KR20100074183A

KR20100074183A - 타우 단백질 키나아제 억제제로서 3-메틸-2-((2ｓ)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴리노)-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4(3ｈ)-온

Info

Publication number: KR20100074183A
Application number: KR1020107008068A
Authority: KR
Inventors: 다이키 사카이; 가즈토시 와타나베
Original assignee: 사노피-아벤티스
Priority date: 2007-09-14
Filing date: 2008-09-12
Publication date: 2010-07-01
Also published as: CN101842371A; US8288383B2; EP2197877A1; CA2698818A1; WO2009035159A8; BRPI0816708A2; AR068438A1; EA201070366A1; MX2010002766A; US20110003988A1; TW200927133A; ZA201002214B; EP2197877B1; JP2010538970A; WO2009035159A1; AU2008297814A1; JP5449147B2

Abstract

타우 단백질 키나아제 1의 비정상적인 활성에 의해 유발되는 질병, 예를 들어 신경퇴행성 질병(예를 들어 알쯔하이머 병)의 예방 및/또는 치료적 처치를 위해 사용되는 하기 화학식 I로 나타내는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
화학식 I

Description

타우 단백질 키나아제 억제제로서 3-메틸-2-((2Ｓ)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴리노)-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4(3Ｈ)-온{3-METHYL-2-((2S)-2-(4-(3-METHYL-1,2,4-OXADIAZOL-5-YL)PHENYL)MORPHOLINO)-6-(PYRIMIDIN-4-YL)PYRIMIDIN-4(3H)-ONE AS TAU PROTEIN KINASE INHIBITOR}

본 발명은 타우 단백질 키나아제 1(TPK1, 또한 GSK3베타, 글리코젠 신타제 키나아제 3 베타라 칭함)의 비정상적인 활성에 의해 주로 유발되는 질병, 예를 들어 신경퇴행성 질병(예를 들어 알쯔하이머 병)의 예방 및/또는 치료적 처치(therapeutic treatment)를 위한 약제의 활성 성분으로서 유용한 화합물에 관한 것이다.

알쯔하이머 병은 진행성 노인성 치매이며, 신경 세포의 퇴화 및 신경 세포수의 감소로 인해 현저한 뇌피질위축(cerebral cortical atrophy)이 관찰된다. 병리학적으로는 다수의 노인성 반과 신경섬유다발이 뇌에서 관찰된다. 노령 인구의 증가에 따라 환자 수가 증가하여 왔으며, 상기 질병은 심각한 사회 문제를 일으킨다. 다양한 이론들이 제안되었지만, 상기 질병의 원인은 아직 밝혀지지 않았다. 상기 원인의 조기 해결이 요구되어 왔다.

알쯔하이머 병의 2 가지 특징적인 병리학적 변화의 출현 정도는 지적인 기능장애와 매우 상관이 있는 것으로 알려졌다. 따라서, 1980년대 초부터 상기 2 가지 병리학적 변화의 성분들에 대한 분자 수준 연구를 통해 상기 질병의 원인을 밝히고자 많은 연구들이 수행되어 왔다. 노인성 반은 세포 외에 축적되며, β 아밀로이드(amyloid) 단백질이 그의 주성분으로 밝혀졌다(이후부터 본 명세서에서 "Aβ"라 약기함: Biochem. Biophys. Res. Commun., 120, 885(1984); EMBO J., 4, 2757(1985); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 4245(1985)). 다른 병리학적 변화, 즉 이중 나선 섬유(paired helical filament)(이후부터 본 명세서에서 "PHF"라 약기함)라 지칭되는 이중-나선 섬유성 물질인 상기 신경섬유다발은 세포 내에 축적되며, 뇌에 특이적인 미세소관-관련 단백질의 일종인 타우 단백질이 그의 주성분으로 밝혀졌다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 4506(1988); Neuron, 1, 827(1988)).

더욱 또한, 유전자 연구를 바탕으로, 프리세닐린(presenilins) 1 및 2가 가족성 알쯔하이머 병의 원인 유전자로서 밝혀졌으며(Nature, 375, 754(1995); Science, 269, 973(1995); Nature. 376, 775(1995)), 프리세닐린 1 및 2의 돌연변이체의 존재는 Aβ의 분비를 촉진하는 것으로 밝혀졌다(Neuron, 17, 1005(1996); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 2025(1997)). 이러한 결과로부터, 알쯔하이머 병에서, Aβ는 PHF의 형성과 맞물려 신경 세포의 사망을 유발하는 몇몇 이유로 인해 비정상적으로 축적되고 응집된다. 또한 글루탐산의 세포 외 유출 및 상기 유출에 반응하는 글루타메이트 수용체의 활성화는 허혈성 뇌혈관 질환(ischemic cerebrovascular accidents)에 의해 유발된 신경 세포사의 초기 과정에 중요한 인자일 수도 있음이 예상된다.

글루타메이트 수용체 중 하나인 AMPA 수용체를 자극하는 카인산 처리가 Aβ의 전구체로서 상기 아밀로이드 전구체 단백질(이후부터 본 명세서에서 "APP"라 약기함)의 mRNA를 증가시키고(Society for Neuroscience Abstracts, 17, 1445(1991)), 또한 APP의 대사를 촉진함(The Journal of Neuroscience, 10, 2400(1990))이 보고되었다. 따라서, Aβ의 축적이 허혈성 뇌혈관 장애로 인한 세포사에 관련 있음이 강하게 시사되었다. Aβ의 비정상적인 축적 및 응집이 관찰되는 다른 질병으로는 예를 들어 다운 증후군, 단발성(solitary) 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로 인한 뇌출혈, 루이 소체 병(Lewy body disease) 등이 있다. 더욱 또한, PHF 축적으로 인해 신경섬유다발을 보이는 질병으로서, 예를 들어 진행성 핵상 마비(progressive supranuclear palsy), 아급성 경화성 범 뇌염성 파킨슨증(subacute sclerosing panencephalitic parkinsonism), 뇌염후 파킨슨증(postencephalitic parkinsonism), 투사형 뇌염(pugilistic encephalitis), 괌 파킨슨-치매 복합증(Guam parkinsonism-dementia complex), 루이 소체 병 등이 있다.

상기 타우 단백질은 일반적으로 SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동에서 48 내지 65 kDa의 분자량에서 여러 가지 밴드를 형성하는 관련 단백질들의 그룹으로 구성되며, 상기 단백질은 미세소관의 형성을 촉진한다. 알쯔하이머 병을 앓고 있는 뇌에서 PHF에 얽힌 타우 단백질은 통상적인 타우 단백질에 비해 비정상적으로 인산화됨이 입증되었다(J. Biochem., 99, 1807(1986); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 4913(1986)). 상기 비정상적인 인산화를 촉진하는 효소가 단리되었다. 상기 단백질을 타우 단백질 키나아제 1(이후부터 본 명세서에서 "TPK1"이라 약기함)이라 명명했으며, 그의 물리화학적 성질들이 밝혀졌다(J. Biol. Chem., 267, 10897(1992)). 더욱이, 래트(rat) TPK1의 cDNA가 TPK1의 부분 아미노산 서열을 기본으로 하는 래트 대뇌피질 cDNA 라이브러리로부터 클로닝되었으며, 그의 뉴클레오타이드 서열이 측정되었고 아미노산 서열이 추론되었다. 그 결과, 상기 래트 TPK1의 1차 구조는 래트 GSK-3 β(글리코젠 신타제 키나아제 3β, FEBS Lett., 325, 167(1993))로서 공지된 효소의 구조에 상응하는 것으로 밝혀졌다.

노인성 반의 주성분인 Aβ는 신경독성인 것으로 보고되었다(Science, 250, 279(1990)). Aβ가 세포사를 일으키는 이유에 대한 다양한 이론들이 제안되었으나, 어떠한 믿을만한 이론도 아직 확립되지 못했다. 타카시마(Takashima) 등은 상기 세포사가 태아 래트 해마 1차 배양 시스템의 Aβ 처리에 의해 유발됨을 관찰하였으며, 이어서 상기 TPK1 활성이 Aβ 처리에 의해 증가되고 상기 Aβ에 의한 세포사가 TPK1의 안티센스에 의해 억제됨을 발견하였다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 7789(1993); EP616032).

상기에 비추어, TPK1 활성을 억제하는 화합물이 어쩌면 Aβ의 신경독성 및 PHF의 형성을 억제하고 알쯔하이머 병에서 신경 세포사를 억제하여, 상기 병의 진행을 멈추거나 지연할 수도 있다. 상기 화합물은 또한 어쩌면 Aβ의 세포독성을 억제함으로써 허혈성 뇌혈관 장애, 다운 증후군, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 루이 소체 병으로 인한 뇌출혈 등의 치료적 처치를 위한 약제로서 사용될지도 모르겠다. 더욱 또한, 상기 화합물은 어쩌면 신경퇴행성 질병, 예를 들어 진행성 핵상 마비, 아급성 경화성 범 뇌염성 파킨슨증, 뇌염후 파킨슨증, 투사형 뇌염, 괌 파킨슨-치매 복합체, 루이 소체 병, 픽병(Pick's disease), 피질기저 퇴화(corticobasal degeneration) 및 이마관자엽 치매(frontotemporal dementia), 혈관성 치매(vascular dementia), 외상성 손상, 뇌 및 척수 외상, 말초 신경병증(peripheral neuropathies), 망막병증 및 녹내장, 뿐만 아니라 비 인슐린 의존성 당뇨병, 비만증, 조울증, 정신분열증, 탈모, 유방암, 비 소세포 폐암(non-small cell lung carcinoma), 갑상선암, T 또는 B-세포 백혈병, 및 여러 가지 바이러스 유발 종양(virus-induced tumors)과 같은 다른 질병들의 치료적 처치를 위한 약제로서 사용될지도 모르겠다.

인간 TPK1의 억제제는 또한 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum)에서 발견되는 상기 효소의 오르소로그(ortholog)인 pfGSK3을 억제할 수 있으며, 그 결과 상기 억제제를 말라리아의 치료에 사용할 수 있었다(Biochimica et Biophysica Acta 1697, 181-196, 2004).

최근에, 인간 유전학 및 동물 연구 모두가 골 질량 증가의 주요 조절인자로서 Wnt/LPR5 경로의 역할을 지적하였다. TPK1의 억제는 정규(canonical) Wnt 신호전달의 결과적인 활성화를 이끈다. 불완전한 Wnt 신호전달은 감소된 골 질량의 장애와 관련 있기 때문에, TPK1 억제제를 또한 감소된 골 질량의 장애, 골-관련된 병리상태, 골다공증의 치료에 사용할 수 있다.

최근의 데이터에 따르면, TPK1 억제제를 심상성 천포창(Pemphigus vulgaris)의 치료 또는 예방에 사용할 수도 있다.

최근의 연구는 TPK1 억제제 치료가 호중구(neutrophil) 및 거핵세포(megakaryocyte) 회복을 개선함을 보이고 있다. 따라서, TPK1 억제제는 암 화학요법에 의해 유발된 호중성 백혈구 감소증(neutropenia)의 치료에 유용할 것이다.

일부 6-피리미디닐-피리미드-2-온 유도체들은 이미 TPK1 억제제로서 활성이 있는 것으로 공지되어 있으나(WO03/027080), 그럼에도 불구하고, 놀랍게도 화학식 I의 화합물이 시토크롬 P450 2D6 : CYP 2D6의 억제 없이 보다 양호한 생체 내 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 이는 상기 화합물의 개발성(developability)에 현저하게 기여할 것이다.

더욱이, 약제로서 사용된 화합물들을 다른 약물과의 병용(combined) 투여를 고려하여 연구하는 것은 일반적으로 필수적이다. 이는 최근의 약물 치료의 다양성 및 사회 노령화에 따라 증가하고 있다. 약물-약물 상호작용(drug-drug interactions)을 피하기 위해서, 예를 들어 투여되는 화합물들 중 하나가 시토크롬 P450 효소, 예를 들어 시토크롬 P450 2D6을 억제하지 않기를 바란다. 이는 상기 약물 병용과 관련된 예기치못한 부작용들을 유도할 수 있다.

WO03/0272080의 공지된 화합물들로부터, 시험관 내 활성들이 필적할만하였고 따라서 상기 모든 화합물들이 유사한 프로파일을 가질 수 있을 것으로 기대되었다. 놀랍게도, 일반적으로 포함되지만 WO03/027080에는 예시되지 않은 화합물들 중 하나가 다른 개시된 화합물들과 현저하게 상이한 것으로 밝혀졌다.

WO, 03/027080

본 발명의 목적은 시토크롬 2D6의 억제 없이 생체 내 활성이 개선된, 알쯔하이머 병과 같은 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위한 약제의 활성 성분으로서 유용한 화합물을 제공하는 것이다. 보다 구체적으로, 상기 목적은 TPK1 활성을 억제하여 Aβ의 신경독성 및 PHF의 형성을 억제하고 신경 세포사를 억제함으로써, CYP 2D6의 억제 없이 생체 내 활성이 개선된, 알쯔하이머 병과 같은 신경퇴행성 질병의 근본적인 예방 및/또는 치료를 가능하게 하는 약제의 활성 성분으로서 유용한 신규의 화합물을 제공하는 것이다.

놀랍게도, 하기 화학식 I로 나타내는 신규의 화합물이 목적하는 활성을 가지며 상기 언급한 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위한 약제의 활성 성분으로서 유용한 것으로 밝혀졌다. 본 발명은 이러한 발견을 토대로 성취되었다.

따라서 본 발명은 다음을 제공한다;

1. 하기 화학식 I로 나타내는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

화학식 I

2. 활성 성분으로서 상기 1 에 따른 화학식 I로 나타내는 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 물질을 포함하는 약제.

3. 활성 성분으로서 상기 1 에 따른 화학식 I로 나타내는 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 물질을 포함하는 타우 단백질 키나아제 1 억제제.

4. 상기 2 에 있어서, 타우 단백질 키나아제 1 과잉활성에 의해 유발되는 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위해 사용되는 약제.

5. 상기 2 에 있어서, 신경 퇴행성 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위해 사용되는 약제.

6. 상기 5 에 있어서, 상기 질병이 알쯔하이머 병, 허혈성 뇌혈관 질환, 다운 증후군, 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로 인한 뇌출혈, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화성 범 뇌염성 파킨슨증, 뇌염후 파킨슨증, 투사형 뇌염, 괌 파킨슨-치매 복합증, 루이 소체 병, 픽병, 피질기저 퇴화, 이마관자엽 치매, 혈관성 치매, 외상성 손상, 뇌 및 척수 외상, 말초 신경병증, 망막병증 및 녹내장으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 약제.

7. 상기 2 에 있어서, 비 인슐린 의존성 당뇨병, 비만증, 조울증, 정신분열증, 탈모, 유방암, 비 소세포 폐암, 갑상선암, T 또는 B-세포 백혈병, 골다공증, 말라리아, 암 화학요법에 의해 유발된 호중성 백혈구 감소증 및 바이러스 유발 종양으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위해 사용되는 약제.

선행 연구들은 GSK3 활성이 기억 강화의 전기생리학적 상관현상인 장기 상승작용(Long Term Potentiation)을 감소시킴을 입증하였으며, 이는 상기 효소의 억제제가 사전인지(procognitive) 활성을 가질 수도 있음을 시사한다. 상기 화합물의 사전인지 효과를 알쯔하이머 병, 파킨슨병, 연령 관련된 기억 장애, 경증 인지 장애(mild cognitive impairment), 뇌 외상, 정신분열증, 및 기억 결손이 관찰되는 다른 증상들의 상기와 같은 기억 결손 특성(characteristic)의 치료에 적용할 수 있다.

본 발명은 알쯔하이머 병, 파킨슨병, 연령 관련된 기억 장애, 경증 인지 장애, 뇌 외상, 정신분열증, 및 기억 결손이 관찰되는 다른 증상들의 인지 및 기억 결손 특성을 특징으로 하는 질병의 치료적 처치를 위한 화학식 I 에 관한 것이다.

본 발명의 화합물은 TPK1 억제 활성을 가지며 TPK1의 비정상적인 진행에 의해 유발된 질병, 예를 들어 신경 퇴행성 질병(예를 들어 알쯔하이머 병) 및 상기 언급한 질병들의 예방 및/또는 치료적 처치를 위한 약제의 활성 성분으로서 유용하다.

달리 나타내지 않는 한, 하기의 정의들을 본 발명의 개시에 사용되는 다양한 용어들의 의미 및 범위를 예시하고 한정하기 위해 나타낸다.

상기 언급한 화학식 I로 나타내는 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화 수소산 등과 염 및 유기산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 타타르산, 푸마르산, 말레산, 말산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 벤조산 등과의 염을 포함할 수 있다.

상기 언급한 화학식 I로 나타내는 화합물 이외에, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 그의 용매화물 및 수화물도 또한 본 발명의 범위 내에 있다.

본 발명의 화합물은 TPK1에 대해 생체 내에서 억제 활성을 갖는다. 따라서, 상기 화합물은 알쯔하이머 병과 같은 신경퇴행성 질병의 환자에게서 TPK1 활성을 억제하고, 이에 의해 Aβ의 신경독성 및 PHF의 형성을 억제하며, 신경 세포사를 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 알쯔하이머 병의 예방 및/또는 치료적 처치를 근본적으로 가능하게 하는 약제의 활성 성분으로서 유용하다. 또한, 본 발명의 화합물은 허혈성 뇌혈관 질환, 다운 증후군, 단발성 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로 인한 뇌출혈, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화성 범 뇌염성 파킨슨증, 뇌염후 파킨슨증, 투사형 뇌염, 괌 파킨슨-치매 복합체, 루이 소체 병, 픽병, 피질기저 퇴화, 이마관자엽 치매, 혈관성 치매, 외상성 손상, 뇌 및 척수 외상, 말초 신경병증, 망막병증 및 녹내장, 비 인슐린 의존성 당뇨병, 비만증, 조울증, 정신분열증, 탈모, 유방암, 비 소세포 폐암, 갑상선암, T 또는 B-세포 백혈병, 및 여러 가지 바이러스 유발 종양, 골다공증, 말라리아, 암 화학요법에 의해 유발된 호중성 백혈구 감소증, 및 알쯔하이머 병, 파킨슨병, 연령 관련된 기억 장애, 경증 인지 장애, 뇌 외상, 정신분열증, 및 기억 결손이 관찰되는 다른 증상들의 인지 및 기억 결손 특성을 특징으로 하는 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위한 약제의 활성 성분으로서 또한 유용하다.

본 발명의 화합물은 또한 CYP2D6 에 대해 낮은 억제 활성을 가지며, 이는 병용되는 약제의 대사에 덜 영향을 미친다. 따라서, 상기 약제를 다른 약제들과 병용하는 경우에조차도 약제-약제 상호작용으로부터 부작용이 거의 발생하지 않는다.

더욱이, 본 발명의 화합물은 현저한 독성을 나타내지 않으며 따라서 약제에 사용하기에 적합하다.

본 발명 약제의 활성 성분으로서, 상기 언급한 화학식 I로 나타내는 물질 및 그의 약물학적으로 허용 가능한 염, 및 그의 용매화물 및 그의 수화물을 사용할 수 있다. 상기 물질은 그 자체로서 본 발명의 약제로서 투여될 수 있지만, 상기 약제를 활성 성분으로서 상기 언급한 물질과 약학적 첨가제들 중 하나 이상을 포함하는 약학 조성물의 형태로 투여하는 것이 바람직하다. 본 발명 약제의 활성 성분으로서, 상기 언급한 물질 중 2 개 이상을 함께 사용할 수 있다.

상기 약학 조성물의 유형은 특별히 제한되지 않으며, 상기 조성물을 경구 또는 비 경구 투여를 위한 임의의 제형으로서 제공할 수 있다. 예를 들어, 상기 약학 조성물을 예를 들어 경구 투여용 약학 조성물의 형태로, 예를 들어 과립, 미세 과립, 분말, 경질 캡슐, 연질 캡슐, 시럽, 유화액, 현탁액, 용액 등으로, 또는 비 경구 투여용 약학 조성물의 형태로, 예를 들어 정맥 내, 근육 내, 또는 피하 투여용 주사제, 점적 주입제, 경피 제제(transdermal preparations), 점막 통과 제제(transmucosal preparations), 코 점적제(nasal drops), 흡입제, 좌약 등의 형태로 제형화할 수 있다.

본 발명 약제의 투여 용량 및 투여 회수는 특별히 제한되지 않으며, 예방 및/또는 치료적 처치의 목적, 질병의 유형, 환자의 체중 또는 연령, 질병의 중증도 등과 같은 조건들에 따라 적합하게 선택될 수 있다. 일반적으로, 성인에 대한 1일 경구 투여 용량은 0.01 내지 1,000 ㎎(활성 성분의 중량)일 수 있으며, 상기 용량을 하루에 1 회 또는 하루에 수 회 분할 용량으로서, 또는 수일에 1 회 투여할 수 있다. 상기 약제를 주사제로서 사용하는 경우, 투여를 바람직하게는 성인에게 0.001 내지 3000 ㎎(활성 성분의 중량)의 1일 용량으로 연속적으로 또는 간헐적으로 수행할 수 있다.

실시예

본 발명을 실시예를 참고로 보다 구체적으로 설명할 것이다. 그러나, 본 발명의 범위는 하기의 실시예들로 제한되지 않는다.

본 발명 화합물의 제조

실시예 1: 3-메틸-2-((2S)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴리노)-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4(3H)-온

본 발명의 화합물을 염기의 존재 하에서 2-클로로-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(중간체 1)과 상응하는 아민(중간체 19)과의 축합에 의해 제조한다.

본 발명 화합물의 일반적인 합성 반응식은 하기와 같다.

[반응식 1]

중간체 1의 합성 반응식

[반응식 2]

본 발명 화합물의 합성 반응식

단계 1-1: 에틸 오로테이트(중간체 3)

오로트산(orotic acid) 모노하이드레이트(중간체 2, 53.19 g, 0.306 밀리몰)를 다이메틸포름아미드(85 ㎖) 중의 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운덱-7-엔(46.51 g, 0.306 밀리몰)의 용액에 가하였다. 상기 용액을 5 분간 교반한 후에, 에틸 아이오다이드(ethyl iodide)(57.14 g, 0.366 밀리몰)를 상기 용액에 가하고 상기 혼합물을 60 ℃에서 5 시간 동안 가열하였다. 물(1000 ㎖)을 상기 혼합물에 가하고, 생성 침전물을 여과에 의해 수거하고, 물로 세척하고, 건조시켜 에틸 오로테이트(중간체 3, 49.25 g, 88%)를 제공하였다.

융점: 205.5 ℃

단계 1-2: 에틸 2,6-다이클로로피리미딘-4-카복실레이트(중간체 4)

N,N-다이에틸아닐린(60 ㎖, 0.377 밀리몰)을 에틸 오로테이트(중간체 3, 97.70 g, 0.531 밀리몰) 및 옥시염화 인(120 ㎖, 1.31 몰)의 혼합물에 가하고 상기 혼합물을 70 분간 환류(reflux)시켰다. 상기 용액을 빙 수에 붓고, 생성 고체를 여과에 의해 수거하고 물로 세척하였다. 상기 고체를 에틸 아세테이트에 용해시키고, 상기 용액을 실리카젤을 통해 여과하였다. 상기 여액을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 수득된 잔사를 짧은 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액(eluent); 헥산/에틸 아세테이트 = 2/1)에 의해 정제시켜 에틸 2,6-다이클로로피리미딘-4-카복실레이트(중간체 4, 99.94 g, 85%)를 제공하였다.

융점: 31.6 ℃

단계 1-3: 에틸 피리미딘-4-카복실레이트(중간체 5)

트라이에틸아민(48.03 g, 0.475 밀리몰)을 테트라하이드로퓨란(700 ㎖) 중의 에틸 2,6-다이클로로피리미딘-4-카복실레이트(중간체 4, 38.60 g, 0.175 밀리몰)의 용액에 가하였다. 상기 용액에 팔라듐-탄소(5%)를 가하고, 이를 수소 분위기 하에서 6 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템에서 고체를 여과에 의해 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 수득된 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 에틸 피리미딘-4-카복실레이트(중간체 5, 23.06 g, 87%)를 제공하였다.

융점: 36.8 ℃

단계 1-4: 에틸 3-옥소-3-(피리미딘-4-일)프로피오네이트(중간체 6)

다이에틸 에테르(15 ㎖) 중의 에탄올(16.18 g, 0.351 몰)의 용액을 다이에틸 에테르(100 ㎖) 중의 수소화 나트륨 용액(13.71 g, 0.343 몰, 파라핀 중의 60%, 파라핀을 헥산으로 세척하여 제거하였다)에 가하였다. 상기 혼합물을 30 분간 교반한 후에, 용매를 감압 하에서 증발시키고, 톨루엔(100 ㎖)을 상기 잔사에 가하였다. 상기 용액에 톨루엔(100 ㎖) 중의 에틸 피리미딘-4-카복실레이트(중간체 5, 30.86 g, 0.203 몰) 및 에틸 아세테이트(30.48 g, 0.346 몰)의 용액을 가하고, 상기 혼합물을 80 ℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물에 염산을 가하고 이어서 중탄산 나트륨을 가하여 pH 4로 조절하였다. 상기 용액이 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배되었다(partitioned). 유기층을 식염수로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시켜 에틸 3-옥소-3-(피리미딘-4-일)프로피오네이트(중간체 6, 36.10 g, 92%)를 제공하였다.

융점: 52.3 ℃

단계 1-5: 2-머캅토-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(중간체 7)

에탄올(150 ㎖) 중의 에틸 3-옥소-3-(피리미딘-4-일)프로피오네이트(중간체 6, 36.10 g, 0.186 몰), N-메틸티오유레아(25.40 g, 0.282 몰) 및 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운덱-7-엔(29.11 g, 0.191 몰)의 용액을 21 시간 동안 환류시켰다. 절반 양의 에탄올을 감압 하에서 증발시키고 염산을 가하였다. 생성되는 침전물을 여과에 의해 수거하고, 물로 세척하고 건조시켰다. 상기 침전물을 고온 에틸 아세테이트(1000 ㎖) 중에서 교반하고, 침전물을 여과에 의해 수거하고 건조시켜 2-머캅토-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(중간체 7, 33.91 g, 83%)을 제공하였다.

융점: 228.0 ℃(분해)

단계 1-6: 2-클로로-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(중간체 1)

다이메틸포름아미드(30 ㎖) 및 1,2-다이클로로에탄(30 ㎖)의 혼합된 용매 중의 2-머캅토-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(중간체 7, 8.8 g, 40 밀리몰)의 현탁액을 옥시염화 인(11.2 ㎖, 120 밀리몰)에 가하고, 상기 혼합물을 65 ℃에서 50 분간 교반하였다. 상기 용액을 빙-냉(ice-cooled) 다이클로로메탄(300 ㎖)에 붓고, 물을 상기 용액에 가하고, 상기 혼합물을 5 분간 격렬히 교반하였다. 탄산 나트륨 수용액(25.4 g, 240 밀리몰, 수(100 ㎖) 중)을 가하고 pH를 포화된 탄산 수소 나트륨 수용액으로 8로 조절하였다. 차아염소산 나트륨 수용액(수중 5%, 120 ㎖)을 가하였다. 셀라이트로 여과한 후에, 유기층을 다이클로로메탄으로 2 회 추출하고, 포화된 중탄산 나트륨 수용액으로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시키고, 수득된 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액; 에틸 아세테이트/헥산 = 1/1)에 의해 정제시키고, 다이에틸 에테르로 세척하여 담황색(pale-yellow) 고체(2.2 g, 62%, 순도 98.7%)로서 2-클로로-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(중간체 1)을 제공하였다.

융점: 168.5 ℃(분해)

단계 1-7: 2-브로모-(1S)-1-(4-브로모페닐)에탄올(중간체 9)

(S)-CBS(25 ㎖, (S)-2-메틸-CBS-옥사자보롤리딘, 알드리치(Aldrich)에 의해 제조됨, 톨루엔 중의 1.0M 용액)를 0 ℃로 냉각시키고, 보란-테트라하이드로퓨란 착체(185 ㎖, 185 밀리몰, 테트라하이드로퓨란 중 1.0M 용액)를 가하였다. 플라스크를 빙-염화 나트륨 욕(bath)에 의해 냉각시킨 후에, 다이클로로메탄(300 ㎖) 중의 4-브로모펜아실 브로마이드(중간체 8, 50.28 g, 181 밀리몰)의 용액을, 온도를 -5℃ 내지 0 ℃에서 유지시키면서 1 시간에 걸쳐 적가하였다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 50 분간 교반한 후에, 메탄올(12 ㎖)을 조금씩 나누어 가하였다. 이어서, 0.5M 염산(300 ㎖)을 적가하고 상기 혼합물을 실온에서 40 분간 교반하였다. 침전물을 여과하고 여액은 다이클로로메탄과 물 사이에서 분배되었다. 유기층을 분리시키고 수성층을 염화 메틸렌으로 추출하였다. 유기층들을 합하고, 0.5M 염산 및 식염수로 2 회 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시켜 담갈색(pale-brown) 오일로서 2-브로모-1-(1S)-(4-브로모페닐)에탄올(중간체 9)을 제공하였다. 상기 조 생성물(crude product)을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

단계 1-8: (2S)-2-(4-브로모페닐)옥시란(중간체 10)

상기 수득된 (2S)-2-브로모-1-(4-브로모페닐)에탄올(중간체 9)을 에틸 에테르(300 ㎖)에 용해시키고, 상기 용액을 실온에서 2-층 시스템 중의 수성 수산화 나트륨(14.47 g, 물 300 ㎖ 중의 362 밀리몰)과 함께 1.5 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물은 다이에틸 에테르와 물 사이에서 분배되고, 유기층을 포화된 식염수로 세척하고 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시켜 담갈색 오일로서 (2S)-2-(4-브로모페닐)옥시란(중간체 10)을 제공하였다. 상기 조 생성물을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

단계 1-9: (1S)-1-(4-브로모페닐)-2-((1R)-1-페닐에틸아미노)에탄올(중간체 11)

상기 수득된 (2S)-2-(4-브로모페닐)옥시란(중간체 10) 및 (R)-1-페닐에틸아민(65.22 g, 538 밀리몰)의 혼합물을 80 ℃에서 3시간 동안 가열하면서 오일 욕 중에서 교반하였다. 과잉의 아민을 감압 하에서 증류시켰다(7 ㎜Hg에서 약 70 ℃). 냉각시킨 후에, 생성되는 고체 잔사를 아이소프로필 에테르로 세척하고 건조시켜 백색 결정으로서 (1S)-1-(4-브로모페닐)-2-((1R)-1-페닐에틸아미노)에탄올(중간체 11, 46.76 g, 3 단계에 대해 81% 수율)을 제공하였다.

융점: 106.3 ℃

고유 광회전도(specific optical rotation);[α]_D = +80.74(c = 1.0, 다이클로로메탄)

단계 1-10: (6S)-6-(4-브로모페닐)-4-((1R)-1-페닐에틸)모폴린-3-온(중간체 12)

다이클로로메탄(100 ㎖) 중의 클로로아세틸 클로라이드(19.5 ㎖, 245 밀리몰)의 용액을 다이클로로메탄(600 ㎖) 중의 (1S)-1-(4-브로모페닐)-2-((1R)-1-페닐에틸아미노)에탄올(중간체 11, 71.0 g, 222 밀리몰) 및 트라이에틸아민(34 ㎖, 245 밀리몰)의 빙-냉 용액에 적가하였다. 상기 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후에, 1M 염산을 가하고 상기 혼합물은 물과 클로로포름 사이에서 분배되었다. 유기층을 포화된 수성 탄산수소 나트륨 및 식염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시키고 잔사를 2-프로판올(600 ㎖)에 용해시켰다. 상기 용액에 수산화 칼륨(85%, 18.3 g, 278 밀리몰)을 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 15 시간 동안 교반하였다. 상기 용매를 감압 하에서 증발시키고 잔사에 에틸 아세테이트를 가하였다. 상기 혼합물은 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배되고, 유기층을 1M 염산, 포화된 수성 탄산 수소 나트륨 및 식염수로 세척하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시켰다. 상기 용매를 감압 하에서 증발시켜 갈색 오일로서 (6S)-6-(4-브로모페닐)-4-((1R)-1-페닐에틸)모폴린-3-온(중간체 12, 92 g)을 제공하였다. 상기 조 생성물을 정제 없이 다음 반응을 위해 사용하였다.

고유 광회전도;[α]_D = +71.68(c = 0.5, 클로로포름)

단계 1-11: (2S)-2-(4-브로모페닐)-4-((1R)-1-페닐에틸)모폴린(중간체 13)

테트라하이드로퓨란(400 ㎖) 중의 단계 1-10에서 수득한 (6S)-6-(4-브로모페닐)-4-((1R)-1-페닐에틸)모폴린-3-온(중간체 12, 92 g)의 빙-냉 용액에 보란-테트라하이드로퓨란 착체(테트라하이드로퓨란 중의 1.0M 용액, 600 ㎖, 600 밀리몰)를 30 분에 걸쳐 적가하였다. 실온으로 가온하고 2 시간 동안 교반한 후에, 상기 혼합물을 다시 빙-냉각시키고 메탄올(70 ㎖)을 적가하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 상기 잔사에 메탄올(750 ㎖) 및 1M 수성 수산화 나트륨(280 ㎖)을 가하였다. 상기 혼합물을 80 ℃에서 1 시간 동안 교반하였으며, 이 기간 동안 1M 수성 수산화 나트륨(70 ㎖)을 매 15 분마다 3 회 가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후에, 메탄올을 감압 하에서 증발시키고 생성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층들을 물 및 식염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시켜 백색 결정으로서 (2S)-2-(4-브로모페닐)-4-((1R)-1-페닐에틸)모폴린(중간체 13, 68 g, 중간체 11로부터 수율 88%)을 제공하였다.

융점: 88.0 ℃

고유 광회전도;[α]_D = +32.06(c = 1.0, 다이클로로메탄)

단계 1-12: (2S)-2-(4-브로모페닐)모폴린 하이드로클로라이드(중간체 14)

1,2-다이클로로에탄(240 ㎖) 중의 (2S)-2-(4-브로모페닐)-4((1R)-1-페닐에틸)모폴린(중간체 13, 50.0 g, 144 밀리몰)의 용액에 실온에서 1-클로로에틸 클로로포메이트(103 g, 722 밀리몰)를 가하였다. 상기 혼합물을 8 시간 동안 환류시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고 메탄올(120 ㎖)을 가하였다. 상기 혼합물을 3시간 동안 환류시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하였다. 상기 조 생성물을 아세톤으로 세척하고, 감압 하에 건조시켜 (2S)-2-(4-브로모페닐)모폴린 하이드로클로라이드(중간체 14, 37.6 g, 93%)를 제공하였다.

융점 : 294.6℃(분해)

고유 광회전도; [α]_D = +20.28(c = 0.5, 메탄올)

단계 1-13: (2S)-tert-부틸 2-(4-브로모페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 15)

테트라하이드로퓨란(270 ㎖) 중의 (2S)-2-(4-브로모페닐)모폴린 하이드로클로라이드(중간체 14, 37.6 g, 135 밀리몰)의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민(40.9 g, 404 밀리몰) 및 다이-tert-부틸 다이카보네이트(32.4 g, 148 밀리몰)를 가하였다. 상기 혼합물은 실온에서 5시간 동안 교반되고 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배되었다. 유기층을 식염수로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 제공하였다. 상기 조 생성물을 헥산으로 세척하고, 감압 하에 건조시켜 (2S)-tert-부틸 2-(4-브로모페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 15, 39.3 g, 85%)를 제공하였다.

MS: [M+H]⁺ = 242(-tert-BuOCO)

융점 : 97.2 ℃

고유 광회전도; [α]_D = -28.91(c = 0.5, 클로로포름)

단계 1-14: 4-((2S)-4-(tert-부톡시카보닐)모폴린-2-일)벤조산(중간체 16)

-78 ℃에서 냉각된 테트라하이드로퓨란(320 ㎖) 중의 (2S)-tert-부틸 2-(4-브로모페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 15, 39.3 g, 115 밀리몰)의 용액에 n-부틸리튬(헥산 용액 중 1.58 M, 76.3 ㎖, 121 밀리몰)을 가하였고 상기 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 드라이아이스로 부터 이산화탄소 가스를 1.5시간 동안 상기 혼합물 안으로 거품을 냈고 상기 혼합물을 -10 ℃까지 가온되게 하고 이어서 물로 급냉시켰다. 실온에서 10분 동안 교반 후에, 상기 혼합물은 물과 에틸 아세트 사이에서 분배되었다. 수(water) 상을 에틸 아세테이트로 세척하고, 이어서 1N-염산으로 중화시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매는 감압 하에 증발시켜 4-((2S)-4-(tert-부톡시카보닐)모폴린-2-일)벤조산(중간체 16, 22.4 g, 63%)을 제공하였다.

융점 :172.7 ℃

고유 광회전도; [α]_D = -32.92(c = 0.5, 클로로포름)

단계 1-15: (2S)-tert-부틸 2-(4-카바모일페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 17)

N,N-다이메틸포름아미드(185 ㎖) 중의 4-((2S)-4-(tert-부톡시카보닐)모폴린-2-일)벤조산(중간체 16, 22.4 g, 72.9 밀리몰)의 용액에 실온에서 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드(21.0 g, 109 밀리몰), 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트(16.8 g, 109 밀리몰), N,N-다이이소프로필에틸아민(37.7 g, 292 밀리몰) 및 암모늄 클로라이드(7.80 g, 146 밀리몰)를 가하였다. 6시간 동안 교반 후에 상기 혼합물은 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배되었고, 유기층을 물 및 식염수로 세척하여 황산 나트륨 상에 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켜 (2S)-tert-부틸 2-(4-카바모일페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 17, 20.9 g, 93%)를 제공하였다.

MS: [M+H]⁺ = 207(-tert-BuOCO)

융점 : 179.2 ℃

고유 광회전도; -29.12(c = 0.5, 클로로포름)

단계 1-16: (2S)-tert-부틸 2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 18)

N,N-다이메틸아세트아미드 다이메틸 아세탈(110 ㎖) 중의 (2S)-tert-부틸 2-(4-카바모일페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 17, 20.9 g, 68.2 밀리몰)의 용액을 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시킨 후, 1,4-다이옥산(120 ㎖), 아세트산(120 ㎖), 1N-수산화나트륨(70 ㎖) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(4.80 g, 69.1 밀리몰)를 잔사에 가하고 상기 용액을 2시간 동안 100 ℃에서 교반하였다. 상기 혼합물은 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배되고, 유기층을 식염수 및 탄산수소나트륨 수용액으로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 유기 용매는 감압 하에 제거되고, 잔사는 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액; 헥산/에틸 아세테이트 = 6/1)에 의해 정제시켜 (2S)-tert-부틸 2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 18, 20.5 g, 86%)를 제공하였다.

융점 : 115.8 ℃

고유 광회전도; -41.25(c = 0.5, 클로로포름)

단계 1-17: (2S)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴린 하이드로클로라이드(중간체 19)

에틸 아세테이트(50 ㎖) 중의 (2S)-tert-부틸 2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴린-4-카복실레이트(중간체 18, 20.5 g, 59.4 밀리몰)의 용액에 실온에서 에틸 아세테이트(200 ㎖) 중의 염화수소(4N)를 가하여 3시간 동안 교반하였다. 용매는 감압 하에 증발시키고, 상기 침전물은 여과하여, 에틸 아세테이트로 세척하고 감압 하에 건조시켜 (2S)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴린 하이드로클로라이드(중간체 19, 16.7 g, 99%)를 제공하였다.

융점 : 268.5 ℃(분해)

고유 광회전도; +26.81(c=0.5, 메탄올)

단계 1-18: 3-메틸-2-((2S)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴리노)-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4(3H)-온(본 발명의 화합물)

2-클로로-3-메틸-6-(피리미딘-4-일)-3H-피리미딘-4-온(중간체 1, 12.6 g, 56.6 밀리몰) 및 (2S)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴린 하이드로클로라이드(중간체 19, 16.7 g, 59.3 밀리몰)의 용액에 실온에서 트리에틸아민(17.2 g, 170 밀리몰)을 가하고 상기 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 감압 하에 제거하고, 생성되는 조 생성물을 에틸 아세테이트 및 물로 세척하고 감압 하에 건조하여 3-메틸-2-((2S)-2-(4-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)페닐)모폴리노)-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4(3H)-온(본 발명의 화합물, 23.7 g, 97%)를 제공하였다.

융점 : 219 ℃(분해)

고유 광회전도; -56.72(c=0.5, 클로로포름)

비교 화합물들의 제조

실시예 2: 표 1의 화합물 1의 제조:

1-메틸-2-[2-(3-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-5-일)-모폴린-4-일]-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온

단계 2-1: 4-벤질-2-(3-페닐-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)모폴린(중간체 21)

N,N-다이메틸포름아미드(10 ㎖) 중의 4-벤질-2-모폴린카복실산 하이드로클로라이드(중간체 20, 1.5 g, 5.82 밀리몰)의 교반된 용액에 2-(1H-벤조트라이아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄테트라플루오로보레이트(2.2 g, 6.98 밀리몰), 1-하이드록시벤조트라이아졸 하이드레이트(236 ㎎, 1.74 밀리몰) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(5.1 ㎖, 29.1 밀리몰)을 가하고, 상기 반응 혼합물을 실온에서 30 분간 교반하였다. N'-하이드록시벤즈아미딘(792 ㎎, 5.82 밀리몰)의 첨가 후에, 상기 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 이어서 110 ℃로 가열하였다. 상기 반응이 완료되었을 때(박층 크로마토그래피에 의해 검사), 과잉의 시약을 물을 첨가하여 분해하고 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 상기 추출물을 물 및 식염수로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 생성되는 잔사를 실리카젤 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 헥산 중의 25% 에틸 아세테이트) 무색 오일로서 4-벤질-2-(3-페닐-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)모폴린(중간체 21, 1.44 g, 77%)을 제공하였다.

단계 2-2: 2-(3-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-5-일)-모폴린 하이드로클로라이드(중간체 22)

1,2-다이클로로에탄(10 ㎖) 중의 4-벤질-2-(3-페닐-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)모폴린(중간체 21, 2.0 g, 6.22 밀리몰)의 교반된 용액에 클로로에틸 클로로포메이트(2.0 ㎖, 18.7 밀리몰)를 가하고, 반응 혼합물을 70 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 용매를 제거한 후에, 잔사를 메탄올(10 ㎖)에 용해시키고, 반응 용액을 환류 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 반응이 완료되었을 때(박층 크로마토그래피에 의해 검사), 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 생성되는 2-(3-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-5-일)-모폴린 하이드로클로라이드(중간체 22)를 추가의 정제없이 다음 반응에 사용하였다.

융점: 194.1 ℃

단계 2-3: 1-메틸-2-(2-(3-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-5-일)-모폴린-4-일)-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온:(표 1의 화합물 1)

테트라하이드로퓨란(10 ㎖) 중의 상기 수득한 2-(3-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-5-일)-모폴린 하이드로클로라이드(중간체 22)의 용액에 2-클로로-3-메틸-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4-온(중간체 1, 1.3 g, 6.22 밀리몰) 및 트라이에틸아민(4.3 ㎖, 31.1 밀리몰)을 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 용액은 물과 클로로포름 사이에서 분배되고, 유기층을 물 및 식염수로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 생성되는 잔사를 실리카젤 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 클로로포름 중의 5% 메탄올) 고체로서 1-메틸-2-(2-(3-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-5-일)-모폴린-4-일)-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 1, 1.53 g, 59%, 2단계)을 제공하였다.

융점: 166.7 ℃

실시예 3: 표 1의 화합물 2의 제조:

1-메틸-2-[2-(5-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-3-일)-모폴린-4-일]-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온

단계 3-1: 4-벤질모폴린-2-카보나이트릴(중간체 25)

N-벤질에탄올아민(중간체 23, 44.8 ㎖, 314 밀리몰) 및 2-클로로아크릴로나이트릴(중간체 24, 25 ㎖, 314 밀리몰)의 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 0 ℃로 냉각시킨 후에, 테트라하이드로퓨란(300 ㎖) 및 이어서 칼륨 tert-부톡사이드를 상기 혼합물에 가하고, 상기 혼합물을 0 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸 에테르에 의해 희석하고, 이어서 물 및 식염수로 세척하고 황산 마그네슘 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 헥산 중의 5% 에틸 아세테이트) 무색 오일로서 4-벤질모폴린-2-카보나이트릴(중간체 25)을 제공하였다.

단계 3-2: 4-벤질-N'-하이드록시모폴린-2-카복스아미딘(중간체 26)

에탄올과 물의 혼합물(2/1, 75 ㎖) 중의 4-벤질모폴린-2-카보나이트릴(중간체 25, 5.0 g, 24.7 밀리몰)의 교반된 용액에 하이드록실아민 하이드로클로라이드(5.2 g, 74.2 밀리몰) 및 중탄산 나트륨(13.1 g, 123.5 밀리몰)을 가하고 반응 혼합물을 12 시간 동안 환류 하에서 교반하였다. 상기 반응물을 클로로포름으로 희석하고, 반응 혼합물을 물 및 식염수로 세척하였다. 유기층을 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 생성되는 4-벤질-N'-하이드록시모폴린-2-카복스아미딘(중간체 26)을 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 3-3: 4-벤질-2-(5-페닐-1,2,4-옥사다이아졸-3-일)모폴린(중간체 27)

N,N-다이메틸포름아미드(20 ㎖) 중의 벤조산(2.30 g, 19.1 밀리몰)의 교반된 용액에 2-(1H-벤조트라이아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄테트라플루오로보레이트(6.15 g, 19.1 밀리몰), 1-하이드록시벤조트라이아졸 하이드레이트(518 ㎎, 3.83 밀리몰) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(11.0 ㎖, 63.8 밀리몰)을 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30 분간 교반하였다. 4-벤질-N'-하이드록시모폴린-2-카복스아미딘(중간체 26, 3.0 g, 12.8 밀리몰)의 첨가 후에, 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 이어서 110 ℃로 가열하였다. 상기 반응이 완료되었을 때(박층 크로마토그래피에 의해 검사), 과잉의 시약을 물의 첨가에 의해 분해하고 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 상기 추출물을 물 및 식염수로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 실리카젤 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 헥산 중의 30% 에틸 아세테이트) 무색 오일로서 4-벤질-2-(5-페닐-1,2,4-옥사다이아졸-3-일)모폴린(중간체 27, 3.08 g, 75%)을 제공하였다.

단계 3-4: 2-(5-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-3-일)-모폴린 하이드로클로라이드(중간체 28)

1,2-다이클로로에탄(2.0 ㎖) 중의 4-벤질-2-(5-페닐-1,2,4-옥사다이아졸-3-일)모폴린(중간체 27, 900 ㎎, 2.80 밀리몰)의 교반된 용액에 클로로에틸 클로로포메이트(0.46 ㎖, 4.20 밀리몰)를 가하고, 반응 혼합물을 70 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 용매를 제거한 후에, 잔사를 메탄올(2.0 ㎖)에 용해시키고, 상기 용액을 환류 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 반응이 완료되었을 때(박층 크로마토그래피에 의해 검사), 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 생성되는 2-(5-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-3-일)-모폴린 하이드로클로라이드(중간체 28)를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

융점: 111.0 ℃

단계 3-5: 1-메틸-2-[2-(5-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-3-일)-모폴린-4-일)-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 2)

테트라하이드로퓨란(6.0 ㎖) 중의 상기 생성된 2-(5-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-3-일)-모폴린 하이드로클로라이드(중간체 28)의 용액에 2-클로로-3-메틸-6-(피리미딘-4-일)피리미딘-4-온(중간체 1, 260 ㎎, 2.34 밀리몰) 및 트라이에틸아민(1.81 ㎖, 13.0 밀리몰)을 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 용액은 물과 클로로포름 사이에 분배되고, 유기층을 물 및 식염수로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 생성되는 잔사를 실리카젤 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 클로로포름 중의 5% 메탄올) 고체로서 1-메틸-2-[2-(5-페닐-[1,2,4]옥사다이아졸-3-일)-모폴린-4-일]-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 2, 749 ㎎, 64%, 2 단계)을 제공하였다.

융점: 207.6 ℃

실시예 4: 표 1의 화합물 3의 제조

2-[2-(4-퓨란-3-일-페닐)-모폴린-4-일]-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온

단계 4-1: 2-(4-브로모페닐)옥시란(중간체 30)

아세토나이트릴(140 ㎖) 중의 4-브로모벤즈알데하이드(중간체 29, 25.25 g, 136 밀리몰), 트라이메틸설포늄 아이오다이드(28.71 g, 141 밀리몰), 물(6.5 ㎖, 361 밀리몰) 및 수산화 칼륨(15.56 g, 277 밀리몰)의 혼합물을 55 ℃로 2.5 시간 동안 가온하였다. 생성 용액은 물과 다이에틸 에테르 사이에서 분배되고, 유기층을 물로 세척하고, 염산 및 식염수로 희석하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 2-(4-브로모-페닐)-옥시란(중간체 30)의 조 생성물을 감압 하에서 유기 용매의 제거에 의해 수득하고 이를 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 4-2: 2-벤질아미노-1-(4-브로모-페닐)-에탄올(중간체 31)

상기 수득된 2-(4-브로모-페닐)-옥시란(중간체 30)의 조 생성물 및 벤질아민(47.00 g, 439 밀리몰)의 혼합물을 70 ℃로 8 시간 동안 가열하고 과잉의 벤질아민을 감압 하에서 증류시켰다(10 mmHg에서 약 65 ℃). 상기 잔사를 고화되도록 냉각시키고, 이를 다이아이소프로필 에테르로 세척하여 백색 고체로서 2-벤질아미노-1-(4-브로모-페닐)-에탄올(중간체 31, 23.63 g, 4-브로모벤즈알데하이드로부터 57%)을 제공하였다.

융점: 108.8 ℃

단계 4-3: 4-벤질-6-(4-브로모-페닐)-모폴린-3-온(중간체 32)

톨루엔(300 ㎖) 중의 2-벤질아미노-1-(4-브로모-페닐)-에탄올(중간체 31, 21.85 g, 71.4 밀리몰)의 빙-냉 용액에 톨루엔(30 ㎖) 중의 클로로아세틸 클로라이드(8.49 g, 75.2 밀리몰)를 첨가한 후에, 톨루엔(20 ㎖) 중의 트라이에틸아민(10.25 g, 101 밀리몰)의 용액을 상기 혼합물에 가하고 1 시간 동안 교반하였다. 이어서 메탄올(30 ㎖) 중의 나트륨 메톡사이드(메탄올 중의 28% 용액, 45.73 g, 237 밀리몰)를 상기 용액에 가하고 2 시간 동안 교반하였다. pH를 7.0 부근으로 조절하기 위해 묽은 염산을 가함으로써 반응물을 급냉시키고, 이는 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배되었다. 유기층을 묽은 염산, 물, 포화된 수성 중탄산 나트륨, 및 식염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액; 헥산/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제시켜 무색 오일로서 4-벤질-6-(4-브로모-페닐)-모폴린-3-온(중간체 32, 21.26 g, 86%)을 제공하였다.

단계 4-4: 4-벤질-2-(4-브로모-페닐)-모폴린(중간체 33)

테트라하이드로퓨란(100 ㎖) 중의 4-벤질-6-(4-브로모-페닐)-모폴린-3-온(중간체 32, 18.70 g, 54 밀리몰)의 용액에 질소 분위기 하에 0 ℃에서 테트라하이드로퓨란 중의 보란-테트라하이드로퓨란 착체의 용액(0.9M, 170 ㎖, 153 밀리몰)을 적가하였다. 생성 혼합물을 실온으로 가온하고 3 시간 동안 교반하였다. 0 ℃로 냉각시킨 후에, 메탄올(30 ㎖)을 서서히 첨가하여 반응물을 급냉시켰다. 등명한 혼합물을 감압 하에서 증발시키고 잔류 오일을 1N 수성 수산화 나트륨(300 ㎖)으로 희석하였다. 생성되는 수성 혼합물을 100 ℃에서 3 시간 동안 교반하고 실온으로 냉각시켰다. 상기 제공된 유기 물질을 에틸 아세테이트로 추출하고 합한 추출물을 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 농축 후에, 상기 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액; 헥산/에틸 아세테이트 = 3/1)에 의해 정제시켜 무색 오일로서 4-벤질-2-(4-브로모-페닐)-모폴린(중간체 33, 17.30 g, 52 밀리몰, 96%)을 제공하였다.

단계 4-5: 2-(4-브로모-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 34)

다이클로로에탄(90 ㎖) 중의 4-벤질-2-(4-브로모-페닐)-모폴린(중간체 33, 10.0 g, 30 밀리몰)의 용액에 실온에서 클로로에틸 클로로포메이트(4.0 ㎖, 36 밀리몰)를 가하고 생성 용액을 1 시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에, 상기 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 메탄올(100 ㎖)로 희석하고 생성 용액을 1 시간 동안 환류시켰다. 메탄올을 증발시키고 에틸 아세테이트를 잔류 고체에 가하였다. 연마 후에, 백색 고체를 여과에 의해 수거하고 감압 하에서 건조시켰다. 수득된 고체를 테트라하이드로퓨란(60 ㎖)으로 현탁시키고 상기 생성 혼합물에 다이-tert-부틸 다이카보네이트(6.50 g, 30 밀리몰) 및 1N 수성 수산화 나트륨(60 ㎖, 60 밀리몰)을 실온에서 가하였다. 2 시간 교반 후에, 에틸 아세테이트로 추출성 후처리(workup)를 수행하고 합한 유기 상을 무수 황산 나트륨 상에서 건조시킨 다음 농축시켰다. 생성 고체를 헥산으로 세척하여 백색 고체로서 2-(4-브로모-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 34, 9.08 g, 26.5 밀리몰, 88%)를 제공하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

MS: [M+H]⁺ = 242(-tert-부톡시카보닐)

융점: 97.5 ℃

단계 4-6: 2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 35)

N,N-다이메틸포름아미드(40 ㎖) 중의 2-(4-브로모-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 34, 6 g, 17.5 밀리몰), 비스(피나콜라토)다이보론(5.1 g, 20 밀리몰), 칼륨 아세테이트(3.5 g, 36 밀리몰) 및 [1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센]다이클로로팔라듐(II)(1.2 g, 1.5 밀리몰)의 혼합물을 질소 분위기 하에서 80 ℃로 가열하였다. 3 시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물에 부었다. 에틸 아세테이트를 사용하여 추출성 후처리를 수행하고 유기상을 식염수로 세척하였다. 상기 수거된 유기층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성 물질을 실리카젤 상에서 플래시(flash) 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켰다(용리액으로서 헥산/에틸 아세테이트 = 5/1). 백색 고체로서 2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 35, 5.6 g, 14.5 밀리몰, 83% 수율)를 수득하였다.

MS: [M+H]⁺ = 290(-tert-부톡시카보닐)

융점: 129.4 ℃

단계 4-7: 2-(4-퓨란-3-일-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 36)

N,N-다이메틸포름아미드(5 ㎖) 중의 2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0 g, 2.6 밀리몰), 3-브로모퓨란(0.27 ㎖, 3.0 밀리몰), 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0)(0.35 g, 0.3 밀리몰) 및 2N 탄산 칼륨 수용액(4.5 ㎖)의 혼합물을 질소 분위기 하에서 80 ℃로 가열하고 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 식염수로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 농축 후에, 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 헥산/에틸 아세테이트 = 3/1) 백색 고체로서 2-(4-퓨란-3-일-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 36, 0.73 g, 2.2 밀리몰, 85% 수율)를 제공하였다.

MS: [M+H]⁺ = 230(-tert-부톡시카보닐)

융점: 114.0 ℃

단계 4-8: 2-[2-(4-퓨란-3-일-페닐)-모폴린-4-일]-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 3)

2-(4-퓨란-3-일-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 36, 0.73 g, 2.2 밀리몰)를 실온에서 에틸 아세테이트 용액 중의 4N 염화 수소에 용해시키고 상기 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물의 농축 후에, 생성되는 고체 물질을 수거하였다. 상기 수득된 고체를 테트라하이드로퓨란(10 ㎖)으로 현탁시켰다. 상기 혼합물에 실온에서 2-클로로-3-메틸-6-(피리미딘-4-일)-3H-피리미딘-4-온(중간체 1, 0.33 g, 1.5 밀리몰) 및 트라이에틸아민(0.62 ㎖, 4.5 밀리몰)을 가하였다. 6 시간 동안 교반 후에, 생성 혼합물을 물에 붓고 클로로포름으로 추출하였다. 유기 용액을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 실리카젤 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액으로서 클로로포름/메탄올 = 95/5) 백색 고체로서 2-[2-(4-퓨란-3-일-페닐)-모폴린-4-일]-1-메틸-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 3, 0.55 g, 1.3 밀리몰, 87%)을 제공하였다.

융점: 219.4 ℃(분해)

실시예 5: 표 1의 화합물 4의 제조:

1-메틸-2-{2-[4-(1-메틸-1H-이미다졸-2-일)-페닐]-모폴린-4-일}-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온

단계 5-1: 2-[4-(1-메틸-1H-이미다졸-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 37)

N,N-다이메틸포름아미드(5 ㎖) 중의 2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 35, 1.0 g, 2.6 밀리몰), 2-브로모-1-메틸 이미다졸(0.29 ㎖, 3.0 밀리몰), 테트라키스(트라이페닐포스핀) 팔라듐(0)(0.35 g, 0.3 밀리몰) 및 2N 수성 탄산 칼륨(4.5 ㎖)의 혼합물을 질소 분위기 하에서 80 ℃로 가열하고 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 식염수로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 농축 후에, 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액; 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 무색 오일로서 2-[4-(1-메틸-1H-이미다졸-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 37, 0.40 g, 1.2 밀리몰, 45%)를 제공하였다.

단계 5-2: 1-메틸-2-{2-[4-(1-메틸-1H-이미다졸-2-일)-페닐]-모폴린-4-일}-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 4)

2-[4-(1-메틸-1H-이미다졸-2-일)-페닐]-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 37, 0.40 g, 1.2 밀리몰)를 실온에서 에틸 아세테이트(5 ㎖) 중의 4N 염화 수소에 용해시키고 상기 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 농축 후에, 생성되는 고체 물질을 수거하였다. 상기 수득된 고체를 테트라하이드로퓨란(10 ㎖)으로 현탁시켰다. 상기 혼합물에 2-클로로-3-메틸-6-(피리미딘-4-일)-3H-피리미딘-4-온(중간체 1, 0.18 g, 0.8 밀리몰) 및 트라이에틸아민(0.42 ㎖, 3 밀리몰)을 실온에서 가하였다. 6 시간 동안 교반한 후에, 생성 혼합물을 물에 붓고 클로로포름으로 추출하였다. 유기 용액을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피(용리액; 클로로포름/메탄올 = 95/5)에 의해 정제시켜 백색 고체로서 1-메틸-2-{2-[4-(1-메틸-1H-이미다졸-2-일)-페닐]-모폴린-4-일}-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 4, 0.12 g, 0.3 밀리몰, 35%)을 제공하였다.

융점: 179.8 ℃(분해)

실시예 6: 표 1의 화합물 5의 제조:

1-메틸-2-[2-(4-피라졸-1-일-페닐)-모폴린-4-일]-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온

단계 6-1: 2-(4-피라졸-1-일-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 38)

톨루엔(10 ㎖) 중의 2-(4-브로모-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 34, 3.0 g, 8.8 밀리몰), 구리(I) 아이오다이드(0.05 g, 0.3 밀리몰), 요오드화 나트륨(1.8 g, 12 밀리몰) 및 트랜스-N,N'-다이메틸사이클로헥산-1,2-다이아민(0.1 ㎖, 0.6 밀리몰)의 혼합물을 질소 분위기 하에서 3 시간 동안 환류시켰다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후에, 피라졸(0.68 g, 10 밀리몰) 및 인산 칼륨(6.4 g, 30 밀리몰)을 상기 혼합물에 가하였다. 생성 혼합물을 3 시간 동안 환류시키고 이어서 실온으로 냉각시켰다. 여과에 의해 고체 물질을 제거한 후에, 상기 여액을 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 실리카젤 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 백색 고체로서 2-(4-피라졸-1-일-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 38, 1.7 g, 5.3 밀리몰, 60%)를 제공하였다.

MS: [M+H]⁺ = 230(-tert-부톡시카보닐)

융점: 87.3 ℃

단계 6-2: 1-메틸-2-[2-(4-피라졸-1-일-페닐)-모폴린-4-일]-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 5)

2-(4-피라졸-1-일-페닐)-모폴린-4-카복실산 tert-부틸 에스터(중간체 38, 1.74 g, 5.3 밀리몰)를 실온에서 에틸 아세테이트(10 ㎖) 중의 4N 염화 수소에 용해시키고 상기 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물의 농축 후에, 생성되는 고체 물질을 수거하였다. 수득된 고체의 일부(500 ㎎)를 테트라하이드로퓨란(20 ㎖)으로 현탁시켰다. 상기 혼합물에 2-클로로-3-메틸-6-(피리미딘-4-일)-3H-피리미딘-4-온(중간체 1, 0.33 g, 1.5 밀리몰) 및 트라이에틸아민(0.62 ㎖, 4.5 밀리몰)을 실온에서 가하였다. 6 시간 동안 교반 후에, 생성 혼합물을 물에 붓고 클로로포름으로 추출하였다. 유기 용액을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 실리카젤 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜(용리액; 클로로포름/메탄올 = 95/5) 백색 고체로서 1-메틸-2-[2-(4-피라졸-1-일-페닐)-모폴린-4-일]-1H-[4,4']바이피리미디닐-6-온(표 1의 화합물 5, 0.44 g, 1.0 밀리몰, 70%)을 제공하였다.

융점: 183.5 ℃

생물학적 분석

실험 7: 생체 내에서 타우 인산화에 대한 억제 활성

시험 화합물을 25 내지 35 g 중량의 5 내지 6 주 된 수컷 CD-1 마우스(Charles River Japan, inc.)에게 10 ㎎/㎏ p.o.으로 투여하고(0.5% 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 모노라우레이트 80(트윈 80)/수 현탁액), 1 시간 후에 마우스를 참수시키고 피질을 신속히 회수한 다음 액체 N₂ 중에서 동결시켰다. 피질을 2.3% 나트륨 도데실 설페이트(SDS) 균질화 완충제(62.5 mM 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판다이올 하이드로클로라이드(트리스-HCl), 2.3% SDS, 각각 1mM의 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA), 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA) 및 다이티오쓰레이톨(DTT), 0.2 μM 4-(2-아미노에틸)벤젠설포닐 플루오라이드(AEBSF), 13 μM 베스타틴, 1.4 μM E-64, 0.1 mM 류펩틴, 30 nM 아프로티닌을 함유하는 프로테아제 억제제 칵테일(sigma P2714), pH 6.8)로 직접 균질화시키고 4 ℃에서 15 분간 15000 x g에서 원심분리시켰다. DC 단백질 분석 키트(BIO-RAD)를 사용하여 단백질 농도를 측정하였다. 상등액을 샘플 완충제(62.5 mM 트리스-HCl, 25% 글리세롤, 2% SDS, 0.01% 브로모페놀 블루, pH 6.8)로 희석하여 상기 단백질 농도를 0.5 내지 2 ㎎/㎎ 부근으로 조절하고 이어서 5 분간 비등시켰다. 샘플(10 ㎍)을 10% 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 전기영동(SDS-PAGE) 미니 슬랩 젤 상에서 분리시키고 폴리비닐리덴 다이플루오라이드(PVDF) 멤브레인 상으로 옮겼다. 멤브레인을 실온에서 1 시간 동안 5% 비-지방 우유를 함유하는 포스페이트 완충 식염수(PBS)와 함께 배양하고 이어서 4 ℃에서 밤새 pS396 항체(BIOSOURCE)로 탐침 검사하였다. 항-토끼 IgG 양고추냉이(horseradish) 퍼옥시다제(HRP) 접합된 항체(Promega)를 2차 항체로서 사용하였다. 멤브레인을 강화된 화학발광(ECL) 키트(Amersham Bioscience)에 의해 가시화하고 LAS1000(Fuji Photo Film)에 의해 검출하였다.

실험 8: CYP2D6에 대한 억제 활성

상기 약동학적 연구의 목적은 시험관 내에서 인간 재조합 CYP를 사용하여 인간 CYP 아이소자임(isozymes)의 특이적인 대사 활성에 대한 시험 화합물의 억제 효과를 조사하기 위한 것이었다. 0.4, 2, 10 및 50 μ몰/L 농도의 시험 화합물(시험 화합물이 DMSO에 대해 낮은 용해도를 보이는 경우, 상기 농도를 0.2, 1, 5 및 25 μ몰/L로 정하였다) 또는 양성 대조군을 CYP2D6을 함유하는 반응 혼합물에 가하였다. 상기 특이적인 기질 및 양성 대조군은 각각 루시페린-6'-메틸 에테르의 에틸렌 글리콜 에스터 및 퀴니딘이다. 상기 CYP 아이소자임에 대한 기질을 시험 화합물의 존재 또는 부재 하에서 인간 재조합 CYP와 함께 배양하고 상기 CYP 아이소자임의 대사 활성을 측정하였다. 반응 혼합물을 NADPH 생성 시스템 없이 37 ℃에서 예비배양하였다. NADPH 생성 시스템을 가하여 상기 반응을 출발시키고, 이어서 아세토나이트릴을 가하여 종결시켰다. 상기 인간 CYP 아이소자임의 활성을 반응 혼합물의 형광 신호(CYP2D6)에 의해 측정하였다. 각 화합물에 대한 IC₅₀ 값을, 화합물이 없는 반응 혼합물의 데이터를 100% 활성으로 정하여 계산하였다.

제형 예

(1) 정제

하기의 성분들을 통상적인 방법에 의해 혼합하고 통상적인 장치를 사용하여 압착시켰다.

본 발명의 화합물 30 ㎎

(제조예에서 제조된 것)

결정성 셀룰로스 60 ㎎

옥수수 전분 100 ㎎

락토오스 200 ㎎

마그네슘 스테아레이트 4 ㎎

(2) 연질 캡슐

하기의 성분들을 통상적인 방법에 의해 혼합하고 연질 캡슐에 충전하였다.

본 발명의 화합물 30 ㎎

(제조예에서 제조된 것)

올리브 오일 300 ㎎

레시틴 20 ㎎

산업상 이용가능성

Claims

하기 화학식 I로 나타내는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
화학식 I

.
활성 성분으로서 제 1 항에 따른 화학식 I로 나타내는 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 물질을 포함하는 약제.
활성 성분으로서 제 1 항에 따른 화학식 I로 나타내는 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 물질을 포함하는 타우 단백질 키나아제 1 억제제.
제 2 항에 있어서,
타우 단백질 키나아제 1 과잉활성에 의해 유발되는 질병의 예방 및/또는 치료적 처치(therapeutic treatment)를 위해 사용되는 약제.
제 2 항에 있어서,
신경 퇴행성 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위해 사용되는 약제.
제 5 항에 있어서,
상기 질병이 알쯔하이머 병, 허혈성 뇌혈관 질환, 다운 증후군, 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로 인한 뇌출혈, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화성 범 뇌염성 파킨슨증, 뇌염후 파킨슨증, 투사형 뇌염, 괌 파킨슨-치매 복합증, 루이 소체 병, 픽병, 피질기저 퇴화, 이마관자엽 치매, 혈관성 치매, 외상성 손상, 뇌 및 척수 외상, 말초 신경병증, 망막병증 및 녹내장으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 약제.
제 2 항에 있어서,
비 인슐린 의존성 당뇨병, 비만증, 조울증, 정신분열증, 탈모, 유방암, 비 소세포 폐암, 갑상선암, T 또는 B-세포 백혈병, 골다공증, 말라리아, 암 화학요법에 의해 유발된 호중성 백혈구 감소증 및 바이러스 유발 종양으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 질병의 예방 및/또는 치료적 처치를 위해 사용되는 약제.
제 2 항에 있어서,
인지 및 기억 결손을 특징으로 하는 질병의 치료적 처치를 위해 사용되는 약제.