KR20100042549A - 병용 방법 및 조성물 - Google Patents

Abstract

리포좀성 캄프토테신 및 임의로 리포좀성 플루오로피리미딘 및 표적화된 항종양제를 포함하는 조성물은, 이들 제제가 병용되어 투여될 경우 향상된 치료학적 효과를 달성하는 데 유용하다.

리포좀성 캄프토테신, 리포좀성 플루오로피리미딘, 표적화된 항종양제, 병용 방법

Description

병용 방법 및 조성물{Combination method and compositions}

본 발명은 과증식성 상태에 대한 향상된 효과를 나타내는 표적화된 항종양제의 병용에 관한 것이다.

암, AIDS, 감염성 질환, 면역 장애 및 심혈관 장애와 같은 생명을 위협하는 많은 질환의 진행은 다수의 분자적 기작에 의해 영향을 받는다. 이러한 복잡성으로 인해 단일 제제를 이용한 치유의 달성은 성공이 제한되었다. 따라서, 특히 암의 치료에서 질환을 퇴치하기 위해 제제들의 병용물이 흔히 사용되어 왔다. 투여되는 제제의 수와, 급성 림프구성 백혈병 및 전이성 직장결장 암과 같은 암의 치유율 간에 강력한 상관관계가 있는 것으로 보인다[참조: Frei, et al., Clin. Cancer Res. (1998) 4:2027-2037; Fisher, M.D., Clin Colorectal Cancer (2001) Aug;1(2):85-86]. 특히, 다른 표적화된 항종양제, 예를 들면, 혈관신생(angiogenesis)을 억제하고/하거나 단백질 또는 지질 키나제 활성을 표적화/감소시키는 항종양제와 병용된 화학요법제(예: 캄프토테신)가 임상에서 사용되어 암을 성공적으로 치료하였다.

캄프토테신은 중국 캄프토테카 나무(Chinese camptotheca tree)의 나무껍질에서 발견된 퀴놀린계 알칼로이드이다. 토포테칸 및 이리노테칸과 같은 반합성 또는 합성 유도체를 포함하는 많은 캄프토테신 유도체는 토포이소머라제 I을 억제하는 특유의 능력을 지니고 있으며, 이러한 능력은 캄프토테신 유도체가 매우 활성적인 세포-사멸 제제가 되도록 만든다. 토포이소머라제 I은 DNA의 나선형 꼬임 및 풀림에 관여하는 세포성 효소이다. DNA가 풀릴 수 없는 경우 DNA 메세지의 전사가 일어나지 못하고 단백질이 합성될 수 없어 결국에 세포는 사멸하게 된다. 암 세포와 같이 빠른 속도로 분열하는 세포의 DNA는 딸 세포를 위해 복제되기 위해서 지속적으로 풀리기 때문에, 이러한 세포는 캄프토테신 유도체에 대해 특이 민감하다. 개방된 상태에서 DNA는 캄프토테신 약물의 삽입에 취약하고, 이는 최종적으로 DNA의 파괴 및 세포 사멸을 야기하는 것으로 나타났다.

본 발명의 요법은 5-FU 또는 FUDR과 같은 플루오로피리미딘의 부가를 포함할 수도 있다. 5-FU는 약 40년 전에 임상 시험에 도입되었고, 1990년대 초까지 캄프토테신 유도체와 피리미딘 유사체의 병용과 관련된 시험은 조사되지 않았다[참조: Furuta, T., et al., Gan To Kagaku Ryoho (1991) Mar; 18(3):393-402]. 암 치료법에서의 기대할만한 개선은 수많은 피리미딘/캄프토테신 병용물의 유리 약물 칵테일을 투여함으로써 발견되었다[참조: PCT 특허원 제WO/0066125호 및 제WO/00162235호]. 예를 들면, 미국 특허 제6,403,569호는 류코보린(5-FU 치료 동안 표준 치유 관행인 비타민 엽산과 관련된 화합물)이 200mg/m² 이상임을 조건으로 하여 캄프토테 신 유도체, 5-FU 및 류코보린의 상승작용적 양을 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 청구하고 있다.

피리미딘캄프토테신 약물 칵테일의 사용과 관련된 이점에도 불구하고, 이의 치료학적 사용을 제한하는 다양한 단점들이 있다. 예를 들면, 유리 약물 칵테일의 투여는 흔히 종양 부위에 도달하기 전에 약물중 하나 또는 모두의 신속한 제거를 야기한다. 이러한 이유로, 많은 약물들은 약물을 혈류로부터 제거할 수 있는 기작으로부터 이러한 약물을 '보호'하도록 고안된 전달 비히클 내로 혼입되었다. 리포좀은 이러한 '보호' 효과를 제공하는 능력을 갖고 따라서 치료제의 반감기를 연장시킬 수 있는 것으로 공지되어 있다.

또한, 적절히 고안된 전달 비히클 내로 약물을 캡슐화시키는 것은 캡슐화된 약물의 약물동력학을 조정할 수 있다. 본 발명자들은 피리미딘과 캄프토테신 유도체의 병용물을 수용하기 위해 필요한 특정한 전달 비히클 제형을 확인하였다. PCT 공보 제WO03/028696호(Celator Pharmaceuticals에게 양도됨)에는 피험자에게 투여된 후에 바람직한 mol 비가 유지되도록 하는, 리포좀과 같은 전달 비히클과 안정하게 결합된 2종 이상의 생물학적 활성 제제의 비-길항적 mol 비를 투여하기 위한 조성물 및 방법이 기재되어 있다. PCT 공보 제WO2004/087115호에는 리포좀이 하나 이상의 캄프토테신과 하나 이상의 플루오로피리미딘을 함유하는 조성물의 특정한 양태를 기술하고 있다. 이들 제제의 특정한 양태가 기술되어 있으며 이는 CPX-1으로서 공지되었다. 이러한 특정한 양태는 임상 시험에서 성공적이였다.

본 발명에 이르러, 이러한 조성물에 추가의 표적화된 항종양제를 보충하는 것은 조성물의 치료학적 효과를 향상시킨다는 것이 밝혀졌다. 이들 표적화된 항종양제의 존재가 맥관계의 리포좀 흡수를 억제할 수 있고 따라서 리포좀 제형화의 효과를 부분적으로 무효화시킬 수 있는 것으로 사료되었기 때문에, 이것은 놀라운 것이다.

본 발명의 병용물은 과증식성 질환을 치료하기 위해 유용하다. 과증식성 질환은 일반적으로 암 및/또는 임의의 전이 질환이다. 본 발명의 병용제는 특히 결장직장 종양을 치료하기 위해 유용하다.

본 발명은 비-길항성 비로 하나 이상의 플루오로피리미딘 및 하나의 수용성 캄프토테신이 안정하게 결합되어 있는 리포좀 비히클을 사용하여 플루오로피리미딘/캄프토테신 약물 병용물과 함께 유효량의 표적화된 항종양제를 투여하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. (몇몇 양태에서, 리포좀성 캄프토테신 및 표적화된 항종양제만이 사용된다). 리포좀성 캄프토테신/플루오로피리미딘 조성물은 캄프토테신 및 플루오로피리미딘이 결합된 방식으로 질환 부위로 전달되도록 하여 이들 제제가 목적하는 비로 질환 부위에 존재하도록 한다. 당해 결과는 제제가 리포좀에 공-캡슐화되거나 별도로 캡슐화되든 상관 없이 성취되고 목적하는 비가 질환 부위에 유지되도록 투여된다. 조성물의 약물동력학(PK)은 리포좀 자체에 의해 조절 되어 연합 전달이 성취되도록 한다(단, 전달 시스템의 PK는 유사하다).

따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 과증식을 특징으로 하는 상태를 치료하는 방법에 관한 것이고, 이때 당해 방법은 당해 치료를 필요로 하는 피험자에게 하나 이상의 수용성 캄프토테신과 결합된 당해 치료 리포좀을 투여하는 것을 포함하고 이때, 추가의 표적화된 항종양제가 또한 투여된다. 바람직한 양태에서, 당해 방법은 플루오로피리미딘 및 상기 캄프토테신과 안정하게 결합된 리포좀을 사용하고, 여기서, 플루오로피리미딘에 대한 캄프토테신의 mol 비는 비-길항성이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 당해 성분들을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

하기에 추가로 기재된 바와 같이, 바람직한 양태에서, 병용물을 적절히 고안하여 리포좀성 수용성 캄프토테신 및 리포좀성 플루오로피리미딘을 포함하도록 하기 위해 수용성 캄프토테신 및 플루오로피리미딘은 광범위한 농도 범위에서 비-길항성 비로 존재한다. 이를 측정하는 방법 및 기준은 상기한 WO03/028696에 상세히 기재되어 있다. 적합한 리포좀 제형은 이들이 안정하게 유효량의 플루오로피리미딘/수용성 캄프토테신 병용물을 혼입하여 생체내에서 2개의 약물이 결합 방출되도록 고안된다. 이것은 또한 WO03/028696에 기재되어 있다. 바람직한 제형은 하나 이상의 음전하 지질, 예를 들어, 포스파티딜글리세롤을 함유하고 하나 이상의 스테롤, 예를 들어, 콜레스테롤을 함유한다.

본 발명은, 표적화된 항종양제가 하나 이상의 수용성 캄프토테신과 안정적으 로 결합된 리포좀과 병용 투여되는, 일부 양태에서는 캄프토테신에 대해 비-길항적 비의 하나 이상의 플루오로피리미딘과 안정하게 결합된 리포좀과 추가 병용 투여되는, 일련의 치료물을 투여함으로써 과증식 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다.

하나 이상의 수용성 캄프토테신 및 하나 이상의 플루오로피리미딘이 리포좀과 "안정하게 결합된 (stably associated)" 양태에서, 용어 "안정하게 결합된"은 피험자에 투여되는 이들 제제의 비가 투여한지 적어도 1시간 후에 피험자의 혈액에서 유지된다는 것을 의미한다. 이는 칵테일의 비가 투여 후 불가피하게 변경되는 유리 약물 칵테일로서의 투여와는 대조적이다. 전형적으로, 그 비는 시간 경과에 따라 5% 이상으로 가변적이지 않다.

용어 "비-길항적" 비란, 시험관 내 검정으로 피험자의 암과 관련된 암세포에 이러한 비로 제공되는 경우, 병용물이 임의의 농도 범위(영향을 받는 세포의 분획이 이러한 범위 중 적어도 20% 이상이 0.20 내지 0.80이다)에 걸쳐 비-길항적이라는 것을 의미한다. 일반적으로, 캄프토테신 및 플루오로피리미딘에 대해, 적합한 mol 비는 약 1:1이다.

캄프토테신 및 플루오로피리미딘의 병용물이 사용되는 경우, 이들은 동일한 리포좀과 안정적으로 연관되거나, 즉, 공-캡슐화되거나, 약물동력학이 상기 기재된 바와 같은 속도로 유지되도록 조절되는 한, 개별적으로 제조된 리포좀과 연관될 수 있다.

따라서, 하나의 양태에서, 당해 방법은 수용성 캄프토테신과 연관된 리포좀 의 투여 및 또한 추가의 표적화된 항종양제의 투여에 관한 것이다. 리포좀성 캄프토테신 및 추가의 제제는 동일한 조성물로, 동시에 개별적인 조성물로, 또는 임의의 순서대로 투여될 수 있다. 따라서, 리포좀성 캄프토테신이 먼저 투여된 후, 추가의 표적화된 항종양제를 투여되거나, 이와 반대의 순서로 투여될 수 있다. 또한, 각각의 다중 투여형이 제공될 수 있다. 따라서, 리포좀성 캄프토테신이 먼저 투여된 후, 추가의 표적화된 항종양제가 투여된 다음, 리포좀성 캄프토테신의 또 다른 투여가 수행될 수 있다. 이들 투여는 필요에 따라 반복된다. 병용물에서 동일한 수의 각 약물의 각 투여는 동일할 필요는 없다.

리포좀과 연관된 캄프토테신 및 플루오로피리미딘의 병용물의 투여 및 또 다른 표적화된 항종양제의 추가 투여를 유사하게 적용할 수 있다. 전형적으로, 그러나, 안정하게 연관된 캄프토테신/플루오로피리미딘 조성물은 동시에 투여된다.

일반적으로, 단일 캄프토테신 및 단일 플루오로피리미딘이 단독으로 사용되고, 이들 각 원소의 혼합물이 또한 사용될 수 있다. 일반적으로, 용어, 예를 들면, 하나("a" 및 "an")는 하나 이상을 의미할 수 있다.

수용성 캄프토테신

거의 모두 천연적으로 발생하는 캄프토테신은 불량한 수용성을 갖고, 이러한 성질은 이들의 제형화 및 투여를 어렵게 하고, 많은 경우 불가능하게 한다. 결과적으로, 시중에 판매되거나 개발되는 다수의 캄프토테신은 수용성으로 제조된 것들이다. 수용성 캄프토테신은 생리학적 pH가 변경된(charged) 캄프토테신의 유도체 를 포함한다. 예를 들면, 증가된 수용성은 캄프토테신 A 환의 9, 10 또는 11 위치의 친수성 하이드록실 또는 니트로 그룹의 첨가를 통해 효과적으로 달성되었다. 유사하게, 9 위치에서 양으로 하전된 디메틸아미노메틸 그룹의 첨가는 수용성을 증가시키는 것으로 입증되었다.

캄프토테신의 수용성 유도체는 사람 종양에 대한 광범위한 활성을 나타내었다. 이 때문에, 미국 식약청(the United States Food and Drug Administration: FDA)는 사람의 임상 사용을 위한 이리노테칸, 포토테칸 및 루르토테칸의 수용성 캄프토테신 제형을 승인하였다. 이리노테칸에 의해 입증된 항종양 활성은 이의 대사물질인 SN-38을 통해 발생하는 것으로 여겨진다.

본 발명의 "수용성 캄프토테신"은 물에 충분히 용해되는 캄프토테신의 유도체 및 이의 제형을 의미한다. 수용성 캄프토테신은, 이로써 제한되지는 않지만, 이리노테칸, SN-38, 토포테칸, 9-아미노캄프토테신, 루르토테칸 및 프로드럭, 전구체, 이들 약물의 대사생성물 뿐만 아니라 수용성 캄프토테신의 친수성 염 유도체, 예를 들면, 모 화합물인 캄프토테신의 나트륨 염을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에서 사용하기 위한 수용성 캄프토테신은 이리노테칸, 토포테칸, 9-아미노캄프토테신 또는 루르토테칸이다. 가장 바람직하게는, 수용성 캄프토테신은 이리노테칸이다.

표적화된 항종양제

본 발명의 문맥에서 "표적화된 항종양제"는 단백질 키나제 또는 지질 키나제 활성 또는 항-혈관생성 화합물을 표적화하는/감소시키는 화합물을 일컫는다. 이들은 단백질 티로신 키나제 및/또는 세린 및/또는 트레오닌 키나제 억제제 또는 지질 키나제 억제제, 예를 들면, 수용체 티로신 키나제의 상피성장인자 계열(호모다이머 또는 헤테로다이머로서, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4), 수용체 티로신 키나제의 혈관내피성장인자 계열(VEGFR), 혈소판유래성장인자 수용체(PDGFR), 섬유아세포 성장인자 수용체(FGFR), 인슐린유사성장인자 수용체 1(IGF-1R), Trk 수용체 티로신 키나제 계열, Ax1 수용체 티로신 키나제 계열, Ret 수용체 티로신 키나제, Kit/SCFR 수용체 티로신 키나제, c-Ab1 계열의 구성원 및 이들의 유전자 융합 생성물(예를 들면, BCR-Abl), 단백질 키나제 C(PKC)의 구성원 및 세린/트레오닌 키나제의 Raf 계열의 구성원, MEK, SRC, JAK, FAK, PDK 또는 PI(3) 키나제 계열의 구성원, 또는 PI(3)-키나제-관련 키나제 계열의 구성원, 및/또는 사이클린 의존성 키나제 계열(CDK)의 구성원 및 그들의 활성을 위한 또 다른 메카니즘, 예를 들면, 단백질 또는 지질 키나제 억제와 관련없는 메카니즘을 갖는 항-혈관생성 화합물의 요소의 활성을 표적화하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

VEGFR의 활성을 표적화하고, 감소시키거나 억제하는 화합물은, 특히, VEGF 수용체 티로신 키나제를 억제하고, VEGF 수용제를 억제하거나 VEGF에 결합하는, 화합물, 단백질 또는 항체로, 특히 이들 화합물, 단백질 또는 단일클론 항체는 일반적으로 및 상세하게 제WO 98/35958호에, 예를 들면, 1-(4-클로로아닐리노)-4-(4-피리딜메틸)프탈라진 또는 약제적으로 허용가능한 이들의 염, 예를 들면, 석시네이트 로, 또는 제WO-00/09495호, WO-0027820호, 제WO-00/59509호, 제WO-98/11223호, 제WO-00/27819호 및 제EP 0769947호에 기재되어 있고; 문헌(참조: Prewett, M., et al., in Cancer Research(1999) 59:5209-5218, Yuan, F., et al., in Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996) 93:14765-14770, Zhu, Z., et al., in Cancer Res.(1998) 58:3209-3214, and Mordenti, J., et al., in Toxicologic Pathology (1999) 27:14-21); 제WO 00/37502호 및 제WO 94/10202호에 기재되어 있고; Angiostatin^TM(참조: O'Reilly M. S., et al., Cell (1994) 79:315-328); Endostatin^TM(참조: O'Reilly, M. S., et al., Cell (1997) 88:277-285); 안트라닐산 아미드; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; 또는 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 수용체 항체, 예를 들면, RhuMab가 기재되어있다.

항체는, 항체가 바람직한 생물학적 활성 나타내는 한, 본래의 단일클론 항체, 다클론성 항체, 2 이상의 본래 항체로부터 형성된 다중특이성 항체, 및 항체 단편을 의미한다. 단쇄 형태도 포함된다.

표피성장인자 수용체 계열의 활성을 표적화하고, 감소시키거나 억제하는 표적화된 항종양제는, 특히, EGF 수용체 티로신 키나제 계열의 구성원, 예를 들면, EGF 수용체, ErbB2, ErbB3 및 ErbB4를 억제하거나, EGF 또는 EGF 연관 리간드에 결합하는, 화합물, 단백질 또는 항체이고, 특히 이들 화합물, 단백질 또는 단일클론 항체는 일반적으로 및 상세하게 제WO 97/02266호에, 예를 들면 ex. 39의 화합물로, 또는 제EP 0564409호, 제WO 99/03854호, 제EP 0520722호, 제EP 0566226호, 제EP 0787722호, 제EP 0837063호, U.S. 특허 제 5,747,498호, 제WO 98/10767호, 제WO 97/30034호, 제WO 97/49688호, 제WO 97/38983호 및, 특히 제WO 96/30347호(예를 들면, CP 358774로 알려진 화합물), 제WO 96/33980호(예를 들면, 화합물 ZD 1839) 및 제WO 95/03283호 (예를 들면, 화합물 ZM105180)에 기재되어있고; 예를 들면, 트라스트주맙(trastuzumab)(Herpetin®), Cetuximab®, Iressa®, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 또는 E7.6.3이다.

PDGFR의 활성을 표적화하거나 감소시키거나 억제하는 표적화된 항종양제는 특히 PDGF 수용체를 억제하는 화합물이고, 예를 들면, N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들면, 이마티니브이다.

c-Abl 계열의 구성원 및 이들의 유전자 융합 생성물을 표적화하거나 감소시키거나 억제하는 표적화된 항종양제는, 예를 들면, N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들면, 이마티니브; PD180970; AG957; 또는 NSC680410이다.

단백질 키나제 C, Raf, MEK, SRC, JAK, FAK 및 PDK 계열의 구성원, 또는 PI(3) 키나제 또는 PI(3) 키나제 관련 계열의 구성원 및/또는 사이클린 의존성 키나제 계열(CDK)의 구성원의 활성을 표적화하거나 감소시키거나 억제시키는 표적화된 항종양제는 EP 0296110에 기재된 스타우로스포린 유도체, 예를 들면, 미도스타우린이고, 추가 화합물의 예는, 예를 들면, UCN-01, 사핀골, BAY 43-9006, 브리오스타틴 1, 페리포신; 일모포신; RO 318220; RO 320432; GO 6976; Isis 3521; 또는 LY333531/LY379196이다.

추가의 항혈관형성 표적화된 항종양제는, 예를 들면, 탈리도미드(THALOMID) 및 TNP-470이다.

단백질 또는 지질 포스파타제의 활성을 표적화하거나 감소시키거나 억제시키는 표적화된 항종양제는, 예를 들면, 포스파타제 1, 포스파타제 2A, PTEN 또는 CDC25, 예를 들면, 오카다산 또는 이의 유도체이다. 세포 분화 공정을 유도하는 화합물은, 예를 들면, 레티노산, 알파-, 감마- 또는 델타-토코페롤 또는 알파-, 감마- 또는 델타-토코트리에놀이다.

본원에서 사용되는 용어 사이클로옥시게나제 억제제는, 예를 들면, 셀레콕시브(Celebrex^R), 로페콕시브(Vioxx^R), 에토리콕시브, 발데콕시브 또는 5-알킬-2-아릴아미노페닐아세트산, 예를 들면, 5-메틸-2-(2'-클로로-6'-플루오로아닐리노)페닐 아세트산을 포함하지만 이로 제한되지는 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "비스포스포네이트"는 에트리돈산, 클로드론산, 틸루드론산, 파미드론산, 알렌드론산, 이반드론산, 리제드론산 및 졸레드론산을 포함하지만 이로 제한되지는 않는다. "에트리돈산"은, 예를 들면, 상표명 디드로넬(DIDRONEL)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "클로드론산"은, 예를 들면, 상표명 보네포스(BONEFOS)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "틸루드론산"은, 예를 들면, 상표명 스켈라이드(SKELID)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "파미드론산"은, 예를 들면, 상표명 아레디 아(AREDIA)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "알렌드론산"은, 예를 들면, 상표명 포사막스(FOSAMAX)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "이반드론산"은, 예를 들면, 상표명 본드라나트(BONDRANAT)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "리제드론산"은, 예를 들면, 상표명 악토넬(ACTONEL)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다. "졸레드론산"은, 예를 들면, 상표명 조메타(ZOMETA)^TM 하에, 예를 들면, 시판된 형태로 투여될 수 있다.

약물 병용 상승작용의 시험관내 측정

본 발명의 몇 가지 양태에 있어서, 캄프토테신 및 플루오로피리미딘은 상승 또는 첨가(즉, 비길항적) 비에서 리포좀에서 캡슐화되고/거나 전달되며 생물학적 제제("CTX-1"이라고 불리는 조성물)를 사용하여 투여된다. 상승 또는 첨가 배합 효과를 나타내는 캄프토테신 및 플루오로피리미딘의 비의 측정은 PCT 공보 제WO 03/028696호 및 제WO 2004/087115호에 기재된 실험 데이타의 유형을 기준으로 한 다양한 연산법을 사용하여 수행될 수 있다.

캄프토테신 및 플루오로피리미딘에 대한 지질계 전달 비히클의 제조

본 발명에서 사용하기 위한 바람직한 지질 담체는 리포좀이다. 리포좀은 문헌[참조: Liposomes: Rational Design (A.S. Janoff, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, NY)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있거나, 당해 분야의 숙련가에게 공지된 추가의 기술에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에서 사용하기 위한 적합한 리포좀은 대형 단일 라멜라 소포체(large unilamellar vesicle; LUV), 다중 라멜라 소포체(multilamellar vesicle; MLV), 소형 단일 라멜라 소포체(small unilamellar vesicle; SUV) 및 늑간(interdigital) 융합 리포좀을 포함한다.

본 발명에서 사용하기 위한 리포좀은 "저콜레스테롤"로 구성되도록 제조될 수 있다. 이러한 리포좀은 리포좀의 상 전이 특성을 상당히 변경시키기에 불충분한 콜레스테롤의 양의 존재를 허용한다(전형적으로 콜레스테롤 20mol% 미만). 본 발명의 리포좀은 치료적 지질을 포함할 수도 있으며, 이의 예로는 에테르 지질, 포스파티드산, 포스포네이트, 세라미드 및 세라미드 동족체, 스핑고신 및 스핑고신 동족체 및 세린 함유 지질을 들 수 있다.

리포좀은 또한 표면 안정화 친수성 중합체-지질 공액체, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜-DSPE를 사용하여 제조되어 순환 수명을 증가시킬 수 있다. 포스파티딜글리세롤(PG) 및 포스파티딜리노시톨(PI)과 같은 음으로 하전된 지질의 혼입은 담체의 순환 수명을 증가시키기 위해 리포좀 제형에 첨가될 수도 있다. 이러한 지질은 친수성 중합체-지질 공액체를 표면 안정화제로서 대체하도록 사용될 수 있다. 본 발명의 바람직한 양태는 PG 또는 PI를 함유하는 저콜레스테롤 리포좀을 사용하여 응집을 예방함으로써 담체의 혈액 체류 시간을 증가시킬 수 있게 한다.

제제를 리포좀에 캡슐화하는데 여러 방법을 이용할 수 있다. "캡슐화"는 제제와 지질계 전달 비이클의 공유 또는 비공유 결합을 포함한다. 예를 들면, 캡슐화는 제제와 리포좀의 외층 또는 층들과의 상호작용, 또는 리포좀 내에 제제의 포함(entrapment)에 의한 것일 수 있으며, 평형은 상이한 부분의 리포좀 사이에서 달성된다. 따라서, 제제의 캡슐화는 액체 성분과의 공유 또는 비공유 상호작용을 통해 리포좀의 이층과의 상호작용에 의한 또는 리포좀의 수성 인테리어 또는 내부 수성상 및 이층 사이의 평형에서 포함에 의한 제제의 결합에 의한 것일 수 있다.

목적하는 병용물의 캡슐화는 별개의 전달 비이클에서의 캡슐화 또는 동일한 전달 비이클 내에서의 캡슐화를 통해 달성될 수 있다. 별개의 리포좀으로의 캡슐화를 목적으로 하는 경우, 각각의 리포좀의 지질 조성은 약물동력학이 대등(coordinated)하게 되도록 매우 상이할 수 있다. 비히클 조성을 변경함으로써, 캡슐화된 약물의 방출 속도를 매칭하여 목적하는 비의 약물을 종양 부위에 전달할 수 있다. 2개 이상의 약물이 별개의 리포좀에 캡슐화에 되는 경우, 최적의 치료 활성을 제공하기 위해 환자 특이적으로 결정된 수용성 캄프토테신 대 플루오로피리미딘의 비가 투여 전 각각의 리포좀 캡슐화 약물의 적당량을 배합함으로써 개개 환자에게 생성될 것이라는 점을 용이하게 받아들여야 한다. 또는, 2개 이상의 제제는 동일한 리포좀내에 캡슐화될 수 있다.

본 발명의 조성물의 생체내 투여

상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 사람을 포함하는 온혈동물 및 가축 조류 종에게 투여될 수 있다. 사람의 병 치료에 있어서, 주치의는 확립된 프로토콜을 사용하여 용량, 스케줄 및 투여 경로 면에서 본 발명의 조성물이 어떻게 이용되어야 하는지를 결정할 것이다. 본 발명의 전달 비이클 조성물에서 캡슐화된 제제가 환자의 건강한 조직에 대하여 감소된 독성을 나타내는 경우, 이러한 적용은 또한 용량 단계적 확대를 이용할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물은 비경구로, 즉 동맥내로, 정맥내로, 복강내로, 피하로 또는 근육내로 투여된다. 보다 바람직하게는, 당해 약제학적 조성물은 일시 주사에 의해 정맥내로 또는 복강내로 투여된다. 그러나, 내시경 시술을 포함한 모든 효과적인 투여 방법이 사용될 수 있다.

본 발명의 전달 비히클을 포함하는 약제학적 조성물은 표준 기술에 의해 제조될 수 있으며, 물, 완충수, 0.9% 염수, 0.3% 글리신, 5% 덱스트로스, 및 안정성의 증가를 위한 당단백질, 예를 들어 알부민, 지단백질, 글로불린 등과 같은 기타 물질을 포함할 수 있다. 이들 조성물은 통상의, 익히 공지된 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있다. 생성된 수용액은 사용을 위하여 포장되거나 무균 상태하에서 여과되고 동결건조될 수 있으며, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 수용액과 배합된다. 상기 조성물은 적당한 생리학적 상태에 요구되는 약제학적으로 허용되는 보조 물질, 예를 들어 pH 조절제, 완충제, 장력 조정제, 및 예컨대 나트륨 아세테이트, 나트륨 락테이트, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 등과 같은 기타 물질을 함유할 수 있다. 추가로, 전달 비히클 현탁액은, 보관 시의 지질-과산화 손상 및 유리 라디칼에 대해 지질을 보호하기 위하여, 지질-보호제를 포함할 수 있다. 알 파-토코페롤과 같은 친지성 유리-라디칼 제거물질 및 페리옥스아민과 같은 수용성 철-특이적 킬레이터가 적합하다. 투여된 플루오로피리미딘의 저장 수명을 증가시키기 위하여, 레우코보린(leucovorin)이 또한 표준 기술에 의해 본 발명의 조성물과 함께 투여될 수 있다.

약제학적 조성물에 부가하여, 수의용으로 적합한 제형이 제조되고 피험자에게 적당한 방법으로 투여될 수 있다. 바람직한 수의용 피험자에는 포유동물 종, 예를 들어 사람이외의 영장류, 개, 고양이, 소, 말, 양, 및 사육된 가금류가 포함된다. 피험자에는 또한 실험실 동물, 예를 들면, 특히 랫트, 래빗, 마우스 및 기니아 피그가 포함될 수 있다.

후술되는 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이지, 본 발명을 제한하고자 하는 것이 아니다.

실시예 1:

세툭시맙(Cetuximab ^® )은 DLD-1 사람 결장 이종이식 모델에서의 이리노테칸 뿐만 아니라 리포좀 이리노테칸의 활성을 증가시킨다.

본 실시예는 유리 또는 리포좀성 캄프토테신 및 표피 성장 인자 수용체 억제제(예: 세툭시맙)를 포함하는 효능을 개별 제제와 비교한다. 유리 이리노테칸 및 유리 세툭시맙의 효능을 둘의 병용물과 비교하였고, 유사하게 리포좀 이리노테칸과 유리 세툭시맙의 효능을 이들 두 제제의 병용물과 비교하였다.

간단히, 마우스에 대한 종양 연구를 수행하기 위해서, 동물에게 약 2×10⁶개의 종양 세포를 피하 접종한 후, 치료하기 전에 충분한 크기로 성장하도록 하였다. 이는 PCT 공보 WO03/028696에서 이미 기재한 방법을 사용하여 수행한다.

유리 이리노테칸 또는 세툭시맙을 암컷 누드-폭슨1(nude-foxn1) 마우스에게 100mg/kg 또는 1mg/마우스의 용량으로 도 1a에 화살표로 나타낸 다중 투여 스케줄로 각각 투여하였다. 세툭시맙은 Q3Dx7 스케줄로 투여하였고 이리노테칸은 Q7Dx3 스케줄로 투여하였다. 결과는 유리 제제 둘의 병용물이 단독 제제에 비해 상당히 향상됨을 보여준다.

이리노테칸을 또한 DSPC/DSPG/Chol(70:20:10 mol 비) 리포좀에 활성적으로 부하하였다. 클로로포름에 DSPC를 50mg/ml로 용해시키고 콜레스테롤을 50mg/ml로 용해시키고 클로로포름/메탄올/물(50/10/1)에 DSPG를 25mg/ml로 용해시켜 지질막을 제조하였다. 당해 지질을 합하고, 용매를 제거한 후, 생성된 지질막을 100mM Cu(글루코네이트)₂, 220mM 트리에탄올아민(TEA)으로 이루어진 용액(70℃에서 pH 7.4)으로 수화하였다. 생성된 MLV를 70℃에서 압출시켜 LUV를 생성시켰다. 생성된 리포좀의 평균 직경을 QELS(준탄성광산란) 분석에 의해 측정한 바, 대략 100nm +/- 20nm였다. 이어서, 리보좀을 수동 접선 유동 칼럼을 사용하여 300mM 수크로스, 20mM Hepes, 30mM EDTA(SHE), pH 7.4로 완충액 교환한 후, 150mM NaCl, 20mM Hepes(HBS), pH 7.4에 가하고, 캡슐화되지 않은 Cu(글루코네이트)₂를 제거하였다. 부하하고 실온으로 냉각시킨 후, 샘플을 접선 유동 투석에 의해 염수(0.9% 염화나 트륨 주사, USP; pH 5.5, Baxter)로 교환하여 EDTA 또는 캡슐화되지 않은 약물을 제거하였다. 이리노테칸의 부하 정도를 표준 곡선에 대한 370nm에서의 흡광도를 사용하여 측정하였다. 액체 신틸레이션 계수를 사용하여 각각의 시점에서의 약물 대 지질 비를 산출함으로써 지질 농도(¹⁴C-CHE) 농도를 측정하였다.

리포좀성 이리노데칸 또는 유리 Cetuximab®을 도 1b에서 화살로 나타낸 다중 투여 스케줄로 각각 100mg/kg 또는 1mg/마우스의 투여량으로 암컷 누드-Foxn1 마우스에 투여하였다. Cetuximab®을 Q3Dx7 스케줄로 투여하고, 리포좀성 이리노데칸을 Q7Dx3 스케줄로 투여하였다. 도 1b의 결과는 리포좀성 이리노데칸이 Cetuximab®단독보다 활성이 크고, 이들 제제 둘 다의 배합이 리포좀성 이리노데칸 또는 유리 Cetuximab® 단독에 비해 상당히 개선되었음 나타낸다.

실시예 2: CPX-1과 Avastin®의 배합은 LS174T 사람 결장 이종이식 모델에 대한 첨가제이다

이들 제제 단독에 비해 2개의 약물 리포좀성 조성물과 생물학적 제제의 조합에서 개선된 효율이 관찰되는 지를 입증하기 위해, 생물학적 제제 Avastin®와 배합된 이중-로딩된 리포좀의 효율을 또한 Avastin® 단독 뿐만 아니라 이중-로딩된 리포좀 단독의 치료 효과를 비교하였다. Avastin®은 혈관내피세포 성장 인자(VEGF)에 대한 단독 클론 항체이다.

본 발명의 발명자들은 캄프토테킨과 플루오로피리미딘과의 병용물의 효과가 비-의존적(ratio-dependent)이며 이들 약물 부류의 병용물의 개선된 효능이 적어도 부가 효과를 제공하는 제제의 비를 유지하는 경우 발생할 수 있음을 이전에 나타내었다. 특히, 캄프토테킨, 이리노테칸 및 플루오로피리미딘, FUDR의 병용물이, 두 개의 제제가 1:1 약물 비로 존재할 경우 강한 상승작용을 나타낸다고 이전에 제시하였다. 이들 두 가지 약물은 리포좀 내로 함께 로딩되어 생체 내 투여("CPX-1"로 명명되는 병용물) 후 비를 유지하여 정확한 1:1 비에서 약물을 종양 자리로 전달할 수 있다. 본 발명의 발명자들은 CPX-1의 개선된 효능이 Avastin®(베바시주맙으로도 불림)의 존재하에 발생하는 경우 본 발명의 발명자들이 측정한다.

이리노테칸은 DSPC/DSPG/Chol(70:20:10 mol 비) 리포좀 함유 수동 포획된 FUDR 내로 활발하게 로딩되었다. 지질 필름은 클로로포름 내에 DSPC를 50mg/ml로, 콜레스테롤을 50mg/ml로, DSPG를 클로로포름/메탄올/물(50/10/1) 내에 25mg/ml로 용해시킴으로써 제조되었다. 이후, 지질을 합한 다음, 용매를 제거하고, 생성된 지질 필름을 70℃에서 pH 7.4에서 대략 25mg/ml FUDR(미량의 ³H-FUDR을 포함함)을 함유하는 100mM Cu(글루코네이트)₂, 220mM 트리에탄올아민(TEA)으로 이루어진 용액으로 수화시켰다. 생성된 MLV를 70℃에서 압출시켜 LUV를 생성시켰다. 생성된 리포좀의 평균 직경은 QELS(준탄성광산란) 분석법으로 약 100nm +/- 20nm로 측정되었다. 이후, 리포좀을 휴대용 접선류 컬럼을 사용하여 300mM 슈크로스, 20mM 헤페스(Hepes) 30mM EDTA(SHE), pH 7.4로 완충 교환한 다음, 150mM NaCl, 20mM 헤페스(HBS), pH 7.4로 완충 교환하여 임의의 캡슐화되지 않은 FUDR 및 Cu(글루코네이트)₂를 제거하였다.

FUDR 대 이리노케탄의 mol 비가 1:1이 되도록 이리노테칸을 이들 리포좀에 첨가하였다. 초기 이리노테칸 대 지질 비가 0.1:1인 리포좀 내로 이리노테칸을 로딩시켜 50℃에서 10분 동안 샘플을 배양하여 촉진시켰다. 로딩시킨 다음, 실온으로 냉각시킨 후에, EDTA 또는 캡슐화되지 않은 약물(들)을 제거하기 위해 접선유 투석에 의해 샘플을 식염수(0.9% 염화나트륨 주입, USP; pH 5.5, Baxter)로 교환하였다. 표준 곡선에 대해 370nm에서 흡광도를 사용하여 이리노테칸 로딩 정도를 측정하였다. 액체 농도(¹⁴C-CHE) 및 FUDR 농도(³H-FUDR)를 측정하기 위해 이 시간 지점에서 약물 대 지질의 비는 액체 신틸레이션 계측을 사용하여 산출하였다. 액체 농도(¹⁴C-CHE) 및 FUDR 농도(³H-FUDR)를 측정하였다.

CPX-1 또는 유리 Cetuximab®을 Q7Dx3 스케줄로 도 2a 및 2B에 상세화한 투여량으로 암컷 누드-Foxn1 마우스에 투여하였다. 도 2의 결과는 CPX-1이 유리 베바시주맙보다 활성이 크고, 이들 병용물 둘 다의 병용물이 CPX-1 또는 유리 베바시주맙 단독에 비해 개선되었음을 나타낸다.

베바시주맙(Avastin®)로 예비처리한 마우스를 사용하여 이 실험을 또한 반복하였다. 이들 마우스에 CPX-1의 단독 주사 전에 베바시주맙의 2회 주사하였다. 도 2b에 나타낸 바와 같이, CPX-1과 배합한 베바시주맙을 예비처리 및 주사한 마우스는 종양 감소가 탁월하게 개선되었음을 나타내었다.

도 1a는, DLD-1 사람 결장 이종이식편을 갖는 마우스에 투여되는 경우, Cetuximab^®(사각형), 이리노테칸(삼각형), 또는 Cetuximab^®와 이리노테칸의 병용물(원형)에 대한 효능 그래프이다.

도 1b는, DLD-1 사람 결장 이종이식편을 갖는 마우스에 투여되는 경우, Cetuximab^®(사각형), 리포좀 이리노테칸(삼각형), 또는 Cetuximab^®와 리포좀 이리노테칸의 병용물(원형)에 대한 효능 그래프이다.

도 2a는, LS174T 사람 결장 이종이식편을 갖는 마우스에 투여되는 경우, 베바시주맙(사각형), CPX-1(삼각형), 또는 동시 투여되는 베바시주맙과 CPX-1의 병용물(원형)에 대한 효능 그래프이다.

도 2b는, LS174T 사람 결장 이종이식편을 갖는 마우스에 투여되는 경우, 베바시주맙(사각형), CPX-1(삼각형), 또는 베바시주맙의 2회 주사가 1회 용량의 CPX-1 이전에 투여되는 베바시주맙과 CPX-1의 병용물(원형)에 대한 효능 그래프이다.

Claims (20)

1. 과증식을 특징으로 하는 상태의 치료방법에 사용하기 위한 하나 이상의 약물을 치료를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 상태의 치료방법에 사용하기 위한 하나 이상의 약물의 제조를 위한,

   (a) 하나 이상의 수용성 캄프토테신과 결합된 리포좀 및

   (b) 추가의 표적화된 항종양제의 용도.
2. 제1항에 있어서, 표적화된 항종양제가 혈관생성 억제제이거나, 티로신 키나제 매개된 수용체의 활성 억제제인 용도.
3. 제2항에 있어서, 혈관생성 억제제가 혈관상피성장인자(VEGF) 억제제이고/이거나, 티로신 키나제 매개된 수용체의 억제제가 표피 성장인자 수용체(EGFR) 억제제인 용도.
4. 제1항에 있어서, 수용성 캄프토테신이 이리노테칸, 토포테칸, 9-아미노캄프토테신 또는 루르토테칸인 용도.
5. 제1항에 있어서, 리포좀이 플루오로피리미딘을 추가로 포함하고, 플루오로피리미딘에 대한 캄프토테신의 mol 비가 비-길항성이며, 캄프토테신 및 플루오로피리 미딘이 리포좀과 안정적으로 결합되는 용도.
6. 제5항에 있어서, 플루오로피리미딘 제제가 플록수리딘, 플루오로우라실 또는 UFT(테가푸르/우라실)인 용도.
7. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 리포좀이 DSPC 또는 DAPC 및 DSPG 또는 DMPG를 포함하고, 콜레스테롤 20mol% 미만을 포함하는 용도.
8. 과증식을 특징으로 하는 상태의 치료방법에 사용하기 위한 하나 이상의 약물을 치료를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 것을 포함하며, 투여된 플루오로피리미딘과 수용성 캄프토테신의 mol 비가 비-길항성인, 상기 상태의 치료방법에 사용하기 위한 하나 이상의 약물의 제조를 위한,

   (a) 제1 리포좀과 안정적으로 결합된 플루오로피리미딘,

   (b) 제2 리포좀과 안정적으로 결합된 수용성 캄프토테신 및

   (c) 추가의 표적화된 항종양제의 용도.
9. 제8항에 있어서, 표적화된 항종양제가 혈관생성 억제제이거나, 티로신 키나제 매개된 수용체의 활성 억제제인 용도.
10. 제9항에 있어서, 혈관생성 억제제가 혈관상피성장인자(VEGF) 억제제이고/이 거나, 티로신 키나제 매개된 수용체의 억제제가 표피 성장인자 수용체(EGFR) 억제제인 용도.
11. 제8항에 있어서, 수용성 캄프토테신이 이리노테칸, 토포테칸, 9-아미노캄프토테신 또는 루르토테칸인 용도.
12. 제8항에 있어서, 플루오로피리미딘 제제가 플록수리딘, 플루오로우라실 또는 UFT(테가푸르/우라실)인 용도.
13. 제8항 내지 제12항 중의 어느 한 항에 있어서, 리포좀이 DSPC 또는 DAPC 및 DSPG 또는 DMPG를 포함하고, 콜레스테롤 20mol% 미만을 포함하는 용도.
14. (a) 리포좀(하나 이상의 수용성 캄프토테신과 결합된 리포좀) 및

    (b) 추가의 표적화된 항종양제를 포함하는 조성물.
15. 제14항에 있어서, 하나 이상의 플루오로피리미딘 제제와 결합된 리포좀을 추가로 포함하고, 캄프토테신 및 플루오로피리미딘의 mol 비가 비-길항성이며, 캄프토테신 및 플루오로피리미딘이 리포좀과 안정적으로 결합되는 조성물.
16. 제14항에 있어서, 표적화된 항종양제가 혈관생성 억제제이거나, 티로신 키나 제 매개된 수용체의 활성 억제제인 용도.
17. 제16항에 있어서, 혈관생성 억제제가 혈관상피성장인자(VEGF) 억제제이고/이거나, 티로신 키나제 매개된 수용체의 억제제가 표피 성장인자 수용체(EGFR) 억제제인 용도.
18. 제14항에 있어서, 수용성 캄프토테신이 이리노테칸, 토포테칸, 9-아미노캄프토테신 또는 루르토테칸인 용도.
19. 제14항에 있어서, 플루오로피리미딘 제제가 플록수리딘, 플루오로우라실 또는 UFT(테가푸르/우라실)인 용도.
20. 제14항 내지 제19항 중의 어느 한 항에 있어서, 리포좀이 DSPC 또는 DAPC 및 DSPG 또는 DMPG를 포함하고, 콜레스테롤 20mol% 미만을 포함하는 용도.

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