를 억제하는 능력이 높고 면역억제 활성이 본질적으로 결핍된 다른 화합물을 동정하기 위한 목적으로, 지난 20년 동안 다수의 약물 화학 연구들이 수행되었다(WO 00/01715(Wenger et al.; DEBIOPHARM SA) 및 Tetrahedron Lett., 41, (2000), 7193-6 참조).
시클로필린에 결합하는 비-면역억제 화합물이 C형 간염 바이러스(HCV)에 대해 억제 효과를 나타낸다는 것이 발견되었다. 비-A형, 비-B형 간염의 주 원인인자로서 동정된, HCV에 의한 지속성 감염은 만성 간염, 간경화증 또는 간세포암종과 같은 간 질환과 밀접하게 관련된 것으로 고려되었다. 이러한 간 질환들의 발달은 주요한 공중위생 문제이다. 효과적인 항-HCV 요법은 인터페론 또는 인터페론과 리바비린의 조합에 의한 요법으로 한정된다. 그러나, 상기 알려진 제제로 치료된 HCV 환자들의 약 절반에게서 바이러스가 제거되지 않기 때문에, 대안적인 항-HCV 제제에 대한 강한 요구가 여전히 존재한다.
C형 간염 바이러스(HCV) 복제의 억제에 대해 작용하는 특징을 갖는 시클로운데카펩티드는 이미 WO 2005/021028(Novartis Pharma GMBH) 및 WO 2006/038088(DEBIOPHARM SA)로부터 공지되어 있다. Hanssons M J 등의 문헌 [Journal of Bioenergetics and biomembranes, plenum publishing, New York, NY, US, Vol. 36, n°4, 2004년 8월 1일, 제407-413면(XP002330699)]에는 WO 2006/038088에 기재되어 있는 화합물에 의한 mPT 억제의 더 우수한 효능이 보고되고 있다. 그러나, 이러한 펩티드의 일부가 현재 임상시험에 포함되어 있을지라도, 개선된 약동학적 프로파일(예컨대, 간 수송체(hepatic transporter) 억제 프로파일 및 이에 따른 약물-약물 상호작용) 및 개선된 독성학적 프로파일(예컨대, 비-면역억제 활성 및 이에 따른 이상반응)과 함께, 특히 HCV의 복제를 억제하는 충분한 성질을 갖는 신규한 항바이러스제를 개발할 필요성이 여전히 존재한다.
따라서, 본 발명은 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료에 사용되는 비-면역억제 화합물을 제공하는 것을 또한 목적으로 한다. 상기 화합물은 간 수송체의 억제와 관련된 잠재적인 부작용, 또는 간 수송체의 억제와 관련된 잠재적인 약물-약물 상호작용, 또는 상기 둘 다를 감소시키는 점에서, 예측할 수 없는 이점을 갖는다. 또한, 본 발명의 추가 목적은 특히 산업적 규모로 합성하는 것이 더 용이한 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 요약
따라서, 본 발명은 상술한 개선된 특징들을 갖는 신규한 항바이러스제를 제공하는 것을 목적으로 하며, 놀랍게도 이러한 요구는 하기 식 (I)에서 정의된 바와 같은 시클로운데카뎁시펩티드 화합물에 의해 충족된다는 것이 밝혀졌다:
Figure pct00001
상기 식 중,
AXX1은 MeBmt, 4-플루오로-MeBmt, 디히드로-MeBmt, 8-히드록시-MeBmt, O-아세틸-MeBmt이며;
AXX2는 Abu, Val, Thr, Thr(OMe), Thr(OAc), Thr(OCOCH2CH2CH2OH), Nva, 5-히드록시-Nva이며;
AXX3은 D-MeAla, D-3-플루오로-MeAla, D-MeSer, D-MeSer(OAc), D-MeSer(O-CH2CH2OH), D-MeSer(OCH2CH2NEt2), D-MeAsp(OMe)이며;
AXX4는 MeIle, MeMet, MeMet(Ox), 여기서 Ox는 메티오닌의 황 원자가 설폭시드 또는 설폰인 것을 의미함, MeVal, MeThr, MeThr(OAc), MeThr(OtBu), MeThr(OMe), MeAla, MeIle, MeThr, EtVal, EtIle, EtPhe, EtTyr, EtThr(OAc), MeThr(OAc), MeTyr, MeTyr(OAc), MeTyr(OMe), MePhe이며;
AXX5는 Leu, Val, Ile, Ala이며;
AXX6은 MeAla, Sar, MeLeu이며;
AXX7은 Gly, Ala임.
본 발명의 또다른 목적은 식 I의 화합물과 함께 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는, C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 적어도 a) 식 I의 화합물 또는 약학 조성물로 이루어진 제1 제제, 및 b) HCV 복제에 대해 작용하는 성질을 갖는 제2 제제를 포함하는 약학적 조합물(combination)을 제공하는 것이다.
식 I에 따른 화합물은 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료에 있어서 약제의 제조에 사용될 수 있다.
본 발명의 또다른 목적은 치료적 유효량의 식 I의 화합물 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
선택적으로는, 치료적 유효량의 식 I의 화합물 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 HCV 복제의 억제 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 상세한 설명
달리 정의되지 않는다면, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법들과 물질들이 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있지만, 적합한 방법들과 물질들이 하기에 기재된다. 본원에서 언급되는 모든 공보, 특허출원, 특허 및 다른 참조문헌들은 전체로서 본원에 참조로 삽입된다. 대립되는 경우, 정의를 포함하는 본원 명세서에 따를 것이다. 또한, 물질, 방법 및 실시예들은 설명의 목적을 위한 것일 뿐이고, 이에 한정하려는 의도가 아니다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 하기의 정의들은 본 발명의 이해를 돕기 위하여 제공된다.
"포함한다"라는 용어는 일반적으로 함유한다는 의미로 사용되며, 이는 하나 이상의 특징 또는 성분의 존재를 허용한다는 것을 뜻한다.
본 발명의 목적은 하기 식 (I)의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물을 제공하는 것이다:
Figure pct00002
상기 식 중,
AXX1은 MeBmt, 4-플루오로-MeBmt, 디히드로-MeBmt, 8-히드록시-MeBmt, O-아세틸-MeBmt이며;
AXX2는 Abu, Val, Thr, Thr(OMe), Thr(OAc), Thr(OCOCH2CH2CH2OH), Nva, 5-히드록시-Nva이며;
AXX3은 D-MeAla, D-3-플루오로-MeAla, D-MeSer, D-MeSer(OAc), D-MeSer(O-CH2CH2OH), D-MeSer(OCH2CH2NEt2), D-MeAsp(OMe)이며;
AXX4는 MeIle, MeMet, MeVal, MeThr, MeThr(OAc), MeAla, EtVal, EtIle, EtPhe, EtTyr, EtThr(OAc), MeThr(OAc), MeTyr, MeTyr(OAc), MeTyr(OMe), MePhe, MeMet(Ox), 여기서 메티오닌의 황 원자는 설폭시드 또는 설폰임;
AXX5는 Leu, Val, Ile이며;
AXX6은 MeAla, Sar, MeLeu이며;
AXX7은 Gly, Ala임.
IUPAC의 공인된 정의에 따르면, 시클로뎁시펩티드는 아미노 및 히드록실 카복실산 잔기(일반적으로, α-아미노 및 α-히드록시 산)의 서열을 갖는 천연 또는 합성 화합물이며, 상기 잔기는 고리에 연결된다(IUPAC Compendium of Chemical Terminology, 제2판 (1997) 참조). 상기 시클로뎁시펩티드는 하나 이상의 아미드 결합이 에스테르 결합으로 치환된 헤테로데틱(heterodetic) 펩티드로 묘사된다(J. Peptide Sci. 10: 115-8 (2004) 참조).
본 발명의 화합물은 11개의 잔기를 포함하며, 10개는 α-아미노산이고 1개는 α-히드록시산이다. 상기 α-히드록시산은 (2R)-2-히드록시-3-메틸-부탄산이며, 이는 D-α-히드록시이소발레르산이라고도 알려져 있으며, H-D-Hiv-OH로 약칭된다. 식 (I)에서, 상기 히드록시산은 8 위치에 있다. 이는 카복실산 말단에서 9 위치의 α-아미노산, 즉 N-메틸-류신의 아미노기와 아미드 결합을 형성하며, 히드록실 말단에서 7 위치의 α-아미노산, 즉 알라닌 또는 글리신의 카복실산기와 에스테르 결합을 형성한다.
식 (I)의 α-아미노산은 아미노산들을 명명하기 위해 일반적으로 사용되는 3개의 문자 코드 약칭을 사용하여 지칭되며, 이의 배열은 달리 특정되지 않는다면 L-배열이다. 잔기의 넘버링은 N-메틸-(4R)-4-[(E)-2-부테닐]-4-메틸-L-트레오닌 또는 MeBmt 및 상기 정의된 이의 구조적 유도체를 나타내는 AXX1로부터 시작한다. 메틸기 Me 또는 에틸기 Et와 같은 알킬기가 아미노산의 약칭 앞에 존재할 때, 이는 상기 알킬기가 상기 아미노산 잔기의 아미노기에 고정된다는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 화합물의 이점은 선행기술에 개시되어 있는 대응하는 시클로운데카펩티드 화합물의 규칙적인(regular) 고리형 아미드 백본(backbone)에 비해, 매크로(macro) 고리형 백본 내의 에스테르 결합의 밀집에 있을 수 있다. 이론에 얽매이지 않고, 7 위치의 아미노산 AXX7과 위치 8의 D-HIV 사이의 에스테르 결합에 의한 아미드의 치환은 구조적 및 물리화학적 특징들에 대해 강하게 영향을 미치는 것으로 여겨지며, 예컨대 구조적 유연성(P.J. Flory, Statistical Mechanics of Chain Molecules, Hanser Publishers, NY, 1988 참조) 및 친유성의 증가　뿐만 아니라 수소 공여 결합의 부재가 그 예이다.
이러한 구조적 특징들은 CsA 유도 유사체의 군에 비해 본 발명의 화합물의 물리화학적, 약동학적 및 생물학적 특징들에서 현저한 차이의 변형을 가져오는 것으로 여겨진다. 전신적 SAR 연구에서 아미노산 치환에 대해 관찰되는 더 높은 내성의 가능한 근거는 생활성 형태와 관련하여 형태 공간의 증가에 있을 수 있다(V. Mikol et al., J. Mol. Biol. (1998) 283, 451-461).
선행기술의 시클로운데카펩티드 유사체와 달리, US 제5,116,816호의 실시예 2 또는 WO 제02/092033호의 실시예 4의 단계 4-1로부터 수득되는, 천연 시클로운데카뎁시펩티드의 2 위치의 아미노산과 7 위치의 아미노산 사이의 단편의 위치에서 하나 또는 다수의 치환은, 본 발명의 기준을 충족시키는 화합물의 목록에 의해 입증되는 바와 같이 시클로필린에 대한 높은 결합 능력의 보유를 야기한다. 특히, WO 제2006/038088호에 따른 화합물, 즉 [D-MeAla]3-[EtVal]4-CsA(Debio 025)에 비해, 본 발명의 화합물에 대해 2-4까지 인자들의 Cyp A에 대한 결합 친화력의 증가가 관찰되었다.
향상된 활성 프로파일(실시예 5 및 6 참조) 외에,　신규한 화합물의 군은 또한 향상된 제조 공정, 특히 산업적 규모의 제조를 제공한다.
또한, 본 발명은 순환 수명을 연장하기 위한 식 I의 화합물의 화학적 변형을 포함한다. 이러한 특징을 갖는 적합한 폴리(에틸렌 글리콜) 유도체의 예들은 예컨대 US 2005171328(NEKTAR THERAPEUTICS AL CORP) 또는 US 6,713,454(NOBEX CORP)에 기재되어 있다.
더 바람직하게는, 본 발명의 화합물은 하기의 정의를 갖는 식 (I)에 의해 한정된다:
식 중,
AXX1은 MeBmt, 디히드로-MeBmt, 8-히드록시-MeBmt이며;
AXX2는 Abu, Val, Thr, Thr(OMe), Thr(OAc), Thr(OCOCH2CH2CH2OH), 5-히드록시-Nva이며;
AXX3은 D-MeAla, D-3-플루오로-MeAla, D-MeSer, D-MeSer(OAc), D-MeAsp(OMe)이며;
AXX4는 MeIle, MeMet, MeMet(Ox), 여기서 Ox는 메티오닌의 황 원자가 설폭시드 또는 설폰인 것을 의미함, MeVal, EtVal, EtIle, MeTyr, MeTyr(OAc), MeTyr(OMe), MeThr, MeThr(OtBu),MeThr(OAc),MeThr(OMe), MePhe이며;
AXX5는 Leu, Val, Ile, Ala이며;
AXX6은 MeAla, Sar, MeLeu이며;
AXX7은 Gly, Ala임.
더욱더 바람직하게는, 식 (I)의 화합물은 하기의 정의를 갖는다:
식 중,
AXX1은 MeBmt, 8-히드록시-MeBmt이며;
AXX2는 Abu, Val, Thr, Thr(OMe), Thr(OAc), Thr(OCOCH2CH2CH2OH), 5-히드록시-Nva이며;
AXX3은 D-MeAla, D-3-플루오로-MeAla, D-MeSer, D-MeSer(OAc), D-MeAsp(OMe)이며;
AXX4는 MeIle, MeMet, MeMet(Ox), 여기서 Ox는 -SOMe, -SO2Me임, MeVal, EtVal, EtIle, MeTyr이며;
AXX5는 Leu, Val, Ile이며;
AXX6은 MeAla, Sar, MeLeu이며;
AXX7은 Gly, Ala임.
본 발명의 특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 하기의 정의를 갖는다:
AXX1은 MeBmt이며;
AXX2는 Abu, Val, Thr이며;
AXX3은 D-MeAla이며;
AXX4는 MeIle, MeVal, EtVal이며;
AXX5는 Leu, Val, Ile이며;
AXX6은 MeAla, MeLeu, Sar이며;
AXX7은 Gly, Ala임.
본 발명의 바람직한 구현예 중 하나에 따르면, 식 (I)의 화합물은 하기 식을 나타낸다:
Figure pct00003
상기 나열된 화합물들은 본 발명의 가장 중요한 기준의 전체적인 최적화, 즉, 화학 합성, 약리적 특징, 약동학적 및 독성학적 프로파일의 향상에 상응하는 것이다.
특히, 상기 화합물들은 MRP2 또는 OATP1B1과 같은 간 수송체를 억제하는데 있어서 Debio 025에 비해 훨씬 더 낮은 능력을 나타낸다. 따라서, 상기 화합물들은 간 수송체의 억제와 관련되는 잠재적인 부작용(예컨대 고빌리루빈혈증) 또는 잠재적인 약물-약물 상호작용(예컨대 아토르바스타틴과 같은 HMG-CoA 환원효소 억제제와의 상호작용), 또는 상기 둘다를 감소시키는 것으로 예측된다.
본 발명의 추가적인 화합물들은 다음과 같다:
Figure pct00004
본 발명의 관심대상인 다른 화합물들은 하기 식에 의해 정의된다:
Figure pct00005
본 발명의 화합물은 통상적인 펩티드(solution or solid-phase peptide synthesis; in Houben - Weyl, Methods of Organic Chemistry, Vol. E 22d, Ed.-in-Chief: M. Goodman, Thieme Verlag, Stuttgart, 2003) 및 유기화학 또는 생명공학을 적용함으로써, 예를 들어 Wenger의 문헌 [Helv. Chim. Acta, 67, 502-25, 1984] 또는 [Helv. Chim. Acta, 66, 2672-702 (1983)]에 기재된 화학 수단을 적용함으로써, 그리고 Rich, D.H. 등의 문헌 [Comparative studies of the coupling of N-methylated, sterically hindered amino acids during SPPS, Tetr. Letters. 35, 5981-5984 (1994)]에 기재된 커플링 시약으로서 HATU를 이용함으로써 수득할 수 있다.
예를 들어, 일반적인 가능한 도식의 하나는, 필요하다면 적합한 보호기 및 활성화기와 함께 적합한 잔기를 포함하는 2개의 단편, 즉 단편 A 및 단편 B를 제조하는 단계, 및 상기 제조의 마지막 단계에서 단편들을 함께 연결하여 운데카펩티드를 수득한 후 시클로운데카뎁시펩티드로 고리화하는 단계로 이루어진다.
예를 들어, 단편(Ax)는 하기와 같을 수 있으며:
H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-AXX1-OH (Ax)
단편(Bx)는 하기와 같을 수 있으며:
H-AXX2-AXX3-AXX4-AXX5-AXX6-AXX7-OR (여기서, R은 알킬기임) (Bx),
그 후, Ax 및 Bx는 운데카뎁시펩티드 Ax-Bx, H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-AXX1-AXX2-AXX3-AXX4-AXX5-AXX6-AXX7-OR (여기서, R= 알킬, H)로 커플링되며,
마지막 단계는 매크로락톤화(macrolactonisation)이다.
α-히드록시산 잔기 D-Hiv를 포함하는 단편 A는 천연 시클로운데카뎁시펩티드(즉, 시클로-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)의 분해에 의해 수득될 수 있으며, 상기 시클로운데카뎁시펩티드의 제조는 US 5,116,816의 실시예 2, 또는 WO 02/092033의 실시예 4의 단계 4-1에 기재되어 있다.
선행기술에 대한 본 발명의 화합물의 이점은 그의 활성 프로파일에 있을 뿐만 아니라(실시예 5 및 6 참조), 특히 산업적 규모로 향상된 제조 과정에 있다.
1. 천연 화합물들(CsA 및 시클로-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)로부터 시작하여(도 1 참조), 시클로운데카뎁시펩티드 유사체의 합성의 총 수율은, DEBIO 025(DEBIOPHARM SA의 WO 2006/038088에 기재되어 있는 [D-MeAla]3-[EtVal]4-CsA)에 대한 20%에 비해, 50%를 초과한다.
2.　값비싼 디펩티드 유도체 Boc-D-MeAla-EtVal-OH의 합성(4개의 화학 단계들을 포함함)이 필요하지 않다. 또한,　화합물의 일부는 C-말단 글리신(Ia, Ic, If, Ig, Ii, Ik)을 포함하며, 이는 합성의 마지막 단계(매크로락톤화, 에피머화 없음)를 촉진시킨다.
3. 본 발명에 따른 화합물의 경우에, 시약 및 출발 화합물의 비용이 훨씬 더 낮다. 특히, CsA의 고리 열림 반응을 위해 사용되는 "메르바인(Meerwein) 시약"이 필요하지 않다.
4. 단편 B(헥사펩티드 AXX2-AXX7)는 시판되는 출발 화합물을 사용하여 표준 고체상 펩티드 합성에 의해 효과적으로 수득될 수 있다(도 1 참조).
5. 천연 출발 화합물로부터 단편 A의 제조 뿐만 아니라, 축합(단편 A와 단편 B), 매크로고리화(macrocyclization) 및 최종 정제 단계들을 최적화하여, 약학적으로 관심대상인 화합물을 수득하기 위한 총 수율은 80%에 이를 수 있다.
6. 종합적으로, 상기 나타낸 점들은 특히 산업적 규모로 본 발명의 화합물의 합성과 관련하여 우수한 효율 및 이에 따라 우수한 상품의 비용을 가져온다.
HCV의 복제를 억제하는 본 발명의 화합물의 능력은 레플리콘 어세이에서 입증되었으며, 면역억제 활성의 본질적인 부재는 T-세포 증식 어세이에서 평가되었다(실시예 5 및 6 참조).
본 발명에 따른 "비 면역억제" 화합물은 시클로스포린 A(CsA)보다 면역억제가 30배 이상 더 낮고(화합물의 IC50(최대 억제의 반을 나타내는 농도) 대 시클로스포린 A의 IC50(IC50 화합물/IC50 CsA)의 비로서 측정됨), 바람직하게는 150배보다 더 낮고, 더 바람직하게는 200배보다 더 낮고, 훨씬더 바람직하게는 300배보다 더 낮은 화합물로서 이해된다. 이상적으로는, 본 발명의 화합물은 콘카나발린-A-유도 T-세포 증식 어세이에서 CsA와 2 로그 차이 이상의 시험관내 비 면역억제 활성을 갖는다.
따라서, 본 발명의 화합물은 약제로서, 특히 항바이러스제로서, 더욱 특히 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료를 위해, 사용하기 위해 고려된다. C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애는 예컨대 만성 간염, 간경화증 또는 간암, 예컨대 간세포암종이다. 또한, 본 발명의 화합물은 예를 들어 HCV 감염된 엄마에게서 태어난 신생아, 또는 상기 바이러스에 노출된 의료계 종사자, 또는 이식 수용자, 예컨대 기관 또는 조직 이식 수용자, 예컨대 간 이식 수용자의 예방적 치료로서, 이식 후에 가능한 재발성 HCV 감염을 제거하기 위해 사용될 수 있다.
"처치"는 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 수단 모두를 나타낸다. 처치를 필요로 하는 대상에는 이미 장애를 갖고 있는 대상체 뿐만 아니라 장애를 예방하려는 대상체도 포함된다. 따라서, 본원에서 처치되는 포유류는 장애를 갖는 것으로 진단된 것일 수도 있고, 또는 장애에 취약하거나 민감할 것일 수도 있다.
처치의 목적을 위한 "포유류"는 포유류로서 분류되는 임의의 동물을 나타내며, 여기에는 인간, 가축 및 경작용 동물 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소, 원숭이 등이 포함된다. 바람직하게는, 상기 포유류는 인간이다. "치료적 유효량"이라는 용어는 포유류의 질환 또는 장애를 치료하는데 유효한 약물의 양을 나타낸다.
본 발명의 화합물은 예를 들어 대상 환자에게 경구적으로 투여될 수 있으며, 예를 들어 미리 농축된 마이크로에멀전으로 혼입될 수 있다.
본 발명의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 이의 프로드럭은 적용가능한 곳에서 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애를 예방 또는 치료하기 위하여, 약학적으로 허용가능한 아쥬반트, 희석제 또는 담체와 조합된 약학 조성물의 형태로 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 아쥬반트, 희석제 또는 담체와 조합하여 본 발명의 화합물 또는 상기 정의된 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 적합한 부형제, 희석제 및 아쥬반트와 관련하여, 이들이 기재되어 있는 표준 문헌, 예컨대 문헌 ["Comprehensive Medicinal Chemistry", Pergamon Press 1990]의 Vol. 5의 챕터 25.2, 및 문헌 ["Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete", by H.P. Fiedler, Editio Cantor, 2002]을 참조할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 예를 들어 코아세르베이션 기법 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 각각, 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀전, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀전에 포획될 수도 있다. 상기 기법들은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
서방성 제제가 제조될 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예에는 본 발명의 화합물을 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 기질이 포함되며, 상기 기질은 형상화된 물품의 형태, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐이다. 서방성 기질의 예에는 폴리에스테르, 히드로겔(예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락티드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산 및 [감마] 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 젖산-글리콜산 공중합체, 예컨대 약제 LUPRON DEPOT(TM)의 제조에 사용되는 것(젖산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사가능 마이크로스피어), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다.
본 발명의 일일 투여량은 처치되는 숙주, 투여의 특정 경로, 및 처치되는 질환의 중증도 및 종류에 따라 필연적으로 달라질 것이다. 따라서, 최적의 투여량은 임의의 특정 환자를 처치하는 의사에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 국부 투여를 위해 크림, 겔, 용액, 연고, 현탁액 또는 플라스터 등으로 제형화될 수 있으며; 흡입에 의한 투여를 위해 예컨대 에어로졸 또는 건조 분말로 제형화될 수 있으며; 경구 투여를 위해 예컨대 정제, 캡슐, 겔, 시럽, 현탁액, 용액, 분말 또는 과립의 형태로 제형화될 수 있으며; 직장 또는 질 투여를 위해 예컨대 좌약으로 제형화될 수 있으며; 또는 비경구적 주사(정맥내, 피하, 근육내, 혈관내 또는 수액이 포함됨)를 위해 멸균액, 현탁액 또는 에멀전으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 활성 화합물은 임의의 통상적 경로에 의해 투여될 수 있다. 이는 예컨대 주사액 또는 현탁액의 형태로, 또는 주사가능 보관 제형의 형태로 비경구 투여될 수 있다. 바람직하게는, 이는 마실 수 있는 용액 또는 현탁액, 정제 또는 캡슐의 형태로 경구 투여될 것이다. 본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물을 포함하는 경구 투여를 위한 약학 조성물은 본 실시예에 기재되어 있다. 본 실시예에서 입증된 바와 같이, 상기 약학 조성물은 통상적으로 본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 물질을 포함한다. 통상적으로, 상기 조성물은 농축되고, 투여하기에 앞서 적합한 희석제, 예컨대 물과 혼합될 필요가 있다. 비경구 투여를 위한 약학 조성물에는 통상적으로 하나 이상의 부형제가 또한 포함된다. 선택적인 부형제에는 등장 제제, 완충액 또는 다른 pH-조절 제제 및 보존제가 포함된다. 이러한 부형제는 조성물의 유지를 위해, 그리고 pH(약 6.5-7.5) 및 삼투농도(약 300 mosm/L)의 바람직한 범위의 달성을 위해, 부가될 수 있다. 경구 투여를 위한 제형의 추가적 예는 미국 특허 제5,525,590호 및 제5,639,724호, 및 미국 특허출원 제2003/0104992호에서 찾을 수 있다. 경구적 경로에 의해, 본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물의 지시된 투여량은 매일 내지 매주 두번 투여를 위해 약 1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg일 수 있다. 정맥내 경로에 의해, 지시된 상응 투여량은 약 1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 바람직하게는 약 1 mg/kg 내지 약 25 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 유효량의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물은, HCV 감염의 처치를 요하는 환자에게 치료적 요법 동안 반복적으로 투여될 때 환자에게서 혈청 HCV 역가의 통계적으로 유의적인 감소 또는 혈청 ALT 활성의 유의적인 감소와 같은 객관적인 임상 반응을 야기하는 양인 것으로 이해된다.
HCV 감염에 대해 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물의 효능을 테스트하기 위한 시험 투여량을 결정할 때, 임상의에 의해 다양한 인자들이 고려될 것이다. 이 중에서 주요한 것은 본 발명의 선택된 시클로운데카뎁시펩티드 화합물의 독성 및 반감기이다. 추가적인 인자에는 환자의 체중, 환자의 연령, 환자의 일반 상태(대상부전의 간 질환, 중증의 이미 존재하는 골수 손상 및 다른 바이러스 감염을 포함하는 유의적인 전신 또는 주요 질환이 포함됨), 예컨대 혈청 알라닌 아미노전이효소(ALT) 수준에 의해 나타내는 HCV 감염의 단계(급성 대 만성), HCV의 특정 유전자형, HCV 감염의 이전 치료, 환자의 다른 약물의 존재 등이 포함된다. 처치의 과정은 본 발명의 약학 조성물의 반복적 투여를 필요로 할 것이다. 통상적으로, 적합한 약물 투여량이 매주 3-7회 투여될 것이며, 처치 기간은 약 4주 내지 6개월, 바람직하게는 약 4주 내지 약 12개월일 수 있다. 처치 후에, 혈청의 HCV의 결정 및 혈청 ALT 수준의 측정이 이어질 수 있다. 처치의 종점은, 바이러스학적 반응, 즉 처치 과정의 끝, 처치를 시작한지 수개월 후, 또는 처치를 완료한지 수개월 후에 HCV의 부재이다. 혈청 중 HCV는 정량적 RT-PCR 또는 노던 블로팅과 같은 방법에 의해 RNA 수준에서 측정될 수 있거나, 또는 바이러스 단백질의 효소 면역어세이 또는 강화 화학발광 면역어세이에 의해 단백질 수준에서 측정될 수 있다. 또한, 상기 종점은 정상적인 범위에서 혈청 ALT 수준의 결정을 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 화합물 외에 HCV 감염에 대해 활성인 하나 이상의 다른 성분, 예를 들어 다른 항바이러스 약물, 예컨대 리바비린, 또는 인터페론 알파를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물 및 상기 다른 활성성분은 조합 요법의 이점을 얻기 위해 설계된 적절한 투여 요법의 부분으로서, 동일한 약학 조성물의 일부로 함께 투여될 수도 있고 개별적으로 투여될 수도 있다. 적절한 투여 요법, 투여되는 각각의 투여량, 및 각 활성제의 용량 사이의 특정 간격은 사용된 활성제의 특이적 조합, 처치되는 환자의 상태, 및 앞에서 논의된 다른 인자들에 의존할 것이다. 상기 부가적 활성성분은 일반적으로 이들이 단일 치료제로서 유효한 양보다 더 적거나 동일한 양으로 투여될 것이다. 인간에게 투여하기 위해 FDA 승인을 받은 상기 활성제들에 대한 FDA 승인 투여량이 공개적으로 이용가능하다.
본 발명의 화합물은 단독 성분으로 투여될 수도 있고, 다른 약물, 예컨대 항-HCV 활성을 갖는 약물, 예컨대 인터페론, 예컨대 인터페론-알파-2a 또는 인터페론-알파-2b, 예컨대 Intron A®, Roferon®, Avonex®, Rebif® 또는 베타feron®, 또는 수용성 중합체 또는 인간 알부민에 컨쥬게이트된 인터페론, 예컨대 Albuferon®(Human Genome Science), 항바이러스제, 예컨대 리바비린, 라미부딘, NV08 또는 NM283, NS3-4A 세린 단백질분해효소, 헬리카제 또는 RNA 중합효소와 같은 HCV 인코딩 인자의 억제제, 또는 상기 억제제의 프로드럭, 항-섬유증제, 예컨대 N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예컨대 이마티닙, 면역 조절제, 예컨대 미코페놀산, 이의 염 또는 프로드럭, 예컨대 미코페놀레이트 나트륨 또는 미코페놀레이트 모페틸, 또는 S1 P 수용체 작용물질, 예컨대 FTY720 또는 인산화될 수 있는 이의 유사체, 예컨대 본원에 전체로서 참조로 삽입되는 EP 627406A1, EP 778263A1, EP 1002792A1, W0 02/18395, W0 02/76995, WO 02/06268, JP 2002316985, W0 03/29184, W0 03/29205, W0 03/62252 및 W0 03/62248에 개시된 것들과 함께 투여될 수도 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 바람직한 인터페론은 Intron-A®, PEG-Intron®, Roferon®, Pegasys®, Berefor®, Sumiferon®, 웰feron®, Infergen®, Alferon®, Viraferon®, Albuferon®(Human Genome Science), Rebif, Omniferon, Omega 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
수용성 중합체에 대한 인터페론의 컨쥬게이트는 특히 폴리알킬렌 산화물 호모중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 이의 공중합체 및 이의 블록 공중합체에 대한 컨쥬게이트를 포함하는 것으로 여겨진다. 폴리알킬렌 산화물-기재 중합체에 대한 대안으로서, 효과적으로 비-항원 물질, 예컨대 덱스트란, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐 알코올, 탄수화물-기재 중합체 등이 사용될 수 있다. 상기 인터페론-중합체 컨쥬게이트는 미국 특허 제4,766,106호, 제4,917,888호, 유럽 특허출원 제0236987호, 유럽 특허출원 제0510356호 및 국제출원공보 WO 제95/13090호에 기재되어 있다. 중합체성 변형은 항원성 반응을 충분히 감소시키기 때문에, 외래 인터페론은 완전히 자가조직일 필요는 없다. 중합체 컨쥬게이트를 제조하는데 사용되는 인터페론은 포유류의 추출물, 예컨대 인간, 반추동물 또는 소의 인터페론으로부터 제조될 수 있으며, 또는 재조합에 의해 제조될 수도 있다. 다른 형태의 인터페론에는 인터페론 베타, 감마, 타우 및 오메가, 예컨대 [Serono]의 Rebif(인터페론 베타 1a), [Viragen]의 Omniferon(천연 인터페론), 또는 [Boehringer Ingelheim]의 오메가 인터페론이 포함된다. 경구 인터페론에는 예컨대 [Amarillo Biosciences]의 경구 인터페론 알파가 포함된다. 페길화된 인터페론이라고도 알려진, 폴리에틸렌 글리콜에 대한 인터페론의 컨쥬게이트가 바람직하다.
특히 바람직한 인터페론의 컨쥬게이트는 페길화된 알파-인터페론, 예를 들어 페길화된 인터페론-알파-2a, 페길화된 인터페론-알파-2b; 페길화된 컨센서스 인터페론 또는 페길화된 정제 인터페론-a 산물이다. 페길화된 인터페론-알파-2a는 예컨대 유럽 특허 제593,868호에 기재되어 있으며, 예컨대 상표명 PEGASYS®(Hoffmann-La Roche)로 시판되고 있다. 페길화된 인터페론-알파-2b는 예컨대 유럽 특허 제975,369호에 기재되어 있으며, 예컨대 상표명 PEG-INTRON A®(Schering Plough)로 시판되고 있다. 페길화된 컨센서스 인터페론은 WO 제96/11953호(본원에 전체로서 참조로 삽입됨)에 기재되어 있다. 바람직한 페길화된 알파-인터페론은 페길화된 인터페론-알파-2a 및 페길화된 인터페론-알파-2b이다. 또한, 페길화된 컨센서스 인터페론이 바람직하다.
사용되는 보조제(co-agent)와 관련된 일일 투여량은 예를 들어 사용된 화합물, 숙주, 투여 방식 및 처치되는 상태의 중증도에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 라미부딘은 일일 투여량 100 mg으로 투여될 수 있다.
페길화된 인터페론은 매주 1회 내지 3회, 바람직하게는 매주 1회, 비경구적으로 투여될 수 있으며, 전체 매주 투여량의 범위는 2백만 내지 1천만 IU, 더 바람직하게는 5백만 내지 1천만 IU, 가장 바람직하게는 8백만 내지 1천만 IU이다. 이는, 매주 3회씩 하루걸러 또는 매일에 기초하여, 주 당 0.5 내지 2.0 마이크로그램/킬로그램에 대응할 수 있다.
또다른 구현예에서, 상기 인터페론 알파는 페길화된 인터페론 알파-2a이고, 투여되는 페길화된 인터페론 알파-2a의 양은 매주 3회씩 하루걸러 또는 매일에 기초하여 주 당 20 내지 250 마이크로그램/킬로그램이다. 바람직하게는, 상기 인터페론 peg-IFNa2a는 매주 1회 180ug의 양으로 투여된다.
또한, HCV의 처치를 위해 통상적으로 사용되는 항바이러스제가 본 발명에 따른 조합물에 포함된다. 상기 제제에는 포유류에서 바이러스의 형성 및/또는 복제를 억제하는데 효과적인 화합물 또는 생물학적 제제가 포함된다. 여기에는 [Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA]의 리바비린(1-베타-D-리보푸라노실-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드), [Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ]의 Rebetol®, 및 [Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ]의 Copegus®, Valeant에서 개발 중인 Levovirin 및 Viramidine과 같은 리바비린 유사체, 및 미조리빈 모노포스페이트과 같은 제제가 포함된다.
또한, 본 발명의 조합물에는 HCV 감염에 대한 활성을 갖는 것으로 입증된 HCV NS3-4A 세린 단백질분해효소의 기질-기재 단백질분해효소 억제제, 비-기질-기재 NS3 단백질분해효소 억제제, 페난트렌퀴논, 티아졸리딘 및 벤즈아닐리드 등의 투여가 추가로 포함될 수 있다.
HCV의 처치를 위한 단백질분해효소 억제제는 예를 들어 본원에 전체로서 참조로 삽입되는 미국 특허 제6,004,933호(Spruce et al); 미국 특허 제5,990,276호(Zhang et al); 미국 특허 제5,538,865호(Reyes et al.); WO 제02/008251호(Corvas International, Inc.), WO 제02/08187호 및 WO 제02/008256호(Schering Corporation); 미국 특허 제6,534,523호, 제6,410,531호 및 제6,420,380호(Boehringer lngelheim) 및 WO 제02/060926호(Bristol Myers Squibb); WO 제02/48172호 및 WO 제02/18198호(Schering Corporation); WO 제02/48157호 및 WO 제02/48116호(Bristol Myers Squibb); WO 제98/17679호(Vertex Pharmaceuticals)에 개시되어 있다.
RD3-4082 및 RD3-4078을 포함하여, 2,4,6-트리히드록시-3-니트로-벤즈아미드 유도체와 같은 비-기질-기재 NS3 단백질분해효소 억제제(Sudo K. et al., Biochemiscal and Biophysical Research Communications, 1997, 238 643-647; Sudo K. et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 1998, 9, 186)가 사용되는 것이 바람직할 수 있다.
HCV 치료법에서 효과적인 것으로 나타난 추가적인 실험 제제에는 [Boehringer Ingelheim]의 HCV NS3-4A 세린 단백질분해효소 억제제 BILN 2061, [Vertex]의 VX-950, [Schering-Plough]의 SCH-6, SCH-7 및 SCH-351633, [GlaxoSmithKline, Bristol Myers Squibb, Abbot, Roche, Merck, Pfizer, 및 Gilead]에 의해 전임상 및 임상 개발중인 다른 HCV 단백질분해효소 억제제가 포함된다. 본원에 기재된 본 발명의 조합물에 유용할 수 있는, HCV의 처치를 위해 현재 임상 개발중인 부가적 제제에는 TMC 435350(Tibotec) 및 ITM-191(Intermune)이 포함된다.
또한, 뉴클레오시드 유사체가 사용될 수도 있다. 상기 유사체의 하나의 예는 [Idenix]의 telbivudine이다(US 6444652, US6596700 및 WO0196353). 또한, WO 제2004/002422호에 개시되어 있는 2'-C-메틸-3'-O-L-발린 에스테르 리보푸라노실 시티딘(NM283, Idenix)과 같은, HCV NS5B RNA-의존 RNA 중합효소의 뉴클레오시드 또는 비-뉴클레오시드 억제제가 사용될 수도 있다. 또한, WO 제01/90121호 및 WO 제01/92282호(Idenix Pharmaceuticals)에 개시되어 있는 분지형 뉴클레오시드가 사용될 수도 있다. 상기 국제특허출원들의 내용은 본원에 전체로서 참조로 삽입된다.
부가적 치료 화합물에는 HCV 게놈에 대한 안티센스 분자, 또는 치료의 효과를 증가시키는 HCV 게놈의 임의의 부분에 상보적인 안티센스 서열이 포함될 수 있다.
또한, Celgosivir(MBI 3253), [Migenix]의 당단백질 가공 억제제, [Trimeris]의 융합 억제제, [Achillion]의 ACH-0137171과 같은 HCV 라이프 사이클의 다른 표적들의 억제제가 고려된다. 수용체 작용물질, 예컨대 톨 유사 수용체("TLR") 작용물질에는 [Anadys]의 ANA245, ANA971, ANA975(US 5041426, 4880784); CpG-10101 a TLR-9 작용물질(Coley Pharmaceuticals); IMPDH 억제제, 미코페놀산, 이의 염 또는 프로드럭, 미코페놀레이트 나트륨 또는 미코페놀레이트 모페틸, 또는 Merimebodib([Vertex]의 VX-497); 티모신 알파-1([SciClone]의 Zadaxin 또는 이의 조합물); SCV-07(SciClone), Belerofon([Nautilus]에 의해 개선된 IFN-α); [NABI]의 CIVACIR(C형 간염 면역 글로불린), 또는 S1P 수용체 작용물질, 예컨대 FTY720 또는 선택적으로 인산화된 이의 유사체, 예컨대 EP 627406A1, EP 778263A1, EP 1002792A1, WO 02/18395, WO 02/76995, WO 02/06268, JP2002316985, WO 03/29184, WO 03/29205, WO 03/62252 및 WO 03/62248에 개시된 것들, 여기서 상기 개시내용은 본원에 전체로서 참조로 삽입됨; [3M Pharmaceuticals]의 Resiquimod [VML 600], 인터페론-α의 강력한 유도인자인 이미퀴모드 유사체 및 다른 시토킨이 포함된다. 또한, 본 발명의 화합물은 인터루킨-10(Schering-Plough), [Endo Labs Solvay]의 AMANTADINE(Symmetrel), [Idun Pharma]의 카스파제 억제제 IDN-6556, [Chiron]의 HCV/MF59, [Maxim]의 CEPLENE(히스타민 디클로라이드), [Idun PHARM]의 IDN-6556, [Tularik]의 T67, 베타-튜불린 억제제, [Fujisawa Healthcare]의 FK788, IdBI 016(Siliphos, 경구 실리빈-포스파티딜 콜린 피토좀), [Immtech]의 Dication, [Aethlon Medical]의 hemopurifier, [United Therapeutics]의 UT 231 B; HepeX-C SM1, [Bayer]의 PPVO-Bay55-8800(파라폭스바이러스 오비스); [Angion]의 Refanalin(HGF 모방체), R803(Rigel), JTK-003, JTK-002, 및 JTK-109(모두 Japan Tobacco의 것임), HCV-086(ViroPharma/Wyeth), ISIS-14803(ISIS Pharmaceuticals), GS-9132([Achillion pharmaceuticals]의 중합효소 억제제), HCV-793(Pharmasset 및 Roche), R1626(Roche)과 조합하여 사용될 수 있다.
관심대상인 다른 화합물에는 Ursodiol(EP 00269516, Axcan Pharma), HE-2000(DHEA 유사체, Colthurst Ltd), EHC-18(면역조절자, Enzo biochem), 히스타민 디히드로클로라이드(H2 작용물질, WO09104037, Estero-Anstalt), 니타족사니드(Romark), 1-아미노-알킬시클로헥산(미국 특허 제6,034,134호), 알킬 지질(미국 특허 제5,922,757호), 비타민 E 및 다른 항산화제(미국 특허 제5,922,757호), 담즙산(미국 특허 제5,846,964호), N-(포스포노아세틸)-L-아스파르트산)(미국 특허 제5,830,905), 벤젠디카르복스아미드(미국 특허 제5,633,388호), 폴리아데닐산 유도체(미국 특허 제5,496,546호), 2'3'-디데옥시이노신(미국 특허 제5,026,687호), 벤즈이미다졸(미국 특허 제5,891,874호), 식물 추출물(미국 특허 제5,837,257호; 미국 특허 제5,725,859호 및 미국 특허 제6,056,961호) 및 피페리딘(미국 특허 제5,830,905호); N-(포스포노아세틸)-L-아스파르트산, 벤젠디카르복스아미드, 폴리아데닐산 유도체, 글리코실화 억제제, 및 바이러스 감염에 의해 야기된 세포 손상을 차단하는 비특이적 세포보호제가 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 화합물은 HCV 치료에 대한 백신 또는 항체-기재 접근법과 조합하여 이용될 수 있다. 치료 백신에는 [Intercell]의 백신(치료 펩티드 백신 IC41 HCV), Epimmune/Genecor, Merix, Tripep(Chiron-VacC), [Avant]의 면역요법(Therapore), [CellExSys]의 T 세포 요법, [STL]의 모노클로날 항체 XTL-002, ANA 246 및 [Anadys]의 ANA 246, [Innogenetics]의 E2에 대한 치료 백신, [XTL Bio]의 E2 엔벨로프 단백질에 대한 mAb, GI-5005(Globelmmune Inc), InnoVac-C(WO 9967285, Innogenetics), IC-41(Intercell), 인터페론 알파-n3(Interferon Sciences)이 포함된다.
또다른 측면에서, 본 발명은 적어도 a) 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 약학 조성물로 이루어진 제1 제제, 및 b) HCV 복제에 대해 작용하는 성질을 갖는 제2 제제를 포함하는 약학적 조합물을 제공한다.
특히, 이러한 약학적 조합물은 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이다.
또한, 본 발명에 따라, 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
또한, 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 HCV 복제를 억제하기 위한 방법이 제공된다.
본 발명의 또다른 목적은 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 약학 조성물 및 항-HCV 성질을 갖는 제제로부터 선택된 보조제(co-agent)를 공동으로 또는 차례대로 공투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공하는 것이다.
본원에서 사용되는 "공투여" 또는 "조합 투여" 등의 용어들은 선택된 치료제의 단일 환자에 대한 투여를 포함하는 것으로 여겨지며, 상기 치료제가 반드시 동일한 투여 경로에 의해 또는 동시에 투여될 필요가 없는 처치 요법을 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명의 약학적 조합물의 투여는 그의 약학적 활성성분의 하나만을 적용하는 단일요법에 비해 이로운 효과, 예컨대 상승적 치료 효과를 가져온다. 바람직한 상승적 조합물은 본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물과 중합체에 컨쥬게이트될 수 있는 인터페론의 조합물이다.
더 바람직한 조합물은 본 발명에 따른 식 I의 화합물과 미코페놀산, 이의 염 또는 프로드럭, 또는 S1 P 수용체 작용물질, 예컨대 FTY720과의 조합물이다.
본원에서 인용된 모든 특허, 특허출원 및 공보들은 본원에 전체로서 참조로 삽입되는 것으로 고려되어야 한다.
당업자라면 본원에 기재되어 있는 본 발명이 구체적으로 기재된 것 외에 변형 및 수정이 허용된다는 것을 인식할 수 있을 것이다. 본 발명은 그의 취지 또는 본질적인 특징에서 벗어나지 않는다면 모든 변형 및 수정들을 포함한다는 것이 이해되어져야 한다. 또한, 본 발명은 본원 명세서에서 언급되거나 지적한 모든 단계들, 특징들, 조성물 및 화합물을, 개별적으로 또는 집합적으로, 그리고 상기 단계들 및 특징들의 임의의 둘 이상 또는 모든 조합들을 포함한다. 따라서, 본원의 개시내용은 모든 면에서 예시적인 것이고 이에 제한되지 않는 것으로 여겨지며, 본 발명의 범위는 첨부된 특허청구범위에 의해 나타내어지며, 동등한 의미와 범위 내에 있는 모든 변화들은 본원에 포함되는 것으로 의도된다.
본원 명세서를 통해 인용된 다양한 참조문헌들은 각각 본원에 전체로서 참조로 삽입된다.
전술한 기재는 하기 실시예를 참조하여 더 자세하게 이해될 수 있을 것이다. 그러나, 이러한 실시예는 본 발명을 실시하는 예시적인 방법이며, 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
본 발명을 더 잘 이해하고 이를 어떻게 효과적으로 실시할 수 있는지를 보여주기 위해, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 특정 구현예, 방법 및 과정을 단지 일례로서 나타낼 것이다.
도 1은 WO 2006/038088에 따른 화합물, 즉 [D-MeAla]3-[EtVal]4-CsA(Debio 025)와 비교하여 본 발명에 따른 화합물의 화학 합성을 나타낸다.
실시예 1a:
시클로운데카뎁시펩티드 (Ia)의 제조: 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv- MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)
1. 천연 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)로부터 시작하여, 단편 (Aa)의 제조(US 제5,116,816호의 실시예 2, 또는 WO 제02/092033호의 실시예 4의 단계 4-1 참조):
H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (Aa)
1.1 변이형 A
시클로-(MeBmt-Thr(O-(N-이미다졸릴)카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (1A)의 제조.
15 mL의 무수 CH2Cl2 중 시클로-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(US 제5,116,816호의 실시예 2, 또는 WO 제02/092033호의 실시예 4의 단계 4-1 참조)(3.00 g, 2.40 mmol, 1.0 equiv.) 및 1,1'-카보닐디이미다졸(1.17 g, 7.21 mmol, 3.0 equiv.)의 용액이 2.5시간 동안 실온에서 교반되었다. 반응의 진행은 분석적 UPLC에 의해 모니터되었다. 81.1% 전환이 획득되었다. 부가적인 양의 1,1'-카보닐디이미다졸(0.39 g, 2.40 mmol, 1.0 equiv.)이 상기 반응 혼합물에 첨가되었다. 16시간 동안 추가로 교반한 후에, 98.8% 전환이 획득되었다. 상기 용액은 감압하에 증발되었다. 잔여물은 AcOEt(45 mL)에 용해되었으며, 10% 시트르산 (45 mL) 및 브라인(brine)(45 mL)에 의해 순차적으로 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되어, 백색 분말로서 2개의 화합물 (1A) 및 (2A)의 혼합물이 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z): (1A): 1342.75 [M + H]+ ([C68H117N12O15]+; calc. 1342.73), (2A): 1274.77 [M + H]+ ([C65H113N10O15]+; calc. 1274.65)
시클로-(MeBmt-Thr(O,N-카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (2A)의 제조.
건조 DMSO(15 mL) 중 이전 반응에서 수득된 화합물 (1A)의 용액(3.41 g, 2.40 mmol)이 교반되었으며, 아르곤 대기하에서 2시간 동안 100℃에서 가열되었다. 반응의 진행은 분석적 UPLC에 의해 모니터되었다. 완전한 전환이 획득되었다. 그 후, 상기 용액은 AcOEt(45 mL)에 용해되었으며, HCl 1M(30 mL) 및 23.2% aq. NaCl 용액(15 mL), 이어서 11.6% aq. NaCl 용액(45 mL)에 의해 순차적으로 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되어, 백색 분말로서 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Thr(O,N-카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (2A)가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z): 1274.65 [M + H]+ ([C65H113N10O15]+; calc. 1274.65.
H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe (단편 (Aa) 메틸 에스테르 (3A)의 제조.
0℃에서 냉각된 30 mL의 MeOH(건조) 중 이전 반응에서 수득된 시클로뎁시펩티드(1.00 g, 0.78 mmol)의 용액에 아르곤 하에서 일부의(in one portion) Ca(OMe)2(0.24 g, 2.35 mmol)가 부가되었다. 0℃에서 5시간, 그리고 실온에서 1시간 후에, UPLC에 의한 반응 진행 제어는 98.6%의 전환을 나타내었다. 상기 용액은 0℃에서 냉각된 후에, 10% 시트르산의 수용액으로 중화되었다. 메탄올은 증발되었다. 상기 수성 혼합물은 AcOEt/NaCl 23.2%(1:1 V/V)의 혼합물 100 mL에 부가되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물(crude mixture)이 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리되었으며, 펜타펩티드 -D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe (3A)가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z): 669.16 [M + H]+ ([C35H65N4O8]+; calc. 669.48).
단편 (Aa) H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (4)의 제조.
THF(8.6 mL) 및 물(1.1 mL) 중 이전 반응에서 수득된 펜타펩티드(1.15 g, 1.72 mmol, 1.0 equiv.)(3A)의 용액이 냉수조에서 0℃까지 냉각되었으며, 그 후 2 M LiOH(1.72 mL, 3.44 mmol, 2.0 equiv.)가 20초 내에 첨가되었다. 냉각조는 그 후 제거되었으며, 상기 혼합물(pH = 12-13)은 약 3시간 동안 실온에서 교반되었다. UPLC에 의한 반응 진행 제어는 완전한 전환을 나타내었다. 그 후, 상기 용액은 0℃까지 냉각되었으며, 10% 시트르산으로 중화되었다. 테트라히드로푸란은 감압하에 증발되었다. 잔여물은 AcOEt(50 mL)에 용해되었으며, 10% 시트르산(3 mL) 및 23.2% aq. NaCl 용액(50 mL)(pH 3)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되어, 백색 분말로서 단편 (Aa) H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (4)가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 655.21 [M + H]+ ([C34H63N4O8]+; calc. 655.46).
1.2 변이형 B
H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 MeOH(90 mL) 중 천연 시클로-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(US 제5,116,816호의 실시예 2, 또는 WO 제02/092033호의 실시예 4의 단계 4-1에서 수득됨)(3.0 g, 2.40 mmol)의 용액에 아르곤 하에서 MeONa(0.519 g, 9.6 mmol, 4.0 equiv.)가 부가되었다. 0℃에서 1시간, 그리고 실온에서 2시간 후에, HPLC에 의한 반응 진행 제어는 완료를 나타내었다. 상기 용액은 0℃에서 냉각된 후에, 10% 시트르산의 수용액으로 중화되었다(pH 5-6). 메탄올은 증발되었다. 상기 수성 혼합물은 150 mL의 에틸 아세테이트에 부가되었다. 유기층은 H2O(20 mL) 및 브라인(20 mL)에 의해 세척되었으며, MgSO4 상에서 건조되었으며, 여과되었다. 진공하에서 용매 증발 및 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해, 순 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
H-D-Hiv( O -(N-이미다졸릴)카보닐)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr(O-(N-이미다졸릴)카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (1B)의 제조
53 mL의 무수 CH2Cl2 중 이전 반응에서 수득된 운데카펩티드(2.96 g, 2.31 mmol, 1.0 equiv.) 및 1,1'-카보닐디이미다졸(1.50 g, 9.25 mmol, 4.0 equiv.)의 용액이 22시간 동안 실온에서 교반되었다. 반응의 진행은 분석적 HPLC 및 TLC에 의해 모니터되었다. 상기 용액은 감압하에서 증발되었다. 잔여물은 150 mL의 에틸 아세테이트에 용해되었으며, 10% 시트르산(30 mL), H2O(30 mL) 및 브라인(30 mL)에 의해 순차적으로 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 생성물이 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제되었으며, 백색 분말로서 H-D-Hiv(O-(N-이미다졸릴)카보닐)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr(O-(N-이미다졸릴)카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (1B)가 획득되었다.
H-D-Hiv( O -(N-이미다졸릴)카보닐)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr(O,N-카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (2B)의 제조
건조 DMSO(40 mL) 중 이전 반응에서 수득된 운데카펩티드(3.26 g, 2.22 mmol)의 용액이 교반되었으며, 아르곤 대기하에서 3.5시간 동안 100℃에서 가열되었다. 반응의 진행은 TLC 및 분석적 HPLC에 의해 모니터되었다. 그 후, 상기 용액은 AcOEt(200 mL)에 용해되었으며, aq. 10% 시트르산(2회, 30 mL), H2O(1×30 mL) 및 포화된 aq. NaCl 용액(1×30 mL)에 의해 순차적으로 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 생성물은 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제되었다. 용매 증발 후에 잔여물은 고진공하에서 건조되어, 백색 분말로서 운데카펩티드 H-D-Hiv(O-(N-이미다졸릴)카보닐)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr(O,N-카보닐)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (2B)가 획득되었다.
H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe (3B)의 제조
0℃에서 냉각된 100 mL의 MeOH(건조) 중 이전 반응에서 수득된 운데카펩티드 (2B)(3.05 g, 2.17 mmol)의 용액에 아르곤 하에서 일부의(in one portion) MeOK(0.456 g, 6.53 mmol)가 부가되었다. 0℃에서 1시간, 그리고 실온에서 1시간 후에, HPLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 상기 용액은 0℃에서 냉각된 후에, 10% 시트르산의 수용액으로 중화되었다. 메탄올은 증발되었다. 상기 수성 혼합물은 AcOEt/H2O(1:1 v/v)의 혼합물 100 mL에 부가되었다. 유기층은 H2O(1×10 mL) 및 브라인(1×10 mL)으로 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 예비 HPLC에 의해 분리되어, 펜타펩티드 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe (3B)가 획득되었다.
H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (4, 단편 Aa)의 제조
THF(18.8 mL) 중 이전 반응에서 수득된 펜타펩티드(1.265 g, 1.88 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 냉수조에서 0℃까지 냉각되었으며, 그 후 0.2 M LiOH (18.8 mL, 3.66 mmol, 2.0 equiv.)가 20분에 걸쳐 적하첨가되었다. 냉각조는 그 후 제거되었으며, 상기 혼합물(pH = 12-13)은 약 2.5시간 동안 실온에서 교반되었다(TLC 제어). 그 후, 상기 용액은 0℃까지 냉각되었으며, 0.1 M HCl(pH 2-3)으로 중화되었다. 테트라히드로푸란은 감압하에 증발되었다. 잔여물은 AcOEt(100 mL)에 용해되었으며, 10% 시트르산(1×20 mL), H2O(1×20 mL) 및 브라인(1×20 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되어, 백색 분말로서 펜타펩티드(나트륨염) H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-ONa가 획득되었다.
HR-MALDI-MS: 677.46 [M + Na]+ ([C34H62N4NaO8]+; calc. 677.4465).
2. 단편 (Ba)의 제조:
H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe (Ba)
2.1. Boc-MeLeu-Gly-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(240 mL) 중 시판되는 H-Gly-OMe.HCl(4.0 g, 31.8 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(32.88 mL, 189.0 mmol, 6.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 15분 후에, HATU(15.72 g, 41.34 mmol, 1.3 equiv.) 및 Boc-MeLeu-OH(7.8 g, 31.8 mmol, 1.0 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 22.45시간 후에, TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(40 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(400 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×80 mL), H2O(1×80 mL) 및 브라인(1×80 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 분리되었으며, 백색의 오일성 거품(oily foam)으로서 에스테르 Boc-MeLeu-Gly-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 339.0234 [M + Na]+ ([C15H28N2NaO5]+; calc. 339.1896).
2.2. H-MeLeu-Gly-OMe의 제조
TFA/DCM(30 mL, 2:3 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 디펩티드(9.9 g, 31.29 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 45분 동안 0℃, 그리고 2시간 동안 실온에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(20분) 건조되었다. 그 후, DCM(60 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지 DIPEA(2.0 mL)에 의해 0℃에서 연마(triturate)되었다. 증발 및 건조 후에, 디펩티드 H-MeLeu-Gly-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 217.0546 [M + H]+ ([C10H21N2O3]+; calc. 217.1552).
2.3. Boc-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(160 mL) 중 이전 반응에서 수득된 디펩티드(3.38 g, 15.63 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(8.08 mL, 46.89 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(7.72 g, 20.14 mmol, 1.3 equiv.) 및 Boc-Leu-OH(3.98 g, 17.19 mmol, 1.1 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 15.45시간 후에, TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(36 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(240 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×60 mL), H2O(1×60 mL) 및 브라인(1×60 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 황색의 오일(yellowish oil)로서 에스테르 Boc-Leu-MeLeu-Gly-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 430.0120 [M + H]+ ([C21H40N3O6]+; calc. 430.2917).
2.4. H-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
TFA/DCM(12 mL, 1:1 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 트리펩티드(3.0 g, 6.98 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1시간 동안 0℃, 그리고 2시간 동안 실온에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(15분) 건조되었다. 그 후, DCM(20 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지 DIPEA에 의해 0℃에서 연마(triturate)되었다. 증발 및 건조 후에, H-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 330.0227 [M + H]+ ([C16H32N3O4]+; calc. 330.2393); 352.0016 [M + Na]+ ([C16H31N3NaO4]+; calc. 352.4248); 659.1626 [2M + H]+ ([C32H63N6O8]+; calc. 659.1626).
2.5. Boc-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(105 mL) 중 이전 반응에서 수득된 트리펩티드(2.3 g, 6.98 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(3.61 mL, 20.34 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(3.45 g, 9.07 mmol, 1.3 equiv.) 및 Boc-MeVal-OH(1.78 g, 7.68 mmol, 1.1 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 15.45시간 후에, TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(25 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(150 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×50 mL), H2O(1×50 mL) 및 브라인(1×50 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 분리되었으며, 황색의 오일(yellowish oil)로서 에스테르 Boc-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 543.0484 [M + H]+ ([C27H51N4O7]+; calc. 543.3758); 565.0467 [M + Na]+ ([C27H50N4NaO7]+; calc. 565.3577).
2.6. H-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
TFA/DCM(12 mL, 1:1 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 테트라펩티드(3.56 g, 6.56 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1시간 동안 0℃, 그리고 2시간 동안 실온에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(약 15분) 건조되었다. 그 후, DCM(45 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지 DIPEA에 의해 0℃에서 연마(triturate)되었다. 증발 및 건조 후에, 테트라펩티드 H-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 443.0694 [M + H]+ ([C22H43N4O5]+; calc. 443.3233); 465.0063 [M + Na]+ ([C22H42N4NaO5]+; calc. 465.3053).
2.7. Boc-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(110 mL) 중 이전 반응에서 수득된 테트라펩티드(2.90 g, 6.56 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(3.39 mL, 19.68 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(3.24 g, 8.53 mmol, 1.3 equiv.) 및 Boc-D-MeAla-OH(1.46 g, 7.21 mmol, 1.1 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 17.45시간 후에, TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(25 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(150 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산 (1×50 mL), H2O(1×50 mL) 및 브라인(1×50 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 황색의 거품(yellowish foam)으로서 에스테르 Boc-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 628.56 [M + H]+ ([C31H58N5O8]+; calc. 628.4285); 650.53 [M + Na]+ ([C31H57N5NaO8]+; calc. 650.4105).
2.8. H-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
TFA/DCM(6 mL, 1:1 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 펜타펩티드(1.6 g, 2.55 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1시간 동안 0℃, 그리고 2시간 동안 실온에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(약 15분) 건조되었다. 그 후, DCM(20 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지 DIPEA에 의해 0℃에서 연마(triturate)되었다. 증발 및 건조 후에, 펜타펩티드 H-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 528.49 [M + H]+ ([C26H50N5O6]+; calc. 528.3761).
2.9. Boc-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(60 mL) 중 이전 반응에서 수득된 펜타펩티드(1.33 g, 2.52 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(1.30 mL, 7.56 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(1.25 g, 3.28 mmol, 1.3 equiv.) 및 Boc-Abu-OH(0.56 g, 2.77 mmol, 1.1 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 밤샌 후에, TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(15 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(100 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×40 mL), H2O(1×40 mL) 및 브라인(1×40 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 황색의 거품(yellowish foam)으로서 에스테르 Boc-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 713.1513 [M + H]+ ([C35H65N6O9]+; calc. 713.4813); 735.1010 [M + Na]+ ([C35H64N6NaO9]+; calc. 735.4632).
2.10. H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe (Ba)의 제조
TFA/DCM(6 mL, 1:1 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 헥사펩티드(0.82 g, 1.15 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1시간 동안 0℃, 그리고 1시간 동안 실온에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(약 15분) 건조되었다. 그 후, DCM(25 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지 DIPEA에 의해 0℃에서 연마(triturate)되었다. 증발 및 건조 후에, 헥사펩티드 H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 613.1925 [M + H]+ ([C30H57N6O7]+; calc. 613.4289).
3. 단편 (Aa) 및 단편 (Ba)의 커플링(coupling)
3.1. D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(33 mL) 중 이전 반응에서 수득된 헥사펩티드 H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe(0.7 g, 1.14 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(0.59 mL, 3.42 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(0.56 g, 1.48 mmol, 1.3 equiv.) 및 펜타펩티드 D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH(0.75 g, 1.14 mmol, 1.0 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 16.45시간 후에, TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(10 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(130 mL)으로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×35 mL), H2O(1×35 mL) 및 브라인(1×35 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 생성물이 CC에 의해 정제되었으며, 백색의 거품으로서 운데카펩티드 D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 625.6903 [M/2 + H]+ ([C32H59N5O7]+; calc. 625.4415); 1249.7793 [M + H]+ ([C64H117N10O14]+; calc. 1249.8751).
3.2. D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OH의 제조
THF(10.4 mL) 중 이전 반응에서 수득된 운데카뎁시펩티드(1.30 g, 1.04 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 냉수조에서 0℃까지 냉각되었으며, 그 후 0.2 M LiOH(10.4 mL, 2.08 mmol, 2.0 equiv.)가 10분에 걸쳐 적하첨가되었다. 냉각조는 유지되었으며, 상기 혼합물(pH = 12-13)은 0℃에서 약 20분 동안, 그리고 실온에서 30분 동안 교반되었다(TLC 제어). 그 후, 상기 용액은 0℃까지 냉각되었으며, 0.1 M HCl(pH 2-3)으로 중화되었다. 테트라히드로푸란은 감압하에 증발되었다. 그 후, 상기 용액은 0℃까지 냉각되었으며, aq. 10% 시트르산(pH 3-4)으로 중화되었다. 상기 용액은 감압하에 증발되었다. 잔여물은 AcOEt(140 mL)에 용해되었으며, H2O(1×30 mL) 및 브라인(1×30 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 생성물이 CC에 의해 정제되었으며, 백색 분말로서 운데카펩티드 D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OH가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 1235.7690 [M + H]+ ([C63H115N10O14]+; calc. 1235.8594).
4. 매크로락톤화: 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)의 제조
DCM(128 mL) 중 DMAP(0.507 g, 4.144 mmol, 4.0 equiv.) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP)(1.078 g, 2.071 mmol, 2.0 equiv.)의 용액에 2시간에 걸쳐 DCM(20 mL) 중 이전 반응에서 수득된 운데카뎁시펩티드 산(1.28 g, 1.036 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 적하첨가되었다. 혼합물은 산의 첨가가 완료된 후에 밤새(22시간) 교반되었으며; 그 후, 혼합물은 분별깔때기로 이동되었다. 총 반응 시간 = 24 h. 상기 용액은 0.1 M HCl(20 mL)에 의해 세척되었으며, 유기층은 분리되고 MgSO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 농축되었다. 조 생성물이 CC에 의해 정제되었으며, 이에 따라 백색의 고체로서 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)가 획득되었다. 그 후, 획득된 화합물은 예비 HPLC에 의해 재정제되었으며, 백색 분말로서 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)이 획득되었다. 순도 99.38% (80℃, 30분).
(C63H112N10O13, MW = 1217.6226 g/mol).
UPLC(40℃, ACQUITY UPLC® BEH C18 1.7 μm, 214 nm, 50 → 95%, 7분) tR = 2.923분.
UPLC
천연 운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)에서 시작하여 운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)을 수득하는 총 수율은 50%보다 높다.
실시예 1b:
화합물 (Ic), (If), (Ig), (Ii) 및 (Ik)는 실시예 1a와 유사한 반응 경로에 따라 제조될 수 있다.
실시예 2
시클로운데카뎁시펩티드 (Ib)의 제조:
시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ib)
2. 단편 (Bb)의 제조:
H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe (Bb)
2.1. Boc-MeLeu-Ala-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(130 mL) 중 시판되는 H-Ala-OMe.HCl(2.00 g, 14.32 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(14.68 mL, 86.0 mmol, 6.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 15분 후에, HATU(6.52 g, 17.18 mmol, 1.2 equiv.) 및 Boc-MeLeu-OH(3.512 g, 14.32 mmol, 1.0 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 48시간 후에(RT = 2일 15분), TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(20 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(200 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×40 mL), H2O(1×40 mL) 및 브라인(1×40 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 연한 황색 오일로서 에스테르 Boc-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다. 샘플(30 mg)은 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 펩티드는 동결건조되어, 백색 분말로서 에스테르 Boc-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
2.2. H-MeLeu-Ala-OMe의 제조
TFA/DCM(10 mL, 2:3 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 디펩티드(1.70 g, 5.14 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1.5시간 동안 0℃에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(20분) 건조되었다. 그 후, DCM(10 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지 DIPEA에 의해 0℃에서 연마되었다. 그 후, 반응 혼합물은 DCM(60 mL)로 희석되었으며, H2O(1×10 mL) 및 브라인(1×10 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 여과되고, Na2SO4 상에서 건조되고, 감압하에 증발되고 건조되었다. H-MeLeu-Ala-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다.
2.3 Boc-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(108 mL) 중 이전 반응에서 수득된 디펩티드 (7)(2.17 g, 9.42 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(6.45 mL, 37.68 mmol, 4.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(4.65 g, 12.25 mmol, 1.3 equiv.) 및 Boc-Leu-OH(2.39 g, 10.36 mmol, 1.1 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 15시간 후에(15시간 15분), TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(10 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(50 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×20 mL), H2O(1×20 mL) 및 브라인(1×20 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 황색의 오일(yellowish oil)로서 트리펩티드 Boc-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다. 샘플은 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 펩티드는 동결건조되어, 백색 분말로서 트리펩티드 Boc-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
2.4. H-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
TFA/DCM(10 mL, 2:3 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 트리펩티드(2.00 g, 4.50 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 2시간 동안 0℃에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 생성물은 고진공하에서(20분) 건조되어, 조 물질이 획득되었다. 그 후, DCM(20 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지(Lackmus지) DIPEA에 의해 0℃에서 연마되었다. 증발 및 건조 후에, 조 아민 H-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다. 샘플(25 mg)은 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 생성물은 동결건조되어, 고체로서 트리펩티드 H-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
2.5. Boc-D-MeAla-EtVal-OH의 제조
BuLi 및 트리에틸옥소늄플루오로보레이트를 사용하여 Boc-D-MeAla-Val-OMe로부터 시작하여, 문헌 [Jean Francois. Guichou, PhD thesis entitled "De nouveaux analogues de Cyclosporine A comme agent anti-VIH-1" Faculte des Sciences, Universite de Lausanne, 2001, p.121-122]에 따라 메틸에스테르의 가수분해에 의해, Boc-D-MeAla-EtVal-OH가 획득되었다.
2.6. Boc-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
-8℃에서 냉각된 건조 DCM(8 mL) 중 트리펩티드 H-Leu-MeLeu-Ala-OMe(0.096 g, 0.291 mmol, 1.0 equiv.) 의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(0.15 mL, 0.87 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 10분 후에, HATU(0.13 g, 0.35 mmol, 1.2 equiv.) 및 디펩티드 Boc-D-MeAla-EtVal-OH(0.1 g, 0.29 mmol, 1.0 equiv.)가 일부로서 부가되었다. -8℃에서 10분, 그리고 실온에서 40분 후에, HPLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(1 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(20 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×5 mL), H2O(1×5 mL) 및 브라인(1×5 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 오일로서 펜타펩티드 Boc-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다. 샘플은 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 생성물은 동결건조되어, 백색 분말로서 펜타펩티드 Boc-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
2.7. H-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
TFA/DCM(4.0 mL, 2:3 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 펜타펩티드(0.45 g, 0.69 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1.5시간 동안 0℃에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 잔여물은 고진공하에서(0.5시간) 건조되었다. 그 후, DCM(10 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 과량의 TFA를 중화시키기 위해 pH 7-8까지(Lackmus지) DIPEA에 의해 0℃에서 연마되었다. 증발 및 건조 후에, 펜타펩티드 H-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 조 아민염이 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다. 샘플(30 mg)은 준-예비 RP-HPLC에 의해 정제되었으며, 펩티드는 동결건조되어, 백색 분말로서 펜타펩티드 H-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 자유 아민이 획득되었다.
2.8. Boc-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(10 mL) 중 이전 반응에서 수득된 조 펜타펩티드(0.2 g, 0.36 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(0.18 mL, 1.08 mmol, 3.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 5분 후에, HATU(0.19 g, 0.5 mmol, 1.4 equiv.) 및 Boc-Abu-OH(0.088 g, 0.42 mmol, 1.1 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 1.15시간 후에(RT = 1.5시간), TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(2 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(50 mL)로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×10 mL), H2O(1×10 mL) 및 브라인(1×10 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 혼합물이 CC에 의해 분리되었으며, 황색의 오일로서 헥사펩티드 Boc-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다. 샘플(30 mg)은 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 생성물은 동결건조되어, 백색 분말로서 헥사펩티드 Boc-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
2.9. H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe 단편 (Bb)의 제조
TFA/DCM(3.0 mL, 2:3 V/V) 중 이전 반응에서 수득된 헥사펩티드(0.187 g, 0.25 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 1.5시간 동안 0℃에서 유지되었으며, 용매는 감압하에 제거되었다. 조 생성물은 고진공하에서(0.5시간) 건조되었다. 그 후, DCM(3 mL)이 첨가되었으며, 혼합물은 TFA를 제거하기 위해 pH 7-8까지(Lackmus지) DIPEA에 의해 0℃에서 연마되었다. 증발 및 건조 후에, 조 아민 H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 추가의 정제 없이 다음의 짝지어진 단계에 사용되었다. 조 생성물의 샘플(23 mg)은 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 펩티드는 동결건조되어, 백색 분말로서 단편 (Ba) H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 641.259 [M + H]+ ([C32H61N6O7]+; calc.641.4602).
3. 단편 (Aa) 및 단편 (Bb)의 커플링(coupling)
3.1. H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe의 제조
0℃에서 냉각된 건조 DCM(10 mL) 중 이전 반응에서 수득된 헥사펩티드 H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe(0.16 g, 0.25 mmol, 1.0 equiv.)의 용액에 아르곤 하에서 DIPEA(0.214 mL, 1.26 mmol, 5.0 equiv.)가 부가되었다. 이어서 5분 후에, HATU(0.12 g, 0.31 mmol, 1.25 equiv.) 및 상기에서 수득된 펜타뎁시펩티드 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (4)(0.16 g, 0.25 mmol, 1.0 equiv.)가 일부로서 부가되었다. 0℃에서 15분, 그리고 실온에서 1.15시간 후에(RT = 1.5시간), TLC에 의한 반응 진행 제어는 완결을 나타내었다. 반응은 10% NaHCO3(3 mL)의 첨가에 의해 종료(quench)되었으며, 15분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 DCM(40 mL)으로 희석되었으며, 10% 시트르산(1×8 mL), H2O(1×8 mL) 및 브라인(1×8 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 생성물이 CC에 의해 분리되었으며, 백색의 거품으로서 운데카펩티드 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다. 분석용 샘플(18 mg)이 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 생성물은 동결건조되어, 백색 분말로서 운데카펩티드 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe가 획득되었다.
3.2. H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OH의 제조
THF(2.5 mL) 중 이전 반응에서 수득된 운데카펩티드 메틸에스테르(0.27 g, 0.21 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 냉수조에서 0℃까지 냉각되었으며, 그 후 0.2 M LiOH(2.11 mL, 0.42 mmol, 2.0 equiv.)가 10분에 걸쳐 적하첨가되었다. 그 후, 냉각조는 제거되었으며, 혼합물(pH = 12-13; Lackmus지)은 실온에서 1시간 20분 동안 교반되었다(TLC 제어). 그 후, 상기 용액은 0℃까지 냉각되었으며, pH 3-4까지 1.0 M HCl에 의해 산성화되었다. 상기 용액은 감압하에 증발되었다. 잔여물은 AcOEt(40 mL)에 용해되었으며, 10% 시트르산(1×8 mL), H2O(1×8 mL) 및 브라인(1×8 mL)에 의해 세척되었다. 유기상은 Na2SO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 증발되었다. 조 생성물이 CC에 의해 분리되었으며, 백색 분말로서 산 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OH가 획득되었다. 샘플(40 mg)이 준-예비 RP-HPLC에 의해 재정제되었으며, 생성물은 동결건조되어, 백색 분말로서 운데카펩티드 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OH가 획득되었다.
4. 매크로락톤화 : 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ib)의 제조
DCM(12 mL) 중 DMAP (0.048 g, 0.39 mmol, 4.0 equiv.) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP)(0.102 g, 0.196 mmol, 2.0 equiv.)의 용액에 1.5시간에 걸쳐 DCM(4 mL) 중 이전 반응에서 수득된 운데카펩티드(0.124 g, 0.098 mmol, 1.0 equiv.)의 용액이 적하첨가되었다. 혼합물은 산의 첨가가 완료된 후에(RT = 24시간) 교반되었으며; 그 후, 분별깔때기로 이동되었다. 상기 용액은 1 M HCl(2 mL)에 의해 세척되었으며, 유기층은 분리되고 MgSO4 상에서 건조되었으며, 여과되고 감압하에 농축되었다. 조 생성물이 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되었으며, 이에 따라 백색의 고체로서 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)가 획득되었다. 샘플(77 mg)이 준-예비 RP-HPLC에 의해 정제되었으며, 생성물은 동결건조되어, 백색 분말로서 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ib)가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 1245.787 [M + H]+ ([C65H117N10O13]+; calc. 1245.8802), 623.465 [M/2 + H]+ (calc. 623.444).
실시예 3:
시클로-(MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ih)의 제조
(Ih)의 제조는 실시예 2에 기재되어 있는 화합물의 제조와 유사하게 수행되었다.
단편 (Bh)는 단편 (Bb)를 제조하기 위해 실시예 2에 기재된 것과 유사한 반응 조건을 적용하여 제조되었다. 그 후, 단편 (Bh)는 실시예 2에 기재된 것과 유사한 반응 조건을 적용하여 단편 (Aa)에 커플링되었다.
그 후, 매크로락톤화는 실시예 2a에 기재된 것과 유사한 조건을 적용하여 수행되었으며, 그 결과 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ih)가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 1259.888 [M + H]+ ([C66H119N10O13]+; calc. 1259.8958); 1260.788 [M + 2H]2+ ([C66H120N10O13] 2+; calc. 1260.9037).
실시예 4:
시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Id)의 제조
단편 H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe (Bd)은 단편 (Ba)를 제조하기 위해 실시예 1에 기재된 것과 유사한 반응 조건을 적용하여 제조되었다. 그 후, 단편 (Aa)에 대한 커플링 및 매크로락톤화는 실시예 1에 기재된 것과 유사한 반응 조건을 적용하여 수행되었으며, 그 결과 시클로운데카뎁시펩티드 시클로-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Id)가 획득되었다.
UPLC-ESI-MS (m/z) 1261.888 [M + H]+ ([C66H117N10O14]+; calc. 1261.8751)
실시예 5:
HCV 레플리콘 시스템의 억제 효과
본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물이 항-HCV 활성을 갖는지 여부를 결정하기 위해, HCV 레플리콘 시스템에서 상기 화합물의 억제 효과들을 비교하는 실험들이 수행되었다.
어세이는 C형 간염 바이러스 유전자형 1b Con1 레플리콘을 포함하는 Huh 9-13을 사용하였다(Lohmann et al. 2001. J.Virol. 75:1437-1449; and Lohmann et al. 1999. Science. 285:110-113). 세포들은 1:4 - 1:5의 비율로 10% FCS, 1% 비필수 아미노산, 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 2% 게네티신(Invitrogen)이 보충된 세포 성장 배지 DMEM에서 계대배양되었으며, 75cm 조직 배양 플라스크(Techno Plastic Products)에서 3-4일 동안 성장되었으며, 수확되었으며, 세포증식억제/세포독성 및 항바이러스 효과의 평가를 위해 96-웰 조직 배양 마이크로적정 플레이트(Falcon, Beckton Dickinson)에서 5000 세포/웰(100μl/웰)의 밀도로 어세이 배지(DMEM, 10% FCS, 1% 비필수 아미노산, 1% 페니실린/스트렙토마이신)에 파종되었다. 상기 마이크로적정 플레이트는 밤새(37℃, 5% CO2, 95-99% 상대습도) 배양되었으며, 비-전면(non-confluent) 세포 단층을 생성하였다.
세포 밀도 및 세포증식억제 효과는 MTT 어세이(CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay, Promega)를 사용하여 정규 96-웰 플레이트(Beckton-Dickinson)에서 평행 배양으로 측정되었다. 이러한 어세이에서, 3-(4,5-디메틸-티아졸-2-일)-5-(3-카복시메톡시-페닐)-2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸륨(MTS)은 플레이트 리더에서 498 nm에서 정량화된 포르마잔으로 생환원된다. 포르마잔 생산은 생 세포의 수와 직접적으로 관련된다. 흡광도는 파장 498nm(Safire2, Tecan)에서 측정되었으며, 광밀도(OD 값)는 비처리 대조군의 백분율로 전환되었다.
화합물은 4 mmole/L의 농도로 DMSO에 용해되었다. 모액(stock solution)은 실험들을 셋업하는데 즉시 사용되었다. 화합물은 0.0001 mmole/L 내지 100 mmole/L의 24개의 다른 농도 범위에서 테스트되었다. 어세이에서 DMSO의 가장 높은 농도는 2.5%(화합물의 100μM 최종농도에서)인 것으로 결정되었다. 어세이 셋업을 하는 동안, DMSO 백분율은 화합물의 농도의 감소에 수반하여 감소되었다.
항바이러스 효과를 평가하기 위해, 어세이 배지가 흡입되었으며, 건조 단층을 갖는 플레이트는 추출을 대기하면서 -80℃에서 저장되었다. 실온에서 플레이트를 해동한 후에, 세포 단층은 100μl의 세포-대-cDNA 용균 완충액(Invitrogen)으로 용균되었다. 세포의 용균은 그의 모든 액체가 PCR 플레이트(Axygen)로 이동된 후에 실온에서 10분 동안 진행되어졌다. PCR 플레이트는 75℃에서 15분 동안 배양되었다(T3, Biometra). 용해물은 그의 5μl가 실시간 PCR 플레이트(Applied Biosystems)로 이동된 후에 RNase/DNase-유리수로 1:2 희석되었다.
레플리콘 RNA 함량은 실시간 정량적 일단계 RT-PCR 방법(RT-qPCR)(Low Rox One-Step RT-qPCR master mix, Abgene)을 사용하여 정량화되었다. 사용된 정방향 및 역방향 프라이머들은 각각 5'-CCA GAT CAT CCT GAT CGA CCA G-3' 및 5'-CCG GCT ACC TGC CCA TTC-3'이었다. 형광발생 프로브는 5'-ACATCGCATCGAGCGAGCACGTAC-3'이었다. 샘플의 분석은 그의 레플리콘 RNA 양이 비처리 대조군의 백분율로 전환된 후에 SDS7500F(Applied Biosystems, 표준 열순환 프로파일: 48℃에서 30분, 95℃에서 10분, 95℃에서 15초의 40회 사이클 및 60℃에서 1분)을 사용하여 수행되었다.
EC50(용량-반응 곡선으로부터 유래된 값)은 바이러스 복제의 50% 억제가 관찰되는 농도를 나타낸다. CC50(용량-반응 곡선으로부터 유래된 값)은 세포의 대사 활성이 비처리된 세포의 대사 활성의 50%로 감소되는 농도를 나타낸다.
상기 실험들의 결과로부터, HCV 레플리콘 복제를 50% 정도로 억제하는데 필요한 유효 농도인 EC50±SD(표준편차 또는 Std. Dev.), 및 지수 성장하는 세포의 증식을 50% 정도로 억제하는데 필요한 농도인 CC50±SD(언제든지 가능함)가 계산되었다. EC50 및 CC50 ± SD 값은 3개의 각각의 용량-반응 곡선으로부터 유래된 모든 EC50 또는 CC50 값들의 중값값으로서 각각 계산되었다. 화합물의 치료 윈도우를 나타내는 선별지수(SI)는 CC50과 EC50 사이의 비로서 계산되었다.
표 1은 Huh 9-13 세포들에서 선택된 화합물의 EC50, CC50(mmole/L) 및 SI 값의 비교 결과를 나타낸다.
화합물 EC 50
(μmole/L)		 CC 50
(μmole/L)		 SI
평균 sd 평균 sd
Debio 025 0.034 0.02 2.5 0.6 73.5
(Ia) 0.034 0.019 60.1 1791.8
(Ib) 0.037 0.023 52.3 1398
(Ic) 0.022 0.006 86.9 4024.1
(Id) 0.025 0.013 44.4 1745.9
(Ie) 0.07 0.02 8.3 3.3 117.9
(If) 0.025 0.02 81.8 3236.8
(Ig) 0.033 0.016 67 2045.2
(Ih) 0.022 0.02 20.5 950
(Ii) 0.041 0.023 25.4 623.8
(Ik) 0.075 0.033 9.8 0.9 132
화합물의 농도는 특정 농도에서 항-레플리콘 효과가 70% 한계값 이상에서 우수하고 대사 활성의 30% 이하의 감소가 관찰될 때 HCV 레플리콘 시스템에서 진정한 항바이러스 효과를 나타내는 것으로 고려된다.
표 1에 나타낸 바와 같이, Huh 9-13 세포에서 수득된 상기 결과는, 상기 화합물이 세포 배양에서 C형 간염 바이러스 레플리콘의 복제를 선택적으로 억제한다는 것을 보여주며, 두 자리 수의 나노몰 범위의 EC50 값을 갖는 Debio 025보다 더 높은 효능에 가깝게, 그리고 더 높은 선별지수에 가깝게 입증한다.
실시예 6
비-면역억제 활성
본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물이 비-면역억제 활성을 갖는지 여부를 결정하기 위해, 콘카나발린-A-유도된 T-세포 증식의 용량-의존적 억제를 비교하는 실험들이 수행되었다(표 2 참조).
어세이의 방법은 Dayton 등의 문헌[1992. Mol. Pharmacol. 41. 671-676] 및 Mishell 등의 문헌[1980. Cell proliferation in selected methods in cellular immunology, V, XXIX, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA. 153-160]에 기재된 바에 따라 수행되었다. 화합물의 IC50(최대 억제의 반을 나타내는 농도)은 용량 반응 곡선으로부터 유도되었으며, CsA의 IC50과 비교되었다(IC50 비).
화합물 IC 50 (마이크로몰/L) IC 50 비
시클로스포린 A(CsA) 0.006 1
(Ia) 2 333
(Ib) 9.44 1573
(Ic) 0.984 164
(Id) 1.435 239
(Ie) 2 333
(If) 7.725 1288
(Ig) 2.69 448
(Ih) 1.74 290
(Ii) 2.69 448
(Ik) 3.44 573
본 연구에서, 화합물 (Ia), (Ib) 및 (Id)는 시클로스포린 A(CsA)보다 면역억제가 (IC50 비의 측면에서) 약 300배 이상 덜 나타났다.
실시예 7:
간 수송체(hepatic transporter) 상호작용
본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물이 간 수송체와 상호작용하는지 여부를 결정하기 위해, 다약물 내성 관련 단백질 2(MRP2), 유기 음이온 수송 폴리펩티드 1B1(OATP1B1), 담즙산염 배출 펌프(BSEP) 및 나트륨-타우로콜레이트 공수송 폴리펩티드(NTCP)에 대한 농도-의존적 억제를 비교하는 실험들이 수행되었다. 상기 수송체들은 담즙산염 또는 빌리루빈과 같은 내인성 화합물의 간담즙성 순환에 관여한다(C. Pauli-Magnus et al, J. Hepatology, 2005, 43:342-357 참조). 또한, 이들 중 일부는 제노바이오틱스의 제거에 기여한다.
MRP2 및 BSEP는 스포돕테라 프루지페르다(Sf9) 난소 세포에서 [SOLVO Biotechnology]에 의해 상기 곤충 세포를 재조합 바큘로바이러스로 감염시킴으로써 발현되었다. 수송체를 포함하는, 인사이드-아웃(inside-out) 막 소포로의, 방사성 프로브 기질(MRP2 및 BSEP에 대해 각각 에스트라디올-17-베타-글루쿠로니드 및 타우로콜레이트)의 수송의 억제는 신틸레이션 계수기에 의해 측정되었다.
OATP1B1 및 NTCP 어세이는 이러한 인간 흡수 수송체를 발현하는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에 의해 수행되었다. 수송된 프로브 기질(OATP1B1 및 NTCP에 대해 각각 에스트론-3-설페이트 및 타우로콜레이트)의 양은 세포 용균 후에 액체 신틸레이션 또는 형광 광도법에 의해 측정되었다.
화합물의 IC50(최대 억제의 반을 나타내는 농도, 프로브 기질의 수송을 50% 정도로 억제하는데 필요한 농도로 정의됨)은 농도-반응 곡선으로부터 유도되었으며, Debio 025의 IC50과 비교되었다(표에서 "배수(fold) Debio 025"로서 표현된 IC50 비).
MRP2는 담즙산염 독립적 담즙 흐름을 위한 주요 원동력이며, 이는 넓은 스펙트럼의 유기 음이온, 예컨대 빌리루빈-디글루쿠로니드, 담즙산염 컨쥬게이트 뿐만 아니라 다수의 약물들을 수송한다. 표 3은 상기 수송체에 대한 선택된 화합물의 상호작용의 결과를 나타낸다.
MRP2
　 IC 50 (μM) 배수(fold) Debio 025
Debio 025 15 1
(Ib) n.i. n.a.
(Ih) n.i. n.a.
(Id) n.i. n.a.
(Ie) 20 0.73
(Ic) 2.2 6.6
(Ia) n.i. n.a.
(If) n.i. n.a.
n.i.: 억제가 나타나지 않음(no inhibition)　
n.a.: 적용되지 않음(not applicable)
OATP1B1은 나트륨-독립적 방식으로 담즙산염을 수송한다. 또한, 다수의 약물들이 OATP의 기질이다. 표 4는 OATP1B1에 대한 선택된 화합물의 상호작용의 결과를 나타낸다.
OATP1B
IC 50 (μM) 배수(fold) Debio 025
Debio 025 0.42 1
(Ib) 6.2 0.07
(Ih) 12 0.04
(Id) 7.9 0.05
(Ie) 0.58 0.72
(Ic) 2.3 0.18
(Ia) 18 0.02
(If) 15 0.03
BSEP는 간 세포로부터 모세담관으로 담즙친화성 화합물의 분비에 관여하는 주요 담즙산염 배출 시스템이다. 표 5는 BSEP에 대한 선택된 화합물의 상호작용의 결과를 나타낸다.
BSEP
IC 50 (μM) 배수(fold) Debio 025
Debio 025 0.24 1
(Ib) 0.15 1.6
(Ih) 0.30 0.80
(Id) 0.57 0.42
(Ie) 0.60 0.40
(Ic) 0.16 1.5
(Ia) 0.40 0.60
(If) 0.48 0.50
NTCP는 담즙 형성에 필수적인, 문맥순환으로부터 담즙산염의 나트륨-의존적 흡수를 매개한다. 표 6은 NTCP에 대한 선택된 화합물의 상호작용의 결과를 나타낸다.
NTCP
IC 50 (μM) 배수(fold) Debio 025
Debio 025 3.2 1
(Ib) 65 0.05
(Ih) n.i. n.a.
(Id) 2.5 1.2
(Ie) 26 0.12
(Ic) 30 0.11
(Ia) n.i. n.a.
(If) n.i. n.a.
n.i.: 억제가 나타나지 않음(no inhibition)　
n.a.: 적용되지 않음(not applicable)
간 수송체에 대한 이러한 시험관내 연구 외에, 본 발명의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물은 또한 대사 효소의 시험관내 억제 뿐만 아니라 동물의 생체내 약동학적 성질과 관련하여 평가되었다.
표 3-6에 나타낸 바와 같이, 시험관내 수송 실험들의 결과는 상기 화합물이 Debio 025에 비해 일부 간 수송체를 억제하는 능력이 훨씬 더 낮다는 것을 보여준다. 특히, 일부 화합물은 MRP2에 대한 억제의 부재 및/또는 OATP1B1에 대한 50배까지 더 낮은 능력을 나타낸다. 따라서, 상기 화합물은 간 수송체의 억제와 관련된 잠재적인 부작용(예컨대, 고빌리루빈혈증), 또는 간 수송체의 억제와 관련된 잠재적인 약물-약물 상호작용(예컨대, 아토르바스타틴과 같은 HMG-CoA 환원효소 억제제와의 상호작용), 또는 상기 둘 다를 감소하는 것으로 여겨진다.
약어들의 목록
Abu L-α-아미노-n-부티르산
Ac 아세틸
AcOEt 에틸 아세테이트
AcOH 아세트산
Ala L-알라닌
Boc tert-부틸옥시카보닐
BSEP 담즙산염 배출 펌프
t-Bu tert-부틸
Ca(MeO)2 칼슘 메톡시드
CC 컬럼 크로마토그래피
DCM 디클로로메탄
DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민
DMAP 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘
DMSO 디메틸 설폭시드
Eq 등가
ESI-MS 전자분무 이온화 질량분석
EtVal N-에틸-L-발린
Fmoc 9-플루오레닐메톡시카보닐
HATU N-[(디메틸아미노)-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘-1-일-메틸렌]-N-메틸메탄아미늄 헥사플루오로포스페이트 N-산화물
D-Hiv D-히드록시이소발레르산
g 그램
HCOOH 포름산
HPLC 고성능액체 크로마토그래피
HR-MALDI-MS 고해상도 MALDI-TOF 질량분석
HR-Q-TOF-MS 고해상도 Q-TOF 질량분석
Im2CO N,N-카보닐-디이미다졸(CDI)
Kg 킬로그램
KOMe 칼륨 메톡시드
L 리터
MALDI 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화법
MALDI-TOF 비행시간형 질량분석법
Me 메틸
D-MeAla N-메틸-D-알라닌
MeBmt N-메틸-(4R)-4-[(E)-2-부테닐]-4,4-디메틸-L-트레오닌
MeLeu N-메틸-L-류신
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
MeVal N-메틸-L-발린
mg 밀리그램
mL 밀리리터
MRP2 다약물 내성 관련 단백질 2
MS 질량분석
MtBE 메틸-tert-부틸-에테르
NMR 핵자기공명법
NTCP 나트륨-타우로콜레이트 공수송 폴리펩티드
OATP1B1 유기 음이온 수송 폴리펩티드 1B1
PyBOP (벤조트리아졸-1-일옥시)-트리스(피롤리디노)포스포늄-헥사플루오로포스페이트
RP 역상
RP-HPLC 역상 HPLC
RT 반응 시간
Thr L-트레오닌
TFA 트리플루오로아세트산
tR 보유시간
THF 테트라히드로푸란
Tj 재킷(jacket)의 온도
TLC 박막 크로마토그래피
Tr 반응기로의 온도
UPLC 초고성능 액체 크로마토그래피
Vol. 부피(1g의 주 원재료는 1 부피를 의미함)

Claims (14)

  1. 하기 식 (I)의 시클로운데카뎁시펩티드 화합물:
    Figure pct00006

    식 중,
    AXX1은 MeBmt, 4-플루오로-MeBmt, 디히드로-MeBmt, 8-히드록시-MeBmt, O-아세틸-MeBmt이며;
    AXX2는 Abu, Val, Thr, Thr(OMe), Thr(OAc), Thr(OCOCH2CH2CH2OH), Nva, 5-히드록시-Nva이며;
    AXX3은 D-MeAla, D-3-플루오로-MeAla, D-MeSer, D-MeSer(OAc), D-MeSer(O-CH2CH2OH), D-MeSer(OCH2CH2NEt2), D-MeAsp(OMe)이며;
    AXX4는 MeIle, MeMet, MeVal, MeThr, MeThr(OAc), MeAla, EtVal, EtIle, EtPhe, EtTyr, EtThr(OAc), MeThr(OAc), MeTyr, MeTyr(OAc), MeTyr(OMe), MePhe, MeMet(Ox), 여기서 메티오닌의 황 원자는 설폭시드 또는 설폰임;
    AXX5는 Leu, Val, Ile이며;
    AXX6은 MeAla, Sar, MeLeu이며;
    AXX7은 Gly, Ala임.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 식 (I)에서 하기의 정의를 갖는 것을 특징으로 하는 화합물:
    AXX1은 MeBmt, 8-히드록시-MeBmt이며;
    AXX2는 Abu, Val, Thr, Thr(OMe), Thr(OAc), Thr(OCOCH2CH2CH2OH), 5-히드록시-Nva이며;
    AXX3은 D-MeAla, D-3-플루오로-MeAla, D-MeSer, D-MeSer(OAc), D-MeAsp(OMe)이며;
    AXX4는 MeIle, MeMet, MeMet(Ox), 여기서 Ox는 -SOMe, -SO2Me임, MeVal, EtVal, EtIle, MeTyr이며;
    AXX5는 Leu, Val, Ile이며;
    AXX6은 MeAla, Sar, MeLeu이며;
    AXX7은 Gly, Ala임.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 식 (I)에서 하기의 정의를 갖는 것을 특징으로 하는 화합물:
    AXX1은 MeBmt이며;
    AXX2는 Abu, Val, Thr이며;
    AXX3은 D-MeAla이며;
    AXX4는 MeIle, MeVal, EtVal이며;
    AXX5는 Leu, Val, Ile이며;
    AXX6은 MeAla, MeLeu, Sar이며;
    AXX7은 Gly, Ala임.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기의 식을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00007
    .
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는, C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. a) 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 제5항에 따른 약학 조성물로 이루어진 제1 제제, 및 b) HCV 복제에 대해 작용하는 성질을 갖는 제2 제제를 적어도 포함하는 약학적 조합물.
  7. 제6항에 있어서,
    C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조합물.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    약제로서 사용되는 화합물.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    항바이러스제로서 사용되는 화합물.
  10. C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료용 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  11. 치료적 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 제5항에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체의 C형 간염 감염 또는 HCV 유도성 장애의 예방 또는 치료 방법.
  12. 치료적 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 제5항에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체의 HCV 복제의 억제 방법.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서,
    치료적 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 제5항에 따른 약학 조성물, 및 HCV 복제에 대해 작용하는 성질을 갖는 제제로부터 선택된 하나 이상의 제2 제제를 공동으로 또는 차례대로 공투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 항-HCV 성질을 갖는 제제가 인터페론-알파-2a 또는 인터페론-알파-2b와 같은 인터페론; 또는 수용성 중합체 또는 인간 알부민에 컨쥬게이트된 인터페론; 리바비린, 라미부딘, NV08 또는 NM283과 같은 항바이러스제; NS3-4A 단백질분해효소, 헬리카제 또는 RNA 중합효소와 같은 HCV 인코딩 인자의 억제제; N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체와 같은 항-섬유증제; 미코페놀산과 같은 면역 조절제; 또는 FTY720과 같은 S1 P 수용체 작용물질, 또는 인산화될 수 있는 이의 유사체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
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