KR20080101883A - 식물의 성장 속도 및 식물에서 바이오매스를 조절하는뉴클레오티드 서열 및 상응하는 폴리펩티드 - Google Patents

식물의 성장 속도 및 식물에서 바이오매스를 조절하는뉴클레오티드 서열 및 상응하는 폴리펩티드 Download PDF

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Abstract

본 발명은 식물에서 조절된 식물 크기, 영양 성장, 기관 수, 식물 구조, 성장 속도, 묘목 활력, 성장 속도, 열매 및 종자 수득율, 분얼 및/또는 바이오매스의 특성이 제공가능한 분리된 핵산 분자 및 이에 상응하는 코딩된 폴리펩티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 유사한 조건 하에 성장된 야생형 식물에 대하여 변경된 식물 크기, 영양 성장, 기관 수, 식물 구조, 성장 속도, 묘목 활력 및/또는 바이오매스를 갖는 유전자 도입(transgenic) 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자를 제조하는데 이들 핵산 분자 및 폴리펩티드의 용도에 관한 것이다.

Description

식물의 성장 속도 및 식물에서 바이오매스를 조절하는 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 폴리펩티드{NUCLEOTIDE SEQUENCES AND CORRESPONDING POLYPEPTIDES CONFERRING MODULATED PLANT GROWTH RATE AND BIOMASS IN PLANTS}
본 발명은 식물에서 식물의 성장 속도, 영양 성장, 기관 크기, 구조, 묘목 활력 및/또는 바이오매스 조절이 가능한 분리된 핵산 분자 및 이에 상응하는 코딩된 폴리펩티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 유사한 조건 하에 성장된 야생형 식물과 비교하여 조절된 성장 속도, 영양 성장, 기관 수, 구조, 묘목 활력 및/또는 바이오매스를 갖는 유전자 도입(transgenic) 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자를 제조하기 위한 핵산 분자 및 폴리펩티드의 용도에 관한 것이다.
농업, 원예, 바이오매스 전환 및 다른 산업(예: 제지 산업, 단백질 또는 다른 화합물에 대한 생산 인자로서 식물)에 있어서 특히 개선된 식물은 분자 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 일예로서, 우수한 작물재배학 유용성은 전체 또는 그의 임의의 기관 또는 그의 임의의 수의 기관으로서 식물 크기의 조절로부터 생길 수 있다.
유사하게, 전체 식물의 크기 및 키, 또는 식물의 특정 부분, 또는 성장 속도, 또는 묘목 활력의 조절은 특정 산업에 있어서 더욱 적당한 식물의 생산을 가능하게 한다. 예를 들어, 특정 농작물 및 나무 종에서의 키의 감소는 더 쉬운 수확을 허용함으로써 유용할 수 있다. 대안적으로, 증가된 키, 두께 또는 기관 크기, 기관 수는 식품, 사료, 연료 및/또는 화학믈질로의 처리에 유용한 더 많은 바이오매스를 제공함으로써 유효할 수 있다(에너지 효율 및 재생 에너지에 관한 미국 에너지부 웹사이트 참조). 상업적으로 바람직한 특성의 다른 예는 절화의 꽃 줄기의 길이의 증가, 잎 크기 및 모양의 증가 또는 변경 및 종자 및/또는 열매의 증진을 포함한다. 기관 크기, 기관 수 및 바이오매스에서의 변화는 또한 이차 산물과 같은 구성 분자의 중량에서의 변화 및 식물이 이들 화합물에 대한 제조로의 전환을 초래한다.
동물 및 사람의 먹이 및 식사를 위한 동물사료 및 음식의 재생가능한 스트림의 유효성 및 유지는 인간 문화의 역사를 통하여 우선 순위였으며 농업의 기원에 놓여 있다. 농경 과학, 농업, 농작물 과학, 원예, 및 산림 과학의 분야의 전문가 및 연구자는 현재 증가하는 세계 인구에 식량을 공급하고 재생가능한 원료의 공급을 보장하기 위하여 효능 있는 증가된 성장을 갖는 식물을 찾고 생산하기 위하여 끊임없이 애쓰고 있다. 이들 과학 분야에서의 어려운 수준의 연구는 집단에 있어서 음식, 사료, 화학 및 에너지의 유지가능한 공급원을 제공하는데 전 세계의 모든 지리적 환경 및 기후에서 중요한 선도자의 수준임을 지적한다.
농작물 성능의 조작은 식물 육종을 통하여 수세기 동안 인습적으로 달성해왔 다. 그러나, 육종 과정은 시간 소비 및 노동 집약적이다. 또한, 적절한 육종 프로그램은 각각의 상대적인 식물 종에 대하여 특이적으로 설계되어야 한다.
한편, 우수한 과정은 더 나은 농작물을 제공하기 위한 식물을 제작하기 위하여 분자 유전학적인 접근을 사용하는데 사용되어 왔다. 식물에서 재조합 핵산 분자의 도입 및 발현을 통하여, 연구자들은 독특한 지리학 및/또는 기후 환경에도 불구하고 더욱 효율적으로 성장하고 더 많은 산물을 생산하기 위하여 맞춰진 식물 종을 갖는 집단을 제공하기 위하여 현재 준비가 되어 있다. 이들 새로운 접근은 하나의 식물 종에 한정하는 것이 아닌, 복합적인 다른 식물 종에 적용할 수 있는 추가의 이점을 가진다(Zhang et al.(2004) Plant Physiol. 135:615).
이 과정에도 불구하고, 현재, 특정한 환경 조건에 좌우되는 특정한 요구에 맞추기 위한 임업 또는 농업 식물 성장을 개선시키는 일반적으로 적용가능한 과정이 매우 요망되고 있다. 마지막으로, 본 발명은 식물이 성장해야만하고, 식물에서 재조합 DNA 분자의 발현에 의해 특정화되는 이익 추구 및 특정 환경에 좌우되는 다양한 농작물의 이익을 최대화하기 위한 식물 크기, 기관 수, 식물 성장 속도, 식물 구조 및/또는 바이오매스를 유용하게 조작하는 것에 관한 것이다. 이들 분자는 식물 자체로부터 유래될 수 있고, 단순히 높거나 낮은 수준으로 발현되거나, 분자는 다른 식물 종으로부터 유래될 수 있다.
발명의 요약
그러므로, 본 발명은 분리된 핵산 분자 및 폴리펩티드 및 유사하거나 동일한 조건 하에서 성장된 야생형 식물에 비해 변경된 생활주기, 특히, 식물 크기, 영양 성장, 식물 성장 속도, 기관 수, 식물 구조 및/또는 바이오매스를 갖는 유전자 도입 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자를 만드는데 그들의 용도에 관한 것이다.
달리 정의가 없다면, 본원에서 사용한 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속해있는 당업자들이 통상적으로 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.
도 1. 리드 29(ME04717), 서열번호 93의 호몰로그의 아미노산 서열 정렬. 보존 영역은 박스에 넣었다. 공통 서열은 정렬 밑에 나타내었다.
도 2. 리드 36(ME03195), 서열번호 99의 호몰로그의 아미노산 서열 정렬. 보존 영역은 박스에 넣었다. 공통 서열은 정렬 밑에 나타내었다.
도 3. 리드 15(ME04077), 서열번호 81의 호몰로그의 아미노산 서열 정렬. 보존 영역은 박스에 넣었다. 공통 서열은 정렬 밑에 나타내었다.
도 4. 리드 ME04012, 서열번호 110의 호몰로그의 아미노산 서열 정렬. 보존 영역은 박스에 넣었다. 공통 서열은 정렬 밑에 나타내었다.
도 5. 리드 클론 691319, 서열번호 104의 호몰로그의 아미노산 서열 정렬. 보존 영역은 박스에 넣었다. 공통 서열은 정렬 밑에 나타내었다.
1. 발명
본 출원의 발명은, 반드시 한정하는 것은 아니나, 하기 예시적인 구체예로 기술될 수 있다.
본 발명은 신규한 분리된 핵산 분자, 이들 핵산 분자를 간섭하는 핵산 분자, 이들 핵산 분자에 혼성화하는 핵산분자 및 DNA 코드의 축퇴에 기인하는 동일한 단백질을 코딩하는 분리된 핵산 분자를 개시한다. 또한 본 출원의 추가의 구체예는 본 발명의 분리된 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 포함한다.
더욱 특히, 본 발명의 핵산 분자는 하기를 포함한다: (a) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319 중 어느 하나에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; (b) (a)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 상보성인 뉴클레오티드 서열; (c) 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열; (d) 5' 에서 3' 방향으로 해독할 경우 (c)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 역순서인 뉴클레오티드 서열; (e) (a)의 뉴클레오티드 서열에 대해 간섭 RNA인 뉴클레오티드 서열; (f) 혼성화된 핵산 듀플렉스의 용융 온도 약 40℃ 내지 약 48℃ 아래의 온도에서 (a) - (e)의 중 어느 하나의 핵산과 혼성화된 핵산 듀플렉스를 형성할 수 있는 뉴클레오티드 서열; (g) 각각 서열번호 81, 91, 93, 99, 110 및 104에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319의 아미노산 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열.
또한, 본 발명의 구체에는 서열번호 80, 81, 90, 91, 92, 93, 98, 99, 109, 110, 103 및 104에 기술된 핵산 분자 서열 및 이들 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명은 또한 식물 전사 및/또는 번역 신호를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 제 1의 핵산 및 본 발명의 분리된 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열을 갖는 제 2의 핵산을 포함하는 벡터를 구체화한다. 더욱 특히, 제 1 및 제 2의 핵산은 작동가능하게 연결될 수 있다. 더더욱 특히, 제 2의 핵산은 제 1의 유기체에서 내생적일 수 있고, 벡터의 임의의 다른 핵산은 제 2의 유기체에 내생적일 수 있다. 가장 특히, 제 1 및 제 2의 유기체는 상이한 종일 수 있다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 숙주 세포는 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함할 수 있다. 더욱 특히, 본 발명의 숙주 세포에서 발견되는 본 발명의 분리된 핵산 분자는 제 1의 유기체에 내생적일 수 있고 제 2의 유기체에 대한 내생적인 뉴클레오티드 서열에 의해 플랭크될 수 있다. 또한 제 1 및 제 2의 유기체는 상이한 종일 수 있다. 더더욱 특히, 본 발명의 숙주 세포는 그 자체가 본 발명에 따른 핵산 분자를 포함하는 본 발명의 벡터를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 본 발명의 분리된 폴리펩티드는 추가로 서열번호 81, 91, 93, 99, 110 및 104에 각각 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319 중 어느 하나에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예는 본 발명의 분리된 핵산을 숙주 세포로 도입하는 방법을 포함한다. 더욱 특히, 본 발명의 분리된 핵산 분자는 숙주 세포로 분리된 핵산의 수송이 가능한 조건 하에 숙주 세포에 접촉될 수 있다. 더더욱 특히, 본 발명의 앞선 구체예에서 기술된 벡터는 동일한 방법으로 숙주 세포로 도입될 수 있다.
검출 방법이 또한 본 발명의 구체예로서 가능하다. 특히, 샘플에서 본 발명의 핵산 분자의 검출 방법이다. 더욱 특히, 본 발명의 분리된 핵산 분자는 샘플에서 분리된 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열과 핵산의 뉴클레오티드 서열의 비교가 가능한 조건 하에 샘플과 접촉될 수 있다. 이어서 이러한 분석의 결과는 본 발명의 분리된 핵산 분자가 검출가능한지 그러므로 샘플 내에 존재하는 지를 결정하는데 고려될 수 있다.
본 발명의 추가의 구체예는 본 발명의 분리된 핵산 분자 및/또는 벡터를 포함하는 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자를 포함한다. 더욱 특히, 본 발명의 분리된 핵산 분자는 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자에 대하여 외생적일 수 있다.
본 발명의 추가의 구체예는 본 발명의 식물 세포 또는 종자로부터 재생된 식물을 포함한다. 더욱 특히, 본 발명의 식물, 식물로부터 유래된 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자는 이상적인 조건에서 재배된 야생형 식물에 비해 증가된 크기(전체 또는 부분), 증가된 영양 성장, 증가된 기관 수 및/또는 증가된 바이오매스(종종 하기에 증가된 바이오매스로 집합적으로 언급됨), 치사율, 열매를 맺지 않음(sterility) 또는 관상용 성질을 바람직하게 갖는다. 또한, 유전자 도입 식물은 성장 및 표현형 성질을 조절하는 것과 관련된 단백질을 코딩하는 본 발명의 제 1의 분리된 핵산 분자 및 식물에서 발현을 조정할 수 있는 프로모터를 코딩하는 제 2의 분리된 핵산 분자를 포함하고, 여기에서 성장 및 표현형 조절 성분 및 프로모터는 작동가능하게 연결된다. 더욱 바람직하게, 제 1의 분리된 핵산은 본 발명의 유전자 도입 식물에서 발현이상이 될 수 있고, 유전자 도입 식물 및 원종 식물이 이상적인 환경 조건 하에서 재배될 경우, 유전자 도입 식물은 유전자를 제거한 원종 식물과 비교하여 조절된 성질을 나타낸다. 본 발명의 다른 구체예에서, 조절된 성장 및 표현형 성질은 특정 서열, 예를 들어, 간섭 RNA를 사용한 불활성화에 기인될 수 있다.
추가의 구체예는 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함하는 본 발명의 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자로 구성되고, 여기에서, 식물, 또는 식물로부터 유래된 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자는 이상적인 조건 하에서 재배된 야생형 식물과 비교하여 조절된 성장 및 표현형 성질을 갖는다.
증가된 바이오매스 또는 활력을 제공하는 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 유전자 도입 식물에서 발현이상이 될 수 있고, 유전자 도입 식물은 유전자 도입 식물 및 원종 식물이 이상적인 환경 조건 하에서 재배될 경우, 폴리뉴클레오티드가 제거된 원종 식물에 비하여 증가된 바이오매스 또는 활력을 나타낸다. 본 발명의 다른 구체예에서, 증가된 바이오매스 또는 활력 표현형은 특정 서열, 예를 들어, 간섭 RNA를 사용한 불활성화에 기인될 수 있다.
다른 구체에는 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함하는 본 발명의 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자로 구성되고, 여기에서, 식물, 또는 식물로부터 유래된 식물, 식물 세포, 식물 물질 또는 식물의 종자는 이상적인 조건 하에서 재배된 야생형 식물과 비교하여 증가된 바이오매스 또는 활력을 갖는다.
본 발명의 다른 구체예는 식물에서 바이오매스 또는 활력의 증진 방법을 포함한다. 더욱 특히, 이들 방법은 식물을 본 발명의 분리된 핵산 분자로 형질전환시키는 것을 포함한다. 바람직하게, 방법은 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산분자로 형질전화된 식물에서 바이오매스 또는 활력의 증진 방법이다.
본 발명의 폴리펩티드는 공통 서열을 포함한다. 공통 서열은 도 1-5에 나타낸 바와 같다.
2. 정의
하기 용어가 본 출원을 통하여 사용된다:
바이오매스: 본원에서 사용된 "바이오매스"는 대상의 산물을 포함하는 유용한 생물학적 물질을 언급하고, 이 물질은 대상의 산물을 분리 또는 농축하는 추가의 과정에서 의도되고 회수된다. "바이오매스"는 열매 또는 그의 부분 또는 종자, 잎, 또는 줄기 또는 뿌리를 포함할 수 있고, 여기에서 이들은 산업적 목적에 대하여 특히 관심 있는 식물의 부분이다. 식물 물질에 대하여 언급한 바와 같이, "바이오매스"는 대상의 산물을 포함 또는 나타내는 식물의 임의의 구조(들)를 포함한다.
형질전환: 이를 수행할 수 있는 수단의 예시는 하기에 기술하고 아그로박테리움(Agrobacterium)-중재 형질전환[쌍떡잎식물의 형질전환(Needleman 및 Wunsch (1970) J Mol . Biol 48:443; Pearson 및 Lipman (1988) Proc . Natl . Acad . Sci .(USA) 85: 2444), 외떡잎식물의 형질전환(Yamauchi et al.(1996) Plant Mol Biol. 30:321-9; Xu et al.(1995) Plant Mol . Biol. 27:237; Yamamoto et al.(1991) Plant Cell 3:371)] 및 바이오리스틱(biolistic) 방법(P. Tijessen, "Hybridization with Nucleic Acid Probes" In Laboratory Techniques in Biochemistry 및 Molecular Biology, P.C. vand der Vliet, ed., c. 1993 by Elsevier, Amsterdam), 전기천공법, 인 플란타(in planta) 기술 등을 포함한다. 외재성 핵산을 포함하는 식물은 제 1의 유전자 도입 식물에 대해서는 T0로서, 제1의 세대에 대해서는 T1으로서 본원에서 언급된다.
기능적으로 유사한 단백질 또는 기능적 호몰로그: 이 용어는 적어도 하나의 공통적인 기능적 성질을 갖는 단백질을 기술한다. 이러한 성질은 서열 유사성, 생화학적 활성, 전사 패턴의 유사성 및 표현형 활성을 포함한다. 전형적으로, 기능적으로 유사한 단백질은 일부 서열 유사성 또는 적어도 하나의 생화학을 공유한다. 이 정의 이내에서, 유사체는 기능적으로 유사한 것으로 간주된다. 또한, 기능적으로 유사한 단백질은 적어도 하나의 생화학 및/또는 표현형 활성을 일반적으로 공유한다.
기능적으로 유사한 단백질은 유사하게 동일한 성질에서 발생될 수 있지만, 동일한 정도일 필요는 없다. 전형적으로 유사한 단백질은 동일한 성질을 제공하고 여기에서 유사한 단백질 중의 하나에 기인한 양 측정은 나머지의 적어도 20%이고; 더욱 전형적으로, 나머지의 30 내지 40%; 더더욱 전형적으로, 나머지의 50-60%; 더더욱 전형적으로, 나머지의 70 내지 80%; 더더욱 전형적으로, 나머지의 90 내지 100%이다.
이종 서열: "이종 서열"은 작동가능하게 연결되지 않거나 사실상 서로 인접하지 않는 것이다. 예로서, 옥수수(corn) 유래의 프로모터는 아라비돕시스(Arabidopsis) 코딩 영역 서열에 대하여 이종으로 간주된다. 또한, 옥수수(corn)의 성장 인자를 코딩하는 유전자 유래의 프로모터는 성장 인자에 대한 옥수수 수용체를 코딩하는 서열에 대하여 이종으로 간주된다. 조절 요소 서열, 예컨대, UTR 또는 코딩 서열로서 사실상 동일한 유전자로부터 기원되지 않은 3' 말단 종결 서열은 상기 코딩 서열에 대하여 이종으로 간주된다. 사실상 작동가능하게 연결되고 서로 인접한 요소는 서로 이종이 아니다. 한편, 이들 동일한 요소는 작동가능하게 연결되지만, 다른 필러 서열이 그들 사이에 위치한다면 이종이 된다. 따라서, 아미노산 수송자를 발현하는 옥수수 유전자의 프로모터 및 코딩 서열은 서로 이종이 아니지만, 신규한 방식으로 작동가능하게 연결되는 옥수수 유전자의 프로모터 및 코딩 서열은 이종이다.
발현이상: 용어 "발현이상"은 야생형에 비해 상보성 RNA 서열로의 코딩 영역의 전사가 증가 또는 감소하는 것을 의미한다. 이 용어는 또한 야생형 및/또는 다른 식물 종 또는 비-식물 유기체의 유전자 또는 코딩 영역을 포함하는, 식물 게놈 내에 위치한 비-자연적인 위치에 비하여 상이한 기간 동안 유전자 또는 코딩 영역의 발현 및/또는 번역, 또는 이러한 전사 및/또는 번역의 억제를 포함한다.
서열 동일성의 퍼센트: 본원에서 사용된 용어 "서열 동일성 퍼센트"는 임의의 주어진 해당 서열과 대상 서열의 동일성 정도를 의미한다. 해당 핵산 또는 아미노산 서열은, 핵산 또는 단백질 서열의 정렬을 그들의 전장을 가로질러서 수행(전역 정렬)될 수 있는 컴퓨터 프로그램 ClustalW(버전 1.83, 디폴트 파라미터)를 사용하여 하나 이상의 대상 핵산 또는 아미노산 서열에 정렬된다.
ClustalW는 해당 서열과 하나 이상의 대상 서열의 최상의 매치를 계산하고 그들을 정렬하여 동일성, 유사성 및 상이함을 결정할 수 있도록 한다. 하나 이상의 잔기의 차이가 서열 정렬을 최대화하기 위하여, 해당 서열, 대상 서열, 또는 둘 모두에 삽입될 수 있다. 핵산 서열의 빠른 쌍(pairwise) 정렬을 위하여, 하기 디폴트 파라미터가 사용된다: 단어 크기: 2; 윈도우 크기: 4; 점수 방법: 퍼센트; 탑(top) 대각선의 수: 4; 및 차이 감점: 5. 핵산 서열의 복합 정렬을 위하여, 하기 파라미터가 사용된다: 차이 오프닝 감점: 10.0; 차이 연장 감점: 5.0; 및 중량 변이: 예스. 단백질 서열의 빠른 쌍정렬을 위하여, 하기 파라미터가 사용된다: 단어 크기: 1; 윈도우 크기: 5; 점수 방법: 퍼센트; 탑 대각선의 수: 5; 차이 감점: 3. 단백질 서열의 복합 정렬을 위하여, 하기 파라미터가 사용된다: 중량 매트릭스: 블로섬(blosum); 차이 오프닝 감점: 10.0; 차이 연장 감점: 0.05; 친수성 차이: 온(on); 친수성 잔기: Gly, Pro, Ser, Asn, Asp, GIn, GIu, Arg, 및 Lys; 잔기-특이성 차이 감점: 온(on). 출력은 서열 사이의 관계를 반영하는 서열 정렬이다. ClustalW는, 예를 들어, Baylor College of Medicine Search Launcher 웹사이트 및 World Wide Web 상의 European Bioinformatics Institute 웹사이트에서 실행할 수 있다.
기능적 호몰로그를 찾을 경우, 해당 서열로서 동일한 기능을 갖는 대상 서열을 확보하기 위하여, 정렬은 해당 서열의 길이의 적어도 80%를 가짐으로써 해당 서열의 대부분이 대상 서열에 의해 포함될 수 있도록 한다. 해당 서열과 대상 서열의 동일성 퍼센트를 결정하기 위하여, ClustalW를 비교된 잔기의 수(차이 위치는 배제함)에 의한 최상의 정렬에서 동일성의 수로 나누고, 결과에 100을 곱한다. 출력은 해당 서열에 대한 대상 서열의 동일성 퍼센트이다. 동일성 퍼센트 값은 소수점 한자리로 반올림할 수 있다. 예를 들어, 78.11, 78.12, 78.13, 및 78.14는 78.1로 내려가는 반면, 78.15, 78.16, 78.17, 78.18, 및 78.19는 78.2로 올라간다.
조절 영역: 용어 "조절 영역"은 작동가능하게 서열에 연결될 경우, 상기 서열의 전사 개시 또는 번역 개시 또는 전사 종결 및 상기 과정의 비율 및/또는 전사 또는 번역 산물의 안정성 및/또는 이동성에 영향을 미치는 뉴클레오티드 서열을 의미한다. 본원에서 사용된 용어 "작동가능하게 연결된"은 상기 영향이 가능한 조절 영역 및 상기 서열의 포지셔닝을 의미한다. 조절 영역은, 제한 없이, 프로모터 서열, 인핸서 서열, 반응 요소, 단백질 인식 자리, 유도 요소, 단백질 결합 서열, 5' 및 3' 비번역 영역(UTR), 전사 개시 자리, 종결 서열, 폴리아데닐화 서열 및 인트론을 포함한다. 조절 영역은 두개의 카테고리, 프로모터 및 다른 조절 영역으로 분류될 수 있다.
묘목 활력: 본원에서 사용된 "묘목 활력"은 야생형 또는 유사한 조건 하에 대조군에 비해 식물이 더 빠르게 토양으로 부터 나와, 증가된 발아율(즉 더 빠르게 발아됨), 더 빠르고 큰 묘목 성장을 가지고/가지거나 추운 조건 하에 보다 더 빠르게 발아되는 식물 성질을 의미한다. 묘목 활력은 자주 "광범위한 필드 조건 하에 정상 묘목의 빠르고 균일한 발생 및 발달에 대한 잠재성"을 결정하는 종자 성질을 포함하는 것으로 정의된다.
스트린전시 (Stringency): 본원에서 사용된 "스트린전시"는 핵산 분자 프로브 길이의 기능, 핵산 분자 프로브 구성(G + C 함량), 염 농도, 유기 용매 농도 및 혼성화의 온도 및/또는 세정 조건이다. 스트린전시는 전형적으로 파라미터 Tm으로 측정되고, 이는 혼성화 어세이에서 Tm에서 온도에 의해, 상보성 핵산 분자의 50%가 혼성화되는 온도이다. 고 스트린전시 조건은 Tm - 5℃ 내지 Tm - 10℃의 조건을 제공하는 것이다. 중간 또는 온화한 스트린전시 조건은 Tm - 20℃ 내지 Tm - 29℃의 조건을 제공하는 것이다. 저 스트린전시 조건은 Tm - 4O℃ 내지 Tm - 48℃의 조건을 제공하는 것이다. 혼성화 조건과 Tm(℃로)의 관계는 하기 수학식으로 나타낸다:
Figure 112008054433236-PCT00001
상기 식에서, N은 핵산 분자 프로브의 뉴클레오티드의 수이다. 이 방정식은 타겟 서열에 대하여 동일한 14 내지 70개의 뉴클레오티드 길이의 프로브에 대하여 잘 작용한다. DNA-DNA 혼성물의 Tm에 대한, 하기 방정식은 500 뉴클레오티드보다 더 긴 50 범위의 길이를 갖는 프로브 및 유기 용매(포름아미드)를 포함하는 조건에 대하여 유용하다:
T m = 81.5+16.6 log{([Na + ]/(1+0.7[Na + ])}+ 0.41(%G+C)-500/L 0.63( 포름아미 드%) (II)
상기 식에서, L은 혼성물 (21)에서 프로브의 뉴클레오티드의 수를 나타낸다. 식 II의 Tm은 혼성물의 성질에 의해 영향을 받는다: DNA-RNA 혼성물에 대하여, Tm은 계산된 것보다 10-15℃ 높다; RNA-RNA 혼성물에 대하여, Tm은 20-25℃ 더 높다. 긴 프로브가 사용될 경우, Tm은 호몰로그에서 각 1% 감소에 대하여 약 1℃ 감소함으로(Frischauf et al.(1983) J. Mol Biol, 170: 827-842), 스트린전시 조건은 동일한 유전자 또는 관련된 패밀리 원의 검출을 촉진하는데 사용될 수 있다.
식 II는 반응이 평형이라는 가정 하에 유도된다. 그러므로, 본 발명의 혼성화는 초과의 프로브 및 평형에 도달하기에 충분한 시간이 허용된 조건 하에 가장 바람직하게 수행된다. 평형 도달에 요구되는 시간은 혼성화 촉진제, 예컨대, 덱스트란 설페이트 또는 다른 고 부피 폴리머를 포함하는 혼성화 버퍼를 사용함으로써 단축될 수 있다.
스트린전시는 혼성화 반응 동안, 또는 혼성화가 일어난 후에, 세정 용액의 온도 조건 및 염을 변경함으로써 조절될 수 있다. 상기에 나타낸 식은 세정 용액의 스트린전시를 계산할 경우 동일하게 유효하다. 바람직한 세정 용액의 스트린전시는 상술한 범위 이내에 있다; 고 스트린전시는 5-8℃ 미만의 Tm이고, 중간 또는 온화한 스트린전시는 26-29℃ 미만의 Tm이며, 저 스트린전시는 45-48℃ 미만의 Tm이다.
T 0 : 용어 "T0"는 형질전환 매질로 접종된 전체 식물, 외식편 또는 칼로스 조직을 의미한다.
T 1 : 용어 T1은 전체-식물 형질전환의 경우, T0 식물의 자손, 또는 외식편 또는 칼로스 조직 형질전환의 경우에 재생된 묘목을 의미한다.
T 2 : 용어 T2는 T1 식물의 자손을 의미한다. T2 자손은 자가-수정 또는 T1 식물의 타가 수분의 생성물이다.
T 3 : 용어 T3은 형질전환 실험의 직접적인 생성물인 식물의 제 2세대 자손을 의미한다. T3 자손은 자가-수정 또는 T2 식물의 타가 수분의 생성물이다.
3. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 중요한 성질
본 발명의 핵산 분자 및 폴리펩티드는 핵산 분자가 발현이상(즉, 야생형에 비해 비-자연적인 위치에서 또는 증가 또는 감소된 양으로 발현될 경우)이 될 경우, 그들이 하기 기술된 다양한 실험의 결과로 증명된 바, 야생형 식물에 비하여 조절된 바이오매스, 성장 속도, 또는 묘목 활력을 나타내는 식물을 생산하기 때문에 중요하다. 이 특성은 식물 산물을 개발하거나 극대화하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 핵산 분자 및 폴리펩티드는 식물이 조절된 바이오매스, 성장 속도 또는 묘목 활력을 갖게하는 유전자의 발현을 증가시키는데 사용된다.
기술된 서열 및 방법은 영양 성장 및 성장 속도를 증가시키므로, 기술된 방법은 바이오매스 생산을 증진시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 실질적인 영양 성장에 있어서 유전적으로 변형되지 않은 동일한 종의 식물에 비하여, 영양적으로 성장한 식물은 증가된 바이오매스 생산을 갖는다. 바이오매스 생산의 증가의 예시는 영양적으로 성장하지 않은 동일한 종의 식물에 의한 바이오매스 생산의 양과 비교할 경우, 적어도 5%, 적어도 20% 또는 더욱 적어도 50%의 증가를 포함한다.
본 발명의 리드 36의 서열 및 그의 기능적 호몰로그는 특히, 에이커 당 열매 수득율 및 수득율을 포함하는, 증가된 수득율, 다소 이른 발육 및 더 짧은 줄기를 갖는 더욱 컴팩트한 키(20%, 30%, 40% 또는 60% 이상의 컴팩트)를 갖지만, 비율적으로 감소된 바이오매스는 없는 형질전환된 식물을 제공한다. 토마토에서, 이는 더욱 컴팩트한 식물에서 증가된 열매 수득율을 갖는 식물을 초래한다. 쌀에서, 이는 증가된 곁눈의 수를 갖는 식물을 초래한다. 본 발명의 리드 29의 서열 및 그의 기능적 호몰로그는 특히, 에이커 당 열매 수득율 및 수득율을 포함하는, 증가된 수득율, 다소 이른 발육 및 더 짧은 줄기를 갖는 더욱 컴팩트한 키(20%, 30%, 40% 또는 60% 이상의 컴팩트)를 갖는 형질전환된 식물을 제공한다. 토마토에서, 이는 더욱 컴팩트한 식물에서 증가된 열매 수득율을 갖는 식물을 초래한다. 쌀에서, 이는 증가된 곁눈의 수를 갖는 식물을 초래한다. 본 발명의 리드 15 및 28의 서열 및 그의 기능적 호몰로그는 특히, 에이커 당 열매 수득율 및 수득율을 포함하는, 증가된 수득율을 갖는 형질전환된 식물을 제공한다. 토마토에서, 이는 더욱 컴팩트한 식물에서 증가된 열매 수득율을 갖는 식물을 초래한다. 쌀에서, 이는 증가된 곁눈의 수를 갖는 식물을 초래한다.
일반적으로 현화 식물의 생활주기는 3개의 성장 단계로 나눌 수 있다: 영양, 개화, 및 꽃(후기 개화 단계). 영양 단계에서, 경단 분열 조직(SAM)이 후에 번식력이 있는 자손을 생산하기 위하여 필요한 공급원을 확보하게 될 잎을 발생시킨다. 적절한 환경 및 발달의 신호를 받아 식물이 꽃 또는 번식으로 전환하면, 성장 및 SAM은 개화 단계 (I)로 들어가고 화성 시원체(flower primordia)를 갖는 개화를 일으킨다. 이 단계 동안 잎의 옆액에 발생하는 덧가지 및 SAM의 운명은 분열조직 동일성 유전자의 세트의 분열조직에 의해 결정되고, 이들의 일부는 꽃의 분열조직의 발달을 막고 일부는 증진시킨다. 일단 확립되면, 식물은 후기 개화 단계에 들어가고(Xu et al.(1995) plant Mol . Biol. 27:237) 여기에서 꽃의 기관이 생산된다. 식물이 꽃 또는 번식, 성장으로 전환하게 되는 적절한 환경 및 발달 신호가 파괴되면, 식물은 번식 성장에 들어갈 수 없게 되므로, 영양 성장을 유지한다.
종자 또는 묘목 활력은 식물, 예컨대, 농작물의 성공적인 성장에 크게 영향을 미칠 수 있는 중요한 성질이다. 불리한 환경 조건, 예컨대, 건조, 습함, 춥거나 더운 조건은 식물 성장 사이클 및 종자의 활력에 영향을 줄 수 있다(즉, 이러한 조건 하의 생명력 및 강도는 성공적 농작물 성장과 실패의 농작물 성장을 구별할 수 있다). 묘목 활력은 자주 "광범위한 필드 조건 하에 정상적인 묘목의 빠르고, 균일한 발생 및 발달의 잠재성"을 결정하는 종자 성질을 포함하는 것으로 정의되어 왔다. 그러므로, 증가된 활력을 갖는 식물 종자의 발달이 유리할 것이다.
예를 들어, 증가된 묘목 활력은 곡물, 예컨대, 쌀, 옥수수(maize), 밀 등의 생산에 있어서 유리할 것이다. 이들 농작물에 있어서, 성장은 종종 자라는 동안의 추운 환경 온도에 의해 느려지거나 정지될 수 있다. 또한 쌀의 빠른 발생 및 분얼은 재배자가 물을 절약하고 약한 성장을 억제할 수 있는 담수 관개(flood irrigation)를 더 빨리 개시할 수 있다. 그러므로, 쌀에서 증가된 종자 활력 및/또는 내냉성과 관련된 유전자는 개선된 쌀 변종을 생산하기 위하여 탐색되어 왔다. 예를 들어, Pinson, S., "Molecular Mapping of Seedling Vigor QTLs in Tropical Rice", USDA Agricultural Research Service, December 16, 2000 참조.
묘목 활력은 가장 전형적인 내냉성 검사 및 가속 노화 검사를 포함하는, 여러가지의 검사 및 어세이로 측정되어 왔다.
본 발명의 뉴클레오티드 서열의 일부는 염기성-헬릭스-루프(bHCH) 전사 인자를 코딩한다. 전사 인자는 종종 경로에서 복합 유전자의 발현을 조절하는 것으로 공지되어 있다. 염기성/헬릭스-루프-헬릭스(BHLH) 단백질은 특정 DNA 타겟 자리에 다이머로서 결합하는 전사 인자의 수퍼패밀리이다. bHLH 전사 인자는 비식물 진핵생물에서 잘 특정지어지고 다른 생물학적 과정에서 중요한 조절 성분으로 확인되어 왔다. 종종 호모- 또는 헤테로-다이머화와 관련된 세포 증식 및 전사의 조절을 포함하는, 많은 다른 기능이 동물에서 그들의 단백질에 대하여 확인되었다. 식물 전사 인자의 R/B 염기성 헬릭스-루프-헬릭스(bHCH) 패밀리의 일원은 다양한 성장 및 분화 과정과 관련 있다.
염기성-헬릭스-루프-헬릭스(bHLH)는 전사 인자의 패밀리를 특정짓는 단백질 구조 모티프이다. 모티프는 루프에 의해 연결되는 두개의 α 헬릭스에 의해 특정지어진다. 이 타입의 전사 인자는 전형적으로 다이머이고, 각각은 DNA 결합을 용이하게 하는 염기성 아미노산 잔기를 포함하는 하나의 헬릭스를 갖는다. 하나의 헬릭스는 전형적으로 더 작고 루프의 유연성 때문에 다른 헬릭스에 대한 접힘과 팩킹에 의한 다이머화를 허용한다. 더 큰 헬릭스는 전형적으로 DNA 결합 영역을 포함한다. bHLH 단백질은 전형적으로 E-박스, CANNTG라 칭해지는 공통 서열에 결합한다. 기준의 E-박스는 CACGTG이지만, 일부 bHLH 전사 인자는 종종 E-박스와 유사한 다른 서열에 결합한다. bHLH 전사 인자는 종종 발달 또는 세포 활성에 중요하다.
4. 본 발명의 폴리뉴클레오티드/폴리펩티드
본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 이들 폴리뉴클레오티드의 번역을 통하여 발현되는 단백질은 서열 목록, 특히, 서열번호 80, 81, 90, 91, 92, 93, 98, 99, 109, 110, 103 및 104에 기재하였다. 서열 목록은 또한 기능적으로 유사한 단백질로 구성된다. 공통 서열의 하나로 확인되고 서열 내의 서열로 구성되는 폴리펩티드는 본 발명의 목적, 즉, 조절된 바이오매스, 성장 속도 및/또는 묘목 활력을 갖는 유전자 도입 식물을 제조하는데 사용될 수 있다.
5. 유전자 도입 식물을 제조하기 위한 폴리펩티드의 용도
본 발명의 서열 또는 이들의 조합 또는 이들의 일부 및/또는 돌연변이 및/또는 융합 및/또는 변체를 사용하기 위하여, 벡터로 삽입된 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고 식물 세포의 형질전환에 적절한 재조합 DNA 작제물을 제조하였다. 상기 작제물은 기준 재조합 DNA 기술(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, New York 참조)을 사용하여 제조될 수 있고, 예를 들어, 아그로박테리움(Agrobacterium)-중재 형질전환 또는 형질전환의 다른 수단, 예를 들어, 후술할 수단에 의해 대상 식물 종으로 도입될 수 있다.
벡터 골격은 분야에서 전형적으로 사용할 수 있는 임의의 것, 예컨대, 플라스미드, 바이러스, 인공적 크로모좀, BAC, YAC, PAC 및 벡터, 예컨대, 박테리아-이스트 운반 벡터, 람다 파지 벡터, T-DNA 융합 벡터 및 플라스미드 벡터(Shizuya et al.(1992) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89: 8794-8797; Hamilton et al.(1996) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 93: 9975-9979; Burke et al.(1987) Science, 236:806-812 ; Sternberg N. et al.(1990) Proc Natl Acad Sci U S A., 87:103-7; Bradshaw et al.(1995) Nucl Acids Res, 23: 4850-4856; Frischauf et al.(1983) J Mol Biol, 170: 827-842; Huynh et al., Glover NM(ed) DNA Cloning: A practical Approach, VoLl Oxford: BRL Press(1985); Walden et al.(1990) Mol cell Biol 1: 175-194, 참조)일 수 있다.
전형적으로, 작제물은 전사 및/또는 번역 조절 서열, 예컨대, 프로모터, UTR, 및 3' 말단 종결 서열을 갖는 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함한다. 벡터는 또한, 예를 들어, 복제의 기원, 스캐폴드 부착 영역(SAR), 마커, 호몰로그 서열 및 인트론을 포함한다. 벡터는 또한 식물 세포에서 선택적 표현형으로 간주되는 마커 유전자를 포함한다. 마커는 바람직하게 살생물제 내성 성질, 특히 항생제 내성, 예컨대, 예를 들어, 카나마이신, 블레오마이신, 또는 하이그로마이신에 대한 내성, 또는 제초제 내성, 예컨대, 예를 들어, 글라이포세이트, 클로로설푸론 또는 포스피노트리신에 대한 내성을 코딩한다.
하나 이상의 조절 영역, 예를 들어, 인트론, 인핸서, 업스트림 활성화 영역, 전사 종결자 및 유도 요소가 재조합 폴리뉴클레오티드에 존재할 것이라는 것이 이해될 것이다. 따라서, 하나 이상의 조절 영역은 상기 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다.
서열에 프로모터 서열이 "작동가능하게 연결"되기 위하여, 상기 서열의 번역 리딩 프레임의 번역 개시 자리는 전형적으로 프로모터의 하나 내지 약 50개의 뉴클레오티드 다운스트림에 위치한다. 그러나, 프로모터는 번역 개시 자리의 약 5,000개의 뉴클레오티드 업스트림, 또는 전사 시작 자리의 약 2,000개의 뉴클레오티드 업스트림에 위치할 수 있다. 프로모터는 전형적으로 적어도 코어(기본적인) 프로모터를 포함한다. 프로모터는 또한 적어도 하나의 조절 요소, 예컨대, 인핸서 서열, 업스트림 요소 또는 업스트림 활성화 영역(UAR)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 적절한 인핸서는 옥토핀 신타아제(ocs) 유전자의 업스트림 영역의 시스-조절 요소(-212 내지 -154)이다. Fromm et al., The Plant Cell 1:977-984(1989).
기본적인 프로모터는 전사 개시에 있어서 필요한 전사 컴플렉스의 어셈블리에 필수불가결한 최소의 서열이다. 기본적인 프로모터는 종종 전사 개시 자리로부터 약 15 내지 약 35개의 뉴클레오티드 업스트림에 위치할 수 있는 "TATA 박스" 요소를 포함한다. 기본적인 프로모터는 또한 "CCAAT 박스" 요소(전형적으로 서열 CCAAT) 및/또는 GGGCG 서열을 포함할 수 있고, 이는 전사 시작 자리로부터 약 40 내지 약 200개의 뉴클레오티드, 전형적으로 약 60 내지 약 120개의 뉴클레오티드 업스트림에 위치할 수 있다.
포함될 수 있는 프로모터의 선택은, 한정하는 것은 아니나, 효율, 선택성, 유도성, 원하는 발현 수준 및 세포- 또는 조직-선택적 발현을 포함하는 몇몇의 인자에 달려있다. 프로모터 및 상기 서열에 상대적인 다른 조절 영역의 적절한 선택 및 포지셔닝에 의한 서열의 발현의 조절은 당업자에 일상적인 일이다.
일부 적절한 프로모터는 단지 또는 주로, 특정 세포 타입에서 전사를 개시한다. 예를 들어, 번식 조직(예를 들어, 열매, 배주, 화분, 암술, 암배우체, 난세포, 중심 세포, 주심, 배병, 조세포, 꽃, 배조직, 배낭, 배, 접합자, 배젖, 외피 또는 종피)에서 주로 활성인 프로모터가 사용될 수 있다. 따라서, 본원에서 사용된 바와 같이, 세포 타입- 또는 조직-선택적 프로모터는 타겟 조직에서 선택적으로 발현을 조정하는 하나이지만, 또한 조직에서뿐만 아니라 다른 세포 타입에서 일부 발현을 일으킬 수 있다. 식물 게놈의 DNA에서 프로모터 영역을 확인하고 특정짓는 방법은, 예들 들어, 하기 참조에 기재된 것을 포함한다: Jordano, et al., Plant Cell, 1:855-866(1989); Bustos, et al., Plant Cell, 1:839-854(1989); 녹색, et al., EMBO J. 7, 4035-4044(1988); Meier, et al., Plant Cell, 3, 309-316(1991); 및 Zhang, et al., Plant Physiology 110: 1069-1079(1996).
프로모터의 다양한 클래스의 예시는 하기에 기재된다. 하기에 기술된 프로모터의 일부는 미국 특허 출원 번호 60/505,689; 60/518,075; 60/544,771; 60/558,869; 60/583,691; 60/619,181; 60/637,140; 10/950,321; 10/957,569; 11/058,689; 11/172,703; 11/208,308; 및 PCT/US05/23639에 더욱 상세히 기재되어 있다. 프로모터는 하나의 식물 종에서 그의 활성을 기초로 한 하나의 분류에 대한 기준을 충족시킬 수 있고, 또한, 다른 식물 종에서 그의 활성을 기초로 한 다른 분류에 대한 기준을 충족시킬 수 있다는 것을 이해될 것이다.
다른 조절 영역: 5' 비번역 영역(UTR)이 본원에서 기재한 핵산 작제물에 포함될 수 있다. 5' UTR은 전사되지만 번역되지는 않고, 전사의 시작 자리와 번역 개시 코돈 사이에 위치하고 +1개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 3' UTR은 번역 종결 코돈과 번역물의 말단 사이에 위치할 수 있다. UTR은 특정 기능, 예컨대, mRNA 안정성을 증가시키거나 번역을 약화시키는 기능을 가질 수 있다. 3' UTR의 예시는, 한정하는 것은 아니나, 폴리아데닐화 신호 및 전사 종결 서열, 예를 들어, 노팔린 신타아제 종결 서열을 포함한다.
다양한 프로모터가 본 발명의 유전자의 발현을 조정하는데 사용될 수 있다. 이러한 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 1-79에 기재하였다. 이들의 일부는 광범위하게 발현하는 프로모터일 수 있고, 다른 것은 보다 조직 우선적일 수 있다.
프로모터가 전부는 아니지만, 많은 식물 조직 또는 식물 세포에서 전사를 촉진할 경우, "광범위하게 발현하는"이라고 칭할 수 있다. 예를 들어, 광범위하게 발현하는 프로모터는 하나 이상의 지맥, 경단(apex) 및 잎에서 작동가능하게 연결된 서열의 전사를 촉진시키지만, 뿌리 또는 줄기와 같은 조직에서는 전사를 약하게 촉진시키거나 전혀 촉진시키지 않는다. 다른 예시로서, 광범위하게 발현하는 프로모터는 하나 이상의 줄기, 지맥, 경단(apex) 및 잎에서 작동가능하게 연결된 서열의 전사를 촉진시키지만, 꽃 및 발육 중인 종자의 번식 조직과 같은 조직에서는 전사를 약하게 촉진시키거나 전혀 촉진시키지 않는다. 본원에서 제공된 핵산 작제물에 포함될 수 있는 광범위하게 발현하는 프로모터의 비-한정적인 예시는 p326(서열번호 76), YP0144(서열번호 55), YP0190(서열번호 59), p13879(서열번호 75), YP0050(서열번호 35), p32449(서열번호 77), 21876(서열번호 1), YP0158(서열번호 57), YP0214(서열번호 61), YP0380(서열번호 70), PT0848(서열번호 26), 및 PT0633(서열번호 7)을 포함한다. 추가의 예시는 콜리플라워 모자이크 바이러스(CaMV) 35S 프로모터, 만노핀 신타아제(MAS) 프로모터, 아그로박테리움 튜메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)의 1' 또는 2' 프로모터, 현삼 모자이크 바이러스 34S 프로모터, 액틴 프로모터, 예컨대, 쌀 액틴 프로모터, 및 유비퀴틴 프로모터, 예컨대, 옥수수(maize) 유비퀴틴-1 프로모터를 포함한다. 어떤 경우에는, CaMV 35S 프로모터가 광범위하게 발현하는 프로모터의 카테고리에서 제외된다.
뿌리-활성 프로모터는 뿌리 조직, 예를 들어, 뿌리 내피, 뿌리 표피, 또는 뿌리 관 조직에서 전사를 조정한다. 일부 구체예에서, 뿌리-활성 프로모터는, 단지 또는 주로 뿌리 조직에서 전사를 조정하는 뿌리-선택적 프로모터이다. 뿌리-선택적 프로모터는 YP0128(서열번호 52), YP0275(서열번호 63), PT0625(서열번호 6), PT0660(서열번호 9), PT0683(서열번호 14), 및 PT0758(서열번호 22)을 포함한다. 다른 뿌리-선택적 프로모터는 PT0613(서열번호 5), PT0672(서열번호 11), PT0688(서열번호 15), 및 PT0837(서열번호 24)을 포함하고, 이는 주로 뿌리 조직에서 전사를 조정하고 배주 및/또는 종자에서는 더욱 적은 범위로 조정한다. 뿌리-선택적 프로모터의 다른 예시는 CaMV 35S 프로모터의 뿌리-특이적 서브도메인(Lam et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 86:7890- 7894(1989)), Conkling et al., Plant Physiol. 93:1203-1211(1990)에 기재된 뿌리 세포 특이적 프로모터 및 담배 RD2 유전자 프로모터를 포함한다.
일부 구체예에서, 성숙한 배젖에서 전사를 조정하는 프로모터는 유용할 수 있다. 성숙한 배젖 프로모터로부터의 전사는 전형적으로 수정 후 시작되고 종자가 발육 중인 배젖 조직에서 주로 일어나고 전형적으로 세포화 단계 동안 가장 높다. 비록 또한 다른 조직에서 활성인 프로모터가 종종 사용될 수 있지만, 주로 성숙한 배젖에서 활성인 프로모터가 가장 적절하다. 본원에서 제공된 핵산 작제물에 포함될 수 있는 성숙한 배젖 프로모터의 비-한정적인 예시는 나핀 프로모터, 아르셀린-5 프로모터, 파세올린 유전자 프로모터(Bustos et al.(1989) Plant Cell 1(9):839-853), 대두 트립신 억제제 프로모터(Riggs et al.(1989) Plant Cell 1(6):609-621), ACP 프로모터(Baerson et al.(1993) Plant Mol Biol, 22(2):255-267), 스테아로일-ACP 데세튜라제(desaturase) 유전자(Slocombe et al.(1994) Plant Physiol 104(4): 167- 176), β-콘글리시닌 프로모터의 대두 α' 서브유닛(Chen et al.(1986) Proc Natl Acad Sci USA 83:8560-8564), 올레오신 프로모터(Hong et al.(1997) Plant Mol Biol 34(3):549-555), 및 제인 프로모터, 예컨대, 15 kD 제인 프로모터, 16 kD 제인 프로모터, 19 kD 제인 프로모터, 22 kD 제인 프로모터 및 27 kD 제인 프로모터를 포함한다. 또한 쌀 글루텔린-1 유전자의 Osgt-1 프로모터(Zheng et al.(1993) Mol . Cell Biol. 13:5829-5842), 베타-아밀라아제 유전자 프로모터 및 보리 호르데인 유전자 프로모터도 적절하다. 다른 성숙한 배젖 프로모터는 YP0092(서열번호 38), PT0676(서열번호 12), 및 PT0708(서열번호 17)을 포함한다.
배주 벽 및 중과피와 같은 씨방 조직에서 전사를 조정하는 프로모터, 예를 들어, 폴리갈락투로니다아제 프로모터, 바나나 TRX 프로모터 및 멜론 액틴 프로모터가 또한 유용할 수 있다. 배주에서 선택적으로 유전자 발현을 조정하는 다른 프로모터는 YP0007(서열번호 30), YPO111(서열번호 46), YP0092(서열번호 38), YP0103(서열번호 43), YP0028(서열번호 33), YP0121(서열번호 51), YP0008(서열번호 31), YP0039(서열번호 34), YPO115(서열번호 47), YPO119(서열번호 49), YP0120(서열번호 50) 및 YP0374(서열번호 68)이다.
본 발명의 일부 다른 구체예에서, 배낭/이른 배젖 프로모터는, 난세포 또는 난세포에 대한 전구체에서가 아닌, 극핵 및/또는 중심 세포, 또는 극핵에 대한 전구체에서 관심 있는 서열의 전사를 조정하기 위하여 사용될 수 있다. 단지 또는 주로 극핵 또는 그에 대한 전구체 및/또는 중심 세포에서 발현을 조정하는 프로모터가 가장 적절하다. 비록 전사는 전형적으로 세포화 단계 동안 및 후에 후기 배젖 발달에서 유의하게 감소하지만 극핵에서 이른 배젖 발달로 확장되는 전사의 페턴은 또한 배낭/이른 배젖-선택적 프로모터로 발견될 수 있다. 접합자 또는 발육중인 배에서의 발현은 전형적으로 배낭/이른 배젖-선택적 프로모터로 존재하지 않는다.
적절할 수 있는 프로모터는 하기 유전자로부터 유래된 것을 포함한다: 아라비돕시스 비비파로우수-1(Arabidopsis viviparous-1)(GenBank No. U93215 참조); 아라비돕시스 애트믹1(Arabidopsis atmyc1)(Urao(1996) Plant Mol Biol, 32:571-57; Conceicao(1994) Plant, 5:493-505 참조); 아라비돕시스 FIE(Arabidopsis FIE)(GenBank No. AF129516); 아라비돕시스 MEA(Arabidopsis MEA); 아라비돕시스 FIS2(Arabidopsis FIS2)(GenBank No. AF096096); 및 FIE 1.1(U.S. 특허 6,906,244). 적절할 수 있는 다른 프로모터는 하기 유전자로부터 유래된 것을 포함한다: 옥수수(maize) MAC1(Sheridan(1996) Genetics, 142:1009-1020 참조); 옥수수(maize) Cat3(GenBank No. L05934; Abler(1993) Plant Mol . Biol, 22:10131-1038 참조). 다른 프로모터는 하기 아리비돕시스 프로모터를 포함한다: YP0039(서열번호 34), YPO1O1(서열번호 41), YP0102(서열번호 42), YPO110(서열번호 45), YPO117(서열번호 48), YPO119(서열번호 49), YP0137(서열번호 53), DME, YP0285(서열번호 64), 및 YP0212(서열번호 60). 유용할 수 있는 다른 프로모터는 하기 쌀 프로모터를 포함한다: p530c10, pOsFIE2-2, pOsMEA, pOsYpl02 및 pOsYp285.
수정에 따르는 접합 세포에서 전사를 선택적으로 조정하는 프로모터는 배-선택적 발현을 제공할 수 있고 본 발명에 유용할 수 있다. 하트 단계 이전의 이른 단계 배에서 선택적으로 전사를 조정하는 프로모터가 가장 적절하지만, 후기 단계 및 성숙한 배에서의 발현도 적절하다. 배-선택적 프로모터는 보리 리피드 전달 단백질(Ltp1) 프로모터(Plant Cell Rep(2001) 20:647-654), YP0097(서열번호 40), YP0107(서열번호 44), YP0088(서열번호 37), YP0143(서열번호 54), YP0156(서열번호 56), PT0650(서열번호 8), PT0695(서열번호 16), PT0723(서열번호 19), PT0838(서열번호 25), PT0879(서열번호 28) 및 PT0740(서열번호 20)을 포함한다.
잎 및 줄기와 같은 녹색 조직에서 전사를 조정하기 위한 광합성 조직에서의 프로모터의 활성은 본 발명에 있어서 특히 관심 있는 것이다. 단지 또는 주로 이러한 조직에서 발현을 조정하는 프로모터가 가장 적절하다. 이러한 프로모터의 예시는 리불로오스-1,5-비스포스페이트 카르복실라아제(RbcS) 프로모터, 예컨대, 이스턴 라치(Larix laricina)의 RbcS 프로모터, 파인 cab6 프로모터(Yamamoto et al.(1994) Plant Cell Physiol. 35:773-778), 밀 유래의 Cab-1 유전자 프로모터(Fejes et al.(1990) Plant Mol . Biol. 15:921-932), 시금치 유래의 CAB-1 프로모터(Lubberstedt et al.(1994) Plant Physiol. 104:997-1006), 쌀 유래의 cab1R 프로모터(Luan et al.(1992) Plant Cell 4:971-981), 옥수수 유래의 피루베이트 오르토포스페이트 디키나아제(PPDK) 프로모터(Matsuoka et al.(1993) Proc Natl Acad . Sci USA 90:9586-9590), 담배 Lhcb1*2 프로모터(Cerdan et al.(1997) Plant Mol . Biol. 33:245-255), 아라비돕시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana) SUC2 수크로오스-H+ 심포터(symporter) 프로모터(Truernit et al.(1995) Planta 196:564-570), 및 시금치 유래의 틸라코이드 막 단백질 프로모터(psaD, psaF, psaE, PC, FNR5 atpC, atpD, cab, rbcS)를 포함한다. 줄기, 잎 및 녹색 조직에서 전사를 조정하는 다른 프로모터는 PT0535(서열번호 3), PT0668(서열번호 2), PT0886(서열번호 29), PR0924(서열번호 78), YP0144(서열번호 55), YP0380(서열번호 70) 및 PT0585(서열번호 4)이다.
본 발명의 일부 다른 구체예에서, 유도 프로모터가 바람직할 수 있다. 유도 프로모터는 화학제 또는 환경적 자극과 같은 외부 자극에 대한 반응에서 전사를 조정한다. 예를 들어, 유도 프로모터는 호르몬, 예컨대, 지베렐린산 또는 에틸렌, 또는 빛 또는 가뭄에 대한 반응에서 전사를 제공할 수 있다. 가뭄 유도 프로모터의 예시는 YP0380(서열번호 70), PT0848(서열번호 26), YP0381(서열번호 71), YP0337(서열번호 66), YP0337(서열번호 66), PT0633(서열번호 7), YP0374(서열번호 68), PT0710(서열번호 18), YP0356(서열번호 67), YP0385(서열번호 73), YP0396(서열번호 74), YP0384(서열번호 72), YP0384(서열번호 72), PT0688(서열번호 15), YP0286(서열번호 65), YP0377(서열번호 69) 및 PD1367(서열번호 79)이다. 질소에 의해 유도된 프로모터의 예시는 PT0863(서열번호 27), PT0829(서열번호 23), PT0665(서열번호 10) 및 PT0886(서열번호 29)이다. 그늘 유도 프로모터의 예시는 PR0924(서열번호 78)이다.
다른 프로모터: 프로모터의 다른 클래스는, 한정하는 것은 아니나, 잎-선택적, 줄기/지맥-선택적, 캘러스-선택적, 공변 세포-선택적, 예컨대, PT0678(서열번호 13), 및 노화-선택적 프로모터를 포함한다. 상기-참조된 특허 출원에 기재된 바와 같이, YP0086(서열번호 36), YPOl 88(서열번호 58), YP0263(서열번호 62), PT0758(서열번호 22), PT0743(서열번호 21), PT0829(서열번호 23), YPO119(서열번호 49) 및 YP0096(서열번호 39)으로 설계된 프로모터도 또한 유용할 수 있다.
대안적으로, 발현이상은 두개의 성분 시스템을 사용하여 달성될 수 있고, 제 1의 성분은 프로모터에 작동가능하게 연결된 전사 활성물을 포함하는 유전자 도입 식물로 구성되고, 전사 활성물의 타겟-결합 서열/영역에 작동가능하게 연결된 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 제 2의 성분은 유전자 도입 식물로 구성된다. 두개의 유전자 도입 식물은 교차되고 본 발명의 핵산 분자가 식물의 자손에서 발현된다. 본 발명의 다른 대안적인 구체예에서, 발현이상은 하나의 유전자 도입 식물주에 형질전환된 두개의 성분 시스템의 서열을 가짐으로써 달성될 수 있다.
다른 대안은 관심 있는 식물 종에서 바이오매스 또는 활력을 조절하는 폴리펩티드의 발현을 억제하는데 있다. 용어 "발현"은 폴리뉴클레오티드에 코딩된 유전적 정보를 폴리뉴클레오티드의 전사를 통하여(예; RNA 폴리머라아제의 효소 작용을 통하여) RNA로 전환시키고, mRNA의 번역을 통하여 단백질로 전환시키는 과정을 의미한다. "상향 조절" 또는 "활성화"는 기본 또는 자연적인 상태와 비교하여 발현 산물의 생산을 증가시키는 조절을 의미하는 반면, "하향 조절" 또는 "억제"는 기본 또는 자연적인 상태와 비교하여 생산을 감소시키는 조절을 의미한다.
안티센스 RNA, 리보자임의 직접 RNA 절단 및 간섭 RNA(RNAi)를 포함하는 많은 핵산을 기본으로 하는 방법은 식물에서 단백질 발현을 억제하는데 사용될 수 있다. 안티센스 기술은 하나의 공지된 방법이다. 이 방법에서, 내생적 유전자의 핵산 단편은 클론되고 프로모터에 작동가능하게 연결되어 RNA의 안티센스 가닥이 전사된다. 이어서 재조합 벡터는 상술한 바와 같이, 식물로 형질전환되고, RNA의 안티센스 가닥이 생산된다. 핵산 단편은 억제시키기 위한 내생적 유전자의 전체 서열일 필요는 없지만, 전형적으로 억제시키기 위한 내생적 유전자의 적어도 일부분과 실질적으로 동일할 것이다. 일반적으로, 고 호몰로그는 더 짧은 서열의 사용을 보상하는데 사용될 수 있다. 전형적으로, 적어도 30개의 뉴클레오티드의 서열이 사용된다(예: 적어도 40, 50, 80, 100, 200, 500개의 뉴클레오티드 또는 그 이상).
따라서, 예를 들어, 본원에서 제공되는 분리된 핵산은 바이오매스를 조절하는 폴리펩티드를 코딩하는 상술한 핵산의 하나에 대한 안티센스 핵산일 수 있다. 바이오매스를 조절하는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 전사 또는 번역 산물의 수준을 감소시키는 핵산은 바이오매스- 또는 성장 속도를 조절하는 폴리펩티드의 센스 코딩 서열에 대해 유사하거나 동일한 안티센스 핵산으로 전사된다. 대안적으로, 분리된 핵산의 전사 산물은 바이오매스 성장 속도를 조절하는 폴리펩티드의 센스 코딩 서열에 대해 유사하거나 동일할 수 있으나, 폴리아데닐화되지 않고, 5' 캡 구조가 결여되었거나, 스플라이싱되지 않은 인트론을 포함하는 RNA이다.
다른 방법에서, 핵산은 리보자임, 또는 촉매작용의 RNA로 전사될 수 있고, mRNA의 발현에 영향을 미친다(미국 특허 번호 6,423,885 참조). 리보자임은 실질적으로 임의의 타겟 RNA와 특이적으로 쌍을 이루도록 설계될 수 있고 특정 위치에서 포스포디에스테르 골격을 절단함으로써, 기능적으로 타겟 RNA을 비활성화시킨다. 이종 핵산은 특정 mRNA 전사물을 절단하도록 설계된 리보자임을 코딩할 수 있고, 따라서 폴리펩티드의 발현을 막는다. 비록 자리-특이적 인식 서열에서 mRNA를 절단하는 다양한 리보자임이 사용될 수 있지만, 귀상어머리모양의 리보자임은 특정 mRNA를 파괴하는데 유용하다. 귀상어머리모양의 리보자임은 타겟 mRNA와 상보성 염기 쌍을 형성하는 플랭킹 영역에 의해 지시된 위치에서 mRNA를 절단한다. 타겟 RNA가 5'-UG-3' 뉴클레오티드 서열을 포함하여야 하는 것이 하나의 요건이다. 귀상어머리모양의 리보자임의 작제 및 생산은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,254,678 및 WO 02/46449 및 본원에 언급된 참조를 참조. 귀상어머리모양의 리보자임 서열은 생체 내에서 절단 효율을 증가시키기 위하여 전달 RNA(tRNA)와 같은 안정적인 RNA를 포함할 수 있다. Perriman, et al.(1995) Proc. Natl. Acad . Sci . USA, 92(13):6175-6179; de Feyter 및 Gaudron, Methods in Molecular Biology, Vol. 74, Chapter 43, "Expressing Ribozymes in Plants", Edited by Turner, P.C, Humana Press Inc., Totowa, NJ. RNA 엔도리보뉴클레아제는 테트라히메나 테모필라(Tetrahymena thermophila)에서 자연적으로 발생하는 하나이고, Cech와 공동연구자들에 의해 널리 기술되었던 것으로, 유용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4,987,071 참조.
RNA 간섭(RNAi)을 기초로 한 방법이 사용될 수 있다. RNA 간섭은 유전자의 발현 및 바이러스의 복제를 조절하기 위한 세포적 기작이다. 이 기작은 이중-가닥의 작은 간섭 RNA 분자에 의해 중재되는 것으로 알려졌다. 세포는 이중-가닥 RNA로서 같은 서열을 갖는 내생적 mRNA를 파괴함으로써 이러한 이중-가닥 RNA에 반응한다. 간섭 RNA의 설계 및 제조의 방법은 당업자들에게 공지되어 있다; 예를 들어, WO 99/32619 및 WO 01/75164 참조. 예를 들어, 간섭 RNA로 전사되는 서열을 포함하는 작제물이 제조될 수 있다. 이러한 RNA는 그 자체에 어닐링 될 수 있는, 예를 들어, 줄기-루프 구조를 갖는 이중-가닥 RNA의 하나일 수 있다. 이중 가닥 RNA의 줄기 부분의 하나의 가닥은 관심 있는 폴리펩티드의 센스 코딩 서열에 유사하거나 동일한 서열을 포함하고, 약 10개의 뉴클레오티드 내지 약 2,500개의 뉴클레오티드 길이이다. 센스 코딩 서열에 유사하거나 동일한 서열의 길이는 10개의 뉴클레오티드 내지 500개의 뉴클레오티드, 15개의 뉴클레오티드 내지 300개의 뉴클레오티드, 20개의 뉴클레오티드 내지 100개의 뉴클레오티드, 또는 25개의 뉴클레오티드 내지 100개의 뉴클레오티드일 수 있다. 이중 가닥 RNA의 줄기 부분의 다른 가닥은 관심 있는 바이오매스를 조절하는 폴리펩티드의 안티센스 서열을 포함하고, 센스 서열의 상응하는 길이보다 더 짧거나, 동일하거나, 더 긴 길이를 가질 수 있다. 이중 가닥 RNA의 루프 부분은 10개의 뉴클레오티드 내지 5,000개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 15개의 뉴클레오티드 내지 1,000개의 뉴클레오티드, 20개의 뉴클레오티드 내지 500개의 뉴클레오티드, 또는 25개의 뉴클레오티드 내지 200개의 뉴클레오티드일 수 있다. RNA의 루프 부분은 인트론을 포함할 수 있다. 예를 들어, WO 99/53050 참조.
식물에서 유전자 발현의 억제에 대한 핵산을 기초로 한 일부 방법에서, 적절한 핵산은 핵산 유사체일 수 있다. 핵산 유사체는 예를 들어, 핵산의 안정성, 혼성화, 또는 용해도를 증진시키기 위하여, 염기 일부분, 슈가 일부분, 또는 포스페이트 골격에서 변경될 수 있다. 염기 일부분의 변경은 데옥시티미딘에 대한 데옥시우리딘, 데옥시시티딘에 대한 5-메틸-2'-데옥시시티딘 및 5-브로모-2'-데옥시시티딘을 포함할 수 있다. 슈가 일부분의 변경은 2'-O-메틸 또는 2'-O-알릴 슈가를 형성하기 위한 리보오스 슈가의 2' 하이드록실의 변경을 포함한다. 데옥시리보오스 포스페이트 골격은 모폴리노 핵산을 생산하기 위하여 변경될 수 있고, 각각의 염기 일부분은 6-원 모폴리노 환, 또는 펩티드 핵산에 연결되고, 데옥시포스페이트 골격은 슈도펩티드 골격에 의해 대체되고 4개의 염기는 유지된다. 예를 들어, Summerton 및 Weller, 1997, Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7:187-195; Hyrup et al., 1996, Bio기관. Med . Chem., 4: 5-23 참조. 또한, 데옥시포스페이트 골격은 예를 들어, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트 골격, 포스포로아미다이트, 또는 알킬 포스포트리에스테르 골격으로 대체될 수 있다.
형질전환
본 발명의 핵산 분자는 다양한 기술에 의해 적절한 숙주 식물의 게놈 또는 세포로 도입될 수 있다. 다양한 고등 식물 종에 형질전환이 가능한 이들 기술은 공지되어 있고 기술 및 과학 문헌에 기재되어 있다(예를 들어, Weising et al.(1988) Ann. Rev. Genet., 22:421 및 Christou(1995) Euphytica, 85:13-27 참조).
당업계에 공지된 다양한 기술은 DNA를 식물 숙주 세포로 도입하는데 유용하다. 이들 기술은 주입(Newell(2000)), 마이크로주입(Griesbach(1987) Plant Sci 50:69-77), DNA의 전기천공법(Fromm et al.(1985) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 82:5824), PEG(Paszkowski et al.(1984) EMBO J. 3:2717), 바이오리스틱의 사용(Klein et al.(1987) Nature 327:773), 세포 또는 원형질체의 융합(Willmitzer, L.(1993) Transgenic Plants. In: Iotechnology, A Multi-Volume Comprehensive treatise(HJ. Rehm, G. Reed, A. Pueler, P. Stadler, eds., Vol. 2, 627- 659, VCH Weinheim-New York-Basel-Cambridge)), 및 아그로박테리움 튜메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)(Crit . Rev. Plant. Sci . 4:1-46; Fromm et al.(1990) Biotechnology 8:833-844) 또는 아그로박테리움 라이조네스(Agrobacterium rhizogenes)(Cho et al.(2000) Planta 210:195-204) 또는 예를 들어, 다른 숙주(Brootghaerts et al.(2005) Nature 433:629-633)를 사용하는 T-DNA에 의한 식물 세포의 형질전환을 포함한다
또한, 당업자들에게 공지된 대다수의 비-안정적인 형질전환 방법은 본 발명에 있어서 바람직할 수 있다. 이러한 방법은 한정하는 것은 아니나, 한시적인 발현(Lincoln et al.(1998) Plant Mol . Biol . Rep. 16:1-4) 및 바이러스 트랜스펙션(Lacomme et al.(2001), "Genetically Engineered Viruses"(C.J.A. Ring 및 E.D. Blair, Eds). Pp. 59-99, BIOS Scientific Publishers, Ltd. Oxford, UK)을 포함한다.
종자는 형질전환된 식물로부터 수득되고 안정성 및 유전성 성질을 검사하는데 사용된다. 일반적으로, 두개 이상의 세대가 표현형 특색이 안정적으로 유지되고 전달되는지 확인하기 위하여 재배된다.
당업자는 발현 카세트를 유전자 도입 식물에 도입하고 작동가능하도록 확인한 후, 이를 유성 교배에 의해 다른 식물로 도입할 수 있다는 것을 인지한다. 많은 기준 육성 기술 중 임의의 것이 사용될 수 있고, 이는 교배되는 종에 달려있다.
본 발명의 핵산 분자는 변경된 개화 시간을 제공하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 핵산 분자는 임의의 유기체, 바람직하게는 식물, 진균류, 박테리아 또는 동물에서 발견되는 적절한 단백질을 코딩한다.
본 발명의 방법은 임의의 식물, 바람직하게는 피자식물아문(Angiospermae) 및 나자식물문(Gymnospermae)의 클래스가 속해 있는, 고등 식물에 적용될 수 있다. 쌍떡잎식물강(Dicotyledonae) 및 외떡잎식물강(Monocotyledonae)의 서브클래스의 식물이 특히 적절하다. 예를 들어, Magniolales , Hliciales, Laurales , Piperales Aristochiales , Nymphaeales , Ranunculales , Papeverales , Sarraceniaceae , Trochodendrales , Hamamelidales , Eucomiales , Leitneriales , Myricales, Fagales , Casuarinales , Caryophyllales , Batales , Polygonales , Plumbaginales, Dilleniales , Theales , Malvales , Urticales, Lecythidales , Violates, Salicales , Capparales , Ericales , Diapensales , Ebenales , Primulales, Rosales , Fabales , Podostemates , Haloragales , Myrtales , Cornales , Proteales , Santales , Rqfflesiales , Celastrales , Euphorbiales , Rhamnales, Sapindales , Juglandales , Geraniales , Polygalales , Umbellales , Gentianales , Polemoniales , Lamiales, Plantaginales , Scrophulariales , Campanulales, Rubiales , Dipsacales, 및 Asterales의 목에 속해 있는 쌍떡잎 식물도 또한 적절하다. Alismatales, Hydrocharitales , Najadales , Triuridales , Commelinales , Eriocaulales , Restionales , Poales, Juncales , Cyperales , Typhales , Bromeliales , Zingiberales , Arecales , Cyclanthales , Pandanales , Arales , Lilliales, 및 Orchidales의 목에 속해 있는 외떡잎 식물도 또한 본 발명의 구체예에서 유용할 수 있다. 추가의 예시는 한정하는 것은 아니나, 나자식물문의 클래스에 속해 있는 식물인 Pinales, Ginkgoales , CycadalesGnetales를 포함한다.
본 발명의 방법은 농업, 원예, 생물전환 및/또는 임업에 대한 바이오매스에 대하여 중요하거나 관심 있는 식물에서 바람직하게 사용된다. 비-제한적인 예시는, 예를 들어, 담배, 유량종자 평지, 사탕무, 감자, 토마토, 오이, 후추, 강낭콩, 완두콩, 감귤류의 열매, 아보카도, 복숭아, 사과, 배, 베리, 자두, 멜론, 가지, 목화, 대두, 해바라기, 장미, 포인세티아, 페튜니아, 구아율, 양배추, 시금치, 알파파, 아티초크, 사탕수수, 미모사, Serviced lespedera, 옥수수(corn), 밀, 쌀, 호밀, 보리, 수수 및 볏과의 식물, 예컨대, 스위치 그래스, 물대, 버뮤다 그래스, 존슨 그래스 또는 터프 그래스, 기장, 삼, 바나나, 포플러, 유칼립투 나무, 및 구과식물을 포함한다. 에너지 생산에 대하여 성장된 플레이트가 흥미로와, 알파파, 삼, 뚱딴지(Jerusalem artichoke)와 같은 활엽 식물 및 볏과의 식물, 예컨대, 수수(sorgum), 스위치 그래스, 존슨 그래스 등은 에너지 농작물이라 칭해진다.
본 발명에 의해 포함되는 호몰로그
서열에서 하나 이상의 아미노산은 다른 아미노산(들)로 치환될 수 있고, 치환된 아미노산의 것과 유사한 전하 및 극성, 즉, 통상의 아미노산 치환은 생물학적으로/기능적으로 침묵의 변화를 가져온다. 폴리펩티드 서열 이내의 아미노산에 대한 통상의 치환기는 아미노산이 속해 있는 클래스의 다른 원으로부터 선택될 수 있다. 아미노산은 하기의 4개의 그룹으로 분류될 수 있다: (1) 산성(음으로 하전된) 아미노산, 예컨대, 아스파르트산 및 글루타민산; (2) 염기성(양으로 하전된) 아미노산, 예컨대, 아르기닌, 히스티딘, 및 라이신; (3) 중성 극성 아미노산, 예컨대, 세린, 트레오닌, 티로신, 아르파라긴 및 글루타민; 및(4) 중성 비극성(소수성) 아미노산, 예컨대, 글리신, 알라닌, 루신, 이소루신, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 시스테인 및 메티오닌.
본 발명의 핵산 분자는, 하나 이상의 통상의 아미노산 변화를 갖는 단백질을 코딩하는 상이한 핵산 서열이라는 사실 때문에, 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319, 각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103으로 구성된 그룹으로부터 선택된 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 것과 상이한 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드의 생물학적 기능적 등가물 또는 그의 단편은 약 10개 이하의 통상의 아미노산 변화, 더욱 바람직하게 약 7개 이하의 통상의 아미노산 변화 및 가장 바람직하게 약 5개 이하의 통상의 아미노산 변화를 가질 수 있다. 본 발명의 바람직한 일 구체예에서, 폴리펩티드는 약 5개 내지 약 500개의 통상의 변화, 더욱 바람직하게 약 10개 내지 약 300개의 통상의 변화, 더더욱 바람직하게 약 25개 및 약 150개의 통상의 변화 및 가장 바람직하게 약 5개 및 약 25개의 통상의 변화 또는 1개 내지 약 5개의 통상의 변화를 갖는다.
유용한 핵산 분자 및 그의 상응하는 뉴클레오티드 서열의 확인
본 발명의 핵산 분자, 및 그의 뉴클레오티드 서열을 변경된 크기, 영양 성장, 성장 속도, 기관 수, 식물 구조 및/또는 바이오매스를 갖는 식물을 제공하는 뉴클레오티드 서열의 전조가 되는 다양한 스크린 사용으로 확인하였다. 그러므로, 하나 이상의 하기 스크린이 본 발명의 뉴클레오티드(및 아미노산) 서열을 확인하는데 이용된다.
본 발명은 하기 실시예로 더욱 설명된다. 실시예는 본 발명의 출원 및 그의 용도 범위를 어떤 식으로든 제한하고자 하는 것은 아니다.
6. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 유용성을 확인하는 실험
일반적인 프로토콜
아그로박테리움이 중재된 아라비돕시스의 형질전환
야생형 아라비돕시스(Arabidopsis) thaliana Wassilewskija(WS) 식물을 35S 프로모터에 대하여 상대적으로 센스 기원에서 클론을 함유한 Ti 플라스미드로 형질전환시켰다. 이들 작제물, CRS 338에 대하여 유용한 Ti 플라스미드 벡터는 세레스에서 작제된, 식물 선택가능한 마커 유전자 포스피노트리신 아세틸트란스퍼라아제(PAT)를 포함하고, 이는 형질전환된 식물 제조체 내성을 제공한다.
10개의 독립적으로 형질전환된 사례가 T1 세대에서 그들의 정성적 표현형에 대하여 특정적으로 선택되고 평가되었다.
토양 혼합물의 제조: 시멘트 믹서에서 24 L SunshineMix #5 토양(Sun Gro Horticulture, Ltd., Bellevue, WA)을 16 L Therm-O-Rock 질석(Therm-O- Rock West, Inc., Chandler, AZ)과 혼합하여 60:40 토양 혼합물을 제조하였다. 토양 혼합물에 2 Tbsp Marathon 1% 과립(Hummert, Earth City, MO), 3 Tbsp OSMOCOTE® 14-14-14(Hummert, Earth City, MO) 및 1 Tbsp Peters 비료 20-20-20(J.R. Peters, Inc., Allentown, PA)을 첨가하고, 이를 우선 3 갤론의 물에 첨가한 다음, 토양에 첨가하고 완전하게 혼합하였다. 통상의 4-인치 직경의 화분을 토양 혼합물로 채웠다. 이어서 화분을 8-인치 사각형의 나일론 망사로 덮었다.
식재: 60 mL의 주사기를 사용하여, 35 mL의 종자 혼합물을 흡인하였다. 깨끗한 번식 돔을 화분의 윗부분에 위치시킨 다음 55% 차광막 천 하에 두고 1 인치의 물을 첨가하여 지하관개하였다.
식물 유지: 식재 3 내지 4일 후, 뚜껑 및 차광막 천을 제거하였다. 필요에 따라 식물에 물을 주었다. 7-10일 후, 화분을 포셉(forcep)을 사용하여 화분 당 20개의 식물로 솎았다. 2주 후, 모든 식물을 물 갤런 당 1 Tsp의 비율로 Peters 비료로 지하관개하였다. 볼트가 약 5-10 cm 길이일 경우, 그들을 제 1의 마디와 줄기의 기저 사이에서 클리핑하여 제 2의 볼트를 유도하였다. 침지 용침(infiltration)은 클리핑 6 내지 7일 후에 수행하였다.
아그로박테리움(Agrobacterium)의 준비: 150 mL의 신선한 YEB에 카르베니실린, 스펙티노마이신 및 리팜피신(각각 100 mg/㎖ 스톡 농도) 각각의 0.1 mL을 첨가하였다. 아그로박테리움 스타터 블록을 수득하고(약 1.0의 OD6O0으로 성장된 아그로박테리움 배양균을 갖는 96-웰 블록) 스타터 블록 중 적절한 웰로부터 1 mL을 전달함으로써 작제물 당 하나의 배양 용기를 배양하였다. 이어서 배양균을 27℃에서 교반하면서 배양하였다. 배양균을 약 1.0의 OD6O0을 수득(약 24 시간)한 후 스핀다운하였다. 200 mL의 용침 매질을 현탁된 아그로박테리움 펠렛에 첨가하였다. 용침 매질을 2.2 g의 MS 염, 5O g의 수크로오스, 및 5 ㎕의 2 mg/㎖ 벤질아미노푸린을 900 ㎖의 물에 첨가함으로써 제조하였다.
침지 용침: 화분을 거꾸로 하고 5분 동안 물에 잠기게 하여 식물의 기생 부분을 아그로박테리움 현탁액에 넣었다. 식물을 정상적으로 자라게하였고 종자를 회수하였다.
발현이상 돌연변이의 초고속 표현형 스크리닝: 종자를 화분에서 물로-포화된 토양으로 평평하게 흩어지게 하고 균일한 발아를 촉진시키기 위하여 이틀 밤 동안 어두운 4℃ 냉각기에 두었다. 이어서 화분을 냉각기로부터 제거하고 4-5일 동안 55% 차광막 천으로 덮었다. 이 단계에서 떡잎은 완전히 벌어진다. FINALE®(Sanofi Aventis, Paris, France)을 식물(48 oz. 물로 희석된 3 ㎖ FINALE® )에 분무하고 형질전환체만 남을 때까지 3-4일 마다 반복하였다.
스크리닝: 스크리닝은 일반적으로 4개의 단계에서 수행된다: 묘목, 로제트, 개화기 및 노화기.
o 묘목 - 떡잎이 나온 후의 시기이지만, 세번째의 본엽은 형성되기 전.
o 로제트 - 세번째의 본엽의 발생 시기로부터 제 1의 볼트가 연장되기 전.
o 개화기 - 제 1의 볼트의 발생시기로부터 노화기(개화기 그 자체의 특색을 제외하고, 대부분의 관찰은 약 50%의 꽃이 핀 단계에서 관찰되어야 한다)의 시작까지.
o 노화기 - 노화기의 시작에 따르는 시기("지연된 노화기"를 제외하고, 대부분의 관찰은 식물이 완전히 마른 후에 수행되어야 한다). 이어서 종자를 회수한다.
스크린: 증가된 크기, 영양 성장 및/또는 바이오매스에 대한 스크리닝을 측정함으로써 수행하고, 특히 T2 측정은 하기와 같이 하였다:
볼트에 대한 일수 = 종자의 뿌림과 처음의 개화 발생 사이의 일수.
볼트에서 로제트 잎의 수 = 처음의 개화 발생 시기에 나타난 로제트 잎의 수.
로제트 영역 = 초기의 개화 발생의 시기에서 로제트의 영역, 식 ((L x W)*3.14)/4의 사용.
= 기저부터 꼭대기까지 가장 긴 개화의 길이. 이 측정은 개화기의 끝/노화기의 시작에서 수행하였다.
제 1의 개화의 두께 = 기저로부터 2.5 cm 위의 제 1의 개화의 직경. 이 측정은 개화기의 끝/노화기의 시작에서 수행하였다.
개화 수 = 단독 개화의 총수. 이 측정은 개화기의 끝/노화기의 시작에서 수행하였다.
랜덤하게 선택된 T2 식물에서 cDNA 삽입물을 증폭하기 위하여 PCR을 사용하였다. 이어서 이 PCR 산물을 식물에서 서열을 확인하기 위하여 서열분석하였다.
결과 :
대상 유전자로 형질전환된 식물을 조절된 성장 및 표현형 성질에 대하여 상술한 바와 같이 스크린하였다. 관찰은 식물의 부분, 예컨대 뿌리 및 잎뿐만 아니라 전체 식물에 대한 것을 포함한다. 각각의 폴리뉴클레오티드 서열을 갖는 형질전환체에 대한 관찰은 검사된 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 코딩된 폴리펩티드의 각각에 대한 서열 목록에 기록된다. 조절된 성질(즉, 관찰된 표현형)은 각각의 서열에 대하여 "다방면의 특징" 분야에서 기입에 의해 기록된다. 각각의 상대적인 서열에 대한 서열 목록에서 기록된 "표현형"은 추가로 관찰에 기초한 서열의 유용한 효용성의 진술을 포함한다.
다양한 형질전환체에 대하여 수행된 관찰은 분류될 수 있고, 관찰에 있어서 상대적인 식물 조직 및 형질전환체 제조에 사용된 뉴클레오티드 서열/폴리펩티드의 결과의 효용성/유용성에 달려있다. 표 1은 각각의 형질전환체("기술" 줄), 관찰된 조직, 형질전환체와 관련된 표현형, 및 삽입된 뉴클레오티드 서열 및 코딩된 폴리펩티드의 결과의 효용성/유용성("해석" 줄)에 대하여 기록된 관찰에 대한 서열 목록에서 약기 한 것과 서로 관련 있다.
본 발명의 임의의 폴리뉴클레오티드/폴리펩티드에 있어서, 서열 목록은 또한("다방면의 특징" 단락에서) 확인된 중요한 우성형질(들) 및 도메인의 상응하는 기능 또는 공적으로 사용가능한 pfam 데이터베이스의 지시를 포함한다.
표 1
Figure 112008054433236-PCT00002
Figure 112008054433236-PCT00003
Figure 112008054433236-PCT00004
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Figure 112008054433236-PCT00019
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Figure 112008054433236-PCT00021
Figure 112008054433236-PCT00022
Figure 112008054433236-PCT00023
표 1 및 서열 목록에 기재된 결과로부터, 각각의 개별의 서열에 달려있는, 본 발명의 뉴클레오티드/폴리펩티드는 하기를 포함하는 변경된 성장 및 표현형 성질을 갖는 식물은 제조하기 위하여, 유용한 것으로 보인다:
a. 증가 및 감소된 키 또는 길이를 포함하는 조절된 식물 크기;
b. 조절된 영양 성장(증가 또는 감소된);
c. 조절된 기관 수;
d. 증가된 바이오매스;
e. 열매를 맺지 않음;
f. 묘목 치사율;
g. 가속화된 농작물 발육 또는 수확;
h. 가속화된 개화기 시기;
i. 지연된 개화기 시기;
j. 지연된 노화기;
k. 강화된 가뭄 또는 스트레스 내성;
1. 증가된 클로로필 및 광합성 능력;
m. 증가된 안토시아닌 함량;
n. 증가된 뿌리 성장 및 증가된 영양 흡수;
o. 증가 또는 감소된 종자 중량 또는 크기, 증가된 종자 탄소 또는 질소 함량;
p. 증가된, 종자/열매 수득율 또는 변경된 열매 함량을 포함하는 변경;
q. 강화된 군엽;
r. 식물에서 영양보조식품/의약품을 제조하는데 유용성;
s. 식물 치사율;
t. 증가된 소화율을 제공하기 위한 종자 섬유 함량의 증가;
u. 변경된 잎, 꽃, 색 또는 군엽을 갖는 변경된 관상용 외형;
v. 식물에서 열매를 맺지 않는 것이 변경됨;
w. 그늘에서 성장하는데 강화된 능력;
x. 강화된 생물 스트레스 내성;
y. 밀도 및 저 비료에 대하여 증가된 내성;
z. 고 또는 저 pH, 저 또는 고 질소 또는 포스페이트에 대하여 강화된 내성;
aa. 산화 스트레스에 대하여 강화된 내성;
bb. 강화된 화학 구성;
cc. 변경된 잎 모양;
dd. 강화된 비생물 스트레스 내성;
ee. 한냉 스트레스에 대하여 증가된 내성;
ff. 증가된 전분 함량;
gg. 감소된 종자 수 또는 무종자;
hh. 강화된 식물 강도;
ii. 변경된 꽃 길이;
jj. 더 긴 개화;
kk. 변경된 종자 섬유 함량;
ll. 변경된 열매 모양;
mm. 변경된 열매 구성;
nn. 변경된 종자 수득율;
oo. 변경된 식물 구조, 예컨대, 옆가지의 변경된 양 또는 각, 변경된 잎의 구조, 또는 변경된 종자 구조; 및
pp. 강화된 그늘 기피.
실시예 1: 리드 28 - ME04701 - 클론 1952 - cDNA 13499809 (서열번호 90)
T 1 식물의 정성 분석:
모두 10개의 사례가 대조군보다 더 많은 잎 및 더 많은 개화를 갖는 로제트를 생산하였다. 또한 식물은 대조군보다 다소 더 작았다(표 1-1). 유전자 도입 "대조군"은 상이한 35S::cDNA를 발현하지만 형질전환되지 않은 WS 야생형과는 구별되지 않는 식물로 설정하였다. 표현형을 기록하는 이 방법은 본원의 대규모의 형태학상 표현형 연구과제에 대하여 전형적이다.
표 1-1. 35S::cDNA 13499809 T1 사례에서 관찰된 정성적 표현형
사례 증가된 로제트 잎의 수, 증가된 개화 수, & 다소 더 작음
ME04701-01 x
ME04701-02 x
ME04701-03 x
ME04701-04 x
ME04701-05 x
ME04701-06 x
ME04701-07 x
ME04701-08 x
ME04701-09 x
ME04701-10 x
T 2 식물의 정량 분석:
사례 ME04701-08 및 ME04701-09를 T2 세대에서 더욱 상세하게 평가하였다. 이들 두 사례는 가장 이로운 표현형을 가졌으므로 선택되었다. 18개의 개체를 두개의 사례에 대하여 씨를 뿌리고 관찰하였다. 유전자 도입 식물은 통계적 유의도 0.05 수준에 대하여 증가된 수의 개화를 나타내었다(표 1-2). T1에서와는 달리, T2 식물은 대조군보다 유의하게 더 많은 잎을 갖지 않았다. ME04701-08은 대조군보다 다소 개화기가 늦었다. ME04701-09는 대조군보다 유의하게 큰 로제트를 가졌다. ME04701-08 및 ME04701-09로서 표에 기재된 모든 식물은 관심 있는 표현형을 나타내는 T1의 자손을 분리하였다. -08 또는 -09 대조군으로서 표에 기재된 모든 식물은 표현형을 나타내지 않는 자손을 분리하는 T2였고 변이유전자를 유지하지 않았다(내부 대조군; 표 1-2).
검사 식물의 분리 빈도는 각 사례가 카이 제곱 검정에 의해 계산된 바, 단일 삽입물을 포함함을 제안한다(표 1-2 및 데이터는 나타내지 않음).
두 개의 사례에 대하여 개화 수에서 증가는 35S 프로모터가 이 cDNA를 발현하기 위하여 사용되었을 때 관찰된 증가보다 훨씬 더 적었다(데이터는 나타내지 않음). 이 증거는 또한 유전자 산물의 발현/투여의 정도가 관찰된 표현형의 강도에 대하여 상대적으로 높을 것이라는 본원의 가설을 지지한다. 상이한 발현 패턴을 갖는 프로모터를 사용함으로써, 본 발명자들은 양성의 표현형은 유지하면서, 앞서 관찰된 불임의 부정적인 측면은 제거하였다. 물론, 거래 조건은 유의함은 유지하면서 양성의 표현형을 줄이는 것이다.
표 1-2. p326F::cDNA 13499809 T2 사례에서 관찰된 정량적 표현형(PIT = 제 1의 개화 두께)
사례/대조군 관찰된 수 로제트 영역( mm 2 ) 잎의 수 키(cm) PIT(mm) 볼트에 대한 일수 개화의 수
ME04701 -08 14 1241.8 6.0 42.1 0.99 17.8* 4.3*
-08 대조군 4 1419.1 5.8 38.8 1.02 16.5 2.8
ME04701 -09 14 1620.0* 5.9 40.1 1.01 16.8 4.8*
-09 대조군 4 996.5 6.0 40.4 0.93 16.6 2.8
*t-검정을 통하여, 0.05 수준에서 대조군과 유의적으로 다름
이 실험에서 모든 식물은 일반적인 그린하우스 집단보다 더 적은 개화를 가졌지만, 식물은 건강하였다. 유전자 도입은 대조군보다 유의하게 더 많은 수의 개화를 가졌으므로, 개화의 수에서 전반적인 감소-이는 실험의 시기에 그린하우스의 일반적인 조건에 기인함-는 실험의 결과에 영향을 미치지 않았다.
리드 요약/토론:
● 적절한 프로모터를 갖는 리드 28/cDNA 13499809의 과발현은 개화의 수의 증가를 유도한다. 이는 글리신-풍부 단백질(GRP)로서, 세포 확장 또는 부착, 세포 단계의 다른 포지셔닝, 및/또는 개화 개시에 대한 다른 기회에 영향을 미치는 세포 벽 구조 상에 효과가 있는 듯하다. 이 유전자와 식물 성장 및 발육에 또한 영향을 미치는 AP2를 갖는 비공지의 단백질을 코딩하는 유전자를 결합하는 것은 흥미로울 것이다.
● 이 폴리뉴클레오티드/단백질은 전반적인 식물 형태에 대한 방해 없이 분 열조직에서 세포 분열의 수/비율을 조절하는데에 특히 유용할 수 있다. 이는 적절한 프로모터를 갖는 농작물에서 많은 개체의 기관의 크기 및 성장 속도를 조절하기 위하여 개발될 수 있다.
사례 1 사례 4 사례 5 사례 7 사례 평균 증가 퍼센트
식물 중량 1952 유전자 도입 1888 1423 1682 1523 1629 110%
1952 대조군 1516 1471 1383 1559 1482
식물 당 열매 중량 1952 유전자 도입 5892 3704 5131 5814 5135 105%
1952 대조군 4746 4826 4601 5343 4879
붉은 열매 퍼센트 1952 유전자 도입 40.1 42.4 36.5 47.2 42 107%
1952 대조군 42.4 46.7 28.7 37.8 39
수확률 1952 유전자 도입 75.7% 72.2% 75.3% 79.2% 76% 99%
1952 대조군 75.8% 76.6% 76.9% 77.4% 77%
● 증가된 영양 바이오매스는 개선된 공급원으로 제공될 수 있다: 수크로오스 및 전분에 대한 탄소의 침하율 및 개선된 고정, 개선된 수득율을 유도.
● 더욱 많은 개화를 더 많은 꽃에 대하여 제공함으로써 더 많은 종자를 제공할 수 있다. 개선된 바이오매스와 개화 수의 조합은 수득율에서 유의한 개선을 제공할 수 있다.
토마토 실지 실험 결과
클론 1952를 플라스미드 p326의 제어 하에 토마토로 형질전환시켰다. 4개의 독립적인 유전자 도입 사례를 실지 실험에 대하여 선택하였다. 결과는 하기 표 1-3에 나타내었다. 평균적으로, 총 식물 중량, 열매 중량 및 식물 당 붉은 열매의 퍼센트에서 증가가 있었다. 사례 4는 수행에서 개선을 나타내지 않았다. 사례 4가 분석에서 고려되지 않는다면, 평균 식물 중량, 열매 중량 및 붉은 열매 퍼센트는 각각 약 대조군의 115%로 증가한다.
표 1-3 - 토마토 실지 실험의 결과
실시예 2: 리드 29 - ME04717 - 클론 123905 - cDNA 12562634 (서열번호 92)
● 326D 프로모터의 제어 하에 세레스 cDNA 12562634의 이소 발현은 하기를 포함하는 많은 수의 표현형을 유도한다:
o 개화의 증가된 수
o 전반적으로 증가된 수의 잎을 생성하기 위한 개화기 후의 로제트 잎 개시의 연속.
● 세레스 cDNA 12562634의 발현이상은 옆가지 및 개화의 수를 증가시키는데 유용할 수 있다. 이는 종자 수 상에 유의한 영향을 줄 수 있다.
T 1 식물의 정성 분석:
326D 프로모터를 사용한, 10개의 사례 중 9개가 대조군보다 더 많은 잎 및 더 많은 개화를 갖는 로제트를 생산하였다(표 1). 9개의 사례 중 하나는 또한 번식력 결점을 가졌고, 35S::cDNA 12562634를 사용한 것에서 보여준 것과 매우 유사하였다. 유전자 도입 "대조군"은 상이한 35S::cDNA 작제물을 발현하는 식물로 설정하였고 이는 형질전환되지 않은 WS 야생형과는 구별되지 않았다. 표현형을 기록하는 이 방법은 본원의 대규모의 형태학상 표현형 연구과제에 대하여 전형적이다.
표 2-1. p326D::cDNA 12562634 T1 사례에서 관찰된 정성적 표현형(가장 이로운 표현형을 갖는 2개의 사례를 T2 평가를 위하여 선택함)
사례 증가된 로제트 잎의 수 & 증가된 개화 수 번식력 결점
ME04717-02 x x
ME04717-03 x
ME04717-04 x
ME04717-05 x
ME04717-06 x
ME04717-07 x
ME04717-08 x
ME04717-09 x
ME04717-10 x
T 2 식물의 정량 분석:
사례 ME04717-03 및 ME04717-05를 T2 세대에서 더욱 상세하게 평가하였다. 18개의 개체를 두개의 사례에 대하여 씨를 뿌리고 관찰하였다. 유전자 도입 식물은 통계적 유의도 0.05 수준에 대하여 증가된 수의 개화를 나타내었다. ME04717-03은 대조군보다 유의하게 큰 로제트를 가졌다. ME04717-03 및 ME04717-0로서 표 2-2에 기재된 모든 식물은 관심 있는 표현형을 나타내는 T1의 자손을 분리하였다. -03 또는 -05로서 표 2-2에 기재된 모든 식물은 표현형을 나타내지 않는 자손을 분리하는 T2였고 변이유전자를 유지하지 않았다(내부 대조군; 표 2-2).
검사 식물의 분리 빈도는 각 사례가 카이 제곱 검정에 의해 계산된 바, 단일 삽입물을 포함함을 제안한다(데이터는 나타내지 않음).
하기 기록된 사례에 대한 개화의 수에서 증가는 35S::cDNA 12532634 사례(데이터는 나타내지 않음)에서 관찰된 증가보다 더 적음은 주목되어야 한다. 이 보고에서 나타내지 않은, 다른 p326D::cDNA 12532634 T2 사례는 복합 삽입물을 포함하였다. 이들 복합 삽입물을 포함하는 사례의 T2 자손의 일부는 35S::cDNA 12532634 사례의 T2 자손과 유사하게 약간의 부정적인 효과(번식력 결함 및 보통보다 작음)를 나타내었다. 이 증거는 또한 유전자 산물의 발현/투여의 정도가 관찰된 표현형의 강도에 대하여 상대적으로 높을 것이라는 우리의 가설을 지지한다. 새로운 프로모터를 사용함으로써, 단일 삽입물을 갖는 유전자 도입을 생성하고, 우리는 앞서 관찰된 35S 표현형의 양성의 표현형은 유지하면서, 앞서 보여진 부정적인 측면은 제거하였다. 이 목적의 달성의 결과는 매우 유의한 수준은 유지하면서 양성의 표현형의 정도를 줄이는 것이다.
표 2-2. p326D::cDNA 12562634 T2 사례에서 관찰된 정량적 표현형(PIT = 제 1의 개화 두께)
사례/대조군 관찰의 수 로제트 영역(mm2) 잎의 수 키(cm) PIT(mm) 볼트에 대한 일수 개화의 수
ME04717-03 13 2701.5* 7.7* 35.2 0.94 18.0 8.4*
-03 대조군 5 1086.9 6.6 32.7 0.99 18.6 3.8
ME04717-05 14 1057.6 5.7 35.0 0.91 16.1 7.3*
-05 대조군 4 504.6 5.0 29.3 0.71 16.0 4.0
*t-검정을 통하여, 0.05 수준에서 대조군과 유의적으로 다름
키에서 감소와 개화기 시기는 정확하다. 식물은 건강하였지만, 그 시기에 그린하우스에서 자란 다른 식물보다 이른 개화기를 가질 수 있다. 이는 특히 ME04717-05 및 그의 대조군을 포함하는 플랫의 경우이다. 모든 식물은 플랫 이내에서 동일하게 처리되었다. 우리의 목적은 단지 개화 수에 대한 어세이였다.
리드 요약/토론:
● 326D 프로모터의 제어 하에 세레스 cDNA 12562634의 이소 발현은 증가된 개화의 수 및 더 많은 잎을 포함하는 많은 수의 표현형을 유도한다.
● 세레스 cDNA 12562634의 발현이상은 옆가지 및 개화의 수를 증가시키는데 유용할 수 있다. 이는 종자 수 상에 유의한 영향을 줄 수 있다.
● 비록 아직 측정되지는 않았지만, 또한 수확률 상에 양성의 효과가 있는 듯하다.
● 이 유전자/단백질은 전반적인 식물 형태에 대한 방해 없이 분열조직에서 세포 분열의 비율을 조절하는데에 특히 유용할 수 있다. 이는 적절한 프로모터를 갖는 농작물에서 많은 개체의 기관의 크기 및 성장 속도를 조절하기 위하여 개발될 수 있다.
● 증가된 영양 바이오매스는 개선된 공급원을 제공할 수 있다: 수크로오스 및 전분에 대한 탄소의 침하율 및 개선된 고정, 개선된 수득율을 유도.
● 더욱 많은 개화를 더 많은 꽃에 대하여 제공함으로써 더 많은 종자를 제공할 수 있다. 개선된 바이오매스와 개화 수의 조합은 수득율에서 유의한 개선을 제공할 수 있다.
토마토 수득율 실험 결과
유전자 123905를 또한 프로모터 p326의 제어 하에 토마토로 형질전환시켰다. 4개의 독립적인 유전자 도입 사례를 현장에서 특정화하였다. 많은 독립적인 사례를 처음부터 평가하였고 4개를 유전자 발현, 단일 삽입물 및 그린하우스에서 발견된 식물의 표현형을 기초로 추가의 분석을 위하여 선택하였다. 동형의 T2 종자를 랜덤하게 완전한 차단 설계로 현장에 심었다. 각 사례는 상응하는 대조군주를 가졌다. 식물 중량의 결과, 개별적 식물의 총 중량, 식물 당 열매 중량, 식물 당 붉은 열매 퍼센트 및 수확률을 하기 표 2-3에 나타내었다. 결과는 사례 1 및 21은 대조군에 비해 수득율은 유지하면서 실질적으로 감소된 잎의 중량을 가짐을 나타내었다. 그러므로, 그들의 수확률이 개선되었다. 이들 사례는 식물 당 붉은 열매 퍼센트에서 증가를 가졌다. 사례 14는 증가된 바이오매스 및 수득율을 가졌다.
표 2-3 - 토마토 실지 실험 결과
식물 당 1 14 21 26 평균
잎/줄기 중량 C5 1410.0 1537.1 1294.4 1564.1 1451.4
C5 대조군 1866.4 1215.9 1738.8 1766.0 1646.8
열매 중량 C5 4300.5 4936.5 4122.5 4159.0 4379.6
C5-대조군 4293.5 4608.5 4098.0 4877.0 4469.3
붉은 열매 퍼센트 C5 35.3 33.2 56.2 36.9 40.4
C5-대조군 16.7 33.0 45.8 34.8 32.6
수확률 C5 75% 76% 76% 73% 75%
C5-대조군 70% 79% 70% 73% 73%
요약하자면, 유전자 123905로 형질전환된 토마토 식물은 대조군과 비교하여 더 많은 가지 및 잎, 및 더 많은 열매를 가지려는 경향이 있다.
쌀 실지 실험 결과:
유전자 123905를 p326 제어 하에 쌀 재배종 Kitaake로 형질전환시켰다. 다섯개(5)의 독립적인 유전자 도입 사례를 랜덤하게 완전한 차단 설계로 현장에서 평가하였다. 평가된 특성은 식물 당 곁눈, 개화기에 대한 일수, 잎의 각도, 식물 키, 식물 당 그램으로 나타낸 바이오매스, 식물 당 그램으로 나타낸 수득율 및 그램으로 나타낸 총 토지 수득율이고, 그에 대한 결과를 하기 표 2-4, 2-5 및 2-6에 나타내었다. 각각의 사례는 식물 당 곁눈의 수에서 증가가 있었다.
표 2 -4 - 쌀 실지 실험의 결과
식물의 수 식물 당 곁눈 제 1의 꽃 일수 중간 꽃 일수 대략의 잎의 각
123905-1 1060 7.1 22 32 33.1
123905-4-6 200 8.2 19 28 45
123905-8-3 650 7.4 28 33 32.1
123905-12-3 300 8.9 22 33 38.6
Kitaake 대조군 1200 5.4 22 31 31.2
몇몇 사례는 키에서 유의한 감소를 나타내었다. 사례 8-3은 대조군과 비교하여 키, 바이오매스 및 수득율에서 증가를 나타내었다. 사례 1 및 사례 12은 수득율에서 일반적으로 낮고, 키에서 유의하게 감소되었지만, 대조군과 비교하여 바이오매스 밀도에서 증가를 가르키면서 대조군과 유사한 바이오매스를 생산하였다.
표 2 -5 - 쌀 실지 실험의 결과
식물 키(cm) 바이오매스(식물 당 그램) 수득율(식물 당 그램) 토지 당 총 수득율 (gm)
123905-1 54.0 25.3 12.52 417.0
123905-4-6 37.0 19.6 7.82 116.5
123905-8-3 65.5 30.6 14.9 668.8
123905-12-3 48.8 23.3 10.02 312.3
Kitaake 61.2 26.7 13.59 537.5
쌀에서 감소된 키의 관찰
유전자 123905를 p326 제어 하에 쌀 재배종 Kitaake로 형질전환시켰다. 절간이 길이에서 감소되었는지를 결정하기 위하여 측정을 수행하였고, 여기에서 절간 I는 가장 위의 절간이며 절간 V는 가장 아래의 절간이다. 대조군과 비교하여 유의하게 감소된 키를 갖는 사례 1, 4 및 12에서, 절간 III 및 IV는 길이에서 유의하게 감소되었지만, 절간 I 및 II는 아주 다소 또는 전혀 감소되지 않았다.
표 2 -6 - 쌀 실지 실험의 결과
식물 키(cm) 원추꽃차례 수 절간 I 절간 II 절간 III 절간 IV 절간 V
123905-1 89.0 8.8 35.2 20.0 7.9 3.0 0.1
123905-4-6 68.2 18.3 30.4 16.4 4.6 1.7 0.1
123905-8-3 111.6 9.8 38.4 24.8 19.8 10.6 0.8
123905-12-3 82.6 12.2 32.4 21.4 7.0 4.1 0.3
Kitaake 대조군 110.6 10.0 36.6 24.5 19.8 11.6 0.4
쌀에서 발아의 관찰
유전자 도입주 123905-1 및 123905-12-3은 Kitaake 대조군 종자보다 1 내지 2일 빠르게 발아하였다.
실시예 3: 리드 36 - ME03195 - 클론 679923 - cDNA 13594332(서열번호 98)
세레스 콩 cDNA 라이브러리의 클론 679923은 cDNA 13594332를 포함하고, 아라비돕시스 LEAFY PETIOLE(LEP) 유전자와 유사한 전사 인자를 코딩한다. 이 단백질 서열은 AP2 도메인을 포함한다. 공지된 아라비돕시스 유전자(LEP)의 추정 오솔로그를 결정하기 때문에 cDNA를 세레스 발현이상 파이프라인에 두었다.
T 1 식물의 정성 분석:
모든 5개의 사례는 거의 없는 엽병 연장을 갖는 다소의 컬 잎을 갖는 더 큰 로제트를 생산하였고, 대조군과 비교하여 개화가 매우 짧았다. 이들 식물은 또한 몇일까지 개화기 시기가 지연되었고 번식력 결점은 없었다(표 3-1). 유전자 도입 "대조군"은 상이한 35S::cDNA 융합을 발현하는 식물로 설정하였고 이는 형질전환되지 않은 WS 야생형과는 구별되지 않았다. 표현형을 기록하는 이 방법은 본원의 대 규모의 형태학상 표현형 연구과제에 대하여 전형적이다. 종자 회수 후, 또한 이들 식물은 그들 키의 전형적인 돌연변이와 비교하여 상대적으로 유의하게 많은 수의 종자를 생산하는 것으로 나타났다.
표 3-1. 35S::cDNA 13594332 T1 사례에서 관찰된 정성적 표현형
사례 짧은/없는 옆병을 갖는 컬 잎, 짧은 개화, 지연된 개화기 시기를 갖는 더 큰 로제트
ME03195-01 x
ME03195-02 x
ME03195-03 x
ME03195-04 x
ME03195-05 x
T 2 식물의 정량 분석:
T1 관찰로부터 명확히 한 기본적인 가설은 35S::cDNA 13594332 식물이 유의하게 증가된 수확률을 가질 것이라는 것이었다. 사례 ME03195-02 및 ME03195-04를 이 가설을 검사하기 위하여 T2 세대에서 더욱 자세하게 평가하였다. 두개의 사례에 대하여 18개의 개체를 씨를 뿌리고 관찰하였다. 검사 식물의 분리 빈도는 각 사례가 카이 제곱 검정에 의해 계산된 바, 단일 삽입물을 포함함을 제안한다(데이터는 나타내지 않음).
자세한 T2 분석 후, 본 발명자들은 유전자 도입에 관하여 하기를 결정하였다(하기 결과는 0.05 수준에 대하여 통계적으로 유의하거나 달리 언급이 없다면 t-검정에 대하여 더 낫다)
● 개화기 시기(볼트에 대한 일수)가 대조군보다 5-8일 더 늦었다.
● 볼트에서 로제트 잎의 수가 약 2.5개의 잎까지 증가되었다.
● 로제트 영역이 대조군보다 2-3배 컸다.
● 키는 대조군의 약 1/2이었다.
● 총 식물 종자 중량은 대조군보다 유의하게 다르지 않았다.
● 총 식물 종자 중량은 사례 -04에서 다소 많았고, 사례 -02에서 대조군과 다르지 않았다.
● 수확률은 대조군보다 다소 낮았다.
● 대조군보다 두배의 종자가 식물 유닛 키 당 생산되었다.
상세한 설명은 표 3-2 및 3-3에서 확인할 수 있다.
표 3-2. p35S ::cDNA 13594332 T 2 사례에서 관찰된 정량적 표현형
사례/대조군 관찰의 수 볼트에 대한 일수 잎의 수 로제트 영역(mm2) 키(cm)
ME03195-02 12 26* 9.6* 6735.43* 18.63*
-02 대조군 3 18 7 1802.62 42.33
ME03195-04 8 24.9* 10.3* 7758.16* 25.06*
-04 대조군 7 19 7.7 2884.43 44.71
*t-검정을 통하여, 0.05 수준에서 대조군과 유의적으로 다름
표 3-3. p35S ::cDNA 13594332 T 2 사례에서 관찰된 정량적 표현형
사례/대조군 관찰의 수 종자 중량(g) 식물 중량(g) 수확률 유닛 키 당(cm) 종자 중량(g)
ME03195-02 12 0.375 0.73 53.25* 0.0204*
-02 대조군 3 0.376 0.58 64.47 0.0090
ME03195-04 8 0.431 0.8258* 53.26* 0.0171*
-04 대조군 7 0.397 0.6119 64.90 0.0089
*t-검정을 통하여, 0.05 수준에서 대조군과 유의적으로 다름
사례 -02 및 -04는 각각 상술한 표현형의 훨씬 더 심각한 형태를 나타내는 3개의 T2 식물을 가졌다. 이들 식물은 심각하게 추대가 늦었고, 개화 연장이 거의 없었으며, 거의 열매를 맺지 않았다. 이들 식물주를 사용한 다른 실험으로부터(데이터는 나타내지 않음), 본 발명자들은 불리한 표현형은 적량/동형의 삽입물 효과 때문이라고 결정하였고, 헤미/이형의 식물은 유닛 키 당 증가된 종자 생산의 이로운 특성을 제공하지만, 동형의 주는 네가티브 표현형을 제공한다고 제안하였다. 본원의 통계적 분석은 변이유전자 및 이로운 표현형을 포함하는 식물에 대하여 내부 대조군과 비교하였다. 불리한 표현형을 갖는 모든 변이유전자-포함 식물은 표 3-2 및 3-3에서 통계적 분석으로부터 생략하였다.
실시예 4: ME04012 - Gemini ID 5000F6 (서열번호 109)
ME04012는 추정 시토크롬 P450을 코딩하는 게놈 클론을 포함한다. 식물 주 ME04012를 사례 -03에서 15/20 식물이 식물 구조 표현형을 나타내는 것이 관찰되었을 경우 가뭄 내성에 대하여 분석하였다. 6/15이 단지 웨이브 줄기를 나타내는 더 약한 버전이었다. 9/15가 강하고 웨이브 줄기, 감소된 키 및 감소된 가지 및 작은 꽃자루 각을 나타내었다.
실시예 5: 리드 l5 - ME04077 - 클론 92459 - cDNA 12561537(서열번호 80)
세레스 아라비돕시스 cDNA 라이브러리에서 클론 92459는 cDNA 12561537을 포함하고, 개화기 1(MAF1)에 영향을 미치는 아라비돕시스 MADS를 코딩한다. 전사 인자이기 때문에 cDNA를 세레스 발현이상 파이프라인에 두었다. 전사 인자는 많은 유전자에게 동시에 영향을 미치므로 특히 중요한 것이고, 그러므로 이들은 과발현되었을 경우 아라비돕시스에서 변경된 표현형을 생산이 증가될 가망성을 갖는다.
● 35S 프로모터 제어 하에 세레스 cDNA 12561537의 이소 발현은 하기 표현형의 다수를 유도한다:
o 더 키가 큰 식물
o 더 두꺼운 개화
o 더 큰 로제트
o 증가된 로제트 잎의 수
o 지연된 개화기
● 세레스 cDNA 12561537의 발현이상은 전반적인 식물 크기/바이오매스를 증가시키는데 유용할 수 있다.
T 1 식물의 정성 분석:
10개의 모든 사례가 대조군에 비해 개화기가 늦었고, 더 많은 잎을 갖고 키가 큰 더 큰 로제트를 생산하였고, 두꺼운 개화를 가졌다(표 5-1). 유전자 도입 " 대조군"은 형질전환되지 않은 WS 야생형과는 구별되지 않는 식물을 발현하는 상이한 35S::cDNA로 설정하였다. 표현형을 기록하는 이 방법은 본원의 대규모의 형태학상 표현형 연구과제에 대하여 전형적이다.
표 5-1. 35S::cDNA 12561537 T1 사례에서 관찰된 정성적 표현형
사례 증가된 로제트 크기 증가된 로제트 잎의 수 늦은 개화기 키 & 두께
ME04077-01 X X X
ME04077-02 X X X
ME04077-03 X X X
ME04077-04 X X X
ME04077-05 X X X
ME04077-06 X X X
ME04077-07 X X X
ME04077-08 X X X
ME04077-09 X X X
ME04077-10 X X X
T 2 식물의 정량 분석:
사례 ME04077-06 및 ME04077-10을 T2 세대에서 더욱 상세히 평가하였다. 사례 06에 대하여 18개의 개체를 씨를 뿌리고 관찰한 반면, 사례 10에 대하여 17개의 개체를 씨를 뿌리고 관찰하였다. 두개의 사례에 대하여 유전자 도입 식물은 통계적 유의도 0.05 수준에 대하여 증가된 제 1의 개화 두께, 로제트 잎의 증가된 수, 더 큰 로제트 및 개화기 시기의 지연을 나타내었다(표 5-2). 두개의 사례의 식물은 대조군보다 외관상으로는 훨씬 키가 컸지만, t-검정을 통한 통계적 유의도의 0.05 수준에 대하여 사례 -10만이 정량적으로 더 컸다. 내부 대조군의 더 많은 수가 사례 -06에 대하여 가능하다면, 이 사례는 동일한 검사를 통하여 동일한 유의도 에 매우 가까울 수 있다. 두개의 사례는 일반적인 번식력을 가졌다. ME04077-06 및 ME04077-10으로서 표에 기재된 모든 식물은 본 발명자들이 검사 하에 변이유전자를포함한다고 확인한 T1 사례의 자손을 분리시켰다. -06 대조군 또는 -10 대조군로서 표에 기재된 모든 식물은 검사 하에 변이유전자를 포함하지 않는 자손을 분리하는 T2였다(내부 대조군).
두개의 사례는 대조군보다 유의하게 더 많은 종자를 생산하였고, 전형적이고, 번식의, 늦은 현화 식물로 예상될 수 있다.
사례 ME04077-06은 12개의 변이유전자를 포함하는 이로운 표현형을 나타내는 식물 및 3개의 변이유전자를 포함하는 야생형을 나타내는 식물(이들 3개는 표 5-2의 통계적 분석으로부터 생략하였다)을 가졌다. 사례 ME04077-10은 9개의 변이유전자를 포함하는 이로운 표현형을 나타내는 식물 및 1개의 변이유전자를 포함하는 야생형을 나타내는 식물을 가졌다. 본원의 통계적 분석은 변이유전자를 포함하는 이로운 표현형을 갖는 이들 식물에 대하여 내부 대조군을 비교하였다.
검사 변이유전자의 분리 빈도는 각 사례가 카이 제곱 검정에 의해 계산된 바, 단일 삽입물을 포함함을 제안한다. T2 종자는 두개의 사례에 대하여 3R:1S를 분리하였다(데이터는 나타내지 않음).
표 5-2. 35S::cDNA 12561537 T2 사례에서 관찰된 정량적 표현형
사례/대조군 관찰의 수 로제트 영역(mm2) 잎의 수 키(cm) 제 1의 개화 두께(인치) 볼트에 대한 일수
ME04077-06 12 7302.7* 15.6* 72.8 0.068* 23.9
-06 대조군 3 1666.3 6.7 55.9 0.046 18.3
ME04077-10 9 9343.9* 19.6* 73.0* 0.086* 24.4*
-10 대조군 7 2696.1 8.9 52.3 0.053 18.6
*t-검정을 통하여, 0.05 수준에서 대조군과 유의적으로 다름
리드 요약/토론:
● 강한 구성 프로모터(35S)를 갖는 cDNA 12561537의 이소 발현은 더 두꺼운 개화, 더 큰 로제트, 및 더 많은 로제트 잎을 갖는 더 키큰 식물을 유도한다.
● 이 발현에 의해 나타나는 식물 크기에서의 증가는 개화기 시기에서 지연을 동반하지만, 번식력은 감소하지 않는다.
● 이는 또한 뿌리 성장을 증가시키는데 유용한 유전자일 수 있고, 지맥 분열조직 및 뿌리 팁 세포에서 유사한 발현 패턴이 제공된다.
● 증가된 영양 바이오매스는 개선된 수크로오스:침하율 및 수크로오스 및 전분에 대한 개선된 탄소의 고정을 제공할 수 있고, 개선된 수득율을 유도한다.
● 더 키큰 개화가 더 많은 꽃에 대한 기회를 제공하여 더 많은 종자를 제공하였다. 개선된 바이오매스 및 개화 키의 조합은 수득율에서 유의한 개선을 제공할 수 있다.
● 더 두꺼운 개화는 바람, 비 또는 가뭄에 대한 "스냅"을 예방할 수 있다.
● 바이오매스 이점 및 당연한 것으로 여겨지는 광합성 이점은 옥수수 및 대두에서 유용할 것이다.
● 이 유전자/단백질은 전반적인 식물 형태를 어지럽히는 일 없이 분열조직 에서 세포 분열의 수/비율을 조절하는데 특히 유용할 수 있다. 이는 많은 개체의 기관의 크기 및 성장 속도를 조절하기 위한 적절한 프로모터를 갖는 농작물에서 개발될 수 있다. 단백질은 옥수수에서 더 튼튼한 줄기를 생성하고 "스냅"을 예방하는데 유용할 수 있다.
토마토 실지 실험 결과
이 리드 15(클론 92459)를 플라스미드 p13879의 제어 하에 토마토로 형질전환시켰다. 1개의 유전자 도입 사례를 실지 실험을 위하여 선택하였다. 이 사례는 표 5-3의 결과에서 나타낸 바와 같이, 바이오매스에서 증가를 보였다.
표 5-3: 토마토 실지 실험 결과
사례-13 증가 퍼센트
식물 중량 92459 유전자 도입 2042.54 120%
92459 대조군 1707.50
열매 중량 식물 당 92459 유전자 도입 4932 100%
92459 대조군 4956
붉은 열매 퍼센트 92459 유전자 도입 28.9 93%
92459 대조군 31.0
수확률 92459 유전자 도입 71% 95%
92459 대조군 74%
실시예 6 기능적 호몰로그 서열의 결정
실시예 1 - 5에서 상술한 "리드" 서열을 리드 서열의 기능적 호몰로그를 확인하기 위하여 그들 서열과 함께 이용하였고, 리드 및 기능적 호몰로그 서열의 제 공된 그룹에 대하여 공통 서열을 결정하는데 이용하였다.
대상 서열은 대상 및 해당 서열이 유사한 기능 및/또는 활성을 갖는 단백질을 코딩한다면 해당 서열의 기능적 호몰로그로 간주된다. Reciprocal BLAST(Rivera et al, Proc.Natl Acad. ScL USA, 1998, 95:6239-6244)로서 공지된 프로세스가 모두 공적으로 사용가능하고 독점의 펩티드 서열로 구성되고, NCBI의 NR 및 세레스 클론의 펩티드 번역을 포함하는 데이터로부터 효능있는 기능적 호몰로그 서열을 확인하는데 사용하였다.
Reciprocal BLAST 프로세스를 시작하기 전에, 해당 폴리펩티드에 대하여 80% 이상의 서열 동일성 및 정렬에서 더 짧은 서열을 따라서 85% 이상의 정렬 길이를 갖는 폴리펩티드를 확인하기 위하여, 특정한 해당 폴리펩티드를 BLAST를 사용하여 그의 공급원 종의 모든 펩티드에 대하여 조사하였다. 해당 폴리펩티드 및 앞서 정의된 폴리펩티드를 클러스터로서 설계하였다.
주요한 Reciprocal BLAST 프로세스는 BLAST 조사의 두개의 라운드로 구성된다: 정 조사 및 역 조사. 정 조사 단계에서, 공급원 종 SA로부터의 해당 폴리펩티드 서열, "폴리펩티드 A"를 관심 있는 종의 모든 단백질 서열에 대하여 BLAST하였다. 탑 히트를 10-2의 E-값 컷오프 및 35%의 동일성 컷오프를 사용하여 결정하였다. 탑 히트 사이에서, 가장 낮은 E-값을 갖는 서열을 최선의 히트로 설계하고, 효능 있는 기능적 호몰로그로 설계하였다. 최선의 히트 또는 기원의 해당 폴리펩티드에 대하여 80% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 다른 탑 히트는 또한 효능 있는 기능적 호몰로그로서 간주된다. 이 프로세스는 관심 있는 모든 종에 대하여 반복된다.
역 조사 라운드에서, 모든 종으로부터 정 조사에서 확인된 탑 히트는 공급원 종 SA의 모든 단백질 또는 폴리펩티드 서열에 대한 BLAST 조사를 수행하는데 사용된다. 앞서 언급한 클러스터로부터 폴리펩티드를 반환한 정 조사로부터의 탑 히트는 또한 효능 있는 기능적 호몰로그로 간주된다.
기능적 호몰로그는 효능 있는 기능적 호몰로그 서열의 매뉴얼 검사에 의해 확인된다. 대표적 기능적 호몰로그를 도 1 - 5에 나타내었다. 각각의 도는 상응하는 확인된 기능적 호몰로그 대상 서열을 갖는 정렬된 리드/해당 서열의 그룹을 나타낸다. 리드 서열 및 그의 상응하는 기능적 호몰로그 서열을 보존된 아미노산을 확인하고 도 1-5에서 나타낸 바와 같이, 정렬된 서열의 특정한 위치에서 종종 발생하는 아미노산 잔기를 포함하는 공통 서열을 결정하기 위하여 정렬한다.
이어서 각각의 공통 서열은 확인되고 몇 부분으로 이루어진 보존된 영역 또는 도메인으로 구성되고, 보존된 사이에서, 대쉬(-)로 나타내어지는, 하나 이상의 아미노산으로 분리된 보존된 영역의 일부를 갖는다.
그러므로, 본 발명의 유용한 폴리펩티드는 도 1-5에 나타낸 리드 및 기능적 호몰로그 서열의 각각 뿐만 아니라, 이들 도에서 나타낸 공통 서열도 포함한다. 본 발명은 또한 공통 서열 및 확인된 보존된 영역을 기초로 하여 작제된 다른 유용한 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 유용한 폴리펩티드는 도 1-5에 개시한 각 도의 각 정렬 표에서 넘버링된 보존된 영역의 하나 이상을 포함하고, 보존된 영역은 대쉬로 분리될 수 있다. 유용한 폴리펩티드는 또한 도 1-5로부터 선택된 각각의 정렬 표에서 넘버링된 보존된 영역을 모두 포함하고, 대안적으로 각각의 정렬 표 및 도 1-5로부터 선택된 각각의 정렬 표에서 기재된 바와 같은 순서에서 넘버링된 보존된 영역을 모두 포함한다. 유용한 폴리펩티드는 또한 각각의 정렬 표 및 도 1-5로부터 선택된 각각의 정렬 표에서 기재된 바와 같은 순서에서 넘버링된 보존된 영역을 모두 포함하는 것을 포함하고, 보존된 영역은 대쉬로 분리되고, 두개의 인접한 보존된 영역 사이의 각각의 대쉬는 특정한 대쉬로 정의된 위치에서 리드 및/또는 기능적 호몰로그 서열에 대한 정렬 표에서 개시된 아미노산으로 구성된다. 공통 서열에서 이러한 대쉬는 정렬된 서열의 하나에서 대쉬의 가장 작은 수의 길이 내지 정렬된 서열의 하나에서 대쉬의 가장 긴 수의 길이의 범위의 길이일 수 있다.
이러한 유용한 폴리펩티드는 또한 공통 서열에 대하여 확인되는 길이와 동일한 길이(아미노산 잔기의 총 수) 또는 도 1-5로부터 선택된 각각의 정렬 표에서 확인되는 리드 및 기능적 호몰로그 서열의 임의의 주어진 패밀리에서 가장 짧은 서열 내지 가장 긴 서열의 범위를 갖는 길이를 가질 수 있다.
본 발명은 또한 상술한 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 뿐만 아니라, 그의 보상물을 포함하고, 대안적으로 유전적 코드의 축퇴를 기초로 한 것을 포함한다.
따라서, 상술한 본 발명은, 본 발명의 수행에 있어서 물질 및 방법의 다양한 변형이 가해질 수 있다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 변형은 하기 청구항에 의해 정의되는 본 발명의 범위 내인 것으로 간주된다.
본원에서 인용된 정기 간행물 및 특허의 각 참조문헌은 이러한 인용에 의해 그의 전체가 본원에 명백하게 포함된다.
참조문헌
Figure 112008054433236-PCT00024
Figure 112008054433236-PCT00025
SEQUENCE LISTING <110> Nickolai ALEXANDROV Vyacheslav BROVER Peter MASCIA Kenneth A. FELDMANN Cory CHRISTENSEN Greg NADZAN <120> NUCLEOTIDE SEQUENCES AND CORRESPONDING POLYPEPTIDES CONFERRING MODULATED PLANT GROWTH RATE AND BIOMASS IN PLANTS <130> 2750-1669PWO1 <140> <141> 2005-12-29 <160> 121 <210> 1 <211> 1823 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1823) <223> Ceres Promoter 21876 <400> 1 gtctcttaaa aaggatgaac aaacacgaaa ctggtggatt atacaaatgt cgccttatac 60 atatatcggt tattggccaa aagagctatt ttaccttatg gataatggtg ctactatggt 120 tggagttgga ggtgtagttc aggcttcacc ttctggttta agccctccaa tgggtaatgg 180 taaatttccg gcaaaaggtc ctttgagatc agccatgttt tccaatgttg aggtcttata 240 ttccaagtat gagaaaggta aaataaatgc gtttcctata gtggagttgc tagatagtag 300 tagatgttat gggctacgaa ttggtaagag agttcgattt tggactagtc cactcggata 360 ctttttcaat tatggtggtc ctggaggaat ctcttgtgga gtttgatatt tgcgagtata 420 atctttgaac ttgtgtagat tgtacccaaa accgaaaaca tatcctatat aaatttcatt 480 atgagagtaa aattgtttgt tttatgtatc atttctcaac tgtgattgag ttgactattg 540 aaaacatatc ttagataagt 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accgataaaa attcacattt gcaaatttta ttcagtcgga 60 atatatattt gaaacaagtt ttgaaatcca ttggacgatt aaaattcatt gttgagagga 120 taaatatgga tttgttcatc tgaaccatgt cgttgattag tgattgacta ccatgaaaaa 180 tatgttatga aaagtataac aacttttgat aaatcacatt tattaacaat aaatcaagac 240 aaaatatgtc aacaataata gtagtagaag atattaattc aaattcatcc gtaacaacaa 300 aaaatcatac cacaattaag tgtacagaaa aaccttttgg atatatttat tgtcgctttt 360 caatgatttt cgtgaaaagg atatatttgt gtaaaataag aaggatcttg acgggtgtaa 420 aaacatgcac aattcttaat ttagaccaat cagaagacaa cacgaacact tctttattat 480 aagctattaa acaaaatctt gcctattttg cttagaataa tatgaagagt gactcatcag 540 ggagtggaaa atatctcagg atttgctttt agctctaaca tgtcaaacta tctagatgcc 600 aacaacacaa agtgcaaatt cttttaatat gaaaacaaca ataatatttc taatagaaaa 660 ttaaaaaggg aaataaaata tttttttaaa atatacaaaa gaagaaggaa tccatcatca 720 aagttttata aaattgtaat ataatacaaa cttgtttgct tccttgtctc tccctctgtc 780 tctctcatct ctcctatctt ctccatatat acttcatctt cacacccaaa actccacaca 840 aaatatctct ccctctatct gcaaattttc caaagttgca tcctttcaat ttccactcct 900 ctctaatata attcacattt tcccactatt gctgattcat ttttttttgt gaattatttc 960 aaacccacat aaaaaaatct ttgtttaaat ttaaaacca 999 <210> 73 <211> 998 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(998) <223> Ceres Promoter YP0385 <400> 73 actcaacaat aggacaagcc aaaaaaattc caattattgt gttactctat tcttctaaat 60 ttgaacacta atagactatg acatatgagt atataatgtg aagtcttaag atattttcat 120 gtgggagatg aataggccaa gttggagtct gcaaacaaga agctcttgag ccacgacata 180 agccaagttg atgaccgtaa ttaatgaaac taaatgtgtg tggttatata ttagggaccc 240 atggccatat acacaatttt tgtttctgtc gatagcatgc gtttatatat atttctaaaa 300 aaactaacat atttactgga tttgagttcg aatattgaca ctaatataaa ctacgtacca 360 aactacatat gtttatctat atttgattga tcgaagaatt ctgaactgtt ttagaaaatt 420 tcaatacact taacttcatc ttacaacggt aaaagaaatc accactagac aaacaatgcc 480 tcataatgtc tcgaaccctc aaactcaaga gtatacattt tactagatta gagaatttga 540 tatcctcaag ttgccaaaga attggaagct tttgttacca aacttagaaa cagaagaagc 600 cacaaaaaaa gacaaaggga gttaaagatt gaagtgatgc atttgtctaa gtgtgaaagg 660 tctcaagtct caactttgaa ccataataac attactcaca ctcccttttt ttttcttttt 720 ttttcccaaa gtaccctttt taattccctc tataacccac tcactccatt ccctctttct 780 gtcactgatt caacacgtgg ccacactgat gggatccacc tttcctctta cccacctccc 840 ggtttatata aacccttcac aacacttcat cgctctcaaa ccaactctct cttctctctt 900 ctctcctctc ttctacaaga agaaaaaaaa cagagccttt acacatctca aaatcgaact 960 tactttaacc accaaatact gattgaacac acttgaaa 998 <210> 74 <211> 1000 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1000) <223> Ceres Promoter YP0396 <400> 74 catagtaaaa gtgaatttaa tcatactaag taaaataaga taaaacatgt tatttgaatt 60 tgaatatcgt gggatgcgta tttcggtatt tgattaaagg tctggaaacc ggagctccta 120 taacccgaat aaaaatgcat aacatgttct tccccaacga ggcgagcggg tcagggcact 180 agggtcattg caggcagctc ataaagtcat gatcatctag gagatcaaat tgtatgtcgg 240 ccttctcaaa attacctcta agaatctcaa acccaatcat agaacctcta aaaagacaaa 300 gtcgtcgctt tagaatgggt tcggtttttg gaaccatatt tcacgtcaat ttaatgttta 360 gtataatttc tgaacaacag aattttggat ttatttgcac gtatacaaat atctaattaa 420 taaggacgac tcgtgactat ccttacatta agtttcactg tcgaaataac atagtacaat 480 acttgtcgtt aatttccacg tctcaagtct ataccgtcat ttacggagaa agaacatctc 540 tgtttttcat ccaaactact attctcactt tgtctatata tttaaaatta agtaaaaaag 600 actcaatagt ccaataaaat gatgaccaaa tgagaagatg gttttgtgcc agattttagg 660 aaaagtgagt caaggtttca catctcaaat ttgactgcat aatcttcgcc attaacaacg 720 gcattatata tgtcaagcca attttccatg ttgcgtactt ttctattgag gtgaaaatat 780 gggtttgttg attaatcaaa gagtttgcct aactaatata actacgactt tttcagtgac 840 cattccatgt aaactctgct tagtgtttca tttgtcaaca atattgtcgt tactcattaa 900 atcaaggaaa aatatacaat tgtataattt tcttatattt taaaattaat tttgatgtat 960 taccccttta taaataggct atcgctacaa caccaataac 1000 <210> 75 <211> 1514 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1514) <223> Ceres Promoter p13879 <400> 75 tttcgatcct cttctttttt aggtttcttg atttgatgat cgccgccagt agagccgtcg 60 tcggaagttt cagagattaa aaccatcacc gtgtgagttg gtagcgaatt aacggaaagt 120 ctaagtcaag attttttaaa aagaaattta tgtgtgaaaa gaagccgttg tgtatattta 180 tataatttag aaaatgtttc atcattttaa ttaaaaaatt aataatttgt agaagaaaga 240 agcatttttt atacataaat catttacctt ctttactgtg tttttcttca cttacttcat 300 ttttactttt ttacaaaaaa gtgaaaagta aattacgtaa ttggtaacat aaattcactt 360 taaatttgca tatgttttgt tttcttcgga aactatatcg aaaagcaaac ggaaagaact 420 tcacaaaaaa ccctagctaa ctaaagacgc atgtgttctt cttattcttc atatatcctc 480 tgtttcttgt gttctgtttt gagtcttaca ttttcaatat ctgactctga ttactatatc 540 taaaagggaa catgaagaac ttgagaccat gttaaactgt acaatgcctt caaacatggc 600 taactaaaga tacattagat ggctttacag tgtgtaatgc ttattatctt taggtttttt 660 aaatcccttg tattaagtta tttaccaaat tatgttcttg tactgcttat tggcttggtt 720 gttgtgtgct ttgtaaacaa cacctttggc tttatttcat cctttgtaaa cctactggtc 780 tttgttcagc tcctcttgga agtgagtttg tatgcctgga acgggtttta atggagtgtt 840 tatcgacaaa aaaaaaatgt agcttttgaa atcacagaga gtagttttat attcaaatta 900 catgcatgca actaagtagc aacaaagttg atatggccga gttggtctaa 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tatctatctt ttgactttca 180 aaggtgatcg atcgtgttct ttgtgatagt tttggtcgtc ggtctacaag tcaacaacca 240 ccttgaagtt ttcgcgtctc ggtttcctct tcgcatctgg tatccaatag catacatata 300 ccagtgcgga aaatggcgaa gactagtggg cttgaaccat aaggtttggc cccaatacgg 360 attccaaaca acaagcctag cgcagtcttt tgggatgcat aagactaaac tgtcgcagtg 420 atagacgtaa gatatatcga cttgattgga atcgtctaag ctaataagtt taccttgacc 480 gtttatagtt gcgtcaacgt ccttatggag attgatgccc atcaaataaa cctgaaaatc 540 catcaccatg accaccataa actcccttgc tgccgctgct ttggcttgag caaggtgttt 600 ccttgtaaag ctccgatctt tggataaagt gttccacttt ttgcaagtag ctctgacccc 660 tctcagagat gtcaccggaa tcttagacag aacctcctct gccaaatcac ttggaagatc 720 ggacaatgtc atcatttttg caggtaattt ctccttcgtt gctgctttgg cttgagcacg 780 gtgcttcttt gtaaagctcc gatctttgga taagagcgga tcggaatcct ctaggaggtg 840 ccagtccctt gacctattaa tttatagaag gttttagtgt attttgttcc aatttcttct 900 ctaacttaac aaataacaac tgcctcatag tcatgggctt caaattttat cgcttggtgt 960 atttcgttat ttgcaaggcc ttggcccatt ttgagcccaa taactaaatc tagccttttc 1020 agaccggaca tgaacttcgc atattggcgt aactgtgcag ttttaccttt ttcggatcag 1080 acaagatcag atttagacca cccaacaata gtcagtcata tttgacaacc taagctagcc 1140 gacactacta aaaagcaaac aaaagaagaa ttctatgttg tcattttacc ggtggcaagt 1200 ggacccttct ataaaagagt aaagagacag cctgtgtgtg tataatctct aattatgttc 1260 accgacacaa tcacacaaac ccttctctaa tcacacaact tcttcatgat ttacgacatt 1320 aattatcatt aactctttaa attcacttta catgctcaaa aatatctaat ttgcagcatt 1380 aatttgagta ccgataacta ttattataat cgtcgtgatt cgcaatcttc ttcattagat 1440 gctgtcaagt tgtactcgca cgcggtggtc cagtgaagca aatccaacgg tttaaaacct 1500 tcttacattt ctagatctaa tctgaaccgt cagatatcta gatctcattg tctgaacaca 1560 gttagatgaa actgggaatg aatctggacg aaattacgat cttacaccaa ccccctcgac 1620 gagctcgtat atataaagct tatacgctcc tccttcacct tcgtactact actaccacca 1680 catttcttta gctcaacctt cattactaat ctccttttaa ggtatgttca cttttcttcg 1740 attcatactt tctcaagatt cctgcatttc tgtagaattt gaaccaagtg tcgatttttg 1800 tttgagagaa gtgttgattt atagatctgg ttattgaatc tagattccaa tttttaattg 1860 attcgagttt gttatgtgtg tttatactac ttctcattga tcttgtttga tttctctgct 1920 ctgtattagg tttctttcgt gaatcagatc ggaa 1954 <210> 77 <211> 2016 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2016) <223> Ceres Promoter p32449 <400> 77 gatcggcctt cttcaggtct tctctgtagc tctgttactt ctatcacagt tatcgggtat 60 ttgagaaaaa agagttagct aaaatgaatt tctccatata atcatggttt actacaggtt 120 tacttgattc gcgttagctt tatctgcatc caaagttttt tccatgatgt tatgtcatat 180 gtgataccgt tactatgttt ataactttat acagtctggt tcactggagt ttctgtgatt 240 atgttgagta catactcatt catcctttgg taactctcaa gtttaggttg tttgaattgc 300 ctctgttgtg atacttattg tctattgcat caatcttcta atgcaccacc ctagactatt 360 tgaacaaaga gctgtttcat tcttaaacct ctgtgtctcc ttgctaaatg gtcatgcttt 420 aatgtcttca cctgtctttc tcttctatag atatgtagtc ttgctagata gttagttcta 480 cagctctctt ttgtagtctt gttagagagt tagttgagat attacctctt aaaagtatcc 540 ttgaacgctt tccggttatg accaatttgt tgtagctcct tgtaagtaga acttactggg 600 accagcgaga cagtttatgt gaatgttcat gcttaagtgt cgaacgtatc tatctctact 660 atagctctgt agtcttgtta gacagttagt tttatatctc catttttttg tagtcttgct 720 agttgagata ttacctcttc tcttcaaagt atccttgaac gctcaccggt tatgaaatct 780 ctacactata gctctgtagt cttgctagat agttagttct ttagctctct ttttgtagcc 840 tagttcttta gctctccttt tgtagccttg ctacagagta agatgggata ttacctcctt 900 gaacgctctc cggttatgac caatttgttg tagctccttg taagtagaac ttaggataga 960 gtgagtcaac tttaagaaag aacctagtat gtggcataac cagattgcag gctctgtctc 1020 ggctacagta acgtaactct atagctcttt gttttgttca gaaagaacca gtgattggat 1080 gattcgtcct tagaaactgg acctaacaac agtcattggc tttgaaatca agccacaaca 1140 atgcctatat gaaccgtcca tttcatttat ccgtttcaaa ccagcccatt acatttcgtc 1200 ccattgataa ccaaaagcgg ttcaatcaga ttatgtttta attttaccaa attctttatg 1260 aagtttaaat tatactcaca ttaaaaggat tattggataa tgtaaaaatt ctgaacaatt 1320 actgattttg gaaaattaac aaatattctt tgaaatagaa gaaaaagcct ttttcctttt 1380 gacaacaaca tataaaatca tactcccatt aaaaagattt taatgtaaaa ttctgaatat 1440 aagatatttt ttacaacaac aaccaaaaat atttattttt ttcctttttt acagcaacaa 1500 gaaggaaaaa cttttttttt tgtcaagaaa aggggagatt atgtaaacag ataaaacagg 1560 gaaaataact aaccgaactc tcttaattaa catcttcaaa taaggaaaat tatgatccgc 1620 atatttagga agatcaatgc attaaaacaa cttgcacgtg gaaagagaga ctatacgctc 1680 cacacaagtt gcactaatgg tacctctcac aaaccaatca aaatactgaa taatgccaac 1740 gtgtacaaat tagggtttta cctcacaacc atcgaacatt ctcgaaacat tttaaacagc 1800 ctggcgccat agatctaaac tctcatcgac caatttttga ccgtccgatg gaaactctag 1860 cctcaaccca aaactctata taaagaaatc ttttccttcg ttattgctta ccaaatacaa 1920 accctagccg ccttattcgt cttcttcgtt ctctagtttt ttcctcagtc tctgttctta 1980 gatcccttgt agtttccaaa tcttccgata aggcct 2016 <210> 78 <211> 1024 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1024) <223> Ceres Promoter PR0924 <400> 78 atctataacg agttaacatg ttgccagttt gaatcaagaa gcttggatga tgaatgaatg 60 gatcggtttg tggtacaatt cttaaaattg tagtagagga gacagagaaa aaacatgata 120 agactttggt atttacaact tgacggagac aagacagtaa gccaaatctg tcacaaaaac 180 actcaaactc ttttctcagt gttttgagtt taaagagaga cttattcact tcccctttcg 240 taacacttat ttgtctccca accaaacagt ttctgtcctt tcccttgtcc tcccacgtgc 300 atctttatat ctcatgactt ttcgtttcta gatcttgaat aatgtcttag tggattaggt 360 ttgttgtcgg taaattaggt gaccgttttt ttcttatatt tggaagatcg cgggatgaag 420 cagatactga gtttcagggc atacacacct aatttgaaaa tcattgttag tccaatttca 480 ctttaatctt gtttacaaaa aaattgatct gaaaatgttg atgggataag taaaaatgta 540 agttttgcta gtagtcatga tataataata gcaaaaccag atcaattttg agcaaaagga 600 agaaacaaaa aacagatcga tcccacgagc aagactaagt gtaaagtggt tcccacaaga 660 gccatatgga tatggtcctt caacttttaa agcccattac ttcagtggtc gacccgacat 720 tacgccacga gtagtcacgc acgcacgact ccgttcacgt gacattcacg ttgatatttc 780 cccctctact ctcttctgct tggttgatct aaaaaacatg aagagaccaa cctaatttca 840 tattaatata tgatatagac ttcatactca acagtcactt tcgtaatcca aatccatatc 900 ttacgaaatt agttcttaat aaaggttgtg gattaagtta taatattgtg ttaagagtta 960 agacacagca tataaccttg taccaacagt gctttattct taaatggaaa caaaacatat 1020 gtca 1024 <210> 79 <211> 857 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(857) <223> Ceres Promoter PD1367 <220> <221> misc_feature <222> (116)..(116) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (136)..(136) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (154)..(154) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (159)..(159) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (168)..(168) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (172)..(172) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (175)..(175) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (679)..(679) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (680)..(680) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (686)..(686) <223> n is a, c, t, g, unknown, or other <220> <221> misc_feature <222> (724)..(724) 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agggccatca ccactgcagt ggaacaatga agactaatct 780 ttttctcttt ctcatctttt cacttctcct atcattatcc tcggccgaat tcagtaaagg 840 agaagaactt ttcactg 857 <210> 80 <211> 884 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(884) <223> Ceres CLONE ID no. 92459 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(884) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04077 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(884) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 15 <220> <221> CDS <222> (42)..(663) <223> Referenced by SEQ ID NO: 81 <400> 80 aggattaaat tagggcataa cccttatcgg agatttgaag ccatgggaag aagaaaaatc 60 gagatcaagc gaatcgagaa caaaagcagt cgacaagtca ctttctccaa acgacgcaat 120 ggtctcatcg acaaagctcg acaactttcg attctctgtg aatcctccgt cgctgttgtc 180 gtcgtatctg cctccggaaa actctatgac tcttcctccg gtgacgacat ttccaagatc 240 attgatcgtt atgaaataca acatgctgat gaacttagag ccttagatct tgaagaaaaa 300 attcagaatt atcttccaca caaggagtta ctagaaacag tccaaagcaa gcttgaagaa 360 ccaaatgtcg ataatgtaag tgtagattct ctaatttctc tggaggaaca acttgagact 420 gctctgtccg taagtagagc taggaaggca gaactgatga tggagtatat cgagtccctt 480 aaagaaaagg agaaattgct gagagaagag aaccaggttc tggctagcca gatgggaaag 540 aatacgttgc tggcaacaga tgatgagaga ggaatgtttc cgggaagtag ctccggcaac 600 aaaataccgg agactctccc gctgctcaat tagccaccat catcaacggc tgagttttca 660 ccttaaactc aaagcctgat tcataattaa gagaataaat ttgtatatta taaaaagctg 720 tgtaatctca aaccttttat cttcctctag tgtggaattt aaggtcaaaa agaaaacgag 780 aaagtatgga tcagtgttgt acctccttcg gagacaagat cagagtttgt gtgtttgtgt 840 ctgaatgtac ggattggatt tttaaagttg tgctttcttt cttc 884 <210> 81 <211> 206 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(206) <223> Ceres CLONE ID no. 92459 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(206) <223> Also Known As Ceres CDNA ID no. 23361912 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(206) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04077 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(206) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 15 <220> <221> misc_feature <222> (117)..(166) <223> Pfam Name: K-box; Pfam Description: K-box re.g.ion <220> <221> misc_feature <222> (9)..(59) <223> Pfam Name: SRF-TF; Pfam Description: SRF-type transcription factor (DNA-binding and dimerisation domain) <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Late Flowering Useful for delaying flowering time <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Dark Green Useful for increasing chlorophyll and photosynthetic capacity <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Large Useful for making larger plants <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: INFLORESCENCE Useful for making ornamental plants with modified flowers <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: CAULINE LEAVES Useful for making ornamental plants with modified leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: ROSETTE LEAVES Useful for making ornamental plants with modified leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Serrate Margins Useful for making plants with increased biomass and foliage <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Serrate Margins Useful for making plants with increased biomass and foliage <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Plant Size Useful for making plants with increased size and biomass <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Strong Useful for making stronger plants <400> 81 Met Gly Arg Arg Lys Ile Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Asp Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Ile Leu Cys Glu Ser Ser Val Ala Val Val Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asp Ser Ser Ser Gly Asp Asp Ile Ser 50 55 60 Lys Ile Ile Asp Arg Tyr Glu Ile Gln His Ala Asp Glu Leu Arg Ala 65 70 75 80 Leu Asp Leu Glu Glu Lys Ile Gln Asn Tyr Leu Pro His Lys Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Thr Val Gln Ser Lys Leu Glu Glu Pro Asn Val Asp Asn Val 100 105 110 Ser Val Asp Ser Leu Ile Ser Leu Glu Glu Gln Leu Glu Thr Ala Leu 115 120 125 Ser Val Ser Arg Ala Arg Lys Ala Glu Leu Met Met Glu Tyr Ile Glu 130 135 140 Ser Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Arg Glu Glu Asn Gln Val Leu 145 150 155 160 Ala Ser Gln Met Gly Lys Asn Thr Leu Leu Ala Thr Asp Asp Glu Arg 165 170 175 Gly Met Phe Pro Gly Ser Ser Ser Gly Asn Lys Ile Pro Glu Thr Leu 180 185 190 Pro Leu Leu Asn Pro Pro Ser Ser Thr Ala Glu Phe Ser Pro <210> 82 <211> 201 <212> PRT <213> Brassica rapa subsp. pekinensis <220> <221> misc_feature <222> (1)..(201) <223> Public GI no. 71834745 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(201) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 6.50E-66 and percent identity of 75.2 <400> 82 Met Gly Arg Arg Lys Val Glu Ile Lys Leu Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Thr Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Glu Ser Ser Val Ala Val Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asn Ser Ser Ser Gly Asp Asn Met Thr 50 55 60 Asn Ile Val Asp Arg Tyr Glu Ile Gln His Ala Gly Glu Leu Arg Ser 65 70 75 80 Leu Asp Leu Ala Glu Lys Thr Arg Asn Tyr Leu Pro His Lys Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Ser Val Lys Ser Asn Leu Glu Glu Pro Asn Val Asp Ser Val 100 105 110 Ser Val Asp Ser Leu Ile Ser Leu Glu Asp Gln Leu Glu Thr Ala Leu 115 120 125 Ser Ala Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Thr Met Glu Phe Val Lys 130 135 140 Met Leu Gln Glu Lys Glu Glu Leu Leu Arg Glu Glu Asn Leu Val Leu 145 150 155 160 Val Ser Gln Ile Gly Thr Thr Asn Gly Arg Arg Glu Asn Asn Ser Pro 165 170 175 Val Asn Ser Ser Gly Ile Asn Pro Pro Glu Thr Leu Pro Leu Leu Lys 180 185 190 Val Thr Ser Val Ile Gln Arg Leu Ser 195 200 <210> 83 <211> 196 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Public GI no. 31580813 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 3.09E-59 and percent identity of 67.5 <400> 83 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Ser Val Ala Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asn Phe Ser Ala Gly Asp Asn Leu Val 50 55 60 Lys Ile Leu Asp Arg Tyr Gly Lys Gln His Ala Asp Asp Leu Lys Ala 65 70 75 80 Leu Asp Leu Gln Ser Lys Ala Pro Lys Tyr Gly Ser His His Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Val Glu Ser Asn Ser Asp Val Ser 100 105 110 Val Asp Ser Leu Val Gln Leu Glu Asp His Leu Glu Thr Ala Leu Ser 115 120 125 Val Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Met Leu Lys Leu Val Asp Ser 130 135 140 Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Lys Glu Glu Asn Gln Gly Leu Ala 145 150 155 160 Ser Gln Met Glu Lys Asn Asn Leu Ala Gly Ala Glu Ala Asp Lys Met 165 170 175 Glu Met Ser Pro Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Arg Pro Val Thr Leu 180 185 190 Arg Leu Leu Tyr 195 <210> 84 <211> 197 <212> PRT <213> Brassica oleracea var. capitata <220> <221> misc_feature <222> (1)..(197) <223> Public GI no. 34591565 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(197) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 3.50E-58 and percent identity of 67.0 <400> 84 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Ser Val Ala Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asn Phe Ser Ala Gly Asp Asp Leu Val 50 55 60 Lys Val Ile Asp Arg Tyr Gly Glu Gln His Ala Asp Asp Asp Arg Lys 65 70 75 80 Ala Leu Asp Leu Gln Ser Glu Ala Pro Lys Tyr Gly Ser His His Glu 85 90 95 Leu Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Val Glu Ser Asn Ser Asp Val 100 105 110 Ser Val Asp Ser Leu Val Gln Leu Glu Asn His Leu Glu Thr Ala Leu 115 120 125 Ser Val Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Leu Leu Lys Leu Val Asp 130 135 140 Ser Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Lys Glu Glu Asn Gln Gly Leu 145 150 155 160 Ala Ser Gln Met Glu Lys Asn Asn Leu Ala Gly Ala Glu Ala Asp Lys 165 170 175 Met Glu Val Ser Pro Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Cys Pro Val Thr 180 185 190 Leu Pro Leu Leu Tyr 195 <210> 85 <211> 197 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(197) <223> Ceres CLONE ID no. 1065387 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(197) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 1.30E-60 and percent identity of 67.0 <400> 85 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Ser Val Ala Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Ser Phe Ser Ser Gly Asp Asn Leu Val 50 55 60 Lys Ile Leu Asp Arg Tyr Gly Lys Gln His Asp Asp Asp Leu Lys Ala 65 70 75 80 Leu Asp Arg Gln Ser Lys Ala Leu Asp Cys Gly Ser His His Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Glu Glu Ser Asn Val Asp Asn Val 100 105 110 Ser Val Gly Ser Leu Val Gln Leu Glu Glu His Leu Glu Asn Ala Leu 115 120 125 Ser Val Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Met Leu Lys Leu Val Glu 130 135 140 Asn Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Glu Glu Glu Asn His Val Leu 145 150 155 160 Ala Ser Gln Met Glu Lys Ser Asn Leu Val Arg Ala Glu Ala Asp Asn 165 170 175 Met Asp Val Ser Pro Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Leu Pro Val Thr 180 185 190 Leu Pro Leu Leu Asn 195 <210> 86 <211> 197 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(197) <223> Public GI no. 17933450 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(197) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 1.59E-60 and percent identity of 66.8 <400> 86 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Ser Val Ala Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Ser Phe Ser Ser Gly Asp Asn Leu Val 50 55 60 Lys Ile Leu Asp Arg Tyr Gly Lys Gln His Asp Asp Asp Leu Lys Ala 65 70 75 80 Leu Asp Arg Gln Ser Lys Ala Leu Asp Cys Gly Ser His His Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Glu Glu Ser Asn Val Asp Asn Val 100 105 110 Ser Val Gly Ser Leu Val Gln Leu Glu Glu His Leu Glu Asn Ala Leu 115 120 125 Ser Val Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Met Leu Lys Leu Val Glu 130 135 140 Asn Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Glu Glu Glu Asn His Val Leu 145 150 155 160 Ala Ser Gln Met Glu Lys Ser Asn Leu Val Arg Ala Glu Ala Asp Asn 165 170 175 Met Asp Val Ser Pro Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Leu Pro Val Thr 180 185 190 Leu Pro Leu Leu Asn 195 <210> 87 <211> 196 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Public GI no. 17933456 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 4.99E-59 and percent identity of 66.4 <400> 87 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Ser Val Ala Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asn Phe Ser Ala Gly Asp Asp Leu Val 50 55 60 Lys Ile Val Asp Arg Tyr Gly Lys Gln His Ala Asp Asp Arg Lys Ala 65 70 75 80 Leu Asp Leu Gln Ser Glu Ala Pro Lys Tyr Gly Ser His His Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Val Glu Ser Asn Ser Asp Val Ser 100 105 110 Val Asp Ser Leu Val Gln Leu Glu Asn His Leu Glu Thr Ala Leu Ser 115 120 125 Val Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Leu Leu Lys Leu Val Asp Ser 130 135 140 Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Lys Glu Glu Asn Gln Gly Leu Ala 145 150 155 160 Ser Gln Met Glu Lys Asn Asn Leu Ala Gly Ala Glu Ala Asp Lys Met 165 170 175 Glu Val Ser Pro Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Cys Pro Val Thr Leu 180 185 190 Pro Leu Leu Tyr 195 <210> 88 <211> 196 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Ceres CLONE ID no. 1091989 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 4.99E-59 and percent identity of 66.4 <400> 88 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Ser Val Ala Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asn Phe Ser Ala Gly Asp Asp Leu Val 50 55 60 Lys Ile Val Asp Arg Tyr Gly Lys Gln His Ala Asp Asp Arg Lys Ala 65 70 75 80 Leu Asp Leu Gln Ser Glu Ala Pro Lys Tyr Gly Ser His His Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Val Glu Ser Asn Ser Asp Val Ser 100 105 110 Val Asp Ser Leu Val Gln Leu Glu Asn His Leu Glu Thr Ala Leu Ser 115 120 125 Val Thr Arg Ala Arg Lys Thr Glu Leu Leu Leu Lys Leu Val Asp Ser 130 135 140 Leu Lys Glu Lys Glu Lys Leu Leu Lys Glu Glu Asn Gln Gly Leu Ala 145 150 155 160 Ser Gln Met Glu Lys Asn Asn Leu Ala Gly Ala Glu Ala Asp Lys Met 165 170 175 Glu Val Ser Pro Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Cys Pro Val Thr Leu 180 185 190 Pro Leu Leu Tyr 195 <210> 89 <211> 196 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Public GI no. 17933458 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(196) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 92459 at SEQ ID NO. 81 with e-value of 1.19E-57 and percent identity of 65.6 <400> 89 Met Gly Arg Lys Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ile Glu Lys Asn Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Cys Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Glu Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Val Leu Cys Glu Ala Ser Val Gly Leu Leu Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Asp Lys Leu Tyr Ser Phe Ser Ser Gly Asp Arg Leu Glu 50 55 60 Lys Ile Leu Asp Arg Tyr Gly Lys Lys His Ala Asp Asp Leu Asn Ala 65 70 75 80 Leu Asp Leu Gln Ser Lys Ser Leu Asn Tyr Ser Ser His His Glu Leu 85 90 95 Leu Glu Leu Val Glu Ser Lys Leu Val Glu Ser Ile Asp Asp Val Ser 100 105 110 Val Asp Ser Leu Val Glu Leu Glu Asp His Leu Glu Thr Ala Leu Ser 115 120 125 Val Thr Arg Ala Arg Lys Ala Glu Leu Met Leu Lys Leu Val Glu Ser 130 135 140 Leu Lys Glu Lys Glu Asn Leu Leu Lys Glu Glu Asn Gln Val Leu Ala 145 150 155 160 Ser Gln Ile Glu Lys Lys Asn Leu Glu Gly Ala Glu Ala Asp Asn Ile 165 170 175 Glu Met Ser Ser Gly Gln Ile Ser Asp Ile Asn Leu Pro Val Thr Leu 180 185 190 Pro Leu Leu Asn 195 <210> 90 <211> 614 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(614) <223> Ceres CLONE ID no. 1952 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(614) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04701 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(614) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 28 <220> <221> CDS <222> (30)..(429) <223> Referenced by SEQ ID NO: 91 <400> 90 ggaagtgaag gaggtatatc cggaggtggt atgtctgggg gcagtggaag taaacacaaa 60 attggaggag gtaaacacgg aggtcttgga ggtaaattcg gaaagaaaag aggcatgtcc 120 ggaagtggag gaggcatgtc aggaagtgaa ggaggtgtgt ctggaagtga aggaagtatg 180 tccggaggtg gtatgtctgg gggtagcgga agtaaacaca aaattggagg aggtaaacac 240 ggaggtctta gaggtaaatt cggaaagaaa agaggtatgt caggaagtga aggaggtatg 300 tctggaagtg aaggaggtgt gtcggaaagt ggtatgtccg ggagtggagg gggtaaacac 360 aaaatcggag gaggtaaaca caaatttgga ggaggtaaac acggaggtgg aggtggccac 420 atggcggagt aaagaacaat ggtcaagttg ttccaacatt aagcagatca ttgtgcatta 480 gttcaagatt gtatgattgg gaaagtaaaa gaaagaaaaa atattttcta ataagtttta 540 tgtttatatg taatgttgaa tctgattatt atgataaaaa gacataaatg tgatacaatg 600 tttattttaa gagc 614 <210> 91 <211> 133 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(133) <223> Ceres CLONE ID no. 1952 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(133) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04701 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(133) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 28 <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: INFLORESCENCE Useful for making ornamental plants with modified flowers <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: ROSETTE LEAVES Useful for making ornamental plants with modified leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Plant Architecture Useful for making plants with enhanced plant architecture <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Disorganized Rosette Useful for making plants with increased biomass <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Lanceolate Shaped Useful for making plants with increased biomass and foliage <400> 91 Met Ser Gly Gly Ser Gly Ser Lys His Lys Ile Gly Gly Gly Lys His 1 5 10 15 Gly Gly Leu Gly Gly Lys Phe Gly Lys Lys Arg Gly Met Ser Gly Ser 20 25 30 Gly Gly Gly Met Ser Gly Ser Glu Gly Gly Val Ser Gly Ser Glu Gly 35 40 45 Ser Met Ser Gly Gly Gly Met Ser Gly Gly Ser Gly Ser Lys His Lys 50 55 60 Ile Gly Gly Gly Lys His Gly Gly Leu Arg Gly Lys Phe Gly Lys Lys 65 70 75 80 Arg Gly Met Ser Gly Ser Glu Gly Gly Met Ser Gly Ser Glu Gly Gly 85 90 95 Val Ser Glu Ser Gly Met Ser Gly Ser Gly Gly Gly Lys His Lys Ile 100 105 110 Gly Gly Gly Lys His Lys Phe Gly Gly Gly Lys His Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Gly His Met Ala Glu <210> 92 <211> 1383 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1383) <223> Ceres CLONE ID no. 123905 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1383) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04717 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1383) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 29 <220> <221> CDS <222> (119)..(920) <223> Referenced by SEQ ID NO: 93 <400> 92 caaaaacaca aacaaaactc atattttcaa tctccaggtg ctttacacca acagagtcgc 60 aagaaaacaa aaaccaaact cggatttagt ttgacagaag aaggaatcga gagtcgggta 120 tgcattatcc taacaacaga accgaattcg tcggagctcc agccccaacc cggtatcaaa 180 aggagcagtt gtcaccggag caagagcttt cagttattgt ctctgctttg caacacgtga 240 tctcagggga aaacgaaacg gcgccgtgtc agggtttttc cagtgacagc acagtgataa 300 gcgcgggaat gcctcggttg gattcagaca cttgtcaagt ctgtaggatc gaaggatgtc 360 tcggctgtaa ctactttttc gcgccaaatc agagaattga aaagaatcat caacaagaag 420 aagagattac tagtagtagt aacagaagaa gagagagctc tcccgtggcg aagaaagcgg 480 aaggtggcgg gaaaatcagg aagaggaaga acaagaagaa tggttacaga ggagttaggc 540 aaagaccttg gggaaaattt gcagctgaga tcagagatcc taaaagagcc acacgtgttt 600 ggcttggtac tttcgaaacc gccgaagatg cggctcgagc ttatgatcga gccgcgattg 660 gattccgtgg gccaagggct aaactcaact tcccctttgt ggattacacg tcttcagttt 720 catctcctgt tgctgctgat gatataggag caaatgcaag tgcaagcgcc agtgtgagcg 780 ccacagattc agttgaagca gagcaatgga acggaggagg aggggattgc aatatggagt 840 ggatgaatat gatgatgatg atggattttg ggaatggaga ttcttcagat tcaggaaata 900 caattgctga tatgttccag tgataaatga gctctttctt gttggcgttt tttggagtta 960 agtgcaagaa gagattgaca ctgtggcttg tttaaagtga acaagaacaa gaaagcatgt 1020 aattagtagt ctcattcttt tgtttgtggt caattctatg tttatctcat ataaaatctg 1080 agttaaacct atctgaggag agagtaaata aagaggttaa gaaacccaac attggtctga 1140 attataaacg taagtgtcaa cgttgtttat aaaggagaaa actataattg gtgacaaaag 1200 acataaagaa aagatgtcta ctcctacaaa gcatcgcgtg cagctattcg acaaacaatg 1260 gcatctccca gagaggaaat tccgagctct tggctagtta tcttgtaatg ctgaaaacat 1320 gaatgtattt gagtttattt ctgtaacatt ggaagcgaaa taaaagggtt atcaactgtt 1380 acc 1383 <210> 93 <211> 267 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(267) <223> Ceres CLONE ID no. 123905 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(267) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04717 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(267) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 29 <220> <221> misc_feature <222> (134)..(197) <223> Pfam Name: AP2; Pfam Description: AP2 domain <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: INFLORESCENCE Useful for making ornamental plants with modified flowers <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: ROSETTE LEAVES Useful for making ornamental plants with modified leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Plant Architecture Useful for making plants with enhanced plant architecture <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Disorganized Rosette Useful for making plants with increased biomass <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Lanceolate Shaped Useful for making plants with increased biomass and foliage <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Short Useful for making shorter plants <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Reduced Apical Dominance Useful for modifying plant structure, i.e. increased branching <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Reduced fertility Useful for sterility, genetic confinement systems <400> 93 Met His Tyr Pro Asn Asn Arg Thr Glu Phe Val Gly Ala Pro Ala Pro 1 5 10 15 Thr Arg Tyr Gln Lys Glu Gln Leu Ser Pro Glu Gln Glu Leu Ser Val 20 25 30 Ile Val Ser Ala Leu Gln His Val Ile Ser Gly Glu Asn Glu Thr Ala 35 40 45 Pro Cys Gln Gly Phe Ser Ser Asp Ser Thr Val Ile Ser Ala Gly Met 50 55 60 Pro Arg Leu Asp Ser Asp Thr Cys Gln Val Cys Arg Ile Glu Gly Cys 65 70 75 80 Leu Gly Cys Asn Tyr Phe Phe Ala Pro Asn Gln Arg Ile Glu Lys Asn 85 90 95 His Gln Gln Glu Glu Glu Ile Thr Ser Ser Ser Asn Arg Arg Arg Glu 100 105 110 Ser Ser Pro Val Ala Lys Lys Ala Glu Gly Gly Gly Lys Ile Arg Lys 115 120 125 Arg Lys Asn Lys Lys Asn Gly Tyr Arg Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp 130 135 140 Gly Lys Phe Ala Ala Glu Ile Arg Asp Pro Lys Arg Ala Thr Arg Val 145 150 155 160 Trp Leu Gly Thr Phe Glu Thr Ala Glu Asp Ala Ala Arg Ala Tyr Asp 165 170 175 Arg Ala Ala Ile Gly Phe Arg Gly Pro Arg Ala Lys Leu Asn Phe Pro 180 185 190 Phe Val Asp Tyr Thr Ser Ser Val Ser Ser Pro Val Ala Ala Asp Asp 195 200 205 Ile Gly Ala Asn Ala Ser Ala Ser Ala Ser Val Ser Ala Thr Asp Ser 210 215 220 Val Glu Ala Glu Gln Trp Asn Gly Gly Gly Gly Asp Cys Asn Met Glu 225 230 235 240 Trp Met Asn Met Met Met Met Met Asp Phe Gly Asn Gly Asp Ser Ser 245 250 255 Asp Ser Gly Asn Thr Ile Ala Asp Met Phe Gln <210> 94 <211> 229 <212> PRT <213> Populus balsamifera subsp. trichocarpa <220> <221> misc_feature <222> (1)..(229) <223> 1460991 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(229) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 123905 at SEQ ID NO. 93 with e-value of 2.10E-35 and percent identity of 59.8 <400> 94 Met Val Ala Ala Leu Lys Asn Val Val Ser Gly Thr Ala Ser Met Asp 1 5 10 15 Phe Ser Arg Glu Met Asn Ser Ile Asn Met Pro Ile Ile Thr Ser His 20 25 30 Pro Gln Phe Gly Ser Ala Ser Asn Asn Gly Asn Gly Phe Cys Asn Ser 35 40 45 Ile Leu Pro Pro Ser Ser Asp Leu Asp Thr Cys Gly Val Cys Lys Ile 50 55 60 Lys Gly Cys Leu Gly Cys Asn Phe Phe Pro Pro Asn Gln Glu Asp Lys 65 70 75 80 Lys Asp Asp Lys Lys Gly Lys Arg Lys Arg Val Lys Lys Asn Tyr Arg 85 90 95 Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp Gly Lys Trp Ala Ala Glu Ile Arg Asp 100 105 110 Pro Arg Lys Ala Ala Arg Val Trp Leu Gly Thr Phe Asn Thr Ala Glu 115 120 125 Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Lys Ala Ala Ile Asp Phe Arg Gly Pro 130 135 140 Arg Ala Lys Leu Asn Phe Pro Phe Pro Asp Ser Gly Ile Ala Ser Phe 145 150 155 160 Glu Glu Ser Lys Glu Lys Gln Glu Lys Gln Gln Glu Ile Ser Glu Lys 165 170 175 Arg Ser Glu Phe Glu Thr Glu Thr Gly Lys Asp Asn Glu Phe Leu Asp 180 185 190 Asn Ile Val Asp Glu Glu Leu Gln Glu Trp Met Ala Met Ile Met Asp 195 200 205 Phe Gly Asn Gly Gly Ser Ser Asn Ser Ser Gly Thr Ala Ser Ala Ala 210 215 220 Ala Thr Ile Gly Phe 225 <210> 95 <211> 256 <212> PRT <213> Zea mays <220> <221> misc_feature <222> (1)..(256) <223> Ceres CLONE ID no. 1494990 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(256) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 123905 at SEQ ID NO. 93 with e-value of 4.19E-37 and percent identity of 49.2 <400> 95 Met Glu Ala Ser Arg Gln Tyr Met Ile Arg Phe Asp Gly His Phe Glu 1 5 10 15 Glu Gly Pro Ser Ser Ala Ala Ala Glu Pro Pro Gln Pro Phe Ala Ser 20 25 30 Arg Ala Phe Ser Pro Glu Gln Glu Gln Ser Val Met Val Ala Ala Leu 35 40 45 Leu His Val Val Ser Gly Tyr Ala Thr Pro Ala Pro Asp Leu Phe Phe 50 55 60 Pro Ala Gly Lys Glu Ala Cys Thr Ala Cys Gly Val Asp Gly Cys Leu 65 70 75 80 Gly Cys Glu Phe Phe Gly Ala Glu Ala Gly Arg Ala Val Ala Ala Ser 85 90 95 Asp Ala Pro Arg Ala Ala Thr Ala Gly Gly Pro Gln Arg Arg Arg Arg 100 105 110 Asn Lys Lys Ser Gln Tyr Arg Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp Gly Lys 115 120 125 Trp Ala Ala Glu Ile Arg Asp Pro Arg Arg Ala Val Arg Val Trp Leu 130 135 140 Gly Thr Phe Asp Thr Ala Glu Asp Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Arg Ala 145 150 155 160 Ala Val Lys Phe Arg Gly Pro Arg Ala Lys Leu Asn Phe Ser Phe Pro 165 170 175 Glu Gln His Leu Arg Asp Asp Ser Gly Asn Ala Ala Ala Lys Ser Asp 180 185 190 Ala Cys Ser Pro Ser Pro Ser Pro Arg Ser Ala Glu Glu Glu Glu Thr 195 200 205 Gly Asp Leu Leu Trp Asp Gly Leu Val Asp Leu Met Lys Leu Asp Glu 210 215 220 Ser Asp Leu Cys Leu Leu Leu Pro Val Asp Asn Thr Leu Asp Lys Phe 225 230 235 240 His Ala Pro Gly Gln Arg Arg Ser Gly Ser Gly Val Pro Leu Cys Tyr 245 250 255 <210> 96 <211> 266 <212> PRT <213> Triticum aestivum <220> <221> misc_feature <222> (1)..(266) <223> Ceres CLONE ID no. 634402 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(266) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 123905 at SEQ ID NO. 93 with e-value of 1.80E-36 and percent identity of 45.0 <400> 96 Met Thr Phe Ser Val Ser Pro Ala Thr Gly Ala Ser Gln Glu Tyr Met 1 5 10 15 Ile Arg Phe Asp Gly His Phe Glu Asp Pro Ser Ser Ala Ala Ala Ser 20 25 30 Ala Glu Pro Pro Leu Pro Phe Ala Gly Arg Ala Phe Ser Pro Gln Gln 35 40 45 Glu Gln Ser Ala Met Val Ala Ala Leu Leu His Val Val Ser Gly Tyr 50 55 60 Thr Thr Pro Ala Pro Asp Leu Phe Phe Pro Ala Arg Lys Glu Ala Cys 65 70 75 80 Thr Ala Cys Gly Met Asp Gly Cys Leu Gly Cys Glu Phe Phe Gly Ala 85 90 95 Glu Ala Gly Arg Ala Val Ala Ala Ser Asp Ala Pro Arg Ala Pro Ala 100 105 110 Ala Gly Gly Pro Gln Arg Arg Arg Arg Asn Lys Lys Asn Gln Tyr Arg 115 120 125 Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp Gly Lys Trp Ala Ala Glu Ile Arg Asp 130 135 140 Pro Arg Arg Ala Val Arg Val Trp Leu Gly Thr Phe Asp Thr Ala Glu 145 150 155 160 Asp Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Arg Ala Ala Val Glu Phe Arg Gly Pro 165 170 175 Arg Ala Lys Leu Asn Phe Ser Phe Pro Glu Gln Gln Gln Gln Gln Leu 180 185 190 Gly Gly Ser Gly Asn Ala Ala Ala Lys Ser Asp Ala Cys Ser Pro Ser 195 200 205 Pro Ser Pro Arg Ser Ala Asp Glu Asp Glu Thr Gly Asp Leu Leu Trp 210 215 220 Asp Gly Leu Val Asp Leu Met Lys Leu Asp Glu Ser Asp Leu Cys Leu 225 230 235 240 Leu Leu Pro Val Asp Asn Thr Asp Lys Phe His Ile Glu Gly Lys Arg 245 250 255 Arg Ser Gly Ser Gly Val Pro Leu Cys Tyr 260 265 <210> 97 <211> 274 <212> PRT <213> Oryza sativa subsp. japonica <220> <221> misc_feature <222> (1)..(274) <223> Public GI no. 51536200 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(274) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 123905 at SEQ ID NO. 93 with e-value of 3.09E-34 and percent identity of 43.4 <400> 97 Met Thr Lys Lys Val Ile Pro Ala Met Ala Ala Ala Arg Gln Asp Ser 1 5 10 15 Cys Lys Thr Lys Leu Asp Glu Arg Gly Gly Ser His Gln Ala Pro Ser 20 25 30 Ser Ala Arg Trp Ile Ser Ser Glu Gln Glu His Ser Ile Ile Val Ala 35 40 45 Ala Leu Arg Tyr Val Val Ser Gly Cys Thr Thr Pro Pro Pro Glu Ile 50 55 60 Val Thr Val Ala Cys Gly Glu Ala Cys Ala Leu Cys Gly Ile Asp Gly 65 70 75 80 Cys Leu Gly Cys Asp Phe Phe Gly Ala Glu Ala Ala Gly Asn Glu Glu 85 90 95 Ala Val Met Ala Thr Asp Tyr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val 100 105 110 Ala Gly Gly Ser Gly Gly Lys Arg Val Arg Arg Arg Arg Lys Lys Asn 115 120 125 Val Tyr Arg Gly Val Arg His Arg Pro Trp Gly Lys Trp Ala Ala Glu 130 135 140 Ile Arg Asp Pro Arg Arg Ala Val Arg Lys Trp Leu Gly Thr Phe Asp 145 150 155 160 Thr Ala Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Arg Ala Ala Leu Glu Phe 165 170 175 Arg Gly Ala Arg Ala Lys Leu Asn Phe Pro Cys Ser Glu Pro Leu Pro 180 185 190 Met Pro Ser Gln Arg Asn Gly Asn Gly Gly Asp Ala Val Thr Ala Ala 195 200 205 Thr Thr Thr Ala Glu Gln Met Thr Pro Thr Leu Ser Pro Cys Ser Ala 210 215 220 Asp Ala Glu Glu Thr Thr Thr Pro Val Asp Trp Gln Met Gly Ala Asp 225 230 235 240 Glu Ala Gly Ser Asn Gln Leu Trp Asp Gly Leu Gln Asp Leu Met Lys 245 250 255 Leu Asp Glu Ala Asp Thr Trp Phe Pro Pro Phe Ser Gly Ala Ala Ser 260 265 270 Ser Phe <210> 98 <211> 541 <212> DNA <213> Glycine max <220> <221> misc_feature <222> (1)..(541) <223> Ceres CLONE ID no. 679923 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(541) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME03195 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(541) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 36 <220> <221> CDS <222> (24)..(456) <223> Referenced by SEQ ID NO: 99 <400> 98 gctcaagttt ccaagaccaa gccaatggaa aacctttcac cattgattta caaaaacccc 60 attagaagaa cttctaggcg atctacaatg tatcttggtg tgagaaaaag gccatgggga 120 agatatgctg ctgagattag gaacccatac accaaagaga gacactggct aggcacattt 180 gacactgctg aagaggctgc tatagcttat gatctttcat ctatcaagat ttgtggcatt 240 aatgctcgaa ctaattttca ctaccctttt gtgtctcttc caccacttcc tatgtcgtca 300 ttgcctcctc caccgccacc gccgacccca gagttggatc caagtgttga agtttgtcta 360 gagatgatga atgctgcttc ttacgatggt gatgatgaat ctcttgttat tgcttccatt 420 ttgcaaagtt tttctaattc tggtaactgt tctttttagt ttttggttcc aatgaggcta 480 tggcctgcct cttatcaaat caataattct attttttttc tttgcaaaaa aaaaaaaaaa 540 a 541 <210> 99 <211> 144 <212> PRT <213> Glycine max <220> <221> misc_feature <222> (1)..(144) <223> Ceres CLONE ID no. 679923 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(144) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME03195 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(144) <223> Also Known As Ceres LEAD Number 36 <220> <221> misc_feature <222> (21)..(84) <223> Pfam Name: AP2; Pfam Description: AP2 domain <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Late Flowering Useful for delaying flowering time <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Large Useful for making ornamental plants with modified flowers <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: ROSETTE LEAVES Useful for making ornamental plants with modified leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Curled 1 Useful for making plants with altered leaf shape e.g. curled leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Plant Architecture Useful for making plants with enhanced plant architecture <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Short Useful for making shorter plants <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Short Petioles Useful for making smaller plants <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Strong Useful for making stronger plants <400> 99 Met Glu Asn Leu Ser Pro Leu Ile Tyr Lys Asn Pro Ile Arg Arg Thr 1 5 10 15 Ser Arg Arg Ser Thr Met Tyr Leu Gly Val Arg Lys Arg Pro Trp Gly 20 25 30 Arg Tyr Ala Ala Glu Ile Arg Asn Pro Tyr Thr Lys Glu Arg His Trp 35 40 45 Leu Gly Thr Phe Asp Thr Ala Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Leu 50 55 60 Ser Ser Ile Lys Ile Cys Gly Ile Asn Ala Arg Thr Asn Phe His Tyr 65 70 75 80 Pro Phe Val Ser Leu Pro Pro Leu Pro Met Ser Ser Leu Pro Pro Pro 85 90 95 Pro Pro Pro Pro Thr Pro Glu Leu Asp Pro Ser Val Glu Val Cys Leu 100 105 110 Glu Met Met Asn Ala Ala Ser Tyr Asp Gly Asp Asp Glu Ser Leu Val 115 120 125 Ile Ala Ser Ile Leu Gln Ser Phe Ser Asn Ser Gly Asn Cys Ser Phe 130 135 140 <210> 100 <211> 129 <212> PRT <213> Populus balsamifera subsp. trichocarpa <220> <221> misc_feature <222> (1)..(129) <223> 1479788 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(129) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 679923 at SEQ ID NO. 99 with e-value of 3.80E-36 and percent identity of 69.0 <400> 100 Met Glu Asn Phe Pro Pro Leu Leu Tyr Arg Asn Pro Lys Arg Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Ser Ser Arg Tyr Leu Gly Val Arg Arg Arg Pro Trp Gly Arg 20 25 30 Tyr Ala Ala Glu Ile Arg Asn Pro Tyr Thr Lys Glu Arg His Trp Leu 35 40 45 Gly Thr Phe Asp Thr Ala Glu Glu Ala Ala Val Ala Tyr Asp Leu Ser 50 55 60 Ser Ile Ser Phe Ser Gly Ile Glu Arg Ala Arg Thr Asn Phe Tyr Tyr 65 70 75 80 Pro Phe Phe Ala His Pro Ser Pro Ser Gln Glu Ala Pro Pro Pro Pro 85 90 95 Leu Pro Pro Pro Glu Met Glu Lys Gly Asp Gln Leu Gly Met Glu Asp 100 105 110 Val Asp Gly Asn Asn Ala Leu Glu Ile Leu Leu Lys Ala Gly Asn Gly 115 120 125 Lys <210> 101 <211> 143 <212> PRT <213> Populus balsamifera subsp. trichocarpa <220> <221> misc_feature <222> (1)..(143) <223> 1533259 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(143) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 679923 at SEQ ID NO. 99 with e-value of 3.49E-42 and percent identity of 66.6 <400> 101 Met Glu Asn Phe Pro Pro Leu Leu Tyr Arg Asn Pro Lys Arg Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Ser Ser Arg Tyr Leu Gly Val Arg Arg Arg Pro Trp Gly Arg 20 25 30 Tyr Ala Ala Glu Ile Arg Asn Pro Tyr Thr Lys Glu Arg His Trp Leu 35 40 45 Gly Thr Phe Asp Thr Ala Glu Glu Ala Ala Val Ala Tyr Asp Leu Ser 50 55 60 Ser Ile Ser Phe Ser Gly Ile Glu Arg Ala Arg Thr Asn Phe Tyr Tyr 65 70 75 80 Pro Phe Phe Ala His Pro Ser Pro Ser Gln Glu Ala Pro Pro Pro Pro 85 90 95 Leu Pro Pro Pro Glu Met Glu Lys Gly Asp Gln Leu Gly Met Glu Asp 100 105 110 Val Gly Thr Thr Gln Asp Asp Glu Ser Ile Val Ile Ala Ser Ile Leu 115 120 125 Gln Ser Phe Cys Gln Ser Thr Ser Tyr Ser Phe His Pro Gln Ile 130 135 140 <210> 102 <211> 175 <212> PRT <213> Oryza sativa subsp. japonica <220> <221> misc_feature <222> (1)..(175) <223> Public GI no. 50941583 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(175) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 679923 at SEQ ID NO. 99 with e-value of 1.20E-32 and percent identity of 65.8 <400> 102 Met Ala Asp Ala Ala Glu Gln His His Arg Gln Glu Glu Thr Ala Ala 1 5 10 15 Ala Thr Thr Thr Pro Gln Gln Met Met Met Arg Arg Arg Arg Ala Arg 20 25 30 Ala Ser Ser Glu Tyr Leu Gly Val Arg Arg Arg Pro Trp Gly Arg Tyr 35 40 45 Ala Ala Glu Ile Arg Asn Pro Tyr Thr Lys Glu Arg His Trp Leu Gly 50 55 60 Thr Phe Asp Thr Ala Glu Glu Ala Ala Val Ala Tyr Asp Leu Ser Ala 65 70 75 80 Ile Ser Ile Ser Gly Ala Ala Ala Ala Arg Thr Asn Phe Leu Tyr Pro 85 90 95 Asp Met His His His His Pro Ser Pro Pro Gln His Ala Leu Ser Pro 100 105 110 Ala Val Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Tyr Asp 115 120 125 Asp Asp Tyr Leu Ser Pro Ala Ala Ala Glu Glu Glu Val Glu Ala Gly 130 135 140 Asp Asp Glu Ser Leu Thr Ile Ala Thr Ile Leu Gln Ser Phe Gln Tyr 145 150 155 160 Gln Gln Ser Val Pro Pro Ala Ser Ser Gly Ser Met Phe Tyr Tyr 165 170 175 <210> 103 <211> 1681 <212> DNA <213> Glycine max <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1681) <223> Ceres CLONE ID no. 691319 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1681) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME05057 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1681) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME09233 <220> <221> CDS <222> (111)..(1470) <223> Referenced by SEQ ID NO: 104 <400> 103 aaaagggtgt ccaaagaagg aatcacacaa gagaaatttt gggtggatct tggtaattta 60 aatttggtcc aaaaatagta agaaaaaaaa accatagttc atttaatttt catgtccttg 120 ctaacggtgg cgcaccaaag ggggtcaggt gagtttatcc ggttcacgga aagtcatggc 180 ggtggtggcg atgacgtcag tggtgacggt gaacatggtt gtggacatga tgatggaagt 240 ggtgctggag gttcactagg gttgaatttt aaccaagtga tgcaacaagg tgaggtgaca 300 atgcaaggtg gttcattggt ttcagggtat aacaggggtg atccagagtt gagagaaata 360 gtttcagctt tgacacacgt ggtgtcttca gggtctggcc agaggagcac cgaattgacc 420 cagcaaagtg gttttcctat gatgtctgct tcttctcttt cacgtttgtc tgctttctct 480 tcttcttctc cttctccttc ttctggagcc tcttgggttg gccacaaaag aggcagagaa 540 gaagaagaga atagtacttc acataacttg atgcaacaac aacaacaaag tgctccaaga 600 ctcttcagaa acattggtga cttcatggtg ccttctcaag gagactcatc atcagtgaca 660 gaagaagccc ccacctccac aactacaact gtaaccgccg tcactgaaaa cccaccagga 720 ggtggggaaa ggaggagaaa gtacagagga gtgaggcaga ggccatgggg aaaatgggca 780 gcagaaatcc gtgatccaca caaagcagca agagtttggc taggcacatt tgacacagaa 840 gaagcagcag caagagccta tgatgaagct gcattgaggt tcagaggcaa cagagcaaag 900 cttaacttcc ctgaaaatgt aagagcagtt ccacccattc aaccttttca agccaccact 960 aggctaaccg tttctgattc caccacctct caattccggc cactctccgc ggtggcgcca 1020 cccttcattc agcagccaca gattcagggc tcctctgact tgatcagaga ctacttgcaa 1080 tactctcagc ttctacagag tgattttcaa cagcaacaaa tacaacaaca acagcagcag 1140 cagcggcagc agcagcagcg gcagcggcag cagcggcagc agcagcagca acaacaacaa 1200 caaccatcta gtttgcttca gcagttgtac tataatgcac aatttgcttc acttcaatca 1260 ccttcaatgc tatcatcatc tccttcattt tcttcttctg tgtctccagc accattccca 1320 ttattcacaa cctctgcttc tttccccttg ttttcaagtc aacaaatggg ctatttccag 1380 ccaccggaaa gccgcaatcc cgctggcggc gtgccggagt ttccaacgtc cacatggtcg 1440 gataccagta gccagccacc accttctggt tgatacagtg ttttagtttc cttcatattt 1500 tcctttttct tttttctttc tttcattctt agcataaaaa aaaaagactt gttatactta 1560 tttctttttt caagggtgaa actatgatat agtttttttt aagtattttt ggtactattc 1620 tcgtatcaga attagagttt cagtaattta tgttgatatt caatacaaat ctttattatg 1680 t 1681 <210> 104 <211> 453 <212> PRT <213> Glycine max <220> <221> misc_feature <222> (1)..(453) <223> Ceres CLONE ID no. 691319 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(453) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME05057 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(453) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME09233 <220> <221> misc_feature <222> (209)..(272) <223> Pfam Name: AP2; Pfam Description: AP2 domain <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: ROSETTE LEAVES Useful for making ornamental plants with modified leaves <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Disorganized Rosette Useful for making plants with increased biomass <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Lanceolate Shaped Useful for making plants with increased biomass and foliage <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Short Useful for making shorter plants <400> 104 Met Ser Leu Leu Thr Val Ala His Gln Arg Gly Ser Gly Glu Phe Ile 1 5 10 15 Arg Phe Thr Glu Ser His Gly Gly Gly Gly Asp Asp Val Ser Gly Asp 20 25 30 Gly Glu His Gly Cys Gly His Asp Asp Gly Ser Gly Ala Gly Gly Ser 35 40 45 Leu Gly Leu Asn Phe Asn Gln Val Met Gln Gln Gly Glu Val Thr Met 50 55 60 Gln Gly Gly Ser Leu Val Ser Gly Tyr Asn Arg Gly Asp Pro Glu Leu 65 70 75 80 Arg Glu Ile Val Ser Ala Leu Thr His Val Val Ser Ser Gly Ser Gly 85 90 95 Gln Arg Ser Thr Glu Leu Thr Gln Gln Ser Gly Phe Pro Met Met Ser 100 105 110 Ala Ser Ser Leu Ser Arg Leu Ser Ala Phe Ser Ser Ser Ser Pro Ser 115 120 125 Pro Ser Ser Gly Ala Ser Trp Val Gly His Lys Arg Gly Arg Glu Glu 130 135 140 Glu Glu Asn Ser Thr Ser His Asn Leu Met Gln Gln Gln Gln Gln Ser 145 150 155 160 Ala Pro Arg Leu Phe Arg Asn Ile Gly Asp Phe Met Val Pro Ser Gln 165 170 175 Gly Asp Ser Ser Ser Val Thr Glu Glu Ala Pro Thr Ser Thr Thr Thr 180 185 190 Thr Val Thr Ala Val Thr Glu Asn Pro Pro Gly Gly Gly Glu Arg Arg 195 200 205 Arg Lys Tyr Arg Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp Gly Lys Trp Ala Ala 210 215 220 Glu Ile Arg Asp Pro His Lys Ala Ala Arg Val Trp Leu Gly Thr Phe 225 230 235 240 Asp Thr Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Glu Ala Ala Leu Arg 245 250 255 Phe Arg Gly Asn Arg Ala Lys Leu Asn Phe Pro Glu Asn Val Arg Ala 260 265 270 Val Pro Pro Ile Gln Pro Phe Gln Ala Thr Thr Arg Leu Thr Val Ser 275 280 285 Asp Ser Thr Thr Ser Gln Phe Arg Pro Leu Ser Ala Val Ala Pro Pro 290 295 300 Phe Ile Gln Gln Pro Gln Ile Gln Gly Ser Ser Asp Leu Ile Arg Asp 305 310 315 320 Tyr Leu Gln Tyr Ser Gln Leu Leu Gln Ser Asp Phe Gln Gln Gln Gln 325 330 335 Ile Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Arg Gln Gln Gln Gln Arg Gln Arg 340 345 350 Gln Gln Arg Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Ser Ser Leu 355 360 365 Leu Gln Gln Leu Tyr Tyr Asn Ala Gln Phe Ala Ser Leu Gln Ser Pro 370 375 380 Ser Met Leu Ser Ser Ser Pro Ser Phe Ser Ser Ser Val Ser Pro Ala 385 390 395 400 Pro Phe Pro Leu Phe Thr Thr Ser Ala Ser Phe Pro Leu Phe Ser Ser 405 410 415 Gln Gln Met Gly Tyr Phe Gln Pro Pro Glu Ser Arg Asn Pro Ala Gly 420 425 430 Gly Val Pro Glu Phe Pro Thr Ser Thr Trp Ser Asp Thr Ser Ser Gln 435 440 445 Pro Pro Pro Ser Gly <210> 105 <211> 398 <212> PRT <213> Populus balsamifera subsp. trichocarpa <220> <221> misc_feature <222> (1)..(398) <223> 1443093 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(398) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 691319 at SEQ ID NO. 104 with e-value of 3.19E-73 and percent identity of 56.0 <400> 105 Met Gly Tyr Ser Ser Ser Thr Glu Met Ser Met Val Ser Glu Leu Thr 1 5 10 15 His Val Val Ser Gly Gln Arg Gly Ser Thr Ser Asp Trp Gly Ser Tyr 20 25 30 Gly Ala Val Gly Leu Gly Gly Ala Thr Ile Thr Ser Asn Phe Gly Gln 35 40 45 Ala Ala Pro Gly Ser Asn Thr Ser Thr Pro Ala Ser Pro Pro Leu Ser 50 55 60 Ala Tyr Ser Ser Thr Ser Gly Ser Gly Leu Trp Ile Gly Gln Lys Arg 65 70 75 80 Gly Arg Glu Glu Glu Ala Gly Ala Ala Ala Gln Leu Met Glu Ser Leu 85 90 95 Pro Arg Val Tyr Arg Gly Phe Asn Asp Phe Arg Ser Ser Gln Gly Asp 100 105 110 Ser Ser Ser Ser Gly Ala Thr Ala Thr Glu Glu Val Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Ile Val Ile Pro Thr Thr Thr Thr Pro Ser Thr Thr Ala Thr Pro Ser 130 135 140 Ser Glu Ile Ala Ser Leu Glu Glu Thr Gly Glu Gln Arg Arg Arg Tyr 145 150 155 160 Arg Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp Gly Lys Trp Ala Ala Glu Ile Arg 165 170 175 Asp Pro His Lys Ala Ala Arg Val Trp Leu Gly Thr Phe Asp Thr Ala 180 185 190 Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Asp Ala Ala Leu Arg Phe Arg Gly 195 200 205 Asn Arg Ala Lys Leu Asn Phe Pro Glu Asn Val Arg Leu Leu Pro Ala 210 215 220 Gln Thr Gln Asn Val Thr Ala Ser Gln Val Pro Ile Ser His Ser Gln 225 230 235 240 Leu Ser Ser His Leu Gln Leu Gln Pro Ile Ser Ser Pro Arg Gln Gln 245 250 255 Ala Gln Arg Pro Gln Ala Pro Ala Pro Ala Leu Phe Gln Ser Gln Ala 260 265 270 Asp Ile Ile Arg Asp Tyr Trp Glu Tyr Ser Gln Leu Leu Gln Ser Ser 275 280 285 Gly Glu Phe His His His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro 290 295 300 Ser Ser Leu Leu Gln Pro Met Phe Tyr Asn Pro Gln Val Ala Ser Leu 305 310 315 320 Gln Ser Ser Ala Leu Thr Ser Leu Ser Ser Ser Thr Ser Val Ser Ser 325 330 335 Leu Ala Ala Ile Ser Ser Gly Ser Ser Pro Ser Thr Phe Ser Pro Ser 340 345 350 Ala Ser Ser Phe Pro Leu Leu Phe Ala Gly Gln Gln Leu Gly Tyr Phe 355 360 365 Arg Pro Pro Gln Asn Gln Asn Pro Ala Ser Gly Ser Asp Phe Pro Val 370 375 380 Pro Pro Trp Thr Asp Ser Ser His Asn Pro Ser Ser Ser Gly 385 390 395 <210> 106 <211> 393 <212> PRT <213> Populus balsamifera subsp. trichocarpa <220> <221> misc_feature <222> (1)..(393) <223> 1452324 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(393) <223> Functional Homolog of Ceres CLONE ID no. 691319 at SEQ ID NO. 104 with e-value of 1.69E-67 and percent identity of 54.8 <400> 106 Met Gly Tyr Ser Ser Ser Ala Glu Met Ser Ala Met Val Ser Ala Leu 1 5 10 15 Thr His Val Val Ser Gly His Arg Gly Ser Thr Ser Asp Trp Gly Ser 20 25 30 Tyr Gly Ala Ser Gly Leu Gly Gly Ala Thr Ile Thr Ser Thr Ile Val 35 40 45 Gln Ala Ala Pro Gly Ser Asn Thr Ser Pro Ala Ser Pro Ser Leu Ser 50 55 60 Ala Tyr Ser Ser Thr Ser Gly Ser Gly Ser Trp Ile Gly Gln Lys Arg 65 70 75 80 Gly Arg Glu Lys Glu Ala Gly Ala Ala Ala Gln Leu Lys Glu Ser Leu 85 90 95 Pro Arg Val His Arg Gly Phe Asp Asp Phe Arg Ser Ser Leu Gly Asp 100 105 110 Ser Pro Ser Ser Gly Ala Thr Ala Thr Glu Glu Val Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Leu Val Phe Ser Thr Thr Ala Thr Pro Ser Thr Thr Ala Thr Pro Ser 130 135 140 Ser Glu Thr Ala Ser Leu Gly Glu Thr Gly Glu Arg Lys Arg Arg Tyr 145 150 155 160 Arg Gly Val Arg Gln Arg Pro Trp Gly Lys Trp Ala Ala Glu Ile Arg 165 170 175 Asp Pro His Lys Ala Ala Arg Val Trp Leu Gly Thr Phe Glu Thr Ala 180 185 190 Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Glu Ala Ala Leu Arg Phe Arg Gly 195 200 205 Ser Arg Ala Lys Leu Asn Phe Pro Glu Asn Ala Arg Leu Leu Pro Ala 210 215 220 Gln Met Gln Asn Val Thr Ala Ser Gln Val Pro Ile Ser Arg Ser Gln 225 230 235 240 Leu Pro Ser His His Gln Leu Gln Ser Ile Ser Ser Pro Arg Gln Gln 245 250 255 Ala Gln Arg Pro Gln Val Pro Ala Pro Ala Leu Phe Gln Ser Gln Pro 260 265 270 Asp Ile Ile Arg Asp Tyr Trp Glu Tyr Ser Gln Leu Leu Gln Ser Ser 275 280 285 Gly Asp Phe His Gly Gln Gln Gln Pro Pro Pro Ser Asn Leu Leu Glu 290 295 300 Gln Met Phe Tyr Asn Pro Gln Leu Ala Ser Leu Gln Ser Ser Thr Leu 305 310 315 320 Ser Ser Leu Pro Ser Ser Thr Ser Gly Ser Ser Phe Ala Ala Ile Pro 325 330 335 Ser Gly Ser Ile Ser Ser Thr Leu Ser Pro Ser Ala Ser Ser Phe Pro 340 345 350 Leu Leu Phe Ala Gly Gln Gln Leu Gly Tyr Phe Arg Pro Pro Glu Asn 355 360 365 Gln Asn Pro Ala Ala Gly Ser Asp Phe Pro Val Pro Pro Trp Thr Asp 370 375 380 Cys Ser Arg Arg Pro Ser Ser Thr Gly 385 390 <210> 107 <211> 877 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(877) <223> Ceres CLONE ID no. 98850 <220> <221> CDS <222> (47)..(626) <223> Referenced by SEQ ID NO: 108 <400> 107 agattaggat taaattaggg cataaccctt atcggagatt tgaagccatg ggaagaagaa 60 aaatcgagat caagcgaatc gagaacaaaa gcagtcgaca agtcactttc tccaaacgac 120 gcaatggtct catcgacaaa gctcgacaac tttcgattct ctgtgaatcc tccgtcgctg 180 ttgtcgtcgt atctgcctcc ggaaaactct atgactcttc ctccggtgac gagatagaag 240 cgctgttcaa gccggagaaa cctcaatgtt ttgaactcga tcttgaagaa aaaattcaga 300 attatcttcc acacaaggag ttactagaaa cagtccaaag caagcttgaa gaaccaaatg 360 tcgataatgt aagtgtagat tctctaattt ctctggagga acaacttgag actgctctgt 420 ccgtaagtag agctaggaag gcagaactga tgatggagta tatcgagtcc cttaaagaaa 480 aggagaaatt gctgagagaa gagaaccagg ttctggctag ccagatggga aagaatacgt 540 tgctggcaac agatgatgag agaggaatgt ttccgggaag tagctccggc aacaaaatac 600 cggagactct cccgctgctc aattagccac catcatcaac ggctgagttt tcaccttaaa 660 ctcaaagcct gattcataat taagagaata aatttgtata ttataaaaag ctgtgtaatc 720 tcaaaccttt tatcttcctc tagtgtggaa tttaaggtca aaaagaaaac gagaaagtat 780 ggatcagtgt tgtacctcct tcggagacaa gatcagagtt tgtgtgtttg tgtctgaatg 840 tacggattgg atttttaaag ttgtgctttc tttctcc 877 <210> 108 <211> 192 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(192) <223> Ceres CLONE ID no. 98850 <220> <221> misc_feature <222> (69)..(162) <223> Pfam Name: K-box; Pfam Description: K-box re.g.ion <220> <221> misc_feature <222> (9)..(59) <223> Pfam Name: SRF-TF; Pfam Description: SRF-type transcription factor (DNA-binding and dimerisation domain) <400> 108 Met Gly Arg Arg Lys Ile Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ser Ser 1 5 10 15 Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Ile Asp Lys Ala 20 25 30 Arg Gln Leu Ser Ile Leu Cys Glu Ser Ser Val Ala Val Val Val Val 35 40 45 Ser Ala Ser Gly Lys Leu Tyr Asp Ser Ser Ser Gly Asp Glu Ile Glu 50 55 60 Ala Leu Phe Lys Pro Glu Lys Pro Gln Cys Phe Glu Leu Asp Leu Glu 65 70 75 80 Glu Lys Ile Gln Asn Tyr Leu Pro His Lys Glu Leu Leu Glu Thr Val 85 90 95 Gln Ser Lys Leu Glu Glu Pro Asn Val Asp Asn Val Ser Val Asp Ser 100 105 110 Leu Ile Ser Leu Glu Glu Gln Leu Glu Thr Ala Leu Ser Val Ser Arg 115 120 125 Ala Arg Lys Ala Glu Leu Met Met Glu Tyr Ile Glu Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Lys Glu Lys Leu Leu Arg Glu Glu Asn Gln Val Leu Ala Ser Gln Met 145 150 155 160 Gly Lys Asn Thr Leu Leu Ala Thr Asp Asp Glu Arg Gly Met Phe Pro 165 170 175 Gly Ser Ser Ser Gly Asn Lys Ile Pro Glu Thr Leu Pro Leu Leu Asn 180 185 190 <210> 109 <211> 1614 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1614) <223> Ceres CDNA ID no. 36533702 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1614) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04012 <220> <221> CDS <222> (14)..(1523) <223> Referenced by SEQ ID NO: 110 <400> 109 aaacactttc atacatgagc aatattcaag aaatggagat gatattgatg gtctctttgt 60 gcttaacgac cctcattacc cttttcttgc ttaaacaatt cctcaaacga accgccaaca 120 aagtgaactt accaccatct ccatggaggc ttccgttgat tggtaacctc caccagctta 180 gcctccaccc tcaccgttcc ctccattccc taagccttcg gtacggacca ctcatgctcc 240 ttcattttgg ccgtgtcccc atactcgtag tatcctccgg ggaagcagct caagaggtat 300 tgaaaacaca cgatcttaag tttgccaacc gcccgagatc aaaagccgtt catgggctta 360 tgaatggggg gcgtgatgtg gtgtttggtc cctatggaga atattggaga cagatgaaga 420 gtgtatgcat tctcaatctg ctcacgaaca aaatggttgc gtcctttgag aagataagag 480 aagaagagct aaatgaaatg atcaagaagc tggagaaagc aagttcttct tcttcgtcag 540 aaaatctgag cgaactcttt gttactctcc caagcgatgt tacgagtaga attgccttgg 600 gaagaaaaca tagtgaggac gaaaccgcaa gggatctcaa gaagcgagtg aggcagatca 660 tggagctttt aggcgagttc ccaatcgggg actatgtccc ggctttggca tggatagaca 720 ggatcaacgg tttcaatgct agaataaagg aagtaagtca agggtttagc gatcttatgg 780 acaaagtggt gcaagaacat ttagaggcag gtaatcataa agaggacttt gtcgatatac 840 tgttatcaat cgaaagcgag aagagtattg gattccaagc tcaaagagac gacatcaaat 900 tcatgatatt ggatatgttt ataggaggga cgtcaacaag ttcaactcta ctagaatgga 960 taatgacgga gctgatcaga aatccaaatg ttatgaagaa actccaagac gagattcggt 1020 caaccattag gccacatggt tcatacataa aagaaaaaga tgttgaaaat atgaaatact 1080 tgaaagccgt gattaaagag gtgtttcggg tgcatcctcc tcttccacta atacttccca 1140 gattattaag tgaagatgtc aaagtaaagg gatataacat agccgcagga accgaggtga 1200 taatcaatgc ttgggccatc caaagagacc ccgcgatatg gggaccggat gcagaagaat 1260 tcaaaccaga aagacattta gattcaactt tggattatca tggaaaagat ttaaacttca 1320 tcccattcgg atcagggaga aggatttgtc cagggataaa tcttgctttg ggtttggtag 1380 aggtgacagt ggccaacctt gtaggccgat ttgactggag ggccgaggct ggaccaaatg 1440 gggatcaacc tgatctaact gaagcttttg gtctcgatgt ttgccgaaag ttccctctca 1500 ttgcatttcc atcttccgtt atttaaaatg tttctctttt tatcttttac cttgttatgc 1560 acttaattaa taagaagcat tgtaagatat aataaaatcc ttcattttag aaaa 1614 <210> 110 <211> 503 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(503) <223> Ceres CDNA ID no. 36533702 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(503) <223> Also Known As Ceres ME LINE ME04012 <220> <221> misc_feature <222> (40)..(498) <223> Pfam Name: p450; Pfam Description: Cytochrome P450 <220> <221> misc_feature <222> <223> Phenotype: Dark Green Useful for increasing chlorophyll and photosynthetic capacity <400> 110 Met Ser Asn Ile Gln Glu Met Glu Met Ile Leu Met Val Ser Leu Cys 1 5 10 15 Leu Thr Thr Leu Ile Thr Leu Phe Leu Leu Lys Gln Phe Leu Lys Arg 20 25 30 Thr Ala Asn Lys Val Asn Leu Pro Pro Ser Pro Trp Arg Leu Pro Leu 35 40 45 Ile Gly Asn Leu His Gln Leu Ser Leu His Pro His Arg Ser Leu His 50 55 60 Ser Leu Ser Leu Arg Tyr Gly Pro Leu Met Leu Leu His Phe Gly Arg 65 70 75 80 Val Pro Ile Leu Val Val Ser Ser Gly Glu Ala Ala Gln Glu Val Leu 85 90 95 Lys Thr His Asp Leu Lys Phe Ala Asn Arg Pro Arg Ser Lys Ala Val 100 105 110 His Gly Leu Met Asn Gly Gly Arg Asp Val Val Phe Gly Pro Tyr Gly 115 120 125 Glu Tyr Trp Arg Gln Met Lys Ser Val Cys Ile Leu Asn Leu Leu Thr 130 135 140 Asn Lys Met Val Ala Ser Phe Glu Lys Ile Arg Glu Glu Glu Leu Asn 145 150 155 160 Glu Met Ile Lys Lys Leu Glu Lys Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu 165 170 175 Asn Leu Ser Glu Leu Phe Val Thr Leu Pro Ser Asp Val Thr Ser Arg 180 185 190 Ile Ala Leu Gly Arg Lys His Ser Glu Asp Glu Thr Ala Arg Asp Leu 195 200 205 Lys Lys Arg Val Arg Gln Ile Met Glu Leu Leu Gly Glu Phe Pro Ile 210 215 220 Gly Asp Tyr Val Pro Ala Leu Ala Trp Ile Asp Arg Ile Asn Gly Phe 225 230 235 240 Asn Ala Arg Ile Lys Glu Val Ser Gln Gly Phe Ser Asp Leu Met Asp 245 250 255 Lys Val Val Gln Glu His Leu Glu Ala Gly Asn His Lys Glu Asp Phe 260 265 270 Val Asp Ile Leu Leu Ser Ile Glu Ser Glu Lys Ser Ile Gly Phe Gln 275 280 285 Ala Gln Arg Asp Asp Ile Lys Phe Met Ile Leu Asp Met Phe Ile Gly 290 295 300 Gly Thr Ser Thr Ser Ser Thr Leu Leu Glu Trp Ile Met Thr Glu Leu 305 310 315 320 Ile Arg Asn Pro Asn Val Met Lys Lys Leu Gln Asp Glu Ile Arg Ser 325 330 335 Thr Ile Arg Pro His Gly Ser Tyr Ile Lys Glu Lys Asp Val Glu Asn 340 345 350 Met Lys Tyr Leu Lys Ala Val Ile Lys Glu Val Phe Arg Val His Pro 355 360 365 Pro Leu Pro Leu Ile Leu Pro Arg Leu Leu Ser Glu Asp Val Lys Val 370 375 380 Lys Gly Tyr Asn Ile Ala Ala Gly Thr Glu Val Ile Ile Asn Ala Trp 385 390 395 400 Ala Ile Gln Arg Asp Pro Ala Ile Trp Gly Pro Asp Ala Glu Glu Phe 405 410 415 Lys Pro Glu Arg His Leu Asp Ser Thr Leu Asp Tyr His Gly Lys Asp 420 425 430 Leu Asn Phe Ile Pro Phe Gly Ser Gly Arg Arg Ile Cys Pro Gly Ile 435 440 445 Asn Leu Ala Leu Gly Leu Val Glu Val Thr Val Ala Asn Leu Val Gly 450 455 460 Arg Phe Asp Trp Arg Ala Glu Ala Gly Pro Asn Gly Asp Gln Pro Asp 465 470 475 480 Leu Thr Glu Ala Phe Gly Leu Asp Val Cys Arg Lys Phe Pro Leu Ile 485 490 495 Ala Phe Pro Ser Ser Val Ile <210> 111 <211> 503 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(503) <223> Public GI no. 42569483 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(503) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 1.49E-242 and percent identity of 89.4 <400> 111 Met Ser Asn Ile Gln Glu Met Glu Met Ile Leu Ser Ile Ser Leu Cys 1 5 10 15 Leu Thr Thr Leu Ile Thr Leu Leu Leu Leu Arg Arg Phe Leu Lys Arg 20 25 30 Thr Ala Thr Lys Val Asn Leu Pro Pro Ser Pro Trp Arg Leu Pro Val 35 40 45 Ile Gly Asn Leu His Gln Leu Ser Leu His Pro His Arg Ser Leu Arg 50 55 60 Ser Leu Ser Leu Arg Tyr Gly Pro Leu Met Leu Leu His Phe Gly Arg 65 70 75 80 Val Pro Ile Leu Val Val Ser Ser Gly Glu Ala Ala Gln Glu Val Leu 85 90 95 Lys Thr His Asp His Lys Phe Ala Asn Arg Pro Arg Ser Lys Ala Val 100 105 110 His Gly Leu Met Asn Gly Gly Arg Asp Val Val Phe Ala Pro Tyr Gly 115 120 125 Glu Tyr Trp Arg Gln Met Lys Ser Val Cys Ile Leu Asn Leu Leu Thr 130 135 140 Asn Lys Met Val Glu Ser Phe Glu Lys Val Arg Glu Asp Glu Val Asn 145 150 155 160 Ala Met Ile Glu Lys Leu Glu Lys Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu 165 170 175 Asn Leu Ser Glu Leu Phe Ile Thr Leu Pro Ser Asp Val Thr Ser Arg 180 185 190 Val Ala Leu Gly Arg Lys His Ser Glu Asp Glu Thr Ala Arg Asp Leu 195 200 205 Lys Lys Arg Val Arg Gln Ile Met Glu Leu Leu Gly Glu Phe Pro Ile 210 215 220 Gly Glu Tyr Val Pro Ile Leu Ala Trp Ile Asp Gly Ile Arg Gly Phe 225 230 235 240 Asn Asn Lys Ile Lys Glu Val Ser Arg Gly Phe Ser Asp Leu Met Asp 245 250 255 Lys Val Val Gln Glu His Leu Glu Ala Ser Asn Asp Lys Ala Asp Phe 260 265 270 Val Asp Ile Leu Leu Ser Ile Glu Lys Asp Lys Asn Ser Gly Phe Gln 275 280 285 Val Gln Arg Asn Asp Ile Lys Phe Met Ile Leu Asp Met Phe Ile Gly 290 295 300 Gly Thr Ser Thr Thr Ser Thr Leu Leu Glu Trp Thr Met Thr Glu Leu 305 310 315 320 Ile Arg Ser Pro Lys Ser Met Lys Lys Leu Gln Asp Glu Ile Arg Ser 325 330 335 Thr Ile Arg Pro His Gly Ser Tyr Ile Lys Glu Lys Glu Val Glu Asn 340 345 350 Met Lys Tyr Leu Lys Ala Val Ile Lys Glu Val Leu Arg Leu His Pro 355 360 365 Ser Leu Pro Met Ile Leu Pro Arg Leu Leu Ser Glu Asp Val Lys Val 370 375 380 Lys Gly Tyr Asn Ile Ala Ala Gly Thr Glu Val Ile Ile Asn Ala Trp 385 390 395 400 Ala Ile Gln Arg Asp Thr Ala Ile Trp Gly Pro Asp Ala Glu Glu Phe 405 410 415 Lys Pro Glu Arg His Leu Asp Ser Gly Leu Asp Tyr His Gly Lys Asn 420 425 430 Leu Asn Tyr Ile Pro Phe Gly Ser Gly Arg Arg Ile Cys Pro Gly Ile 435 440 445 Asn Leu Ala Leu Gly Leu Ala Glu Val Thr Val Ala Asn Leu Val Gly 450 455 460 Arg Phe Asp Trp Arg Val Glu Ala Gly Pro Asn Gly Asp Gln Pro Asp 465 470 475 480 Leu Thr Glu Ala Ile Gly Ile Asp Val Cys Arg Lys Phe Pro Leu Ile 485 490 495 Ala Phe Pro Ser Ser Val Val 500 <210> 112 <211> 497 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(497) <223> Public GI no. 2880054 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(497) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 1.69E-239 and percent identity of 89.3 <400> 112 Met Glu Met Ile Leu Ser Ile Ser Leu Cys Leu Thr Thr Leu Ile Thr 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Arg Arg Phe Leu Lys Arg Thr Ala Thr Lys Val Asn 20 25 30 Leu Pro Pro Ser Pro Trp Arg Leu Pro Val Ile Gly Asn Leu His Gln 35 40 45 Leu Ser Leu His Pro His Arg Ser Leu Arg Ser Leu Ser Leu Arg Tyr 50 55 60 Gly Pro Leu Met Leu Leu His Phe Gly Arg Val Pro Ile Leu Val Val 65 70 75 80 Ser Ser Gly Glu Ala Ala Gln Glu Val Leu Lys Thr His Asp His Lys 85 90 95 Phe Ala Asn Arg Pro Arg Ser Lys Ala Val His Gly Leu Met Asn Gly 100 105 110 Gly Arg Asp Val Val Phe Ala Pro Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Met 115 120 125 Lys Ser Val Cys Ile Leu Asn Leu Leu Thr Asn Lys Met Val Glu Ser 130 135 140 Phe Glu Lys Val Arg Glu Asp Glu Val Asn Ala Met Ile Glu Lys Leu 145 150 155 160 Glu Lys Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asn Leu Ser Glu Leu Phe 165 170 175 Ile Thr Leu Pro Ser Asp Val Thr Ser Arg Val Ala Leu Gly Arg Lys 180 185 190 His Ser Glu Asp Glu Thr Ala Arg Asp Leu Lys Lys Arg Val Arg Gln 195 200 205 Ile Met Glu Leu Leu Gly Glu Phe Pro Ile Gly Glu Tyr Val Pro Ile 210 215 220 Leu Ala Trp Ile Asp Gly Ile Arg Gly Phe Asn Asn Lys Ile Lys Glu 225 230 235 240 Val Ser Arg Gly Phe Ser Asp Leu Met Asp Lys Val Val Gln Glu His 245 250 255 Leu Glu Ala Ser Asn Asp Lys Ala Asp Phe Val Asp Ile Leu Leu Ser 260 265 270 Ile Glu Lys Asp Lys Asn Ser Gly Phe Gln Val Gln Arg Asn Asp Ile 275 280 285 Lys Phe Met Ile Leu Asp Met Phe Ile Gly Gly Thr Ser Thr Thr Ser 290 295 300 Thr Leu Leu Glu Trp Thr Met Thr Glu Leu Ile Arg Ser Pro Lys Ser 305 310 315 320 Met Lys Lys Leu Gln Asp Glu Ile Arg Ser Thr Ile Arg Pro His Gly 325 330 335 Ser Tyr Ile Lys Glu Lys Glu Val Glu Asn Met Lys Tyr Leu Lys Ala 340 345 350 Val Ile Lys Glu Val Leu Arg Leu His Pro Ser Leu Pro Met Ile Leu 355 360 365 Pro Arg Leu Leu Ser Glu Asp Val Lys Val Lys Gly Tyr Asn Ile Ala 370 375 380 Ala Gly Thr Glu Val Ile Ile Asn Ala Trp Ala Ile Gln Arg Asp Thr 385 390 395 400 Ala Ile Trp Gly Pro Asp Ala Glu Glu Phe Lys Pro Glu Arg His Leu 405 410 415 Asp Ser Gly Leu Asp Tyr His Gly Lys Asn Leu Asn Tyr Ile Pro Phe 420 425 430 Gly Ser Gly Arg Arg Ile Cys Pro Gly Ile Asn Leu Ala Leu Gly Leu 435 440 445 Ala Glu Val Thr Val Ala Asn Leu Val Gly Arg Phe Asp Trp Arg Val 450 455 460 Glu Ala Gly Pro Asn Gly Asp Gln Pro Asp Leu Thr Glu Ala Ile Gly 465 470 475 480 Ile Asp Val Cys Arg Lys Phe Pro Leu Ile Ala Phe Pro Ser Ser Val 485 490 495 Val <210> 113 <211> 497 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(497) <223> Public GI no. 22329490 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(497) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 1.49E-233 and percent identity of 86.6 <400> 113 Met Glu Met Thr Leu Met Val Ser Leu Cys Leu Thr Thr Leu Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Lys Lys Phe Leu Lys Arg Thr Ala Lys Lys Val Asn 20 25 30 Leu Pro Pro Ser Pro Trp Arg Ile Pro Val Ile Gly Asn Leu His Gln 35 40 45 Leu Ser Leu His Pro His Arg Ser Leu His Ser Leu Ser Leu Arg Tyr 50 55 60 Gly Pro Leu Met Leu Leu His Phe Gly Arg Val Pro Ile Leu Val Val 65 70 75 80 Ser Ser Ser Glu Ala Ala His Glu Ile Leu Lys Thr His Asp Leu Lys 85 90 95 Phe Ala Asn Arg Pro Lys Ser Lys Ala Val His Gly Leu Met Asn Gly 100 105 110 Gly Arg Asp Val Val Phe Gly Pro Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Met 115 120 125 Lys Ser Val Cys Ile Leu Asn Leu Leu Thr Asn Lys Met Val Ala Ser 130 135 140 Phe Glu Lys Val Arg Glu Glu Glu Val Asn Ala Met Met Glu Lys Leu 145 150 155 160 Glu Lys Ala Ser Cys Ser Ser Ser Ala Glu Asn Leu Ser Glu Leu Phe 165 170 175 Val Thr Leu Thr Ser Asp Val Thr Ser Arg Val Ser Leu Gly Lys Lys 180 185 190 Tyr Trp Glu Asp Glu Thr Ala Gly Gly Leu Lys Lys Arg Val Arg Gln 195 200 205 Ile Met Glu Leu Leu Arg Glu Phe Pro Ile Gly Asp Tyr Val Pro Ala 210 215 220 Leu Ala Trp Ile Asp Arg Ile Asn Gly Phe Asn Ser Lys Ile Val Glu 225 230 235 240 Val Ser Arg Ala Tyr Ser Asp Leu Met Glu Lys Val Val Gln Glu His 245 250 255 Leu Glu Ala Gly Glu His Lys Ala Asp Phe Val Asn Ile Leu Leu Ser 260 265 270 Ile Glu Lys Glu Lys Asn Asn Gly Phe Lys Val Gln Arg Asn Asp Ile 275 280 285 Lys Phe Met Ile Leu Asp Met Phe Ile Gly Gly Ile Ser Thr Ser Ser 290 295 300 Thr Leu Leu Glu Trp Ile Met Thr Glu Leu Ile Arg Asn Pro Glu Cys 305 310 315 320 Met Lys Lys Leu Gln Asn Glu Ile Arg Ser Thr Ile Arg Pro His Gly 325 330 335 Ser Tyr Ile Lys Glu Lys Glu Val Glu Asn Met Arg Tyr Leu Lys Ala 340 345 350 Val Ile Lys Glu Val Phe Arg Val His Pro Pro Leu Pro Leu Ile Leu 355 360 365 Pro Arg Leu Leu Thr Glu Asp Val Lys Val Lys Gly Tyr Asp Ile Ala 370 375 380 Ala Gly Thr Glu Val Leu Ile Asn Ala Trp Ser Ile His Arg Asp Pro 385 390 395 400 Ala Ile Trp Gly Pro Asp Ala Glu Glu Phe Lys Pro Glu Arg His Leu 405 410 415 Asp Ser Thr Leu Asp Tyr His Gly Gln Asp Leu Lys Tyr Ile Pro Phe 420 425 430 Gly Ser Gly Arg Arg Ile Cys Pro Gly Ile Asn Leu Ala Met Gly Leu 435 440 445 Val Glu Val Thr Leu Ala Asn Leu Val Gly Arg Phe Asp Trp Ser Val 450 455 460 Asp Pro Gly Pro Asn Gly Asp Gln Pro Asp Leu Ala Glu Asp Phe Gly 465 470 475 480 Leu Asp Val Cys Arg Lys Asn Pro Leu Ile Ala Phe Pro Ser Ser Val 485 490 495 Ala <210> 114 <211> 477 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(477) <223> Public GI no. 4835796 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(477) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 9.10E-218 and percent identity of 86.1 <400> 114 Met Glu Met Thr Leu Met Val Ser Leu Cys Leu Thr Thr Leu Leu Thr 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Lys Lys Phe Leu Lys Arg Thr Ala Lys Lys Val Asn 20 25 30 Leu Pro Pro Ser Pro Trp Arg Ile Pro Val Ile Gly Asn Leu His Gln 35 40 45 Leu Ser Leu His Pro His Arg Ser Leu His Ser Leu Ser Leu Ser Glu 50 55 60 Ala Ala His Glu Ile Leu Lys Thr His Asp Leu Lys Phe Ala Asn Arg 65 70 75 80 Pro Lys Ser Lys Ala Val His Gly Leu Met Asn Gly Gly Arg Asp Val 85 90 95 Val Phe Gly Pro Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Met Lys Ser Val Cys 100 105 110 Ile Leu Asn Leu Leu Thr Asn Lys Met Val Ala Ser Phe Glu Lys Val 115 120 125 Arg Glu Glu Glu Val Asn Ala Met Met Glu Lys Leu Glu Lys Ala Ser 130 135 140 Cys Ser Ser Ser Ala Glu Asn Leu Ser Glu Leu Phe Val Thr Leu Thr 145 150 155 160 Ser Asp Val Thr Ser Arg Val Ser Leu Gly Lys Lys Tyr Trp Glu Asp 165 170 175 Glu Thr Ala Gly Gly Leu Lys Lys Arg Val Arg Gln Ile Met Glu Leu 180 185 190 Leu Arg Glu Phe Pro Ile Gly Asp Tyr Val Pro Ala Leu Ala Trp Ile 195 200 205 Asp Arg Ile Asn Gly Phe Asn Ser Lys Ile Val Glu Val Ser Arg Ala 210 215 220 Tyr Ser Asp Leu Met Glu Lys Val Val Gln Glu His Leu Glu Ala Gly 225 230 235 240 Glu His Lys Ala Asp Phe Val Asn Ile Leu Leu Ser Ile Glu Lys Glu 245 250 255 Lys Asn Asn Gly Phe Lys Val Gln Arg Asn Asp Ile Lys Phe Met Ile 260 265 270 Leu Asp Met Phe Ile Gly Gly Ile Ser Thr Ser Ser Thr Leu Leu Glu 275 280 285 Trp Ile Met Thr Glu Leu Ile Arg Asn Pro Glu Cys Met Lys Lys Leu 290 295 300 Gln Asn Glu Ile Arg Ser Thr Ile Arg Pro His Gly Ser Tyr Ile Lys 305 310 315 320 Glu Lys Glu Val Glu Asn Met Arg Tyr Leu Lys Ala Val Ile Lys Glu 325 330 335 Val Phe Arg Val His Pro Pro Leu Pro Leu Ile Leu Pro Arg Leu Leu 340 345 350 Thr Glu Asp Val Lys Val Lys Gly Tyr Asp Ile Ala Ala Gly Thr Glu 355 360 365 Val Leu Ile Asn Ala Trp Ser Ile His Arg Asp Pro Ala Ile Trp Gly 370 375 380 Pro Asp Ala Glu Glu Phe Lys Pro Glu Arg His Leu Asp Ser Thr Leu 385 390 395 400 Asp Tyr His Gly Gln Asp Leu Lys Tyr Ile Pro Phe Gly Ser Gly Arg 405 410 415 Arg Ile Cys Pro Gly Ile Asn Leu Ala Met Gly Leu Val Glu Val Thr 420 425 430 Leu Ala Asn Leu Val Gly Arg Phe Asp Trp Ser Val Asp Pro Gly Pro 435 440 445 Asn Gly Asp Gln Pro Asp Leu Ala Glu Asp Phe Gly Leu Asp Val Cys 450 455 460 Arg Lys Asn Pro Leu Ile Ala Phe Pro Ser Ser Val Ala 465 470 475 <210> 115 <211> 509 <212> PRT <213> Nepeta racemosa <220> <221> misc_feature <222> (1)..(509) <223> Public GI no. 3582021 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(509) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 3.60E-113 and percent identity of 46.3 <400> 115 Met Val Ser Leu Ser Tyr Phe Leu Ile Ala Leu Leu Cys Thr Leu Pro 1 5 10 15 Phe Leu Leu Phe Leu Asn Lys Trp Arg Arg Ser Tyr Ser Gly Lys Thr 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Pro Pro Lys Leu Pro Val Ile Gly Asn Leu His Gln 35 40 45 Leu Gly Leu Tyr Pro His Arg Tyr Leu Gln Ser Leu Ser Arg Arg Tyr 50 55 60 Gly Pro Leu Met Gln Leu His Phe Gly Ser Val Pro Val Leu Val Ala 65 70 75 80 Ser Ser Pro Glu Ala Ala Arg Glu Ile Met Lys Asn Gln Asp Ile Val 85 90 95 Phe Ser Asn Arg Pro Lys Met Ser Ile Ala Asn Arg Leu Phe Phe Asn 100 105 110 Asn Arg Asp Val Ala Phe Thr Gln Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Ile 115 120 125 Arg Ser Ile Cys Val Leu Gln Leu Leu Ser Asn Lys Arg Val Gln Ser 130 135 140 Phe Arg Arg Val Arg Glu Glu Glu Thr Ser Ile Met Val Glu Lys Ile 145 150 155 160 Met Gln Leu Gly Ser Ser Ser Ser Thr Pro Val Asn Leu Ser Glu Leu 165 170 175 Leu Leu Ser Leu Thr Asn Asp Val Val Cys Arg Val Thr Leu Gly Lys 180 185 190 Lys Tyr Gly Gly Gly Asn Gly Ser Glu Glu Val Asp Lys Leu Lys Glu 195 200 205 Met Leu Thr Glu Ile Gln Asn Leu Met Gly Ile Ser Pro Val Trp Glu 210 215 220 Phe Ile Pro Trp Leu Asn Trp Thr Arg Arg Phe Asp Gly Val Asp Gln 225 230 235 240 Arg Val Asp Arg Ile Val Lys Ala Phe Asp Gly Phe Leu Glu Ser Val 245 250 255 Ile Gln Glu His Lys Glu Arg Asp Gly Asp Lys Asp Gly Asp Gly Asp 260 265 270 Gly Ala Leu Asp Phe Val Asp Ile Leu Leu Gln Phe Gln Arg Glu Asn 275 280 285 Lys Asn Arg Ser Pro Val Glu Asp Asp Thr Val Lys Ala Leu Ile Leu 290 295 300 Asp Met Phe Val Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Thr Ala Leu Glu Trp 305 310 315 320 Ala Val Ala Glu Leu Ile Lys Asn Pro Arg Ala Met Lys Arg Leu Gln 325 330 335 Asn Glu Val Arg Glu Val Ala Gly Ser Lys Ala Glu Ile Glu Glu Glu 340 345 350 Asp Leu Glu Lys Met Pro Tyr Leu Lys Ala Ser Ile Lys Glu Ser Leu 355 360 365 Arg Leu His Val Pro Val Val Leu Leu Val Pro Arg Glu Ser Thr Arg 370 375 380 Asp Thr Asn Val Leu Gly Tyr Asp Ile Ala Ser Gly Thr Arg Val Leu 385 390 395 400 Ile Asn Ala Trp Ala Ile Ala Arg Asp Pro Ser Val Trp Glu Asn Pro 405 410 415 Glu Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe Leu Asp Ser Ser Ile Asp Tyr Lys 420 425 430 Gly Leu His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Gly Cys 435 440 445 Pro Gly Ala Thr Phe Ala Val Ala Ile Asp Glu Leu Ala Leu Ala Lys 450 455 460 Leu Val His Lys Phe Asp Phe Gly Leu Pro Asn Gly Ala Arg Met Glu 465 470 475 480 Glu Leu Asp Met Ser Glu Thr Ser Gly Met Thr Val His Lys Lys Ser 485 490 495 Pro Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro His His Ala Ala Pro 500 505 <210> 116 <211> 494 <212> PRT <213> Ammi majus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(494) <223> Public GI no. 46947673 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(494) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 1.10E-102 and percent identity of 46.0 <400> 116 Met Lys Met Leu Glu Gln Asn Pro Gln Tyr Leu Tyr Phe Phe Ser Leu 1 5 10 15 Phe Leu Val Thr Ile Phe Leu Tyr Lys Trp Leu Thr Leu Lys Lys Thr 20 25 30 Pro Leu Lys Asn Leu Pro Pro Ser Pro Pro Gln Tyr Pro Ile Ile Gly 35 40 45 Asn Leu His Gln Ile Gly Pro Asp Pro Gln Ala Ser Leu Arg Asp Leu 50 55 60 Ala Gln Lys Tyr Gly Pro Leu Met Phe Leu Lys Phe Gly Thr Val Pro 65 70 75 80 Val Leu Val Val Ser Ser Ala Asp Ala Ala Arg Glu Ala Leu Lys Thr 85 90 95 His Asp Leu Val Phe Ala Asp Arg Pro Tyr Ser Ser Val Ala Asn Lys 100 105 110 Ile Phe Tyr Asn Gly Lys Asp Met Val Phe Ala Arg Tyr Thr Glu Tyr 115 120 125 Trp Arg Gln Val Lys Ser Ile Cys Val Thr Gln Leu Leu Ser Asn Lys 130 135 140 Arg Val Asn Ser Phe His Tyr Val Arg Glu Glu Glu Val Asp Leu Leu 145 150 155 160 Val Gln Asn Leu Glu Asn Ser His Ser Lys Val Ala Asn Leu Thr Glu 165 170 175 Leu Leu Ile Glu Val Thr Gly Asn Val Val Cys Arg Val Ser Val Gly 180 185 190 Ser Gly Asp Lys Val Asp Ser Tyr Lys Ile Leu Ile Leu Glu Ile Met 195 200 205 Asp Met Leu Gly Tyr Ser Arg Ser Ile Glu Asp Phe Phe Pro Leu Leu 210 215 220 Gly Trp Val Asp Trp Leu Thr Gly Leu Arg Gly Lys Val Ala Glu Ala 225 230 235 240 Ala Lys Gly Val Asp Thr Phe Leu Glu Gly Val Leu Lys Glu His Leu 245 250 255 Ser Thr Thr Gly Ser Lys Tyr Asn Asp Phe Val Ser Ile Leu Leu Glu 260 265 270 Ile Gln Glu Ala Asp Ala Gly Ser Ser Met Asp Asn Glu Cys Ile Lys 275 280 285 Ser Leu Ile Trp Asp Met Leu Gly Ala Gly Thr Glu Thr Ile Ser Thr 290 295 300 Ala Leu Glu Trp Thr Leu Ala Ala Leu Ile Lys Asn Pro Asp Ala Met 305 310 315 320 Phe Lys Leu Gln Asn Glu Val Arg Glu Ile Gly Lys Gly Lys Ser Lys 325 330 335 Ile Ser Glu Ala Asp Leu Val Lys Met Asn Tyr Leu Gln Ala Val Met 340 345 350 Lys Glu Ser Met Arg Leu Tyr Phe Thr Ala Pro Leu Leu Val Pro Arg 355 360 365 Glu Ala Arg Gln Asp Ile Lys Phe Met Gly Tyr Asp Ile Ser Ser Gly 370 375 380 Thr Gln Val Leu Ile Asn Ala Trp Ala Ile Ala Arg Asp Pro Leu Leu 385 390 395 400 Trp Asp Lys Pro Glu Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu Asn Ser Pro 405 410 415 Ile Asp Tyr Lys Gly Phe His Tyr Glu Phe Leu Pro Phe Gly Ala Gly 420 425 430 Arg Arg Gly Cys Pro Gly Ile Gln Phe Ala Met Cys Ile Asn Glu Leu 435 440 445 Val Val Ala Asn Leu Val His Lys Phe Asn Phe Glu Leu Pro Asp Gly 450 455 460 Lys Arg Leu Glu Asp Leu Asp Met Thr Ala Ala Ser Gly Ile Thr Leu 465 470 475 480 Arg Lys Lys Ser Pro Leu Leu Val Val Ala Arg Pro His Val 485 490 <210> 117 <211> 471 <212> PRT <213> Persea americana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(471) <223> Public GI no. 117188 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(471) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 3.09E-107 and percent identity of 45.9 <400> 117 Met Ala Ile Leu Val Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ile Ala Leu Thr Phe 1 5 10 15 Phe Leu Leu Lys Leu Asn Glu Lys Arg Glu Lys Lys Pro Asn Leu Pro 20 25 30 Pro Ser Pro Pro Asn Leu Pro Ile Ile Gly Asn Leu His Gln Leu Gly 35 40 45 Asn Leu Pro His Arg Ser Leu Arg Ser Leu Ala Asn Glu Leu Gly Pro 50 55 60 Leu Ile Leu Leu His Leu Gly His Ile Pro Thr Leu Ile Val Ser Thr 65 70 75 80 Ala Glu Ile Ala Glu Glu Ile Leu Lys Thr His Asp Leu Ile Phe Ala 85 90 95 Ser Arg Pro Ser Thr Thr Ala Ala Arg Arg Ile Phe Tyr Asp Cys Thr 100 105 110 Asp Val Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Val Arg Lys 115 120 125 Ile Cys Val Leu Glu Leu Leu Ser Ile Lys Arg Val Asn Ser Tyr Arg 130 135 140 Ser Ile Arg Glu Glu Glu Val Gly Leu Met Met Glu Arg Ile Ser Gln 145 150 155 160 Ser Cys Ser Thr Gly Glu Ala Val Asn Leu Ser Glu Leu Leu Leu Leu 165 170 175 Leu Ser Ser Gly Thr Ile Thr Arg Val Ala Phe Gly Lys Lys Tyr Glu 180 185 190 Gly Glu Glu Glu Arg Lys Asn Lys Phe Ala Asp Leu Ala Thr Glu Leu 195 200 205 Thr Thr Leu Met Gly Ala Phe Phe Val Gly Asp Tyr Phe Pro Ser Phe 210 215 220 Ala Trp Val Asp Val Leu Thr Gly Met Asp Ala Arg Leu Lys Arg Asn 225 230 235 240 His Gly Glu Leu Asp Ala Phe Val Asp His Val Ile Asp Asp His Leu 245 250 255 Leu Ser Arg Lys Ala Asn Gly Ser Asp Gly Val Glu Gln Lys Asp Leu 260 265 270 Val Asp Val Leu Leu His Leu Gln Lys Asp Ser Ser Leu Gly Val His 275 280 285 Leu Asn Arg Asn Asn Leu Lys Ala Val Ile Leu Asp Met Phe Ser Gly 290 295 300 Gly Thr Asp Thr Thr Ala Val Thr Leu Glu Trp Ala Met Ala Glu Leu 305 310 315 320 Ile Lys His Pro Asp Val Met Glu Lys Ala Gln Gln Glu Val Arg Arg 325 330 335 Val Val Gly Lys Lys Ala Lys Val Glu Glu Glu Asp Leu His Gln Leu 340 345 350 His Tyr Leu Lys Leu Ile Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu His Pro Val 355 360 365 Ala Pro Leu Leu Val Pro Arg Glu Ser Thr Arg Asp Val Val Ile Arg 370 375 380 Gly Tyr His Ile Pro Ala Lys Thr Arg Val Phe Ile Asn Ala Trp Ala 385 390 395 400 Ile Gly Arg Asp Pro Lys Ser Trp Glu Asn Ala Glu Glu Phe Leu Pro 405 410 415 Glu Arg Phe Val Asn Asn Ser Val Asp Phe Lys Gly Gln Asp Phe Gln 420 425 430 Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Ile Ala Phe 435 440 445 Gly Ile Ser Ser Val Glu Ile Ser Leu Ala Asn Leu Leu Tyr Trp Phe 450 455 460 Asn Trp Glu Leu Pro Gly Ile 465 470 <210> 118 <211> 529 <212> PRT <213> Oryza sativa subsp. japonica <220> <221> misc_feature <222> (1)..(529) <223> Public GI no. 34904242 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(529) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 2.70E-99 and percent identity of 45.5 <400> 118 Met Ala Val Ser Leu Val Val Val Val Val Val Val Ile Ala Ile Val 1 5 10 15 Val Pro Leu Leu Tyr Leu Val Leu Leu Pro Ala Trp Lys Pro Ala Arg 20 25 30 Arg Asp Asp Gly Asp Gly Gly Met Arg Arg Arg Leu Pro Pro Ser Pro 35 40 45 Pro Trp Gly Leu Pro Leu Leu Gly His Leu His Leu Leu Gly Ala Leu 50 55 60 Pro His Arg Ala Leu Arg Ser Leu Ala Ala Ala His Gly Pro Val Leu 65 70 75 80 Leu Leu Arg Leu Gly Arg Val Pro Val Val Val Val Ser Ser Ala Ala 85 90 95 Ala Ala Glu Glu Val Met Arg Thr Arg Asp Leu Glu Phe Ala Ser Arg 100 105 110 Pro Arg Val Ala Met Ala Glu Arg Leu Leu Tyr Gly Gly Arg Asp Val 115 120 125 Ala Phe Ala Pro Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Thr Arg Arg Ile Cys 130 135 140 Val Val His Leu Leu Ser Ala Arg Arg Val Leu Ser Phe Arg Arg Val 145 150 155 160 Arg Glu Glu Glu Ala Ala Ala Leu Val Ala Arg Val Arg Ala Ala Gly 165 170 175 Gly Ala Val Asp Leu Val Glu His Leu Thr Ala Tyr Ser Asn Thr Val 180 185 190 Val Ser Arg Ala Val Phe Gly Asp Glu Ser Ala Arg Gly Leu Tyr Gly 195 200 205 Asp Val Asp Arg Gly Arg Val Leu Arg Lys Leu Phe Asp Asp Phe Val 210 215 220 Glu Leu Leu Gly Gln Glu Pro Met Gly Glu Leu Leu Pro Trp Leu Gly 225 230 235 240 Trp Val Asp Ala Leu Asn Gly Met Glu Val Lys Val Gln Arg Thr Phe 245 250 255 Glu Ala Leu Asp Gly Ile Leu Glu Lys Val Ile Asp Asp His Arg Arg 260 265 270 Arg Arg Arg Glu Val Gly Arg Gln Met Asp Asp Gly Gly Gly Gly Asp 275 280 285 His Arg Asp Phe Val Asp Val Leu Leu Asp Val Asn Glu Thr Asp Met 290 295 300 Asp Ala Gly Val Gln Leu Gly Thr Ile Glu Ile Lys Ala Ile Ile Leu 305 310 315 320 Asp Met Phe Ala Ala Gly Thr Asp Thr Thr Thr Thr Val Ile Glu Trp 325 330 335 Ala Met Ala Glu Leu Ile Thr His Pro Asp Ala Met Arg Asn Ala Gln 340 345 350 Asp Glu Ile Lys Ala Val Val Gly Ile Thr Ser His Ile Thr Glu Asp 355 360 365 His Leu Asp Arg Leu Pro Tyr Leu Lys Ala Val Leu Lys Glu Thr Leu 370 375 380 Arg Leu His Pro Pro Leu Pro Leu Leu Val Pro His Glu Pro Ser Ser 385 390 395 400 Asp Thr Lys Ile Leu Gly Tyr Ser Ile Pro Ala Cys Thr Arg Ile Val 405 410 415 Ile Asn Ala Trp Thr Ile Gly Arg Asp Gln Ala Thr Trp Gly Glu His 420 425 430 Ala Glu Glu Phe Ile Pro Glu Arg Phe Leu Glu Ser Gly Leu Asp Tyr 435 440 445 Ile Gly Gln Asp Phe Val Leu Val Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Gly 450 455 460 Cys Pro Gly Val Gly Phe Ala Val Gln Ala Met Glu Met Ala Leu Ala 465 470 475 480 Ser Leu Leu Tyr Asn Phe Asp Trp Glu Thr Arg Val Val Asp Arg Arg 485 490 495 Ser Glu Phe Gly Thr Ser Ser Leu Asp Met Ser Glu Met Asn Gly Leu 500 505 510 Ser Val Arg Leu Lys Tyr Gly Leu Pro Leu Ile Ala Ile Ser Arg Phe 515 520 525 Pro <210> 119 <211> 482 <212> PRT <213> Triticum aestivum <220> <221> misc_feature <222> (1)..(482) <223> Ceres CLONE ID no. 921721 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(482) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 6.10E-102 and percent identity of 45.2 <400> 119 Met Glu Gly Arg Arg His Leu Pro Pro Ser Pro Arg Gly Leu Pro Leu 1 5 10 15 Leu Gly His Leu His Leu Leu Gly Ser Leu Pro His Arg Ala Leu Arg 20 25 30 Ser Leu Ala Ala Ala His Gly Pro Val Leu Leu Leu Arg Leu Gly Arg 35 40 45 Val Pro Ala Val Val Val Ser Ser Pro Ala Ala Ala Glu Glu Val Met 50 55 60 Arg Ala Arg Asp Leu Ala Phe Ala Ser Arg Pro Arg Ser Ala Met Ala 65 70 75 80 Asp Arg Leu Leu Tyr Gly Arg Asp Val Ala Phe Ala Pro Tyr Gly Glu 85 90 95 Tyr Trp Arg Gln Ala Arg Arg Val Cys Val Val His Leu Leu Ser Pro 100 105 110 Leu Arg Ile Leu Ser Phe Arg Gly Val Arg Glu Glu Glu Ala Ala Ala 115 120 125 Leu Val Glu Arg Val Arg Gly Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Asp 130 135 140 Leu Cys Glu Leu Leu Val Ala Tyr Ala Asn Thr Val Val Ser Arg Ala 145 150 155 160 Ala Phe Gly Asp Asp Ser Ala Arg Gly Leu Tyr Glu Glu Gly Asn Lys 165 170 175 Glu Arg Glu Leu Arg Lys Val Phe Asn Asp Phe Gln Glu Leu Leu Gly 180 185 190 Thr Ala Pro Leu Gly Glu Leu Leu Pro Trp Leu Gly Trp Leu Asp Ala 195 200 205 Val Arg Gly Met Glu Gly Lys Ile Arg Arg Thr Phe Lys Ala Leu Asp 210 215 220 Gly Val Leu Glu Lys Val Ile Gly Asp His Arg Arg Arg Arg Gln Ala 225 230 235 240 Gly Gln Gln Thr Gly Asp Asp Gly Gly Asp His Arg Asp Phe Val Asp 245 250 255 Val Leu Leu Asp Val Ser Asp Thr Asp Asp Glu Ala Gly Met Arg Leu 260 265 270 Ser Thr Thr Glu Ile Lys Ala Ile Ile Leu Asp Met Phe Ala Ala Gly 275 280 285 Thr Asp Thr Thr Ser Thr Ala Met Glu Trp Ala Met Ala Glu Val Ile 290 295 300 Thr His Pro Asp Ser Met Arg Lys Leu Gln Asp Glu Leu Arg Ala Ala 305 310 315 320 Val Gly Gly Ser Gly His Val Ile Thr Glu Asp His Ile Asp Lys Leu 325 330 335 His Tyr Leu Lys Ala Val Val Lys Glu Thr Leu Arg Leu His Pro Pro 340 345 350 Ile Pro Leu Leu Val Pro Arg Glu Pro Gln Asp Asp Ala Glu Ile Leu 355 360 365 Gly His His Val Pro Ala Gly Thr Arg Val Val Ile Asn Ala Trp Ala 370 375 380 Val Gly Arg Asp Pro Ala Ala Trp Glu Arg Ala Glu Glu Phe Val Pro 385 390 395 400 Glu Arg Phe Leu Asp Gly Ala Val Asp Tyr Lys Gly Gln Asp Phe Gln 405 410 415 Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Val Gly Phe 420 425 430 Ala Ala Ala Thr Val Glu Met Ala Leu Ala Ser Leu Met Tyr His Phe 435 440 445 Asp Trp Glu Pro Ala Gly Ala Ser Leu Asp Met Arg Glu Val Asn Gly 450 455 460 Leu Ala Val His Leu Lys Ser Gly Leu Pro Leu Val Ala Lys Leu Arg 465 470 475 480 Phe Arg <210> 120 <211> 515 <212> PRT <213> Triticum aestivum <220> <221> misc_feature <222> (1)..(515) <223> Ceres CLONE ID no. 703961 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(515) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 6.10E-102 and percent identity of 45.2 <400> 120 Met Ala Val Ser Pro Leu Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Ala Phe Ala 1 5 10 15 Val Ser Leu Leu Tyr Ile Leu Arg Arg Pro Ala Pro Leu Arg Ser Gly 20 25 30 Ser Asp Gly Gly Arg Arg His Leu Pro Pro Ser Pro Arg Gly Leu Pro 35 40 45 Leu Leu Gly His Leu His Leu Leu Gly Ser Leu Pro His Arg Ala Leu 50 55 60 Arg Ser Leu Ala Ala Ala His Gly Pro Val Leu Leu Leu Arg Leu Gly 65 70 75 80 Arg Val Pro Ala Val Val Val Ser Ser Pro Ala Ala Ala Glu Glu Val 85 90 95 Met Arg Ala Arg Asp Leu Ala Phe Ala Ser Arg Pro Arg Ser Ala Met 100 105 110 Ala Asp Arg Leu Leu Tyr Gly Arg Asp Val Ala Phe Ala Pro Tyr Gly 115 120 125 Glu Tyr Trp Arg Gln Ala Arg Arg Val Cys Val Val His Leu Leu Ser 130 135 140 Pro Leu Arg Ile Leu Ser Phe Arg Gly Val Arg Glu Glu Glu Ala Ala 145 150 155 160 Ala Leu Val Glu Arg Val Arg Gly Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val 165 170 175 Asp Leu Cys Glu Leu Leu Val Ala Tyr Ala Asn Thr Val Val Ser Arg 180 185 190 Ala Ala Phe Gly Asp Asp Ser Ala Arg Gly Leu Tyr Glu Glu Gly Asn 195 200 205 Lys Glu Arg Glu Leu Arg Lys Val Phe Asn Asp Phe Gln Glu Leu Leu 210 215 220 Gly Thr Ala Pro Leu Gly Glu Leu Leu Pro Trp Leu Gly Trp Leu Asp 225 230 235 240 Ala Val Arg Gly Met Glu Gly Lys Ile Arg Arg Thr Phe Lys Ala Leu 245 250 255 Asp Gly Val Leu Glu Lys Val Ile Gly Asp His Arg Arg Arg Arg Gln 260 265 270 Ala Gly Gln Gln Thr Gly Asp Asp Gly Gly Asp His Arg Asp Phe Val 275 280 285 Asp Val Leu Leu Asp Val Ser Asp Thr Asp Asp Glu Ala Gly Met Arg 290 295 300 Leu Ser Thr Thr Glu Ile Lys Ala Ile Ile Leu Asp Met Phe Ala Ala 305 310 315 320 Gly Thr Asp Thr Thr Ser Thr Ala Met Glu Trp Ala Met Ala Glu Val 325 330 335 Ile Thr His Pro Asp Ser Met Arg Lys Leu Gln Asp Glu Leu Arg Ala 340 345 350 Ala Val Gly Gly Ser Gly His Val Ile Thr Glu Asp His Ile Asp Lys 355 360 365 Leu His Tyr Leu Lys Ala Val Val Lys Glu Thr Leu Arg Leu His Pro 370 375 380 Pro Ile Pro Leu Leu Val Pro Arg Glu Pro Gln Asp Asp Ala Glu Ile 385 390 395 400 Leu Gly His His Val Pro Ala Gly Thr Arg Val Val Ile Asn Ala Trp 405 410 415 Ala Val Gly Arg Asp Pro Ala Ala Trp Glu Arg Ala Glu Glu Phe Val 420 425 430 Pro Glu Arg Phe Leu Asp Gly Ala Val Asp Tyr Lys Gly Gln Asp Phe 435 440 445 Gln Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Val Gly 450 455 460 Phe Ala Ala Ala Thr Val Glu Met Ala Leu Ala Ser Leu Met Tyr His 465 470 475 480 Phe Asp Trp Glu Pro Ala Gly Ala Ser Leu Asp Met Arg Glu Val Asn 485 490 495 Gly Leu Ala Val His Leu Lys Ser Gly Leu Pro Leu Val Ala Lys Leu 500 505 510 Arg Phe Arg 515 <210> 121 <211> 502 <212> PRT <213> Persea americana <220> <221> misc_feature <222> (1)..(502) <223> Public GI no. 25282608 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(502) <223> Functional Homolog of Ceres CDNA ID no. 36533702 at SEQ ID NO. 110 with e-value of 3.69E-111 and percent identity of 45.2 <400> 121 Met Ala Ile Leu Val Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ile Ala Leu Thr Phe 1 5 10 15 Phe Leu Leu Lys Leu Asn Glu Lys Arg Glu Lys Lys Pro Asn Leu Pro 20 25 30 Pro Ser Pro Pro Asn Leu Pro Ile Ile Gly Asn Leu His Gln Leu Gly 35 40 45 Asn Leu Pro His Arg Ser Leu Arg Ser Leu Ala Asn Glu Leu Gly Pro 50 55 60 Leu Ile Leu Leu His Leu Gly His Ile Pro Thr Leu Ile Val Ser Thr 65 70 75 80 Ala Glu Ile Ala Glu Glu Ile Leu Lys Thr His Asp Leu Ile Phe Ala 85 90 95 Ser Arg Pro Ser Thr Thr Ala Ala Arg Arg Ile Phe Tyr Asp Cys Thr 100 105 110 Asp Val Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Glu Tyr Trp Arg Gln Val Arg Lys 115 120 125 Ile Cys Val Leu Glu Leu Leu Ser Ile Lys Arg Val Asn Ser Tyr Arg 130 135 140 Ser Ile Arg Glu Glu Glu Val Gly Leu Met Met Glu Arg Ile Ser Gln 145 150 155 160 Ser Cys Ser Thr Gly Glu Ala Val Asn Leu Ser Glu Leu Leu Leu Leu 165 170 175 Leu Ser Ser Gly Thr Ile Thr Arg Val Ala Phe Gly Lys Lys Tyr Glu 180 185 190 Gly Glu Glu Glu Arg Lys Asn Lys Phe Ala Asp Leu Ala Thr Glu Leu 195 200 205 Thr Thr Leu Met Gly Ala Phe Phe Val Gly Asp Tyr Phe Pro Ser Phe 210 215 220 Ala Trp Val Asp Val Leu Thr Gly Met Asp Ala Arg Leu Lys Arg Asn 225 230 235 240 His Gly Glu Leu Asp Ala Phe Val Asp His Val Ile Asp Asp His Leu 245 250 255 Leu Ser Arg Lys Ala Asn Gly Ser Asp Gly Val Glu Gln Lys Asp Leu 260 265 270 Val Asp Val Leu Leu His Leu Gln Lys Asp Ser Ser Leu Gly Val His 275 280 285 Leu Asn Arg Asn Asn Leu Lys Ala Val Ile Leu Asp Met Phe Ser Gly 290 295 300 Gly Thr Asp Thr Thr Ala Val Thr Leu Glu Trp Ala Met Ala Glu Leu 305 310 315 320 Ile Lys His Pro Asp Val Met Glu Lys Ala Gln Gln Glu Val Arg Arg 325 330 335 Val Val Gly Lys Lys Ala Lys Val Glu Glu Glu Asp Leu His Gln Leu 340 345 350 His Tyr Leu Lys Leu Ile Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu His Pro Val 355 360 365 Ala Pro Leu Leu Val Pro Arg Glu Ser Thr Arg Asp Val Val Ile Arg 370 375 380 Gly Tyr His Ile Pro Ala Lys Thr Arg Val Phe Ile Asn Ala Trp Ala 385 390 395 400 Ile Gly Arg Asp Pro Lys Ser Trp Glu Asn Ala Glu Glu Phe Leu Pro 405 410 415 Glu Arg Phe Val Asn Asn Ser Val Asp Phe Lys Gly Gln Asp Phe Gln 420 425 430 Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Ile Ala Phe 435 440 445 Gly Ile Ser Ser Val Glu Ile Ser Leu Ala Asn Leu Leu Tyr Trp Phe 450 455 460 Asn Trp Glu Leu Pro Gly Asp Leu Thr Lys Glu Asp Leu Asp Met Ser 465 470 475 480 Glu Ala Val Gly Ile Thr Val His Met Lys Phe Pro Leu Gln Leu Val 485 490 495 Ala Lys Arg His Leu Ser 500

Claims (25)

  1. (a) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319 중 어느 하나에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
    (b) (a)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 상보성인 뉴클레오티드 서열;
    (c) 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열;
    (d) 5' 에서 3' 방향으로 해독할 경우 (c)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 역순서인 뉴클레오티드 서열;
    (e) (a)의 뉴클레오티드 서열에 대하여 간섭 RNA인 뉴클레오티드 서열;
    (f) 혼성화된 핵산 듀플렉스의 용융 온도 보다 약 40℃ 내지 약 48℃ 아래의 온도에서 상기 (a) - (d) 중 어느 하나의 핵산과 혼성화된 핵산 듀플렉스를 형성할 수 있는 뉴클레오티드 서열;
    (f) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319로 확인된 아미노산 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
    (g) 도 1-5의 리드, 기능적 호몰로그 또는 공통 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.
  2. a) 식물 전사 및/또는 번역 신호를 코딩하는 조절 영역을 갖는 제 1의 핵산; 및
    제 1항의 어느 하나의 뉴클레오티드 서열에 따른 뉴클레오티드 서열을 갖는 제 2의 핵산을 포함하며,
    상기 제 1 및 제 2의 핵산은 작동가능하게 연결되어 있는 벡터.
  3. (a) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319 중 어느 하나에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
    (b) (a)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 상보성인 뉴클레오티드 서열;
    (c) 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열;
    (d) 5' 에서 3' 방향으로 해독할 경우 (c)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 역순서인 뉴클레오티드 서열;
    (e) (a)의 뉴클레오티드 서열에 대해 간섭 RNA인 뉴클레오티드 서열;
    (f) 혼성화된 핵산 듀플렉스의 용융 온도 보다 약 40℃ 내지 약 48℃ 아래의 온도에서 상기 (a) - (d) 중 어느 하나의 핵산과 혼성화된 핵산 듀플렉스를 형성할 수 있는 뉴클레오티드 서열;
    (f) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319로 확인된 아미노산 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 및
    (g) 도 1-5의 리드, 기능적 호몰로그 또는 공통 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산을 식물 세포로 도입하는 것을 포함하는, 식물 크기, 영양 성장, 식물 구조, 묘목 활력(seedling vigor), 성장 속도, 열매 및 종자 수득, 분얼 및/또는 식물 바이오매스의 조절 방법으로서, 상기 식물 세포로부터 생성된 식물은 상기 핵산을 포함하지 않는 조절 식물의 조직에서 상응하는 수준과 비교하여 조절된 식물 크기, 조절된 영양 성장, 조절된 식물 구조, 조절된 묘목 활력 및/또는 조절된 바이오매스를 가짐을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 3항에 있어서, 공통 서열은 도 1-5의 정렬 표 중 어느 하나에서 확인된 보존된 영역의 하나 이상을 포함함을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 공통 서열은 도 1-5의 정렬 표 중 어느 하나에서 확인된 보존된 영역을 모두 포함함을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 5항에 있어서, 공통 서열은 도 1-5의 정렬 표 중 어느 하나에서 확인된 순서로 보존된 영역을 모두 포함함을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 보존된 영역은 하나 이상의 아미노산 잔기에 의해 분리됨 을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 7항에 있어서, 하나 이상의 아미노산 각각은 리드 및/또는 그에 상응하는 위치에서의 기능적 호몰로그 서열에 대한 정렬 표에 묘사된 종류 및 수의 아미노산으로 구성됨을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 공통 서열은 도 1-5의 하나에서 공통 서열에 대하여 확인된 길이와 동등한 아미노산의 총 수에 관한 길이를 갖거나, 도 1-5 중 어느 하나에서 임의의 개별적인 정렬 표에서 가장 짧은 서열 내지 가장 긴 서열의 범위의 길이와 동일함을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 3항에 있어서, 상이함은 식물 크기, 영양 성장, 기관 수, 묘목 활력, 성장 속도, 열매 및 종자 수득율, 분얼 및/또는 바이오매스의 수준 증가임을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 3항에 있어서, 분리된 핵산은 조절 영역에 작동가능하게 연결됨을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 11항에 있어서, 조절 영역은 YP0092(서열번호 38), PT0676(서열번호 12), PT0708(서열번호 17), PT0613(서열번호 5), PT0672(서열번호 11), PT0678(서열번호 13), PT0688(서열번호 15), PT0837(서열번호 24), 나핀 프로모터, 아르셀린-5 프로모터, 파세올린 유전자 프로모터, 대두 트립신 억제제 프로모터, ACP 프로모터, 스테아로일-ACP 데세튜라제(desaturase) 유전자, β-콘글라이시민 프로모터의 대두 α' 서브유닛, 올레오신 프로모터, 15 kD 제인(zein) 프로모터, 16 kD 제인 프로모터, 19 kD 제인 프로모터, 22 kD 제인 프로모터, 27 kD 제인 프로모터, Osgt-1 프로모터, 베타-아밀라아제 유전자 프로모터 및 보리 호르데인 유전자 프로모터로 구성된 그룹으로부터 선택된 프로모터임을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 11항에 있어서, 조절 영역은 p326(서열번호 76), YP0144(서열번호 55), YP0190(서열번호 59), p13879(서열번호 75), YP0050(서열번호 35), p32449(서열번호 77), 21876(서열번호 1), YP0158(서열번호 57), YP0214(서열번호 61), YP0380(서열번호 70), PT0848(서열번호 26), 및 PT633(서열번호7), 콜리플라워 모자이크 바이러스(CaMV) 35S 프로모터, 만노핀 신타아제(MAS) 프로모터, 아그로박테리움 튜메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)의 T-DNA로부터 유래된 1' 또는 2' 프로모터, 현삼 모자이크 바이러스 34S 프로모터, 액틴 프로모터, 예컨대, 쌀 액틴 프로모터, 및 유비퀴틴 프로모터, 예컨대, 옥수수(maize) 유비퀴틴-1 프로모터로 구성된 그룹으로부터 선택된 프로모터임을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 11항에 있어서, 조절 영역은 리불로오스-1,5-비스포스페이트 카르복실라아제(RbcS) 프로모터, 예컨대, 이스턴 라치(Larix laricina) 유래의 RbcS 프로모 터, 파인(pine) cab6 프로모터, 밀 유래의 Cab-1 유전자 프로모터, 시금치 유래의 CAB-1 프로모터, 쌀 유래의 cab1R 프로모터, 옥수수 유래의 피루베이트 오르토포스페이트 디키나아제(PPDK) 프로모터, 담배 Lhcb1*2 프로모터, 아라비돕시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana) SUC2 수크로오스-H+ 심포터(symporter) 프로모터, 및 시금치 유래의 틸라코이드 막 단백질 프로모터(psaD, psaF, psaE, PC, FNR, atpC, atpD, cab, rbcS), PT0535(서열번호 3), PT0668(서열번호 2), PT0886(서열번호 29), PR0924(서열번호 78), YP0144(서열번호 55), YP0380(서열번호 70) 및 PT0585(서열번호 4)로 구성된 그룹으로부터 선택된 프로모터임을 특징으로 하는 방법.
  15. (a) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319 중 어느 하나에 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
    (b) (a)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 상보성인 뉴클레오티드 서열;
    (c) 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열;
    (d) 5' 에서 3' 방향으로 해독할 경우 (c)의 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나에 역순서인 뉴클레오티드 서열;
    (e) (a)의 뉴클레오티드 서열에 대해 간섭 RNA인 뉴클레오티드 서열;
    (f) 혼성화된 핵산 듀플렉스의 용융 온도 보다 약 40℃ 내지 약 48℃ 아래의 온도에서 상기 (a) - (d) 중 어느 하나의 핵산과 혼성화된 핵산 듀플렉스를 형성할 수 있는 뉴클레오티드 서열;
    (f) 각각 서열번호 80, 90, 92, 98, 109 및 103에 상응하는 리드 15, 28, 29, 36, ME04012 및 클론 691319로 확인된 아미노산 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
    (g) 도 1-5의 리드, 기능적 호몰로그 또는 공통 서열 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 그룹으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산을 포함하는 식물 세포.
  16. 제 15항의 식물 세포를 포함하는 유전자 도입 식물.
  17. 제 16항의 핵산을 포함하지 않는 조절 식물의 조직에서 상응하는 수준과 비교하여 조절된 식물 크기, 조절된 영양 성장, 조절된 식물 구조, 조절된 묘목 활력, 성장 속도, 열매 및 종자 수득율, 분얼 및/또는 조절된 바이오매스를 갖는, 제 16항의 식물의 자손.
  18. 제 16항의 유전자 도입 식물의 종자.
  19. 제 16항의 유전자 도입 식물의 영양 조직.
  20. 제 16항의 유전자 도입 식물의 영양 조직을 포함하는 식품.
  21. 제 16항의 유전자 도입 식물의 영양 조직을 포함하는 사료.
  22. 연료 또는 화학 원료로의 전환을 위하여 사용되는 제 16항의 유전자 도입 식물의 영양 조직을 포함하는 제품.
  23. 제 1항의 분리된 핵산을 제공하는 단계;
    상기 분리된 핵산을 샘플내 핵산의 뉴클레오티드 서열과 분리된 핵산의 뉴클레오티드 서열의 비교가 가능한 조건 하에서 샘플과 접촉시키는 단계; 및
    상기 비교를 분석하는 단계를 포함하는, 샘플에서 핵산의 검출 방법.
  24. (a) 도 1-5 중 어느 하나에서 리드 중 어느 하나, 기능적 호몰로그 또는 공통 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로 식물을 형질전환시키는 단계 및
    (b) 상기 형질전환된 식물에서 상기 뉴클레오티드 서열을 발현시키는 단계를 포함하는, 식물에서 바이오매스 증가를 촉진하는 방법으로서,
    상기 형질전환된 식물은 상기 뉴클레오티드 서열로 형질전환되지 않은 식물에 비해 증가된 바이오매스를 갖거나 묘목 활력을 증진시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 1항에 따른 핵산 분자의 식물에서 발현 수준을 변경시키는 것을 포함하는, 식물의 바이오매스의 조절 방법.
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