KR20100008541A - Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell to adipocytic cells containing the extracts of trichosanthis semen or cannabis semen - Google Patents

Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell to adipocytic cells containing the extracts of trichosanthis semen or cannabis semen Download PDF

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Abstract

PURPOSE: A composition promoting adipocyte differentiation of human mesenchymal stem cells is provided to ensure volume and elasticity of the skin and effectively prevent or treat diabetes type 2. CONSTITUTION: A composition for promoting adipocyte differentiation contains Trichosanthis Semen extract or Cannabis Semen extract as an active ingredient. A composition for preventing or treating diabetes contains the Trichosanthis Semen extract or Cannabis Semen extract as an active ingredient. The composition promotes differentiation of human mesenchymal stem cells to adipocytes. The human mesenchymal stem cells are derived from human bone marrow.

Description

괄루인 또는 마자인 추출물을 함유하는 인간 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화 촉진용 조성물{Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell to adipocytic cells containing the extracts of Trichosanthis Semen or Cannabis Semen}Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell to adipocytic cells containing the extracts of Trichosanthis Semen or Cannabis Semen}

본 발명은 인간 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화를 촉진하는 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 괄루인 및 마자인 추출물을 적어도 1종 이상 유효성분으로 함유하여 사람 중간엽줄기세포를 지방세포로 분화하는 것을 촉진시킴으로써 지방세포를 생성하여 피부의 볼륨과 탄력을 부여하고, 아디포넥틴 발현을 촉진하여 제 2형 당뇨병 예방 또는 치료에 효과적인 괄루인 또는 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하고 인간 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화를 촉진하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for promoting differentiation of human mesenchymal stem cells into adipocytes, and more particularly, containing human extracts of Gluluin and Mazarin as at least one active ingredient as adipocytes. Promotes differentiation to produce fat cells, imparts volume and elasticity to the skin, promotes adiponectin expression, and contains the extracts of the extract of Joulein or Mazain, which are effective in preventing or treating type 2 diabetes mellitus, and as human mesenchymal stem cells. The present invention relates to a composition for promoting differentiation into adipocytes.

피부는 인체를 구성하고 있는 기관 중 가장 큰 기관으로, 우리 몸 부피의 약 16 %를 차지하고, 면적이 1.8 ㎡, 두께가 2∼4 mm, 무게가 약 3 kg이며 표피, 진피 및 피하지방 층으로 구성되어 있다. 이러한 피부는 외부 환경과 직접 접하고 있으면서, 인체 유해 미생물과 같은 다양한 유해인자들과 자외선 등과 같은 외부 자극으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당하는 동시에 전신의 대사에 필요한 생화학적 기능을 영위하는 생명유지에 필수 불가결한 기관이다. 특히, 진피 아래에 존재하는 피하지방 층은 지방세포(adipocyte)의 소엽으로 구성되어 있는데, 외부의 열에 대해 피부 내부의 기관의 보호 및 충격을 흡수하는 쿠션 역할을 하며, 영양성분을 트리아실글리세롤의 형태로 저장하여 필요 시 에너지원으로 사용하기도 한다. 그러나 나이가 들어감에 따라, 자연적인 요인과 각종 외부 자극에 의해 피부 손상을 입게 되며, 그 결과, 피부에서 피부세포들의 본래 기능이 제대로 이루어지지 않게 되어 주름 생성, 탄력 손실 등의 피부노화 현상이 발생하게 된다. The skin is the largest organ of the human body, occupying about 16% of our body volume, 1.8 m², 2 to 4 mm thick, and weighing about 3 kg. It is the epidermis, dermis and subcutaneous fat layer. Consists of. The skin is in direct contact with the external environment and serves as an important protective barrier to protect the body from various harmful factors such as human harmful microorganisms and external stimuli such as ultraviolet rays, while maintaining the biochemical functions necessary for metabolism of the whole body. Indispensable to the institution. In particular, the subcutaneous fat layer under the dermis is composed of the lobules of adipocytes, which act as a cushion to absorb and protect the organs inside the skin against external heat, and the nutrients of triacylglycerol It can also be stored as an energy source if needed. However, as they age, they are damaged by natural factors and various external stimuli. As a result, skin cells in the skin do not function properly, resulting in skin aging such as wrinkles and loss of elasticity. Done.

현대 사회에서 특히 여성들에게 피부는 그들의 건강에 대한 주요한 지표가 되고 있으며, 따라서 나이가 들어감에 따라 탄력을 잃는 피부는 여성들에게 민감한 문제로 대두되고 있다. 특히 얼굴 부위의 피부는 체중이나 나이 등의 요인으로 인해 처지고 탄력을 잃기 쉽다. 또한 폐경기 여성들에게서 주로 발생하는 호르몬, 혈액, 지방, 뼈 등의 대사 이상으로 인한 얼굴의 탄력 저하 및 지방의 감소는 여성들로 하여금 여성성에 대한 큰 상실감을 느끼게 한다. 이처럼 현대 사회 여성들에게 아주 민감한 문제들에 대해서 지방조직의 볼륨을 증가시키는 것이 하나의 해결책으로 대두되고 있으며, 많은 여성들이 부작용과 경제적인 부담이 따르는 성형수술을 통해서 피부의 탱탱함을 유지 혹은 증가시키고자 한다.In the modern world, especially for women, skin is a major indicator of their health, so skin that loses its elasticity as it ages becomes a sensitive issue for women. In particular, the skin on the face is liable to sag and lose elasticity due to factors such as weight and age. In addition, the decrease in facial elasticity and fat caused by metabolic abnormalities such as hormones, blood, fat, and bone, which occur mainly in postmenopausal women, make women feel a great loss of femininity. Increasing the volume of adipose tissue is a solution to the problems that are very sensitive to women in modern society, and many women try to maintain or increase the firmness of the skin through plastic surgery with side effects and economic burden. do.

이러한 피부의 탄력 저하를 개선하고자 현재 널리 사용되고 있는 방법이 지 방이식수술이다. 지방이식수술은 튜립 니들(tulip needle) 모양의 끝이 날카롭지 않은 바늘을 갖는 주사기를 이용하여 자신의 지방을 채취해 탄력이 떨어져 보이는 피부의 각 부위에 이식하는 수술이다. 이러한 지방 이식은 나이가 들어감에 따라 노화되는 피부의 주름 개선을 비롯하여, 입술선, 턱선, 이마선의 교정, 코 성형과 화상이나 상처로 인해 함몰된 피부, 암 절제 수술로 상실된 부분 등에 적용하여 채워주면서 좋은 성과를 보이고 있다. 하지만 지방이식수술 이후에 이식 부피의 40∼60%가 다시 인체 내에 흡수된다는 것이 보고되었고(S Eremia et al., Dermatol . Sur. 2000, 26: 1150-1158; Fulton JE et al., Dermatol . Clin . 2001, 19(3): 523-530), 피부가 얇고 피하지방이 적은 부위에서의 지방이식수술은 세포 덩어리가 만져지는 등의 문제가 제기되며, 실제로 이식한 지방의 생존율과 생존기간이 기대에 미치지 못해 재이식이 필요한 경우가 발생한다. 따라서, 이러한 문제점들이 있는 지방이식수술을 대체하면서 피하지방층을 충분히 증가시킬 수 있는 조성물에 대한 요구가 높아지고 있다.Local transplantation surgery is currently widely used to improve the elasticity of the skin. Lipograft surgery is a procedure in which a tulip needle-shaped needle is taken using a syringe having a needle that is not sharp and transplanted to each part of the skin where elasticity is poor. These fat grafts can be applied to fill and improve the wrinkles of aging skin as it ages, to correct the lip, jaw, and forehead lines, skin impregnated by nose shaping and burns or wounds, and areas lost due to cancer resection. The results are showing. However, it has been reported that 40-60% of the graft volume is absorbed back into the body after liposuction (S Eremia et al., Dermatol . Sur. 2000, 26: 1150-1158; Fulton JE et al., Dermatol . Clin 2001, 19 (3): 523-530), fat transplantation of skin is thin subcutaneous fat area is less raised a problem of which the cell mass touched, actually the transplanted fat survival and survival expectancy There is a case in which replanting is not necessary. Therefore, there is an increasing demand for a composition that can sufficiently increase the subcutaneous fat layer while replacing lipostomy with these problems.

현재 판매되고 있는 피부 탄력 증진 효능을 가진 화장품의 대부분은 피부의 주름 제거 또는 진피 강화 등의 일반적인 효능을 가진 성분을 사용한 것이다. 피부 탄력의 저하는 노화나 자외선 등에 의해 유발되는 콜라겐(collagen)과 엘라스틴(elastin)의 생성 저하 또는 파괴에 기인한다. 이러한 탄력 감소의 원인이 되는 콜라겐 및 엘라스틴의 감소를 억제하려는 목적으로 여러 가지 물질들이 개발되어 사용되고 있다. 그 중, 대표적으로 사용되고 있는 것이 레티놀과 레티노익산 등의 레티노이드이다. 레티노이드는 탁월한 탄력개선 효과를 나타내지만(Dermatology therapy 1998, 16, 357-364), 소량만을 피부에 적용하여도 자극이 나타난다는 단점을 가진다. 따라서 최근 들어, 이러한 원료들의 피부 자극 문제를 해소하기 위해 보다 안전하고 피부에 자극이 없는 천연 식물성 원료를 이용한 화장품 개발에 대한 요구가 높아지고 있다. Most of the cosmetics that have a skin elasticity promoting effect currently on the market using ingredients having the general efficacy, such as skin wrinkle removal or strengthening the dermis. Decreased skin elasticity is caused by decreased production or destruction of collagen and elastin caused by aging or ultraviolet rays. Various substances have been developed and used for the purpose of suppressing the reduction of collagen and elastin, which causes the decrease in elasticity. Among them, retinoids such as retinol and retinoic acid are typically used. Retinoids have an excellent elasticity-improving effect (Dermatology therapy 1998, 16, 357-364), but they have the disadvantage that irritation occurs even when only a small amount is applied to the skin. Therefore, in recent years, in order to solve the skin irritation problem of these raw materials, there is a demand for the development of cosmetics using natural vegetable raw materials that are safer and have no skin irritation.

최근 들어, 이러한 화장품 원료들에서 나타나는 피부 자극 문제를 해소하기 위해서 보다 안전하고 피부에 자극이 없는 천연 식물성 원료를 이용한 화장품 개발에 대한 요구가 높아지고 있다. 피부의 기본적인 구조가 피하지방조직에 의해서 유지되고, 이러한 피하지방조직은 피부의 볼륨과 강도를 좌우하는 역할을 하므로, 상기 설명한 바와 같이 기존에 사용되고 있던 피부 외곽층의 진피나 표피에 탄력을 부여하는 방법보다 지방조직의 부피를 증가시키는 것이 피부의 볼륨감 유지에 좋은 해결책이 될 수 있다.Recently, in order to solve the skin irritation problem that occurs in these cosmetic raw materials, there is a demand for the development of cosmetics using natural vegetable raw materials that are safer and have no skin irritation. Since the basic structure of the skin is maintained by the subcutaneous fat tissue, and the subcutaneous fat tissue plays a role in determining the volume and strength of the skin, as described above, it provides elasticity to the dermis or epidermis of the outer skin layer. Increasing the volume of fat tissue may be a better solution for maintaining skin volume.

피부의 기본적인 구조는 피하지방조직에 의해 유지되며, 이러한 피하지방조직은 피부의 볼륨과 강도를 좌우하는 역할을 한다. 따라서 위에서 언급한 바와 같이 기존에 사용되고 있던 피부 외곽층에 있는 진피나 표피에 탄력을 부여하는 방법보다 지방조직의 부피를 증가시키는 것이 피부의 볼륨 및 탄력을 유지할 수 있는 좋은 해결책이 될 수 있다.The basic structure of the skin is maintained by the subcutaneous fat tissue, which acts to determine the volume and strength of the skin. Therefore, as mentioned above, increasing the volume of adipose tissue may be a good solution to maintain the volume and elasticity of the skin rather than the method of imparting elasticity to the dermis or epidermis in the outer skin layer.

지방세포를 이용한 연구는 다양한 분야에서 활발하게 진행되고 있다. 일반적으로 사용되는 지방전구세포(preadipocyte)는 인슐린과 같은 분화 유도 물질에 의해 지방세포로 분화되는 특성을 가지고 있기 때문에, 널리 사용되는 세포이다. 이러한 지방세포를 이용한 연구에 있어서 최근 주목을 받고 있는 것이 중간엽줄기세 포(mesenchymal stem cell)이다. 중간엽줄기세포는 일반적으로 지방전구세포를 지방세포로 분화시키는 데 사용되는 방법과 유사한 방법을 이용하여 분화시킬 수 있기 때문에(Exp. Cell Res. 2006, 312, 1856-1864), 지방세포 분화 연구에 널리 이용되고 있다(Science 1999, 284, 143-146). 이러한 중간엽줄기세포는 지방세포뿐만 아니라 연골세포, 뼈세포 등의 다른 유형의 세포로도 분화될 수 있다고 알려져 있으며(J. Cell Sci. 2006, 119, 2204-2213), 신체 대부분의 조직에 분포되어 있다. Research using fat cells has been actively conducted in various fields. Preadipocytes generally used are widely used cells because they have the property of differentiating into adipocytes by differentiation inducing substances such as insulin. Recently, the mesenchymal stem cell (mesenchymal stem cell) is attracting attention in the study using these fat cells. Mesenchymal stem cells can be differentiated using methods similar to those used to differentiate adipocytes into adipocytes in general (Exp. Cell Res. 2006, 312, 1856-1864). It is widely used in (Science 1999, 284, 143-146). These mesenchymal stem cells are known to be differentiated not only into adipocytes but also into other types of cells such as chondrocytes and bone cells (J. Cell Sci. 2006, 119, 2204-2213), and are distributed in most tissues of the body. It is.

사람의 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cells)는 신체의 대부분의 조직에 분포되어 있다고 알려져 있으며, 이 성체줄기세포는 지방세포, 연골세포, 뼈세포 등으로 분화될 수 있다고 알려져 있다(Meirelles et al., J. Cell Sci. 2006, 119: 2204-2213). 중간엽줄기세포는 유래한 기원조직에 따라 미세한 차이는 있지만, 일반적으로 그 성격이나 특성이 유사한 것으로 알려져 있다(Sakaguchi et al., Arthritis Rheumat ., 2005. 52: 2521-2529). 이 중 사람의 골수(bone marrow)에서 유래한 중간엽줄기세포는 지방세포분화 등의 연구에 널리 응용되고 있다 (Pittenger et al., Science 1999, 284: 143-146). 사람의 피하 조직 등에서 채취한 전지방세포(preadipocyte)를 완전한 지방세포로 분화시키는 방법은 중간엽줄기세포를 지방세포로 분화시키는 방법에 비해 큰 차이가 없는 것으로 알려져 있어 사람의 지방세포 분화 연구에 골수 중간엽세포가 널리 이용되고 있다(Xu et al., Exp. Cell Res . 2006, 312: 1856-1864).Human mesenchymal stem cells are known to be distributed in most tissues of the body, and adult stem cells are known to be differentiated into adipocytes, chondrocytes, and bone cells (Meirelles et al. , J. Cell Sci . 2006, 119: 2204-2213. Although mesenchymal stem cells vary slightly depending on the tissue of origin, they are generally known to have similar characteristics or characteristics (Sakaguchi et al., Arthritis Rheumat . , 2005. 52: 2521-2529 ). Among them, mesenchymal stem cells derived from human bone marrow have been widely applied to studies on adipocyte differentiation (Pittenger et al., Science 1999, 284: 143-146). The method of differentiating preadipocytes from human subcutaneous tissues into complete adipocytes is known to be insignificant compared to the method of differentiating mesenchymal stem cells into adipocytes. Mesenchymal cells are widely used (Xu et al., Exp. Cell) Res . 2006, 312: 1856-1864.

당뇨병(diabetes)은 전세계적으로 중요한 성인병 중의 하나로서, 최근 우리나라에서도 급속한 경제 성장과 더불어 당뇨병 유병률이 7∼8%에 달하며, 60∼70 대의 중요한 사망원인이 되고 있다. 당뇨병 환자 중 상당 비율은 제 2형 당뇨병을 앓고 있다. 제 2형 당뇨병은 인슐린 분비 및 작용 이상, 및 인슐린 저항성으로 특징된다. Diabetes is one of the world's most important adult diseases. Recently, with the rapid economic growth in Korea, the prevalence rate of diabetes reaches 7-8%, and it is a major cause of death in the 60s and 70s. A significant proportion of diabetics suffer from type 2 diabetes. Type 2 diabetes is characterized by insulin secretion and dysfunction and insulin resistance.

현재까지 알려진 제 2형 당뇨병 치료제를 살펴 보면, 설포닐우레아(sulfonylurea) 계통의 약물이 있으며, 대표적으로 글리벤클라마이드 (glibenclamide)를 예로 들 수 있다. 이러한 약물들은 가장 먼저 당뇨병 치료제로 사용된 것으로서, 췌장의 베타세포에 직접적으로 작용하여 인슐린의 분비를 촉진시킴으로써 당뇨 치료 효능을 나타내었다. 하지만 이 약물의 큰 문제는 혈당 농도에 상관없이 효능을 나타냄으로써, 혈당이 낮아도 인슐린을 분비시켜 저혈당을 유발시킬 수 있다. 이는 저혈당증이 당뇨병의 주요사망원인인 심혈관 질환의 위험성 상승과 관련되기 때문에 문제가 된다. Looking at the type 2 diabetes therapeutics known to date, there is a sulfonylurea family of drugs, for example, glibenclamide. These drugs were the first to be used as a diabetic treatment, and showed a therapeutic effect on diabetes by directly acting on the beta cells of the pancreas to promote the secretion of insulin. The big problem with this drug, however, is its efficacy regardless of blood sugar levels, which can lead to hypoglycemia by secreting insulin even when blood sugar is low. This is problematic because hypoglycemia is associated with an increased risk of cardiovascular disease, which is the leading cause of diabetes.

또한 최근에는 제 2형 당뇨병에 대해 효과적인 새로운 종류의 합성 약물인 티아졸리딘다이온(Thiazolidinedione)이 보고되었다(Nolan 등, N. Engl. J. Med., 331: 1188-1193, 1994). 효과적인 당뇨병 치료제로서 티아졸리딘다이온의 효능은 지방유발 작용, 즉 전지방세포 및 줄기세포로부터 지방세포로 분화시키는 능력과 거의 일치한다(Harris 및 Kletzein, Mol. Pharmacol., 45 : 439-445, 1994 ; Wilson 등, J. Med. Chem., 39 : 665-668, 1996). 상기 보고된 지방 유발 효능의 티아졸리딘다이온은 인슐린 저항성을 개선시키며, 매우 많은 양을 투여할 때에도 저혈당 상태를 일으키지 않으면서 혈장 포도당 및 증가된 인슐린의 수준을 정상화 시킨다고 보고되었다. 하지만, 티아졸리딘다이온의 주요 문제점은 그의 생체 내 독 성 부작용으로, 독성을 나타내지 않는 천연물 중에서 지방분화 촉진 효능을 나타내어 당뇨병을 예방 및 치료할 수 있는 물질의 개발이 필요한 상황이다.In recent years, thiazolidinedione, a new class of synthetic drugs effective against type 2 diabetes, has also been reported (Nolan et al., N. Engl. J. Med., 331: 1188-1193, 1994). The efficacy of thiazolidinediones as an effective antidiabetic agent is almost consistent with adipogenic action, ie the ability to differentiate from cell and stem cells to adipocytes (Harris and Kletzein, Mol. Pharmacol., 45: 439-445, 1994 Wilson et al., J. Med. Chem., 39: 665-668, 1996). Thiazolidinediones of the reported fat-inducing efficacy have been reported to improve insulin resistance and to normalize the levels of plasma glucose and increased insulin without causing hypoglycemic conditions even at very high doses. However, the main problem of thiazolidinedione is its toxic side effects in vivo, and it is necessary to develop a substance capable of preventing and treating diabetes due to its ability to promote fat differentiation among natural products that are not toxic.

지방 세포 분화 과정 중 지방세포에서 분비되는 대표적인 아디포카인(adipokine) 중 하나인, 아디포넥틴(adiponectin)은 항당뇨작용을 비롯하여 다양한 효능을 나타내는 것으로 보고되었다(Clin Nutr. 2004 Oct.; 23(5):963-74, Adiponectin, the missing link in insulin resistance and obesity). 즉, 특히 당뇨병에 있어서 아디포넥틴은 인슐린 감수성을 증가시켜 혈당을 낮춤으로써 당뇨병을 예방하는 효능을 나타낸다. 또한 이러한 아디포넥틴은 지방세포가 분화되면서 발현이 증가하는 단백질로도 보고되었다. 따라서 지방 세포 분화 과정 중 아디포넥틴의 발현을 증가시키는 물질은 당뇨병 치료 효능을 나타낼 수 있을 것이다.Adiponectin, one of the representative adipokines secreted by adipocytes during adipocyte differentiation, has been reported to exhibit various effects including antidiabetic activity (Clin Nutr. 2004 Oct .; 23 (5)). : 963-74, Adiponectin, the missing link in insulin resistance and obesity). That is, especially in diabetes, adiponectin shows the effect of preventing diabetes by increasing insulin sensitivity and lowering blood sugar. In addition, such adiponectin has been reported as a protein that increases expression as adipocytes differentiate. Thus, substances that increase the expression of adiponectin during adipocyte differentiation may be effective in treating diabetes.

국내를 비롯한 아시아에서는 민간요법으로 여러 가지 약초들을 당뇨병 및 여러 질병의 치료제로 사용하여 왔다. 인슐린의 작용을 향상시키는 인슐린 민감성 효과, 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 효과, 탄수화물의 소화 흡수를 방해하는 α-글루코아밀라제 억제 효과를 가지고 있는 한약재로는 율무, 상백피, 둥굴레 뿌리, 오미자(대한민국 공개특허공보 제2005-90867호)가 알려져 있다. 목단피(대한민국 공개특허공보 제 2005-70704호)의 분획물에는 인슐린 민감성 물질이 함유되어 있는 것이 이미 발견되었다. 특히, 둥굴레 뿌리 추출물은 90% 췌장을 제거한 백서에서 인슐린 민감성을 호전시킴으로 체내 포도당 이용을 증가시켜 혈당을 강하시키는 효과를 나타내었다[Choi SB, Park S. 2002. The effects of water extract of Polygonatum Odoratum (Mill) Druce on insulin resistance in 90% pancreatectomized rats. J Food Sci 67: 2375-2379]. 그 외 대표적인 것으로는 후박(대한민국 공개특허공보 제2004-108500호), 인삼 잎(대한민국 공개특허공보 제2005-71459호), 황련(대한민국 공개특허공보 제2005-89238호)이 항당뇨 효능이 있음이 알려져 있다. 또한, 아디포넥틴의 발현을 증가시켜 항당뇨효능을 나타내는 물질도 여럿 알려져 있다. 대한민국 공개특허공보 제2005-95411호에는 한국산 조의 단백질 농축물을 유효성분으로 하여 혈중 아디포넥틴의 농도를 상승시키는 제2형 당뇨병 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 공개특허공보 제2005-115874호에는 시아니딘 화합물을 유효성분으로 하는 아디포넥틴 발현촉진제가 개시되어 있다.In Korea and in Asia, various medicinal herbs have been used for the treatment of diabetes and various diseases. Herbal medicines that have insulin-sensitive effects that enhance the action of insulin, insulin-like effects that act like insulin, and α-glucoamylase inhibitory effects that interfere with the digestion and absorption of carbohydrates include Yulmu, Baekilpi, Rhubarb root, and Schisandra chinensis. 2005-90867) is known. It has already been found that fractions of Mokdanpi (Korean Patent Publication No. 2005-70704) contain insulin sensitive substances. In particular, the extract of Rhubarb Root showed the effect of lowering blood glucose by increasing glucose utilization in the body by improving insulin sensitivity in 90% of the pancreas from which the pancreas was removed [Choi SB, Park S. 2002. The effects of water extract of Polygonatum Odoratum ( Mill) Druce on insulin resistance in 90% pancreatectomized rats. J Food Sci 67: 2375-2379. Other representatives include Hubac (Korean Patent Publication No. 2004-108500), Ginseng Leaf (Korean Patent Publication No. 2005-71459), and Hwangyeon (Korean Patent Publication No. 2005-89238) have antidiabetic effects. This is known. In addition, several substances are known which increase the expression of adiponectin and exhibit antidiabetic efficacy. Korean Patent Laid-Open Publication No. 2005-95411 discloses a composition for treating type 2 diabetes which increases the concentration of adiponectin in blood by using protein concentrate of Korean crude as an active ingredient, and Korean Patent Laid-Open Publication No. 2005-115874 discloses An adiponectin expression promoter using a nidine compound as an active ingredient is disclosed.

당뇨 연구에 사용되는 지방전구세포는 인슐린과 같은 유도 물질의 존재 하에서 지방세포로 분화되는 특성을 가지고 있기 때문에, 분화를 촉진하는 물질인 인슐린과 유사한 물질(인슐린성 물질)의 존재 여부를 탐색하는 실험에 사용한다. 또한, 이러한 연구에 있어서 지방전구세포(preadipocyte) 뿐만 아니라 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cells)도 사용되고 있다. 특히, 중간엽줄기세포는 피하 조직 등에서 채취한 지방전구세포를 완전한 지방세포로 분화시키는 방법과 거의 유사한 방법을 이용하여 지방세포로 분화시킬 수 있기 때문에(Xu et al., The use of small interfering RNAs to inhibit adipocyte differentiation in human preadipocytes and fetal-femor-derived mesenchymal cells. Exp. Cell Res. 312: 1856-1864, 2006), 지방세포 분화의 연구에 널리 이용되고 있다(Pittenger et al., Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science 284: 143-146, 1999). 이처럼 지방세포로 분화될 수 있는 중간엽줄기세포는 신체의 대부 분의 조직에 분포되어 있다. 중간엽줄기세포는 어느 조직으로부터 유래한 것인지에 따라 그 성질 또는 특성에 있어서 미세한 차이가 있지만, 일반적으로 유사한 성질 또는 특성을 가진 것으로 공지되어 있다(Sakaguchi et al., Comparison of human stem cells derived from various mesenchymal tissues. Arthritis Rheumat., 52: 2521-2529. 2005).Since fat precursor cells used in diabetes research have the property of differentiating into adipocytes in the presence of an inducer such as insulin, an experiment to investigate the presence of an insulin-like substance (insulin-like substance) that promotes differentiation. Used for In this study, not only preadipocytes but also mesenchymal stem cells are used. In particular, mesenchymal stem cells can be differentiated into adipocytes using a method similar to the method of differentiating adipocytes from subcutaneous tissue into complete adipocytes (Xu et al., The use of small interfering RNAs). to inhibit adipocyte differentiation in human preadipocytes and fetal-femor-derived mesenchymal cells.Exp. Cell Res. 312: 1856-1864, 2006), and is widely used for the study of adipocyte differentiation (Pittenger et al., Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.Science 284: 143-146, 1999). As such, mesenchymal stem cells that can differentiate into adipocytes are distributed in most tissues of the body. Mesenchymal stem cells have a slight difference in their properties or properties depending on which tissue they are derived from, but are generally known to have similar properties or properties (Sakaguchi et al., Comparison of human stem cells derived from various mesenchymal tissues.Arthritis Rheumat., 52: 2521-2529. 2005).

괄루인은 박과(Cucurbitaceae)에 속하는 하늘타리(Trichisanthes kirilowii Maxim) 종자로서 그 기원식물인 하늘타리는 다년생 덩굴식물이며 잎과 대생하는 덩굴손이 다른 물체에 잘 붙어 뻗어가고 고구마 같은 큰 괴근이 있다. 잎은 호생하며, 단풍잎처럼 5-7개로 갈라지고 각 열편에 톱니가 있다. 괄루인의 약미는 달고, 약성은 차다. 괄루인은 소염, 진해, 거담약으로서 흉통, 변비, 심장천식, 협심증에 응용할 수 있다 (박종희, 이정규 공저, 상용 약용식물도감, p449-p450).The Gluan is a seed of the Tricisanthes kirilowii Maxim belonging to the family Cucurbitaceae. The herbaceous plant is a perennial vine, whose leaves and perennial tendrils stick well to other objects and have large bulbs such as sweet potatoes. The leaves are regenerated, divided into 5-7 like maple leaves, with serrates on each lobe. Jalluin's sweetness is sweet, weakness is cold. It is applicable to chest pain, constipation, heart asthma and angina as anti-inflammatory, antitussive and expectorant (Jong-Hee Park, co-author Lee Jung-kyu, Commercial Medicinal Plant Book, p449-p450).

대한민국 특허등록공보 특1992-0003620 호에는 괄루인을 포함하는 생약재를 유효성분으로 함유하여 당뇨병을 예방 및 치료하기 위한 조성물이 개시되어 있다. Korean Patent Registration Publication No. 1992-0003620 discloses a composition for preventing and treating diabetes by containing a herbal medicine including a balcuin as an active ingredient.

마자인은 뽕나무과(Moraceae)의 삼(Cannabis sativa L.)의 종자를 건조한 것으로서, 그 기원식물인 삼은 중앙아시아 원산의 일년초로서 원줄기는 높이 1-2.5m로서 곧추 자라며 둔한 사각형이고 잔털이 있으며 녹색이다. 잎은 밑부분에서는 대생하고 엽병이 길며 5-9개로 갈라진 장상복엽이지만, 윗부분에서는 3개로 갈라지거나 갈라지지 않고 엽병도 짧다. 삼의 성분으로 알려진 테트라하이드로카나비놀(tetrahydrocannabinol)은 향정신성 작용을 가지며, 중추신경, 대뇌 척수에 대하 여 처음에는 쾌락, 환각을 동반하는 흥분이 오는 데, 이것이 경과되면 마비작용으로 이행된다. 동시에 감각령에 둔마가 와서 통각의 소실을 가져오고, 결국 동공산대에 이른다. 마자인은 장을 윤택하게 하며, 행인, 작약, 지실, 대황, 후박과 배합한 마자인환은 변비를 치료하는 데 사용한다. 즉 마자인은 장을 통하게 하여 변이 잘 나오게 한다. 변비에 응용할 수 있다(박종희, 이정규 공저, 상용 약용식물도감, p199-p201).Mazarine is a Cannabis from Moraceae. Seeds of sativa L.) are dried, whose origin is the annual herb of Central Asia, whose main stem is 1-2.5m in height, grows straight, dull squares, fine hairs and green. The leaves are vivid at the bottom, long lobes, long intestinal bile divided into 5-9, but the upper part is shorted without splitting or splitting into three. Tetrahydrocannabinol, known as hemp, has psychotropic effects, initially with pleasure and hallucinations in the central nervous system and cerebral spinal cord, which pass into paralysis. At the same time, the dense horse comes to the sensory spirits, bringing about the loss of pain, and eventually reaches the communist zone. As soon as it is intestine moisturizes, and combined with passersby, peony, fruit room, rhubarb, bakbak is used to treat constipation. In other words, as soon as the chapter through the stools to come out well. It can be applied to constipation (Park Jong-hee, co-author Lee Jeong-gyu, commercial medicinal plant illustration, p199-p201).

대한민국 공개특허공보 제2003-0059951호에는 마자인을 포함하는 생약 복합제 즉, 대황, 차전자, 욱리인, 빈랑, 마자인, 토사자, 우슬, 산약, 산수유, 지실, 방풍 및 독활로 이루어진 추출물을 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 공개특허공보 특1999-0084271호에는 마자인을 포함하는 변비증상 개선 효과가 있는 차 및 이의 제조방법이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허공보 제10-0630410호에는 마자인 추출물을 함유하는 여드름 예방 및 치료를 위한 외용제 조성물이 개시되어 있다. 이 발명은 낮은 농도에서 여드름균(P. acnes)의 증식억제 효과를 보이는 귀판, 노회, 마자인, 백굴채 및 현호색의 효과를 확인하고 이러한 증식 억제능을 가진 생약추출물을 함유하는 조성물에 대한 것이다.Korean Unexamined Patent Publication No. 2003-0059951 includes a herbal compound containing mazain, that is, an extract consisting of rhubarb, chason, ulriin, betel nut, mazain, earth and sand, dew, pesticide, cornus, fruiting, windproof and poisonous A composition for preventing and treating diabetes is disclosed, and Korean Laid-Open Patent Publication No. 1999-0084271 discloses a tea having a constipation symptom improvement effect including mazain and a method for manufacturing the same, and the Republic of Korea Patent Publication No. 10- 0630410 discloses a topical composition for the prevention and treatment of acne containing the extract of Mazarin. The present invention relates to a composition containing the herbal extract having the ability to inhibit the growth of the ear, synagogues, maine, white oysters and corydalis showing a proliferation inhibitory effect of P. acnes at low concentrations.

이에 본 발명자들은 지방조직을 이루는 지방세포의 분화를 촉진시키는 천연물을 찾고자 노력한 결과, 괄루인 또는 마자인 추출물을 중간엽줄기세포에 처리할 경우 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 과정을 효과적으로 촉진함과 동시에 아디포넥틴의 발현을 증가시키는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다. Therefore, the present inventors have tried to find a natural product that promotes the differentiation of fat cells that make up the adipose tissue, and when the extracts of gallruin or mazarine to mesenchymal stem cells, the mesenchymal stem cells effectively promote the process of differentiation into adipocytes. At the same time it was found to increase the expression of adiponectin and completed the present invention.

따라서, 본 발명의 목적은 본 발명은 인간 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화를 촉진하는 조성물에 관한 것이다.Accordingly, an object of the present invention relates to a composition for promoting differentiation of human mesenchymal stem cells into adipocytes.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 괄루인 추출물 및 마자인 추출물을 적어도 1종 이상 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for promoting adipocyte differentiation containing at least one of the parenthesis extract and the mother extract as an active ingredient.

본 발명에 의한 조성물은 괄루인 추출물 및 마자인 추출물을 적어도 1종 이상 유효성분으로 함유함으로써 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것을 촉진시킴으로써 미용 또는 성형 목적의 지방조직 증가에 유용하였다.The composition according to the present invention was useful for increasing fat tissue for cosmetic or cosmetic purposes by promoting the differentiation of mesenchymal stem cells into adipocytes by containing at least one active ingredient, such as the parenthesis extract and the mother extract as active ingredients.

또한 본 발명에 의한 조성물은 아디포넥틴 발현을 증가시켰고 이로 인하여 제 2형 당뇨병의 예방 또는 치료에 유용하였다.The compositions according to the invention also increased adiponectin expression and were useful for the prevention or treatment of type 2 diabetes.

본 발명은 괄루인 및/또는 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for promoting adipocyte differentiation, comprising a parenthesis and / or as soon as possible extract as an active ingredient.

본 발명에서 사용하는 용어 "지방세포 분화"는 동물, 바람직하게는 포유동물의 지방전구세포 또는 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것이고, 보다 바람직하게는 인간의 중간엽줄기세포가, 가장 바람직하게는 인간의 골수로부터 유래한 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것이다.As used herein, the term "fat cell differentiation" refers to the differentiation of fat precursor cells or mesenchymal stem cells of an animal, preferably a mammal, into adipocytes, and more preferably human mesenchymal stem cells. Preferably, mesenchymal stem cells derived from human bone marrow differentiate into adipocytes.

또한 본 발명은 괄루인 및/또는 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하여 중간엽줄기세포(Mesenchymal Stem Cell, MSC)의 분화를 촉진함으로써, 피하지방층을 구성하거나 지방세포를 제공하여 피부의 볼륨과 탄력을 부여하는 효능을 갖는 미용 또는 성형 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention contains the extracts of the parenthesis and / or mzain as an active ingredient to promote differentiation of mesenchymal stem cells (MSC), to form a subcutaneous fat layer or to provide fat cells to the skin volume and elasticity It relates to a cosmetic or cosmetic composition having the effect of imparting.

또한 본 발명은 괄루인 및/또는 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하여 중간엽줄기세포의 분화를 촉진함으로써, 아디포넥틴 발현을 증가시키는 제 2형 당뇨병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a composition for preventing or treating type 2 diabetes by increasing the expression of adiponectin by promoting the differentiation of mesenchymal stem cells by containing the extracts of the parentheses and / or mazarin as an active ingredient.

본 발명에서 사용하는 괄루인 또는 마자인 추출물은 괄루인 또는 마자인을 물 또는 에탄올과 같은 유기용매를 사용하여 당업계에 잘 알려진 통상적인 추출 방법에 의해 추출할 수 있다. 상기 괄루인 및 마자인 추출물은 지방세포의 분화를 촉진한다. The parenthesis or motherzain extract used in the present invention can be extracted by a conventional extraction method well known in the art using an organic solvent such as water or mother extract. The parenthesis and mother extract extract promotes the differentiation of adipocytes.

본 발명에 의한 중간엽줄기세포의 분화 촉진용 미용 또는 성형 조성물의 적 용 부위는 신체의 모든 지방 조직을 포함하며, 특정 부위에 한정하지는 않지만, 예를 들면, 지방층이 많은 여성의 가슴 부위를 포함할 수 있다.The application site of the cosmetic or cosmetic composition for promoting the differentiation of mesenchymal stem cells according to the present invention includes all the adipose tissue of the body, but is not limited to a specific site, for example, includes a breast region of a woman with a lot of fat layers. can do.

또한, 상기 지방세포 분화 촉진 효과는 제 2형 당뇨병의 예방 및 치료 증가 효과적일 수 있다. In addition, the fat cell differentiation promoting effect may be effective to increase the prevention and treatment of type 2 diabetes.

상기 지방조직의 증가 효과로는 미용 또는 성형 목적의 지방조직 증가 효과가 있으나, 이로 한정되지 않는다. 또한, 상기 지방세포 분화 촉진 효과는 제 2형 당뇨병의 예방 및 치료 증가 효과일 수 있다.The increasing effect of the adipose tissue, but the effect of increasing the adipose tissue for cosmetic or cosmetic purposes, but is not limited thereto. In addition, the fat cell differentiation promoting effect may be an effect of increasing the prevention and treatment of type 2 diabetes.

본 발명에 의한 조성물이 피부 외용제 조성물로 사용될 경우에 신체 부위에 따라, 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않는다. 구체적으로 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지 크림, 영양 크림, 팩, 젤 또는 피부 점착 타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있으며, 또한 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있다. When the composition according to the present invention is used as a skin external preparation composition, it is not particularly limited in the formulation according to the body part. Specifically, for example, it may be a cosmetic composition having a formulation of a softening lotion, nourishing lotion, massage cream, nutrition cream, pack, gel or skin adhesive type cosmetics, and may also be a lotion, ointment, gel, cream, patch or spray Transdermal dosage forms.

또한 각 제형에 의한 외용제 조성물에 있어서, 상기한 본 발명의 괄루인 또는 마자인 추출물 이외의 다른 성분들은 기타 피부 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 이 경우 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다.In addition, in the external preparation composition according to each formulation, other ingredients other than the above-mentioned parenthesis or as soon as extract of the present invention can be appropriately selected and blended by those skilled in the art without difficulty according to the formulation or purpose of use of other external preparations. If applied simultaneously with other raw materials, synergistic effects may occur.

또한, 본 발명에 의한 조성물이 약학 조성물로 사용될 경우에, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제 학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다. In addition, when the composition according to the present invention is used as a pharmaceutical composition, it further contains pharmaceutical supplements and other therapeutically useful substances such as preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifying accelerators, salts and / or buffers for controlling osmotic pressure. And may be formulated in various oral or parenteral dosage forms according to conventional methods.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신) 및 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard and soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, etc. These formulations may contain diluents (e.g., lactose, dextrose, sucrose, Mannitol, sorbitol, cellulose and glycine) and glidants such as silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salts and polyethylene glycols. Tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally starch, agar, alginic acid or its sodium salt Pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, and sweeteners. Tablets may be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods. Also representative of parenteral formulations are injectable formulations, preferably aqueous isotonic solutions or suspensions.

그러나, 활성 성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다. 일일 투여량은 본 발명에 따른 괄루인 추출물 또는 마자인 추출물을 동결 건조하였을 때의 양을 기준으로 0.1∼100mg/kg로, 하루 1회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 바람직하다.However, it should be understood that the actual dosage of the active ingredient should be determined in light of several relevant factors such as the severity of the symptom, the route of administration chosen, the subject's age, sex, weight and health condition, and therefore the dosage may be determined in any way. Also, the scope of the present invention is not limited. The daily dosage is 0.1-100mg / kg based on the amount of freeze-dried extract of the parenthesis or the extract according to the present invention, preferably administered once to several times a day.

이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

[[ 실시예Example 1]  One] 괄루인Gluluin 추출물의 제조 Preparation of Extract

괄루인(생약명: Trichosanthis Semen, 중국산) 30g을 에탄올 (95.0∼95.5v/v%), 200ml에 넣은 다음 ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR(DIONEX Corporation) 기기를 이용하여 50℃에서 1500psi 압력하에 20분간 분쇄하였다. 또한 초음파 세척기(BRANSON Ultrasonics corporation) 소니케이터 기기를 이용하여 50℃에서 3일 정도 추가 분쇄하였다. 이렇게 분쇄된 괄루인 추출물을 모듈 스핀 40(Modul spin 40; Biotron corporation) 기기를 이용하여 40℃에서 24시간 동안 건조하였으며 괄루인 추출물 시료를 제조하였다.30 g of guar luin (pharmaceutical name: Trichosanthis Semen, made in China) was added to 200 ml of ethanol (95.0 to 95.5 v / v%), and then pulverized for 20 minutes at 1500 ° C. at 50 ° C. using an ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR (DIONEX Corporation) instrument. In addition, using an ultrasonic cleaner (BRANSON Ultrasonics corporation) sonicator device was further ground for 3 days at 50 ℃. The pulverized extract extract was then dried at 40 ° C. for 24 hours using a module spin 40 (Modul spin 40; Biotron corporation) instrument to prepare a sample extract of extract.

[[ 실시예Example 2]  2] 마자인Mazain 추출물의 제조 Preparation of Extract

마자인(생약명: Cannabis Semen, 중국산) 30g을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 마자인 추출물 시료를 제조하였다.As soon as 30 g of Mazarin (Cannabis Semen, Chinese) was extracted in the same manner as in Example 1 to prepare a sample of Mazarine extract.

[[ 시험예Test Example 1] 인간의 골수 유래  1] derived from human bone marrow 중간엽줄기세포의Mesenchymal stem cells 지방세포로의 분화 촉진 효능  Efficacy in promoting differentiation into adipocytes

인간의 골수 유래 중간엽줄기세포(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)를 론자사(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하여 론 자사의 지침서에 따라 배양하였다. 지방세포 분화는 인도메타신(indomethacin) 대신 트로글리타존(Troglitazone)을 사용하여 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 점을 제외하고 론자사에서 권장하는 방법을 사용하여 달성하였다. 구체적으로, 중간엽줄기세포의 배양액에 인슐린 1 μg/ml, 덱사메타손(Dexamethasone, DEXA) 1 μM, 이소부틸메틸크산틴(isobutyl methyl xanthine, IBMX) 0.5 mM 을 넣고 배양하여 줄기세포를 지방세포로 분화시켰으며, 지방세포 분화 유도 시에 괄루인 또는 마자인 추출물을 각각 1, 3 및 10 ppm씩 배지에 첨가하였다. 양성 대조군으로는 글리벤클라마이드(Glibenclamide) 10 mM과 및 트로글리타존(Troglitazone; TRO) 2 mM을 각각 사용하여, IDX 배지와 같이 처치하였다. 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 시작한 지 14일 후, 세포 배양액을 제거하고, 10 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 10% 포르말린/PBS 용액 0.2 ml/㎠을 사용하여 세포를 10분간 고정시켰다. 고정된 세포를 60% 이소프로판올 용액 0.5 ml/㎠로 1회 세척하고, 오일레드오(Oil Red O)를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액 0.2 ml/㎠로 10분간 지방세포 내의 지질체를 염색하였다. 이어서, 헤마톡실린(hematoxylin)으로 재염색을 행하여 세포핵을 쉽게 구분되도록 한 후 현미경으로 관찰하였고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다. Human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs) were purchased from Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA and cultured according to Ron's instructions. Adipocyte differentiation was achieved using the method recommended by Lonza, except that Troglitazone was used instead of indomethacin to induce adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells. Specifically, 1 μg / ml insulin, 1 μM dexamethasone (DEXA) and 0.5 mM isobutyl methyl xanthine (IBMX) were cultured in the culture of mesenchymal stem cells to differentiate stem cells into adipocytes. At the time of inducing adipocyte differentiation, the root extract or the mother extract were added to the medium by 1, 3 and 10 ppm, respectively. As a positive control, 10 mM of glibenclamide and 2 mM of troglitazone (TRO) were used, respectively, and treated with IDX medium. After 14 days of adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells, the cell culture medium was removed, the cells were washed with 10 ml of phosphate buffered saline (PBS), and then 0.2 ml / cm 2 of 10% formalin / PBS solution. Cells were fixed for 10 minutes. The fixed cells were washed once with 0.5 ml / cm 2 of 60% isopropanol solution, and lipid bodies were stained for 10 minutes with 0.2 ml / cm 2 staining solution in which Oil Red O was dissolved in 60% isopropanol. Subsequently, restaining with hematoxylin was performed to make cell nuclei easily distinguished, and then observed under a microscope. The results are shown in FIGS. 1 and 2.

도 1 및 도 2의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 의한 괄루인 및 마자인 추출물은 중간엽줄기세포의 세포 사멸을 유도하지 않으면서 지방세포의 분화를 촉진하였다.As can be seen in the results of Figures 1 and 2, the extracts of the Gluluin and Mazarin according to the present invention promoted the differentiation of adipocytes without inducing cell death of mesenchymal stem cells.

[[ 시험예Test Example 2] 인간  2] human 중간엽줄기세포의Mesenchymal stem cells 지방세포 분화 촉진 효과에 대한 정량적 측정 Quantitative measurement of fat cell differentiation promoting effect

상기 시험예 1과 동일한 방법으로 중간엽줄기세포로부터 지방세포의 분화를 유도하되, 7개의 군으로 나누어 A군에는 인슐린 1μg/ml 만 처리하고(대조군), B 군에는 인슐린 1 μg/ml, DEXA 1 mM 및 IBMX 0.5 mM(하기, IDX)를 처리하였으며, C군은 양성 대조군으로서 IDX 외에 글리벤클라마이드 10 mM 을 더 처리하였다. D, E, F 군은 IDX와 괄루인 또는 마자인 추출물을 각각 1, 3 및 10 ppm씩 처리하였다. G군은 또 다른 양성 대조군으로서 IDX 외에 트로글리타존 2 mM을 처리하였다. 지방세포 분화 정도를 측정하기 위하여, 시험예 1에서와 같이 지방세포를 오일레드오로 염색한 후, 염색된 오일레드오를 100% 이소프로판올 용액으로 용출시킨 후 500 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다(각 데이터 값은 인슐린 대조군으로 보정하였다).Induced differentiation of adipocytes from mesenchymal stem cells in the same manner as in Test Example 1, divided into seven groups treated only 1μg / ml of insulin in group A (control), 1 μg / ml of insulin in group B, DEXA 1 mM and IBMX 0.5 mM (below IDX) were treated, and group C was further treated with 10 mM of glibenclamide in addition to IDX as a positive control. Groups D, E, and F were treated with 1, 3, and 10 ppm of IDX, and parental or mother extract, respectively. Group G was treated with troglitazone 2 mM in addition to IDX as another positive control. In order to measure the degree of adipocyte differentiation, fat cells were stained with oil red o as in Test Example 1, and the absorbed oil red o was eluted with 100% isopropanol solution and absorbance was measured at 500 nm. 3 and 4 (each data value was corrected with the insulin control).

도 3의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, IDX 에 의해 지방세포로의 분화를 유도한 경우, 괄루인 추출물이 처리되지 않은 것에 비해 중간엽줄기세포의 지방세포 분화가 각각 3, 10 ppm의 괄루인 추출물이 처리된 실험군에서 23%, 49% 정도 증가하였다. 이 결과로부터, 괄루인 추출물 10 ppm 처치 시 인간의 골수 유래 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 용량 의존적으로 촉진한다는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 증가는 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 t 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다.As can be seen from the results of FIG. 3, when IDX induced differentiation into adipocytes, the adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells was 3 and 10 ppm, respectively, compared to the untreated guruin extract. In the treated experimental group, it increased by 23% and 49%. From this result, it was confirmed that administration of 10 ppm of the parenthesis extract dose-dependently promote the adipocyte differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells. This increase was statistically significant, and the statistics were verified by the two-tailed Student's t test, indicating that there was a significant difference when the p value was less than 0.05.

또한 도 4의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, IDX 에 의해 지방세포로의 분화를 유도한 경우, 마자인 추출물이 처리되지 않은 것에 비해 중간엽줄기세포의 지 방세포 분화가 각각 3, 10 ppm의 마자인 추출물이 처리된 실험군에서 16%, 42% 정도 증가하였다. 이 결과로부터, 마자인 추출물 10 ppm 처치 시 인간의 골수 유래 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 용량 의존적으로 촉진한다는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 증가는 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 t 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다.In addition, as can be seen from the results of Figure 4, when the differentiation of adipocytes by IDX, fat cell differentiation of mesenchymal stem cells as soon as 3, 10 ppm as compared to the untreated as soon as extract Phosphorus extract increased by 16% and 42% in the experimental group. From these results, it was confirmed that the treatment of adipocyte differentiation of the bone marrow-derived mesenchymal stem cells promoted dose-dependently in 10 ppm treatment. This increase was statistically significant, and the statistics were verified by the two-tailed Student's t test, indicating that there was a significant difference when the p value was less than 0.05.

[[ 시험예Test Example 3] 인간의 골수  3] human bone marrow 중간엽Mesenchyme 줄기세포의  Stem cell 아디포넥틴Adiponectin 발현량 측정 Expression level measurement

아디포넥틴은 인슐린 감수성을 증가시켜 혈당을 낮춤으로써 당뇨병을 예방하는 효능을 나타낸다. 따라서 지방 분화 촉진의 마커인 동시에 항당뇨 효능을 나타내는 아디포넥틴의 양을 각 세포 배양 배지에서 측정하였다. Adiponectin has shown efficacy in preventing diabetes by increasing insulin sensitivity and lowering blood sugar. Therefore, the amount of adiponectin that is a marker of promoting fat differentiation and exhibits antidiabetic efficacy was measured in each cell culture medium.

상기 시험예 2에서와 같이, 중간엽줄기세포로부터 지방세포의 분화를 유도하되, 6개의 군으로 나누어 실험을 실시하였다. A 군에는 인슐린 1 μg/ml만 처리하였고(대조군), B 군에는 인슐린 1 μg/ml, DEXA 1 μM 및 IBMX 0.5 mM (하기 IDX)를 처리하였으며, C 군은 양성 대조군으로서 IDX 외에 글리벤클라마이드(glibenclamide) 10 μM을 처리하였다. D, E, F 군은 IDX 와 괄루인 추출물 또는 마자인 추출물을 1, 3, 10 ppm을 처리하였다. 트로글리타존은 아디포넥틴의 양을 급격하게 증가시키기 때문에 양성 대조군에서 제외하였으며, 글리벤클라마이드(glibenclamide)만 양성 대조군으로 사용하였다. As in Experiment 2, the differentiation of adipocytes was induced from mesenchymal stem cells, but the experiment was divided into six groups. Group A was treated with only 1 μg / ml insulin (control), group B was treated with insulin 1 μg / ml, DEXA 1 μM and IBMX 0.5 mM (IDX), and group C was a positive control in addition to IDX as glibenclamide. ) 10 μM. Groups D, E, and F were treated with 1, 3, and 10 ppm of IDX, a parenthesis extract, or a mother extract. Troglitazone was excluded from the positive control group because it dramatically increased the amount of adiponectin, and only glibenclamide was used as the positive control group.

아디포넥틴의 발현량을 측정하기 위하여 지방 분화 14 일 째 세포 배양 배지를 채취한 후, 아디포넥틴 ELISA 키트(R & D system, cat.no DY1065)를 이용하여 아디포넥틴의 양을 정량하였으며(각 데이터 값은 인슐린 대조군으로 보정하였다), 그 결과를 도 5 및 도 6에 나타내었다. In order to measure the expression level of adiponectin, the cell culture medium was taken on day 14 of adipose differentiation, and the amount of adiponectin was quantified using the adiponectin ELISA kit (R & D system, cat.no DY1065) (each data value was insulin And the results are shown in FIGS. 5 and 6.

도 5의 결과에서, IDX 에 의해 지방세포로의 분화를 유도한 경우, 괄루인 추출물이 처리되지 않은 것에 비해 중간엽줄기세포의 지방세포 분화가 각각 1, 3, 10 ppm의 괄루인 추출물이 처리된 실험군에서 아디포넥틴의 발현량이 1.8 배, 2.0 배 및 3.8 배 정도 증가하였다. 양성 대조군으로 글리벤클라마이드 (glibenclamide)를 10mM 처치하였을 때는 6.0 배 정도 증가하였다. 이러한 결과로부터, 괄루인 추출물 함유 조성물이 인간의 골수 중간엽줄기세포의 지방 분화 과정에서 지방 분화의 대표적 마커인 아디포넥틴의 양을 증가시키는 것을 발견하였다. 이러한 증가는 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 T 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다.In the results of Fig. 5, when the differentiation of adipocytes by IDX was induced, the adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells was treated with 1, 3, and 10 ppm of the goblet extract of mesenchymal stem cells, respectively. In the experimental group, the expression level of adiponectin was increased by 1.8, 2.0 and 3.8 times. When 10 mM of glibenclamide was treated as a positive control, it increased by 6.0 times. From these results, it was found that the parenthesis extract-containing composition increases the amount of adiponectin, which is a representative marker of adipose differentiation, during adipose differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells. This increase was statistically significant, and the statistics were verified by a two-tailed Student's T test, indicating that there was a significant difference when the p value was less than 0.05.

또한 도 6의 결과에서, IDX 에 의해 지방세포로의 분화를 유도한 경우, 마자인 추출물이 처리되지 않은 것에 비해 중간엽줄기세포의 지방세포 분화가 각각 1, 3, 10 ppm의 마자인 추출물이 처리된 실험군에서 아디포넥틴의 발현량이 1.8 배, 2.1 배, 3.3 배 정도 증가하였다. 양성 대조군으로 글리벤클라마이드 (glibenclamide)를 10mM 처치하였을 때는 10 배 정도 증가하였다. 이러한 결과로부터, 마자인 추출물 함유 조성물이 인간의 골수 중간엽줄기세포의 지방 분화 과정에서 지방 분화의 대표적 마커인 아디포넥틴의 양을 증가시키는 것을 발견하였다. 이러한 증가는 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 T 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다.In addition, in the results of Fig. 6, when the differentiation of adipocytes by IDX was induced, the adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells was treated with 1, 3, and 10 ppm of the extracts of mesenchymal stem cells, respectively. In the experimental group, the expression level of adiponectin increased 1.8 times, 2.1 times, and 3.3 times. When 10 mM of glibenclamide was treated as a positive control, it increased by about 10 times. From these results, it was found that as soon as the composition containing the extract extract increases the amount of adiponectin, a representative marker of fat differentiation during the fat differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells. This increase was statistically significant, and the statistics were verified by a two-tailed Student's T test, indicating that there was a significant difference when the p value was less than 0.05.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.Examples of preparations for the compositions of the present invention are illustrated below.

[제제예 1] 정제Preparation Example 1 Tablet

본 발명에 따른 괄루인 또는 마자인 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.The tablets were prepared by mixing 100 mg of gall-in or mazain extract according to the present invention, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate, followed by compression according to a conventional method for preparing tablets.

[제제예 2] 캡슐제Preparation Example 2 Capsule

본 발명에 따른 괄루인 또는 마자인 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.Capsules were prepared by mixing 100 mg of gall-in or mazain extracts according to the present invention, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate, and then filling the gelatin capsules according to a conventional method for preparing capsules.

도 1은 괄루인 추출물 처리 후 중간엽줄기세포를 관찰한 현미경 사진이다.Figure 1 is a micrograph of the mesenchymal stem cells after treatment with the extract.

도 2는 마자인 추출물 처리 후 중간엽줄기세포를 관찰한 현미경 사진이다.Figure 2 is a micrograph observing mesenchymal stem cells after the treatment as soon as extract.

도 3은 괄루인 추출물에 의한 지방세포 분화 촉진 결과를 보여주는 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the results of promoting the adipocyte differentiation by the extract.

도 4는 마자인 추출물에 의한 지방세포 분화 촉진 결과를 보여주는 그래프이다.Figure 4 is a graph showing the results of promoting adipocyte differentiation by extracts as soon as possible.

도 5는 괄루인 추출물에 의한 아디포넥틴 발현 증가를 보여주는 그래프이다.Figure 5 is a graph showing the increase in adiponectin expression by the parenthesis extract.

도 6은 마자인 추출물에 의한 아디포넥틴 발현 증가를 보여주는 그래프이다.Figure 6 is a graph showing the increase in adiponectin expression by the extract as soon as possible.

Claims (6)

괄루인 추출물 및 마자인 추출물 중 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 조성물.A composition for promoting adipocyte differentiation comprising at least one of a parenthesis extract and a mother extract as an active ingredient. 괄루인 추출물 및 마자인 추출물 중 1종 이상을 유효성분으로 함유하여 아디포넥틴 발현을 촉진시키는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물.A composition for preventing or treating diabetes, which promotes adiponectin expression by containing at least one of a parenthesis extract and a mother extract as an active ingredient. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell)가 지방세포로 분화되는 것을 촉진하는 것임을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1 or 2, wherein the composition promotes differentiation of mesenchymal stem cells into adipocytes. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 지방조직을 증가시키는 것임을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1 or 2, wherein the composition increases adipose tissue. 제 3항에 있어서, 상기 중간엽줄기세포가 인간의 중간엽줄기세포임을 특징으로 하는 조성물. The composition of claim 3, wherein the mesenchymal stem cells are human mesenchymal stem cells. 제 5항에 있어서, 인간의 중간엽줄기세포가 인간 골수 유래의 중간엽줄기세포임을 특징으로 하는 조성물.6. The composition of claim 5, wherein the mesenchymal stem cells of human are mesenchymal stem cells derived from human bone marrow.
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