KR20090061727A

KR20090061727A - 인간 씨티알피1 유전자의 에스아이알엔에이, 및 이를포함하는 고혈압 및 심혈관계 질환 치료용 약학조성물

Info

Publication number: KR20090061727A
Application number: KR1020070128640A
Authority: KR
Inventors: 양영; 김근영; 전준호
Original assignee: 숙명여자대학교산학협력단
Priority date: 2007-12-12
Filing date: 2007-12-12
Publication date: 2009-06-17
Also published as: KR100976170B1

Abstract

본 발명은 인간 CTRP1 단백질의 생성을 억제하는 인간 CTRP1 유전자의 siRNA 및 이를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 인간 CTRP1 유전자 또는 인간 CTRP1 단백질을 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물 및 이를 이용한 스크리닝 방법을 제공한다. 추가로, 본 발명은 인간 CTRP1 단백질에 대한 항체를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단 조성물 및 이를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단용 키트를 제공한다.

CTRP1, 알도스테론, 고혈압, 심혈관질환

Description

인간 씨티알피1 유전자의 에스아이알엔에이, 및 이를 포함하는 고혈압 및 심혈관계 질환 치료용 약학조성물{siRNA of human CTRP1 gene, and pharmaceutical composition comprising the siRNA for treating hypertension and cardiovascular diseases}

본 발명은 상보성 c1q-TNF-연관 단백질인 CTRP 중 CTRP1에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 CTRP1의 기능 조절을 통한 고혈압 및 심혈관계 질환의 치료에 관한 것이다.

1995년 렙틴(leptin)의 발견을 시작으로 지방세포에서 TNF-α, VEGF, IL-6, 아디포넥틴(adiponectin), 레시스틴(resistin) 등과 같은 다양한 단백질(adipokines)이 분비되는 것으로 밝혀졌다. 따라서 지방세포는 더 이상 잉여 에너지 저장 창고가 아닌 새로운 내분비기관으로 생각할 정도로 그 중요성이 부각되고 있다. 다른 내분비기관과는 달리 지방세포는 내장기관, 피하조직, 심장, 혈관, 림프구, 신장, 부신, 골수 심지어는 뇌의 일부 조직을 포함해 우리 몸 곳곳에 분포하고 있으며, 지방세포로부터 분비된 아디포카인(adipokines)은 에너지 대사를 비롯한 다양한 인체의 항상성(osteogenesis, hematopoiesis, 염증, hemostasis, 보체 활성, reproduction, hemorheology, feeding behaivior) 유지에 관여하고 있다. 이러한 지방세포의 항상성이 붕괴되면 인체는 비만으로부터 야기되는 당뇨병을 비롯하여 다양한 성인병에 걸리기 쉽게 된다. 따라서 내분비기관으로써 지방조직이 분비하는 아디포카인들에 대한 연구는 암, 고혈압, 비만, 고지혈, 당뇨와 같은 다양한 질병을 이해하고 치료법을 개발하는데 있어서 매우 중요하다. 최근에 아디포카인의 하나로서 많은 연구가 이루어지고 있는 단백질은 아디포넥틴(adiponectin)이다. 이 아디포넥틴은 지방세포에서만 특이적으로 발현이 되지만 비만인 경우에는 발현이 감소하는 것으로 잘 알려져 있다. 아디포넥틴은 정상인에 비하여 당뇨, 비만 환자에서 혈중농도가 현저히 감소되어 있는 것으로 알려져 있으며, 당뇨, 비만 모델 동물에 아디포넥틴을 주사하면 당뇨, 비만의 증상을 완화시키며, 혈관 대식세포에 의한 산화된 LDL의 섭취를 막아서 동맥경화의 촉진을 막는 기능을 수행하며, 항염증반응에도 관여하고 있으며, 유방암을 비롯한 다양한 종류의 암환자에서 혈중농도가 감소되어 있어 이들 암에 대한 위험인자로 알려져 있다.

따라서 아디포넥틴은 현재 비만과 성인병을 연결하는 중요한 단백질로 평가 받고 있다. 아디포넥틴은 N-말단에 콜라겐 유사 도메인과 C-말단에 c1q 구형(globular) 도메인을 가지고 있는데, 이러한 아디포넥틴의 단백질 도메인과 유사성을 가지고 있는 아디포넥틴 패밀리를 상보성 c1q-TNF-연관 단백질(CTRPs, complement C1q TNF related proteins)이라 한다.

아디포넥틴 패밀리는 CTRP 1-7로 7개가 존재하는 것으로 현재 알려져 있으며, CTRP2는 글리코겐 축적과 지방산 산화를 증가시키는 AMP-활성화 단백질 키나제 의 인산화를 유도하는 것으로 알려져 있고, CTRP3는 CORS26 (collagenous repeat-containing sequence of 26-kD)이라는 이름으로 보고되었으며, 연골세포의 분화에 관련이 있다고 보고되었다.

CTRP1은 최근 혈관 벽 조직에서 발현되는 것으로 보고되었으며, 이것은 폰빌리브란트 인자(von-Willebrand factor)가 콜라겐에 결합하는 것을 방해하여 콜라겐에 의해 유도된 혈소판 응집을 억제한다고 보고되었으며, 비만 생쥐(db / db mice)와 당뇨병 모델 쥐(Zucker diabetic fatty(fa/fa) rats)의 지방조직에서 발현이 증가되는 것으로 보고되었다. CTRP1의 유전자의 염기 서열 및 단백질의 아미노산 서열을 공지되어 있으며 그 서열은 각각 서열 목록의 서열 번호 1 및 서열 번호 2와 같다.

한편, 스테로이드 호르몬인 알도스테론은 부신 피질의 구상대(zona glomerulosa)에서 합성되며 염분과 수분의 균형에 중요한 역할을 한다. 이러한 알도스테론의 효과는 신장, 결장, 침샘 등에서 무기질 코르티코이드 수용체 (mineralocorticoid receptor)에 알도스테론이 결합함으로써 만들어지며, 부신 피질에서 알도스테론이 많이 분비되면 고혈압 및 심혈관질환을 일으키는 것으로 알려져 있다.

알도스테론 분비에 가장 중요한 자극은 안지오텐신 II와 세포 외부의 칼륨이다. 레닌-안지오텐신-알도스테론(renin-angiotensin-aldosterone, RAAS) 시스템은 알도스테론의 합성에 중요한 역할을 하며, 신장에서 만들어진 레닌(renin)은 간에서 만들어진 안지오텐시노겐(angiotensinogen)을 안지오텐신 I(angiotensin I)으로 전환시키며, 안지오텐신 I은 혈관의 내벽에 존재하는 안지오텐신 전환 효소(angiotensin converting enzyme, ACE)에 의해 안지오텐신 II가 된다. 안지오텐신 II는 안지오텐신 수용체 I(AT1)과 안지오텐신 수용체 II(AT2)를 통하여 효과를 발휘하게 된다.

안지오텐신 II에 의한 알도스테론의 합성은 알도스테론 신타아제(cytochrome P450 11β-hydroxyase2;CYP11B2)에 의해 코르티코스테론(corticosterone)의 알도스테론으로의 전환에 의하여 만들어진다.

이렇듯 안지오텐신 II에 의한 알도스테론의 생산의 증가는 부신에서 이루어지게 되는데, 본 발명자들은 CTRP1의 경우 부신의 구상대 (zona glomerulosa)에 그 발현이 높은 것을 확인하였다.

이에 본 발명자들은 CTRP1과 알도스테론의 상관 관계를 확인하기 위하여 연구를 거듭한 결과, 부신 피질 세포주인 H-295R세포주에 CTRP1을 처리하면 알도스테론으로 전환을 유도하는 안지오텐신 신타아제(CYP11B2)의 발현이 증가되고 알도스테론의 생산도 증가되는 한편, CTRP1 유전자의 siRNA를 상기 세포주에 처리하여 CTRP1의 생성을 저해할 경우 알도스테론의 생성이 크게 저해되는 것을 확인하여 CTRP1과 고혈압 및 심혈관질환과의 관계를 밝힘으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 인간 CTRP1의 억제 물질을 제공하는 것을 목적으로 한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 인간 CTRP1 유전자의 siRNA를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 인간 CTRP1의 억제 물질을 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물을 제공하는 것을 목적으로 하며, 보다 구체적으로는 인간 CTRP1 유전자의 siRNA를 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 인간 CTRP1 유전자 또는 그로부터 발현되는 단백질을 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 인간 CTRP1 유전자 또는 그로부터 발현되는 단백질을 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물을 이용하여 고혈압 또는 심혈관질환 치료제를 스크리닝하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 인간 CTRP1 항체를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단 조성물 및 이를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단용 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 한 양태에 따라, 본 발명은 인간 CTRP1의 억제 물질을 제공하며, 보다 구체적으로는, 인간 CTRP1 유전자의 siRNA를 제공한다.

본 발명자들은 인간 CTRP1의 기능에 대한 연구 결과 인간 CTRP1이 고혈압 및 심혈관질환 등을 유발하는 알도스테론의 생성을 증가시킴을 확인하였으며, 이러한 연구 결과에 기초할 때 CTRP1의 생성을 억제하거나 CTRP1의 기능을 억제하는 물질을 개발함으로써 알도스테론의 생성을 억제하여 고혈압 및 심혈관질환 등을 치료할 수 있을 것임을 예상하여, CTRP1의 억제 물질을 연구하여 CTRP1의 생성을 억제하는 CTRP1 유전자의 siRNA를 개발하였다.

본 발명에 있어서 'siRNA(small interfering RNA)'란 특정 mRNA의 절단을 통하여 RNA 간섭을 유도할 수 있는 짧은 이중가닥 RNA를 말한다.

siRNA는 RNA끼리 짝을 이루는 이중가닥 RNA 부분이 완전히 쌍을 이루는 것에 한정되지 않고 미스매치(대응하는 염기가 상보적이지 않음), 벌지(일방의 사슬에 대응하는 염기가 없음) 등에 의하여 쌍을 이루지 않는 부분이 포함될 수 있다. 쌍을 이루는 염기 길이는 10 내지 40 염기, 바람직하게는 15 내지 30 염기이다. siRNA 말단 구조는 표적 유전자의 발현을 RNA 간섭 효과에 의하여 억제할 수 있는 것이면 평활 말단 또는 돌출 말단 모두 가능하다. 점착 말단 구조는 3' 말단 돌출 구조와 5' 말단 돌출 구조 모두 가능하다.

본 발명의 인간 CTRP1 유전자의 siRNA는 CTRP1 mRNA 상에서 AA 또는 GG 서열을 찾은 후 AA 또는 GG 이후의 19 뉴클레오티드를 타겟으로 결정하고, 30 ~ 50%의 낮은 G/C 함량을 가지며 다른 유전자와의 상동성이 크지 않도록 하여 디자인할 수 있다. 또한, 컴퓨터 프로그램을 이용하여 RNA의 2차 구조를 예측한 후 구조적으로 표적 RNA에 가장 접근하기 쉬운 siRNA를 선택함으로써 CTRP1 유전자 억제력이 높은 siRNA를 선택할 수도 있을 것이다.

본 발명의 인간 CTRP1 유전자의 siRNA는 바람직하게는 서열 번호 3과 서열 번호 4의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는 siRNA 및 서열 번호 5와 서열 번호 6의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는 siRNA이다.

5'- CAUGCACAGCAACCACUAC-3'(서열번호 3)

5'- GUAGUGGUUGCUGUGCAUG-3'(서열번호 4)

5'- GUAAACCGUGGAGGACAAA-3'(서열번호 5)

5'- UUUGUCCUCCACGGUUUAC-3'(서열번호 6)

본 발명의 siRNA는 그 활성을 저하시키지 않는 하나 이상의 치환, 삽입, 결실 및 그 조합을 갖는 변형체를 포함한다. 이러한 변형체는 상기한 siRNA의 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 가질 수 있으며, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는다.

본 발명의 siRNA는 직접 화학적으로 합성하거나(Sui G 등, (2002) A DNA vector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 5515-5520), 인비트로 전사를 이용하여 합성하는 방법(Brummelkamp TR 등, (2002) A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian celss, Science 296: 550-553) 등 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 합성할 수 있다.

본 발명의 siRNA는 기본적으로 두 가닥의 RNA가 쌍을 이루어 이중가닥 siRNA 를 형성하고 있는 형태이지만, 플라스미드계 shRNA 벡터와 PCR 발현카세트 등에 의한 트랜스펙션에 이용될 수 있도록 짧은 헤어핀을 갖는 구조로 변형된 형태일 수도 있다.

본 발명의 다른 양태에 따라, 본 발명은 인간 CTRP1의 억제 물질을 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물을 제공하며, 보다 구체적으로는 인간 CTRP1 유전자의 siRNA를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물을 제공한다.

인간 CTRP1은 알도스테론의 생성을 증가시키는 것으로 본 발명에 의해 확인되었으며 알도스테론은 고혈압 및 심혈관질환을 야기하는 것으로 알려졌으므로, CTRP1 유전자의 siRNA를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 약학조성물은 알도스테론을 억제함으로써 고혈압 또는 심혈관질환의 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물에 포함되는 siRNA는 인간 CTRP1 유전자의 발현을 억제할 수 있는 임의의 siRNA가 이용될 수 있으며, 인간 CTRP1 유전자의 mRNA 서열 및 당업계의 통상적인 siRNA 디자인 방법을 이용하여 적절한 siRNA를 디자인하여 CTRP1 유전자의 발현을 적절하게 억제할 수 있는 siRNA를 선택하여 이용할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물은 서열 번호 3과 서열 번호 4의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는 siRNA 및 서열 번호 5와 서열 번호 6의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는 siRNA로부터 선택되는 1종 이상의 siRNA를 유효성분으로 포함한다. 이들 siRNA는 본 발명의 약학 조성물에 이용될 수 있는 하나의 바람직한 예일 뿐이며, 본 발명의 약학 조성물에 이용될 수 있는 siRNA가 이들에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 약학조성물은 인간 CTRP1에 대한 항체를 유효성분으로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학조성물에 포함될 수 있는 항체는 인간 CTRP1에 대한 단일클론 항체, 다클론 항체, 재조합 항체 등이 있으며, 예를 들어, 본 발명자들이 개발하였으며 본원에 전체가 참고로 통합되는 대한민국 특허출원 제10-2006-42197호에 개시된 하이브리도마 세포 E21H7(기탁번호 KCTC 10944B)에 의해 생산되는 인간 CTRP1 특이적 IgG2a 형 단일클론 항체가 있다. 상기 하이브리도마 세포 E21H7에 의해 생산되는 단일클론 항체는 인간 CTRP1의 단백질을 사용하여 생쥐를 면역화시키고, 면역화된 생쥐의 비장 세포를 마이엘로마 세포와 융합하여 배양하고, 상기 융합된 하이브리도마 세포에서 인간 CTRP1에 특이적인 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포를 선별하여 이로부터 얻을 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 이용될 수 있는 항체는 중쇄 및 경쇄를 가진 완전한 항체뿐만 아니라 CTRP1 단백질에 대한 결합 기능을 보유한 항체 단편도 포함되며, 예를 들어, Fab, F(ab'), 및 Fv 등이 있다.

본 발명의 약학조성물은 상기한 siRNA 또는 CTRP1 항체에 더하여 추가로 고혈압 또는 심혈관 질환 치료 활성을 갖는 물질을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 약학조성물은 리포좀, 콜레스테롤, 콜레이트 등의, siRNA의 도입을 촉진하는 제제를 포함할 수 있으며, 추가로 약제학적으로 허용가능한 담체 를 1종 이상 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 제형은 정제, 캡슐제, 시럽, 현탁제, 과립제, 피복정, 유제, 또는 주사가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등일 수 있으며, 액상 용액으로 제제화되는 경우에는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 글리세롤, 에탄올 및 말토덱스트린 용액 중 1 성분 이상을 약제학적 담체로 혼합하여 사용할 수 있으며, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제할 수 있다.

또한, 본 발명의 약학조성물은 필요에 따라 예를 들어, 부형제, 붕해제, 감미제, 피복제, 팽창제, 활택제 또는 향미제 등의 가용화제와 같은 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 조제될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 경피, 경구, 피하 등의 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다.

본 발명의 인간 CTRP1 유전자의 siRNA를 포함하는 약학 조성물의 유효 투여량은 환자의 연령, 성별, 및 체중, 투여 방법, 질환의 중증도, 제형의 종류, 조성물에 함유된 유효 성분의 함량 등 다양한 인자에 따라 달라질 수 있으며, 예를 들어, 약 0.1 ng/kg 내지 약 10 mg/kg 범위일 수 있으며, 치료 의사의 판단에 따라 적절히 가감되어 투여될 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따라, 본 발명은 인간 CTRP1 유전자 또는 그로부터 발현되는 CTRP1 단백질을 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물을 제공한다.

인간 CTRP1은 알도스테론의 생성을 증가시키므로 인간 CTRP1의 생성을 억제하거나 그 기능을 저해하는 물질은 알도스테론의 생성을 억제하여 고혈압 또는 심혈관 질환의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 이러한 CTRP1의 억제 물질을 스크리닝함으로써 고혈압 또는 심혈관질환 치료제를 스크리닝할 수 있다.

본 발명의 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물은 인간 CTRP1 유전자 또는 그로부터 발현되는 CTRP1 단백질을 포함한다.

본 발명의 스크리닝 조성물에 포함되는 인간 CTRP1 유전자는 서열 번호 1의 염기 서열, 또는 그 변이체, 및 서열 번호 1 또는 그 변이체의 단편 염기 서열에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

상기 서열 번호 1의 염기 서열의 변이체는 서열 번호 1의 염기 서열과 적어도 80% 이상의 서열 상동성을 가지며 서열 번호 1에 의해 암호되는 인간 CTRP1 단백질과 동등한 기능을 갖는 인간 CTRP1 단백질을 암호하는 염기 서열이다.

보다 바람직하게는, 상기 서열 번호 1의 염기 서열의 변이체는 서열 번호 1의 염기 서열과 적어도 90% 이상의 서열 상동성을 가지며 서열 번호 1에 의해 암호되는 인간 CTRP1 단백질과 동등한 기능을 갖는 인간 CTRP1 단백질을 암호하는 염기 서열이다.

본 발명에 있어서, 서열 번호 1의 염기 서열과 80% 이상 또는 90% 이상의 서열 상동성을 갖는다는 것은 비교 대상 서열과 서열 번호 1의 염기 서열을 BLAST 프 로그램 등을 이용하여 비교할 때 전체 서열의 80% 이상 또는 90% 이상이 동일함을 의미한다.

본 발명의 스크리닝 조성물에 포함되는 인간 CTRP1 단백질은 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 서열 번호 1의 염기 서열 또는 그 변이체로부터 발현된 단백질이거나, 또는 인간 CTRP1과 동등한 생리학적 활성을 나타내는 인간 CTRP1 폴리펩티드 단편일 수 있다.

본 발명의 스크리닝 조성물은 상기한 인간 CTRP1 유전자 또는 인간 CTRP1 단백질에 더하여 필요에 따라 스크리닝 효율을 증가시킬 수 있는 임의의 물질을 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따라, 본 발명은 인간 CTRP1 유전자 또는 그로부터 발현되는 인간 CTRP1 단백질을 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물을 이용하여 고혈압 또는 심혈관질환 치료제를 스크리닝하는 방법을 제공한다.

본 발명 스크리닝 방법은 인간 CTRP1 유전자를 포함하는 상기 본 발명 스크리닝 조성물을 시험대상 물질과 접촉시키는 단계, 및 그들 사이의 반응을 확인하여, 시험대상 물질이 상기 스크리닝 조성물에 포함된 인간 CTRP1 유전자의 발현을 억제하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 단계를 포함한다.

상기 스크리닝 방법에서 인간 CTRP1 유전자를 포함하는 본 발명 스크리닝 조성물과 시험대상 물질 사이의 반응은 DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질, DNA-화합물 간의 반응을 확인하는 데 사용되는 통상적인 방법을 사용하여 확인할 수 있으며, 예를 들어, DNA-DNA 또는 DNA-RNA 혼성화 시험, 노던 분석, 정량적 실시간 PCR 등을 이용하여 인간 CTRP1 유전자의 발현 정도를 측정하는 방법, 또는 CTRP1 유전자에 리포터 유전자를 연결시켜 세포 내로 도입한 후 시험대상 물질과 반응시키고 리포터 단백질의 발현율을 측정하는 방법 등을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 스크리닝 방법은 인간 CTRP1 단백질을 포함하는 본 발명 스크리닝 조성물을 이용할 경우, 상기 스크리닝 조성물을 시험대상 물질과 접촉시키는 단계, 및 그들 사이의 반응을 확인하여, 시험대상 물질이 상기 스크리닝 조성물에 포함된 CTRP1 단백질의 기능을 억제하거나 강화시키는지 여부를 결정하는 단계를 포함한다.

상기 스크리닝 방법에서 CTRP1 단백질을 포함하는 조성물과 시험대상 물질 사이의 반응은 단백질-단백질, 단백질-화합물 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 당업계의 통상적인 방법들이 사용될 수 있으며, 예를 들어, 시험대상 물질과의 반응 후 CTRP1의 활성을 측정하는 방법, CTRP1 단백질에 결합하는 파지 디스플레이 펩티드 클론의 검색, 천연물 및 화합물 라이브러리 등을 이용한 고처리 스크리닝(high throughput screening, HTS), 드러그 히트(drug hit) HTS, 세포기반 스크리닝 또는 DNA 어레이를 이용한 스크리닝 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 스크리닝 방법에 의해 인간 CTRP1 유전자의 발현을 억제하거나 인간 CTRP1 단백질의 기능을 억제하는 것으로 확인되는 물질은 고혈압 또는 심혈관질환 치료제의 후보 물질이 될 수 있으며, 인간 CTRP1 유전자의 발현을 증가시키거나 인간 CTRP1 단백질의 기능을 증대시키는 것으로 확인되는 물질은 이들에 대한 억제제 개발을 통한 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 개발에 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따라, 본 발명은 인간 CTRP1 항체를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단 조성물을 제공한다.

본 발명에 의해 확인된 바처럼 인간 CTRP1은 정상인에 비하여 고혈압 환자에서 그 발현이 증가되므로, 고혈압이나 심혈관 질환이 의심되는 환자를 비롯한 시험 대상에서 CTRP1의 발현량을 측정함으로써 시험 대상이 고혈압 또는 심혈관질환을 가지고 있는지를 진단할 수 있다. 본 발명은 이와 같은 고혈압 또는 심혈관질환 진단에 사용될 수 있는 진단 조성물을 제공한다.

본 발명의 진단 조성물은 인간 CTRP1 항체를 포함한다. 본 발명의 진단 조성물에 포함될 수 있는 CTRP1 항체는 CTRP1 단백질에 특이적으로 결합하는 다클론 항체, 단일클론 항체, 재조합 항체 등이 있다. 이와 같은 CTRP1 항체는 당분야에서 항체 제조를 위하여 통상적으로 이용되는 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 진단 조성물에 이용될 수 있는 CTRP1의 단일클론 항체는 본 발명자들이 개발하였으며 그 전체가 참고로 본원에 통합되는 대한민국 특허출원 제10-2006-42197호에 개시된 하이브리도마 세포 E21H7(기탁번호 KCTC 10944B)에 의해 생산되는 인간 CTRP1 특이적 IgG2a 형 단일클론 항체가 있다.

본 발명의 진단 조성물에 이용될 수 있는 항체는 중쇄 및 경쇄를 가진 완전한 항체뿐만 아니라 CTRP1 단백질에 대한 결합 기능을 보유한 항체 단편도 포함되 며, 예를 들어, Fab, F(ab'), 및 Fv 등이 있다.

또한, 본 발명은 상기 본 발명의 고혈압 또는 심혈관질환 진단 조성물을 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단용 진단 키트를 제공한다.

본 발명의 진단 키트는 상기 본 발명 진단 조성물에 더하여 인간 CTRP1 항체와 결합한 시료 내의 CTRP1의 양을 확인하기 위한 분석에 필요한 물질 및 도구를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 진단 키트는 ELISA 분석을 실시하기 위해 필요한 표지된 2차 항체, 발색단, 효소 및 그 기질 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 인간 CTRP1의 siRNA는 인간 CTRP1의 생성을 저해함으로써 알도스테론의 생성을 억제할 수 있으므로 이러한 본 발명의 CTRP1의 siRNA를 포함하는 약학조성물은 고혈압 및 심혈관질환 등의 치료에 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 본 발명의 인간 CTRP1의 유전자 또는 그 단백질을 포함하는 스크리닝 조성물 및 이를 이용한 스크리닝 방법은 인간 CTRP1 유전자의 발현 및 단백질의 기능을 조절하는 물질을 스크리닝하여 고혈압 및 심혈관질환의 치료제를 개발할 수 있도록 한다. 또한, CTRP1에 대한 항체를 포함하는 진단 조성물은 시료 내의 CTRP1의 양을 측정함으로써 고혈압 또는 심혈관질환의 진단을 가능하게 한다.

이하에서는 실험예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

실험예.

실험예 1. CTRP1 유전자의 부신에서의 발현

CTRP1 유전자가 부신에서도 발현이 되는지를 알아보기 위하여 16주령의 SD 랫트의 부신에서 인시추 하이브리드화(in situ hybridization) 방법을 사용하여 하기와 같이 분석을 실시하였다.

CTRP1의 정방향과 역방향 RNA 프로브(probe)는 T3, T7 RNA 전사효소를 이용하여 얻어졌다. 랫트(rat)의 부신피질 조직은 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde) 용액에 고정한 후에 30% 수크로스(sucrose) 용액으로 바꾸어 밤새 보관하였다. 동결 섹션(두께 30μm)을 만들고 슬라이드에 고정시킨 후에 0.4% Triton X-100을 처리하고 프로테이나제(proteinase) K (25g/ml)를 상온에서 20분간 처리하였다. 슬라이드를 하이브리드화 용액 (0.5 mg/ml tRNA, 20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 2.5 mM EDTA, 1x 덴하르트 용액(Denhardts solution), 0.3 M NaCl, 50% 탈이온화 포름아미드, 0.1% Tween 20, 및 0.5 g/ml 딕옥시제닌-라벨된 CTRP1 안티센스 또는 센스 리보프로브(riboprobes))에 넣고 55 ℃에서 밤새 방치하였다. 그 후에 슬라이드를 2 x SSC/50% 포름아미드 용액으로 55 ℃에서 1 시간, 1 x SSC/50% 포름아미드 용액으로 55 ℃에서 1 시간, 0.5 x SSC/50% 포름아미드 용액에서 60 ℃에서 1 시간 세척하였다. 슬라이드를 항-딕옥시제닌 알카라인 포스페이트 접합된 혈청(1:500으로 희석됨, Roche) 용액에서 밤새 방치한 후, 니트로블루 테트라졸륨(nitroblue tetrazolium)(NBT)/5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이트 (BCIP) 용액에서 색반응을 수행하였다.

상기와 같은 인시추 하이브리드화 실험 결과, CTRP1은 부신의 구상대에서 특이적으로 높은 발현을 나타냈으며, 부신 수질에서는 발현이 되지 않음을 확인할 수 있었다(도 1).

실험예 2. CTRP1에 의한 알도스테론의 생산 증가

부신은 코티졸과 안드로젠 그리고 알도스테론을 포함해 다양한 스테로이드 호르몬의 주된 생산지로 부신의 구상대 (zona glomerlosa)에서 알도스테론의 합성이 이루어지는 것으로 알려져 있다. 따라서 인간 부신 세포주인 H295R 세포에서 CTRP1이 알도스테론의 합성을 증가시킬 수 있는지를 하기 실험을 통해 알아보았다.

NCI-H295R 세포주를 5x105 cells/ml로 6 웰 플레이트에 깔아준 후 무혈청 배지에서 24 시간 동안 배양하였다. 이어서 CTRP1을 0, 4, 20, 40 및 400 ng/ml의 농도로 상기 세포주에 처리한 후 24시간이 지난 후 배지를 모아 분비된 알도스테론의 양을 감마 카운터(COBRA II, PACKARD, USA)로 측정하였다.

그 결과, CTRP1은 40 ng 이상의 농도에서 알도스테론의 생산을 현저히 증가시키는 것을 확인할 수 있었다(도 2).

실험예 3. 고혈압 환자에서의 CTRP1의 발현 증가

CTRP1에 의하여 알도스테론의 생산이 증가되기 때문에, 고혈압 환자의 혈액에서도 CTRP1의 발현 양이 증가 되어 있는지를 면역 항체 침강법과 웨스턴 블롯 방법을 사용하여 하기 실험을 통하여 알아보았다.

고혈압을 가진 15명의 남자와 5명의 여자 그리고 정상인 15명의 남자와 5명의 여자로부터의 혈청을 채취한 후, 동일한 양의 GST-IP 버퍼(20 mM Tris-HCl, pH 7.9, 100 mM KCl, 300 mM NaCl, 10 mM EDTA, 1% 노니뎃(Nonidet) P-40, 프로테아제 억제제)와 혼합하였다. 그리고 1 ㎍의 CTRP1 항체(R&D systems, Minneapolis, MN, USA)를 넣고 4 ℃에서 2 시간 동안 배양하였다. 그리고 프로테인 G 아가로즈 비드 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA)를 넣고 4 ℃에서 2 시간 동안 배양하였다. 결합한 단백질은 다섯 번을 PBS로 세척 후 SDS-PAGE 샘플 버퍼를 넣고 끊여서 회수하였다. 회수된 단백질은 12% SDS-아크릴 아마이드 젤에서 전기영동 후 PVDF 멤브레인(membrane)(Millipore, Marlborough, MA, USA)에 트랜스퍼 하였다. 이 멤브레인을 TBS(20mM Tris-HCl, pH 7.5, 137mM NaCl) 버퍼에 5%의 농도로 녹인 스킴 밀크(skim milk)에 30분 동안 블로킹한 후 인간 CTRP1에 대한 단일클론 항체(E21H7)을 사용하여 2 시간 동안 배양하였다. 그리고 이 멤브레인을 TBST(0.05% Tween-20, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM NaCl) 버퍼로 15 분간 3번 세척해주었다. 세척한 멤브레인은 호스-래디쉬 퍼옥시다제(horse-radish peroxidase)가 부착된 항-마우스 Ig G 항체를 사용하여 1 시간 동안 배양하였다. 다시 3회 TBST(0.05% Tween-20, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM NaCl)로 3회 세척 후 ECL (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)을 사용하여 발현 양을 측정하고 LAS 3000 발광 영상 분석기(luminescence image analyzer)(Fujifilm, Vahalla, NY, USA)를 이용하여 분석하였다.

그 결과 정상인 보다 고혈압 환자의 혈액에서 CTRP1의 발현이 증가 되어있음 을 확인할 수 있었다(도 3). 이 결과는 고혈압과 CTRP1의 연관 관계를 보여준다.

실험예 4. CTRP1에 의한 CYP11B2의 발현 증가

CTRP1이 알도스테론의 생산을 증가 시키는 분자적 경로를 찾기 위하여 알도스테론 합성유전자인 CYP11B2의 발현에 대한 CTRP1의 효과를 알아보기 위해 하기와 같이 실험을 진행하였다.

인간 부신 피질 암 세포주인 NCI-H295R 세포주를 5x105 cells/ml로 6 웰 플레이트에 깔아준 후 무혈청 배지에서 24 시간 동안 배양하였다. 그 다음 CTRP1과 안지오텐신(angiotensin) II를 각각 40ng/ml과 100μM의 농도로 다양한 시간 동안 처리하였다. 각각의 세포들은 GST-IP 버퍼(20 mM Tris-HCl, pH 7.9, 100 mM KCl, 300 mM NaCl, 10 mM EDTA, 1% 노니뎃 P-40, 프로테아제 억제제)를 이용하여 세포를 용해 후 12% 아크릴 아마이드 젤에서 전기영동 하였다. 전기영동 후 젤은 PVDF 멤브레인(Millipore, Marlborough, MA, USA)으로 트랜스퍼하였다. 이 멤브레인은 TBS (20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM NaCl) 버퍼에 녹인 5% 스킴 밀크로 블로킹하였고, 알도스테론 신타제(aldosterone synthase) 항체(Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA)와 CTRP1 항체를 사용하여 4 ℃에서 12 시간 동안 배양하였다. 그 후 TBST(0.05% Tween-20, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM NaCl)를 사용하여 3회 세척하였다. 세척한 멤브레인은 호스-래디쉬 퍼옥시다제가 부착된 항-마우스 Ig G 항체를 사용하여 1 시간 동안 배양하였다. 다시 3회 TBST(0.05% Tween-20, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM NaCl)로 3회 세척 후 ECL (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)을 사용하여 발현 양을 측정하고 LAS 3000 발광 영상 분석기(Fujifilm, Vahalla, NY, USA)를 이용하여 분석하였다.

분석 결과, 기존에 CYP11B2의 발현을 증가시키는 것으로 알려진 안지오텐신 II와 같이 CTRP1도 12 시간 후부터 CYP11B2의 발현을 증가시키는 것을 알 수 있었다(도 4). 이와 같은 결과는 CTRP1이 CYP11B2의 발현을 증가시킴으로써 알도스테론의 생산을 증가시킴을 보여준다.

실험예 5. CTRP1에 의한 알도스테론의 증가는 안지오텐신 II의 수용체를 경유하지 않는다는 사실의 확인

CTRP1에 의한 알도스테론의 생산의 증가가 안지오텐신 II의 수용체를 통하여 이루어지는지를 알아보기 위하여 안지오텐신 II 수용체 I (AT1)의 억제제인 로사르탄을 이용하여 하기와 같은 실험을 실시하였다.

NCI-H2956R 세포주를 5x105 cells/ml로 6 웰 플레이트에 깔아준 후 무혈청 배지에서 24 시간 동안 배양하였다. 그 다음 CTRP1과 안지오텐신 II를 각각 40ng/ml과 100μM로 처리하고 각각 안지오텐신 II 수용체 억제제인 로사르탄(Losartan)을 10μM의 농도로 12 시간 동안 처리하였다. 그 다음 각각의 세포들로부터 RNA 추출시약(RNAzol B, TEL-TEST, Friendswood, TX, USA)을 이용하여 총 RNA를 분리한 후, 이 중 5 ㎍의 RNA를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 이것을 주형으로 중합효소 연쇄 반응(iMAX-II, initron, KOREA)을 시행하였고, 하기 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 세트를 NCBI의 알도스테론 신타아제 염기서열의 양 말 단으로부터 디자인하여 사용하였다.

프라이머 1: 5'-AGG AGA CCT TGC CGC TCT AC-3'(서열번호 1)

프라이머 2: 5'-GGA CGT GCC AGG CCG CAA TA-3'(서열번호 2)

상기 중합효소 연쇄반응은 PTC-100 펠티에 열 순환기(Peltier Thermal Cycler, MJ Research, USA)를 사용하여 수행하였고, 95 ℃에서 5 분간 반응시키고, 95 ℃에서 30 초간, 55 ℃에서 30 초간, 72 ℃에서 30 초간 반응을 30회 수행한 후, 72 ℃에서 7 분간 반응시키는 조건으로 수행하였다.

상기와 같은 실험 결과, 안지오텐신 II에 의한 CYP11B2의 발현 증가는 로사르탄을 처리시 감소하였으나, CTRP1에 의한 CYP11B2의 발현 증가는 억제되지 않았다(도 5). 이와 같은 결과는 CTRP1은 안지오텐신 II와 다른 수용체와 결합하여 신호전달을 하는 것을 보여준다.

실험예 6. 안지오텐신 II와 CTRP1의 관계

안지오텐신 II와 CTRP1은 모두 알도스테론의 생산을 촉진하기 때문에 안지오텐신 II에 의해 CTRP1의 생산이 조절될 수 가능성을 생각할 수 있다. 이러한 가능성을 알아보기 위하여 안지오텐신 II를 H295R 세포에 각각 3, 6, 9, 12 및 24 시간동안 처리한 후, 세포를 용해하고 세포 내의 CTRP1의 단백질량과 세포 밖으로 분비된 CTRP1의 단백질량을 웨스턴 블롯을 통하여 알아보았다.

그 결과 처리 시간이 길어짐에 따라 세포 내의 CTRP1의 단백질량은 감소하고 세포밖으로 분비된 CTRP1 단백질의 양이 증가 됨을 알 수 있었다(도 6). 이와 같 은 결과는 안지오텐신 II는 CTRP1의 분비를 촉진하고 이를 통해 부분적으로 알도스테론의 합성을 증가시킴을 보여준다.

실험예 7. CTRP1 siRNA에 의한 알도스테론 분비 억제

알도스테론을 분비하는 NCI-H295R 세포주는 비교적 많은 양의 CTRP1을 분비하는 세포주이다. 따라서 CTRP1의 발현을 제거하면 NCI-H295R 세포주가 분비하는 알도스테론의 분비가 감소 되는지 알아보기 위하여 하기와 같이 CTRP1의 siRNA를 개발하고 이를 이용하여 CTRP1의 발현을 특이적으로 제거한 후 알도스테론 생성에 대한 그 효과를 확인하였다.

먼저, 인간 CTRP1 mRNA를 특이적으로 제거할 수 있는 작은 간섭 RNA(Small interference RNA)(siRNA) 중합체를 각각 상보적으로 합성한 후 결합시켜 이중가닥의 siRNA를 제작하였다(Samchully Pharmaceuticals, Korea).

CTRP1 siRNA 중합체1: 5'-CAUGCACAGCAACCACUAC-3'(서열번호 3)

CTRP1 siRNA 중합체1: 5'- GUAGUGGUUGCUGUGCAUG-3'(서열번호 4)

CTRP1 siRNA 중합체2: 5'- GUAAACCGUGGAGGACAAA-3'(서열번호 5)

CTRP1 siRNA 중합체2: 5'- UUUGUCCUCCACGGUUUAC-3'(서열번호 6)

상기 이중가닥의 siRNA 중합체는 5 X 106의 NCI-H295R 세포와 Amaxa에서 제공하는 R형의 용액을 이용하여 혼합한 후, Amaxa Nucleofection technology™ (Amaxa, Cologne, Germany) 기계를 이용하여 형질도입 하였다. 이때 2.5 mM의 siRNA 중합체를 사용하였으며 프로그램은 T-020를 사용하였다.

그 결과 NCI-H295R 세포주에서 분비하는 알도스테론의 분비가 대조군과 비교하여 CTRP1의 발현이 억제된 경우 40% 가량 감소됨을 확인할 수 있었다. 뿐만 아니라 CTRP1의 발현이 감소된 경우에는 안지오텐신 II에 의한 알도스테론의 유도도 감소됨을 알 수 있었다(도 7).

도 1은 16주령 렛트의 부신에서 CTRP1유전자가 특이적으로 발현되고 있음을 보여주는 것으로서, 도 1a는 실제로 렛트의 부신에서 CTRP1 유전자의 발현을 인시추(in situ) 실험방법으로 센스로 염색한 경우이고, 도 1b는 실제로 렛트의 부신에서 CTRP1 유전자의 발현을 인시추(in situ) 실험방법으로 안티센스로 염색한 경우를 보여준다.

도 2는 인간 CTRP1을 부신 피질 암세포주인 NCI-H295R 세포주에 처리한 경우 분비된 알도스테론의 양이 증가 되는 것을 보여주는 실험결과이다.

도 3은 고혈압 환자의 혈중 CTRP1 농도가 증가됨을 보여주는 실험결과이다.

도 4는 인간 CTRP1을 부신 피질 암세포주인 NCI-H295R 세포주에 처리한 경우 알도스테론 합성에 관여하는 CYP11B2의 발현이 증가되는 것을 보여주는 실험결과이다.

도 5는 CTRP1에 의한 CYP11B2의 발현증가가 안지오텐신 II의 수용체가 아닌 다른 수용체를 통하여 이루어짐을 보여주는 실험결과이다.

도 6은 안지오텐신 II에 의해 CTRP1 단백질의 분비가 촉진됨을 보여주는 실험결과이다.

도 7a와 7b는 CTRP1을 분비하는 NCI-H295R 세포주에서 CTRP1의 발현을 특이적으로 저해시킨 경우, 세포의 알도스테론의 분비가 억제되고 안지오텐신 II에 의한 알도스테론의 분비 유도까지도 감소됨을 보여주는 실험 결과이다.

<110> Industry-Academy Cooperation Foundation, Sookmyung Women's University <120> siRNA of human CTRP1 gene, and pharmaceutical composition comprising the siRNA for treating hypertension and cardiovascular diseases <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 2759 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> gene <222> (1)..(2759) <220> <221> CDS <222> (171)..(1013) <400> 1 gaattcgaat tcctttgttt ccactgggac ggaatcggag ctctggaggc tgggctggcc 60 aagcgccccg aaggcccgat gcctgacggc tcatgcggcc tccttgtttg cagggcctgg 120 gcaaaaattt acactgagtc ccactcttcg ctccagggcc cggcaggaag atg ggc tcc 179 Met Gly Ser 1 cgt gga cag gga ctc ttg ctg gcg tac tgc ctg ctc ctt gcc ttt gcc 227 Arg Gly Gln Gly Leu Leu Leu Ala Tyr Cys Leu Leu Leu Ala Phe Ala 5 10 15 tct ggc ctg gtc ctg agt cgc gtg ccc cat gtc cag ggg gaa cag cag 275 Ser Gly Leu Val Leu Ser Arg Val Pro His Val Gln Gly Glu Gln Gln 20 25 30 35 gag tgg gag ggg act gag gag ctg ccg tcc cct ccg gac cat gcc gag 323 Glu Trp Glu Gly Thr Glu Glu Leu Pro Ser Pro Pro Asp 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Claims

인간 CTRP1의 생성을 억제하는 인간 CTRP1 유전자의 siRNA.
제1항에 있어서, 서열 번호 3과 서열 번호 4의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는, 인간 CTRP1 유전자의 siRNA.
제1항에 있어서, 서열 번호 5와 서열 번호 6의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는, 인간 CTRP1 유전자의 siRNA.
인간 CTRP1의 생성을 억제하거나 인간 CTRP1의 기능을 억제하는 물질을 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물.
제4항에 있어서, 인간 CTRP1의 생성을 억제하는 물질로서 인간 CTRP1 유전자의 siRNA를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물.
제5항에 있어서, 인간 CTRP1의 생성 억제 물질로서 서열 번호 3과 서열 번호 4의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는 siRNA 및 서열 번호 5와 서열 번호 6의 폴리뉴클레오티드 쌍을 갖는 siRNA 중 1종 이상을 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물.
제4항에 있어서, 인간 CTRP1의 기능을 억제하는 물질로서 인간 CTRP1의 항체를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물.
제7항에 있어서, 인간 CTRP1의 항체가 하이브리도마 세포주 E21H7에 의해 생산되는 단일클론 항체인 고혈압 또는 심혈관질환 치료용 약학조성물.
인간 CTRP1 유전자 또는 인간 CTRP1 단백질을 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물.
제9항에 있어서, 인간 CTRP1 유전자가 서열 번호 1의 염기 서열, 또는 그 변이체, 및 서열 번호 1 또는 그 변이체의 단편 염기 서열에서 선택된 1종인 것인 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물.
제9항에 있어서, 인간 CTRP1 단백질이 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 서열 번호 1의 염기 서열 또는 그 변이체로부터 발현된 단백질이거나, 또는 인간 CTRP1과 동등한 생리학적 활성을 나타내는 인간 CTRP1 폴리펩티드 단편인 것인 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 조성물.
제10항의 스크리닝 조성물을 시험대상 물질과 접촉시키는 단계, 및

상기 스크리닝 조성물과 시험대상 물질 사이의 반응을 확인하여, 시험대상 물질이 스크리닝 조성물에 포함된 인간 CTRP1 유전자의 발현을 억제하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 단계를 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 방법
제11항의 스크리닝 조성물을 시험대상 물질과 접촉시키는 단계, 및

상기 스크리닝 조성물과 시험대상 물질 사이의 반응을 확인하여, 시험대상 물질이 스크리닝 조성물에 포함된 인간 CTRP1 단백질의 기능을 억제하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 단계를 포함하는, 고혈압 또는 심혈관질환 치료제 스크리닝 방법
인간 CTRP1 항체를 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단 조성물.
제14항에 있어서, CTRP1 항체가 하이브리도마 세포주 E21H7에 의해 생산되는 단일클론 항체인 고혈압 또는 심혈관질환 진단 조성물.
제14항 또는 제15항의 진단 조성물을 포함하는 고혈압 또는 심혈관질환 진단용 키트.