KR20060112076A - 경제성과 안정성을 고려한 최적의 다중증폭기법을 이용한한우 개체식별 마커시스템 개발 - Google Patents

경제성과 안정성을 고려한 최적의 다중증폭기법을 이용한한우 개체식별 마커시스템 개발 Download PDF

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KR20060112076A
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marker system
hanwoo
multiplex pcr
individual identification
stability
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KR1020050034488A
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이학교
오재돈
전광주
공홍식
박미현
임현진
홍윤숙
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오재돈
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    • B60H1/00—Heating, cooling or ventilating [HVAC] devices
    • B60H1/02—Heating, cooling or ventilating [HVAC] devices the heat being derived from the propulsion plant
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    • B60H1/08—Heating, cooling or ventilating [HVAC] devices the heat being derived from the propulsion plant from cooling liquid of the plant from other radiator than main radiator
    • B60H1/10—Heating, cooling or ventilating [HVAC] devices the heat being derived from the propulsion plant from cooling liquid of the plant from other radiator than main radiator the other radiator being situated in a duct capable of being connected to atmosphere outside vehicle
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Abstract

본 발명은 한우의 개체식별을 위한 Microsatellite marker의 유전자형 분석에 있어 다중증폭을 이용하여 보다 경제적이고 안정적인 최적의 marker system 설정을 위해 실시하였다. 23개의 MS marker를 이용하여 926두를 분석하였으며 결과를 제시하였다. 최적의 다중증폭조합 M-1, M-2을 설정하였고, 최적의 PCR program 조건을 선정하였다.
본 발명에서 제시한 M-1, 2를 이용하여 14개의 MS Marker를 PCR Program으로 각 각 증폭하여 genotyping 함으로서 개체식별이 높고 한우에서의 오류를 최소화 할 수 있는 marker system을 구축 할 수 있으며 본 발명에서 제시한 방법을 통해 경제적인 측면에서 많은 비용을 절감함과 동시에 분석의 시간적인 단축을 가져올 수 있다. 또한 여러 실험실에서 생성된 data들과 공유 및 비교하는데 있어 문제가 없으며 다른 연관된 연구 및 분석에 있어서 더욱 유리한 것으로 판단되어 진다.
Microsatellite marker, 다중증폭, marker system, 한우 개체식별

Description

경제성과 안정성을 고려한 최적의 다중증폭기법을 이용한 한우 개체식별 마커시스템 개발{Establishment of individual identification marker system using the Multiplex PCR that takes economy and stability into consideration in Hanwoo }
Multiplex PCR(다중증폭)기법은 일반 PCR기법을 변형한 형태로서 두개 또는 그이상의 유전자내 지역을 각각의 primer를 이용하여 동시에 증폭시키는 방법이다. 이 방법은 한번의 PCR을 통해 DNA의 여러 지역을 증폭시킬 수 있어 매우 경제적인 방법이다. 1988년 처음 발표된 이후 지속적인 연구를 통해 발전해왔다. 다중증폭을 이용하여 DNA 검사를 위해 여러 지역을 증폭하는데 성공하였으며 분석을 통해 염기유전자 일부의 결실지역과 변이지역 그리고 다형성 및 QTL 탐색에 이용되어지고 있다. 다중증폭은 primer의 농도를 비롯한 각 시약들의 농도와 양 그리고 cycling profile등 많은 요인들이 일반 PCR기법과는 다소 차이가 있으며 이러한 요인들은 상호적으로 민감하게 반응하며 결과에 영향을 미치고 있다. 다중증폭이 원리적으로는 경제적이지만 대부분의 연구가 미국의 ABI(USA.)사의 자동염기 분석가와 여기에 고유하게 쓰이는 고가의 형광물질을 이용하고 있기 때문에 PCR의 안정성을 떠나서 한우의 개체 식별 사업에 있어 경제성 측면에서는 아직 까지는 미지수인 실정이다. 또한 ABI(USA.)사의 분석기기에 쓰여지는 marker system을 타사의 분석기기에서 사용하기에는 많은 어려움이 따르고 있다. 또한 ABI(USA.)사의 marker system 외국의 품종을 바탕으로 제작되었기 때문에 한우의 개체식별에 있어 전혀 오류가 없다고 하기에는 무리가 따르는 실정이다.
본 발명은 다양한 DNA다형 관찰 기법을 바탕으로 한우집단의 유전적 특성을 규명하고 이에 근거한 한우개체의 추적, 동일성을 검정 및 친자확인을 위한 유전학적 개체 인식 시스템에 소요되는 마커 시스템을 효율적이고 경제적으로 설정하여 이를 이용하고자 하는 것이며
multiplex PCR반응은 GeneAmp PCR System 2700에서 약 50 ng template DNA, 10 pmol each primer 0.1 ㎕, 2.5 mM each of dNTP 1 ㎕, 0.5 U of Taq DNA polymerases(Promega)과 1.2 ㎕ 10X PCR buffer mM(100 mM Tris-HCl, pH 8.3, 500 mM KCl,e 0.01% gelatin, 0.25% nonidet P40 and 20 mM MgCl2), ddH2O를 포함, 10㎕ volume으로 반응액을 조성하여표 2에서 제시한 PCR program을 이용하여 표1에서 제시한 M-1과 M-2 조합을 각각의 multiplex PCR을 수행하여 두개의 증폭산물을 genescan mixture에 1 ㎕씩 혼합하여 genotype을 분석 할 경우 각 marker의 allele의 길이가 비슷하여 출현구간이 중복이 되더라도 특정 형광물질을 서로 다르게 붙여 구분이 가능하도록 고안되었다. 본 발명에서 제시한 방법을 통해 genescan을 실 시한 결과 선택되어진 14개의 Microsatellite marker의 genotype을 얻을 수 있었다. 또한 수차례의 반복 실험을 실시하여 결과의 재현성을 확인 하였다. 본 발명이 제시하는 방법을 이용하게 되면 기존에 시판되어지고 있는 ABI(USA.)사의 stock marker를 이용하여 분석하는 비용에 비해 최소 5배 이상의 비용 절감 효과를 얻을 수 있을 것으로 판단된다. 또한 ABI(USA.)사의 stock marker 에 한우특이적 marker를 포함시켜 한우에서 개체식별 시스템을 운용함에 있어 오류를 최소화 할 수 있는 장점을 가지고 있다.
본 발명에서 제시한 M-1, 2를 이용하여 14개의 MS Marker를 PCR Program으로 증폭하여 genotyping 함으로서 개체식별이 높고 한우에서의 오류를 최소화 할 수 있는 marker system을 구축 할 수 있으며 본 발명에서 제시한 방법을 통해 경제적인 측면에서 많은 비용을 절감함과 동시에 분석의 시간적인 단축을 가져올 수 있다. 또한 여러 실험실에서 생성된 data들과 공유 및 비교하는데 있어 문제가 없으며 다른 연관된 연구 및 분석에 있어서 더욱 유리한 것으로 판단되어 진다.

Claims (3)

  1. M-1(BMS1747, BM2113, BL1009, ILSTS103, BM1824, TGLA126, ETH3, ETH225), M-2(TGLA227, TGLA53, SPS115, BL23, ETH10, ILSTS006)의 14개 Microsatellite marker 조합을 결성 하는것
  2. 표 2에서 제시한 genotyping을 위한 최적의 multiplex PCR program
  3. M-1, 2를 이용하여 14개의 Microsatellite marker를 제시한 multiplex PCR Program 으로 증폭하여 genotyping하는 것
KR1020050034488A 2005-04-26 2005-04-26 경제성과 안정성을 고려한 최적의 다중증폭기법을 이용한한우 개체식별 마커시스템 개발 KR20060112076A (ko)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103937783A (zh) * 2014-04-29 2014-07-23 海河流域水环境监测中心 一种单克隆微囊藻dna的提取方法

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