KR20070015913A - 당뇨병성 망막병증 및 황반 변성에서의 드루젠 형성의치료용 약제 - Google Patents

당뇨병성 망막병증 및 황반 변성에서의 드루젠 형성의치료용 약제 Download PDF

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로버트 에이. 랜더스
데이비드 피. 빙아멘
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알콘, 인코퍼레이티드
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Abstract

독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에서의 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제는 당뇨병성 망막병증 또는 연령관련 황반 변성에서의 드루젠 형성을 치료하는 방법을 제공한다. Nrf2/ARE 경로에 작용하는 구조적으로 다양한 약제는 독성 대사산물 및 생체이물에 대한 보호를 가지며 화학적으로 다양한 세포보호 특징을 가지는 단백질과 효소의 발현을 유도한다. 상기 약제는 마이클 부가 수용체(Michael Addition acceptor), 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 게니스테인 이외의 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 약리학적 활성 유도체 또는 그의 유사체 등의 소정의 친전자체 및 산화제를 포함한다.

Description

당뇨병성 망막병증 및 황반 변성에서의 드루젠 형성의 치료용 약제{AGENTS FOR TREATMENT OF DIABETIC RETINOPATHY AND DRUSEN FORMATION IN MACULAR DEGENERATION}
본 발명은 당뇨병성 망막병증 및 연령 관련 황반 변성에서의 드루젠(drusen) 형성과 관련된 예방제 및 치료제의 분야에 관한 것이다.
당뇨병성 망막병증은 혈관이 일렬로 있는 세포에 있어서의 변화로 인해 당뇨병에서 발달되는 눈의 질환이다. 당뇨병에 있어서와 같이, 당(glucose) 레벨이 높아지면, 당은 여러 가지 방식으로 손상을 초래할 수 있다. 예를 들어, 당 또는 당의 대사 산물은 단백질의 아미노기에 결합해서 조직 손상을 가져온다. 또한, 과잉의 당은 소르비톨의 축적시 폴리올 경로에 들어가게 된다. 소르비톨은 망막의 세포에 의해 물질대사로 변화될 수 없고, 또한, 높은 세포내 삼투압, 세포내 부종, 확산 부전, 조직 저산소증, 모세관 세포 손상 및 모세관 약화에 기여할 수 있다. 당뇨병성 망막병증은 모세관 기저막의 비후화(thickening)를 포함하고, 혈관주위세포가 모세관의 내피세포와 접촉하는 것을 방지한다. 혈관주위세포의 손 실은 모세관의 누설을 증대시켜 혈액망막장벽의 파손을 초래한다. 약화된 모세관은 동맥류 형성, 나아가서는 누설을 초래한다. 이들 고혈당증의 작용은 또한 망막의 신경세포성 기능을 손상시킬 수 있다. 이것은 비증식성의 당뇨병성 망막병증이라 불리는 당뇨병성 망막병증의 초기 단계이다.
망막 모세관은 당뇨병에 있어서 폐색으로 되어 망막의 허혈 영역을 초래한다. 비충만 조직은 기존의 혈관으로부터 새로운 성장을 유도해냄으로써 반응한다(혈관신생). 이들 새로운 혈관은 또한 해당 새로운 혈관이 물러서 눈 속으로 혈액을 누출시키는 경향이 있으므로, 증식성의 당뇨병성 망막병증이라 불리는 조건인 시력의 손실을 초래할 수도 있다.
대두에서 발견된 게니스테인(genistein)인 이소플라보노이드의 경구 투여는 실험적으로 유도된 당뇨병 래트(rat)에서 망막 혈관누설을 감소시키는 것으로 보고되어 있다(Invest Ophthalmol Vis Sci, 2001, 42, 2110-2114). 가오 엑스(Gao, X.) 등에 의한 PCT 특허출원 제 PCT/US02/40457호(공개공보 WO 03/051313)에는 인간 망막 안료 상피 세포에 있어서의 설포라판(sulforaphane)에 의한 제 2기 해독 효소의 유도를 제공하는 것으로 보고되어 있다. 그러나, 상피세포는 혈관 내피 세포와는 다르고, 내피 조직으로부터의 특정 치료제에 대한 생물학적 반응은 상피세포의 생물학적 반응으로부터 예측될 수 없다.
인간 당뇨병의 양호한 혈당 제어를 유지할 때의 어려움을 부여해서, 망막 모세관 세포 및 망막 뉴런(neuron) 손상을 저해하거나 늦추는 약물의 개발은 당뇨병성 망막병증에서 일어나는 조기의 세포 손상을 감소시키는 수단을 제공한다.
황반 변성은 높은 시력의 원인으로 되는 황반으로 불리는, 중앙 망막의 부분의 광수용체의 손실이다. 연령 관련 황반 변성(AMD: age-related macular degeneration)은 "건식" 또는 "습식"의 어느 것으로도 설명된다. AMD의 습식의 삼출 신생혈관 형태는 AMD를 지닌 것의 약 10%에 영향을 미치고, 망막색소상피(RPE: retinal pigment epithelium)를 통해 성장하는 비정상 혈관을 특징으로 하므로, 출혈, 삼출, 흉터 형성 또는 심각한 망막 박리를 초래한다. AMD 환자의 90%는 망막색소상피의 위축 및 황반 광수용체의 손실을 특징으로 하는 건조 형태를 지닌다. 현재 어떠한 형태의 AMD에 대해서도, 광선역학 요법에 의해 감소의 점에서 일부 성공을 얻고 있지만, 치료는 되지 않고 있다.
드루젠은 RPE 밑에서 나이가 듦에 따라 축적되는 조직파편 같은 물질이다. 드루젠은 안저 검사(funduscopic eye examination)를 이용해서 관찰된다. 정상의 눈은 드루젠이 없는 황반을 지닐 수 있지만, 드루젠은 망막 주변에 풍부할 수 있다. 황반 시력의 어떠한 손실이 없는 상태에서 황반에서의 연질의 드루젠의 존재는 AMD의 초기 단계인 것으로 간주된다. 드루젠은 수개의 단백질, 변성 단백질 또는 단백질 부가체와 함께 각종 지질, 다당류 및 글리코사미노글리칸를 함유한다.
Crabb, J. W. 등(Proc Natl Acad Sci 99: 23, 14682-14687)은 정상의 AMD 공여체 눈(donor eyes)으로부터 단리된 드루젠의 단백체(proteomic) 분석을 제공하는 것으로 보고하고 있다. 화학적 산화제로부터 배양된 인간 RPE 세포의 보호는 올티프라즈, 디티오에티온(Invest Ophthalmol Vis Sci, 2002, 43, 3550-3554), 설포라판, 이소티오시아네이트(Proc Natl Acad Sci, 2001, 98, 15221-15226) 및 디메틸 퓨마레이트(Prog Ret Eye Res, 2000, 19, 205-221)에 의해 제공되는 것으로 보고되어 있다. 그러나, 드루젠 형성이 이러한 처치에 의해 영향받는 것에 대해 이들 문헌에서는 어떠한 제안도 제공하고 있지 않다.
드루젠 형성을 제기하고, 이에 따라 AMD의 진행성 기질을 관리하는 일반적으로 허용된 치료법은 없다. 건강과 행복에 대한 AMD의 충격, 그리고 이전의 치료 방법의 부적합성에 비추어, 초기 단계의 AMD, 특히, 드루젠 침착물의 형성을 해결하는 개선된 치료 방법을 지닐 것이 요망되고 있다.
[본 발명의 개요]
본 발명에 의하면, 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서의 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가에 대한 촉진 활성을 지닌 약제는 당뇨병성 망막병증에 의한 망막 혈관 및 신경 세포 손상의 지연 또는 예방에 있어서 보호 또는 치료 효과를 제공한다. 이러한 약제는 황반 변성을 수반하는 드루젠 침착물의 형성에 대한 저해 작용도 제공한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 "Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성"은 Nrf2의 핵으로의 운반 또는 이용성을 증진시키는 약제를 의미한다. Nrf2 단백질의 핵으로의 전위는 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물의 발현시 후속의 증가를 가능하게 한다.
본 발명의 방법은 Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 약제 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물을 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상의 당뇨병성 망막병증의 치료 방법을 제공한다. 상기 대상은 당뇨병성 망막병증 또는 드루젠 형성을 나타낼 위험, 즉 가능성이 있을 수 있고, 또는 당뇨병성 망막병증 또는 드루젠 형성의 증상을 지닐 수 있다. 본 발명의 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제는 마이클 부가 수용체(Michael Addition acceptor), 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 게니스테인 이외의 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함한다. 하나의 구체예에 있어서, 약제는 설포라판과 같은 이소티오시아네이트, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 혹은 유사체를 포함한다. 다른 구체예에서, 약제는 올티프라즈와 같은 1,2-디티올-3-티온, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 혹은 유사체를 포함한다.
또, 본 발명의 방법은 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 약제 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물을 대상에 투여하는 것을 포함하는, 대상의 망막밑 드루센 형성을 저해하는 방법을 제공한다. 상기 약제는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체예는 대상에 있어서 당뇨병성 막망병증에 대한 시험 약제의 치료 반응을 예측하는 방법이며, 상기 시험 약제는 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 것을 특징으로 한다. 상기 방법은 망막 세포의 제 1시료를 산화성 스트레스에 노출하고; 망막 세포의 제 2시료를 시험약제와 조합해서 산화성 스트레스에 노출하고; 노출된 제 1시료로부터의 생존 세포수를 노출된 제 2시료로부터의 생존 세포수와 비교하는 것을 포함한다. 제 2시료로부터의 생존 세포수가 제 1시료로부터의 생존 세포수보다 많은 경우에는, 시험 약제는 대상에게 당뇨병성 망막병증에 대한 치료반응을 제공하는 것으로 예측된다.
독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서의 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제의 투여는 안구내 주입, 서방성 전달 기구의 이식, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여, 전신 주입, 또는 기타 전신 투여에 의한 방법으로 행할 수 있다.
본 발명의 방법의 다른 구체예에서, 대상은 당뇨병성 망막병증 또는 드루젠 형성으로 진단받고, 또 다른 구체예에서 대상은 당뇨병성 망막병증 또는 드루젠 형성의 증상을 갖는다.
[본 발명의 상세한 설명]
본 발명은 당뇨병성 망막병증 및 연령 관련 황반 변성에서의 드루젠 형성의 치료 방법으로서 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제의 용도에 관한 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "당뇨병성 망막병증의 치료"란 용어는 당뇨병성 망막병증 또는 그의 증상의 발달의 지연 또는 예방, 이들의 진행 억제, 또는 이들의 작용의 완화를 의미한다. 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에서의 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가의 촉진은 당뇨병 상태에서의 망막 혈관 모세관 및 망막 뉴런의 보호를 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 " 드루젠 형성의 치료"란 용어는 망막밑 영역에 존재하는 드루젠의 발달의 지연 또는 예방, 이들의 진행 억제, 또는 이들의 작용의 완화를 의미한다. 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에서의 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가의 촉진은 드루젠 형성의 치료에 의해 황반의 보호를 제공한다.
Nrf2의 핵 전위는 임의의 친전자체(electrophile) 및 산화제에 노출된 세포 내에서 유도된다. Nrf2의 핵 전위로 인해 유도된 유전자는 친전자체에 대한 보호를 향상시키고, 손상된 단백질의 복구 또는 분해를 증진시키는 해독 효소를 만든다. 이들 효소의 유도는 전사 수준에서 조절되며, 특정 증강자, 항산화제 반응 요소 또는 유전자 부호화된 효소의 프로모터에서 발견되는 ARE(항산화제 반응 요소: antioxidant response element)에 의해 매개된다. ARE의 서열 내용, 화학적 유도 인자 성질 및 세포 형태는 특정 유전자 내의 증강자의 활성에 영향을 준다.
전사 인자 Nrf2는 Nrf2 전사 인자 족의 맴버이고 항산화제 반응 요소(ARE)-매개된 유전자 발현의 상향조절을 담당한다. Nrf2는 산화 스트레스 신호에 대한 반응에서 또는 구조적으로 유전자 전사를 활성화하는 프로모터의 ARE지역에 결합에 의한 유전자 발현을 유도한다. Nrf2는 정상 상태 하에서 액틴 세포 골격에 고정된 세포질 단백질인 억제 단백질 Keap1에 의해 결합되어 세포질에 존재한다고 여겨진다. 이론에 얽매이는 것을 원하는 일 없이, Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 약제가 Nrf2와 상호작용하는 세포질 인자 Keap1의 시스테인이 풍부한 조절 지역과 경쟁할 수 있는 것으로 여겨진다(Dinkova-Kostova, A.T. 등, Proc Natl Acad Sci, USA, 99:11908-11913(2002)). 설포라판과 같은 어떤 화합물에 의한 Nrf2-Keap1 복합체의 분열은 Nrf2가 유리되어 핵으로 전위되고, 여기서, ARE-조절된 유전자 발현의 유도를 일으키는 유전자의 ARE 지역에서 다른 전사 인자(즉, Maf, c-Jun 등)와 이질이량체화(heterodimerize)될 수 있다.
이 Nrf2/ARE 경로에 의해 발현된 효소 및 단백질은 화학적으로 다양한 세호 보호 특징을 소유하고 있으며, 독성 대사물질 및 생체 이물에 대한 방어이다. Nrf2/ARE 경로를 통해 발현되는 것으로 알려진 효소 및 단백질은 글루타티온-S-전이효소, UDP-글루쿠로노실전이효소(glucuronosyltransferase), NADP(H) 퀴논 산화환원효소, γ-글루타밀시스테인 합성효소, 샤페론/스트레스 반응 단백질, 및 유비퀴틴/프로테아좀 단백질을 포함한다.
Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제는 하기의 예를 포함한다:
디에틸 말레에이트 또는 디메틸푸마레이트와 같은 마이클 부가 수용체(예를 들어, α,β-불포화 카보닐 화합물);
레스베라트롤과 같은 디페놀,
2(3)-tert-부틸-4-하이드록시아니솔과 같은 부틸화 하이드록시아니솔 ,
피롤리딘디티오카바메이트와 같은 티오카바메이트,
tert-부틸-하이드로퀴논과 같은 퀴논,
설포라판과 같은 이소티오시아네이트, 그의 전구물질 글루코시놀레이트, 글로코라파닌, 또는 페네틸 이소티오시아네이트(PEITC),
올티프라즈와 같은 1,2-디티올-3-티온,
3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔,
에톡시퀸,
3-하이드록시쿠마린과 같은 쿠마린,
드루젠 형성의 치료용의 케르세틴 또는 커큐민과 같은 플라보노이드, 당뇨병성 망막병증의 치료용의 케르세틴 또는 커큐민과 같은 게니스테인 이외의 플라보노이드,
디알릴 설피드,
인돌-3-카르비놀,
에피겔로-3-카테킨 겔레이트,
엘라직 산,
그의 조합, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 그의 유사체.
마이클 수용체는 전자 끄는 기(electron withdrawing group)에 인접한 알켄을 갖는 분자이다. 전자 끄는 기는 통상적으로 카보닐이지만, 니트릴 또는 니트로기일 수도 있다. 비록 화학적으로 다양하지만, 이들 화합물은 친전자체이고 친핵성 설프하이드릴기와 반응하는 능력을 가진다. "그의 약리학적 활성 유도체"는 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 상기 화합물 및 그로부터 유도가능한 어떤 것 및 예를 들어, 에테르, 아미드, 또는 그의 염이 될 수 있는 것과 구조적으로 관련된 약제이다. "그의 약리학적 활성 유사체"는 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 상기 화합물의 어느 것과 구조적으로 유사한 약제이나, 예를 들어, 다른 원소의 원자에 의한 하나의 원자의 치환에 있어서 또는 특정 작용기의 존재 하에서와 같은 조성물에 있어서 약간 차이가 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명은 당뇨병성 망막병증 또는 연령관련 황반 변성과 관련된 드루젠 형성에 대한 치료 방법에 있어서 설포라판, 올티프라즈, 그의 약리학적 활성 유사체, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
설포라판(제품 번호 S6317, 시그마-알드리치사(Sigma-Aldrich)사 제품)은 예를 들어, 퀴논 환원효소, 글루타티온-S-전이효소 및 글루타티온 환원효소를 유도하는 것으로 공지되어 있다. 효소 유도는 인간 성인 망막 색소 상피 세포를 포함하는 다양한 세포주(cell line)에서 관찰된다(Zhang, Y. 등., Proc Natl Acad Sci, USA, 89:2399-2403(1992)). 설포라판 유사체는 예를 들어, 6-(이소티오시아나토-2-헥사논), 엑소-2-아세틸-6-이소티오시아나토노보네인, 엑소-2-(이소티오시아나토-6-메틸설포닐노보네인), 6-이소티오시아나토-2-헥산올, 1-(이소티오시아나토-4-디메틸포스포닐부탄,엑소-2-(1-하이드록시에틸)-5-)이소티오시아나토노보네인, 엑소-2-아세틸-5-이소티오시아나토노보네인, 1-(이소티오시아나토-5-메틸설포닐펜탄), 시스-3-(메틸설포닐)(사이클로헥실메틸이소티오시아네이트) 및 트랜스-3-(메틸설포닐)(사이클로헥실메틸이소티오시아네이트)를 포함한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같은 용어 "산화성 스트레스"는 예를 들어, 과산화물 라디칼, 하이드록실 이온 라디칼, 과산화수소, 싱글렛 산소 또는 지질 과산화물 등의 반응성 산소 종(ROS: Reactive Oxygen Species)의 레벨을 상승시키는 작용을 하는 제제에 노출되는 것을 의미한다. 산화성 스트레스는 ROS의 발생을 촉진시키는 생리조건을 유인시킴으로써, 그리고 실험용 당뇨 래트, 실험용 갈락토오스성 래트, Nrf2 결핍 생쥐에서, 또한 노화과정의 결과로서 나타나는 세포 항산화 시스템의 장애에 의해 얻어진다.
세포 배양 시스템에 있어서, 산화성 스트레스는 항산화 시스템의 저해에 의해 혹은 ROS의 생성 혹은 첨가에 의해 유도된다. 예를 들면, 과산화 수소 및 t-부틸 하이드로퍼옥사이드를 배지에 첨가할 수 있다. 메나디온을 첨가해서 과산화물의 공급원을 제공할 수도 있다. 또, 4-하이드록시노네날은 배지에 포함될 수 있는 과산화 지질의 말단 생성물이고, 퍼옥시니트릴은 과산화물의 존재하에 산화질소 공여체로부터 생성될 수 있다. 부티오닌-(S,R)-설폭시민은 중요한 세포 항산화제인 글루타티온의 합성을 저해한다. 또한, 높은 글루코오스하 또는 진행된 무효소(無酵素)당화(糖化) 말단 생성물의 존재하에 유지된 세포는 내인성(endogenous) ROS의 생성을 증대시킬 것이다.
또한, 허혈 저산소증 및 재관류(reperfusion)는 예를 들면, 생물학적 시스템상에 산화성 스트레스를 부여하도록 동물 모델과 세포 및 기관 배양시스템의 양쪽 모두에 이용될 수 있다.
본 명세서에서 이용되는 용어 "망막 세포"는 예를 들어 내피세포, 뉴런, 아교세포 또는 혈관주위세포를 포함한다.
투여 방법: 본 발명의 약제는 당업계에서 통상의 지식을 가진 자(이하 "당업자"라 칭함)가 충분히 공지된 기술을 사용하여 안구(예를 들어: 국소 안구 점적제 또는 연고; 맹관 내 또는, 공막 또는 안구 내에 인접하게 이식된 서방성 기구(slow release device); 안구 주위, 결막, 서브-테논(sub-Tenons), 전방 내, 유리체 내 또는 소관 내의 주사)에 또는 전신(예를 들어: 경구, 정맥내, 피하 또는 근육 내 주사; 비경구적, 피부 또는 비강 전달)에 직접 전달될 수 있다. 또한 본 발명의 약제는 안구 내 투입 또는 이식 장치로 제제화될 수 있는 것도 상정가능하다.
대상: 본 명세서에 기재된 당뇨병성 망막병증 또는 드루젠 형성에 대한 치료를 받는 대상은 당뇨병성 망막병증 또는 연령관련 황반 변성을 일으키는 드루젠 형성을 나타낼 가능성이 있거나 당뇨병성 망막병증 또는 연령관련 황반 변성과 관련된 드루젠 형성의 증상을 갖는 인간 또는 다른 동물이 될 수 있다.
제제 및 복용량: 본 발명의 약제는 적절한 안구용 담체 내에 용액, 현탁액 또는 에멀젼(분산제)으로서 투여될 수 있다. 하기는 본 발명에 의해 구체화된 가능한 제제의 예들이다.
양(중량%)
Nrf2 단백질 핵 전위 촉진 약제 0.01 내지 5; 0.01 내지 2.0; 0.5 내지 2.0
하이드록시프로필메틸셀룰로오스 0.5
염화나트륨 .8
염화 벤잘코늄 0.01
EDTA 0.01
NaOH/HCl 충분량(qs) pH 7.4
정제수 충분량 내지 100%
양(중량%)
Nrf2 단백질 핵 전위 촉진 약제 0.00005 내지 0.5; 0.0003 내지 0.3; 0.0005 내지 0.03; 0.001
인산 완충 식염수 1.0
염화 벤잘코늄 0.01
폴리소르베이트 80 0.5
정제수 충분량 내지 100%
양(중량%)
Nrf2 단백질 핵 전위 촉진 약제 0.001
제1 인산나트륨 0.05
제2 인산나트륨(무수) 0.15
염화나트륨 0.75
이나트륨 EDTA 0.05
크레모포 EL 0.1
얌화 벤잘코늄 0.01
NaOH 및/또는 HCl pH 7.3 내지 7.4
정제수 충분량 내지 100%
양(중량%)
Nrf2 단백질 핵 전위 촉진 약제 0.0005
인산 완충 식염수 1.0
하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린 4.0
정제수 충분량 내지 100%
다른 구체 예에서, 안과용 조성물은 안구 내 농도가 약 0.1 내지 100 나노몰(nM), 또는 다른 구체예에서는 1 내지 10nM을 제공하도록 제제화된다. 20 마이크로몰까지의 최고 혈장 농도는 전신 투여용으로 얻어질 수 있다. 국소 조성물은 숙련된 임상의의 일반적인 재량에 따라 하루에 1번 내지 4번 눈의 표면에 투여된다. 제제의 pH는 4 내지 9 또는 4.5 내지 7.4가 되어야 한다. 전신성 제제는 예를 들어, 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제를 약 10 내지 1000 ㎎, 약 10 내지 500 ㎎, 약 10 내지 100 ㎎ 또는 125 ㎎ 포함할 수 있다.
"유효량"은 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제의 양을 의미한다. 이와 같은 유전자 발현의 유도는 다른 독성 대사 산물뿐 아니라 반응성 친전자체의 독성에 대한 방어를 제공한다. 그러므로, 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제는 세포독성에 대한 보호를 제공한다. 이러한 보호는 당뇨병성 망막병증 또는 연령관련 황반 변성에서의 드루젠 형성을 나타낼 가능성이 있는 대상의 증상의 발병을 지연 또는 예방할 수 있다. 제제의 유효량은 예를 들어, 대상의 나이, 인종 및 성, 또는 망막병증의 경중도 또는 드루젠 형성도 등의 인자에 따라 달라질 수 있다. 하나의 구체예에서, 약제는 눈에 국소적으로 전달되고 치료상 복용량이 망막이나 드루젠에 도달됨으로써 당뇨병성 망막병증 또는 드루젠 형성 프로세스를 개선한다.
정밀 요법(precise regimen)은 임상의의 재량에 의존하지만, 형성된 용액 또는 용액들은 바람직하게는 눈에 각각 하루에 1번 내지 4번 각각의 용액(들)을 한 방울씩 또는 임상의사의 지시에 따라 투여된다.
허용가능한 담체 : 안과용으로 허용가능한 담체는 안구에 대한 자극이 없도록 최대한 적게 자극을 야기하며, 필요한 경우 적절한 보존을 제공하고, 균일 용량(homogenous dosage)에서 본 발명의 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 1종 이상의 약제를 전달하는 담체를 의미한다. 안과용 전달을 위해, 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제는 안과학적으로 허용가능한 보존제, 공-용매(co-solvent), 계면활성제, 점성 증강제, 침투 증강제, 완충제, 염화 나트륨, 또는 물과 배합되어, 수성의 무균 안과용 현탁액, 용액, 점성 또는 반점성 겔 또는 고체 또는 연고와 같은 반고체 조성물의 기타 유형을 형성할 수 있다. 안과용 용액 제제는 생리학적으로 허용가능한 등장성 수성 완충액에 약제를 용해시켜 제조될 수 있다. 또한, 안과용 용액은 약제의 용해를 도와주는 안구학적으로 허용가능한 계면 활성제를 포함할 수 있다. 하이드록시메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈 등의 점성 형성 화합물은 화합물의 체류를 증진시키기 위해 본 발명의 조성물에 첨가될 수 있다.
무균 안연고 제제를 제조하기 위해, 독성 대사 산물을 해독하고 제거하는 유전자 산물에 있어서의 Nrf2 단백질의 핵 전위 및 후속의 증가를 촉진하는 약제는 광유, 액상 라놀린(liquid lanolin), 또는 흰색 페트롤라툼과 같은 적합한 매개체에서 보존제와 배합된다. 무균 안과용 겔 제제는 다른 안과용 제제에 대한 당업계에 공지된 방법에 따라, 예를 들어, CARBOPOL®-940(BF Goodrich, Chalotte, NC) 등을 조합하여 제조한 친수성 염기 중에 약제를 현탁시켜 제조될 수 있다. 예를 들어, VISCOAT®(미국 텍사스주의 포트 워스에 소재한 알콘 레보레터리즈사(Alcon Laboratories, Inc.) 제품)는 안구내 주사용으로 사용될 수 있다. 본 발명의 다른 조성물은 안구내에 본 발명의 약제가 적게 침투될 때, CREMOPHOR®(미국 미주리주의 세인트 루이스시에 소재한 시그마-알드리치사 제품) 및 TWEEN® 80(폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 시그마-알드리치사 제품)과 같은 침투 증강제를 포함할 수 있다.
도 1은 산화제 스트레스인 t-부틸 하이드록시퍼옥사이드에 노출된 망막내포세포에 있어서의 퀘르세틴(quercetin)의 세포보호 작용을 설명하는 도면으로, 도면 중의 기호는 다음과 같다: ▒: 대조예; ■: +케르세틴; ▨: +부티오닌-(S,R)-설폭시민;▧: +케르세틴 및 부티오닌-(S,R)-설폭시민; *: 각각의 t-BOOH 대조군 P < 0.001보다 큼; #: 각각의 t-BOOH 대조군 P < 0.001보다 작음;
Figure 112006051171106-PCT00001
: 제로 t-BOOH 대조군 P < 0.001보다 작음.
실시예 1
Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제
소의 대동맥 내피 세포(BAEC, 미국 뉴욕주의 렌셀라(Rensselaer)에 소재한 VEC Technologies사 제품)와 같은 혈관 내피 세포를 Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 가지는 약제를 결정하는 데 사용하였다. 예를 들어, 소의 대동맥 내피 세포의 융합성 단층을 24 시간까지 1%의 소 태아 혈청과 함께 Dulbecco사에서 제조된 변성 Eagle 배지 중 후보 약제(candidate agent)에 노출시켰다. Buckley의 B.J., 등의 논문(Biochem Biophys Res Commum, 307:973-979(2003))에 기재된 바와 같이, 세포 용해질, 세포질 추출물 및 핵 추출물을 제조한 후에, 이뮤노블롯팅(immunoblotting)을 수행하고, 정량화하였다. 다음에, 약제 없는 대조군 세포와 비교해서 핵 분획에서 검출된 Nrf2의 양을 증가시키는 약제를 실시예 2에 기재된 것처럼 고혈당증과 유사한 내피 세포에서의 활성에 대해 시험하였다.
실시예 2
고혈당증과 유사한 세포의 보호
유사 고혈당증 조건하에서 배양된 소의 망막 내피 세포(BREC's)를 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 지닌 약제와 배합하고 나서, 노출된 세포는 지질 과산화물의 형성 정도를 측정함으로써 혹은 예를 들어, 이하에 기재된 바와 같이 ICAM-1(intercellular cell adhesion molecule-1)의 발현 레벨을 측정함으로써 고혈당증의 작용의 보호(즉, 방어)에 대해 시험하였다. 약제가 없는 대조용의 배양에 비해서, 지질 과산화물의 형성 정도가 낮은 것 또는 시험 배양에서의 ICAM-1의 발현 레벨이 낮은 것은, 약제가 고혈당증의 작용으로부터 보호를 제공하는 것을 나타낸다.
지질 과산화물의 형성 분석: 단리된 소 망막 마이크로베셀(microvessel) 내피 세포(BRMEC's, 미국 뉴욕시의 렌셀라에 소재하는 VEC Technologies사 제품)는 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 지닌 약제로 처리 또는 전처리하였다. 상기 약제는 임의로 제거하였다. 처리된 세포를 상기 약제에 노출하기 전, 노출 하는 동안 또는 노출 후 10 일까지 배지 중 25 mM D-글루코오스에 노출시켰다. 세포 중에서의 지질 과산화물의 형성을 시판의 키트(Lipid Hydroperoxide Assay Kit #705002, 미국 미네아폴리스주 앤 아버시에 소재한 Cayman Chemical Co.사 제품)로 측정하고, 정상의 (5 mM) D-글루코오스에 노출된 세포에서 관찰된 것과 비교하였다. 약제에 노출되지 않은 세포에 비해서 약제에 노출된 세포 중의 지질 과산화물의 형성 정도가 낮은 것은, 약제가 고혈당증의 작용으로부터 보호를 제공하고, 또한, 해당 약제가 당뇨병성 망막병증의 치료에 유용하다는 것을 나타낸다.
락테이트 탈수소효소 활성을 이용한 산화제에 대한 보호 분석: 단리된 BRECs는 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 지닌 약제로 처리 또는 전처리하였다. 처리된 세포는 예를 들어 24시간까지 t-부틸하이드로퍼옥사이드(0.5 mM까지) 또는 메나디온(0.25 mM까지) 등의 산화제의 스트레스에 노출되었다. 세포 생존은 약제에 노출시키지 않은 세포에 비해서 약제에 노출된 배양액 중에서의 생존 세포에 유지된 LDH 활성 및/또는 세포용해로 인한 배지 속으로의 락테이트 탈수소효소(LDH) 방출을 측정함으로써 구하였다. LDH의 배지속으로의 방출량이 약제에 노출시키지 않은 대조 배양의 경우에 비해서 낮은 것은, 약제가 산화제의 보호 작용을 제공하고, 또한, 해당 약제가 당뇨병성 망막병증의 치료에 유용하다는 것을 나타낸다.
ICAM-1 레벨의 분석: 단리된 BRECs는 Nrf2 단백질 핵 전위의 촉진 활성을 지닌 약제로 처리 또는 전처리되었다. 처리된 세포는 고혈당증의 시험관내 모델로서의 메틸글리옥살(MG) 및/또는 MG-변성 BSA에 노출되고, 여기서 ICAM-1의 발현증가는 고혈당증의 결과로서 일어난다. 증가된 ICAM-1 레벨은 백혈구의 맥관 내피 (백혈구 울혈)에의 부착을 촉진시키고, 또한 모세혈관 비관류로 유도된다. ICAM-1의 레벨은 BioVendor(체코 공화국의 브르노; 독일 하이델베르크에 소재, # RE 11228C100, ICAM-1에서부터 클론 MEM-111까지의 단클론 항체)로부터 또는 Zymed Laboratories(캐나다의 사우스 샌프란시스코에 소재; MY-13 monoclonal anti-ICAM-1, Buras etal., Am JCell Phys 278: C292-C302, (2000))로부터 시판되고 있는 항-ICAM-1 항체를 이용해서 효소면역측정법(enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)에 의해 측정되었다. 약제에 노출시키지 않은 대조 배양의 경우에 비해서 ICAM-1의 레벨이 낮은 것은, 약제가 고혈당증의 작용으로부터 보호를 제공하고, 또한, 해당 약제가 당뇨병성 망막병증의 치료에 유용하다는 것을 나타낸다.
상기 분석에 있어서, 설포라판, 올티파즈 등의 Nrf2 단백질 핵 전위 또는 기타 Nrf2 경로 유도인자에 대한 촉진활성을 지닌 약제는 고혈당 상태 또는 산화 스트레스에 대한 처리 또는 전처리로서 제공될 수 있다.
실시예 3
Nrf2 단백질 핵 전위의 촉진 활성을 지닌 약제의 생체내 ( In Vivo ) 보호 작용
Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 지닌 약제를 수용하고 있는 스트렙토조토신-유도 당뇨병 래트에서의 망막 혈관 침투성을 시험하고, 상기 약제를 수용하고 있지 않은 래트에서의 망막 혈관 침투성과 비교하였다. 이 방법은 Nalcajima, M. 등으로부터 변경되었다(Investigative Ophthalmology & Visual Science 42: 9, August, 2001, pg. 2110-2114). 간단하게는, 래트의 비당뇨병 대조군, 래트의 당뇨병 대조군 및 Nrf2 단백질 핵 전위의 촉진활성을 지닌 약제를 수용하고 있는 당뇨병 군에 대해 관류(perfusion) 후의 세포외 공간 속의 알부민을 조사함으로써 분석하였다. 당뇨병은 스트렙토조토신 주입에 의해 유발된다. 망막 혈관 침투성은 관외 유출된 알부민의 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis)을 이용해서 측정된다. 망막 포스포티로신(phosphotyrosine) 레벨 및 증식세포 핵 항원(PCNA: proliferating cell nuclear antigen)은 웨스턴 블롯 분석에 의해 평가될 수도 있다. 래트의 당뇨병 대조군과 비교해서 약제 처리된 당뇨병 래트군에 있어서 침투성 레벨이 낮은 것, 즉 관외 유출된 알부민이 낮은 것은 약제가 고혈당증의 작용으로부터 보호를 제공하고, 또 약제가 당뇨병성 망막병증의 처리에 유용하는 것을 나타낸다.
실시예 4
Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진활성을 지닌 약제에 의한 드루젠 형성의 저해
ARPE-19 세포주(ATCC CRL- 2502)로부터 배양된 인간 망막 색소 상피(RPE) 세포는 Nrf2의 핵전위를 촉진하는 약제로 처리되었다. 약제에 의한 처리는 RPE 세포의 산화성 스트레스 상태로의 노출에 우선하거나 혹은 동시에 수반될 수 있다. 산화성 스트레스는 t-부틸하이드로퍼옥사이드(미국 캘리포니아 얼바인시에 소재한 ICN Biomedicals사 제품), 메나디온(미국 미주리주의 세인트 루이스시에 소재한 시그마-알드리치사 제품) 또는 S-니트로소-N-아세틸-DL-페니실아민(SNAP, 시그마-알드리치사 제품)의 봉입, 또는 이들 약제의 조합물의 봉입에 의해 7일까지의 배양시 일어났다. 배지 중의 부티오닌설폭시민(시그마-알드리치사 제품)의 봉입에 의한 글루타티온 합성시의 속도 제한 효소인 γ-글루타밀시스테인 합성효소의 저해는 단 독으로 또는 기타 약제의 조합에 이용되었다. 처리 과정 동안, 정량 면역분석을 행하여 말론디알데하이드(MDA), 4-하이드록시노네날(HNE), 니트로티로신 및 AGE(advanced glycation end product) 변성의 RPE 세포 단백질에 대한 형성을 모니터하였다. 이들 분석은 항-MDA 및 항-HNE 안티세라(antisera)(미국 텍사스주의 샌 안토니오시에 소재한 Alpha Diagnostics사 제품), 항-AGE 항체(미국 버지니아주의 리치몬드시에 소재한 Wako Chemicals사 제품) 및 항-니트로티로신 항체(뉴욕시의 레이크 플래시트시에 소재한 Upstate Biotechnology사 제품)를 이용한다. 약제에 노출되지 않은 세포에 비해서 약제에 노출된 세포에서의 1개 이상의 단백질 변성 레벨의 감소는, 항산화효소 및 단백질 그리고 및 II기(phase II) 해독 효소를 부호화하는 유전자의 발현 증가로 인해 드루젠에서 발견된 단백질 변성 혹은 부가체의 형성 저해를 나타낸다.
실시예 5
시험관내 산화성 스트레스 분석;
퀘르세틴 전처리의 보호작용
본 실시예는 배양된 망막 내피 세포를 산화성 스트레스에 노출시켜 퀘르세틴에 의한 전처리의 보호 작용을 평가하는 연구를 제공한다. 또한, 본 실시예는 비증식성 당뇨병성 망막병증에서의 치료 활성용 화합물을 선별하기 위한 분석 시스템을 제공한다.
소 망막 내피 세포(BRECs)(미국 뉴욕시의 렌셀라에 소재한 VEC Technologies사 제품)는 MCDB-131 완전 배지(미국 뉴욕주의 렌셀라에 소재하는 VEC Technologies사 제품) 중 5% CO2, 37℃에서, 섬유결합소 (50 ㎎/㎖)-코팅된 플라스틱제 용기에서 배양되었다. SFM(serum-free media) 조건에 대해서, MCDB-131은 100X 항생제/항진균제 5㎖/500㎖, 10 mM L-글루타민 및 0.1% BSA(이상 모두는 미국 뉴욕주의 그랜드 아이랜드시에 소재한 Life Technologies Inc.사 제품)로 보충되어 이용되었다.
BRECs는 10,000 세포/웰에 파종하여, 완전배지(10% 소 태아 혈청(FBS)) 중의 0.2 ㎖/웰 중에서 3일간 부착해서 증식시켰다. 완전배지는 다음 24시간에 대해 25 uM 퀘르세틴, 100 uM DL-부티오닌-(S, R)-설폭시민(BSO, 미국 미주리주의 세인트 루이스시에 소재한 시그마(Sigma)사 제품) 및 0.1 % DMSO가 첨가된 SFM 배지로 교체되었다. 다음날, 모든 배지는 0 내지 500 μM t-부틸 하이드로퍼옥사이드(미국 캘리포니아 얼바인시에 소재한 ICN Biomedicals사 제품)를 함유하는 SFM(0.1 ㎖/웰)로 교체하였다. 5% CO2 중 37℃에서 4시간 배양 후에, Promega CellTiter96® AQueous 비방사성 세포증식 에세이 키트(미국 위스콘신주 메디슨시에 소재한 Promega Corporation사 제품)로부터 MTS(3-(4, 5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카복시메톡시페닐)-2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸륨, 내부염) 20부 및 PMS(phenazine methosulfate) 20부의 혼합물 20㎕를 첨가함으로써 분석을 개시하였다. 상기 플레이트를 3시간 동안 인큐베이터로 복귀시키고 나서, 바탕 평균을 빼서 얻어진 490 ㎚에서의 순수 흡광도를 기록하고 생존 세포의 레벨의 척도로서 이용하였다.
조건당 6개의 웰을 이용해서, 분석을 3회 행하였다. 흡광도 값은 t-부틸 하이드로퍼옥사이드가 없는 대조 웰을 100%로 하도록 정규화하고, 3개의 분석으로부터의 데이터를 공동으로 계산하였다. 전체 통계학적 차이는 처리군 가운데 발견되었다(도면 참조; ANOVA, P < 0.05). 도면의 데이터로 표시된 바와 같이, t-부틸 하이드로퍼옥사이드에의 노출은 전체 농도에서 세포 생존의 상당한 감소를 초래하였다. 또한, 퀘르세틴 단독에 의한 전처리는 각 t-부틸 하이드로퍼옥사이드 농도에 대한 대조군에서보다 생존 세포의 수가 높았다. BSO 단독에 의한 전처리는 세포 생존에 영향을 미치지 않았지만, 모든 t-부틸 하이드로퍼옥사이드 농도의 독성을 상당히 증강시켰다. 퀘르세틴과 BSO와의 조합에 의한 전처리는 100 μM t-부틸 하이드로퍼옥사이드 노출군을 제외하고 퀘르세틴 전처리 단독에 의해서 보여지는 것과 동일한 세포 생존을 나타내었다. 그 군에 있어서, 조합된 전처리는 세포 생존을 단지 부분적으로 복원하였다.
이 연구에 있어서, BSO 전처리는 후속의 t-부틸 하이드로퍼옥사이드 노출의 독성을 증강시켰다. 이 결과는 t-부틸 하이드로퍼옥사이드가 글루타티온 퍼옥시다제에 의해 크게 제거되고, 또한, BSO가 글루타티온 합성의 속도제한효소인 γ-글루타밀시스테인 합성효소를 저해하기 때문인 것으로 예상된다. 퀘르세틴은 γ-글루타밀시스테인 합성효소의 촉매 서브 유닛의 프로모터의 전사촉진에 의해 글루타티온 레벨을 증가시키는 것으로 보고되어 있다(Myhrstad 등, 2002, Free Radical Biology and Medicine, 32: 386-393). 퀘르세틴과 BSO에 의한 조합된 전처리에 의한 BSO의 독성 증강의 감소는 퀘르세틴이 Nrf2/ARE 경로를 통한 효소 발현을 거쳐 항산화 효과를 지니는 기전과 일치한다.
본 명세서에 기재된 참조 문헌은 본 명세서에 기재된 실시예 또는 기타 세부사항의 보충요소를 제공하는 정도로 구체적으로 참조로 포함된다.
당업자라면 본 발명의 개시내용에 비추어, 본 발명의 정신과 범위로부터 벗어나지 않고도 본 명세서에 개시된 실시형태의 변화가 가능하다는 것을 알 수 있다. 본 명세서에 개시된 모든 실시형태는 본 발명에 개시된 내용에 비추어 과도한 실험 없이도 실시되고 제조될 수 있다. 본 발명의 전체 범위는 본 명세서의 기재 내용 및 그의 등가 실시형태에 있어서 설명되어 있다. 본 명세서는 권리가 부여된 본 발명에 대한 보호의 전체 범위를 지나치게 좁히는 것으로 간주해서는 안된다.
달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 단수 형태의 용된 용어는 "하나", "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미한다.

Claims (73)

  1. Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물을 대상에 투여하는 것을 포함하고,
    상기 약제는 마이클 부가 수용체(Michael Addition acceptor), 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 게니스테인 이외의 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는, 대상의 당뇨병성 망막병증의 치료 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 대상은 당뇨병성 망막병증을 나타낼 가능성이 있는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 대상은 당뇨병성 망막병증의 증상을 갖는 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 약제는 이소티오시아네이트 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 이소티오시아네이트는 설포라판 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  6. 제 1항에 있어서, 약제는 1,2-디티올-3-티온 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 1,2-디티올-3-티온은 올티프라즈 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  8. 제 1항에 있어서, 투여는 안구내 주입, 서방성 전달 기구의 이식, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여에 의한 것인 방법.
  9. 제 1항에 있어서, 투여는 안구내 투여에 의한 것인 방법.
  10. 대상이 당뇨병성 망막병증을 지닌 것으로 진단하고,
    Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물을 대상에 투여하는 것을 포함하고,
    상기 약제는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 게니스테인 이외의 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는, 대상의 당뇨병성 망막병증의 치료 방법.
  11. Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물을 대상에 투여하는 것을 포함하고,
    상기 약제는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는, 대상의 망막밑 드루젠 형성을 저해하는 방법.
  12. 제 11항에 있어서, 대상은 망막밑 드루젠 형성을 나타낼 가능성이 있는 방법.
  13. 제 11항에 있어서, 대상은 망막밑 드루젠 형성을 나타내는 증상을 갖는 방법.
  14. 제 11항에 있어서, 약제는 이소티오시아네이트 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  15. 제 14항에 있어서, 이소티오시아네이트는 설포라판 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  16. 제 11항에 있어서, 약제는 1,2-디티올-3-티온 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  17. 제 16항에 있어서, 1,2-디티올-3-티온은 올티프라즈 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 방법.
  18. 제 11항에 있어서, 투여는 안구내 주입, 서방성 전달 기구의 이식, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여에 의한 것인 방법.
  19. 제 11항에 있어서, 투여는 안구내 투여에 의한 것인 방법.
  20. 대상이 망막밑 드루젠 형성을 지닌 것으로 진단하고,
    Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물을 대상에 투여하는 것을 포함하고,
    상기 약제는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는, 대상의 망막밑 드루젠 형성의 치료 방법.
  21. 제 2항에 있어서, 약제는 게니스테인 이외의 플라보노이드를 포함하는 방법.
  22. 제 21항에 있어서, 약제는 케르세틴을 포함하는 방법.
  23. 제 3항에 있어서, 약제는 게니스테인 이외의 플라보노이드를 포함하는 방법.
  24. 제 23항에 있어서, 약제는 케르세틴을 포함하는 방법.
  25. 망막 세포의 제 1시료를 산화성 스트레스에 노출하고;
    망막 세포의 제 2시료를 Nrf2 단백질 핵 전위에 대한 촉진 활성을 지닌 시험 약제와 조합해서 산화성 스트레스에 노출하며;
    노출된 제 1시료로부터의 생존 세포수를 노출된 제 2시료로부터의 생존 세포수와 비교하는 것을 포함하고;
    제 2시료로부터의 생존 세포수가 제 1시료로부터의 생존 세포수보다 많은 경우, 시험 약제는 대상에게 당뇨병성 망막병증에 대한 치료반응을 제공하는, 대상에서 당뇨병성 막망병증에 대한 시험 약제의 치료 반응을 예측하는 방법.
  26. 제 25항에 있어서, 망막 세포는 내피세포, 뉴런, 아교세포 또는 혈관주위세포인 방법.
  27. 제 26항에 있어서, 망막 세포는 내피세포인 방법.
  28. 제 25항에 있어서, 산화성 스트레스는 산화제의 존재에 의한 것인 방법.
  29. 제 25항에 있어서, 산화성 스트레스는 산화제 제거의 저해제의 존재에 의한 것인 방법.
  30. 대상의 당뇨병성 망막병증 치료용 약물 제제의 제조시, Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 게니스테인 이외의 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는 약제, 및 허용가능한 담체를 포함하는 유효량의 조성물의 용도.
  31. 제 30항에 있어서, 대상은 당뇨병성 망막병증을 나타낼 가능성이 있는 상태인 용도.
  32. 제 30항에 있어서, 대상은 당뇨병성 망막병증의 증상을 갖는 용도.
  33. 제 30항에 있어서, 약제는 이소티오시아네이트 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  34. 제 33항에 있어서, 이소티오시아네이트는 설포라판 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  35. 제 30항에 있어서, 약제는 1,2-디티올-3-티온 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  36. 제 35항에 있어서, 1,2-디티올-3-티온은 올티파즈 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  37. 제 30항에 있어서, 약제는 안구내 주입용, 서방성 전달 기구의 이식용, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여용으로 제조된 것인 용도.
  38. 제 30항에 있어서, 약제는 안구내 투여용으로 제조된 것인 용도.
  39. 대상의 망막밑 드루젠 형성의 저해용 약물 제제의 제조시, Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는 약제, 및 허용가능한 담체 를 포함하는 유효량의 조성물의 용도.
  40. 제 39항에 있어서, 대상은 망막밑 드루젠 형성을 나타낼 가능성이 있는 상태인 용도.
  41. 제 39항에 있어서, 대상은 망막밑 드루젠 형성을 나타낼 증상을 갖는 용도.
  42. 제 39항에 있어서, 약제는 이소티오시아네이트 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  43. 제 42항에 있어서, 이소티오시아네이트는 설포라판 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  44. 제 39항에 있어서, 약제는 1,2-디티올-3-티온 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  45. 제 44항에 있어서, 1,2-디티올-3-티온은 올티파즈 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 용도.
  46. 제 39항에 있어서, 약물 제제는 안구내 주입용, 서방성 전달 기구의 이식용, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여용으로 제조된 것인 용도.
  47. 제 39항에 있어서, 약물 제제는 안구내 투여용으로 제조된 것인 용도.
  48. 제 31항에 있어서, 약제는 게니스테인 이외의 플라보노이드를 포함하는 용도.
  49. 제 48항에 있어서, 약제는 케르세틴을 포함하는 용도.
  50. 제 32항에 있어서, 약제는 게니스테인 이외의 플라보노이드를 포함하는 용도.
  51. 제 50항에 있어서, 약제는 케르세틴을 포함하는 용도.
  52. Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 약제, 및 허용가능한 담체를 포함하고,
    상기 약제는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 게니스테인 이외의 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는, 대상의 당뇨병성 망 막병증 치료용 조성물.
  53. 제 52항에 있어서, 대상은 당뇨병성 망막병증을 나타낼 가능성이 있는 조성물.
  54. 제 52항에 있어서, 대상은 당뇨병성 망막병증의 증상을 갖는 조성물.
  55. 제 52항에 있어서, 약제는 이소티오시아네이트 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  56. 제 55항에 있어서, 이소티오시아네이트는 설포라판 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  57. 제 52항에 있어서, 약제는 1,2-디티올-3-티온 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  58. 제 57항에 있어서, 1,2-디티올-3-티온은 올티프라즈 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  59. 제 52항에 있어서, 안구내 주입, 서방성 전달 기구의 이식, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여용으로 제조된 조성물.
  60. 제 52항에 있어서, 안구내 투여용으로 제조된 조성물.
  61. Nrf2 단백질의 핵 전위에 대한 촉진 활성을 갖는 유효량의 약제, 및 허용가능한 담체를 포함하고,
    상기 약제는 마이클 부가 수용체, 디페놀, 티오카바메이트, 퀴논, 1,2-디티올-3-티온, 부틸화 하이드록시아니솔, 플라보노이드, 이소티오시아네이트, 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔, 에톡시퀸, 쿠마린, 그의 조합물, 또는 그의 약리학적 활성 유도체 또는 유사체를 포함하는, 대상의 망막밑 드루젠 형성 저해용 조성물.
  62. 제 61항에 있어서, 대상은 망막밑 드루젠 형성을 나타낼 가능성이 있는 조성물.
  63. 제 61항에 있어서, 대상은 망막밑 드루젠 형성을 나타내는 증상을 갖는 조성물.
  64. 제 61항에 있어서, 약제는 이소티오시아네이트 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  65. 제 64항에 있어서, 이소티오시아네이트는 설포라판 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  66. 제 61항에 있어서, 약제는 1,2-디티올-3-티온 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  67. 제 66항에 있어서, 1,2-디티올-3-티온은 올티프라즈 또는 그의 약리학적 활성 유도체를 포함하는 조성물.
  68. 제 61항에 있어서, 안구내 주입, 서방성 전달 기구의 이식, 또는 국소, 경구 혹은 비강 내 투여용으로 제조된 조성물.
  69. 제 61항에 있어서, 안구내 투여용으로 제조된 조성물.
  70. 제 62항에 있어서, 약제는 게니스테인 이외의 플라보노이드를 포함하는 조성물.
  71. 제 70항에 있어서, 약제는 케르세틴을 포함하는 조성물.
  72. 제 63항에 있어서, 약제는 게니스테인 이외의 플라보노이드를 포함하는 조성물.
  73. 제 72항에 있어서, 약제는 케르세틴을 포함하는 조성물.
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