KR20070022305A

KR20070022305A - 연령 관련 황반 변성을 치료하는 데 있어서 표적화된산화적 치료 제형의 용도

Info

Publication number: KR20070022305A
Application number: KR1020067025820A
Authority: KR
Inventors: 로버트 에프 호프만
Original assignee: 로버트 에프 호프만
Priority date: 2004-05-10
Filing date: 2005-05-10
Publication date: 2007-02-26

Abstract

본 발명은 약제학적 제형 및 이의 용도에 관한 것이다. 당해 약제학적 제형은 산소 함유 산화제(예: 오존)에 의한 알칸(예: 게라니올)의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물, 투과 용매(예: 디메틸설폭사이드("DMSO"), 킬레이트화 금속을 함유하는 염료(예: 헤마토포르핀) 및 방향족 레독스 화합물(예: 벤조퀴논)을 함유한다. 약제학적 제형은 연령 관련 황반 변성("ARMD")을 앓고 있는 환자를 효과적으로 치료하는 데 사용된다.

연령 관련 황반 변성, 산소 함유 산화제, 퍼옥사이드계 화학종, 투과 용매, 킬레이트화 금속을 함유하는 염료, 방향족 레독스 화합물.

Description

연령 관련 황반 변성을 치료하는 데 있어서 표적화된 산화적 치료 제형의 용도 {Use of targeted oxidative therapeutic formulation in treatment of age―related macular degeneration}

본 출원은 전문이 본원에 참고로 인용되어 있는, "연령 관련 황반 변성을 치료하는 데 있어서의 표적화된 산화적 치료 제형의 용도"라는 발명의 명칭으로 2004년 5월 10일자로 출원된 미국 가특허원 제60/569,792호에 우선권을 주장한다.

본 발명은 퍼옥사이드계 화학종 또는 산화 생성물을 함유하는 조성물, 이의 제조방법 및 이의 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 산소 함유 산화제에 의해 액체 형태 또는 용액 형태의 올레핀계 화합물의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물, 투과 용매, 킬레이트화 금속을 함유하는 염료 및 방향족 레독스 화합물을 함유하는 약제학적 조성물 또는 제형에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 약제학적 제형의 제조방법 및 연령 관련 황반 변성(age-related macular degeneration)을 치료하는 데 있어서의 이의 용도에 관한 것이기도 하다.

연령 관련 황반 변성("ARMD")은 65세 이상의 사람에서 영구적인 시력 저하의 주된 요인이며, 현재 13백만명의 미국인이 앓고 있다. ARMD는 안구의 망막의 중심 부인 황반의 광-민감성 광수용체 세포 및 색소 상피 세포에 영향을 미친다. 이것이 전반적인 실명을 야기하지 않을 수도 있지만, 당해 질환은 중심 시력을 파괴하여, 독서, TV 시청 및 운전을 불가능하게 한다. 이의 입증된 치료법이 없으며, 자발적으로 회복된다고 입증된 바도 없으며, 효과적인 치료법이 매우 제한적이다.

망막은 빛을 신경 자극으로 바꾸어 이러한 신경 자극이 뇌로 전해져서 시각 영상으로 해석되게 하는 신경 세포의 복잡한 망상 조직이다. 황반이라고 불리우는 망막의 중심부가 독서 및 기타의 상세한 업무에 필요한 시력을 책임지고 있다. 황반 손상은 시력 저하를 초래한다. 망막에 영향을 미치는 가장 일반적인 질환이 ARMD이다. ARMD 환자에서는, 수년에 걸친 시간 경과에 따라 황반 중의 망막 광수용체 및 색소 상피 세포가 사멸한다. 세포사 및 점진적인 시력 저하가 통상적으로 60세 이상의 연령까지는 시작되지 않으므로, 연령 관련 황반 변성이라고 명명되었다.

ARMD에는 두 가지 유형이 있다: 건성 황반 변성 및 습성 황반 변성. 건성 황반 변성이 보다 일반적인데, 이는 전형적으로 덜 심각하고 보다 점진적인 시력 저하를 초래한다. 건성 ARMD을 앓는 환자는 광수용체 세포 및 이의 친숙한 동종물, 색소 상피("RPE") 세포의 사멸 및 "드루젠"이라고 하는 착물 왁스상 아밀로이드 혼합물의 축적으로 인한 중심 시력의 점진적인 저하를 나타낸다. 실제로 빛을 "보는" 망막 중의 세포인 광수용체가 시력에 필수적이다. 대식세포성 RPE 세포가 광수용체 생존, 작용 및 재생에 필요하다.

황반 변성 환자는 망막 아래에 신생 혈관이 발육한다. 광수용체 및 RPE 세 포가 서서히 변성됨에 따라, 혈관이 맥락막에서의 이들의 정상적인 위치에서 망막 아래의 비정상적인 위치로 성장하는 경향이 있다. 이러한 비정상적인 신생 혈관 성장을 맥락막 신생 혈관 생성(choroidal neovascularization; "CNV")이라고 한다. 비정상적인 혈관에 누출 및 출혈이 생기면, 출혈, 종창, 반흔 조직 및 심각한 중심 시력의 저하를 야기한다. ARMD 환자 중의 10%만이 습성 유형이지만, ARMD로 인한 모든 실명의 90%를 초래한다.

위치에 따라, 습성 ARMD에서 형성된 비정상적인 혈관을 파괴하기 위해 레이져 치료가 때때로 제공될 수 있다. 습성 ARMD 환자의 15%만이 레이져 치료에 적합한데, 그 이유는 혈관이 황반의 중심부에 너무 가까이 위치하지 않을 수 있기 때문이다. 레이져는 혈액, 약물 및 RPE 세포의 색소에 의해 흡수되는 광선 빔이며, 이것이 열 에너지로 전환되어 비정상적인 혈관을 소작(cauterize)시킨다. 빈번하게, 자극이 제거되지 않아, 신생 혈관 생성이 재발하여 심각한 시력 저하를 초래한다. 사실, ARMD 환자의 대부분은 시력이 매우 나쁘며, 신생 혈관 생성의 후유증으로 인해 시력을 상실하게 된다. ARMD에서 발생하는 세포사 또는 비정상적인 혈관 성장을 영구적으로 예방하는 데 이용 가능한 치료법은 없다는 것이 최근 의학계의 견해이다.

안구에서 RPE 세포는 대식세포로서 작용하며, 광수용체의 막 외부 세그먼트의 성분을 식균 작용하고 재순환시킨다. RPE 세포내의 미토콘드리아가 손상되면, 광수용체 재순환이 억제되어, 드루젠이라고 하는 무정형 세포 잔해가 축적된다.

몇가지 연구에서 흡연과 ARMD 사이의 상관성이 확립되었다. 과거 및 현재 흡연자는 ARMD 발병에 있어 비흡연자보다 4배 이상 위험이 높다. ARMD 발병에 미치는 흡연의 영향은 너무도 강해서 예전 흡연자의 경우 위험성이 흡연을 중단한지 20년 후에도 여전히 높을 수 있다. 라이프스타일과 노출이 상이한 집단을 통한 일관성이 흡연과 ARMD 사이의 인과 관계를 뒷받침한다.

이러한 인과 관계는 인체에서의 카드뮴의 영향으로 인한 것일 수 있다. 평균, 흡연자는 비흡연자보다 혈중 카드뮴 농도가 4-5배 더 높고, 신장 카드뮴 농도는 2-3배 더 높다. 독성 금속 성분에의 장기간 노출은 세포 면역 결핍, 죽상경화증, 암, 황반 변성 및 기종과 연관성이 있다. 카드뮴 중독은 세포내 미세필라멘트(intracellular microfilaments; "MF")의 상호작용 손상과 관련이 있으며, 이의 조합, 결합 및 분해는 미토콘드리아 중의 다수의 칼슘-의존성 인자에 의해 조절된다. 카드뮴 클로라이드는 불규칙하고 무질서한 MF 덩어리 또는 플라크의 형태로 MF 변성을 야기한다[문헌 참조; DalleDonne et al., 1997]. MF의 파열은 과산화 부족 및 식균 작용의 마비를 야기한다. 그 결과, 세포 잔해가 아밀로이드, 드루젠 또는 플라크로서 축적되어, 마침내 광수용체와 같은 조직 유세포(parenchyma cell)를 손상시킨다. 식균 세포의 지속적인 이형성은 결국 증식, 신생물 및 신생 혈관 생성을 일으킨다(문헌 참조; Levy et al., 1986).

따라서, ARMD를 앓고 있는 환자의 RPE에서 과산화 활성 및 대식세포 반응성을 회복시키는 수단이 필요하다.

오존은 삼원소 가스 분자이며, 산소의 동소체 형태이다. 이는 순수한 산소를 통한 강력한 자외선 또는 전기 방출에 의해 수득할 수 있다. 질환의 "유리 라 디칼" 이론에서 오존이 심각한 오염물이라는 대중적인 오해로 인해, 항산화 보충제 시장에서는 치료제로서의 이의 사용에 대해 편견적인 의학적 정설이 팽배해 있다. 그러나, 오존요법은 잘못된 호칭이다. 오존은 혈장 및 세포막에 존재하는 유기 화합물과의 선택적 상호작용을 통해 발생하는 부산물과 직접적으로 관련된 작용 메카니즘을 갖는 매우 반응성이고 불안정한 가스이다. 오존과 불포화 올레핀과의 선택적 반응이 탄소-탄소 이중결합에서 발생하여, 오존화물(ozonide)을 발생한다. 오존은 단독으로는 독성이고, 이의 반응 생성물인 오존화물은 불안정하며 단독으로는 치료 효능이 없다.

1818년에 발견된 과산화수소(H₂O₂)는 천연에 미량으로 존재한다. 과산화수소는 불안정하며, 유기 막 및 미립자 물질과 직접 접촉시 격렬하게 분해(발포)된다. 빛, 교반, 가열 및 철 모두가 용액 중의 과산화수소 분해 속도를 가속화시킨다. 생체외 직접 접촉에 의한 과산화수소는 카탈라아제와 같은 퍼옥사이드-파괴 효소의 수준이 낮은 미생물을 사멸시킨다. 그러나, 과산화수소를 퍼옥사이드-민감성 이. 콜라이(E. coli)로 감염된 래빗의 혈액에 주사하는 경우에는 살균 효과가 없다. 또한, 이. 콜라이를 함유하는 래빗 또는 사람 혈액에서 생체외 퍼옥사이드 농도 상승이 어떠한 직접적인 살균 활성의 증거를 나타내지는 않는다. 고농도 과산화수소의 효과의 부족은 호스트 동물의 혈액 중의 퍼옥사이드-파괴 효소인 카탈라아제의 존재와 직접적인 관련이 있다. 효과를 가지기 위해서는, 고농도의 과산화수소를 상당 시간 동안 세균과 접촉시켜야 한다. 혈액 중에 통상적으로 존재하는 카탈라아제와 같은 다량의 과산화수소-파괴 효소는 퍼옥사이드가 수 초 이상 혈 중에 존재하지 못하도록 한다. 따라서, 주사 또는 주입에 의해 혈류로 도입된 과산화수소는 혈액 또는 세포외액에서 세포외 살균제로서 직접적으로 작용하지 않는다.

그러나, 과산화수소는 활성화된 대식세포의 살균 과정에 참여한다. 활성화된 대식세포가 감염 부위로 이동하여 감염 유기체에 부착하여 이를 소화시킨다. 유기체의 사멸은 과산화수소에 의해 대식세포내에서 일어난다. 과산화수소는 세포질 클로라이드를 이산화염소 유리 라디칼로 산화시키고, 이것이 미생물 막을 탈안정화시키고, 존재하는 경우, 아폽토시스 또는 세포 사멸(cellular suicide)을 유도한다. 세포내 과산화에 대한 중요한 치료 기준은 병에 걸린 대식세포로만 퍼옥사이드계 캐리어 분자가 선택적으로 전달, 흡수 및 활성화되는 것이며, 이것은 카탈라아제 및 글루타티온 리덕타아제 활성이 증가하는 것을 불가능하게 하는 것으로 여겨진다. 주입된 과산화수소는 보편화된 독물인 반면, 표적화된 세포내 과산화는 선택적 치료 도구이다.

대식세포는 국부화된 이들의 위치에 따라 면역, 골 석회화, 시력, 신경 절연(유수화(myelinization)), 해독, 펌프 강화 및 신체로부터의 독소 제거에 중요한 역할을 한다. 대식세포의 에너지 요구는 미토콘드리아라고 불리우는 세포내 구조물에 의해 충족된다. 미토콘드리아는 종종 미세필라멘트 내부 세포구축(cytoarchitecture)과 구조적으로 연관된다. 미토콘드리아의 중첩된 내부층은 고에너지 분자인 ATP를 생성하고, 반면에 외부층은 퍼옥사이드를 생성하는 사이토크롬 및 전자 재순환 분자를 함유한다. 미토콘드리아의 외부층은 독성 차단 또는 내독소, 마이코톡신, 바이러스 암호화된 독소, 약물, 중금속 및 살충제에 의한 손상에 영향을 받기 쉽다. 미토콘드리아의 과산화 작용이 차단되면, 세포의 필라멘트 구조가 가교결합하여, 부정확한 신호, 무능, 부적당한 복제 또는 조기 세포사를 야기하는 경향이 있다.

미국 특허 제4,451,480호(De Villez)에는 여드름을 치료하기 위한 조성물 및 방법이 개시되어 있다. 당해 방법은 각종 고정유 및 불포화 에스테르, 알콜, 에테르 및 지방산을 오존화시켜 유도된 오존화된 물질로 환부를 국소 치료함을 포함한다.

미국 특허 제4,591,602호(De Villez)에는 미생물 감염을 제어하는 데 사용되는 호호바의 오존화물이 제시되어 있다.

미국 특허 제4,983,637호(Herman)에는 약제학적으로 허용되는 담체 중의 테르펜의 오존화물을 투여함으로써 국부 및 전신 바이러스 감염을 비경구 치료하는 방법이 기재되어 있다.

미국 특허 제5,086,076호(Herman)에는 담체와 테르펜의 오존화물을 함유하는 항바이러스 조성물이 제시되어 있다. 당해 조성물은 전신 투여 또는 국소 적용에 적합하다.

미국 특허 제5,126,376호(Herman)에는 담체 중의 테르펜의 오존화물을 사용하여 포유동물에서 바이러스 감염을 국소적으로 치료하는 방법이 기재되어 있다.

미국 특허 제5,190,977호(Herman)에는 전신 주사에 적합한, 비수성 담체와 테르펜의 오존화물을 함유하는 항바이러스 조성물이 개시되어 있다.

미국 특허 제5,190,979호(Herman)에는 담체 중의 테르펜의 오존화물을 사용하여 포유동물에서 의학적 질환을 비경구 치료하는 방법이 기재되어 있다.

미국 특허 제5,260,342호(Herman)에는 담체 중의 테르펜의 오존화물을 사용하여 포유동물에서 바이러스 감염을 비경구 치료하는 방법이 기재되어 있다.

미국 특허 제5,270,344호(Herman)에는 불포화 탄화수소의 트리옥솔란 또는 디퍼옥사이드 유도체(여기서, 당해 유도체는 비극성 용매에 용해된 불포화 탄화수소를 오존화시켜 제조한다)를 포유동물의 장에 적용함으로써 포유동물에서 전신성 질환을 치료하는 방법이 제시되어 있다.

미국 특허 제5,364,879호(Herman)에는 비-테르펜 불포화 탄화수소의 디퍼옥사이드 또는 트리옥솔란 유도체(여기서, 당해 유도체는 담체 중의 불포화 탄화수소를 35℃ 미만에서 오존화시켜 제조한다)를 함유하는, 포유동물에서 의학적 질환을 치료하기 위한 조성물이 기재되어 있다.

상이한 의학적 징후에 대한 테르펜 오존화물의 사용에 관한 보고들에도 불구하고, 테르펜 오존화물은 다수의 결함을 나타낸다. 예를 들면, 미르센 및 리모넨과 같은 모노테르펜의 오존화물은 실험실에서 폭발한다. 따라서, 이들은 제형화하거나 저장하기가 매우 위험하다.

또한, 물 또는 디메틸설폭사이드("DMSO") 중의 직쇄 모노테르펜 알콜인 게라니올의 오존화물은 바이러스 바리셀라-조스터(viral Varicella Zoster)(대상 포진)의 세 가지 유형 및 헤르페스 심플렉스 피부염(Herpes Simplex dermatitis)의 두 가지 유형에서는 임상적인 효능이 나타나지 않았다.

따라서, 알켄 화합물의 산화로부터의 반응 생성물을 사용하는 안전하면서도 효과적인 약제학적 제형 또는 조성물이 요구된다. 또한, RPE 세포에서 유리 라디칼 형성으로부터의 미토콘드리아 방어를 자극하여, 드루젠을 감소시키고 ARMD를 앓고 있는 환자의 시력을 향상시키기 위한 방법이 요구된다.

발명의 요약

본 발명은 산소 함유 산화제에 의해 액체 형태 또는 용액 형태의 불포화 유기 화합물의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물, 투과 용매, 킬레이트화 염료 및 방향족 레독스 화합물을 포함하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 약제학적 제형의 한 가지 양태에서, 필수 성분은 불포화 알콜, 안정화 용매, 메탈로포르피린 및 퀴논의 오존 분해에 의해 형성되는 퍼옥사이드계 생성물을 포함한다. 또한, 본 발명은 연령 관련 황반 변성("ARMD")을 치료하기 위한 약제학적 제형의 용도에 관한 것이다.

퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물은 바람직하게는 알켄과 오존과의 반응을 통해 형성된다. 알켄과 오존간의 반응은 크리지 메카니즘(Criegee mechanism)에 의해 진행되는 것으로 일반적으로 받아들여지고 있다. 이러한 메카니즘에 따르면, 아래 반응식 1에 도시되어 있는 바와 같이, 반응의 초기 단계는 오존이 알켄에 1,3-쌍극자 고리 부가 반응(cycloaddition)하여 1차 오존화물(1,2,3-트리옥살란)을 생성한다. 1차 오존화물은 불안정하며, 카보닐 화합물 및 카보닐 옥사이드로 1,3-고리 전환반응(cycloreversion)에 착수한다. 다른 시약 또는 친핵 성 용매의 부재하에서, 이러한 새로운 1,3-쌍극자가 2차 1,3-쌍극자 고리 부가 반응에 도입되어 "표준(normal)" 오존화물인 1,2,4-트리옥살란을 생성한다.

부 반응에서, 반응식 2에 도시되어 있는 바와 같이, 카보닐 옥사이드가 이량체화에 도입되어 퍼옥사이드계 이량체인 1,2,4,5-테트라옥산을 생성할 수 있다.

카보닐 옥사이드는 강력한 친전자성 화학종이며, 반응식 3에 도시되어 있는 바와 같이, 친전자성 화학종(예를 들면, 알콜 또는 물)의 존재하에서, 용이한 친핵성 부가 반응(nucleophilic addition)으로 1-알콕시하이드로퍼옥사이드를 생성한다. 특정 조건하에서, 1-알콕시하이드로퍼옥사이드는 추가의 반응으로 카복실산 유도체를 생성할 수 있다.

다시, 이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 본 발명에서 알콜 함유 알 켄의 오존 분해 동안, 세 가지 주요 유형의 퍼옥사이드계 생성물이 존재할 것이라고 기대하는 것이 합당할 것으로 믿어진다: 표준 오존화물, 카보닐 테트라옥산 이량체 및 1-알콕시하이드로퍼옥사이드. 물의 존재하에서, 이러한 퍼옥사이드계 생성물의 일부는 또한 조 생성물의 혼합물에 유기 과산이 존재하도록 할 수 있다.

또한, 본 발명은 오존 분해의 초기 생성물을 "안정화"시키기 위한 디메틸설폭사이드("DMSO")와 같은 투과 용매의 사용을 포함한다. 유사하게, 이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 안정화는 가장 가능성있는 간단한 용매화 현상인 것으로 여겨진다. 그러나, DMSO는 자체로 친핵성인 것으로 공지되어 있다. 이것은 반응성 화학종을 안정화시키는 데 있어서 친핵성 파트너로서(예를 들면, 디메틸설폭소늄 염으로서) 관여할 수 있다. 본 발명의 약제학적 제형의 안정화된 퍼옥사이드계 분자 및 투과 용매는 일반적으로 안전하다고 간주되는(generally regarded as safe; "GRAS") 성분으로부터 제조된다.

약제학적 제형의 또 다른 성분은 킬레이트화 염료, 예를 들면, 포르피린이다. 광화학적 여기하에서 산소를 감작화시키는 메탈로포르피린의 경향은, 산소 함유 시스템에 결합하는 페로포르피린 및 구리 포르피린의 경향과 마찬가지로, 널리 공지되어 있다.

약제학적 제형의 추가의 성분은 방향족 레독스 화합물, 예를 들면, 퀴논이다.

이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 바람직한 약제학적 제형이, 감염되거나 이형성성 대식세포에서 재순환하는 자동촉매 산화를 유도하는 생화학제의 배합물일 것이 요구된다. 약제학적 제형은 무경쟁의 과산화를 통해 표적화된 아폽토시스(세포 사멸)를 자극한다. 따라서, 약제학적 제형은 겉보기에는 본질적으로 다른 것 같은 다수의 미토콘드리아계 대식세포성 질환에 치료학적 효과를 나타낸다. 특히, 약제학적 제형은 전신 인슐린 내성을 감소시키고, 혈중 글루코즈 반응을 저하시키며, 근육 글루코즈 흡수를 개선시키는 데 효과적인 것으로 나타났으며, 이는 당뇨병 및 비만을 치료하는 데 있어서의 이의 효능을 나타낸다.

바람직한 양태의 상세한 설명

본 발명은 산소 함유 산화제에 의해 액체 형태 또는 용액 형태의 불포화 유기 화합물의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물, 투과 용매, 킬레이트화 염료 및 방향족 레독스 화합물을 포함하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 약제학적 제형은 연령 관련 황반 변성("ARMD")을 앓고 있는 환자를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 한 가지 양태에서, 약제학적 제형의 필수 성분은 불포화 알콜, 안정화 용매, 메탈로포르피린 및 퀴논의 오존 분해에 의해 형성되는 퍼옥사이드계 생성물을 포함한다.

약제학적 제형의 불포화 유기 화합물은 불포화 올레핀계 탄화수소일 수 있으며, 이는 하이드록실 그룹을 갖지 않는 알켄이거나 하이드록실 함유 알켄일 수 있다. 바람직하게는, 알켄의 탄소수는 약 35개 미만이다. 하이드록실 그룹을 갖지 않는 알켄은 열린 사슬 불포화 탄화수소, 모노사이클릭 불포화 탄화수소 또는 바이사이클릭 불포화 탄화수소일 수 있다. 하이드록실 함유 알켄은 열린 사슬 불포화 알콜, 모노사이클릭 불포화 알콜 또는 바이사이클릭 불포화 알콜일 수 있다. 알켄은 또한 고정유, 에스테르, 지방산 또는 에테르에 함유되어 있을 수 있다.

이용 가능한 불포화 올레핀계 탄화수소는 치환되지 않거나 치환되거나 사이클릭 또는 착화된 알켄, 하이드라진, 이소프레노이드, 스테로이드, 퀴놀린, 카로티노이드, 토코페롤, 프레닐화 단백질 또는 불포화 지방일 수 있다. 본 발명에 바람직한 불포화 탄화수소는 알켄 및 이소프레노이드이다.

이소프레노이드는 정유의 구성분으로서 주로 식물에서 발견된다. 다수의 이소프레노이드는 탄화수소이지만, 산소 함유 이소프레노이드는 또한 알콜, 알데히드 및 케톤을 발생한다. 공식적인 의미에서, 이소프레노이드 탄화수소의 구성 블록은 탄화수소 이소프렌, CH₂=C(CH₃)-CH=CH₂로서 간주될 수 있지만, 이소프렌 자체는 이소프레노이드 생합성의 중간체가 아니라 최종 생성물인 것으로 공지되어 있다. 이소프레노이드 탄화수소는 이들이 함유하는 이소프렌(C₅H₈)의 수에 의해 분류된다. 따라서, 모노테르펜은 2개, 세스퀴테르펜은 3개, 디테르펜은 4개, 세스터테르펜은 5개, 트리테르펜은 6개, 테트라테르펜은 8개의 이소프렌 단위를 갖는다. 테트라테르펜은 카로티노이드로 훨씬 더 통상적으로 알려져 있다.

리모넨 및 피넨은 모노테르펜의 예이다. 파르네솔 및 네롤리돌은 세스퀴테르펜 알콜의 예이다. 비타민 A₁ 및 피톨은 디테르펜 알콜의 예인 반면, 스쿠알렌은 트리테르펜의 예이다. 카로틴이라고 공지되어 있는 프로비타민 A₁은 테트라테르펜의 예이다. 모노테르펜 알콜인 게라니올은 산소 결합된 상태 및 통상의 상태 둘 다에서 액체이며, 살아있는 세포에 대해 안전하다.

약제학적 제형에 바람직한 불포화 탄화수소는 알켄 이소프레노이드, 예를 들면, 미리센, 시트릴렌, 시트랄, 피넨 또는 리모넨을 포함한다. 바람직한 불포화 탄화수소는 또한 직쇄에 2 내지 4개의 반복 이소프렌을 갖는 직쇄 이소프레노이드 알콜, 예를 들면, 테르피네올, 시트로넬롤, 네롤, 피톨, 멘톨, 게라니올, 게라닐게라니올, 리날로올 또는 파르네솔을 포함한다.

불포화 유기 화합물은 직쇄, 측쇄, 사이클릭 또는 나선형이거나 이의 배위에서 다른 분자와 착화될 수 있다. 불포화 유기 화합물은 천연에서 산화제와 결합하기 전에 기상 액체 또는 고체 상태로 존재할 수 있다.

열린 사슬 불포화 탄화수소는 다음과 같을 수 있다: C_nH_2n, 1개의 이중결합, n=2-20; C_nH_2n-2, 2개의 이중결합, n=4-20; C_nH_2n-4, 3개의 이중결합, n=6-20; C_nH_2n-6, 4개의 이중결합, n=8-20; C₂₅H₄₀, 세스터테르펜 탄화수소; 또는 C₃₀H₄₈, 트리테르펜 탄화수소.

모노사이클릭 불포화 탄화수소는 다음과 같을 수 있다: C_nH_2n-2, 1개 이중결합과 1개의 환, n=3-20; C_nH_2n-4, 2개의 이중결합과 1개의 환, n=5-20; C_nH_2n-6, 3개 이중결합과 1개의 환, n=7-20; C₂₅H₄₀, 세스터테르펜 탄화수소; 또는 C₃₀H₄₈, 트리테르펜 탄화수소.

바이사이클릭 불포화 탄화수소는 다음과 같을 수 있다: C_nH_2n-4, 1개의 이중결 합과 2개의 환, n=4-20; C_nH_2n-6, 2개 이중결합과 2개의 환, n=6-20; C₂₅H₄₀, 세스터테르펜 탄화수소; 또는 C₃₀H₄₈, 트리테르펜 탄화수소.

열린 사슬 불포화 알콜은 다음과 같을 수 있다: C_nH_2nO_m, 1개의 이중결합, n=3-20, m=1-4; C_nH_2n-2O_m, 2개의 이중결합, n=5-20, m=1-4; C_nH_2n-4O_m, 3개의 이중결합, n=7-20, m=1-4; C_nH_2n-6O_m, 4개의 이중결합, n=9-20, m=1-4; C₂₅H₄₀O_m, m=1-4, 세스터테르펜 탄화수소; 또는 C₃₀H₄₈O_m, m=1-4, 트리테르펜 탄화수소.

모노사이클릭 불포화 알콜은 다음과 같을 수 있다: C_nH_2n-2O_m, 1개의 이중결합과 1개의 환, n=3-20, m=1-4; C_nH_2n-4O_m, 2개의 이중결합과 1개의 환, n=5-20, m=1-4; C_nH_2n-6O_m, 3개의 이중결합과 1개의 환, n=7-20, m=1-4; C₂₅H₄₀O_m, m=1-4, 세스터테르펜 탄화수소; 또는 C₃₀H₄₈O_m, m=1-4, 트리테르펜 탄화수소.

바이사이클릭 불포화 알콜은 다음과 같을 수 있다: C_nH_2n-4O_m, 1개의 이중결합과 2개의 환, n=5-20, m=1-4; C_nH_2n-6O_m, 2개의 이중결합과 2개의 환, n=7-20, m=1-4; C₂₅H₄₀O_m, m=1-4, 세스터테르펜 탄화수소; 또는 C₃₀H₄₈O_m, m=1-4, 트리테르펜 탄화수소.

약제학적 제형의 총 중량을 기준으로 하여, 알켄은 약 0.001 내지 약 30%, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 5.0%, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 약 3.0%로 다양할 수 있다.

불포화 탄화수소를 산화시키는, 약제학적 제형의 산소 함유 산화제는 일중항 산소, 삼중항 상태의 산소, 수퍼옥사이드(superoxide) 음이온, 오존, 페리오데이트, 하이드록실 라디칼, 과산화수소, 알킬 퍼옥사이드, 카바밀 퍼옥사이드, 벤조일 퍼옥사이드 또는 전이원소, 예를 들면, 몰리브덴에 결합된 산소(예를 들면, MoO₅)일 수 있다.

"활성화된 산소"를 손상되지 않은 이소프레노이드 알콜, 예를 들면, 게라니올에 결합시키는 바람직한 방법은 물 또는 극성 용매의 부재하에 암흑에서 0 내지 20℃의 온도에서 오존화시키는 것이다. 이어서, 게라니올 "오존화물"을 암흑에서 100% DMSO에 용해 및 안정화시켜, 생성물의 조기 분해를 방지한다. 이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 오존화물이 아닌, 게라니올 오존의 테트라옥산 퍼옥사이드계 이량체 부산물의 촉매적 분해는 수퍼옥사이드 음이온의 존재하에서 세포내에서 일어나는 것으로 여겨진다. 방출되는 최종 반응성 치료제는 과산화수소 및 아세트산이다.

약제학적 제형은 또한 투과 용매를 사용한다. 산소-결합된 불포화 탄화수소를 안정화시키는 투과 용매는 연화제, 액체, 리포솜, 미셸 막 또는 증기일 수 있다. 사용 가능한 투과 용매는 수용액, 지방, 스테롤, 레시틴, 인지질, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 메틸설포닐메탄, 폴리비닐피롤리돈, pH-완충 염수 및 디메틸설폭사이드("DMSO")를 포함한다. 바람직한 투과 용매는 DMSO, 폴리비닐피롤리돈 및 pH-완충 염수를 포함한다. 가장 바람직한 투과 용매는 DMSO이다.

약제학적 제형의 총 중량을 기준으로 하여, 투과 용매는 약 50 내지 약 99%, 바람직하게는 약 90 내지 약 98%, 보다 바람직하게는 약 95 내지 약 98%로 다양할 수 있다.

"안정화된" 퍼옥사이드계 분자 및 이의 투과 용매는 FDA(the Food and Drug Administration)에 의해 규제된 생산에 최근 사용되고 있는 성분으로부터 제조된다. 이러한 성분은 DMF(Drug Master Files), 약물 모노그래프의 주제이며, USP/NF에서 발견되고, 일반적으로 안전한 것으로 간주되는 것("GRAS")이다.

약제학적 제형의 또 다른 성분은 킬레이트화 염료이다. 염료는 바람직하게는 킬레이트화된 2가 또는 3가 금속, 예를 들면, 철, 구리, 망간, 주석, 마그네슘 또는 스트론튬을 함유한다. 바람직한 킬레이트화 금속은 철이다. 광화학 여기하에서 산소를 감작화시키려는 메탈로포르피린과 같은 킬레이트화 염료의 경향은, 산소 함유 시스템에 결합하는 페로포르피린 및 구리 포르피린의 경향과 마찬가지로, 널리 공지되어 있다. 사용 가능한 염료는 천연 또는 합성 염료를 포함한다. 이러한 염료의 예는 포르피린, 로즈 벤갈, 클로로필린, 헤민, 포르핀, 코린스, 텍사프린, 메틸렌 블루, 헤마톡실린, 에오신, 에리트로신, 플라비노이드, 락토플라빈, 안트라센 염료, 히페리신, 메틸콜안트렌, 중성 레드, 프탈로시아닌, 플루오레세인, 유멜라닌 및 페오멜라닌을 포함한다. 바람직한 염료는 천연 또는 합성 포르피린, 헤마토포르피린, 클로로필린, 로즈 벤갈, 이들의 각각의 동족체 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 가장 바람직한 염료는 천연 포르피린, 예를 들면, 헤마토포르피린 및 로즈 벤갈이다. 염료는 광자, 레이져, 이온화 방사선, 포논, 전기 심장 펄스, 전기천공(electroporation), 자기 펄스 또는 연속 유동 여기에 민감할 수 있다.

약제학적 제형 또는 조성물의 총 중량을 기준으로 하여, 염료는 약 0.1 내지 약 30%, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 5%, 보다 바람직하게는 약 0.8 내지 약 1.5%로 다양할 수 있다.

약제학적 제형의 추가의 성분은 방향족 레독스 화합물, 예를 들면, 퀴논이다. 방향족 레독스 화합물은 어떠한 치환되거나 비치환된 벤조퀴논, 나프토퀴논 또는 안트로퀴논이라도 가능하다. 바람직한 방향족 레독스 화합물은 벤조퀴논, 메틸-벤조퀴논, 나프토퀴논 및 메틸-나프토퀴논을 포함한다. 가장 바람직한 방향족 레독스 화합물은 메틸-나프토퀴논이다.

약제학적 제형의 총 중량을 기준으로 하여, 방향족 레독스 화합물은 약 0.01 내지 약 20.0%, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 10%, 보다 바람직하게는 약 0.1 내지 약 0.5%로 다양할 수 있다.

약제학적 제형은 또한 바람직하게는 에너지원 또는 전자 공여체에 의해 활성화된다. 유용한 전자 공여체는 전류, 아스코르베이트 또는 아스코르브산, NADH, NADPH 및 게르마늄 세스퀴옥사이드를 포함한다. 바람직한 전자 공여체는 아스코르베이트 및 게르마늄 세스퀴옥사이드를 포함한다. 가장 바람직한 전자 공여체는 염 형태의 아스코르브산이다.

약제학적 제형의 총 중량을 기준으로 하여, 전자 공여체는 약 0.01 내지 약 20%, 바람직하게는 약 1 내지 약 10%, 보다 바람직하게는 약 1 내지 약 5%로 다양할 수 있다.

생체내에서 생물학적 효과를 수득하기 위해, 약제학적 제형을, 수퍼옥사이드 발생 킬레이트화 염료 및 방향족 퀴논과 함께, 오존화물이라기 보다는 불포화 탄화수소의 오존 분해-발생된 퍼옥사이드계 생성물로서 주입하는 것이 바람직하다. 불포화 탄화수소 생성물, 즉 퍼옥사이드계 이량체 분자는 수용성 안정화 용매에서 안정화되어야 하며, 지질막을 투과할 수 있어야 한다.

강력하게 활성화된 염료 요법의 연구자들은 오랫동안 수퍼옥사이드 발생 염료 및 방향족 레독스 화합물이, 전형적으로 카탈라아제가 부족한 감염 세포 및 이형성 세포로 우선적으로 흡수된다고 알고 있었다. 이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 카탈라아제-유도된 퍼옥사이드의 파괴는 자연적으로 또는 약제학적 제형에 의해 표적 세포에서 억제되어야 한다. 또한, 퍼옥사이드계 이량체가 수퍼옥사이드 발생 염료에 의해 활성화되어 이량체로의 전자 공여를 개시하고 과산화수소 및 아세트산을 세포내로 방출시키도록 해야 한다. 염료의 전자 활성화가 항상 빛을 필요로 하는 것은 아니며, 오히려 예를 들면, 심장 펄스에 의해 제공되는 작은 전기 펄스를 통해 발생할 수 있다. 이때, 감염된 대식세포내에서의 과산화 반응이 세포내에서의 미세소관의 프레닐화 단백질 결합을 파괴하거나, 감염 독소를 파괴하거나, 대식세포 호스트 세포의 아폽토시스를 유도하는 경향이 있다.

약제학적 제형은 안정한 성분들의 배합물이다. 이러한 성분들은 바람직하게는 별도의 용기에 무수 고체 성분 및 액체 성분으로서 저장할 수 있으며, 이후 사용 부위에서 혼합한다. 무수 고체 성분은 바람직하게는 킬레이트화 염료 및 방향족 레독스 화합물을 포함한다. 액체 성분은 바람직하게는 투과 용매와 함께 산소 함유 활성제에 의한 불포화 탄화수소의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또 는 반응 생성물을 포함한다. 투여는 정맥내 투여가 바람직하다. 재구성된 생성물은 바람직하게는 염수에 희석되는 농축물로서 정맥내 투여할 수 있다. 가능한 투여 경로는 또한 국소, 안과, 복강내, 직장 및 협막내 전달이다. 근육내 주사는 국부 자극을 발생하는 경향이 있기 때문에 바람직하지 않다.

생체내 약제학적 제형의 투여는 황반 드루젠 축적을 감소시키고, ARMD를 앓고 있는 환자의 시력을 향상시키는 데 효과적이다.

실시예 1. 불포화 탄화수소의 오존 분해

알켄의 오존 분해는 용매 속에서 또는 순수한 상태로 수행할 수 있다. 어느 경우에도, 반응의 퍼옥사이드계 생성물의 폭발적인 분해를 피하는 데 있어서 반응 혼합물을 냉각시키는 것이 중요하다.

액체 알켄의 오존 분해를 위해서는 다음의 일반적인 과정이 전형적이다.

자기 교반기가 장착된 1L 플라스크에 알켄(2mol)을 충전하고, 장치를 칭량한다. 플라스크에 냉욕(빙수 또는 빙염)을 둘러싼다. 내용물이 5℃ 미만으로 냉각되면, 교반을 시작하고 무수 산소 중의 오존의 스트림(전형적으로 3% 오존)을 혼합물을 통해 통과시킨다. 오존화된 산소를 유리 프릿을 통해 분산시키는 것이 유리하지만, 교반 용액의 경우에는 이것이 필요치 않다. 주기적으로, 가스 스트림을 중단시키고, 반응 플라스크를 칭량하거나 반응 혼합물을 샘플링한다. 이어서, 가스 스트림을 재가동시킨다.

반응 플라스크의 질량이 충분한 중량 증가를 나타내거나 반응 혼합물의 양자 자기 공명("¹H NMR") 스펙트럼이 올레핀계 양자 공명의 강도의 목적하는 감소(통상적으로 약 50%)를 나타내면, 가스 유동을 중단시킨다.

포화 탄화수소 또는 염소화 탄화수소와 같이 오존에 대해 비반응성인 용매 중의 알켄의 용액으로 대체하여 오존 분해를 상기와 같이 수행할 수 있다. 또한, 독립적인 방식으로 반응에 영향을 미치지 않으면서 알켄을 알켄올로 대체하여 용매의 존재 또는 부재하에서 오존 분해를 상기와 같이 수행할 수 있다.

이어서, 반응 혼합물을 냉각된 투과 용매에 서서히 붓는다.

실시예 2. 약제학적 제형의 제조

본 발명에 바람직한 약제학적 제형을 다음과 같이 제조하였다:

(1) 오존/순수한 산소 가스 혼합물 120mg/L를 알카디엔 알콜, 3,7-디메틸-2,6-옥타디엔-1-올(게라니올)을 통해 시간당 가스 1L로 하여 살포하는 단계,

(2) 반응 온도를 약 5℃로 유지하는 단계,

(3) 소량 분취액의 반응 생성물을 매시간마다 제거하여, 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물의 형성을 ¹H NMR에 의해 측정하는 단계,

(4) 이용 가능한 불포화 결합의 약 50% 이상이 반응한 경우 반응을 중단시키는 단계,

(5) 생성물 혼합물을 디메틸설폭사이드(1:10)로 희석시켜, 용액 또는 분산액을 수득하는 단계,

(6) 표적 생물학적 시스템에 사용하기 전에, 헤마토포르피린, 로즈 벤갈 및 메틸-나프토퀴논 무수 분말의 혼합물을 염수 정맥내 주입에 의해 표적 생물학적 시스템에 전달하는 경우 분산된 각 성분의 농도가 20μM이 되도록 하기에 충분한 양으로 용액 또는 분산액에 가하는 단계. 임의로 아스코르베이트를 사용전에 제형에 첨가할 수 있다.

실시예 3. 약제학적 제형의 예

두 가지 바람직한 약제학적 제형은 다음과 같다:

A. 중량% 성분

0.54^*	게라니올의 오존화로부터의 아세탈 퍼옥사이드의 테트라옥산 이량체
98.00	DMSO
0.83	헤마토포르피린
0.24	메틸나프토퀴논
0.39	로즈 벤갈

^* 질량 분광분석법으로 측정

B. 중량% 성분

0.54^*	게라니올의 오존화로부터의 아세탈 퍼옥사이드의 테트라옥산 이량체
98.00	DMSO
0.83	헤마토포르피린
0.24	메틸나프토퀴논
0.39	클로로필린 나트륨-구리 염

^* 질량 분광분석법으로 측정

실시예 4. 실험 과정

황반 드루젠 축적을 감소시키고 시력을 회복시키는 데 있어서의 약제학적 제형의 효능을 시험하기 위해, 신생 혈관 생성 또는 레이져 치료의 사전 이력은 없으나 건성 ARMD로 증명된 23명의 환자에게 약제학적 제형의 예를 투여하였다. 시험하는 동안 또는 3개월 전부터 환자들 중 아무도 아연 보충, 혈장 사혈 또는 비타민 요법을 처방받지 않았다. 모든 환자들은 최소 10년간 하루 한갑 이상의 흡연 이력이 있었다. 모두에게 시험 및 그후 1년 동안 금연하도록 전하였다. 각각의 환자는 죽상경화증성 심혈관 질환을 앓고 있었다. 예비-임상 교감성 파일럿 시험으로서, 윤리적인 이해관계로 인해 위약 "실명" 대조군의 사용은 하지 않았다.

상기 실시예 3으로부터의 제형 B를 갖는 약제학적 제형의 정맥내 주입(1cc를 표준 염수 100cc로 희석)을 9 내지 12회의 계획된 치료 동안 매달 3회 주입 세트로 매일 15분에 걸쳐 실시하였다. 개별 안구를 시험한 후, 최상의 시력 교정은 3개월, 6개월 및 1년째에 달성되었다.

실시예 5. 드루젠 감소

치료 기간 전후의 사진 및 혈관 조형 증거자료는 세포 성분의 재생, 공극의 폐쇄 또는 신생 혈관 생성의 이전 발병을 나타내지 않았다. 즉, 죽은 세포는 죽은채로 있었으며 색소 클럼핑은 변함이 없었다. 그러나, 드루젠에 의한 맥락막 자동형광으로부터 공극에 의해 생성된 과형광 "윈도우 결함(window defect)"으로의 형광 변화에 의해 입증되는 바와 같이, 드루젠은 수 주내에 소멸하였다. 주요 예민성 개선에도 불구하고, 이전의 세포사 및 색소 클럼핑의 형태학적 변화는 변화가 없었으며 영구적이었다. 그러나, 이러한 결과는 약제학적 제형이 드루젠을 감소시키는 데 효과적임을 나타낸다.

실시예 6. 시력 개선

표 1은 십진법(비-스넬렌) 형태로 주지된 바와 같은, 치료 후의 시력 달성의 평균 회복을 요약한 것이다. 표에서 알 수 있는 바와 같이, 환자들은 치료한지 1년 후에 평균 48.05%의 시력 개선을 보였다.

평균 시력

	치료전	3개월	6개월	12개월
제1 안구	0.2	0.63	0.66	0.72
제2 안구	0.22	0.63	0.65	0.73
양안	0.24	0.63	0.65	0.72
전반적인 증가율	---	38.95%	41.30%	48.05%

참고 문헌

하기의 미국 특허 문헌 및 공보가 본원에 참고로 인용되어 있다:

미국 특허

미국 특허 제4,451,480호(DeVillez)

미국 특허 제4,591,602호(DeVillez)

미국 특허 제4,983,637호(Herman)

미국 특허 제5,086,076호(Herman)

미국 특허 제5,126,376호(Herman)

미국 특허 제5,190,977호(Herman)

미국 특허 제5,190,979호(Herman)

미국 특허 제5,260,342호(Herman)

미국 특허 제5,270,344호(Herman)

미국 특허 제5,364,879호(Herman)

다른 공보들

DalleDonne, I., Milzani, A. , Colombo, R. Actin assembly by cadmium ions. Biochim Biophys Acta vol. 1357 (1), pp.5 - 17, 1997.

Levy, L. , Vredevoe, D. L., Cook, G. In vitro reversibility of cadmium-induced inhibition of phagocytosis. Environ Res vol. 41 (2), pp.361 - 71, 1986.

Claims

산소 함유 산화제에 의한 멘톨 또는 알켄의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물[여기서, 알켄은 테르피네올, 시트로넬롤, 네롤, 리날로올, 피톨, 게라니올, 페릴릴 알콜, 멘톨, 게라닐게라니올 또는 파르네솔을 포함한다]을 약제학적 제형의 약 0.001 내지 약 30중량%,

디메틸설폭사이드, 스테롤, 레시틴, 프로필렌 글리콜 또는 메틸설포닐메탄을 포함하는 투과 용매를 약제학적 제형의 약 50 내지 약 99중량%,

포르피린, 로즈 벤갈, 클로로필린, 헤민, 코린스, 텍사프린, 메틸렌 블루, 헤마톡실린, 에오신, 에리트로신, 락토플라빈, 안트라센 염료, 히페리신, 메틸콜안트렌, 중성 레드, 프탈로시아닌, 플루오레세인, 유멜라닌 또는 페오멜라닌을 포함하는, 킬레이트화된 2가 또는 3가 금속을 함유하는 염료를 약제학적 제형의 약 0.1 내지 약 30중량%, 및

치환되거나 비치환된 벤조퀴논, 나프토퀴논 또는 안트로퀴논을 포함하는 방향족 레독스 화합물을 약제학적 제형의 약 0.01 내지 약 20중량%로 포함하는 유효량의 약제학적 제형을 환자에게 투여함을 포함하여, 연령 관련 황반 변성("ARMD") 환자를 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 알켄이 액체 형태, 용액 또는 분산액으로 존재하는 방법.
제1항에 있어서, 알켄이 고정유, 에스테르, 지방산 또는 에테르에 함유되어 있는 방법.
제1항에 있어서, 산소 함유 산화제가 일중항 산소, 삼중항 상태의 산소, 수퍼옥사이드(superoxide) 음이온, 페리오데이트, 하이드록실 라디칼, 과산화수소, 알킬 퍼옥사이드, 카바밀 퍼옥사이드, 벤조일 퍼옥사이드 또는 전이원소에 결합된 산소를 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 산소 함유 산화제가 오존을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 투과 용매가 액체, 미셸 막, 리포솜, 연화제 또는 증기인 방법.
제1항에 있어서, 투과 용매가 디메틸설폭사이드("DMSO")인 방법.
제1항에 있어서, 염료가 포르피린, 로즈 벤갈 또는 이의 혼합물인 방법.
제1항에 있어서, 금속이 철을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 금속이 구리, 망간, 주석, 마그네슘 또는 스트론튬을 포함 하는 방법.
제1항에 있어서, 전자 공여체를 추가로 포함하는 방법.
제11항에 있어서, 전자 공여체가 아스코르브산 또는 이의 약제학적 염을 포함하는 방법.
오존과 산소의 혼합물에 의한 게라니올의 산화로부터 생성된 퍼옥사이드계 화학종 또는 반응 생성물,

디메틸설폭사이드("DMSO"),

헤마토포르피린, 로즈 벤갈 또는 헤마토포르피린과 클로로필린과의 혼합물을 포함하는, 킬레이트화된 2가 또는 3가 금속을 함유하는 염료, 및

메틸나프토퀴논을 포함하는 유효량의 약제학적 제형을 환자에게 투여함을 포함하여, 연령 관련 황반 변성("ARMD") 환자를 치료하는 방법.