KR20110084533A - 암의 치료를 위한 엔자스타우린 - Google Patents

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KR20110084533A
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고피나쓰 간지
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일라이 릴리 앤드 캄파니
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Abstract

본 발명은 엔자스타우린을 단독 제제로서 또는 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합으로 사용하여 환자의 암을 치료하는데 있어서 생물학적 마커로서의 HDAC2에 관한 것이다.

Description

암의 치료를 위한 엔자스타우린 {ENZASTAURIN FOR THE TREATMENT OF CANCER}
본 발명은 엔자우스타우린을 사용한 암의 치료와 관련하여 HDAC2를 생물학적 마커로 사용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 암의 치료에 있어서 향상된 치료 효과를 달성하기 위한, 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합되는 엔자스타우린의 용도에 관한 것이다.
엔자스타우린은 PKC 베타 선택적 억제제이다. 엔자스타우린의 화학명은 3-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-4-[1-[1-(피리딘-2-일메틸)피페리딘-4-일]-1H-인돌-3-일]-1H-피롤-2,5-디온이고 미국특허 제5,668,152호에 개시되어 있다.
HDAC는 히스톤 데아세틸라제 상과에 속한다. 효모 데아세틸라제와의 상동성에 기반을 두고 보았을 때, HDAC 효소는 4개의 클래스로 분류되어 있는 최소 18종이 있다. HDAC는 히스톤 아세틸전달효소에 의해 첨가되는 아세틸기를 제거한다. 아세틸기가 제거됨으로써 히스톤이 DNA에 결합될 수 있고, 이로써 DNA로의 접근이 제한된다. 결과적으로, HDAC는 전사가 일어나는 것을 방지한다.
로페로 (Ropero)는 자궁내막, 결장 및 위 종양 샘플에서 HDAC2 비활성화 돌연변이가 동반된다고 보고하고 있다. (Ropero, S., et al. (2006) Nat Genet, 38(5): 566-569). ORT-PCR은 암 셀라인 및 종양 (유방, 교모세포종, 난소, 신장, 방광, 및 결장직장 종양)에서 감소된 HDAC2 RNA 수준을 보여준다. (Ozdag, H., et al. (2006) BMC Genomics, 7: 90). 추가로, 위, 자궁내막, 난소, 유방, 신장, 자궁경부, 간, 폐, 악성 유암종, 림프종, 췌장, 갑상선, 및 전립선 종양의 하위 세트에서 HDAC2의 보통 내지 음성 면역조직화학 (IHC) 염색이 관찰되는 것이 프로테인아틀라스 (ProteinAtlas)(http://www.proteinatlas.org)에 의해서 밝혀졌다.
클래스 I HDAC는 잘 알려진 전사 보조억제물질이고 생체내에서 전사 인자 및 보조인자와 항상 연관된다. 생물학적 데이터에 의하면 클래스 I HDAC는 세포 주기 진행, 전이, 및 세포자멸과 연관이 있고, 암 치료에 있어서 촉망되는 표적이라고 제안되고 있다. "클래스 I HDAC 억제제"에는 예를 들면, 보리노스타트, 뎁시펩타이드, MS-275, MGCD0103, 벨리노스타트, 바케카, 파노비노스타트, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, 나트륨 부티레이트, 발프로산, 아피시딘, 페닐 부티레이트, CI994, 트라폭신, SB-429201, 비스피리디늄 다이엔, SHI-1:2, R306465, SB-379278A, 및 PCI-34051이 알려져 있다.
암의 생물학적 기반을 이해하고 그를 치료하는 데에 있어서 많은 진보가 있었지만, 암은 여전히 사망의 주원인 중 하나이다. 약물에 대한 환자 반응의 차이는 내성으로서 중요한 문제를 제기하고 있고 병원에서는 반응의 결핍을 흔히 접한다. 약물에 대한 환자 반응의 차이에는 유전, 수반되는 약물 치료, 환경, 생활 방식, 건강 상태, 및 질병 상태를 포함하여 많은 요인이 작용하는 것으로 생각된다.
화학요법에 가장 잘 반응하는 환자를 찾을 의학적인 필요가 있다. 예측에 사용될만한 생물학적 마커는 소수밖에 확인되지 않았고, 치료의 결정에 뚜렷한 지침이 되는 진단 시험으로 개발된 것은 이보다 적다. 환자 선택 접근법은 엔자스타우린의 용도를 암 치료에 맞추는데에 상당한 가치를 갖는다. 환자가 엔자스타우린 치료에 반응할 수 있을 것인지 적시에 결정하는 방법은 큰 가치를 가질 것이다.
본 발명은 먼저 엔자스타우린의 효능에 대한 생물학적 마커로 사용될 수 있는 HDAC2 발현 수준을 결정한 후에, 엔자스타우린으로 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. HDAC2 수준이 낮거나 또는 검출할 수 없는 경우, 엔자우스타우린은 단독으로 특히 효과적일 것으로 예상된다. HDAC2 수준이 높은 경우, 본 발명은 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 함께 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 HDAC2의 수준이 낮거나 또는 검출할 수 없는 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함하는 환자의 암 치료 방법을 포함한다.
더 나아가, 본 발명은 a) 환자로부터 암세포를 포함하는 샘플을 얻고; b) 암 샘플에서 HDAC2의 수준을 결정하고; c) 암 샘플의 HDAC2 수준이 낮거나 또는 검출할 수 없는 경우, 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 HDAC2 프레임쉬프트 넌센스 돌연변이를 갖는 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법을 포함한다.
추가로, 본 발명은 a) 환자로부터 암세포를 포함하는 샘플을 얻고; b) 암 샘플에서 HDAC2 돌연변이 여부를 결정하고; c) 환자 샘플이 HDAC2 프레임쉬프트 넌센스 돌연변이를 갖는 경우 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 HDAC2 수준이 높은 환자에게 유효량의 엔자스타우린 및 유효량의 클래스 I 선택적 HDAC 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법을 포함한다.
더 나아가, 본 발명은 a) 환자로부터 암세포를 포함하는 샘플을 얻고; b) 암 샘플에서 HDAC2의 수준을 결정하고; c) 암 샘플의 HDAC2 수준이 높은 경우에 환자에게 유효량의 엔자스타우린 및 유효량의 클래스 I 선택적 HDAC 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 HDAC2의 수준이 낮거나 또는 검출될 수 없는 환자의 암 치료용 약제의 제조에 있어서 엔자스타우린의 용도를 포함한다.
더 나아가, 본 발명은 HDAC2 수준이 높은 환자의 암의 치료를 위해 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합 투여되는 약제의 제조에 있어서 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합된 엔자스타우린의 용도를 제공한다.
본 발명은 암이 결장직장암, 위암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 간암, 폐암, 신장암, 피부 T-세포 림프종, 교모세포종, 림프종, 췌장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 본원에 기재된 바와 같은 방법 및 용도를 제공한다. 더 나아가, 클래스 I 선택적 HDAC 억제제가 보리노스타트, 뎁시펩타이드, MS-275, MGCD0103, 벨리노스타트, 바케카, 파노비노스타트, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, 나트륨 부티레이트, 발프로산, 아피시딘, 페닐 부티레이트, CI994, 트라폭신, SB-429201, 비스피리디늄 다이엔, SHI-1:2, R306465, SB-379278A, 및 PCI-34051로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 암의 치료에서 엔자스타우린의 용도에 있어서 환자 결과의 예측에 도움을 주는 생물학적 마커의 확인 및 현재 이용가능한 치료의 알고 내리는 선택을 포함한다. 본 발명에서는 HDAC2를 바람직한 생물학적 마커로 사용한다.
종양의 발달과정에서 획득한 유전적 이상은 질환의 동력 및 암에 있어서 맞춤 치료의 기회를 둘 다 나타낸다. 특정 종양 유형에서 변이된 유전자 및 경로를 가지고 있는 환자들은 목표된 치료에 다르게 반응할 수 있다. 이러한 약물 민감성의 유전적 결정 요인을 발견 절차 초기에 이해하는 것은 임상 적응증, 환자 계층화, 및 합동 연구에 관한 결정을 개선 및 촉진시키는데 도움이 될 수 있다.
이러한 소집단은 단독 제제로서 또는 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합되는 엔자우스타우린에 대한 치료상의 이익 및 반응을 개선시키는데 목표를 둘 수 있는, 저하된 HDAC2 프로필을 갖는 환자군을 대표한다.
본 발명은 결장직장암, 위암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 간암, 폐암, 신장암, 피부 T-세포 림프종, 교모세포종, 림프종, 췌장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암의 치료에 관한 것이다.
본 발명은 엔자스타우린과 조합된, 보리노스타트, 뎁시펩타이드, MS-275, MGCD0103, 벨리노스타트, 바케카, 파노비노스타트, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, 나트륨 부티레이트, 발프로산, 아피시딘, 페닐 부티레이트, CI994, 트라폭신, SB-429201, 비스피리디늄 다이엔, SHI-1:2, R306465, SB-379278A, 및 PCI-34051로 이루어진 군으로부터 선택되는 클래스 I 선택적 HDAC 억제제의 용도를 제공한다.
암 세포에서 유전자 또는 단백질의 발현을 결정하는 여러 가지 방법이 공지되어 있다. 면역조직화학, 웨스턴 블롯, 마이크로어레이, 및 중합효소 연쇄 반응 (PCR)은 암 유형, 아형, 예후, 및 치료 효과의 분자적 이해를 얻기 위해 사용되어 온 몇 가지 예다. 유전자 및 단백질 발현의 측정을 위한 이러한 방법들의 발달은 암 분류의 생물학적 마커의 조사 및 체계적인 평가, 그리고 다양한 종류의 종양에서 결과 예측을 가능하게 한다.
본 발명에서는, HDAC2 단백질 발현이 바람직하게는 웨스턴 블롯 또는 면역조직화학으로 검정 또는 검출된다. 더 나아가, 본 발명에서는, 돌연변이 대립유전자의 존재여부를 결정하기 위해 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)에 이은 서열분석으로 HDAC2 돌연변이를 검정한다. 사용된 검출 방법은 전문지식, 기술, 및 시약의 이용가능을 기초로 달라질 것이다.
하기 정의들은 당업자가 본문의 내용을 이해하는데에 도움을 주기 위해 제공된다. 이 정의들은 당업계에 공지된 것들을 대표하도록 의도되었고, 따라서 제시된 특정 요소에 한정되지 않는다.
용어 "치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")은 증상, 장애, 상태 또는 질환의 진행 또는 중증도의 더딤, 중단, 멎음, 조절, 감소, 또는 반전을 포함하는 과정을 가리킨다.
"환자"는 포유동물, 바람직하게는 인간이다.
용어 "유효량"은 환자에게 단독 또는 복합 용량 투여가 원하는 치료를 제공하는 엔자스타우린 또는 HDAC2 억제제 또는 제약상 허용가능한 염의 양 또는 용량을 가리킨다. 일반적으로, 이러한 치료제 각각의 최적 용량은 환자 개개인에서 활성 성분의 상대적 효능에 따라서 달라질 수 있다. 의사들은 체액 또는 조직에서 활성 성분의 측정된 체류 시간 및 농도 및/또는 특정 암에 대한 연관된 질환-관련 바이오마커를 기초로 투여에 대한 용량 및 반복속도를 결정할 수 있다.
용어 "검출될 수 있는 수준"은 진단 방법 또는 검정, 예를 들어 웨스턴 블롯 또는 면역조직화학에 의해 생물 샘플에서 검출되는 수준에서 존재하는 유전자, 유전자 전사물, 또는 유전자 생성물을 가리킨다. 본 발명에서는, 낮거나 또는 검출할 수 없는 HDAC2 수준은 HCT116 세포에서 HDAC2의 발현에 비교하여 웨스턴 블롯으로 HDAC2의 발현이 20% 미만인 것을 가리킨다. 더 나아가, 본 발명에서 높은 수준의 HDAC2는 HCT116 세포에서 HDAC2의 발현에 비교하여 웨스턴 블롯으로 HDAC2의 발현이 20% 초과인 것을 가리킨다.
HDAC2 발현은 당업계에서 잘 확립된 기술을 사용하여 샘플에서 측정할 수 있다. 근본적으로, 종양 생검을 환자로부터 얻는다. 조직을 균질화시키고 용해물을 웨스턴 블롯으로 분석하여 HDAC2 단백질 발현 양을 결정한다. 포르말린 고정된 파라핀 매립 (FFPE) 샘플의 경우, 면역조직화학에 의한 HDAC2 검출을 위해 종양 핵심을 절편하고 염색한다. 조직병리학자는 공지된 면역조직화학 채점 방법, 예를 들어 H-점수로 이 샘플들에 낮거나 또는 높은 점수를 매긴다.
용어 "프레임쉬프트 넌센스 돌연변이"는 보고된 바와 같이 HDAC2 유전자에서 말단절단 또는 비활성화 돌연변이를 가리킨다. (Ropero, S., et al. (2006) Nat Genet, 38(5): 566-9.)
프레임쉬프트 넌센스 돌연변이는 잘 확립된 방법을 사용하여 결정할 수 있다. 기본적으로, 환자 샘플 유래의 DNA를 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 및 직접 서열분석으로 분석하여 프레임쉬프트 돌연변이의 존재여부를 결정한다. DNA 샘플로부터 얻은 서열 크로마토그램을 야생형 서열과 비교하여 말단절단 돌연변이를 찾는다. (Ropero, S., et al.)
실시예 1
엔자스타우린 약물 반응의 민감제로서의 HDAC2
HCT116 세포를 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Tissue Culture Collection, ATCC) (록빌 (Rockville), 매릴랜드, 미국)에서 얻어서 가습된 5% CO2 함유 37 ℃ 인큐베이터에서, 2 mM L-글루타민 및 10% 소 태아 혈청 (FBS)으로 보충된 멕코이 (McCoy's) 5A 배지에서 배양하였다. 플레이트 (384-웰)를 드러거블 게놈 (Druggable Genome) v2 라이브러리 (Library) (퀴아젠 (Qiagen))에서 표적당 2개의 siRNA를 사용하여 예비-프린트하여 각 웰이 각각의 siRNA 이중나선 13 nM를 함유하도록 하였다. 각각의 웰에 형질감염제 리포펙타민 2000 (인비트로겐 (Invitrogen)), 및 2 mM L-글루타민 및 2% FBS가 보충된 멕코이 (McCoy's) 5A 배지 중의 대략 1500 개 세포를 첨가하고 뒤이은 표준 역 형질감염 프로토콜에 의해 고처리량 역 형질감염을 수행하였다. 형질감염 24 시간 후에, 각각의 검정 플레이트를 1% DMSO 중 5배 농도 (0-10 μM)의 엔자스타우린 있거나 없이 처리하였다. 제조사의 권고에 따라서, 72 시간 후에 화학발광 기반 셀타이터 글로 (CellTiter Glo) (프로메가 (Promega)) 검정 판독을 사용하여 세포 생존성을 측정하였다. UBB siRNA (퀴아젠)가 양성 세포 사멸 대조군이고 올스타 넌-사일런싱 (All Star Non-silencing) (NS-AS) 또는 녹색 형광 단백질 (GFP)은 음성 대조군이다.
로우 (raw) 신호 값을 비처리 대조군 웰로 표준화하여 플레이트끼리 비교하였다. 이들을 4-파라미터 로지스티컬 모델에 맞추어서 IC50 값을 결정하였다. IC50에서 음성 대조군 (상기 기술)에 대한 '쉬프트'는 다음과 같이 계산한다: (IC50 표적 - IC50 대조군)을 IC50 대조군으로 나눔.
RT-PCR에 관해서는, 상기 기술된 바와 같이 세포를 역 형질감염시키고 siRNAs와 함께 72 시간 동안 37 ℃에서 인큐베이션시키고, 플레이트 세척기를 사용하여 1X PBS로 세척하고 용균시켰다. 제조사의 프로토콜에 따라서, 자성 구슬 (앰비온 (Ambion), 매그맥스 (MagMax)-96 토탈 (Total) RNA 단리 키트, Cat # 1830)를 사용하여 RNA를 추출하였다. 나노드롭 (NanoDrop)-1000 분광광도계를 사용하여 샘플의 총 RNA 농도를 측정하였다. cDNA 합성을 위해 바이오-래드 (Bio-Rad)의 아이스크립트 (iScript) cDNA 합성 키트 (Cat # 170-8891)를 사용하였고, 제조사의 권고에 따라서, MJ 리서치 (Research)의 DNA 엔진 테트라드 펠티어 써멀 싸이클러 (Engine Tetrad Peltier Thermal Cycler)에서 반응을 수행하였다. qPCR 반응 부피 10 ㎕당 cDNA 5 나노그램 (5 ng)을 사용하였다. 타크맨 (TaqMan)(등록상표) 프로브 케미스트리 (ABI, 포스터 시티 (Foster City), 캘리포니아)를 사용하여 유전자-특정 qPCR을 수행하고 ABI 7900HT 패스트 실시간 PCR 시스템 (Fast Real-time PCR System)에서 실행하였다. 반응을 내인성 글리세르알데히드-3-포스페이트 디하이드로게나제 (GAPDH), 완충제, 섞은 (scrambled) (상기 기술) 및 비-주형 (프로브에 대한 표준) 대조군과 함께 샘플당 3벌로 실시하였다. 유전자 발현 값을 GAPDH로 표준화시키고 ABI's SDS RQ 매니저 (Manager) 1.2 소프트웨어를 사용하여 상대 수량화 방법 (△△CT 방법)으로 계산하였다. CT는 주기 한계 지수를 가리키는 표준 측정법이다. 내인성 발현에 비교하여 특정 siRNA에 의한 관심있는 유전자의 상쇄는 하기에 의해 계산된다:
Figure pct00001
여기서 '시험'은 siRNA 처리 (si) 또는 완충제 대조군 (완충제)을 가리키고; '대조군'은 음성 대조군인 섞은 siRNA 대조군을 가리킨다. siRNA 처리 (내인성 수준) 있거나 없이 관심있는 표적에 대한 상대적 유전자 발현 값 각각을 결정하기 위해 상기 제시된 바와 같이 RQsi 및 RQ완충제를 계산하였다.
HDAC2를 표적으로 하는 3개의 siRNA는 IC50 값이 2배 초과로 이동하여 HCT116을 엔자스타우린의 효과로 민감화시키는 것에서 볼 수 있듯이, 음성 대조군에 비교하여 용량 반응 사망 곡선을 이동시킨다. 고 함량 이미지는 또한 음성 대조군 및 각 조건을 단독으로 반영한 경우와 비교하여, 엔자스타우린 및 HDAC2 siRNA로 처리한 HCT116 세포에서 더 높은 세포 사멸 정도를 반영한다 (데이터는 나타내지 않음).
Figure pct00002

실시예 2
HCT116에 비교하여 RKO에서 향상된 엔자스타우린의 활성
인간 결장암 셀라인, HCT116 (HDAC 2 중량), 및 넌센스 돌연변이를 함유하여 HCT116와 비교하여 HDAC2의 널 (null)단백질 발현을 나타내는 셀라인 RKO (HDAC 2+/-)를 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션, ATCC (록빌, 메릴랜드, 미국)에서 얻었고 5% CO2 함유 가습된 37 ℃ 인큐베이터에서 ATCC가 권고하는 2 mM L-글루타민 및 10% FBS로 보충된 성장 배지에서 배양하였다. 25 mM N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄술폰산 (헤페스 (HEPES)), 2 mM L-글루타민 및 2% 소 태아 혈청 (FBS) 함유 멕코이 5A 배지 중에 희석한 1000 내지 2000 개 세포를 시딩하고 이어서 1% DMSO 중 단계 희석된 (0-100 μM) 엔자스타우린으로 처리하거나 또는 처리하지 않음으로써 약물 용량 반응 실험을 수행하였다. 화학발광 기반 셀타이터 글로 (프로메가) 검정 판독을 사용하여, 제조사의 권고에 따라서 72 또는 96 시간 후에 세포 생존성을 측정하였다. 로우 신호 값을 비처리 대조군으로 표준화시키고 그래프패드 프리즘 (GraphPad Prism)(라 졸라 (La Jolla), 캘리포니아, 미국)에서 비선형 곡선 맞춤 으로 분석하였다.
약물 용량 반응 곡선은 HCT116 세포에 비교하여 RKO 세포에서 IC50의 상당한 차이 (> 2X) 및 엔자스타우린에 의한 최대 성장 억제 효과를 보였다. HCT116 세포에서의 엔자스타우린의 IC50은 8.34 μM 이었고, 이는 RKO 세포에서의 IC50인 3.56μM와 비교된다. 더 나아가, RKO에서의 엔자스타우린의 최대 사멸 효과 (95 - 100%)는 HCT116에서의 것 (50-60%)보다 더 컸다. 이 데이터들은 엔자스타우린 반응에 대한 민감제로서의 HDAC2 상쇄 (knockdown)를 유전적으로 확인시켜준다.
실시예 3
시험관내 성장 억제 및 약물 조합 연구
클래스 I 선택적 HDAC 억제제 및 엔자스타우린이 이로운 효과를 제공하는지 결정하기 위하여, MS-275, 클래스 I 선택적 HDAC 억제제 및 엔자스타우린에 대하여 암 세포 성장 억제를 알아보는 검정을 하였다.
아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션, ATCC (록빌, 메릴랜드, 미국)에서 얻은 인간 결장암 셀라인 HCT116을 가습된 5% CO2 함유 37 ℃ 인큐베이터에서 25 mM 헤페스, 2 mM L-글루타민 및 10% FBS 함유 멕코이 5A 배지에서 단층으로 유지하였다. 기하급수적으로 성장하는 HCT116 세포 (2000 세포/웰)를 약물 처리 전 24 시간 동안 25 mM 헤페스, 2 mM L-글루타민 및 2% FBS 함유 멕코이 5A 배지 중 폴리-D-라이신 코팅된 96-웰 플레이트에서 플레이팅 하였다. 세포에 (i) S자 용량 반응 곡선으로부터 IC50 값을 결정하기 위해 소정 농도의 엔자스타우린 (0-10 μM) 및 MS-275 (0-4 μM)를 단독으로 처리하였고, (ii) 최종 농도 0.02% DMSO 중 (고정 비율 설계후) 3개의 고정 IC50 비율 (2.5, 5, 10)의 엔자스타우린 및 MS-275를 동시에 첨가하여 72 시간 동안 처리하였다. (Koizumi, F., et al. (2004) Int J Cancer, 108(3): 464-72; Tallarida, R.J., et al. (1997) Life Sci, 61(26): PL 417-25). 이어서 세포를 프로피듐 요오다이드 (PI)로 고정 및 염색하였다. 아큐멘 익스플로러 시스템 (Acumen Explorer system) (아큐멘 바이오사이언스 (Acumen Bioscience) 엘티디, 영국)으로 세포수를 측정하였다.
칼쿠신 (Calcusyn) 소프트웨어 (바이오소프트 (Biosoft), 캠브리지, 영국)를 사용하고 차우 (Chou) 및 탈라레이 (Talalay) (Chou, T.C. and P. Talalay, Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors, Adv Enzyme Regul, 1984. 22: p. 27-55)에 의해 제시된 중위 효과 원칙에 의해 데이터 분석을 수행하여 조합 지수 (CI)를 계산하였다. CI는 각각 다른 약물 간의 상호작용 정도의 정량적 측정치이다: 부가작용에 대해서는 CI = 1이고; 길항작용에 대해서는 CI > 1이고; 및 상승작용에 대해서는 CI < 1이다. 하기 표에서 Fa는 영향받은 비율이고; CI는 조합 지수이고; SD는 표준편차이고; E는 엔자스타우린을 의미하고; M은 MS-275을 의미하고; E/M은 각 약물의 IC50 값의 고정 비율을 의미한다.
Figure pct00003
엔자스타우린 및 MS-275의 동시 조합 약물 연구는 시험된 모든 고정비율 및 Fa 값에 대한 상승작용 (CI < 1)을 입증하였다. 이 데이터들은 엔자스타우린 작용을 향상시키는 HDAC2 고갈에 대한 약리적 증거를 제공한다.
SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> ENZASTAURIN FOR THE TREATMENT OF CANCER <130> X18110_WO <140> PCT/US2009/066925 <141> 2009-12-07 <150> 61/122451 <151> 2008-12-15 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Ala Cys Gly Gly Thr Cys Ala Ala Thr Ala Ala Gly Ala Cys Cys Ala 1 5 10 15 Gly Thr Ala Ala 20 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Gly Thr Thr Thr Cys Ala Ala Thr Cys 1 5 10 15 Thr Ala Ala Cys Ala 20 <210> 3 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Thr Cys Cys Cys Ala Ala Thr Gly Ala Gly Thr Thr Gly Cys Cys Ala 1 5 10 15 Thr Ala Thr Ala Ala 20

Claims (12)

  1. HDAC2의 수준이 낮거나 또는 검출할 수 없는 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법.
  2. a) 환자로부터 암세포를 포함하는 샘플을 얻고;
    b) 암 샘플에서 HDAC2의 수준을 결정하고;
    c) 환자 샘플의 HDAC2 수준이 낮거나 또는 검출할 수 없는 경우, 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것
    을 포함하는, 환자의 암 치료 방법.
  3. HDAC2 프레임쉬프트 넌센스 돌연변이를 갖는 환자에게, 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법.
  4. a) 환자로부터 암세포를 포함하는 샘플을 얻고;
    b) 암 샘플에서 HDAC2 돌연변이 여부를 결정하고;
    c) 환자 샘플이 HDAC2 프레임쉬프트 넌센스 돌연변이를 갖는 경우, 환자에게 유효량의 엔자스타우린을 투여하는 것
    을 포함하는, 환자의 암 치료 방법.
  5. 환자에게 HDAC2 수준이 높은 유효량의 엔자스타우린 및 유효량의 클래스 I 선택적 HDAC 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 환자의 암 치료 방법.
  6. a) 환자로부터 암세포를 포함하는 샘플을 얻고;
    b) 암 샘플에서 HDAC2의 수준을 결정하고;
    c) 환자의 HDAC2 수준이 높은 경우에, 환자에게 유효량의 엔자스타우린 및 유효량의 클래스 I 선택적 HDAC 억제제를 투여하는 것
    을 포함하는, 환자의 암 치료 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 클래스 I 선택적 HDAC 억제제가 보리노스타트, 뎁시펩타이드, MS-275, MGCD0103, 벨리노스타트, 바케카, 파노비노스타트, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, 나트륨 부티레이트, 발프로산, 아피시딘, 페닐 부티레이트, CI994, 트라폭신, SB-429201, 비스피리디늄 다이엔, SHI-1:2, R306465, SB-379278A, 및 PCI-34051로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 결장직장암, 위암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 간암, 폐암, 신장암, 피부 T-세포 림프종, 교모세포종, 림프종, 췌장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  9. HDAC2의 수준이 낮거나 또는 검출될 수 없는 환자의 암 치료용 약제의 제조에 있어서 엔자스타우린의 용도.
  10. HDAC2 수준이 높은 환자의 암의 치료를 위해 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합 투여되는 약제의 제조에 있어서 클래스 I 선택적 HDAC 억제제와 조합된 엔자스타우린의 용도.
  11. 제10항에 있어서, 클래스 I 선택적 HDAC 억제제가 보리노스타트, 뎁시펩타이드, MS-275, MGCD0103, 벨리노스타트, 바케카, 파노비노스타트, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, 나트륨 부티레이트, 발프로산, 아피시딘, 페닐 부티레이트, CI994, 트라폭신, SB-429201, 비스피리디늄 다이엔, SHI-1:2, R306465, SB-379278A, 및 PCI-34051로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 결장직장암, 위암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 간암, 폐암, 신장암, 피부 T-세포 림프종, 교모세포종, 림프종, 췌장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
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