KR20060122954A - 혼성화 방법 및 혼성화용 마이크로어레이 및 혼성화용 키트 - Google Patents

혼성화 방법 및 혼성화용 마이크로어레이 및 혼성화용 키트 Download PDF

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Abstract

시료를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가진 용액이 담긴 밀폐 용기 내에서, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에만 접촉한 상태로 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 서로 혼성화시킴으로써, 커버 글라스 및 밀폐 용기를 사용하지 않고 간단하고 확실하게 시료 생체고분자와 탐침자 DNA 를 서로 혼성화시키는 혼성화 방법이 제공되다. 또한, 본 발명에 이용되는 혼성화용 마이크로어레이 및 키트도 제공된다.
혼성화 방법, 생체고분자, 탐침자, 마이크로어레이

Description

혼성화 방법 및 혼성화용 마이크로어레이 및 혼성화용 키트 {HYBRIDIZATION METHOD AS WELL AS HYBRIDIZATION MICROARRAY AND HYBRIDIZATION KIT}
본 발명은, 복수의 시료 생체고분자 (biopolymer) 를 탐침자 생체고분자와 동시에 혼성화 (hybridization) 시키기 위한 혼성화 방법, 및 혼성화용 마이크로어레이 및 혼성화용 키트에 관한 것이다.
일반적으로, 생체내의 분자를 동정/분별하기 위해서, 특히 목적 DNA 또는 유전자 DNA 의 유무의 검출을 위해, 공지의 서열을 가지는 핵산 또는 단백질의 탐침자를 형광 물질로 표지한 시료 DNA (일반적으로는 시료 생체고분자) 와 혼성화시키는 방법이 흔히 이용되고 있다. 더 구체적으로는, 상기 방법은, 슬라이드 글라스 상에 탐침자 DNA (일반적으로는 탐침자 생체고분자) 를 고정시켜 형성한 DNA 칩 (일반적으로는 마이크로어레이) 을 이용하여 수행된다.
적은 양의 시료 DNA 용액 중에서 시료 DNA 를 효율적으로 탐침자 DNA 와 혼성화시키기 위해서는, 일반적으로 하기 2 가지의 방법이 이용된다: 첫번째 방법에서는, 탐침자 DNA 가 고정되어 있는 슬라이드 글라스 위에, 형광 물질로 표지된 시료 DNA 를 함유한 용액을 적하하고, 그 후 커버 글라스로 덮는다. 이것을 습윤제 (humectant) 와 함께 혼성화용 챔버로 불리는 밀폐 용기에 저장한 후, 8 ~ 16 시간동안 약 65 ℃ 의 온도로 유지하여 혼성화시킨다. 시료 DNA 가 탐침자 DNA 에 결합하면, 시료 DNA 역시 탐침자 DNA 와 함께 고정되므로, 고정화된 시료 DNA 상에 표지된 형광 물질을 광원으로부터의 여기광 (excitation light) 으로 여기하여, 발광되는 형광을 검출함으로써, 혼성화한 시료 DNA를 검출할 수 있다.
두번째 방법에서는, 탐침자 DNA 가 고정된 슬라이드 글라스 위에 용액을 수용할 수 있는 분리가능한 용기를 미리 형성하고, 형광 물질로 표지된 시료 DNA 를 함유한 용액을 주입하고, 주입구를 밀봉하여 용기를 밀폐한 후, 8 ~ 16 시간동안 온도를 약 65 ℃ 로 유지함으로써 혼성화를 수행한다. 시료 DNA 가 탐침자 DNA 에 결합하면, 시료 DNA 역시 탐침자 DNA 와 함께 고정된다. 용기를 벗겨 슬라이드 글라스를 세정한 후에, 고정화된 시료 DNA 에 표지되어 있는 형광 물질을 광원으로부터의 여기광으로 여기하여, 발광하는 형광을 검출함으로써 혼성화된 DNA 를 검출할 수 있다.
상기 선행 기술의 첫번째 방법에서는, 슬라이드 글라스 위에 적하된 시료 DNA 를 함유한 용액 위에 커버 글라스를 두는 경우, 커버 글라스와 슬라이드 글라스 사이의 틈에 기포가 혼입되지 않도록 경험과 기술이 요구된다. 기포가 상기 틈 내로 혼입되는 경우, 혼성화가 올바르게 수행되지 않을 수 있다.
또한, 슬라이드 글라스 위에 놓인 커버 글라스는 혼성화용 용액을 통해 슬라이드 글라스와 밀착하고 있어서, 커버 글라스를 움직이면 탐침자 DNA 의 스팟 (spot) 이 손상될 수 있고, 정상적인 스팟이 검출되지 않을 수 있다. 그러나, 커버 글라스는 극도로 얇고 가볍고, 슬라이드 글라스 위에 적하된 시료 DNA 를 함 유한 용액 위의 정위치에 이를 놓는 작업에는 경험과 기술이 요구된다.
또한, 커버 글라스는 슬라이드 글라스 상의 탐침자 DNA 가 고정되어 있는 위치에 정확하게 놓여야 하기 때문에, 조작에 지장을 초래할 가능성이 있는 작은 커버 글라스를 사용할 수 없다. 보다 구체적으로, 그 한도는 1 개의 슬라이드 글라스 상에 2 개의 커버 글라스이다. 이는, 1 개의 슬라이드 글라스 상에서는 2 개의 시료만이 혼성화될 수 있음을 의미한다. 또한, 습윤제의 조성에 따라서 혼성화 용액의 부피가 변화되어, 슬라이드 글라스 상의 2 개의 시료의 오염이 초래될 수 있다.
상기 선행 기술의 두번째 방법에서는, 상기 분리가능한 용기를 상기 용액으로 완전하게 채울 수 없고, 용기 내에 공기가 잔존하여, 부정확한 혼성화가 초래될 수 있다.
본 발명의 목적은, 상기 언급한 문제점을 고려하여, 커버 글라스 및 밀폐 용기를 사용하지 않고 시료 생체고분자와 탐침자 DNA 를 간단하고 확실하게 서로 혼성화하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 상기 언급한 문제점을 고려하여, 복수의 시료 생체고분자와 탐침자 DNA 를 간단하고 확실하게 서로 혼성화하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은, 상기 언급한 과제를 해결하기 위해서 제안된 것으로서, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에 접촉한 상태로 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 서로 혼성화시키기 위한, 시료를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가진 용액을 저장한 밀폐 용기 내에서 수행되는 혼성화 방법이다. 상기 시료 생체고분자를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가진 용액의 양으로서는, 상기 밀폐 용기의 부피를 포화시키는 수증기의 양에 100 ㎕ 이상을 더하여 수득되는 양 및 상기 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양의 5 배 이상의 양 중 더 큰 것을 선택한다.
본 발명에 따른 혼성화 방법은, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 표면을 가진 친수성 영역과 상기 친수성 영역 주위의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역으로 이루어진 슬라이드 글라스 상에서 행하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명에서 이용되는 슬라이드 글라스는, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역들이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있는 마이크로어레이인 것이 바람직하다.
본 발명은 또한, 상술한 본 발명에 따른 혼성화 방법에 적용되는 혼성화용 마이크로어레이도 제공하는데, 상기 마이크로어레이에는 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있다.
본 발명은 또한 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있는 마이크로어레이 및 상기 마이크로어레이를 수용할 수 있는 내부 공간을 가진 밀폐 용기를 포함하는, 상술한 본 발명에 따른 혼성화 방법에 적용되는 혼성화용 키트를 제공한다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 발명에 따른 혼성화 방법의 특징 중 하나는, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에만 접촉한 상태로 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 서로 혼성화시키는 것에 있다. "슬라이드 글라스에만 접촉한"이란 말은, 상기 시료 생체고분자를 함유한 용액이 일반적으로 혼성화에 요구되는 커버 글라스 등에 접촉하지 않는 상태를 나타낸다. 본 발명에 따르면, 선행 기술에서 요구되는 커버 글라스 등의, 탐침자 생체고분자를 시료 생체고분자에 효율적으로 혼성화시키기 위한 임의의 구조물을 필요로 하지 않고 혼성화를 수행할 수 있어, 매우 간단하고 확실하게 혼성화를 수행할 수 있다.
본 명세서에 있어서, "시료 생체고분자"라는 용어는, 혼성화에 의해 동정/분별이 가능한 생체고분자를 나타내는 것으로, 예를 들어 DNA, RNA, 펩티드 또는 단백질이 포함된다.
시료 생체고분자를 함유한 용액에 있어서의 용매로서는, 시료 생체고분자의 종류에 따라, 당 분야에서 일반적으로 널리 이용되는 적절한 용매를 선택할 수 있다. 예를 들어 시료 생체고분자가 DNA 인 경우에는, 계면활성제 (detergent) 와 염을 함유한 수용액이 이용되고, 시약의 범용성 및 혼성화 반응의 안정성을 고려하여, 특히 계면활성제로서는 SDS 를, 염을 함유한 수용액으로서는 SSC 를 사용하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5 x SSC 를 들 수 있다. 상기 시료 생체고분자는, 상기 용액에서의 농도가, 검출에 충분한 농도라면 특별히 제한되는 것은 아니나, 시료 생체고분자가 일반적으로 값비싸기 때문에, 1 ng/㎕ 내지 1　㎍/㎕ 의 범위 내가 되도록 제조되는 것이 바람직하다.
시료 생체고분자는, 통상, 혼성화 후의 검출을 위해 표지된다. 표지에 대하여는, 형광 표지, 유기 염료 표지, 화학 발광 표지, 방사성 표지 또는 항체 표지 등의 주지의 적절한 표지를 들 수 있고, 안전성 및 검출의 간편성의 관점에서, 형광 표지가 특히 바람직하다.
본 명세서에 있어서, "탐침자 생체고분자"라는 용어는, 시료 생체고분자에 혼성화 가능하고, 슬라이드 글라스 상에 고정 가능한 생체고분자를 나타내며, 예를 들어, DNA, RNA, 단백질 또는 펩티드가 포함된다.
본 발명에 있어서 탐침자 생체고분자의 슬라이드 글라스 상에의 고정에 대하여는, 탐침자 생체고분자의 종류에 대응하여, 당분야에 있어서 일반적으로 널리 이용되는 생체고분자 고정화제를 적절하게 선택할 수 있다. 이 고정화제로서는, 폴리-L-리신 또는 아미노실란을 들 수 있다.
본 발명에 따른 혼성화 방법에 이용되는 슬라이드 글라스로서는, 유리로 한정되지 않고, 플라스틱 또는 금속으로 제조될 수 있고, 더욱 바람직하게는 생화학적 활성이 없는 재료로 제조된 것이다. 슬라이드 글라스는 유리로 제조된 것이 바람직한데, 그 이유는 후술되는 친수성 영역 및 소수성 영역이 그 표면에 용이하게 형성될 수 있기 때문이다.
본 발명에 따른 혼성화 방법의 또 다른 특징은, 상술한 혼성화를, 시료 생체고분자를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가지는 용액 (이하, 이 용액을 "습윤제"라고 칭함) 을 저장한 밀폐 용기 중에서 수행하는데 있다. 즉, 시료 생체고분자를 함유한 용액을 슬라이드 글라스 상에 적하하고, 이 슬라이드 글라스를, 시료 생체고분자를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가지는 습윤제를 저장한 밀폐 용기 (혼성화용 챔버) 내에 도입하여 혼성화를 수행한다. 마이크로어레이는, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 습윤제에 접촉하지 않도록, 밀폐 용기 내에 저장한다. 습윤제의 양으로서는, 밀폐 용기의 체적을 포화시키는 수증기의 양에 100 ㎕ 이상을 더하여 수득되는 양 및 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양의 5 배 이상의 양 중 더 큰 것을 선택한다. 비휘발성 용질에 의해 초래되는 용매의 증기압 강하는 용질의 몰 농도에 비례하므로, 본 발명에서 "동일한 증기압"이란 "동일한 용질 몰 농도"를 나타낸다. "동일한 용질 몰 농도"란, 시료 생체고분자를 함유한 용액에 함유된 용질의 몰 농도와 습윤제에 함유된 용질의 몰 농도 간의 차이가 -10 내지 +8 % (더욱 바람직하게는 -5 내지 +5 %) 인 것을 나타낸다.
상술한 바와 같이 시료 생체고분자를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가지는 습윤제를 이용하기 위해서는, 시료 생체고분자가 함유되는 것을 제외하고는 상기 용액과 동일한 조성의 용액을 습윤제로서 이용할 수 있다. 시료 생체고분자가 DNA 인 경우에는, 상술한 바와 같이 시료 생체고분자를 함유한 용액으로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5 x SSC 를 함유한 용매를 이용하는 것이 바람직하지만, 상기 습윤제가 또한 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5 x SSC 를 함유하도록 제조함으로써, 이들의 증기압을 동일하게 할 수 있다. 시료 생체고분자를 함유한 용액에 있어서, 시료 생체고분자의 농도는, 상기 용액 중의 염 농도와 비교해 매우 낮으므로, 상기 동일한 범위 내의 상기 언급한 차이에 포함되고 이는 무시할 수 있다.
상기 설명한 바와 같이 시료 생체고분자를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가지는 습윤제가 저장된 밀폐 용기 중에서 혼성화를 수행함으로써, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 슬라이드 글라스 상에서 건조되는 일 없이 또는 이의 체적이 증가해 용액이 넘쳐 버리는 일 없이, 혼성화를 완료할 수 있다. 본 발명에 따른 혼성화 방법에 있어서, 습윤제의 증기압이 시료 생체고분자를 함유한 용액의 증기압보다 현저하게 낮으면, 혼성화 동안의 증기 확산에 의해 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양이 현저히 감소하거나, 또는 상기 용액의 건조가 일어나, 정상적으로 혼성화가 수행될 수 없다. 반면, 습윤제의 증기압이 시료 생체고분자를 함유한 용액의 증기압보다 현저하게 높으면, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양이 현저히 증가하여, 상기 용액이 넘쳐 혼성화가 정상적으로 수행될 수 없다.
본 발명에 따른 혼성화 방법에서, 상기 슬라이드 글라스는 바람직하게는, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 표면을 가진 친수성 영역 및 상기 친수성 영역 주위의, 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역으로 구성된다. 따라서, 슬라이드 글라스 상의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 친수성 영역에 적하된 시료 생체고분자를 함유한 용액은, 소수성 영역으로 유출해 버리지 않고, 친수성 영역 상에 유지된다. "친수성"이라는 용어는, 영상 처리식 접촉각계 (접촉각계 CA-X, Kyowa Interface Science Co., Ltd 제조) 를 이용하여 측정한 물에 대한 액체방울 접촉각 (평면형의 대상물 표면에 놓인 액체방울과 대상물 표면과의 접촉면 사이의 경계에 있어서의 액체방울 표면의 접선과 상기 대상물 표면 간의 각도) 이 90°미만인 것을 나타내고, "소수성"이라는 용어는, 상기 액체방울 접촉각이 90°이상인 것을 나타낸다.
슬라이드 글라스 상에 상기 언급한 친수성 영역 및 소수성 영역을 형성하는 방법으로서는, 예를 들어 슬라이드 글라스가 유리로 제조된 경우, 이의 표면은 본래 친수성이므로, 원하는 영역에 친수성 영역이 형성되도록 소수성 영역을 형성한다. 소수성 영역은, 예를 들어 발수성 불소 수지 잉크의 인쇄 방법에 의해 형성된다. 이러한 발수성 불소 수지 잉크로 인쇄된 슬라이드 글라스는, 시중에서 입수 가능하다(상품명: 발수성 인쇄 슬라이드 글라스, Matsunami Glass Ind. Ltd. 제조). 소수성 영역을 형성하는 방법은, 상기 언급한 발수성 불소 수지 잉크를 이용한 방법으로 한정되지 않고, 예를 들어, 실리콘 수지를 도포 및 경화시킴으로써 상기 소수성 영역을 형성할 수도 있다.
본 발명에서 이용되는 슬라이드 글라스로서는, 생체고분자 고정화제가 친수성 영역의 표면에 형성되어 있고, 그 주위의 소수성 영역에는 상기 고정화제가 형성되어 있지 않은 것이 바람직하다. 즉, 탐침자 생체고분자를 친수성 영역에게만 고정화시킬 수 있다. 상기 고정화제로서는, 상기 언급한 폴리-L-리신 또는 아미노실란이 예시될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 슬라이드 글라스는, 상기 언급한 친수성 영역 및 소수성 영역을 각각 1 개 이상 가질 수 있지만, 바람직하게는, 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 이들 친수성 영역을 둘러싸도록 소수성 영역이 형성되어 있는 마이크로어레이가 이용된다. 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역을 배열하여 형성된 마이크로어레이를 이용하여 본 발명에 따른 혼성화 방법을 수행함으로써, 동일 슬라이드 글라스 상에서 복수 종의 시료 생체고분자에 대해, 동시에 혼성화를 수행할 수 있다.
도 1 은, 본 발명에 따른 혼성화 방법에 바람직하게 이용되는 예시적인 마이크로어레이 (1) 를 모식적으로 나타낸 것이다. 도 1 에 나타낸 마이크로어레이 (1) 는, 표면 상에 24 개의 친수성 영역 (2) 및 이들 친수성 영역 (2) 을 둘러싸도록 형성된 소수성 영역 (3) 을 가진다. 각 친수성 영역 (2) 에는, 복수 개의 탐침자 생체고분자가 고정된다(도 1 에 나타낸 예에서는, 각 친수성 영역 (2) 에 24 개의 탐침자 생체고분자가 점적된다). 본 발명에 따르면, 슬라이드 글라스의 표면에, 탐침자 생체고분자가 고정된 복수의 친수성 영역 (2) 과 상기 친수성 영역 (2) 을 둘러싸는 소수성 영역 (3) 이 선택적으로 형성된 마이크로어레이를 이용하여 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 서로 혼성화하는 것이 바람직하다.
도 2 는, 도 1 에 나타낸 마이크로어레이 (1) 의 친수성 영역 (2) 상에, 시료 생체고분자를 함유한 용액 (5) 을 적하한 상태를 모식적으로 나타낸 것이다. 상기 마이크로어레이 (1) 상의 임의의 친수성 영역 상에 시료 생체고분자를 함유한 용액을 적하하면, 상기 친수성 영역 상에 퍼진 이들 용액은, 소수성 영역에 의해 상기 친수성 영역을 넘어 더욱 퍼지는 것이 억제되므로, 인접한 친수성 영역 상에 적하된 시료 생체고분자를 함유한 용액들은 서로 섞이지 않는다. 따라서, 도 1 에 나타낸 마이크로어레이를 이용하여 혼성화를 수행함으로써 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 친수성 영역 상에 시료 생체고분자를 함유한 용액을 적하할 때, 이들 용액들은 친수성 영역을 넘어 유출되지 않기 때문에, 각 친수성 영역 상에 상이한 종류의 시료 생체고분자들을 함유한 용액을 적하할 때, 이들 용액이 오염되지 않는다. 결과적으로, 복수 종 (도 1 에 나타낸 예시적인 마이크로어레이를 이용하는 경우 최대 24 개 종류) 의 상이한 시료 생체고분자를 함유한 용액을, 1 개의 마이크로어레이 상에 선택적으로 혼성화시킬 수 있다.
도 3 은, 본 발명에 따른 혼성화 방법을 수행하기 위한 예시적인 밀폐 용기 (혼성화용 챔버) 를 모식적으로 나타낸 것이다. 상기 밀폐 용기는, 예를 들어, 하부 하우징 (7) 과 상부 하우징 (8) 을 기본적으로 포함하여, 이들 하우징 (8), (7) 을 서로 겹쳐놓을 때 상기 상부 및 하부 하우징 (8), (7) 사이에 밀봉 상태를 제공하는 내부 공간이 형성된다. 도 3 에 나타낸 예시적인 밀폐 용기는, 하부 하우징 (7) 에 고무의 O-고리 (9) 가 장착되어, 이들 하우징 (8), (7) 을 서로 겹쳐놓을 때 상기 상부 및 하부 하우징 (8), (7) 에 의해 형성되는 내부 공간이 밀봉 상태가 되도록 구성된다.
이 밀폐 용기를 이용한 혼성화 방법은, 예를 들어 하기 절차로 수행된다: 우선, 상술한 마이크로어레이의 친수성 영역에, 시료 생체고분자를 함유한 용액 (5) 을 적하한다. 상기 마이크로어레이 (1) 를 하부 하우징 (7) 상에 탑재한다. 하부 하우징 (7) 은, 상기한 바와 같이 상부 하우징 (8) 과 겹쳐질 때 부분적으로 내부 공간을 형성하는 오목한 곳 (recess) 을 가지며, 이 오목한 곳에는 상술한 시료 생체고분자를 함유한 용액 (5) 과 동일한 증기압을 가지는 습윤제 (6) 가 저장된다. 상부 하우징 (8) 을 하부 하우징 (7) 상에 겹쳐 놓아 상기 마이크로어레이 (1) 를 내부 공간 중에 밀폐한다. 이러한 상태로, 상기 밀폐 용기를 8 ~ 16 시간동안 약 65 ℃ 의 온도로 유지하여, 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 서로 혼성화시킨다. 시료 생체고분자가 탐침자 생체고분자에 결합하면, 시료 생체고분자는 탐침자 생체고분자와 함께 마이크로어레이 상에 고정된다. 상기 혼성화 후, 마이크로어레이를 상기 밀폐 용기로부터 꺼내어, 이를 세정액 (세정액의 조성의 예: 0.1 % 의 SDS 를 함유하는 0.2 x SSC 용액 및 0.5 x SSC 용액) 에 침지시키는 등에 의해 상기 마이크로어레이를 세정한 후, 상기 마이크로어레이 상에 고정된 시료 생체고분자에 표지되어 있는 형광 물질을, 예를 들어 마이크로어레이 스캐너 등을 통한 광원으로부터의 여기광으로 여기하여, 발광하는 형광을 검출함으로써, 혼성화된 시료 생체고분자를 검출할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 밀폐 용기 (예시적으로는, 알루미늄 다이 캐스팅에 의해 제조된 상부 하우징 (8) 및 하부 하우징 (7) 을 포함하는 것) 는 상기 마이크로어레이를 밀폐할 수 있는 용기일 수 있고, 예를 들어, 식품 보존용의 부엌용 터퍼웨어 (Tupperware) 를 밀폐 용기로서 이용할 수 있다.
본 발명은, 또한, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있는, 혼성화용 마이크로어레이를 제공한다. 상술한 마이크로어레이는 신규한 것이며, 상기 언급한 본 발명에 따른 혼성화 방법에 특히 바람직하게 사용될 수 있다.
본 발명은 또한, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있는는 마이크로어레이 및 상기 마이크로어레이를 기밀하게 수용할 수 있는 내부 공간을 가진 밀폐 용기를 포함하는, 혼성화용 키트를 제공한다. 즉, 상술한 본 발명에 따른 혼성화 방법에 바람직하게 이용될 수 있는 마이크로어레이 및 밀폐 용기의 조합이, 키트의 형태로 제공될 수 있다. 상기 키트를 이용함으로써, 상기 기술한 바와 같이 시료 생체고분자를 함유한 용액 및 습윤제를 바람직하게 조합할 수 있고, 특히 바람직하게는 이들을 상술한 본 발명에 따른 혼성화 방법에 이용할 수 있다. 본 발명에 따른 키트는, 용기에 미리 저장될 수 있는 습윤제를 추가로 가질 수 있고, 당연한 일로서, 상기 습윤제에 시료 생체고분자를 용해함으로써 시료 생체고분자를 함유한 용액을 적절하게 제조할 수 있도록 구현될 수 있다.
도 1 은, 본 발명에 따른 혼성화 방법에 바람직하게 이용되는 예시적인 마이크로어레이 (1) 를 모식적으로 나타낸 것이다.
도 2 는, 도 1 에 나타낸 마이크로어레이 (1) 의 친수성 영역 (2) 상에, 시료 생체고분자를 함유한 용액 (5) 을 적하한 상태를 모식적으로 나타낸 것이다.
도 3 은, 본 발명에 따른 혼성화 방법을 수행하기 위한 예시적인 밀폐 용기를 모식적으로 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명이 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
RNeasy Mini Kit (Qiagen 제조) 를 이용하여 1 x 106 개의 HeLa 세포로부터, 10 ㎍ 의 전체 (total) RNA 를 제조하였다. Labelstar Array Kit (Qiagen 제조) 와 Cy3-dUTP (Amersham Biosciences 제조) 를 이용하여, 상기 제조한 10 ㎍ 의 HeLa 전체 RNA 로부터 Cy3-표지된 HeLa cDNA 를 제조하고, 이를 시료 생체고분자로 하였다. 상기 시료 생체고분자를 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5 x SSC 용액을 이용하여, 120 ㎕ 의 양으로 조절하였다(상기 시료 생체고분자를 함유한 용액의 용질 몰 농도: 1.67 몰/ℓ).
상술한 방법으로 제조한 시료 생체고분자를 함유한 용액을, 24 개의 친수성 영역과 이들 친수성 영역을 둘러싸도록 형성된 소수성 영역을 그 표면에 가지며 각 친수성 영역에 4 개의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 마이크로어레이의 친수성 영역 상에 적하하였다. 상기 친수성 영역에 고정화된 탐침자 생체고분자로서는, 각각 서열목록의 서열번호 1 ~ 4 로 나타나는 염기 서열을 가지는, 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소, 엔도뉴클레아제 G, pU18 및 람다 파아지 DNA 의 70량체 (70mer) 탐침자 (DNA 합성기에서 합성) 를 이용하였다.
시료 생체고분자를 함유한 용액을 적하한 후, 마이크로어레이를, 도 3 에 나타낸, 하부 하우징 (7) 및 상부 하우징 (8) 을 포함하는 밀폐 용기 (혼성화용 챔버) 의 하부 하우징 (7) 상에 놓아두었다. 하부 하우징 (7) 의 오목부에는, 습윤제로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5 x SSC 600 ㎕ (습윤제의 용질 몰 농도: 1.67 몰/ℓ, 시료 생체고분자를 함유한 용액과의 용질 몰 농도의 차이: ±0 %) 를 미리 저장해 두었다. 마이크로어레이 (1) 를 내부 공간에 밀폐하기 위해, 상부 하우징 (8) 을 하부 하우징 (7) 에 겹쳐두고, 밀폐 용기를 14 시간동안 65 ℃ 의 온도로 유지하여, 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 서로 혼성화시켰다.
혼성화 후에 마이크로어레이를 밀폐 용기로부터 꺼내어, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양을 측정한 결과, 적하한 시점보다 5.5 ㎕ 가 감소하였고, 액량 변화는 4.6 % 이었다. 그 후, 마이크로어레이를 세정액 (0.1 % 의 SDS 를 함유하는 0.2 x SSC 용액 및 0.5 x SSC 용액) 에 침지하여 세정한 후, 마이크로어레이 상에 고정된 시료 생체고분자에 표지되어 있는 Cy3 을 마이크로어레이 스캐너를 통한 광원으로부터의 여기광으로 여기하여 발광하는 형광을 검출함으로써, 혼성화된 생체고분자를 검출할 수 있었다. 따라서, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 마이크로어레이 상에서 건조되는 일 없이, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에만 접촉한 상태로 혼성화를 완료할 수 있었다.
<실시예 2>
습윤제로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 4.5 x SSC 600 ㎕ (습윤제의 용질 몰 농도: 1.50 몰/ℓ, 시료 생체고분자를 함유한 용액과의 용질 몰 농도의 차이: -10 %) 를 이용한 것을 제외하고는, 실시예 1 과 유사하게 혼성화를 수행하였다. 혼성화 후, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양을 측정한 결과, 상기 양이 적하한 시점과 비교하여 4.9 ㎕ 가 증가하였고, 액량 변화는 4.1 % 이었다. 따라서, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 체적이 증가해 상기 용액이 친수성 영역으로부터 넘쳐 버리는 일 없이, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에만 접촉한 상태로 혼성화를 완료할 수 있었다.
<실시예 3>
습윤제로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5.4 x SSC 600 ㎕ (습윤제의 용질 몰 농도: 1.80 몰/ℓ, 시료 생체고분자를 함유한 용액과의 용질 몰 농도의 차이: +8 %) 를 이용한 것을 제외하고는, 실시예 1 과 유사하게 혼성화를 수행하였다. 혼성화 후, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양을 측정한 결과, 상기 양이 적하한 시점과 비교하여 12.0 ㎕ 가 감소하였고, 액량 변화는 10.0 % 이었다. 따라서, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 마이크로어레이 상에서 건조해 버리는 일 없이, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에만 접촉한 상태로 혼성화를 완료할 수 있었다.
<비교예 1>
습윤제로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 4 x SSC 600 ㎕ (습윤제의 용질 몰 농도: 1.33 몰/ℓ, 시료 생체고분자를 함유한 용액과의 용질 몰 농도의 차이: -20 %) 를 이용한 것을 제외하고는, 실시예 1 과 유사하게 혼성화를 수행하였다. 혼성화 후, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양을 측정한 결과, 상기 양이 적하한 시점과 비교하여 17.4 ㎕ 가 증가하였고(액량 변화: 14.5 %), 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양이 현저하게 증가하여, 이 용액이 넘쳐 정상적으로 혼성화를 수행할 수 없었다.
<비교예 2>
습윤제로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 5.5 x SSC 600 ㎕ (습윤제의 용질 몰 농도: 1.83 몰/ℓ, 시료 생체고분자를 함유한 용액과의 용질 몰 농도의 차이: +10 %) 를 이용한 것을 제외하고는, 실시예 1 과 유사하게 혼성화를 수행하였다. 혼성화 후, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양을 측정한 결과, 상기 양이 적하한 시점과 비교하여 14.3 ㎕ 가 감소하였고(액량 변화: 11.9 %), 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양이 혼성화 동안 증기 확산에 의해 현저하게 감소하여, 정상적으로 혼성화를 수행할 수 없었다.
<비교예 3>
습윤제로서 0.5 % 의 SDS 를 함유하는 6 x SSC 600 ㎕ (습윤제의 용질 몰 농도: 2.00 몰/ℓ, 시료 생체고분자를 함유한 용액과의 용질 몰 농도의 차이: +20 %) 를 이용한 것을 제외하고는, 실시예 1 과 유사하게 혼성화를 수행하였다. 혼성화 후, 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양을 측정한 결과, 상기 양이 적하한 시점과 비교하여 21.9 ㎕ 가 감소하였고(액량 변화: 18.2 %), 시료 생체고분자를 함유한 용액의 양이 혼성화 동안 증기 확산에 의해 현저하게 감소하여, 정상적으로 혼성화를 수행할 수 없었다.
표 1 은 상술한 실시예 1 ~ 3 및 비교예 1 ~ 3 의 결과를 나타낸다.
시료 생체고분자를 함유한 용액의 몰 농도 (몰/ℓ) 습윤제의 몰 농도 (몰/ℓ) 몰 농도 차이 (%) 시료 생체고분자를 함유한 용액의 액량 변화
(㎕) (%)
실시예 1 1.67 1.67 ±0 -5.5 4.6
실시예 2 1.67 1.50 -10 +4.9 4.1
실시예 3 1.67 1.80 +8 -12.0 10.0
비교예 1 1.67 1.33 -20 +17.4 14.5
비교예 2 1.67 1.83 +10 -14.3 11.9
비교예 3 1.67 2.00 +20 -21.9 18.2
본 발명의 혼성화 방법에 따르면, 일반적으로 혼성화를 효과적으로 수행하기 위해 요구되는 커버 글라스 등의 슬라이드 글라스 상의 구조물이 사용되지 않기 때문에, 매우 간단하고 확실하게 혼성화를 수행할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 혼성화용 마이크로어레이 및 혼성화용 키트를 이용함으로써, 복수 종의 시료 생체고분자를 동시에 검출하는, 동시 다중-표본 혼성화를 간단하고 확실하게 수행할 수 있다. 따라서, 다수의 시료에 대한 처리 시간, 뿐만 아니라 필요한 마이크로어레이 수 및 필요한 시약의 양을 선행 기술과 비교하여 현저하게 감소시킬 수 있다.
<110> KURASHIKI BOSEKI KABUSHIKI KAISHA <120> Hybridization method as well as Hybridization Microarray and Hybridization Kit <130> 904465 <150> JP2004-056511 <151> 2004-03-01 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 70 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 70mer probe of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase <400> 1 gctgagaacg ggaagcttgt catcaatgga aatcccatca ccatcttcca ggagcgagat 60 ccctccaaaa 70 <210> 2 <211> 70 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 70 mer probe of endonuclease G <400> 2 tggagcgctt cctggtgccc atcgagagca ttgagcgggc ttcggggctg ctctttgtgc 60 caaacatcct 70 <210> 3 <211> 70 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 70 mer probe of pU18 <400> 3 cgactctaga ggatccccgg gtaccgagct cgaattcgta atcatggtca tagctgtttc 60 ctgtgtgaaa 70 <210> 4 <211> 70 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 70mer probe of Lamda phage DNA <400> 4 gtccttctcg gtgcatgcca ctgttgccaa tgacctgcct aggaattggt tagcaagtta 60 ctaccggatt 70

Claims (5)

  1. 시료 생체고분자를 함유한 용액과 동일한 증기압을 가진 용액이 담긴 밀폐 용기 내에서 혼성화를 수행함으로써, 시료 생체고분자를 함유한 용액이 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 슬라이드 글라스에만 접촉한 상태로, 시료 생체고분자와 탐침자 생체고분자를 혼성화하는 혼성화 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 표면을 가진 친수성 영역, 및 상기 친수성 영역 주위의, 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역으로 이루어진 슬라이드 글라스 상에서 혼성화를 수행하는, 혼성화 방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 슬라이드 글라스는, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있는 마이크로어레이인, 혼성화 방법.
  4. 제 1 항에 따른 혼성화에 적용하기 위한 혼성화용 마이크로어레이로서, 복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소 수성 영역이 형성되어 있는 혼성화용 마이크로어레이.
  5. 하기를 포함하는, 제 1 항에 따른 혼성화에 적용하기 위한 혼성화용 키트:
    복수의 탐침자 생체고분자가 고정되어 있는 복수의 친수성 영역이 배열되어 있고, 상기 배열된 복수의 친수성 영역의 주위에 탐침자 생체고분자가 고정되어 있지 않은 소수성 영역이 형성되어 있는 마이크로어레이; 및
    상기 마이크로어레이를 수용할 수 있는 내부 공간을 가진 밀폐 용기.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009058867A2 (en) * 2007-10-29 2009-05-07 Primorigen Biosciences, Llc Affinity measurements using frameless multiplexed microarrays

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4779514B2 (ja) * 2005-09-02 2011-09-28 ニプロ株式会社 試験片およびその製造方法
US7790007B2 (en) 2005-11-29 2010-09-07 Nec Corporation Electrophoresis chip, electrophoresis apparatus, and method for analyzing a sample
US20070161119A1 (en) * 2006-01-12 2007-07-12 Peck Bill J Methods for fabricating chemical arrays
JP5490783B2 (ja) * 2008-05-09 2014-05-14 アコーニ バイオシステムズ マイクロアレイシステム
CN103698507B (zh) * 2014-01-09 2015-05-20 南京医科大学第一附属医院 可拆卸及空间密闭的载玻片孵育器
CN104614517B (zh) * 2014-01-09 2016-03-02 南通大学 可拆卸的载玻片孵育器的使用方法
USD815752S1 (en) * 2014-11-28 2018-04-17 Randox Laboratories Ltd. Biochip well
CN107904283A (zh) * 2017-11-09 2018-04-13 武汉康录生物技术股份有限公司 一种即用型多探针杂交玻片及其制备方法和应用
CN108728346A (zh) * 2018-08-20 2018-11-02 中山康源基因技术科技有限公司 间歇式重力微流芯片杂交装置及方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6589726B1 (en) * 1991-09-04 2003-07-08 Metrigen, Inc. Method and apparatus for in situ synthesis on a solid support
US6555361B1 (en) * 1999-03-24 2003-04-29 Corning Incorporated Hybridization chamber for high density nucleic acid arrays
US6773676B2 (en) * 1999-04-27 2004-08-10 Agilent Technologies, Inc. Devices for performing array hybridization assays and methods of using the same
CN1356392A (zh) * 2000-12-01 2002-07-03 吴昌 一种核酸分子杂交方法及所用的装置
JP2002267667A (ja) * 2001-03-08 2002-09-18 Hitachi Software Eng Co Ltd マイクロアレイ及びマイクロアレイ用基板
CA2450676C (en) 2001-03-09 2010-03-30 Biomicro Systems, Inc. Method and system for microfluidic interfacing to arrays
US6558907B2 (en) * 2001-05-16 2003-05-06 Corning Incorporated Methods and compositions for arraying nucleic acids onto a solid support
EP1490824A2 (en) * 2002-03-28 2004-12-29 Deutsches Krebsforschungszentrum Heidelberg Method and system for determining absolute mrna quantities
US20030194709A1 (en) * 2002-04-10 2003-10-16 Xing Yang Hydrophobic zone device
AU2003270898A1 (en) * 2002-09-27 2004-04-19 Nimblegen Systems, Inc. Microarray with hydrophobic barriers
US20040152083A1 (en) * 2003-01-31 2004-08-05 Leproust Eric M. Multiple arrays with surface energy transition to maintain separation of samples on the arrays

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009058867A2 (en) * 2007-10-29 2009-05-07 Primorigen Biosciences, Llc Affinity measurements using frameless multiplexed microarrays
WO2009058867A3 (en) * 2007-10-29 2009-07-23 Primorigen Biosciences Llc Affinity measurements using frameless multiplexed microarrays

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JP3860174B2 (ja) 2006-12-20

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