KR20070109431A - 조혈세포 배양용 배지 및 조혈세포를 배양하는 방법 - Google Patents

조혈세포 배양용 배지 및 조혈세포를 배양하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 라이실 옥시다제 억제제를 포함하는 조혈세포 배양용 배지 및 그를 이용하여 조혈세포를 배양하는 방법을 제공한다.
라이실 옥시다제, β-아미노프로피오니트릴, 조혈세포

Description

조혈세포 배양용 배지 및 조혈세포를 배양하는 방법{A medium for culturing hematopoietic cell and a method of culturing hematopoietic cells}
도 1은 BAPN이 골수세포의 증식에 미치는 영향을 나타내는 도면이다.
도 2는 IL-3를 포함하는 배지에서 BAPN이 골수세포의 증식에 미치는 영향을 나타내는 도면이다.
본 발명은 조혈세포 배양용 배지 및 조혈세포를 배양하는 방법에 관한 것이다.
조혈세포 이식의 공급원으로는 골수, 혈액, 및 제대혈이 알려져 있는데 이러한 세포들에는 조혈세포로 분화 가능한 조혈모 줄기세포가 함유되어 있다.
대표적인 조혈조직인 골수는 조혈모세포, 골수간질 세포 및 세포외부 매질 물질로 구성된 복합 및 동적 기관 시스템이다. 상기 골수 내의 다분화능 줄기세포는 증식하고 분화하여 적혈구 및 백혈구를 포함한 많은 세포 형태로 된다. 줄기세포와 간질 세포의 연합이 이러한 과정에 핵심적인 것으로 알려져 왔다. 세포 배양 연구에 의하면, 조혈줄기세포가 성장하고 분화할 수 있기 전에, 흡착성 간질 세포 층이 확립되어야만 한다.
골수 간질 세포는 그들의 형태 및 기능에 의하여 정의된 세포들의 비균질 집단이다. 세포 배양에서, 특징적인 방추체 모양 형태를 가지고 성장인자 및 세포외부물질을 형성하는 성분을 분비한다. 간질세포는 EGF, PDGF, 염기성 FGF 및 산성 FGF에 반응하여 분열하는 것으로 알려져 있다 (미국특허 제5,962,323호).
단백질-라이신 6-옥시다제 (이하 "라이실 옥시다제"라고도 한다)는 세포외부 매질의 안정화 특히, 콜라겐과 엘라스틴의 효소적 가교화에 필수적인 구리효소 (cuproenzyme)이다. 세포 피브로넥틴은 라이실 옥시다제와 강한 친화성으로 결합하며, 라이실 옥시다제의 단백질 분해적 활성화에 필수적인 것으로 알려져 있다 (J.Biol. Chem. 2005 Jul 1; 280(26):24690-7).
조혈세포 이식은 조혈모세포와 관련된 많은 질병을 위한 전망있는 치료법 중의 하나이다. 이식에 의하여 빈혈 (anemia)과 같은 내재적 질병에 의하여 손상되거나, 또는 경우에 따라서는 조혈모세포가 화학요법 또는 방사선 요법에 의하여 파괴된 곳의 세포를 대체하는 역할을 한다. 이식은 자가 이식, 즉 환자 자신이 자신의 공여자일 수 있다. 또한, 환자는 조직적합성 공여자로부터 골수를 받을 수 있다. 그러나, 현재까지 이식될 수 있고 많은 유전자 치료에 사용될 수 있는 조혈세포를 배양하는 조건은 최적화되지 않았다. 따라서, 조혈세포를 높은 효율로 증식시킬 수 있는 배지 및 방법은 여전히 요구되고 있다.
본 발명자들은 이러한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 연구하던 중 β-아미노프로피오니트릴을 포함한 라이실 옥시다제의 억제제가 대부분 조혈세포로 구성된 골수세포의 증식을 촉진할수 있다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 목적은 조혈세포를 효율적으로 증식시킬 수 있는 조혈세포 배양용 배지를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 배지를 이용하여 조혈세포를 배양하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 라이실 옥시다제 억제제를 포함하는 조혈세포 배양용 배지를 제공한다.
본 발명의 조혈세포 배양용 배지에 있어서, 상기 라이실 옥시다제 억제제는 상기 라이실 옥시다제의 촉매 부위에 결합하여 직접적으로 활성을 억제하는 것뿐만 아니라, 촉매 부위 이외의 부위 또는 다른 조절 분자에 결합하여 상기 라이실 옥시다제의 활성을 억제하는 물질도 포함된다. 상기 라이실 옥시다제를 직접적으로 억제하는 물질에는 a) 라이실 옥시다제의 카르보닐 기와 반응하는 일차 아민, 더욱 구체적으로는 상기 카르보닐기와 결합하여 공명에 의하여 안정화된 산물을 생산하는 물질로, 예를 들면 에틸렌디아민, 히드라진, 페닐히드라진 및 그의 유도체, 세미카르바지드, 및 요소 유도체, β-아미노프로피오니트릴과 같은 아미노니트릴, 2-니트로에틸아민, 2-브로모-에틸아민, 2-클로로에틸아민, 2-트리플루오로에틸아민, 3-브로모프로필아민 및 p-할로에틸아민과 같은 포화 또는 불포화 할로아민, 및 셀 레노호모시스틴 락톤, b) 구리 킬레이트제, c) 상기 라이실 옥시다제의 활성부위에 결합하는 항체가 포함된다. 또한, 상기 라이실 옥시다제를 간접적으로 억제하는 물질에는 a) 라이실 옥시다제에 의하여 라이실 또는 히드록시라이실 잔기의 산화적 탈아민화에 의하여 발생하는 알데히드 유도체를 저해하는 물질로서, 예를 들면, 티올아민, D-페니실라민, 2-아미노-5-메캅토-5-메틸헥사노인산, D-2-아미노-3-메틸-3-((2-아세트아미도에틸)(부타노인산), p-2-아미노-3-메틸-3-((2-아미노에틸)디티오)부타노인산, 소듐-4-((p-1-디메틸-2-아미노-2-카르복시에틸)디티오)부탄 설피네이트, 2-아세트아미도에틸-2-아세트아미도에탄티올 설파네이트, 소듐-4-머캅도부탄설피네이트 트리히드레이트, b) 안티센스와 같은 라이실 옥시다제의 생합성을 저해하는 물질이 될 수 있다. 바람직하게는, 상기 라이실 옥시다제 억제제는 β-아미노프로피오니트릴이다. 상기 β-아미노프로피오니트릴은 10㎍/ml 내지 200㎍/ml의 농도로 포함되어 있는 것일 수 있다.
본 발명의 조혈세포 배양용 배지는, 종래 알려진 조혈세포 배양용 배지 중에 라이실 옥시다제 억제제를 포함시킴으로써, 조혈세포의 증식을 증진시킬 수 있다. 라이실 옥시다제는 구리 의존적 효소로서, 세포외부 매질 물질 중의 하나인 콜라겐를 가교화하는 데 관여한다. 골수세포 및 조혈모세포의 증식에 있어서, 구리의 결핍이 중요한 것으로 알려져 있었으나, 구리의 생리적 기능이 다양하여 이를 표적으로 하기가 어려웠다. 예를 들면, β-아미노프로피오니트릴은 라이실 옥시다제를 가역적으로 저해하여, 히드록시라이신 가교 전구체를 가진 추출가능한 콜라겐을 축적시키고 콜라겐 가교의 형성, 예를 들면 데히드록시라이신노르루신 (DHLNL)의 형성 을 감소시킴으로써 견고성 (integration)을 억제하는 것으로 여겨지나, 본 발명이 특정한 기작에 한정되는 것은 아니다. 일반적으로 이러한 견고성이 결핍될 경우 정상적인 조직발달에 장애를 가져오며, 심혈관 질환이나 암과 같은 질병 상태에서는 라이실 옥시다제의 발현과 활성이 정상과 다르다고 알려져 있다. 한편, 세포 배양과 관련하여 라이실 옥시다제의 활성을 저해할 경우 연골세포의 탈분화를 억제 또는 지연시킨다는 보고가 있으나 (Osteoarthritis Cartilage 2005 13:120-8), 조혈세포의 체외 배양과 관련한 연구는 밝혀져 있지 않다.
종래 알려진 상기 조혈세포 배양용 배지는 기본 배지에 조혈세포 배양에 특별히 필요한 성분을 포함하는 배지일 수 있다. 상기 기본 배지는 무혈청 배지 또는 혈청을 포함하는 배지일 수 있다. 무혈청 기본 배지는 예를 들면, Iscove's MDM(IMDM)에 재조합 인간 인슐린 10㎍/ml, 우혈청알부민 (BSA) 100㎍/ml, 인간 트란스페린 200㎍/ml, 2-머캅토에탄올 0.1mM 및 L-글루타민 2mM이 함유된 것일 수 있으나, 여기에 한정되는 것은 아니다. 상기 기본 배지는 상업적으로 구입가능하며, 그 조성 또한 당업자라면 용이하게 알 수 있다. 예를 들면, IMDM의 배지 조성은 원용에 의하여 본 명세서에 그 전체 내용이 포함되어지는, 미국특허 제5,945,337호에 개시되어 있다. 상기 기본 배지의 조건은 i) 세포 오스몰랄리티 (osmolality) 및 미네랄 요구조건을 유지하기 위한 무기염(예, 포타슘, 칼슘, 인산 등), ii) 내재적 세포 대사에 의하여 합성되지 않는 아미노산인, 세포 성장에 필요한 필수 아미노산, iii) 세포 에너지 대사에 이용될 수 있는 탄소원, 특히 포도당, 및 iv) 세포 성장에 필요로 할 수도 있는, 리보플라빈, 니코틴아미드, 엽산, 콜린, 비오틴 등과 같은, 다양한 비타민 및 보조 인자를 제공하는 것이다. 글루타민은 효과적인 양으로 본원의 배지에 첨가될 수 있는 필수 아미노산 중의 하나이다. 글루타민 농도는 보통 100㎍/ml 내지 500㎍/ml, 바람직하게는 125㎍/ml 내지 375㎍/ml, 가장 바람직하게는 150㎍/ml 내지 300㎍/ml이다. 글루타민의 불안정성 때문에, 글루타민은 때때로 배지 사용 직전에 첨가된다. 상기 기본 배지는 또한, 일반적으로 세포 대사에 대하여 배지의 pH를 유지하기 위한 버퍼, 일반적으로 비카르보네이트 또는 HEPES를 포함한다. 상기 기본 배지의 pH는 일반적으로 6.8과 7.2 사이이다.
본 발명의 조혈세포 배양용 배지는, 앞서 언급한 기본 배지 중에 조혈세포의 성장에 필요한 사이토카인을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, SCF (stem cell factor) 10ng/ml 내지 200ng/ml, IL-3 (interleukin-3) 2ng/ml 내지 100ng/ml, IL-6 (interleukin-6) 2ng/ml 내지 100ng/ml, TPO (thrombopoietin) 10ng/ml 내지 200ng/ml, 및 FL (fms-like tyrosine kinase-3 ligand) 10ng/ml 내지 200ng/ml로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 사이토카인이 기본 배지 중에 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 조혈 세포 배양용 배지의 일 구체예는, 앞서 언급한 바와 같은 기본 배지 중에서 상기한 바와 라이실 옥시다제를 포함하고, SCF 10ng/ml 내지 200ng/ml, TPO 10ng/ml 내지 200ng/ml, FL 10ng/ml 내지 200ng/ml, 인슐린 1㎍/ml 내지 20㎍/ml, 소혈청 알부민 50㎍/ml 내지 150㎍/ml, 인간 트란스페린 100㎍/ml 내지 300㎍/ml, 2-메캅토에탄올 0.05mM 내지 0.5mM, 및 글루타민 1mM 내지 5mM을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조혈세포 배양용 배지이다. 더욱 바람직하게는, IL-6 2ng/ml 내지 100ng/ml를 더 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 조혈세포 배양용 배지에는, IL-3를 더 포함하는 것일 수 있다. 상기 IL-3는 2ng/ml 내지 100ng/ml의 농도로 포함되어 있는 것일 수 있다.
본 발명의 조혈세포 배양용 배지에는, G-CSF를 더 포함할 수 있다. 상기 G-CSF는 바람직하게는, 20ng/ml 내지 100ng/ml의 농도로 포함되어 있는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, "조혈세포"란 이식시 피이식자의 조혈 작용을 회복시켜줄 수 있는 조혈 기능을 가진 세포들로서 인체의 골수 세포, 혈액 세포 및 제대혈 세포로부터 채취할 수 있다. 따라서, 본 발명에 있어서, 상기 조혈세포는 조혈세포를 포함하고 있는 세포 집단, 예를 들면 골수 세포, 혈액 세포 및 제대혈 세포를 포함하는 의도로 사용된다. 본 발명에 있어서, "골수세포"란 골수 유래의 세포를 의미하며, 대부분 조혈 줄기세포 및 이로부터 분화된 혈구계 세포이고, 일부는 조혈세포의 분화, 증식에 작용하는 골수 간질세포로 구성된다. 상기 골수세포는 상업적으로 구입하거나 (예를 들어 캐나다의 stem cell technology 사) 또는 환자로부터 분리하여 사용할 수 있다. 골수는 조혈모세포, 골수간질 세포 및 세포외부 매질 물질로 구성된 복합 및 동적 기관 시스템이다. 상기 골수 내의 다분화능 줄기세포는 증식하고 분화하여 적혈구 및 백혈구를 포함한 많은 세포 형태로 된다. 세포 배양 연구에 의하면, 조혈줄기세포가 성장하고 분화할 수 있기 전에, 흡착성 간질 세포층이 확립되어야만 한다. 따라서, 간질세포 없이 조혈계 세포들을 체외 배양하기 위하여는 SCF, TPO, IL-3, IL-6 및 FL과 같은 사이토카인들이 필요하다.
따라서,본 발명의 조혈세포 배양용 배지는 이러한 종래 알려진 조혈세포 증식을 자극하는 것으로 알려진 성분, 예를 들면 사이토카인을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명에 따른 조혈세포 배양용 배지를 포함하는 용기 내로 조혈세포를 도입하는 단계; 및
상기 조혈세포를 배양하는 단계를 포함하는, 조혈세포를 배양하는 방법을 제공한다.
본 발명의 조혈세포를 배양하는 방법은 라이실 옥시다제 억제제를 포함하는 조혈세포 배양용 배지를 포함하는 용기 내로 조혈세포를 도입하는 단계를 포함한다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 "조혈세포", 상기 "라이실 옥시다제 억제제" 및 "조혈세포 배양용 배지"에 대하여는 본 발명의 조혈세포 배양용 배지에 대한 부분에서 설명한 바와 같다. 상기 조혈세포는 상업적으로 구입된 것이거나 개체로부터 분리된 것일 수 있다. 또한, 상기 라이실 옥시다제 억제제는 다양한 화합물이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 β-아미노프로피오니트릴이다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 배양 용기는 플라스크, 다양한 수의 웰이 형성되어 있는 플레이트 및 롤러 병, 세포 반응 용기 등 당업계에 알려진 다양한 용기가 사용될 수 있다. 또한, 조혈세포를 상기 용기에 도입하는 것은 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 이루어질 수 있다. 예를 들면, 피펫을 사용하여 접종하거나 따르기 (decantation)에 의하거나 관을 통하여 흘려줌으로써 용기 내에 도입할 수 있다.
본 발명의 방법은 또한, 상기 조혈세포를 배양하는 단계를 포함한다. 조혈세포의 배양은 통상적으로 알려진 배양 조건에서 이루어질 수 있다. 예를 들면, 100% 습도 조건에서 37℃의 이산화탄소 배양기에서 배양하고, 계대 배양은 일주일에 한 번씩 배지의 반을 갈아주는 방법으로 수행될 수 있으나, 이들 조건에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 용기는 세포외부 매질로 코팅되어 있는 것일 수 있다. 세포외부 매질은 조혈세포의 성장을 자극하는 것으로 알려져 있다. 바람직하게는, 상기 세포외부 매질은 피브로넥틴 및 콜라겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질일 수 있으나, 이들 물질에 한정되는 것은 아니다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1 : 무혈청 기본 배지에서 BAPN 이 골수세포의 증식에 미치는 영향
본 실시예에서는 무혈청 배지에서 β-아미노프로피오니트릴 (이하 BAPN이라고도 한다)이 골수세포의 성장에 미치는 영향을 조사하였다. 본 실시예에서는 사용된 골수세포는, 대부분 조혈세포로 구성된 것으로 조혈세포를 포함하는 세포 집단이다.
먼저, 무혈청 배지 중에서 종래 골수세포 증식에 영향을 미치는 것으로 알려진 세포외부 매질 물질인 피브로넥틴 및 콜라겐 IV의 존재 또는 부존재 하에서의 골수세포 증식 정도를 조사하였다.
골수세포는 Stem cell technology 사 (Catalog number ARM07F)로부터 골수 단핵구 세포를 구입하여 사용하였으며, 한 사람의 정상인으로부터 채취한 것이고 총 단핵구 세포 중 CD34+ 세포는 1.6%이었다. 골수세포는 유지 배지 중에서 유지하였다. 상기 유지 배지는 IMDM 중에 SCF 50ng/ml, IL-6 50ng/ml, TPO 50ng/ml, FL 50 ng/ml, 재조합 인간 인슐린 10 ㎍/ml, 우혈청알부민 (BSA) 100㎍/ml, 인간 트란스페린 200 ㎍/ml, 2-머캅토에탄올 0.1mM 및 L-글루타민 2mM을 포함하는 것을 사용하였다.
실험은 24웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕의 상기 기본 배지 및 상기 기본 배지에 100㎍/ml의 BAPN를 포함하는 배지를 첨가하고 1x105 세포/ml의 농도로 골수세포를 접종하고 2주 동안 배양하였다. 배지는 1주일 마다 교환하였으며, 2주 동안 배양하였다. 2주 동안 배양한 후 부착성 세포는 트립신으로 처리하여 표면으로부터 떼어내고 부유 세포와 합쳐서 최종 세포 농도를 헤마사이토미터를 사용하여 측정하였다. 또한, 상기 24웰 플레이트의 바닥은 콜라겐 IV 또는 피브로넥틴으로 코팅된 것을 사용하여 콜라겐 IV 또는 피브로넥틴이 미치는 영향을 함께 조사하였다. 코팅은 먼저 코팅 물질을 5㎍/ml 내지 50㎍/ml로 녹인 후, 1㎍/cm2 내지 10㎍/cm2 가 되도록 24 웰에 부어 실온에서 한 시간 동안 반응시키는 방식으로 진행하였다.
도 1은 BAPN이 골수세포의 증식에 미치는 영향을 나타내는 도면이다. 도 1에 나타낸 바와 같이, BAPN를 포함하는 배지에서 골수세포는 대조군에 비하여 5.4배 더 많이 증식하였으며, 피브로넥틴이 코팅된 24웰 플레이트를 사용한 경우, BAPN를 포함하는 배지에서 골수세포는 대조군에 비하여 12.1배 더 많이 증식하였으며, 콜라겐이 코팅된 24웰 플레이트를 사용한 경우, BAPN를 포함하는 배지에서 골수세포는 대조군에 비하여 5.1배 더 많이 증식하였다. 도 1에 있어서, 1: 대조군, 2: 대조군에 BAPN이 첨가된 배지, 3: 피브로넥틴이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지, 4: 피브로넥틴이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지에 BAPN이 첨가된 배지, 5: 콜라겐이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지, 6: 콜라겐이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지에 BAPN이 첨가된 배지에 대한 결과이다.
이는 BAPN이 배양 용기의 기판이 세포외부 매질로 코팅되어 있는지 여부와 상관없이 골수세포의 증식을 촉진한다는 것을 나타낸다.
실시예 2 : IL-3를 포함하는 무혈청 기본 배지에서 BAPN 이 골수세포의 증식에 미치는 영향
본 실시예에서는 조혈모줄기세포의 분열을 유도하는 IL-3를 포함하는 무혈청 기본 배지에서 BAPN이 골수세포의 증식을 촉진하는지 여부를 조사하였다.
골수세포는 Stem cell technology 사 (Catalog number ARM07F)로부터 골수 단핵구 세포를 구입하여 사용하였으며, 한 사람의 정상인으로 채취한 것이고 총 단핵구 세포 중 CD34+ 세포는 1.6%이었다. 골수세포는 유지 배지 중에서 유지하였다. 상기 유지 배지는 IMDM 중에 SCF 50ng/ml, IL-6 50ng/ml, TPO 50ng/ml, FL 50 ng/ml, 재조합 인간 인슐린 10 ㎍/ml, 우혈청알부민 (BSA) 100㎍/ml, 인간 트란스페린 200 ㎍/ml, 2-머캅토에탄올 0.1mM 및 L-글루타민 2mM을 포함하는 것을 사용하 였다.
실험은 24웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕의 상기 기본 배지에 20㎍/ml의 IL-3 및 상기 기본 배지에 20㎍/ml의 IL-3 및 100㎍/ml의 BAPN를 포함하는 배지를 첨가하고 1x105 세포/ml의 농도로 골수세포를 접종하고 2주 동안 배양하였다. 배지는 1주일 마다 교환하였으며, 2주 동안 배양하였다. 2주 동안 배양한 후 부착성 세포는 트립신으로 처리하여 표면으로부터 떼어내고 부유 세포와 합쳐서 최종 세포 농도를 헤마사이토미터를 사용하여 측정하였다. 또한, 상기 24웰 플레이트의 바닥은 콜라겐 IV 또는 피브로넥틴으로 코팅된 것을 사용하여 콜라겐 IV 또는 피브로넥틴이 미치는 영향을 함께 조사하였다. 코팅은 먼저 코팅 물질을 5㎍/ml 내지 50㎍/ml로 녹인 후, 1㎍/cm2 내지 10㎍/cm2 가 되도록 24 웰에 부어 실온에서 한 시간 동안 반응시키는 방식으로 진행하였다.
도 2는 IL-3를 포함하는 배지에서 BAPN이 골수세포의 증식에 미치는 영향을 나타내는 도면이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, IL-3 및 BAPN를 포함하는 배지에서 골수세포는 IL-3만을 포함하는 대조군 배지에 비하여 3.1배 더 많이 증식하였으며, 피브로넥틴이 코팅된 24웰 플레이트를 사용한 경우, IL-3 및 BAPN를 포함하는 배지에서 골수세포는 대조군에 비하여 2.0배 더 많이 증식하였으며, 콜라겐이 코팅된 24웰 플레이트를 사용한 경우, IL-3 및 BAPN를 포함하는 배지에서 골수세포는 대조군에 비하여 2.6배 더 많이 증식하였다. 도 2에 있어서, 1: 대조군 배지에 IL-3가 첨가된 배지 2: 대조군에 배지에 IL-3 및 BAPN이 첨가된 배지, 3: 피브로넥틴이 코 팅된 배양 용기에 대조군 배지에 IL-3가 첨가된 배지, 4: 피브로넥틴이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지에 IL-3 및 BAPN이 첨가된 배지, 5: 콜라겐이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지에 IL-3가 첨가된 배지, 6: 콜라겐이 코팅된 배양 용기에 대조군 배지에 IL-3 및 BAPN이 첨가된 배지에 대한 결과이다.
이는 BAPN이 배양 용기의 기판이 세포외부 매질로 코팅되어 있는지 여부 및 조혈모줄기세포의 분열하는 사이토카인의 존재 및 부존재와 상관없이 골수세포의 증식을 촉진한다는 것을 나타낸다.
본 발명에 따른 조혈세포 배양용 배지에 의하면, 조혈세포의 증식을 촉진하여 조혈세포를 효율적으로 증식하는데 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조혈세포를 배양하는 방법에 의하면, 조혈세포를 효율적으로 증식할 수 있다.
따라서, 본 발명의 골수세포 배양용 배지 및 조혈세포를 배양하는 방법을 사용하여 얻어지는 조혈세포는 다양한 분야에서 유용하게 사용될 수 있다. 조혈세포 중에 포함되어 있는 조혈모줄기세포는 적절한 조건하에서 완전한 혈액세포로 분화시키는데 사용될 수 있다. 또한, 증식 조혈세포는 세포치료, 조직이식, 약제 탐색 및 항암 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (13)

  1. 라이실 옥시다제 억제제를 포함하는 조혈세포 배양용 배지.
  2. 제1항에 있어서, 상기 라이실 옥시다제 억제제는 β-아미노프로피오니트릴인 조혈세포 배양용 배지.
  3. 제2항에 있어서, 상기 β-아미노프로피오니트릴은 10㎍/ml 내지 200㎍/ml의 농도로 포함되어 있는 것인 조혈세포 배양용 배지.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조혈세포는 조혈세포를 포함하고 있는 골수세포, 혈액 세포 또는 제대혈 세포인 것인 조혈세포 배양용 배지.
  5. 제4항에 있어서, 상기 조혈세포는 조혈세포를 포함하는 골수세포이고, SCF 10ng/ml 내지 200ng/ml, TPO 10ng/ml 내지 200ng/ml, FL 10ng/ml 내지 200ng/ml, 인슐린 1㎍/ml 내지 20㎍/ml, 소혈청 알부민 50㎍/ml 내지 150㎍/ml, 인간 트란스페린 100㎍/ml 내지 300㎍/ml, 2-메캅토에탄올 0.05mM 내지 0.5mM, 및 글루타민 1mM 내지 5mM을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조혈세포 배양용 배지.
  6. 제5항에 있어서, IL-6 2ng/ml 내지 100ng/ml를 더 포함하는 조혈세포 배양용 배지.
  7. 제1항에 있어서, 상기 배지는 무혈청 배지인 조혈세포 배양용 배지.
  8. 제1항에 있어서, 상기 기본 배지는 IMDM인 조혈세포 배양용 배지.
  9. 제1항에 있어서, IL-3를 더 포함하는 조혈세포 배양용 배지.
  10. 제9항에 있어서, 상기 IL-3는 2ng/ml 내지 100ng/ml의 농도로 포함되어 있는 것인 조혈세포 배양용 배지.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 조혈세포 배양용 배지를 포함하는 용기 내로 조혈세포를 도입하는 단계; 및
    상기 조혈세포를 배양하는 단계를 포함하는, 조혈세포를 배양하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 용기는 세포외부 매질로 코팅되어 있는 것인 조혈세포를 배양하는 방법.
  13. 제11항에 있어서, 상기 세포외부 매질은 피브로넥틴 및 콜라겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질인 조혈세포를 배양하는 방법.
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