KR20100119899A - 폴리에틸렌글리콜화된 인슐린 유사 성장 인자 분석법 - Google Patents
폴리에틸렌글리콜화된 인슐린 유사 성장 인자 분석법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20100119899A KR20100119899A KR1020107022026A KR20107022026A KR20100119899A KR 20100119899 A KR20100119899 A KR 20100119899A KR 1020107022026 A KR1020107022026 A KR 1020107022026A KR 20107022026 A KR20107022026 A KR 20107022026A KR 20100119899 A KR20100119899 A KR 20100119899A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- growth factor
- insulin
- binding protein
- pegylated
- antibody
- Prior art date
Links
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 title claims abstract description 162
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 title claims abstract description 150
- 238000003556 assay Methods 0.000 title description 14
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 69
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 69
- 102000028416 insulin-like growth factor binding Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 108091022911 insulin-like growth factor binding Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 46
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 60
- 108090000969 Insulin-like growth factor-binding protein 4 Proteins 0.000 claims description 59
- 102000004369 Insulin-like growth factor-binding protein 4 Human genes 0.000 claims description 59
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 50
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- 108700002854 polyethylene glycol(B1)- insulin Proteins 0.000 claims description 28
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 26
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 18
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 claims description 18
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 17
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 16
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 13
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 42
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 35
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 35
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 19
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 17
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 14
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 14
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 14
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 12
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 9
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 9
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 8
- 108090000965 Insulin-like growth factor binding protein 3 Proteins 0.000 description 7
- 102000004374 Insulin-like growth factor binding protein 3 Human genes 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 7
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- -1 carboxy- Chemical class 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 5
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 5
- 102000028718 growth factor binding proteins Human genes 0.000 description 5
- 108091009353 growth factor binding proteins Proteins 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 4
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004371 Insulin-like growth factor binding protein 5 Human genes 0.000 description 4
- 108090000961 Insulin-like growth factor binding protein 5 Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 4
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 4
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 4
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 4
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 101000998774 Homo sapiens Insulin-like peptide INSL5 Proteins 0.000 description 3
- 108090000957 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 102000004375 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 102000004883 Insulin-like growth factor-binding protein 6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001014 Insulin-like growth factor-binding protein 6 Proteins 0.000 description 3
- 102100033266 Insulin-like peptide INSL5 Human genes 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 3
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 3
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 3
- 239000012070 reactive reagent Substances 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical group 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 3
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 2
- AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108090000964 Insulin-like growth factor binding protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 102000004372 Insulin-like growth factor binding protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 2
- FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 2
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODXKUIGEPAGKKV-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ODXKUIGEPAGKKV-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N Val-Cys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical group NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 2
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 2
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000005963 steroid binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020003178 steroid binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- KHNDABJZSPPYLE-FUGFVFQCSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[[2-[[(3s,5r,8r,9s,10s,12r,13s,14s,17r)-12,14-dihydroxy-10,13-dimethyl-17-(5-oxo-2h-furan-3-yl)-1,2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,15,16,17-tetradecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]acetyl]amino]hexanoate Chemical compound O([C@@H]1C[C@H]2CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@@H]([C@]4([C@@H](C[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)O)C)C=1COC(=O)C=1)CC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O KHNDABJZSPPYLE-FUGFVFQCSA-N 0.000 description 1
- AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N (4R,5S)-dethiobiotin Chemical compound C[C@@H]1NC(=O)N[C@@H]1CCCCCC(O)=O AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZHKJHQBOAJQXQR-UHFFFAOYSA-N 1H-azirine Chemical group N1C=C1 ZHKJHQBOAJQXQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-[6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoyloxy]pyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLWOQMRVOZVGEB-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-3-hydroxypropanoyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-hydroxypr Chemical compound NC(N)=NCCCC(NC(=O)C(N)CO)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O ZLWOQMRVOZVGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-2-iminopentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCC(=N)C(=O)O)SC[C@@H]21 DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IKALWTASUOCXGQ-ZWAPJTDOSA-N 7-[(3aS,4S,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-2-amino-2-butyl-3-oxoheptanoic acid 1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound ON1C(CCC1=O)=O.C(CCCC[C@@H]1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)(=O)C(C(=O)O)(CCCC)N IKALWTASUOCXGQ-ZWAPJTDOSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N Ala-Arg-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- SUMYEVXWCAYLLJ-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O SUMYEVXWCAYLLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QKHWNPQNOHEFST-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O QKHWNPQNOHEFST-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- QOIGKCBMXUCDQU-KDXUFGMBSA-N Ala-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O QOIGKCBMXUCDQU-KDXUFGMBSA-N 0.000 description 1
- MTDDMSUUXNQMKK-BPNCWPANSA-N Ala-Tyr-Arg Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N MTDDMSUUXNQMKK-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010173 Alzheimer-disease mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- DBKNLHKEVPZVQC-LPEHRKFASA-N Arg-Ala-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O DBKNLHKEVPZVQC-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- YUGFLWBWAJFGKY-BQBZGAKWSA-N Arg-Cys-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O YUGFLWBWAJFGKY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QQJSJIBESHAJPM-IHRRRGAJSA-N Arg-Cys-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QQJSJIBESHAJPM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AUIJUTGLPVHIRT-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N AUIJUTGLPVHIRT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- CTQIOCMSIJATNX-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CTQIOCMSIJATNX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DXVMJJNAOVECBA-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DXVMJJNAOVECBA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GIQCDTKOIPUDSG-GARJFASQSA-N Asn-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O GIQCDTKOIPUDSG-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- SDHFVYLZFBDSQT-DCAQKATOSA-N Asp-Arg-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SDHFVYLZFBDSQT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- HAFCJCDJGIOYPW-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Gln Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HAFCJCDJGIOYPW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MYOHQBFRJQFIDZ-KKUMJFAQSA-N Asp-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MYOHQBFRJQFIDZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- QLCPDGRAEJSYQM-LPEHRKFASA-N Cys-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O QLCPDGRAEJSYQM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- FWYBFUDWUUFLDN-FXQIFTODSA-N Cys-Asp-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)CN=C(N)N FWYBFUDWUUFLDN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XABFFGOGKOORCG-CIUDSAMLSA-N Cys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XABFFGOGKOORCG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UDPSLLFHOLGXBY-FXQIFTODSA-N Cys-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UDPSLLFHOLGXBY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VTJLJQGUMBWHBP-GUBZILKMSA-N Cys-His-Gln Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VTJLJQGUMBWHBP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QNNYDGBKNFDYOD-UBHSHLNASA-N Cys-Trp-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N QNNYDGBKNFDYOD-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical compound C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Chemical class 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- ZRXBYKAOFHLTDN-GUBZILKMSA-N Gln-Cys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N ZRXBYKAOFHLTDN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KSKFIECUYMYWNS-AVGNSLFASA-N Gln-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N KSKFIECUYMYWNS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VNTGPISAOMAXRK-CIUDSAMLSA-N Gln-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VNTGPISAOMAXRK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NYCVMJGIJYQWDO-CIUDSAMLSA-N Gln-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NYCVMJGIJYQWDO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RWQCWSGOOOEGPB-FXQIFTODSA-N Gln-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RWQCWSGOOOEGPB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ININBLZFFVOQIO-JHEQGTHGSA-N Gln-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O ININBLZFFVOQIO-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- MXPBQDFWIMBACQ-ACZMJKKPSA-N Glu-Cys-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O MXPBQDFWIMBACQ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N Glu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- HVYWQYLBVXMXSV-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HVYWQYLBVXMXSV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CQAHWYDHKUWYIX-YUMQZZPRSA-N Glu-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O CQAHWYDHKUWYIX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N Gly-Ala-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LLXVQPKEQQCISF-YUMQZZPRSA-N Gly-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN LLXVQPKEQQCISF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GDOZQTNZPCUARW-YFKPBYRVSA-N Gly-Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GDOZQTNZPCUARW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- JJGBXTYGTKWGAT-YUMQZZPRSA-N Gly-Pro-Glu Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JJGBXTYGTKWGAT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LBDXVCBAJJNJNN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O LBDXVCBAJJNJNN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DKJWUIYLMLUBDX-XPUUQOCRSA-N Gly-Val-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O DKJWUIYLMLUBDX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- LYSMQLXUCAKELQ-DCAQKATOSA-N His-Asp-Arg Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N LYSMQLXUCAKELQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CHZRWFUGWRTUOD-IUCAKERBSA-N His-Gly-Gln Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N CHZRWFUGWRTUOD-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 1
- 101001081567 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000840572 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000038460 IGF Type 2 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010031792 IGF Type 2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- SACHLUOUHCVIKI-GMOBBJLQSA-N Ile-Arg-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N SACHLUOUHCVIKI-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- JNDYZNJRRNFYIR-VGDYDELISA-N Ile-His-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JNDYZNJRRNFYIR-VGDYDELISA-N 0.000 description 1
- UWLHDGMRWXHFFY-HPCHECBXSA-N Ile-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UWLHDGMRWXHFFY-HPCHECBXSA-N 0.000 description 1
- XHBYEMIUENPZLY-GMOBBJLQSA-N Ile-Pro-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XHBYEMIUENPZLY-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- BCISUQVFDGYZBO-QSFUFRPTSA-N Ile-Val-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O BCISUQVFDGYZBO-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- GLBNEGIOFRVRHO-JYJNAYRXSA-N Leu-Gln-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O GLBNEGIOFRVRHO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QPXBPQUGXHURGP-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N QPXBPQUGXHURGP-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N Leu-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FBNPMTNBFFAMMH-AVGNSLFASA-N Leu-Val-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N Leu-Val-Arg Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CGHXMODRYJISSK-NHCYSSNCSA-N Leu-Val-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CGHXMODRYJISSK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N Lys-Asp-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YPLVCBKEPJPBDQ-MELADBBJSA-N Lys-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YPLVCBKEPJPBDQ-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- BOJYMMBYBNOOGG-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BOJYMMBYBNOOGG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JMNRXRPBHFGXQX-GUBZILKMSA-N Lys-Ser-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JMNRXRPBHFGXQX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTHGNAAQXISJHP-AVGNSLFASA-N Met-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WTHGNAAQXISJHP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YJNDFEWPGLNLNH-IHRRRGAJSA-N Met-Tyr-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YJNDFEWPGLNLNH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 1
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- ULECEJGNDHWSKD-QEJZJMRPSA-N Phe-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ULECEJGNDHWSKD-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- MPGJIHFJCXTVEX-KKUMJFAQSA-N Phe-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MPGJIHFJCXTVEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- JEGFCFLCRSJCMA-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JEGFCFLCRSJCMA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- BEEVXUYVEHXWRQ-YESZJQIVSA-N Phe-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O BEEVXUYVEHXWRQ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- IFMDQWDAJUMMJC-DCAQKATOSA-N Pro-Ala-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IFMDQWDAJUMMJC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WWAQEUOYCYMGHB-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 WWAQEUOYCYMGHB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SZZBUDVXWZZPDH-BQBZGAKWSA-N Pro-Cys-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SZZBUDVXWZZPDH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HQVPQXMCQKXARZ-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Ser Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O HQVPQXMCQKXARZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FYPGHGXAOZTOBO-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FYPGHGXAOZTOBO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N Pro-Ser-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- NRCJWSGXMAPYQX-LPEHRKFASA-N Ser-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O NRCJWSGXMAPYQX-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MQUZANJDFOQOBX-SRVKXCTJSA-N Ser-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MQUZANJDFOQOBX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N Thr-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N Thr-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- WPSDXXQRIVKBAY-NKIYYHGXSA-N Thr-His-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O WPSDXXQRIVKBAY-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 1
- FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- OMRWDMWXRWTQIU-YJRXYDGGSA-N Thr-Tyr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O OMRWDMWXRWTQIU-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N Val-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- GQMNEJMFMCJJTD-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GQMNEJMFMCJJTD-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N aminothiocarboxamide Natural products NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- LWISPDYGRSGXME-YDHLFZDLSA-N biotin peg2 amine Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCOCCOCCN)SC[C@@H]21 LWISPDYGRSGXME-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010054812 diprotin A Proteins 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical class [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 108010026364 glycyl-glycyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010079413 glycyl-prolyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 125000005179 haloacetyl group Chemical group 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 102000057877 human IGF2 Human genes 0.000 description 1
- 102000047065 human IGFBP1 Human genes 0.000 description 1
- 102000057218 human IGFBP4 Human genes 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 108010072591 lysyl-leucyl-alanyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000021332 multicellular organism growth Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002536 noncholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002161 passivation Methods 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N resorufin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3N=C21 HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 108010007375 seryl-seryl-seryl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 108020003113 steroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-ylideneazanium;chloride Chemical compound Cl.N=C1CCCS1 ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
- G01N2333/65—Insulin-like growth factors (Somatomedins), e.g. IGF-1, IGF-2
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은 인슐린-유사 성장 인자/인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 복합체의 검출을 위해 항-(폴리에틸렌 글라이콜) 항체 및 항-디곡시게닌 항체를 이용하여 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 검출하기 위한 면역분석법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 면역분석법 분야에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 인슐린 성장 인자 결합 단백질의 복합체의 형성 및 검출에 의해 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 검출 및 정량하기 위한 면역분석법에 관한 것이다.
인슐린 유사 성장 인자 I 및 II(IGF I 및 IGF II)는 세포 표면 수용체, 예를 들면 인슐린 유사 성장 인자 I 수용체 또는 인슐린 유사 성장 인자 II 수용체로의 결합을 통해 생물학적 작용이 수득되는 호르몬, 성장 인자 및 뉴로펩타이드의 인슐린 슈퍼패밀리의 일원이다. 인슐린 유사 성장 인자 및 성장 호르몬(GH) 축은 태아 및 어린이 신체 성장을 조절하는데 큰 역할을 한다. 수십년동안의 기본적 및 임상적 조사는 이것이 종양 성장을 유지하는데도 결정적임을 입증하였다([Khandwala, H.M., et al., Endocr. Rev. 21 (2000) 215-244]). 인슐린 유사 성장 인자 작용은 인슐린 유사 성장 인자의 운송자로서 작용하고, 이들을 분해로부터 보호하고, 이들이 수용체에 결합하는 것을 제한하거나 억제하고, 생물학적으로 불활성인 인슐린 유사 성장 인자의 "저장소"를 유지하는 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질(IGFBP)에 의해 조절된다([Martin, J.L., and Baxter, R.C., IGF binding proteins as modulators of IGF actions, in Rosenfeld, R.G., and Roberts, C.T. (eds.), The IGF system, Molecular Biology, Physiology, and Clinical Applications (1999), Humana Press, Totowa, 227-255]; [Jones, J.L., and Clemmons, D.R., Endocr. Rev. 12 (1995) 10-21]; [Khandwala, H.M., et al., Endocr. Rev. 21 (2000) 215-244]; [Hwa, V., et al., The IGF binding protein superfamily, in Rosenfeld, R.G., and Roberts, C.T. (eds.), The IGF system, Molecular Biology, Physiology, and Clinical Applications (1999), Humana Press, Totowa, pp. 315-327]). 종양 조직(IGF, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질, IGF 수용체) 상에서의 인슐린 유사 성장 인자 시스템에 의해 매개되는 반응의 본질적으로 모든 수준은 치료 접근법의 대상일 수 있다([Khandwala, H.M., et al., Endocr. Rev. 21 (2000) 215-244]; [Fanayan, S., et al., J. Biol. Chem. 275 (2000) 39146-39151]; [Imai, Y., et al., J. Biol. Chem. 275 (2000) 18188-18194]). 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3이 인슐린 유사 성장 인자에 독립적인 항-증식 및 세포사멸촉진 효과를 갖는 것 또한 여기서 언급되어야만 한다([Wetterau, L.A., et al., Mol. Gen. Metab. 68 (1999) 161-181]; [Butt, A.J., et al., J. Biol. Chem. 275 (2000) 39174-39181]).
인간 인슐린 유사 성장 인자 I은 인슐린과 구조적으로 관련된 순환 호르몬이다. 인슐린 유사 성장 인자 I은 전통적으로 말초 조직에서 성장 호르몬 작용의 주요 매개체로 간주되었다. 인슐린 유사 성장 인자 I은 70개의 아미노산으로 구성되고, 또한 소마토메딘(somatomedin) C로도 불리고, 스위스프로트(SwissProt) PO1343로 정의된다. 용도, 활성 및 제조에 대해서는, 예를 들어 [le Bouc, Y., et al, FEBS Lett. 196 (1986) 108-112]; [de Pagter-Holthuizen, P., et al., FEBS Lett. 195 (1986) 179-184]; [Sandberg Nordqvist, A. C., et al., Brain Res. Mol. Brain Res. 12 (1992) 275-277]; [Steenbergh, P. H., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 175 (1991) 507-514]; [Tanner, J. M., et al., Acta Endocrinol. (Copenh.) 84 (1977) 681-696]; [Uthne, K., et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 39 (1974) 548-554]; 유럽 특허 제0 123 228호; 제0 128 733호; 및 미국 특허 제5,861,373호; 제5,714,460호; 유럽 특허 제0 597 033호; 국제 특허 공개 제WO 02/32449호; 및 제WO 93/02695호에 언급되어 있다.
인슐린 유사 성장 인자 I의 기능 조절은 상당히 복잡하다. 순환시 단지 0.2% 내지 1.0%의 경계적 수준의 인슐린 유사 성장 인자 I만이 유리 형태로 존재하는 반면, 대부분은 인슐린 유사 성장 인자-결합 단백질(인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질)에 결합되어 있고, 이 단백질은 인슐린 유사 성장 인자에 매우 높은 친화도를 갖고 인슐린 유사 성장 인자 I 기능을 조절한다. 이 인자는 프로테아제에 의한 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 단백질 분해 같은 인슐린 유사 성장 인자 I 방출 기전에 의해 국부적으로 방출될 수 있다.
인슐린 유사 성장 인자 I은 성장중 및 성숙 뇌에서 주변분비(paracrine) 역할을 담당한다([Werther, G. A., et al., MoI. Endocrinol. 4 (1990) 773-778]). 시험관내 연구에서 인슐린 유사 성장 인자 I은 도파민 뉴론([Knusel, B., et al., J. Neurosci. 10(1990) 558-570]) 및 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)([McMorris, F. A., and Dubois-Dalcq, M., J. Neurosci. Res. 21 (1988) 199-209]; [McMorris, F. A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83 (1986) 822-826]; 및 [Mozell, R. L., and McMorris, F. A., J. Neurosci. Res. 30 (1991) 382-390])를 포함하는 CNS([Knusel, B., et al., J. Neurosci. 10(1990) 558-570]; 및 [Svrzic, D., and Schubert, D., Biochem. Biophys. Res. Commun. 172 (1990) 54-60])에서 몇가지 유형의 뉴론에 대하여 효력있는 비선택적 영양 작용제(trophic agent)인 것으로 나타난다. 미국 특허 제5,093,317호에서는 콜린성 뉴론 세포의 생존이 인슐린 유사 성장 인자 II의 투여로 증진되는 것으로 언급된다. 인슐린 유사 성장 인자 I이 말초 신경 재생을 자극하고([Kanje, M., et al., Brain Res. 486 (1989) 396-398]), 오르니틴 데카복실라제 활성을 증진시키는 것으로 또한 공지되어 있다(미국 특허 제5,093,317호). 미국 특허 제5,861,373호 및 국제 특허 공개 제WO 93/02695호에서는 환자의 중추신경계에서 인슐린 유사 성장 인자 I 및/또는 이의 유사체의 활성 농도를 증가시킴으로써, 교세포(glia) 및/또는 비-콜린성 뉴론 세포에 현저하게 영향을 미치는 중추신경계에 대한 손상 또는 이의 질환을 치료하는 방법을 언급하고 있다. 국제 특허 공개 제WO0232449호는 치료학적 유효량의 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 이의 생물학적 활성 변이체를 포함하는 약학 조성물을 포유동물의 비강에 투여함으로써 포유동물의 중추신경계에서 허혈성 손상을 감소시키거나 예방하는 방법에 관한 것이다. 인슐린 유사 성장 인자 I은 허혈성 사건와 연관된 허혈성 손상을 감소시키거나 예방하기에 효과적인 양으로 포유동물의 비강을 통해 흡수되어 중추신경계로 수송된다. 유럽 특허 제EP 0874641호에서는 중추신경계의 뉴론 손상을 치료하거나 예방하는 약제의 제조를 위한 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 인슐린 유사 성장 인자 II의 용도를 보고하고 있다.
유리 인슐린 유사 성장 인자 I의 뇌 및 혈청 수준의 감소는 알츠하이머병의 산발성 및 가족성 형태의 발병과 관련되어 있다. 또한, 인슐린 유사 성장 인자 I은 Aβ-유도 신경독성에 대하여 신경세포를 보호한다([Niikura, T., et al., J. Neurosci. 21 (2001) 1902-1910]; [Dore, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 (1997) 4772-4777]; 및 [Dore, S., et al., Ann. NY Acad. Sci. 890 (1999) 356-364]). 최근, 쥐와 생쥐에서 말초로 투여된 인슐린 유사 성장 인자 I이 뇌 Aβ 수준을 감소시킬 수 있음이 밝혀졌다([Carro, E., et al., Nat. Med. 8 (2002) 1390-1397]). 더욱이, 이 연구에서는 유전자 도입(transgenic) AD 생쥐 모델에서 지속적인 인슐린 유사 성장 인자 I 치료가 뇌 아밀로이드 플라크 하중(load)을 유의하게 감소시킴을 보여주었다. 이들 자료는 인슐린 유사 성장 인자 I이 뇌로부터 Aβ를 청소(clearance)함으로써 뇌 Aβ 수준 및 플라크-연관 뇌 치매를 감소시킬 수 있음을 강력하게 지지한다.
인슐린 유사 성장 인자 I 및 인슐린 유사 성장 인자 II는 각각 70개 및 67개의 아미노산인 67% 동일한 단쇄 폴리펩타이드로서 인슐린과 약 40%의 서열 동일성 및 추정된 구조적 상동성을 공유한다. 인슐린 유사 성장 인자의 첫번째 29개 잔기는 인슐린의 B-쇄(B 영역, 1 내지 29)에 이어서, 프로인슐린의 C-펩타이드와 유사한 12개의 잔기(C 영역, 30-41) 및 인슐린의 A-쇄와 상동성인 21개 잔기 영역(A 영역, 42-62)과 상동성이 있다. 카복시-말단 옥타펩타이드(D 영역, 63-70)는 인슐린과 프로인슐린에 대응물이 없다([Murray-Rust, J., et al., BioEssays 14 (1992) 325-331]; [Baxter, R.C., et al., J. Biol. Chem. 267 (1992) 60-65]). 인슐린 유사 성장 인자는 C 영역이 전사후 단백질분해효소에 의해 제거되지 않는 인슐린 슈퍼패밀리의 유일한 일원이다.
인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질(인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-1 내지 -6)은 216 내지 289개 잔기의 단백질이고, 예를 들면 성숙한 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-5는 252개의 잔기로 구성된다([Wetterau, L.A., et al., Mol. Gen. Metab. 68 (1999) 161-181]; 리뷰에 대해서는 [Rajaram, S., et al., Endocr. Rev. 18 (1997) 801-831]참조). 모든 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 공통의 도메인 조직화를 공유한다. 가장 높은 보존성은 N-말단(잔기 1 내지 약 100) 및 C-말단(잔기 170부터) 시스테인 풍부 도메인에서 발견된다. N-말단 도메인에서 12개의 보존된 시스테인이 발견되고, C-말단 도메인에서 6개의 보존된 시스테인이 발견된다. 중앙의 약하게 보존된 부분(L-도메인)이 특정한 프로테아제에 대한 분해 부위의 대부분을 함유한다([Chernausek, S.D., et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 11377-11382]). 이제까지 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 여러 다른 분획이 개시되고 생화학적으로 특징이 규명되어왔다([Mazerbourg, S., et al., Endocrinology 140 (1999) 4175-4184]). 돌연변이 연구는 높은 친화성의 인슐린 유사 성장 인자 결합 부위가 N-말단 도메인에 위치함을 제시하고([Wetterau, L.A., et al., Mol. Gen. Metab. 68 (1999) 161-181]; [Chernausek, S.D., et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 11377-11382]), 적어도 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3 및 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-2가 2개의 결합 결정자(이중 하나는 N-말단 도메인에 위치하고, 나머지 하나는 C-말단 도메인에 위치한다)을 함유함을 개시하였다([Wetterau, L.A., et al., Mol. Gen. Metab. 68 (1999) 161-181]). 최근, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질에 비해 더 낮은 친화성으로 인슐린 유사 성장 인자에 결합하는 일군의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 관련 단백질(인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-rP)이 개시되었다([Hwa, V., et al., The IGF binding protein superfamily in Rosenfeld, R.G., and Roberts, C.T. (eds.), The IGF system, Molecular Biology, Physiology, and Clinical Applications (1999), Humana Press, Totowa, pp. 315-327]). 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 및 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-rP는 인슐린 유사 성장 인자로의 결합 및 인슐린에 대한 높은 친화성을 비롯한 여러 생물학적 작용에 결정적인 것으로 보이는 가장 많이 보존되고 시스테인이 풍부한 n-말단 도메인을 공유한다. 예를 들면 혈장 분해에 의해 생성된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3의 N-말단 분획 또한 인슐린에 결합하고 따라서 생리학적으로 인슐린 활성에 가장 관련되어 있다. N-말단 도메인을 넘어서면, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-rP 사이에 서열 유사성이 없다.
본 발명의 제 1 양태는 모노클론성 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체인 포획 항체 및 모노클론성 항-디곡시게닌 항체인 추적자 항체를 포함하며, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과의 복합체로서 검출되고, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 항온처리 단계가 실온에서 12 내지 24시간동안 수행되고, 상기 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 농도가 5.0㎍/ml 이하인, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 검출하기 위한 면역분석법에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 상기 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체는 고형 상에 컨쥬게이트되고, 상기 항-디곡시게닌 항체는 검출가능한 수준으로 컨쥬게이트된다. 다른 실시양태에서, 상기 컨쥬게이트는 화학적 컨쥬게이트이다. 추가의 실시양태에서, 상기 검출가능한 라벨은 효소, 항원, 형광 기, 화학적발광 기 및 금속 킬레이트 복합체에서 선택된다. 추가의 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 서열 번호 1의 인슐린 유사 성장 인자 I이거나, 또는 이의 PEG화된 변이체이다. 추가의 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 모노-PEG화되어 있다. 또다른 실시양태에서, 상기 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4 또는 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-5이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석법은 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 항온처리 단계가 18 내지 22시간, 바람직하게는 20시간임을 특징으로한다. 추가의 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석은 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 상기 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 항온처리 단계가 0.1 내지 5.0㎍/ml 또는 0.1㎍/ml 내지 1.0㎍/ml의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 농도를 이용함을 특징으로 한다.
본 발명의 제 2 양태는
a) 분석될 시료를 제공하는 단계;
b) 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 상기 시료와 함께 항온처리하여 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체/PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 복합체를 형성하는 단계;
c) 실온에서 12 내지 24시간동안 단계 b)에서 형성된 복합체를 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와 항온처리하여, 단계 b)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 2 복합체를 형성하되, 상기 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 농도가 5.0㎍/ml 이하인 단계;
d) 단계 c)에서 형성된 상기 복합체를 서양고추냉이 퍼옥시다제 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체와 함께 항온처리하여 c)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 3 복합체를 형성하는 단계;
e) 단계 d)에서 형성된 복합체를 ABTS와 함께 항온처리하고, 착색된 생성물의 형성을 검출함으로써 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는 단계
를 포함하는, 시료에서 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는 방법에 관한 것이다.
상기 방법의 한 실시양태에서, 세척 단계는 단계 b) 및/또는 c) 및/또는 d)이후에 수행된다. 한 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자-I 또는 이의 PEG화된 변이체이다. 다른 실시양태에서, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 단계는 18 내지 22시간이다. 추가의 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 단계는 0.1㎍/ml 내지 5.0㎍/ml의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 농도를 이용한다.
본 발명의 제 3 양태는
a) 분석될 시료를 제공하는 단계;
b) 각각이 한정되었지만 서로 다른 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I을 함유하는 2개 이상의 기준 시료를 제공하는 단계;
c) 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 시료 및 서로 다른 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I을 함유하는 2개 이상의 기준 시료와 함께 별도로 항온처리하여 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체/PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 복합체를 형성하는 단계;
d) 단계 c)에서 형성된 상기 복합체를 각각의 시료 및 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4를 갖는 기준 시료와 함께 별개로 항온처리하여 c)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 2 복합체를 형성하고, 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와의 항온처리가 실온에서 12 내지 24시간이고, 상기 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 농도가 5.0㎍/ml 이하인 단계;
e) 단계 d)에서 형성된 상기 복합체를 각각의 시료 및 서양고추냉이 퍼옥시다제 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체를 갖는 기준 시료와 함께 별도로 항온처리하여 단계 d)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 3 복합체를 형성하는 단계;
f) 단계 e)에서 형성된 복합체를 각각의 시료 및 ABTS를 갖는 기준 시료와 함께 별도로 5 내지 15분동안 항온처리하고, 형성된 착색된 생성물의 양을 측정하는 단계;
g) 기준 시료에서 형성된 착색된 생성물의 양에 근거하여 계산된 보정 곡선을 이용하여 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 이의 PEG화된 변이체의 양을 정량적으로 측정하는 단계
를 포함하는, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 이의 PEG화된 변이체의 양을 정량적으로 측정하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 제 4 양태는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 또는 이의 PEG화된 변이체가 투여된 환자의 추적 조사를 위한 본 발명에 따른 방법의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 양태의 한 실시양태는 포획 항체가 고형 상에 컨쥬게이트된 항체 부위가 서로 다른 2개 이상의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 포함하는 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 혼합물이고, 추적자 항체가 검출가능한 라벨에 컨쥬게이트되어 있는 항체 부위가 서로 다른 2개 이상의 항-디곡시게닌 항체를 포함하는 항-디곡시게닌 항체의 혼합물인 것이다. 추가의 실시양태에서, 이의 컨쥬게이트 파트너에 대한 항체의 컨쥬게이션은 N-말단 및/또는 ε-아미노기(리신), 다른 리신의 ε-아미노기, 항체의 아미노산 주쇄의 카복시-, 설프하이드릴-, 하이드록실- 및/또는 페놀 작용기 및/또는 항체의 탄화수소 구조의 당 알콜 기를 통한 화학적 결합에 의해 수행된다. 본 발명의 양태의 한 실시양태에서, 포획 항체 혼합물 또는 추적자 항체 혼합물은 아미노기 및 탄화수소 구조를 통해 그들의 컨쥬게이트 파트너에 컨쥬게이트되는 개별적인 항체를 포함한다. 추가의 실시양태에서, 고형 상에 대한 포획 항체의 컨쥬게이트는 수동적 흡착을 통하거나, 또는 특정한 결합 쌍을 통해 수행된다. 본 발명의 한 양태에서, 특정한 결합 쌍(제 1 성분/제 2 성분)은 스트렙타비딘 또는 아비딘/바이오틴 또는 항체/항원 또는 렉틴/폴리사카라이드, 또는 스테로이드/스테로이드 결합 단백질, 또는 호르몬/호르몬 수용체, 또는 효소/기질, 또는 IgG/단백질 A 및/또는 G로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, 포획 항체는 바이오틴에 컨쥬게이트되고, 고형 상에 대한 컨쥬게이트는 부동화된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 통해 수행된다. 다른 양태에서, 포획 항체는 IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체이다. 본 발명의 양태의 또다른 실시양태에서는, 추적자 항체가 특정한 결합 쌍을 통해 검출가능한 수준까지 컨쥬게이트된다. 본 발명의 양태의 다른 실시태양은 포획 항체 대 추적자 항체의 비가 1:10 내지 50:1(비란 상이할 수 있는 컨쥬게이트의 분자량과는 무관한 항체 분자의 비이다).
본 발명의 다른 양태는
a) 스트렙타비딘 코팅된 마이크로타이터 플레이트, b) 바이오틴에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, c) 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체, d) 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, e) ABRS를 포함하는, 시료에서 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 이의 PEG화된 변이체를 측정하기 위한 키트에 관한 것이다.
한 실시양태에서, b) 및 c)의 항체는 모노클론 항체이다. 다른 실시양태에서, b)의 항체는 IgM 클래스의 항체이고, c)의 항체는 IgG 클래스의 항체이다.
도 1은 인슐린 유사 성장 인자 I 및 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4로 예시된 본 발명에 따른 면역분석법의 도식도이다. 1: 스트렙타비딘 코팅된 마이크로타이터 플레이트, 2: 모노클론성 바이오틴화된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 3: PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I, 4: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 5: 모노클론성 서양고추냉이 퍼옥시다제 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체.
도 2는 기준 시료(실시예 2)를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도; Y 축: 평균 흡수 신호.
도 3은 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(다이아몬드형), ii) 5%(v/v) 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(삼각형), 및 iii) 10ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 5%(v/v)의 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(사각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 50mU/ml의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, 모든 항온처리 시간: 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 4는 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(다이아몬드형), ii) 5%(v/v) 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(삼각형), 및 iii) 10ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 5%(v/v)의 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(사각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 50mU/ml의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 5는 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(다이아몬드형), ii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml 농도의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(삼각형), iii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 0.5㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(사각형); iv) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 1.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 사각형); 및 v) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 5.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(점선); vi) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 10.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 삼각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 50mU/ml 농도의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 6은 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(다이아몬드형), ii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml 농도의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(삼각형), 및 iii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 0.5㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(사각형); iv) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 1.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 사각형); 및 v) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 5.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(점선); vi) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 10.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 삼각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 50mU/ml 농도의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 4℃, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 7은 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 5%(v/v) 인간 혈청이 첨가된(삼각형), ii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 5%(v/v) 마우스 혈청이 첨가된(삼각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 25mU/ml의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 모든 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 8은 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 5%(v/v) 인간 혈청이 첨가된 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호.
도 2는 기준 시료(실시예 2)를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도; Y 축: 평균 흡수 신호.
도 3은 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(다이아몬드형), ii) 5%(v/v) 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(삼각형), 및 iii) 10ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 5%(v/v)의 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(사각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 50mU/ml의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, 모든 항온처리 시간: 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 4는 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(다이아몬드형), ii) 5%(v/v) 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(삼각형), 및 iii) 10ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 5%(v/v)의 인간 혈청 및 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 첨가된(사각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 50mU/ml의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 5는 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(다이아몬드형), ii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml 농도의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(삼각형), iii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 0.5㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(사각형); iv) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 1.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 사각형); 및 v) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 5.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(점선); vi) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 10.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 삼각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 50mU/ml 농도의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 6은 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(다이아몬드형), ii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml 농도의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4 및 0.1㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(삼각형), 및 iii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 0.5㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(사각형); iv) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 1.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 사각형); 및 v) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 5.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(점선); vi) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 20ng/ml의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 10.0㎍/ml 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4가 첨가된(작은 삼각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 50mU/ml 농도의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 4℃, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 7은 i) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 5%(v/v) 인간 혈청이 첨가된(삼각형), ii) 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 5%(v/v) 마우스 혈청이 첨가된(삼각형) 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호; 분석 조건: 25mU/ml의 항-디곡시게닌 항체-서양고추냉이 퍼옥시다제-컨쥬게이트, IgM 클래스의 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 모든 항온처리 시간: 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 시간이 20시간인 것을 제외하고는 모두 1시간, 실온, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 N-말단 PEG화된 단백질과 68번 위치에서 PEG화된 단백질의 혼합물이다.
도 8은 기준 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 5%(v/v) 인간 혈청이 첨가된 시료를 이용하여 수득된 표준 곡선을 나타낸다. X 축: ng/ml 단위의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 농도, Y 축: 평균 흡수 신호.
본 발명은 포획 항체 및 추적자 항체를 이용하여 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 또는 이의 PEG화된 변이체를 측정하기위한 면역분석법에 관한 것으로, 여기서 포획 항체는 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체이고, 추적자 항체는 항-디곡시게닌 항체이며, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 사이에 형성된 복합체로서 측정되고, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 항온 처리 단계가 실온에서 12 내지 24시간동안이고, 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 농도가 5.0㎍/ml 이하이다.
면역분석법은 당 분야의 숙련자들에게 잘 공지되어 있다. 이런 분석법을 수행하는 방법 및 실제 용도 및 방법이 관련 문헌에 요약되어 있다. 관련 문헌의 예는 [Tijssen, P., Preparation of enzyme-antibody or other enzyme-macromolecule conjugates (in: "Practice and theory of enzyme immunoassays" (1990), 221-278, Eds. R.H. Burdon and v. P.H. Knippenberg, Elsevier, Amsterdam] 및 면역학적 검출 방법을 다루고 있는 ["Methods in Enzymology" (Eds. S.P. Colowick, N.O. Caplan, Academic Press)]의 여러 권, 특히 제70, 73, 74, 84, 92 및 121권이다.
항체는 단백질로서 다수의 반응성 잔기, 예를 들면 아미노기(리신, 알파-아미노 기), 티올 기(시스틴, 시스테인 및 메티오닌), 카복실산 기(아스파트산, 글루탐산) 및 당-알콜 기를 함유한다. 이들은 표면, 단백질, 중합체(예를 들면 PEG, 셀룰로즈, 또는 폴리스티롤), 효소, 또는 결합 쌍의 일원(예를 들면 [Aslam M., and Dent, A., Bioconjugation MacMillan Ref. Ltd. (1999) 50-100]참조)과 같은 결합 파트너에 대한 커플링을 위해 이용될 수 있다.
단백질의 가장 흔한 반응기중 하나는 아미노산 리신의 지방족 ε-아민이다. 일반적으로, 거의 모든 항체가 풍부한 리신을 함유한다. 리신 아민은 pH 8.0 이상에서 상당히 우수한 친핵체이고(pKa = 9.18), 따라서, 다양한 시약과 쉽고 명확하게 반응하여 안정한 결합을 형성한다. 항체에서 다른 흔한 반응기는 황-함유 아미노산 시스틴 및 이의 환원 생성물인 시스테인(또는 절반 시스틴)에서 나온 티올 잔기이다. 시스테인은 유리 티올 기를 함유하고, 이는 아민에 비해 보다 친핵성이고, 일반적으로 단백질에서 가장 반응성인 작용기이다. 티올은 일반적으로 중성 pH에서 반응성이고, 따라서, 아민의 존재하에서 선택적으로 다른 분자에 커플링될 수 있다. 유리 설프하이드릴 기가 비교적 반응성이기 때문에, 이들 기를 갖는 단백질은 종종 다이설파이드 기 또는 다이설파이드 결합과 같은 이들의 산화된 형태로 존재한다. 시스틴 및 시스테인에 추가하여, 일부 단백질은 또한 아미노산 메티오닌을 갖고, 이는 티오에터 연결기에 황을 함유하는 것이다. 문헌은 반응성 아미노 기를 통해 여러 설프하이드릴 기를 도입하는 효과적인 방법을 제공하기 위한 트라우트(Traut) 시약(2-이미노티올란), 석신이미딜(아세틸티오) 아세테이트(SATA) 또는 설포석신이미딜 6-[3-(2-피리딜다이티오)프로피온아미도]헥사노에이트(설포-LC-SPDP)와 같은 여러 티올화 가교결합 시약의 이용을 보고한다. 반응성 에스터, 특히 N-하이드록시석신이미드(NHS) 에스터가 그 중에서도 아민 기의 개질을 위해 가장 흔히 이용되는 시약이다. 수성 환경에서의 반응을 위한 최적 pH는 pH 8.0 내지 9.0이다. 아이소티오시아네이트는 아민-개질 시약이고, 단백질과 티오우레아 결합을 형성한다. 이들은 수용액(pH 9.0 내지 9.5에서 최적)에서 단백질 아민과 반응한다. 알데하이드는 온화한 수성 조건하에서 지방족 및 방향족 아민, 하이드라진 및 하이드라지드와 반응하여 이민 중간체(쉬프 염기)를 형성한다. 쉬프 염기는 선택적으로 온화하거나 강한 환원제(예를 들면 나트륨 보로하이드라이드 또는 나트륨 시아노보로하이드라이드)로 선택적으로 환원되어 안정한 알킬 아민 결합을 유도한다. 아민을 개질시키는데 사용되어온 다른 시약은 산 무수물이다. 예를 들면 디아에틸렌트라이아민펜타아세트산 무수물(DTPA)은 2개의 아민-작용성 무수물 기를 함유하는 이작용성 킬레이트화제이다. 이는 단백질의 N-말단 및 ε-아민 기와 반응하여 아미드 연결기를 형성할 수 있다. 무수물 고리는 개환되어 배위 착체에서 금속과 단단히 결합할 수 있는 다가의, 금속-킬레이팅 암(arm)을 생성한다.
항체에서 다른 흔한 반응기는 카복실산(아스파트 산, 글루탐산)이다. 단백질은 C-말단 위치에서 그리고 아스파트산과 글루탐산의 측쇄에서 카복실산 기를 함유한다. 컨쥬게이트를 위해서, 카복실산 기는 일반적으로 수용성 카보다이이미드를 이용함으로써 반응성 에스터로 전환되고, 아민, 하이드라지드 또는 하이드라진과 같은 친핵성 시약과 반응된다. 단백질 상의 다른 아민의 존재하에서 활성화된 카복실산과 선택적으로 반응하도록 아민-함유 시약은 약염기이어야만 한다. pH가 8.0 이상으로 상승되면 단백질 가교결합이 일어날 수 있다.
나트륨 퍼요데이트를 이용하여 탄화수소 잔기 내부의 당의 알콜 부분을 알데하이드로 산화시킬 수 있다. 각각의 알데하이드 기는 카복실산의 경우 개시된 바와 같이 아민, 하이드라지드 또는 하이드라진과 반응할 수 있다. 탄화수소 잔기가 주로 항체의 결정화가능한 단편(Fc) 영역에서 발견되기 때문에, 컨쥬게이트가 항원 결합 부위에서 먼 탄화수소의 부위 지향적 개질을 통해 수득될 수 있다.
티올-반응성 시약은 단백질 상의 티올 기와 커플링되어 티오에터-커플링된 생성물을 형성하는 것들이다. 이들 시약은 약산성 내지 중성 pH로 급격하게 반응하고, 따라서, 아민 기의 존재하에서 선택적으로 반응될 수 있다. 할로아세틸 유도체, 예를 들면 요도아세트아미드는 티오에터 결합을 형성하고, 티올 개질을 위한 시약이다. 항체에서, 반응은 내부적으로 존재하는 시스테인 기, 또는 항체의 다양한 위치에서 시스틴의 다이설파이드의 환원에서 생성된 시스테인 기에서 수행된다. 추가의 유용한 시약은 말레이미드이다. 말레이미드와 티올-반응성 시약의 반응은 본질적으로 요도아세트아미드와 동일하다. 말레이미드는 약산성 내지 중성 pH에서 신속하게 반응한다.
아민, 하이드라지드 및 하이드라진은 알데하이드 및 카복실산-반응성 시약이다(아미드, 하이드라존 또는 알킬 아민 결합의 형성). 아민, 하이드라지드 및 하이드라진은 수용성 카보다이이미드에 의해 카복실 기가 활성화된 후 단백질의 카복실산에 커플링될 수 있다. 아민-함유 시약은 리신의 보다 높은 염기성 ε-아민의 존재하에서 카보다이이미드-활성화된 단백질과 선택적으로 반응하여 안정한 아미드 결합을 형성하도록 약염기성이어야만 한다. 항체 상의 탄화수소 잔기의 퍼요데이트 산화에 의해 항체 상에서 생성될 수 있는 알데하이드 기와의 반응에서, 쉬프 염기 중간체가 형성되고, 이는 나트륨 시아노보로하이드라이드(온화하고 선택적인 시약) 또는 나트륨 보로하이드라이드(강함) 수용성 환원제를 이용한 중간체의 환원을 통해 알킬 아민으로 환원될 수 있다.
본 발명에서 이용되는 용어 "면역분석법"은 면역학적 측정 방법, 즉 생체 외 방법을 의미한다. 면역분석법을 이용하여, 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 또는 이의 PEG화된 변이체의 존재 및/또는 양 중 하나를 직접적으로 측정하는 것이 가능하다(예를 들면 [The Immunoassay Handbook, edited by David Wild, M Stockton Press, 1994]를 참조할 수 있다). 면역분석법은 일반적으로 시료에서 분석될 분자에 특이적으로 결합하는 하나 이상, 한 실시양태에서는 2개의 서로 다른 결합 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석법은 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 상에서 상이한 비-오버랩된 에피토프에 대한 2가지의 서로 다른 항체 결합을 포함한다. 다른 양태에서는, 본 발명에 따른 면역분석법은 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 또는 이의 PEG화된 변이체에 특정하게 결합하는 하나의 항체, 및 검출되는 분자의 비-오버랩되는 에피토프에 대해 결합하는 하나의 분자를 포함한다. 검출 목적을 위해서, 하나 이상의 결합 분자는 방사활성 분해제, 효소 촉매화된 색-생성, 형광 생산 또는 억제 또는 화학발광 생산에 의해 검출될 수 있는 방사성동위원소, 효소 또는 염료를 포함하는 검출가능한 라벨로 라벨링된다. 면역학적 측정 방법은 방사성면역분석법(RIA), 효소-연결된 면역흡수 분석법(ELISA), 형광 면역분석법(FIA) 및 화학발광 분석법(CLA)과 같은 방법을 포함한다. 본 발명에 따른 면역분석법은 한 양태에서는 이종 면역분석법이다. 이런 분석법에서, 고형 상에 결합되어 있는 포획 항체 및 분석물질을 포함하는 복합체로부터 분석될 시료에 존재하는 결합되지 않은 분자를 제거하는 것이 가능하다. 원심분리, 여과, 자기 분리 및 고형 상으로부터 시료 유체의 흡인에 의해 분리가 수행될 수 있고, 한 양태에서는, 이후에 고형 상 결합된 복합체를 완충액으로 반복 세척한다. 한 실시양태에서는, 면역분석법은 샌드위치 면역분석법이다(예를 들면 [Immunochemistry of Solid-Phase Immunoassay, John E. Butler, CRC Press, 1991] 참고). 이 면역분석법에서, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 제 1 단계에서 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 제 1 에피토프에 특이적으로 결합된 고형 상 부동화된 항체에 결합된다. 복합체가 형성된 후, 시료를 제거하고, 복합체를 완충액으로 반복 세척한다. 이후에, 제 1 에피토프에 대해 겹쳐지지 않는 에피토프인 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 에피토프에 결합하는 검출 분자를 복합체에 첨가한다. 상기 검출 분자는 일반적으로 직접적(예를 들면 형광 기, 방사성 라벨 또는 금속-킬레이트) 또는 간접적으로(예를 들면 결합 쌍의 제 1 파트너에) 검출가능한 라벨에 컨쥬게이트된다. PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 항체와 검출 분자 사이에 "샌드위치"된다. 결합되지 않은 검출 분자를 제거하기 위해 제 2 세척 단계가 수행될 수 있다. 최종적으로 적합한 검출제를 이용하여 검출 라벨이 검출된다. 본 발명에 따른 면역분석법 및 방법의 한 실시양태에서, 항체는 (폴리에틸렌 글리콜)-부분에 결합하고, 검출 분자는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 또는 이의 PEG화된 변이체의 인슐린 유사 성장 인자 부분에 결합한다.
본원에서 이용되는 용어 "시료"는 살아있는 것 또는 이전에 살아있었던 것에서 나온 임의의 양의 물질을 의미하지만, 이로 한정되지는 않는다. 이런 살아있는 것은 인간, 마우스, 원숭이, 래트, 토끼 및 다른 동물을 포함하지만, 이로 한정되지는 않는다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석법 또는 방법의 시료는 마우스, 래트, 개, 사이노몰거스 원숭이 또는 인간으로부터 수득된다. 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석법 또는 방법의 시료는 사이노몰거스 원숭이 또는 인간에서 나온 것이다. 이런 시료는 개인에서 나온 전혈, 혈청 또는 혈장(이들은 임상 일과에서 가장 널리 이용되는 공급원이다)을 포함하지만, 이로 한정되지는 않는다.
본원에서 이용되는 용어 "고형 상"은 비-유체 물질을 의미하고, 중합체, 금속(상자성, 강자성 입자), 유리 및 세라믹과 같은 물질로 제조된 입자(마이크로입자 및 비드 포함); 실리카, 알루미나 및 중합체 겔과 같은 겔 물질; 중합체, 금속, 유리 및/또는 세라믹으로 제조될 수 있는 모세관; 제올라이트 및 다른 다공성 물질; 전극; 마이크로타이터 플레이트; 고형 스트립; 및 큐벳, 관 또는 다른 분광 시료 용기를 포함한다. "고형 상"이 표면 상의 하나 이상의 잔기를 함유하여 분석법에서 이용되는 포획 분자와 상호작용한다는 면에서, 분석법의 고형 상 성분은 분석에서 접촉할 수 있는 불활성 고형 표면과는 구별된다. 고형 상은 관, 스트립, 큐벳 또는 마이크로타이터 플레이트와 같은 정지 상 성분일 수 있거나, 비드 및 미세입자와 같은 비-정지 상 성분일 수 있다. 미세입자는 또한 균질한 분석 형식을 위한 고형 상으로 이용될 수 있다. 단백질과 다른 물질의 비-공유결합 또는 공유 결합 둘 모두를 허용하는 다양한 미세 입자를 사용할 수 있다. 이런 입자는 중합체 입자, 예를 들면 폴리스티렌 및 폴리(메틸메타크릴레이트); 금 입자, 예를 들면 금 나노입자 및 금 콜로이드; 및 세라믹 입자, 예를 들면 실리카, 유리 및 금속 산화물 입자를 포함한다. 예를 들면 [Martin, C.R., et al., Analytical Chemistry-News & Features (1998) 322A-327A]를 참조할 수 있다. 본 발명에 따른 면역분석법을 위한 고형 지지체는 당 분야에 널리 개시되어 있다(예를 들면 [Butler, J.E., Methods 22 (2000) 4-23] 참조).
색원체(형광 또는 발광 기 및 염료), 효소, NMR-활성 기 또는 금속 입자, 햅텐(hapten), 예를 들면 디곡시게닌이 "검출가능한 라벨"의 예이다. 검출가능한 라벨은 또한 광활성화가능한 가교결합기, 예를 들면 아지도 또는 아지린 기일 수 있다. 한 실시양태에서는 전자화학발광에 의해 검출될 수 있는 금속 킬레이트가 검출가능한 라벨이고, 루테늄 킬레이트, 예를 들면 루테늄(비스피리딜)3 2 + 킬레이트가 특히 바람직하다. 적합한 루테늄 라벨링 기는 예를 들면 제EP 0 580 979호, 제WO 90/005301호, 제WO 90/11511호 및 제WO 92/14138호에 개시되어 있다.
직접 검출을 위해서, 라벨링 기는 임의의 공지된 검출가능한 기, 예를 들면 염료, 발광 라벨링 기(예를 들면 화학발광 기, 예를 들면 아크리디늄 에스터 또는 다이옥세탄), 또는 형광 염료(예를 들면 플루오레세인, 쿠마린, 로다민, 옥사진, 레소루핀, 시아닌 및 이의 유도체)에서 선택될 수 있다. 라벨링 기의 다른 예는 발광 금속 복합체(예를 들면 루테늄 또는 유로퓸 복합체), 효소(예를 들면 ELISA 또는 CEDIA(클로닝된 효소 공여자 면역분석법)에 이용되는 것들, 예를 들면 제EP-A-0 061 888호)), 및 방사성동위원소이다.
간접적 검출 시스템은 예를 들면 검출 시약이 바이오어핀 결합 쌍의 제 1 파트너를 이용하여 라벨링되는 것을 포함한다. 적합한 결합 쌍의 예는 햅텐 또는 항원/항체, 바이오틴 또는 바이오틴 동족체, 예를 들면 아미노바이오틴, 이미노바이오틴 또는 데스티오바이오틴/아비딘 또는 스트렙타비딘, 당/렉틴, 핵산 또는 핵산 유사체/상보적 핵산, 및 수용체/리간드, 예를 들면 스테로이드 호르몬 수용체/스테로이드 호르몬이다. 바람직한 제 1 결합 쌍 일원은 햅텐, 항원 및 호르몬을 포함한다. 햅텐, 예를 들면 디곡신 및 바이오틴 및 이의 유사체가 특히 바람직하다. 이런 결합 쌍의 제 2 대응물, 예를 들면 항체, 스트렙타비딘 등이 일반적으로 라벨링되어 예를 들면 상기 언급된 바와 같은 라벨에 의한 직접 검출을 허용한다.
본 발명에 따른 면역학적 검출 방법에서, 예를 들면 항체를 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자에 결합시키는데 이용되는 시약의 결합을 허용하는 시약 조건이 선택된다. 당 분야의 숙련자들은 용어 "복합체"를 이용함으로써 이런 결합 사건의 결과를 언급한다. 본 발명에 따른 분석 방법에서 형성된 복합체는 존재를 측정하기 위해 이용되거나, 또는 농도를 측정하기 위해, 즉 정량하기 위해 이용될 수 있다.
본원에서 이용되는 용어 "인슐린 유사 성장 인자"는 서열 번호 1의 단백질(인슐린 유사 성장 인자 I) 또는 서열번호 2의 단백질(인슐린 유사 성장 인자 II) 또는 이의 변이체를 의미한다. 인슐린 유사 성장 인자의 변이체는 한 실시양태에서는 27번 위치의 리신이 극성 아미노산으로 치환되고, 65번 위치의 리신 또는 68번 위치의 리신중 하나가 극성 아미노산으로 치환된 서열번호 1의 인슐린 유사 성장 인자이다. 용어 "극성 아미노산"은 아르기닌, 글루타민 및 아스파라긴을 의미하고, 즉 리신이 아르기닌, 글루타민 또는 아스파라긴으로 치환된다. 한 실시양태에서, 상기 극성 아미노산은 아르기닌이다. 다른 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 27번 및 65번 위치의 리신이 극성 아미노산으로 치환되고 PEG 잔기가 68번 위치의 아미노산에 결합된 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 모노-PEG화된 인슐린 유사 성장 인자이다. 추가의 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 27번 및 68번 위치의 리신이 극성 아미노산으로 치환되고 PEG 잔기가 65번 위치의 아미노산에 공유 결합되어 있는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 모노-PEG화된 인슐린 유사 성장 인자이다. 또다른 실시양태에서, 상기 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 27번 위치의 리신, 또는 27번 및 65번 및/또는 68번 위치의 리신이 극성 아미노산으로 치환되고, PEG 잔기가 상기 인자의 아미노 말단에 공유 결합되어 있는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 모노-PEG화된 인슐린 유사 성장 인자이다.
본 발명의 제 1 양태는 포획 항체, 인슐린 유사 성장 인자/인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 복합체 및 추적자 항체를 포함하는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 검출을 위한 면역분석법에 관한 것이고, 여기서, a) 포획 항체는 모노클론성 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체이고, b) PEG화된 인슐린 유사 성장 인자는 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과의 복합체로서 검출되고, c) 추적자 항체가 모노클론성 항-디곡시게닌 항체이다.
폴리에틸렌 글리콜(PEG)에 대한 항체는 바이오틴화되고, 한 양태에서는 고형 상, 예를 들면 스트렙타비딘 코팅된 마이크로타이터 플레이트에 결합되어 있다. 참고 기준으로서 또는 시험 시료에서 나온 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 또는 이의 PEG화된 변이체는 제 1 항온처리 단계에서 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체에 결합한다. 본원에서 이용되는 용어 "PEG화된 인슐린 유사 성장 인자"는 (폴리에틸렌 글리콜)잔기가 공유 결합되어 있는 "인슐린 유사 성장 인자"를 의미한다. 따라서, 한 실시양태에서, 디곡시겐화된 검출 시약, 과량으로 존재하는 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 제 2 항온처리 단계에서 이전에 형성된 복합체에 결합된다. 포유동물 유래된 시료에서, 인슐린 유사 성장 인자는 일반적으로 내인성 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과 복합체를 형성할 것이다. PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하기 위해서, 내인성 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 과량으로 첨가되는 분석법의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질로 대체되어야만 한다. 항-디곡시게닌 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트되고, ABTS-용액이 검출 시스템으로 이용된다.
한 실시양태에서, 포획 항체는 완전 항체이고, 즉, 이는 경쇄 및 중쇄를 포함하며, 여기서 경쇄는 가변 도메인 및 불변 도메인을 포함하고, 중쇄는 가변 도메인, CH1, CH2, CH3 및 선택적인 CH4 도메인 및 또한 경첩 영역을 포함한다. 다른 실시양태에서 포획 항체는 상기 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 경쇄, 중쇄의 가변 영역, Fab, Fab', F(ab)2, 또는 F(ab')2 절편에서 선택될 수 있고, 즉, 이는 상기 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 경쇄, 중쇄의 가변 영역, Fab, Fab', F(ab)2, 또는 F(ab')2 절편 중 하나이다.
중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 서로 다른 클래스로 할당된다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. 이들 클래스중 일부는 서브클래스(아이소타입)으로 더욱 나누어진다. 즉, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 나누어지고, IgA는 IgA1 및 IgA2로 나누어진다. 한 실시양태에서, 포획 항체는 다량체 항체, 예를 들면 IgM이다.
추적자 및/또는 포획 항체의 이의 컨쥬게이트 파트너로의 컨쥬게이션은 수동적 흡착, 화학적 결합 또는 특정한 결합 쌍을 통한 결합과 같은 서로 다른 방법에 의해 수행될 수 있다. 본원에서 이용되는 용어 "컨쥬게이트 파트너"는 예를 들면 고형 상, 폴리펩타이드, 검출가능한 라벨 또는 특정한 결합 쌍의 일원을 의미한다. 한 실시양태에서, 포획 및/또는 추적자 항체의 이의 컨쥬게이트 파트너로의 컨쥬게이트는 서로 독립적으로 N-말단 및/또는 ε-아미노 기(리신), 다른 리신의 ε-아미노 기, 항체의 아미노산 주쇄의 카복시-, 설프하이드릴-, 하이드록실- 및/또는 페놀 작용기, 및/또는 항체의 탄화수소 구조의 당 알콜 기를 통한 화학적 결합에 의해 수행된다. 한 실시양태에서, 포획 및/또는 추적자 항체는 특정한 결합 쌍을 통해 이의 컨쥬게이트 대응물에 컨쥬게이트된다. 한 실시양태에서, 포획 항체는 바이오틴에 컨쥬게이트되고, 고형 지지체로의 부동화는 고형 상 부동화된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 통해 수행된다. 한 실시양태에서, 추적자 항체는 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트되고 디곡시게닌에 대한 항체이다. 다른 실시양태에서 포획 항체는 수동적 흡착에 의해 고형 상에 컨쥬게이트된다. 수동적 흡착에 의해 고형 상에 컨쥬게이트된 항체는 서로 다른 항체 부위를 통해 고형 상에 컨쥬게이트된 항체의 혼합물을 포함한다. 따라서, 수동적 흡착에 의해 고형 상에 컨쥬게이트된 포획 항체는 2개 이상의 상이한 컨쥬게이트의 혼합물이고, 여기서 컨쥬게이트는 항체 부위, 즉 고형 상으로의 컨쥬게이트가 수행되는 항체의 아미노산 잔기의 측면에서 서로 상이하다. 수동적 흡착은 예를 들면 [Butler, J.E., "Solid Phases in Immunoassay", page 205-225 in Diamandis, E.P. and Christopoulos, T.K. (Editors): Immunoassay (1996), Academic Press, San Diego]에 개시되어 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 포획 항체는 특정한 결합 쌍을 통해 부동화된다. 이런 결합 쌍(제 1 성분/제 2 성분)은 예를 들면 스트렙타비딘 또는 아비딘/바이오틴, 항체/항원(예를 들면 [Hermanson, G.T., et al., Bioconjugate Techniques, Academic Press, 1996] 참조), 렉틴/폴리사카라이드, 스테로이드/스테로이드 결합 단백질, 호르몬/호르몬 수용체, 효소/기질, IgG/단백질 A 및/또는 G 및/또는 L 등이다. 한 실시양태에서, 포획 항체는 바이오틴에 컨쥬게이트되고, 부동화는 부동화된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 통해 수행된다. 다른 실시양태에서, 추적자 항체는 전기화학적발광 라벨, 예를 들면 루테늄 비스피리딜 복합체에 컨쥬게이트된다.
본 발명에 따른 면역분석법은 인슐린 유사 성장 인자와 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 특정한 상호작용을 이용한다. 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 인슐린 유사 성장 인자에 특이적으로 결합하고, 형성된 인슐린 유사 성장 인자/인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 복합체가 검출된다. 이 복합체는 직접적으로 검출될 수 없고, 따라서, 추가의 결합 파트너가 요구된다. 따라서, 본 발명에 따른 면역분석법은 핵심 요소로서 a) 인슐린 유사 성장 인자에 특이적으로 결합하는 포획 항체, b) 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질에 특이적으로 결합하는 추적자 항체를 포함한다.
따라서, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 검출을 위한 본 발명의 면역분석법은 하기 화합물을 포함한다(또한 도 1 참조):
- 고형 상,
- 폴리에틸렌 글리콜에 특이적으로 결합하고, 고형 상에 컨쥬게이트되는 포획 항체,
- 검출가능한 라벨에 직접적으로 컨쥬게이트되거나, 결합 쌍의 제 1 파트너에 컨쥬게이트되는 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질,
- 선택적으로, 인슐린 성장 인자 결합 단백질이 결합 쌍의 제 1 파트너에 컨쥬게이트되는 경우, 상기 결합 쌍의 제 2 파트너를 포함하는 추적자 분자.
고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체는 PEG화된 화합물의 폴리에틸렌 글리콜 잔기에 특이적으로 결합한다. PEG화된 화합물을 함유하는 시료가 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체와 접촉하면, PEG화된 화합물이 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체에 의해 결합되고, 따라서, 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 통해 고형 상에 컨쥬게이트될 것이다. 한 실시양태에서는 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체가 모노클론 항체이고, 임의의 면역글로불린 클래스일 수 있다. 다른 실시양태에서, 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체는 IgM 클래스의 모노클론성 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체이다. 예시적인 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체는 미국 특허 제7,320,791호 또는 제WO 2002/094853호에 보고되어 있다. 고형 상에 대한 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 컨쥬게이트는 공유결합적으로 또는 특정한 결합 쌍을 통하거나 물리적 상호작용을 통한 것일 수 있다.
한 실시양태에서 고형 상은 마이크로타이터 플레이트의 웰이다. 한 실시양태에서, 상기 포획 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 고형 상으로의 컨쥬게이트는 특정한 결합 쌍을 통한 것이고, 예를 들면 특정한 결합 쌍, 스트렙타비딘/바이오틴을 통한 것이고, 여기서, 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체는 공유 결합을 통해 바이오틴에 결합되어 있고, 고형 상은 공유 결합을 통해 스트렙타비딘에 결합되어 있다.
본 발명에서 용어 "인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질"은 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-1, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-2, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-5 및 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-6을 포함한다. 인간 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-1 내지 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-6의 서열은 스위스프로트 베이타베이스(Swiss Prot Database)(http://www.expasy.ch) 에 상세하게 개시되어 있고, 하기 번호로 확인된다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석법에서 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3, 또는 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4 또는 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-5이다.
포유동물에서 유래된 시료, 예를 들면 인간 시료에서, 인슐린 유사 성장 인자는 내인성 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-1 내지 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-6중 하나와 복합체를 형성하며, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3이 가장 흔하다([Rajaram, S., et al., Endocr. Rev. 18 (1997) 801-831]). 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 면역분석법 또는 방법에서 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질은 서열 번호 3의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4이다. 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질에 컨쥬게이트된 검출가능한 라벨은 공유 결합을 통해 컨쥬게이트된다. 한 실시양태에서, 검출가능한 라벨은 효소, 항원, 형광 기, 화학발광 기, 금속-킬레이트 착체, 및 전자화학발광 기에서 선택된다. 다른 실시양태에서, 검출가능한 라벨은 디곡시게닌 및 루테늄 비스피리딜 복합체에서 선택된다.
본 발명의 다음 양태는
a) 분석될 시료를 제공하는 단계;
b) 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 상기 시료와 함께 항온처리하여 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체/PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 복합체를 형성하는 단계;
c) 단계 b)에서 형성된 복합체를 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와 함께 항온처리하여 단계 b)에서 형성된 복합체를 포함하는 복합체를 형성하는 단계;
d) 단계 c)에서 형성된 복합체를 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체와 함께 항온처리하여 단계 c)에서 형성된 복합체를 포함하는 복합체를 형성하는 단계;
e) 단계 d)에서 형성된 복합체를 ABTS와 함께 항온처리하고 착색된 생성물을 형성함으로써 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는 단계
를 포함하는, 시료에서 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법을 이용하여 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는데 있어서 4단계가 수행된다. 제 1 단계에서, 예를 들면 특정한 결합 쌍인 스트렙타비딘/바이오틴을 통해 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를, PEG화된 폴리펩타이드를 함유하는 것으로, 특히 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 함유하는 것으로 의심되는 문제의 시료와 함께 항온처리한다. 한 실시양태에서는, 시료가 마우스, 래트, 개, 사이노몰거스 원숭이 또는 인간에서 나온 혈액 혈청이다. 한 실시양태에서, 제 1 항온배양 단계는 0.5 내지 5시간, 예를 들면 약 1시간이다. 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체는 시료에 함유된 PEG화된 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하고, 이에 의해 PEG화된 폴리펩타이드를 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 통해 고형 상으로 컨쥬게이트시킨다. 제 1 항온처리 단계 후에, 고형 상을 선택적으로 완충된 용액으로 세척한다.
제 2 항온처리 단계에서, 제 1 항온처리 단계에서 형성된 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체 및 PEG화된 폴리펩타이드로 구성된 복합체를 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와 함께 항온처리한다. 제 1 항온처리 단계에서 수득된 복합체 중에 함유된 PEG화된 폴리펩타이드가 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자인 경우에만 추가의 제 2 복합체가 형성된다. PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하기 위해, 시료의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 복합체를 형성한 내인성 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질을 대체하기 위해서, 과량의 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4를 첨가한다. 제 2 복합체는 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 이에 결합된 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 이에 결합된 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4로 구성된다. 한 실시양태에서, 제 2 항온처리 단계는 12 내지 24시간이고, 다른 실시양태에서는 18 내지 22시간이다. 제 2 항온처리 단계 후에, 고형 상은 선택적으로 완충된 용액으로 세척된다.
제 3 항온처리 단계에서, 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 및 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4로 구성된 복합체를 항-디곡시게닌 항체(이는 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트되어 있다)와 함께 항온처리하고, 제 3 복합체가 형성된다. 제 3 복합체는 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, 이에 결합된 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 이에 결합된 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 이에 결합된 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체로 구성된다. 한 실시양태에서, 제 3 항온처리 단계는 0.5 내지 5시간, 예를 들면 약 1시간이다. 제 3 항온처리 단계 후, 고형 상은 선택적으로 완충된 용액으로 세척된다.
제 4 항온처리 단계에서, 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자, 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, 및 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체로 구성된 복합체를 효소 서양고추냉이 퍼옥시다제의 기질인 2,2'-아지노-비스-3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산(ABTS; 이는 효소에 의해 405nm에서 최대 흡광을 갖는 착색된 생성물로 전환된다)과 함께 항온처리한다. 착색된 화합물의 농도는 서양고추냉이 퍼옥시다제의 양에 비례하고, 따라서, 분석되는 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 양에 비례한다. 따라서, 농도가 공지된 2개 이상의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 기준 시료가 분석되면, 매끄러운 함수/보정 곡선이 결정되고, 이를 이용하여 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 양이 계산되므로, 정량 측정이 가능하다.
한 실시양태에서는 405nm에서의 광학 밀도(OD)에서 490nm(기준 파장, 바탕값)에서의 용액의 광학 밀도를 뺀 값이 1.9 내지 2.1이면, 제 4 단계가 중단된다. 다른 실시양태에서는, 제 4 항온단계가 5 내지 15분이고, 추가의 실시양태에서는 8 내지 12분이다.
면역분석법에서 일부 변수가 조심스럽게 선택되어야만 하는 것으로 발견되었다. 이들 변수중 하나는 고형 상 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체 및 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자로 구성된 복합체를 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과 함께 항온처리하는 시간이다. 항온처리 시간이 더 길어지면 분석법에서 예를 들면 인간 혈청의 다른 성분에 대한 감수성이 감소되거나 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과의 경쟁에 의해 감수성이 감소되는 것으로 발견되었다(도 3 및 4). 따라서, 한 양태에서는 본 발명에 따른 분석법의 제 2 항온 단계에서의 항온처리 시간이 12 내지 24시간이다. 추가의 변수는 제 2 항온처리 단계에서의 항온 처리 온도이다. 제 2 항온처리 단계에서 20 내지 25℃, 즉 실온의 항온처리 온도(도 5)가 저온, 예를 들면 4℃(도 6)에 비해 유리한 것으로 발견되었다. 고려되어야하는 추가의 변수는 이용되는 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 농도이다. 상기 농도가 5.0㎍/ml 이하이어야만 하는 것으로 발견되었다. 한 실시양태에서, 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 농도는 0.1㎍/ml 내지 5.0㎍/ml이고, 추가의 양태에서는 0.1㎍/ml 내지 1.0㎍/ml이다.
제공된 시료가 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 함유하지 않는 경우, 제 2 항온처리 단계에서 복합체가 형성되지 않고, 따라서, 제 4 항온처리 단계에서 착색된 생성물이 형성되지 않는다는 점에 유의해야만 한다.
본 발명의 제 3 양태는
a) 분석할 시료를 제공하는 단계;
b) 공지된 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 함유하는 기준 시료를 제공하는 단계;
c) 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 각각의 상기 시료 및 서로 다른 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 함유하는 2개 이상의 기준 시료와 함께 별도로 항온처리하여 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체/PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 복합체를 형성하는 단계;
d) 각각의 시료 및 기준 시료 중의 단계 c)에서 형성된 상기 복합체를 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와 함께 항온처리하여 단계 c)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 2 복합체를 형성하고, 여기서 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와의 항온처리 시간이 12 내지 20시간인 단계;
e) 각각의 시료 및 기준 시료 중의 단계 d)에서 형성된 복합체를 서양고추냉이 퍼옥시다제 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체와 항온처리하여 단계 d)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 3 복합체를 형성하는 단계;
f) 각각의 시료 및 기준 시료 중의 단계 e)에서 형성된 복합체를 ABTS와 함께 5 내지 15분동안 항온처리하고 형성된 착색된 생성물의 양을 측정하는 단계;
g) 기준 시료에서 형성된 착색된 생성물의 양에 근거하여 계산된 매끄러운 함수 또는 보정 곡선에 근거하여 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 양을 정량적으로 측정하는 단계
를 포함하는, 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 양을 정량적으로 측정하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 제 4 양태는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 투여되는 환자의 추적 조사를 위한 본 발명에 따른 방법의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는 a) 스트렙타비딘 코팅된 마이크로타이터 플레이트, b) 바이오틴에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체, c) 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체, d) 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4, e) ABTS를 포함하는, 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하기 위한 키트에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 항체 b) 및 c)는 모노클론성 항체이다. 다른 실시양태에서는, 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체가 IgM 클래스의 항체이고, 항-디곡시게닌 항체는 IgG 클래스의 항체이다.
하기 실시예, 서열 목록 및 도면은 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공되고, 이의 진정한 범위는 첨부된 특허청구범위에 개시되어 있다. 본 발명의 진의를 벗어나지 않고 개시된 방법을 개질시킬 수 있는 것으로 이해된다.
서열에 대한 설명
서열 번호 1: 인간 인슐린 유사 성장 인자 I의 아미노산 서열(스위스-프로트 ID P01343의 아미노산 49 내지 118)
서열 번호 2: 인간 인슐린 유사 성장 인자 II의 아미노산 서열(스위스-프로트 ID P01344의 아미노산 25 내지 91)
서열 번호 3: 인간 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 아미노산 서열(스위스-프로트 ID P22692의 아미노산 22 내지 258)
실시예
1:
마이크로타이터 플레이트에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 제조
2㎍/ml의 최종 항체 농도를 갖는 바이오틴화된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 용액을 96웰 스트렙타비딘-코팅된 마이크로타이터 플레이트(마이크로코트(MicroCoat))에 각 웰당 100㎕씩 첨가하였다. 그런 다음, 용액을 실온에서 500rpm에서 1시간동안 항온처리하였다. 그런 다음, 용액을 따라내고, 웰을 각각 300㎕의 세척 완충액(0.05%(w/v) n-옥틸글리코시드가 보충된 1X PBS(포스페이트 완충된 염수))으로 3회 세척하였다.
실시예
2:
시료의 제조
a) 표준 시료
0.5%(w/v) 소의 혈장 알부민 1이 보충된 PBS 완충액(포스페이트 완충된 염수) 중의 2ng/ml의 농도의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I(PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I의 제조에 대해서는 예를 들면 제WO2006/066891호를 참조할 수 있다)의 저장 용액을 제조하였다. 저장 용액을 하기 농도로 희석시켰다:
0.5%(w/v) 소의 혈장 알부민 1이 보충된 PBS 완충액(포스페이트 완충된 염수) 중의 2ng/ml의 농도의 5% 수집된 바탕값 마우스 혈청 또는 5% 수집된 바탕값 인간 혈청 또는 5% 수집된 바탕값 인간 혈장을 갖는 2ng/ml의 농도의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I(PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I의 제조에 대해서는 예를 들면 제WO2006/066891호를 참조할 수 있다)의 저장 용액을 제조하였다. 저장 용액을 하기 농도로 희석시켰다:
c) 시험 시료
미지의 시험 혈청 시료를 0.5%(w/v) 소의 혈장 알부민 1로 보충된 포스페이트 완충된 염수 중의 5%의 수집된 바탕값 마우스 혈청을 이용하여 1:20으로 희석시켰다.
실시예
3:
면역분석법
실시예 1에 따라 수득된 마이크로타이터 플레이트의 웰에 100㎕의 각각의 기준 시료 및 시험 시료를 2중으로 첨가하였다. 웰을 500rpm으로 진탕하면서 1시간동안 항온처리하였다. 그런 다음, 용액을 따라내고, 각각의 웰을 각각 300㎕의 0.05%(w/v) n-옥틸글리코시드로 보충된 포스페이트 완충된 염수로 3회 세척하였다. 그런 다음, 100ng/ml의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 용액 100㎕를 각각의 웰에 첨가하고, 12 내지 24시간, 바람직하게는 20시간동안 500rpm에서 진탕하면서 항온처리하였다. 그런 다음, 용액을 따라내고, 각각의 웰을 각각 300㎕의 0.05%(w/v) n-옥틸글리코시드로 보충된 포스페이트 완충된 염수로 3회 세척하였다. 그런 다음, 50mU/ml의 최종 농도를 갖는 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체 용액 100㎕를 각각의 웰에 첨가하고, 500rpm에서 진탕하면서 1시간동안 항온처리하였다. 그럼 다음, 웰중의 용액을 따라내고, 각각의 웰을 각각 300㎕의 0.05%(w/v) n-옥틸글리코시드로 보충된 포스페이트 완충된 염수로 3회 세척하였다. 그런 다음, 100㎕의 ABTS 용액을 각각의 웰에 첨가하였다. 2ng/ml의 가장 높은 표준 용액이 1.9 내지 2.0의 OD 값에 도달하였을 때 반응을 중단시켰다. 이는 일반적으로 5 내지 15분이 걸린다. 표준 시료 및 시험 시료의 OD를 405nm 및 490nm에서 측정하였다. 4 매개변수 부합 프로그램을 이용하여 기준 표준의 표준 곡선을 수득하였다. 표준 곡선을 이용하여 시험 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I의 양을 계산하였다. 검출의 하한 및 정량의 하한은 각각 20pg/ml 및 31pg/ml로 계산되었다. 모든 단계는 실온에서 수행되었다.
| 시료 1 | 시료 2 | 시료 3 | 시료 농도 | 평균 | STDEV | CV [%] |
| 2.0350 | 2.0550 | 2.0020 | 2.00 ng/ml | 2.0307 | 0.0268 | 1.3% |
| 1.6600 | 1.6640 | 1.7330 | 1.00 ng/ml | 1.6857 | 0.0410 | 2.4% |
| 1.2090 | 1.2520 | 1.2240 | 0.50 ng/ml | 1.2283 | 0.0218 | 1.8% |
| 0.7570 | 0.7340 | 0.7660 | 0.25 ng/ml | 0.7523 | 0.0165 | 2.2% |
| 0.4390 | 0.4280 | 0.4360 | 0.13 ng/ml | 0.4343 | 0.0057 | 1.3% |
| 0.2500 | 0.2520 | 0.2430 | 0.06 ng/ml | 0.2483 | 0.0047 | 1.9% |
| 0.1410 | 0.1590 | 0.1490 | 0.03 ng/ml | 0.1497 | 0.0090 | 6.0% |
| 0.0590 | 0.0620 | 0.0660 | 0.00 ng/ml | 0.0623 | 0.0035 | 5.6% |
실시예
4:
항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체의 바이오틴화
폴리에틸렌 글리콜에 대한 항체를 완충액(100mM 인산 칼륨 완충액, pH 8.5)에 대해 투석하였다. 용액을 10mg/ml의 단백질 농도로 조절하였다. D-바이오티노일-아미노카프로산-N-하이드록시석신이미드 에스터를 DMSO에 용해시키고, 1:5의 몰 비로 항체 용액에 첨가하였다. 60분 후, L-리신을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 150mM NaCl이 보충된 25mM 인산 칼륨 완충액, pH 7.5에 대해 투석시켜 과량의 라벨링 시약을 제거하였다.
실시예
5
인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 디곡시겐화
인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질을 디곡시겐화 완충액(100mM 인산 칼륨 완충액, pH 8.5)에 대해 투석시켰다. 그런 다음, 10mg/ml의 단백질 농도로 용액을 조절하였다. 디곡시게닌 3-O-메틸카보닐-ε-아미노카프로산-N-하이드록시석신이미드 에스터를 DMSO에 용해시키고, 1:5의 몰 비로 항체 용액에 첨가하였다. 60분 후, L-리신을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 150mM NaCl이 보충된 25mM 인산 칼륨 완충액, pH 7.5에 대해 투석시켜 과량의 라벨링 시약을 제거하였다.
SEQUENCE LISTING
<110> F. Hoffmann-La Roche AG
<120> PEGylated insulin-like-growth-factor assay
<130> 24884 WO
<140> PCT/EP2009/002319
<141> 2009-03-31
<150> EP 08006768.9
<151> 2008-04-03
<160> 3
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 70
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe
1 5 10 15
Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly
20 25 30
Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys
35 40 45
Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu
50 55 60
Lys Pro Ala Lys Ser Ala
65 70
<210> 2
<211> 67
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr
1 5 10 15
Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala
20 25 30
Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe
35 40 45
Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala
50 55 60
Lys Ser Glu
65
<210> 3
<211> 237
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Asp Glu Ala Ile His Cys Pro Pro Cys Ser Glu Glu Lys Leu Ala Arg
1 5 10 15
Cys Arg Pro Pro Val Gly Cys Glu Glu Leu Val Arg Glu Pro Gly Cys
20 25 30
Gly Cys Cys Ala Thr Cys Ala Leu Gly Leu Gly Met Pro Cys Gly Val
35 40 45
Tyr Thr Pro Arg Cys Gly Ser Gly Leu Arg Cys Tyr Pro Pro Arg Gly
50 55 60
Val Glu Lys Pro Leu His Thr Leu Met His Gly Gln Gly Val Cys Met
65 70 75 80
Glu Leu Ala Glu Ile Glu Ala Ile Gln Glu Ser Leu Gln Pro Ser Asp
85 90 95
Lys Asp Glu Gly Asp His Pro Asn Asn Ser Phe Ser Pro Cys Ser Ala
100 105 110
His Asp Arg Arg Cys Leu Gln Lys His Phe Ala Lys Ile Arg Asp Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Lys Met Lys Val Asn Gly Ala Pro Arg Glu Asp
130 135 140
Ala Arg Pro Val Pro Gln Gly Ser Cys Gln Ser Glu Leu His Arg Ala
145 150 155 160
Leu Glu Arg Leu Ala Ala Ser Gln Ser Arg Thr His Glu Asp Leu Tyr
165 170 175
Ile Ile Pro Ile Pro Asn Cys Asp Arg Asn Gly Asn Phe His Pro Lys
180 185 190
Gln Cys His Pro Ala Leu Asp Gly Gln Arg Gly Lys Cys Trp Cys Val
195 200 205
Asp Arg Lys Thr Gly Val Lys Leu Pro Gly Gly Leu Glu Pro Lys Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Cys His Gln Leu Ala Asp Ser Phe Arg Glu
225 230 235
Claims (20)
- a) 포획 항체가 모노클론성 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체이고,
b) PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질과의 복합체로서 검출되고,
c) 추적자 항체가 모노클론성 항-디곡시게닌 항체이고,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 항온처리 단계가 실온에서 12 내지 24시간동안 5.0㎍/ml 이하의 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질을 이용하여 수행됨을 특징으로 하는,
포획 항체와 추적자 항체를 포함하는 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 검출하기 위한 면역분석법. - 제 1 항에 있어서,
a) 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체가 고형 상에 컨쥬게이트되어 있고,
b) 항-디곡시게닌 항체가 검출가능한 라벨에 컨쥬게이트되어 있는 면역분석법. - 제 2 항에 있어서,
컨쥬게이트가 공유 결합을 통한 컨쥬게이트인 면역분석법. - 제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,
검출가능한 라벨이 효소, 항원, 형광 기, 화학발광 기, 전자화학발광 기 및 금속-킬레이트 복합체에서 선택되는 면역분석법. - 제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 있어서,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 이의 PEG화된 변이체인 면역분석법. - 제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서,
인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질이 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4인 면역분석법. - 제 1 항 내지 제 6 항중 어느 한 항에 있어서,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질을 18 내지 22시간동안 항온처리하는 면역분석법. - 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항에 있어서,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질의 항온처리 단계가 0.1㎍/ml 내지 5.0㎍/ml의 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질을 이용하는 면역분석법. - a) 분석될 시료를 제공하는 단계;
b) 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 상기 시료와 함께 항온처리하여 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체/PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 복합체를 형성하는 단계;
c) 실온에서 12 내지 24시간동안 단계 b)에서 형성된 복합체를 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와 항온처리하여, 단계 b)에서 형성된 복합체를 포함하는 복합체를 형성하되, 상기 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 농도가 5.0㎍/ml 이하인 단계;
d) 단계 c)에서 형성된 상기 복합체를 서양고추냉이 퍼옥시다제 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체와 항온처리하여 c)에서 형성된 복합체를 포함하는 복합체를 형성하는 단계;
e) 단계 d)에서 형성된 복합체를 ABTS와 함께 항온처리하고, 착색된 생성물의 형성을 검출함으로써 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는 단계
를 포함하는, 시료에서 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하는 방법. - 제 9 항에 있어서,
세척 단계가 단계 b), c) 및/또는 d) 이후에 수행되는 방법. - 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자가 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자-I 또는 이의 PEG화된 변이체인 방법. - 제 9 항 내지 제 11 항중 어느 한 항에 있어서,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4를 18 내지 22시간동안 항온처리시키는 방법. - 제 9 항 내지 제 12 항중 어느 한 항에 있어서,
PEG화된 인슐린 유사 성장 인자와 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 항온처리 단계가 0.1㎍/ml 내지 5.0㎍/ml의 농도의 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4를 이용하는 방법. - PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 I 또는 이의 PEG화된 변이체가 투여되는 환자의 추적 조사를 위한 제 9 항의 방법의 용도.
- a) 스트렙타비딘 코팅된 마이크로타이터 플레이트,
b) 바이오틴에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체,
c) 서양고추냉이 퍼옥시다제에 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체,
d) 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질
을 포함하는, 시료에서 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 측정하기 위한 키트. - 제 15 항에 있어서,
b) 및 c)의 항체가 모노클론 항체인 키트. - 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서,
항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체가 IgM 클래스의 항체인 키트. - 제 15 항 내지 제 17 항중 어느 한 항에 있어서,
인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질이 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4인 키트. - a) 분석될 시료를 제공하는 단계;
b) 한정된 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 함유하는 기준 시료를 제공하는 단계;
c) 고형 상에 컨쥬게이트된 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체를 각각의 시료 및 서로 다른 양의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자를 함유하는 2개 이상의 기준 시료와 함께 항온처리하여 항-(폴리에틸렌 글리콜) 항체/PEG화된 인슐린 유사 성장 인자 복합체를 형성하는 단계;
d) 단계 c)에서 형성된 상기 복합체를 각각의 시료 및 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4를 갖는 기준 시료와 항온처리하여 c)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 2 복합체를 형성하고, 여기서 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4와의 항온처리가 실온에서 12 내지 24시간 동안 수행되고, 상기 디곡시겐화된 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-4의 농도가 5㎍/ml 이하인 단계;
e) 각각의 시료 및 기준 시료중의 단계 d)에서 형성된 상기 복합체를 서양고추냉이 퍼옥시다제 컨쥬게이트된 항-디곡시게닌 항체와 함께 항온처리하여 단계 d)에서 형성된 복합체를 포함하는 제 3 복합체를 형성하는 단계;
f) 각각의 시료 및 기준 시료 중의 단계 e)에서 형성된 복합체를 ABTS와 함께 5 내지 15분동안 항온처리하고, 형성된 착색된 생성물의 양을 측정하는 단계;
g) 기준 시료에서 형성된 착색된 생성물의 양에 근거하여 계산된 보정 곡선을 이용하여 시료중의 PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 양을 정량적으로 측정하는 단계
를 포함하는, PEG화된 인슐린 유사 성장 인자의 양을 정량적으로 측정하는 방법. - 제 19 항에 있어서,
단계 d)에서 항온처리가 18 내지 22시간 동안 수행되는 방법.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP08006768 | 2008-04-03 | ||
| EP08006768.9 | 2008-04-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20100119899A true KR20100119899A (ko) | 2010-11-11 |
Family
ID=39717834
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020107022026A KR20100119899A (ko) | 2008-04-03 | 2009-03-31 | 폴리에틸렌글리콜화된 인슐린 유사 성장 인자 분석법 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20110045510A1 (ko) |
| EP (1) | EP2274624B1 (ko) |
| JP (1) | JP5031923B2 (ko) |
| KR (1) | KR20100119899A (ko) |
| CN (1) | CN101965516A (ko) |
| AT (1) | ATE533060T1 (ko) |
| AU (1) | AU2009231186A1 (ko) |
| BR (1) | BRPI0911266A2 (ko) |
| CA (1) | CA2720478A1 (ko) |
| ES (1) | ES2375606T3 (ko) |
| IL (1) | IL207437A0 (ko) |
| MX (1) | MX2010010313A (ko) |
| WO (1) | WO2009121551A1 (ko) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL3517956T3 (pl) * | 2011-05-18 | 2021-12-20 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Testy aktywności zależne od modyfikacji |
| EP2904393B1 (en) * | 2012-10-03 | 2018-11-28 | Gyros Patent Ab | Method and kit for analyte determination at acidic conditions |
| CN104697829B (zh) * | 2015-02-10 | 2018-05-04 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 用于igf-ⅰ化学发光免疫检测的酸性处理剂、样本预处理方法、试剂盒及检测方法 |
| CN108699127A (zh) * | 2015-12-31 | 2018-10-23 | 西门子医疗保健诊断公司 | 非重组人胰岛素-样生长因子结合蛋白浓缩物 |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4904584A (en) * | 1987-12-23 | 1990-02-27 | Genetics Institute, Inc. | Site-specific homogeneous modification of polypeptides |
| US6235488B1 (en) * | 1988-09-29 | 2001-05-22 | Agilent Technologies, Inc. | Surface preparation for chemical-specific binding |
| US5158875A (en) * | 1989-08-25 | 1992-10-27 | Amgen Inc. | Production of biologically active insulin-like growth factor i from high expression host cell systems |
| NZ236819A (en) * | 1990-02-03 | 1993-07-27 | Max Planck Gesellschaft | Enzymatic cleavage of fusion proteins; fusion proteins; recombinant dna and pharmaceutical compositions |
| US5681814A (en) * | 1990-06-07 | 1997-10-28 | Genentech, Inc. | Formulated IGF-I Composition |
| ES2101865T3 (es) * | 1991-08-01 | 1997-07-16 | Genentech Inc | Igf-1 para mejorar el estado neural. |
| US5861373A (en) * | 1991-08-01 | 1999-01-19 | Genentech, Inc | IGF-1 to improve the neural condition |
| US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| US5672662A (en) * | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| CN1246891A (zh) * | 1997-02-06 | 2000-03-08 | 诺沃挪第克公司 | 添加和/或除去了连接基团的多肽－聚合物偶联物 |
| US20030204864A1 (en) * | 2001-02-28 | 2003-10-30 | Henry Daniell | Pharmaceutical proteins, human therapeutics, human serum albumin, insulin, native cholera toxic b submitted on transgenic plastids |
| US6767892B1 (en) * | 1997-11-07 | 2004-07-27 | Chrion Corporation | Compositions providing for increased IGF-I solubility |
| US7067485B2 (en) * | 1997-11-07 | 2006-06-27 | Chiron Corporation | IGF-I composition and its use |
| US6248546B1 (en) * | 1998-03-09 | 2001-06-19 | Diagnostic Systems Laboratories, Inc. | Assay of IGFBP complex |
| PT1141015E (pt) * | 1999-01-06 | 2009-10-13 | Genentech Inc | Variantes mutantes do factor de crescimento do tipo insulina (igf)i |
| JP3971108B2 (ja) * | 1999-01-06 | 2007-09-05 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | インシュリン様成長因子（ｉｇｆ）ｉ突然変異体 |
| IL145597A0 (en) * | 1999-04-08 | 2002-06-30 | Genentech Inc | Composition based on oppositely-charged polypeptides |
| US6596849B1 (en) * | 1999-05-28 | 2003-07-22 | Academia Sinica | Monoclonal-antibody for analysis and clearance of polyethylene glycol and polyethylene glycol-modified molecules |
| US7431921B2 (en) * | 2000-04-14 | 2008-10-07 | Maxygen Aps | Interferon beta-like molecules |
| US20040014652A1 (en) * | 2000-06-01 | 2004-01-22 | Andre Trouet | Tumor activated prodrug compounds and methods of making and using the same |
| PL209550B1 (pl) * | 2000-12-07 | 2011-09-30 | Lilly Co Eli | Heterogenne białko fuzyjne, kompozycja farmaceutyczna do leczenia pacjentów z cukrzycą insulinoniezależną i kompozycja do leczenia pacjentów z otyłością |
| AU2002259281A1 (en) * | 2001-05-21 | 2002-12-03 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Antibodies specific for poly(ethylene glycol) |
| PL396711A1 (pl) * | 2002-12-26 | 2011-12-19 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Koniugaty polimerów z cytokinami, chemokinami, czynnikami wzrostu, hormonami polipeptydowymi i ich antagonistami, kompozycja farmaceutyczna i sposób zapobiegania, diagnozowania lub leczenia |
| CN101983074A (zh) * | 2008-04-03 | 2011-03-02 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | Peg化的igf-i变体在神经肌肉病治疗中的应用 |
-
2009
- 2009-03-31 US US12/934,678 patent/US20110045510A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-31 BR BRPI0911266A patent/BRPI0911266A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-03-31 CN CN200980108314.0A patent/CN101965516A/zh active Pending
- 2009-03-31 WO PCT/EP2009/002319 patent/WO2009121551A1/en active Application Filing
- 2009-03-31 ES ES09726947T patent/ES2375606T3/es active Active
- 2009-03-31 AT AT09726947T patent/ATE533060T1/de active
- 2009-03-31 JP JP2011502278A patent/JP5031923B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-31 KR KR1020107022026A patent/KR20100119899A/ko active IP Right Grant
- 2009-03-31 MX MX2010010313A patent/MX2010010313A/es active IP Right Grant
- 2009-03-31 AU AU2009231186A patent/AU2009231186A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-31 EP EP09726947A patent/EP2274624B1/en not_active Not-in-force
- 2009-03-31 CA CA2720478A patent/CA2720478A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-08-05 IL IL207437A patent/IL207437A0/en unknown
-
2012
- 2012-09-20 US US13/623,130 patent/US20130089875A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX2010010313A (es) | 2010-11-05 |
| US20130089875A1 (en) | 2013-04-11 |
| EP2274624A1 (en) | 2011-01-19 |
| AU2009231186A1 (en) | 2009-10-08 |
| JP2011516843A (ja) | 2011-05-26 |
| BRPI0911266A2 (pt) | 2015-09-29 |
| WO2009121551A1 (en) | 2009-10-08 |
| JP5031923B2 (ja) | 2012-09-26 |
| CN101965516A (zh) | 2011-02-02 |
| ATE533060T1 (de) | 2011-11-15 |
| EP2274624B1 (en) | 2011-11-09 |
| CA2720478A1 (en) | 2009-10-08 |
| US20110045510A1 (en) | 2011-02-24 |
| ES2375606T3 (es) | 2012-03-02 |
| IL207437A0 (en) | 2010-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230111088A1 (en) | Anti-drug antibody assay | |
| JP2021504711A (ja) | 標的による干渉が抑制された抗薬物抗体アッセイ | |
| KR20100077056A (ko) | 식별 검정법 | |
| RU2636822C2 (ru) | Способ обнаружения мультиспецифического связывающего агента | |
| US10458981B2 (en) | Three-step acid dissociation enzyme linked immunosorbent (TADELIS) assay | |
| EP2274624B1 (en) | Pegylated insulin-like-growth-factor assay | |
| JP6272788B2 (ja) | 循環中の免疫複合体を特徴付けるためのマルチプレックス式クロマトグラフィー−イムノアッセイ法 | |
| Liu et al. | Enhanced optical immuosensor based on surface plasmon resonance for determination of transferrin | |
| CN110133271A (zh) | 一种将抗体或其抗原结合片段共价结合至颗粒表面的方法 | |
| Meints | Leptin Delivers β-Cell-Derived C-Peptide to Erythrocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| NORF | Unpaid initial registration fee |