KR20050101158A - Ｙ2 수용체-결합 펩티드들의 강화된 점막 전달용 혼합물과방법 및 비만 예방과 치료를 위한 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 비만을 포함하여 포유류 개체들에게 나타나는 다양한 질병과 증상을 치료하기 위해 최소한 하나의 YY 펩티드 혼합물 및 YY 펩티드의 비내 전달을 강화시키 위한 하나 또는 그 이상의 비내 전달 강화제에 관한 제약 조성물들과 방법들에 관한 것이다. 발명의 한 측면에서, 상기 비내 전달 포뮬레이션들과 방법들은 YY 펩티드가 혈장 또는 중추신경계(CNS) 조직 또는 체액으로 전달되는 것이 강화될 수 있도록 한다. 예를 들면, 상기 개체의 혈장 또는 CNS 조직 또는 체액에서 YY 펩티드의 최고 농도(C_max)는, 이 개체에 같은 농도의 PYY 펩티드를 투여하거나 피하 주사로 PYY 펩티드를 투여한 후 개체의 혈장 또는 CNS 조직 또는 체액에서의 YY 펩티드 최고 농도와 비교해 보았을 때 20% 또는 그 이상을 나타낸다.

Description

Ｙ2 수용체-결합 펩티드들의 강화된 점막 전달용 혼합물과 방법 및 비만 예방과 치료를 위한 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCED MUCOSAL DELIVERY OF Y2 RECEPTOR-BINDING PEPTIDES AND METHODS FOR TREATING AND PREVENTING OBESITY}

본원발명은 포유류 환자들의 다양한 질병들과 상황들을 예방하고 치료하기 위하여 개량된 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 전달용 조성물과 방법들을 제공한다. 본 발명에 따른 포유류 환자에게 적절한 예방법과 치료법은 인간 및 개, 고양이, 쥐, 기니 피그 및 토끼와 같은 가금류 종들을 포함한 인간 아닌 영장류인 말, 소, 양 및 염소와 같은 가축류 종들을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 하기에서 제공되는 정의들에 의해 보다 구체적으로 이해될 수 있다.

Y2 수용체-결합 펩티드들

본 발명의 점막 포뮬레이션에 사용된 Y2 수용체-결합 펩티드들은 췌장 폴리펩티드 군을 포함하는데, 이는 자연스럽게 생리적 활성을 발생시키는 3개의 펩티드인 PP, NPY 및 PYY로 이루어지는 것을 특징으로 한다. Y2 수용체-결합 펩티드들 및 그들의 사용들의 실험예들은 미국특허 제5,026, 685호; 미국특허 제5,574,010호; 미국특허 제5,604, 203호; 미국특허 제5,696,093호 ; 미국특허 제6,046,167호; Gehlertet. al., Proc Soc Exp Biol Med 218 : 7-22 (1998); Sheikh et al. Am JP hysiol, 261 : 701-15 (1991) ; Fournier et al.,Mol Pharmacol 45 : 93-101 (1994); Kirby et al., J Med C/em 38 : 4579-4586 (1995); Rist et al., Eur J Biochena 247: 1019-1028 (1997);Kirby et al., J Med Clze Tn 36 : 3802-3808 (1993); Grundemar et al., Regulatory 펩티드들 62 : 131-136 (1996); 미국특허 제5,696,093호 (PYY 길항제들의 실험예들), 미국특허 제6,046,167호에서 개시되어 있다.

본 발명에 따른 Y2 수용체-결합 펩티드는 자유 염기들, 산 첨가염들 또는 나트륨염들 또는 포타시움과 같은 금속염들 또는 아미데이션, 글리코실레이션, 아실레이션, 설페이션, 포스포릴레이션, 아세틸레이션 및 사이클리제이션(미국특허 제6,093, 692호; 및 미국특허 제 6,225, 445호) 및 페길레이션(pegylaton)과 같은 반응에 의해 변환된 Y2 수용체-결합 펩티드들을 포함한다.

펩티드 YY 길항제들

상기에서 언급된 "PYY"는 네이티브-서열에서 PYY(1-36)을 의미하며 또한 유도체들, 단편들 및 자연상태, 합성, 또는 재조합에 따라 다양한 형질의 PYY 유사체들을 의미한다. 상기 PYY는 적어도 마지막 15개의 아미노산 잔기들 또는 상기 PYY 서열의 그에 따른 유사체가 PYY(22-36) (SEQ ID NO: 3)로 이루어져야 한다. 다른 PYY 펩티드들은 다음과 같은 서열을 가진 PYY들이 사용될 수 있다:.PYY(1-36) (SEQ ID NO: 1) PYY(3-36) SEQ ID NO: 2) PYY(4-36) (SEQ ID NO : 4) PYY(5-36) (SEQ ID NO: 5), PYY(6-36) (SEQ ID NO : 6), PYY(7-36) (SEQ ID NO : 7) PYY(8-36) (SEQ ID NO: 8), PYY9-36 (SEQ ID NO: 9) PYY(10-36) (SEQ ID NO: 10), PYY(11-36) (SEQ ID NO: 11), PYY(12-36) (SEQ ID NO: 12), PYY(13-36) (SEQ ID NO : 13), PYY(14-36) (SEQ ID NO: 14), PYY(15-36) (SEQ ID NO: 15), PYY(16-36) (SEQ ID NO: 16), PYY(17-36) (SEQ ID NO: 17), PYY(18-36) (SEQ ID NO: 18), PYY(19-36) (SEQ ID NO: 19), PYY(20-36) (SEQ ID NO: 20) 및 PYY(21-36) (SEQ ID NO: 21). 이러한 펩티드들은 전형적으로 뇌 및 다른 장소에서 Y 수용체들, 특히 Y2 및/또는 Y5 수용체에 결합된다. 전형적으로 이러한 펩티드들은 비록 항상 필요한 것은 아님에도 불구하고 엔도톡신-프리 또는 피로겐-프리 형질들에서 합성된다. 다른 PYY 펩티드들은 예를 들어 다음과 같은 기존 아미노산 잔기 변화가 PYY 펩티드의 특정 자리 돌연변이를 발생시킨 PYY 펩티드들을 포함한다:.[Asp¹⁵] PYY(15-36) (SEQ ID NO: 90),[Thr¹³] PYY(13-36) (SEQ ID NO: 91), [Val¹²] PYY(12-36) (SEQ ID NO: 92), [Glu¹¹] PYY(11-36) (SEQ ID NO: 93),[Asp¹⁰] PYY(10-36) (SEQ ID NO: 94), [Val⁷] PYY(7-36) (SEQ ID NO: 95), [Asp⁶] PYY (6-36) (SEQ ID NO: 96), [Gln⁴] PYY (4-36) (SEQ ID NO: 97), [Arg⁴] PYY (4-36) (SEQ ID NO: 98), [Asn⁴] PYY(4-36) (SEQ ID NO: 99), [Val³] PYY(3-36) (SEQ ID NO: 100) 및 [Leu³] PYY(3-36) (SEQ ID NO:101). 다른 PYY 펩티드들은 다음과 같이 적어도 2개 이상의 기존 아미노산 잔기가 변화된 그러한 펩티드들을 포함한다: [Asp¹⁰Asp¹⁵] PYY(10-36) (SEQ ID NO: 102), [Asp⁶,Thr¹³] PYY(6-36)(SEQ ID NO : 103), [Asn⁴, Asp¹⁵] PYY (4-36) (SEQ ID NO: 104) 그리고 [Leu³, Asp¹⁰ ] PYY(3-36) (SEQ ID NO: 105). 또한 PYY 유사체들은 하기 문서들을 통해서도 개시되어 있다: 미국특허 제5,604, 203호 및 제5,574,010호; Balasubramaniam, et al., Peptide Research 1 : 32 (1988); 일본특허출원 제2,225,497호 (1990); Balasubramaniam, et al., Peptides 14 :1011, 1993; Grandt, et at., Reg. Peptides 51 : 151, (1994); PCT 국제출원 제94/03380호, 미국특허 제5,604,203호 및 제5,574,010호. 이러한 펩티드들은 전형적으로 뇌 및 다른 장소에서 Y 수용체, 특히 Y2 및/또는 Y5 수용체에 결합된다. 전형적으로 이러한 펩티드들은 비록 항상 필요한 것은 아님에도 불구하고 엔도톡신-프리 또는 피로겐-프리 형질들에서 합성된다.

PYY 길항제들은 쥐 PYY(SEQ ID NO: 72) 및 인간에 대응하는 아미노기 말단들이 절단된 형질들, 돼지 PYY(SEQ ID NO: 73) 및 인간에 대응하는 아미노기 말단들이 절단된 형질들, 기니 피그 PYY(SEQ ID NO : 74) 및 인간에 대응하는 아미노기 말단들이 절단된 형질들을 포함한다.

본 발명에 따른 PYY 펩티드는 또한 자유 염기, 산 첨가염들 또는 나트륨염들 또는 포타시움과 같은 금속염들 또는 아미데이션, 글리코실레이션, 아실레이션, 설페이션, 포스포릴레이션, 아세틸레이션, 사이클리제이션 및 다른 현저하게 알려진 공유결합 변환 방법들에 변환된 PYY 펩티드들을 포함한다. 이러한 펩티드들은 전형적으로 뇌 및 그 밖의 장소에서 Y 수용체들, 특히 Y2 및/또는 Y5 수용체들에 결합된다. 전형적으로 이러한 펩티드들은 비록 항상 필요한 것은 아님에도 불구하고 엔도톡신-프리 또는 피로겐-프리 형질들에서 합성된다.

뉴로펩티드 Y 길항제들

NPY는 다른 Y2 수용체-결합 펩티드이다. NPY 펩티드들은 상기 아미노 말단기에서 잘려진 NPY(1-36)의 단편들과 마찬가지로 전체-길이 NPY(1-36) (SEQ ID NO: 22)도 포함한다. 상기 Y2 수용체 결합의 효과를 위하여 NPY 길항제는 카르복시기 말단에서 적어도 마지막 11개의 아미노산 잔기들이 NPY(26-36) (SEQ ID NO: 23)으로 구성되어야 한다. 상기 Y2 수용체에 결합하는 NPY 길항제들의 다른 실험예들은 NPY(3-36) (SEQ ID NO: 24), NPY(4-36) (SEQ ID NO: 25), NPY(5-36) (SEQ ID NO: 26), NPY(6-36) (SEQ ID NO: 27), NPY(7-36) (SEQ ID NO: 28), NPY(8-36) (SEQ ID NO: 29), NPY(9-36) (SEQ ID NO: 30), NPY(10-36) (SEQ ID NO:31), NPY(11- 36) (SEQ ID NO: 32), NPY(12-36) (SEQ ID NO: 33), NPY(13-36) (SEQ ID NO: 34), NPY(14-36) (SEQ ID NO: 35), NPY(15-36) (SEQ ID NO: 36), NPY(16-36) (SEQ ID NO: 37), NPY(17-36) (SEQ ID NO: 38), NPY(18-36) (SEQ ID NO: 39), NPY(19-36) (SEQ ID NO: 40), NPY(20-36) (SEQ ID NO: 41), NPY(21-36) (SEQ ID NO: 42), NPY(22-36) (SEQ ID NO: 43), NPY(23-36) (SEQ ID NO: 44), NPY(24-36) (SEQ ID NO: 45) 및 NPY(25-36) (SEQ ID NO: 46)이다.

다른 NPY 길항제들은 쥐 NPY (SEQ ID NO: 75) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 쥐 NPY(SEQ ID NO: 76) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 개 NPY(SEQ ID NO: 77) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 돼지 NPY(SEQ ID NO: 78) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 소 NPY (SEQ ID NO: 79) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 양 NPY (SEQ ID NO: 80) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들 및 기니 피그 NPY (SEQ ID NO: 81) 및 인간 형질에 있어서 NPY(3-36)로부터 NPY (26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들을 포함한다.

본 발명에 따른 NPY 펩티드는 또한 자유 염기, 산 첨가염들 또는 나트륨염들 또는 포타시움과 같은 금속염들 또는 아미데이션, 글리코실레이션, 아실레이션, 설페이션, 포스포릴레이션, 아세틸레이션, 사이클리제이션 및 다른 현저하게 알려진 공유결합 변환 방법들에 변환된 PYY 펩티드들을 포함한다. 이러한 펩티드들은 전형적으로 뇌 및 그 밖의 장소에서 Y 수용체들, 특히 Y2 및/또는 Y5 수용체들에 결합된다. 전형적으로 이러한 펩티드들은 비록 항상 필요한 것은 아님에도 불구하고 엔도톡신-프리 또는 피로겐-프리 형질들에서 합성된다.

췌장 펩티드

췌장 펩티드(PP) 및 PP 길항제는 또한 상기 Y2 수용체에 결합된다. 상기 PP 길항제들의 예들은 전-길이 PP(1-36) (SEQ ID NO: 47) 및 아미노기 말단에서 절단된 다수의 PP 단편들이다. 상기 Y2 수용체에 결합하기 위하여 PP 길항제는 카르복시기-말단에서 마지막 11개의 아미노산 잔기들이 PP(26-36), (SEQ ID NO:48) 이어야만 한다. 상기 Y2 수용체에 결합하기 위하여 다른 PP 예들은 PP(3-36) (SEQ ID NO: 49), PP(4- 36) (SEQ ID NO: 50), PP(5-36) (SEQ ID NO: 51), PP(6-36) (SEQ ID NO: 52), PP(7-36) (SEQ ID NO: 53), PP(8-36) (SEQ ID NO: 54), PP(9-36) (SEQ ID NO: 55), PP(10-36) (SEQ ID NO: 56), PP(11-36) (SEQ ID NO: 57), PP(12-36) (SEQ ID NO: 58), PP (13-36) (SEQ ID NO: 59), PP(14-36) (SEQ ID NO: 60), PP (15-36) (SEQ ID NO: 61), PP(16-36) (SEQ ID NO: 62), PP (17-36) (SEQ ID NO: 63), PP(18-36) (SEQID NO: 64), PP (19-36) (SEQ ID NO: 65), PP(20-36) (SEQ ID NO: 66), PP (21-36) (SEQ ID NO: 67), PP(22-36) (SEQ ID NO:68), PP (23-36) (SEQ ID NO: 69), PP(24-36) (SEQ ID NO: 70) 및 PP (25-36) (SEQ ID NO: 71)이다.

다른 PP 길항제들은 양 PP(SEQ ID NO: 82) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 돼지 PP (SEQ ID NO: 83) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 개 PP(SEQ ID NO: 84) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 고양이 PP(SEQ ID NO: 85) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 소 PP(SEQ ID NO: 86) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 쥐 PP (SEQ ID NO: 87) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP(26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들, 마우스(SEQ 88) 및 인간 형질에 있어서 PP(3-36)로부터 PP (26-36)까지 아미노기 말단이 절단된 형질들 및 기니 피그 PP (SEQ ID NO: 89)이다.

본 발명에 따른 PP 펩티드는 또한 자유 염기, 산 첨가염들 또는 나트륨염들 또는 포타시움과 같은 금속염들 또는 아미데이션, 글리코실레이션, 아실레이션, 설페이션, 포스포릴레이션, 아세틸레이션, 사이클리제이션 및 다른 현저하게 알려진 공유결합 변환 방법들에 변환된 PYY 펩티드들을 포함한다. 이러한 펩티드들은 전형적으로 뇌 및 그 밖의 장소에서 Y 수용체들, 특히 Y2 및/또는 Y5 수용체들에 결합된다. 전형적으로 이러한 펩티드들은 비록 항상 필요한 것은 아님에도 불구하고 엔도톡신-프리 또는 피로겐-프리 형질들에서 합성된다.

점막 전달 강화제들

"점막 전달 강화제들"은 화학 약제 및 다른 성분들로 정의되며, 이들이 물, 염 및/또는 일반적 완충제 및 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성된 포뮬레이션(상기 조절 포뮬레이션)에 첨가될 때, 이것들은 혈액, 혈청, 또는 뇌척수액에서 측정된 최대 농도(C_max) 또는 시간에 따른 농도 기울기에서 AUC에서 나타나는 바와 같이 점막을 가로지르는 Y2 수용체-결합 펩티드의 수송에 있어서 현저한 증가를 발생시킨다. 점막은 비강, 구강, 장내, 입주위, 기관지내, 질내, 및 직장 점막 표면들을 포함하며 실질적으로는 외부와 연계되는 모든 신체의 구멍들 또는 인체 내의 수송관들을 연결하는 모든-드러나지 않는 세포막들을 포함한다. 점막 전달 강화제들은 때때로 매개체로 지칭된다.

엔도톡신-프리 포뮬레이션

"엔도톡신-프리 포뮬레이션"은 Y2-수용체- 결합 펩티드 및 하나 이상의 점막 전달 강화제들을 포함한 포뮬레이션을 의미하는데, 상기 점막 전달 강화제들은 실질적으로 엔도톡신 및/또는 관련된 피로게닉 물질들이 제거된다. 엔도톡신들은 미생물 내에 한정된 톡신 및 상기 미생물이 파괴 또는 사멸되었을 때 단지 유출되는 톡신을 포함한다. 피로게닉 물질들은 상기 외부 세포막 및 다른 미생물들로부터 발열-유도, 열안정성 물질들(글리코프로테인들)을 포함한다. 이러한 물질 모두는 인간에게 투여되는 경우, 발열, 저혈압증 및 쇼크의 원인이 될 수 있다. 엔도톡신-프리인 포뮬레이션들의 생성은 특별한 장치, 전문가를 필요로 하며 엔도톡신이 제거되지 않은 포뮬레이션 생성에 비하여 더욱 현저하게 그 비용이 증가될 수 있다.

설치류 주입에 있어서 동시에 NPY 또는 PYY의 정맥 투여는 저혈압증 및 심지어 엔도톡신 단독 투여와 관련된 사망까지 예방하는 것으로 알려져 있으며(미국특허 제4,839,343호), 이러한 치료 약제의 엔도톡신-프리 포뮬레이션들의 생성은 비-주입식 투여를 위하여 필요한 것으로 기대되지 않았다.

비-주입식 투여

"비-주입식 투여"는 동맥 또는 정맥 혈관 속으로 직접적으로 주입하는 전달 방식이 아닌 것을 의미하는데, 이 방법은 특히 바늘, 주사기 또는 다른 침습적인 방법에 의해 신체부분 속으로 (전형적으로 액체를 사용하여) 물질을 주입하는 방법이다. 비-주입식 투여는 파하주사, 근육주사, 인트라파리토니얼 주입 및 점막전달에 대한 비-주입식 방법들을 포함한다.

비만의 치료와 예방

상기에서 언급한 바와 같이, 본 발명은 포유류 환자들에 있어서 비만을 예방하고 치료하기 위하여 Y2 수용체-결합 펩티드의 비내 점막 전달에 대한 개량되고 유용한 방법 및 조성물들을 제공한다. 상기 비만의 예방과 치료는 식사 동안 음식물 섭취 감소 및/또는 투여 동안 체중 감소 또는 체중이 늘어나기 전에 감소된 체중을 유지함에 의해 만성적인 비만의 발병률을 떨어뜨리고 그 심각한 정도를 낮게 하는 것을 의미한다.

본 발명은 포유류 환자들에 있어서 비만을 예방하고 치료하기 위하여뇌 영역에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 비내 점막 전달에 대한 개량되고 유용한 방법 및 조성물들을 제공하는데, 상기 뇌 영역이라 함은 예를 들어, 시상하부, 또는 프루피오밀라노코르틴(POMC) 및 NPY 실제 뉴론들을 의미한다. 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 또한 디하이드로피리딘과 같은 Y1 수용체 길항제와 연계되어 투여될 수 있다.

전달 방법과 조성물들

포유류 환자들에게 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 투여에 대한 개량된 방법들과 조성물들은 Y2 수용체-결합 펩티드 투여 스케줄들을 최적화한다. 본 발명은 하나 이상의 점막 전달-강화제로 포뮬레이트된 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 전달을 제공하는데, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 복용량 방출은 대체적으로 표준화되어있고/거나 Y2 수용체-결합 펩티드 방출 범위의 효과적인 전달 기간은 하기 점막 투여에 있어서 약 0.1~2.0 시간; 0.4~1.5 시간; 0.8~1.0 시간에 대해 유지된다. 상기 완성된 Y2 수용체-결합 펩티드의 유지된 방출은 본 발명에 따른 방법 및 조성물을 사용한 외인성 Y2 수용체-결합 펩티드의 반복 투여에 의해 촉진된다.

지효성(Sustained Release) 조성물들과 방법들

포유류 환자들에 있어서 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 투여에 대한 개량된 조성물들과 방법들은 Y2 수용체-결합 펩티드 투여 스케줄들을 최적화한다. 본 발명은 하나 이상의 점막 전달-강화제 및 최적화의 지효성 -강화제 또는 약제들과 결합된 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 개량된 점막(예를 들어, 비강) 전달 포뮬레이션을 제공한다. 본 발명의 점막 전달-강화제는 전달에 있어서의 증가, 즉, 점막에 투여된 Y2 수용체-결합 펩티드의 치료 활성을 강화하기 위한 최대 혈장 농도(C_max)에서의 증가를 제공한다.

상기 혈장 및 CNS에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 치료적 활성에 영향을 미치는 두 번째 요소는 체류시간(RT)이다. 비내 전달-강화제와 결합된 지효성-강화제들은 C_max 를 증가시키고 Y2 수용체-결합 펩티드의 체류시간(RT)을 증가시킨다. 중합 전달 매체 및 지효성-강화 포뮬레이션들을 제공하는 본 발명의 기타 다른 약제들 및 방법들은, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 상기에서 개시되었다. 본 발명은 포유류 환자들에 있어서 비만, 대장암, 췌장암, 또는 유방암과 관련된 증상의 치료를 위한 개량된 Y2 수용체-결합 펩티드 전달 방법과 투여 형식을 제공한다.

본 발명의 점막 전달 포뮬레이션들과 방법 내에서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 종종 점막 전달을 위한 적절한 전달자 및 매체로 결합되거나 조화되어 투여된다. 상기에서 언급한 바와 같이, "매개체"는 약학적으로 수용 가능한 고체 또는 액체 충전재, 희석제, 또는 캡슐화된 물질을 의미한다. 액체 전달자가 포함된 물은 약학적으로 수용 가능한 산화제들, 알칼리화제들, 항미생물 보존제들, 항산화제들, 완충제들, 킬레이트제들, 합성화제, 용해제들, 습윤제들, 용매제들, 현탁액제 및/또는 점도-증가제들, 강화제들, 습윤제들 또는 기타 다른 생리적 양립 가능한 물질들과 같은 첨가제들을 포함한다. 상기 카테고리들에 의해 기재된 성분들의 타뷸레이션은 미국 Pharmacopeia National Formulary, 1857-1859, (1990) 에서 발견될 수 있다. 약학적으로 수용 가능한 매개체들로 이용될 수 있는 물질들의 예는 약학적인 포뮬레이션들에서 사용되는 다른 무독성의 양립가능한 물질들과 같이 다음과 같다: 락토오스, 포도당 및 수크로오스와 같은 당류; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분류; 소듐 카르복실 메틸 셀룰로오즈, 에틸 셀룰로오즈, 셀룰로오즈 아세테이트와 같은 셀룰로오즈 및 그의 유도체들; 분말 트래거캔스 고무; 맥아; 젤라틴; 활석; 코코아 버터 및 좌약 왁스들과 내용물들; 피넛 오일, 면실유, 잇꽃유, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 콩기름과 같은 오일들; 프로필렌글리콜과 같은 글리콜들; 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올들; 에틸 올레이트 및 에틸 로레이트와 같은 에스테르들; 한천; 마그네슘 하이드록사이드 및 알루미늄 하이드록사이드와 같은 완충제; 아르기닌산; 피로겐이 없는 물; 이소토닉 살린; 링거액, 에틸 알코올 및 포스페이트 완충액들. 상기 포뮬레이터의 요구에 따라 염색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 향신제 및 방향제, 보존제 및 항산화제들과 같이 습윤제, 현탁제들 및 소듐 로릴 설페이트 및 마그네슘 스테레이트와 같은 윤활제들이 또한 상기 조성물에 존재할 수 있다. 약학적으로 수용 가능한 항산화제들의 예는 아스코르브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 소듐 비설피트, 소듐 메타비설피트, 소듐 설피트 등과 같은 수용성 항산화제들; 아스코르빌 팔미테이트, 부틸레이티드 하이드록시아니솔(BHA), 부틸레이티드 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등과 같은 지용성 항산화제; 및 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등과 같은 금속-킬레이트제들을 포함한다. 단일 복용 형식을 제공하기 위하여 상기 전달 물질들과 결합될 수 있는 활성 성분들의 양은 특별한 투여 방법에 따라 다양하게 의존될 것이다.

본 발명의 점막 전달 조성물 및 방법들에서, 다양한 전달-강화제들은 점막 표면 속으로 또는 통과하여 Y2 수용체-결합 펩티드의 전달을 강화하는데 사용된다. 이러한 관점에서 상기 점막 상피 조직을 통과하는 Y2 수용체-결합 펩티드의 전달은 "트랜스셀룰러리" 또는 "파라셀룰러리"를 발생시킬 수 있다. 이러한 경로들이 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 전 플럭스 및 생리적 적용가능성에 미치는 범위는 상기 점막의 환경, 약제의 물리-화학적 활성, 및 상기 점막 상피의 성질들에 의존한다. 세포간 이동이 수동적으로 촉진되거나 능동적인 과정에 의해 발생할 수 있음에 반하여 세포외로의 이동은 단지 수동적인 확산만이 이용된다. 일반적으로, 친수성, 수동적으로 이동된, 극성 용질들은 상기 세포간 이동을 사용한다. 본 발명에 따라 선택된 Y2 수용체-결합 펩티드에서 다양하게, 수동적으로 및 능동적으로 용질들이 흡수된 흡수와 생리적 활성(예를 들면, 침투 계수 및 물리적 분석에 의해 반영된)은 세포외 및 세포간 전달 성분들이 쉽게 평가될 수 있다. 수동적으로 흡수된 약제들에 대해, 약물 전달 관련 세포외 및 세포간 경로들은 pKa, 분배 계수, 분자 반경 및 약물 전하, 상기 약물이 전달된 공간 환경 및 상기 흡수 표면의 pH에 의존한다.

상기 세포외 경로는 비강 점막 상피 조직의 표면에 비교적 작은 부분으로 접근하는 것을 의미한다. 일반적으로, 세포외 공간들에 의해 차지된 영역보다 세포막들이 점막 표면을 차지하고 있는 것이 수 천배 더 크다고 보고되고 있다. 따라서 상기 더 작은 접근 가능한 영역 및 고분자에 대한 크기 및 전하 기초 구별은 세포외 경로가 약물 전달에 대해 일반적으로 세포간 전달 보다 덜 친화적 경로라는 것을 암시한다.

놀랍게도, 본 발명의 방법과 조성물들은 세포외 경로를 통하여 점막 상피 조직 속으로 및 통과하여 생리적 치료의 전달을 현저하게 강화시켰다. 그러므로 본 발명의 방법과 조성물들은 성공적으로 세포외 및 세포간 경로들을 모두 또는 단일 방법 및 조성물 내에서 선택적으로 타겟화한다.

상기에서 언급된, "점막 전달-강화제들"은 Y2 수용체-결합 펩티드 또는 다른 생리적으로 활성화된 화합물(들)의 상기 방출 또는 용해도(예컨대, 포뮬레이션 전달 매체로부터), 확산 속도, 침투력 및 침투시간, 섭취, 체류시간, 안정성, 유효 반감기, 최대 또는 유지 농도 레벨들, 제거 및 다른 바람직한 점막 전달 특성들(예컨대, 전달 자리 또는 혈액 또는 중추신경계와 같은 선택된 활성 표적 자리에서 측정된)이 강화된 약제들을 포함한다. 따라서 점막 전달의 강화는 메커니즘의 다양성에 의해 발생할 수 있다. 다양한 메커니즘이라 함은 예를 들어, Y2 수용체-결합 펩티드의 안정성, 확산, 전달, 또는 보존성이 증가됨에 의해, 세포막 유동성이 증가됨에 의해, 세포내 또는 세포외 침투를 조절하는 칼슘 및 다른 이온들의 수용성 또는 활성 변화, 점막 세포막 성분들(예를 들어, 지질들)의 용해도, 점막 조직에 있어서 비-단백질 및 단백질들의 설프하이드릴 레벨들의 변화, 점막 표면을 관통하는 물 흐름의 증가, 상피 조직의 물리적 결합 변화, 상기 점막 상피 조직 위에 놓여있는 점막의 점도 감소, 점막 제거 속도 감소, 및 다른 메카니즘들이다.

상기에서 언급한 "Y2 수용체-결합 펩티드의 점막에 효과적인 양"은 전달 또는 이송 경로의 다양성을 제공하는 환자에 있어서 약물 활성에 대한 타겟 자리에 Y2 수용체-결합 펩티드의 효과적인 점막 전달을 예상하게 한다. 예를 들어, 주어진 활성제는 상기 점막 세포 사이에서의 제거를 통하여 상기 점막 세포와 인접한 혈관벽에 도달함이 발견될 수 있는 반면, 다른 경로에 의한 약제는 세포들 내에서 활동하기 위해 수동적 또는 능동적으로 점막 세포들 속으로 들어오거나 체계적 순환과 같은 이차적 표적 자리에 도달하기 위해 상기 세포들 밖으로 배출되거나 이송된다.

본 발명의 상기 방법들과 조성물들은 그러한 하나 이상의 선택된 경로에 따라 활성제들의 자리를 변경하는 것을 촉진할 수 있거나, 또는 활성화제(들)의 흡수 또는 침투를 촉진하기 위해 직접적으로 상기 점막 조직 또는 기부 혈관 조직에서 활성화될 수 있다. 본 단락에서 언급된 상기 흡수 또는 침투 촉진은 상기의 메커니즘들에 한정되는 것은 아니다.

상기에서 언급한 바와 같이, "혈장에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 최대 농도(C_max)", "시간 커브(AUC)에 따른 혈장에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 일정 농도 영역", "혈장에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 최대 혈장 농도(t_max)"는 본 발명이 속한 기술 영역에서 알려진 약물 생체 반응 변수들이다. Laursen et al., Eur. J.Endocrinolo, 135: 309-315,1996. 상기 "시간 곡선에 따른 농도"라 함은 비내 투여, 근육주사, 피하주사, 또는 다른 비경구적인 투여 방법에 의해 각각 환자에게 투여된 Y2 수용체-결합 펩티드의 복용 후 시간에 따른 환자의 혈청에서의 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 의미한다. 상기 "(C_max)"은 환자에 있어서 Y2 수용체-결합 펩티드의 단일 복용에 따른 혈청에서의 Y2 수용체-결합 펩티드의 최대 농도이다. "(t_max)"는 환자에 있어서 Y2 수용체-결합 펩티드의 단일 복용에 따른 혈청에서의 Y2 수용체-결합 펩티드의 최대 농도에 도달하는 시간을 의미한다.

상기에서 언급한 "시간 커브(AUC)에 따른 혈장에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 일정 농도 영역"은 잔류 영역들의 부가와 선형 사다리꼴 법칙에 따라서 계산된다. 두 가지 복용들 사이의 23%의 감소와 30%의 증가는 90%의 개연성을 감지시킨다(유형 II 에러β= 10%). 상기 "전달 속도" 또는 "흡수 속도"는 최대 농도(C_max)에 도달하는데 걸리는 시간(t_max)을 비교함으로써 측정된다. C_max 및 t_max 는 불변-변수를 사용하는 방법으로 분석된다. Y2 수용체-결합 펩티드에 대한 근육 주사, 피하주사, 정맥 주사 및 비내 투여의 약물 생체 반응의 비교는 다양성 분석(ANOVA)에 의해 실시된다. 본페로니-홀므즈 연속 공정을 통해 특이성이 측정될 수 있다. 상기 세 가지 비강 복용들 사이에 약물-반응 관계는 경감 분석됨에 의해 측정된다. P < 0.05는 특이성이 있는 것으로 간주된다. 결과들은 +/-SEM 평균값들로서 주어진다.

흡수 촉진 메카니즘이 본 발명의 다른 점막 전달-강화제로 다양해질 수 있는 반면, 본 장에서 사용된 시약들은 대체적으로 상기 점막 조직에 역 영향을 미치지 않고 부분적인 Y2 수용체-결합 펩티드 또는 다른 활성화 또는 전달-강화제의 물리화학적인 성질들에 따라서 선택되어 질 것이다. 본 장에서, 점막 조직의 침투 또는 삼투성을 증가시키는 전달-강화제는 종종 상기 점막의 보호적인 삼투성 장애물로 변질되는 결과를 야기시킨다. 그러한 전달-강화제가 본 발명에서 특징을 가지기 위하여, 일반적으로 상기 점막의 삼투성에서 어떤 특이한 변화들은 바람직한 약물 전달 동안 적절한 정해진 시간 내에 가역적인 것이 바람직하다. 나아가 장기 사용으로 인하여 상기 점막의 관문적인 성질들에 의해 유도된 어떠한 실질적이고 만성적인 독성 또는 어떠한 해로운 변화도 없어야 한다.

본 발명의 확실한 측면에서 본 발명의 Y2 수용체-결합 펩티드와 함께 투여에 도움을 주거나 결합적인 포뮬레이션에 대한 흡수-촉진 약제들은 디메틸 설폭사이드 (DMSO), 디메틸포름아미드, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 및 상기 2- 피롤리돈들이 포함된 작은 친수성 분자들로부터 선택되지만 이에 한정되는 것은 아니다. 선택적으로, 긴-체인 양친매성 분자들, 예를 들어, 디아실메틸 설폭사이드, 아존, 소듐 로릴설페이트, 올레산, 및 상기 담즙 염들이 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 강화 점막 침투에 사용된다. 나아가, 계면활성제들(예를들어, 폴리솔베이드들)은 첨가 화합물, 프로세싱 약제, 또는 Y2 수용체-결합 펩티드의 비내 전달에 첨가하는 포뮬레이션으로서 사용된다. DMSO, 폴리에틸렌 글리콜, 및 에탄올과 같은 약제들은 만약 전달 환경이 현저한 고농도라면, 상기 점막의 수용액 상으로 들어가고 그것들의 용해성들을 변경하여, 상기 매개체로부터 상기 점막 속까지 Y2 수용체-결합 펩티드의 분배를 강화시킨다.

본 발명에 따른 방법과 결합적인 포뮬레이션을 진행시키고 투여를 도와주는 첨가 점막 전달-강화제들은 다음과 같은 물질들을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다: 혼합 마이셀; 에나민; 일산화질소 공여자(예컨대, S-니트로조-N-아세틸-DL-페니실라민, NOR1, NOR4-- 상기 물질들은 카르복시-PITO 또는 도크로페낙 소듐과 같은 NO 스케번저(scavenger)와 함께 처리되는 것이 바람직하다); 소듐 살리실레이트; 아세토아세트산(예컨대, 글리세릴-1,3-디아세토아세테이트 또는 1,2-이소프로필리덴글리세린-3-아세토아세테이트);의 글리세롤 에스테르 및 점막 전달에 생리적으로 양립가능한 다른 방출-확산 또는 인트라-또는 트랜스 상피조직의 침투-촉진 약제. 다른 흡수-촉진 약제들은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 전달, 안정성, 활성 또는 트랜스-상피조직 침투를 강화하는 매개체, 염기 및 첨가제로부터 선택된다. 이러한 물질들은 그 중에서도 특히, 사이클로덱스트린 및 (3-사이클로덱스트린 유도체들(예컨대, 2-하이드록시프로필- (3-사이클로덱스트린 및 헵타키스 (2,6-디-O-메틸-β-사이클로덱스트린)들을 포함한다. 이러한 화합물들은 선택적으로 하나 이상의 활성화된 성분들과 결합되었고 나아가 유성 염기에서 선택적으로 포뮬레이트되어, 본 발명의 점막 포뮬레이션들에서 생리적 활성이 강화되었다. 그러나 점막 전달에 적용된 부가적 흡수-강화제들은 모노- 및 디글리세리드들(예컨대, 소듐 캅레이트--코코넛 오일 추출물, Capmul), 및 트리글리세리드(예컨대, 아밀로덱스트린, Estaram 299, Miglyol 810)를 포함한 중간 길이-사슬 지방산들이 포함되었다.

본 발명의 점막 치료 및 예방 조성물은 점막을 관통하여 Y2 수용체-결합 펩티드의 흡수, 확산, 침투를 촉진하는 적당한 침투-촉진 약제로 보충될 수 있다. 상기 침투 촉진제는 약학적으로 수용 가능한 촉진제가 될 수 있다. 따라서 상기 발명의 조성물을 더욱 구체적으로 보면, 본 조성물은 소듐살리실레이트와 살리실산 유도체들(아세틸 살리실레이트, 콜린살리실레이트, 살리실아미드 등); 아미노산과 그에 따른 염들(예를 들면, 글리신, 알라닌, 페닐알라닌, 프롤린, 하이드록시프롤린, 등과 같은 모노아미노카르복시산; 세린과 같은 하이드록시아미노산; 아스파르트산, 글루탐산, 등과 같은 산성 아미노산; 그리고 라이신 등-이들의 알칼리 금속 또는 알칼리성 대지 금속염들을 포함-과 같은 염기성 아미노산); 그리고 N-아세틸아미노산들(N-아세틸알라닌, N-아세틸페닐알라닌, N-아세틸세린, N-아세틸글리신, N-아세틸리신, N-아세틸글루탐산, N-아세틸프롤린, N-아세틸하이드록시프롤린, 등)과 이들의 염들(알칼리 금속염들과 알칼리성 대지 금속염들)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 침투-촉진 약제의 혼합으로 이루어져 있다. 또한 상기 방법들 내에서 침투-촉진 약제로 제공되고, 상기 발명의 조성물들은 일반적으로 유화제(예를 들면, 소듐 올레일 포스페이트, 소듐 라우릴 포스페이트, 소듐 라우릴 설피트, 소듐 미리스틸 설피트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥실렌 알킬 에스테르, 등), 카프로산, 락트산, 말산, 시트르산, 그리고 알칼리 금속에 따른 염들, 피롤리돈카르복시산들, 알킬피롤리돈카르복시산 에스테르들, N-알킬피롤리돈들, 프롤린 아실 에스테르들 , 기타 등등에 사용되는 물질이다.

상기 발명의 다양한 관점에서 보면, 개선된 코 점막 전달 포뮬레이션들과 방법들은 Y2 수용체-결합 펩티드와 다른 치료 약제들이 체내에 투여되었을 때, 상기 발명의 범위 내에서 이들이 코 점막을 가로질러서 선택된 타겟 사이트에 전달될 수 있도록 한다. 어떤 포뮬레이션들은 선택된 타겟 세포, 조직, 기관, 또는 특별한 질병 상태에 특별히 적응되어 있다. 다른 면에서 포뮬레이션들과 방법들은 분명한 세포 내 또는 세포 외 경로를 특별히 따라가는 Y2 수용체-결합 펩티드의 효과적이고 선택적인 엔도- 또는 트랜스사이토시스를 위해 제공된다. 전형적으로, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 매개체나 다른 전달 운반체 내의 효과적인 농도에서 유효하게 로드되고 전달된다. 그리고 Y2 수용체-결합 펩티드는 예를 들면, 코 점막 및/ 또는 약물 반응을 위한 타겟 사이트에서 멀리 떨어진 곳에서(예를 들면, 혈류, 조직, 기관, 또는 세포 외 공간) 세포 내 공간과 막을 통해 이동하는 동안 안정된 형태로 유지된다. Y2 수용체-결합 펩티드는 전달 운반체로 제공되거나 아니면 생리적 자극(예를 들면, pH 변화, 리소좀 효소 등)에 의해 유발된 Y2 수용체-결합 펩티드의 활성이나 방출이 일어나는 사이에 변형된다(예를 들면, 약의 전구체의 형태로). 종종 Y2 수용체-결합 펩티드는 활성화되기 위해 타겟 사이트에 도달할 때까지 약리학적으로 불활성화된다. 대부분의 경우, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드와 다른 포뮬레이션 조성물들은 비독성이고 비면역적이다. 본 발명에서 매개체나 다른 포뮬레이션 조성물들은 일반적으로 그 성질이 빠르게 없어질 수 있는 것이 선택되었으며, 생리학적 조건하에서 선택되었다. 동시에 포뮬레이션들은 효과적인 저장을 위한 투여 상태에서 화학적으로도 생리학적으로도 안정하다.

펩티드와 단백질 유사체들(analogs)과 모사체들(mimetics)

본 발명에서 사용하는 생물학적 활성 펩티드들과 단백질들의 정의에 포함되는 것은 자연적 또는 합성적, 치료적 또는 예방적 활성 펩티드들(두 개 또는 그 이상의 아미노산의 공유결합으로 이루어짐), 단백질들, 펩티드 또는 단백질 조각들, 펩티드 또는 단백질 유사체, 그리고 화학적으로 변형된 유도체 또는 활성 펩티드 또는 아미노산의 염들이다. Y2 수용체-결합 펩티드의 유용한 유사체와 모사체의 다양한 변종은 상기 발명 내에서 바람직하게 이용되기 위해 연구되었고, 알려진 방법들에 따라 생물학적 활성에 맞게 생산되고 테스트되었다. 종종, 본 발명의 범위 내에서 사용하기에 적합한 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 펩티드들과 단백질들 또는 다른 생물학적 활성 펩티드들 또는 단백질들은 자연적으로 발생하거나 본래의(예를 들면, 야생형, 자연발생 돌연변이, 유전자 돌연변이) 펩티드 또는 단백질 배열 내에서 아미노산의 부분적 치환, 첨가 또는 삭제에 의해 쉽게 얻을 수 있는 뮤테인들이다. 여기에 본래의 펩티드들 또는 단백질들의 생물학적 활성 단편들도 포함된다. 그러한 돌연변이 유도체들과 실질적인 단편들은 본래의 펩티드들 또는 단백질들에게서 원하는 생물학적 활성을 보유하고 있다. 탄수화물 체인들, 이들 탄수화물 종류의 변경에 의해 표시된 생물학적 활성 돌연변이들을 가지고 있는 펩티드들이나 단백질들의 경우도 또한 상기 발명의 범위 내에 포함된다.

여기에서 사용된 용어인 "보존적 아미노산 치환"이라는 용어는 비슷한 사이드 체인을 가진 아미노산 잔기들의 일반적인 교환가능성을 의미한다. 예를 들면, 지방족 사이드 체인들을 가진 아미노산들의 일반적인 교환가능 그룹은 알라닌, 발린, 루신, 그리고 이소루신이고; 지방족 하이드록시 사이드 체인을 가진 아미노산 그룹의 경우는 세린과 티로신이고; 아미드를 포함하는 사이드 체인을 가진 아미노산 그룹의 경우는 아스파라긴과 글루타민이고; 방향족 사이드 체인을 가지는 아미노산 그룹의 경우는 페닐알라닌, 티로신, 그리고 트립토판이고; 염기 사이드 체인을 가진 아미노산 그룹의 경우는 리신, 아르기닌, 히스티딘이고; 황을 포함하는 사이는 체인을 가지는 아미노산 그룹은 시스테인과 메티오닌이다. 보존적 치환의 예들에는 이소루신, 발린, 루신, 메티오닌과 같은 무극성(소수성) 잔기의 치환도 포함시킨다. 또한, 본 발명은 아르기닌과 루신 사이, 글루타민과 아스파라긴 사이, 트레오닌과 세린 사이와 같은 극성(친수성) 잔기의 치환을 고찰한다. 게다가, 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘과 같은 염기성 잔기의 치환 또는 아스파르트산, 글루탐산과 같은 산성 잔기의 치환도 또한 고찰한다. 전형적인 보존적 아미노산 치환 그룹은; 발린-루신-이소루신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 그리고 아스파라긴-글루타민이다. 선택된 생물학적 활성을 결정하기 위하여 본래의 펩티드와 유사한 펩티드 또는 단백질 유사체의 배열에 의하거나, 고착 단백질 또는 수용체 결합 분석과 같은 적당한 분석을 이용하여 상기 발명의 방법들과 조성물들의 사용에 적합한 사용가능한 펩티드와 단백질을 쉽게 확인할 수 있다.

상기 발명의 고체 단백질 포뮬레이션들의 안정화를 위한 방법에는 동결건조와 같은 방법으로 정제된 단백질의 물리적 안정성을 증가시키는 것이 있다. 이것은 단백질의 풀림을 증가시킬 수 있는 공유적 경로를 거치는 것 뿐만 아니라 소수성 반응을 통한 뭉침(aggregation)도 저해시킬 것이다. 본 발명에서 포뮬레이션들의 안정화에는 자연적으로 퇴화할 수 있는 하이드로겔 포뮬레이션/전달 시스템과 같은 폴리머에 기초한 포뮬레이션들도 종종 포함된다. 앞서도 언급했듯이, 단백질의 구조, 기능, 안정성에 있어서 물이 중요한 역할을 함은 잘 알려져 있다. 전형적으로, 다량의 물이 제거된 고체상에서 상대적으로 안정적이다. 그러나 고체 상태의 치료적 단백질 포뮬레이션들은 높은 습도로 저장시에 수화될 수 있거나 지효성 조성물(sustained release composition) 또는 장치로부터 전달되는 동안 수화될 수 있다. 수화가 증가하면 단백질의 안정성은 일반적으로 떨어진다. 물은 예를 들면, 반응 그룹들의 강화된 접근성에 기인해 단백질 유동성을 증가시키거나, 반응물의 유동적 상태를 제공하거나 베타-제거와 가수분해와 같은 많은 해로운 과정에서 반응물로 작용하면서 체 단백질의 뭉침에 중요한 역할을 한다.

약 6%에서 28% 사이의 물을 포함한 단백질 조제물이 가장 불안정하다. 이보다 낮은 수준에서는 물과 단백질 내부 힘의 결합 유동성이 낮다. 이보다 높은 수준에서는, 물의 유동성과 단백질의 힘이 완전한 수화상태에 접근한다. 끝까지 올라가면 수화가 증가하면서 고체상 뭉침이 더욱 쉽게 이루어지는 것이 많은 시스템에서 관찰되었다. 그러나 물의 양이 더 많으면 희석 효과 때문에 뭉침은 감소되는 것이 관찰되었다.

이들 원칙에 따라, 점막 전달시 고체상 뭉침을 막기 위한 펩티드들과 단백질들의 효과적인 안정화 방법은 고체 포뮬레이션에서 물의 양을 조절하고 포뮬레이션 내에서 적정 수준으로 물의 활동성을 유지하는 것이다. 이 수준의 유지는 단백질의 성질에 달려있는데, 일반적으로 물의 범위를 단층 이하로 유지하는 단백질들은 우월한 고체상 안정성을 나타낼 것이다.

단백질 안정성을 위해 물의 양을 효과적으로 조절하는 본 발명의 범위 내에서 다양한 첨가제들, 희석제들, 염기들 그리고 전달 운반체들이 제공된다. 이러한 의미에서 뭉침 방지를 위한 작용물로서 다음과 같은 약제와 매개체 물질들을 예로 들 수 있다. 폴리에틸렌글리콜, 덱스트란, 디에틸라미노에틸덱스트란, 카르복시메틸 셀룰로오즈와 같은 다양한 기능의 폴리머들로, 첨가되거나 서로 연결된 펩티드들과 단백질들의 고체상 뭉침을 감소시키고 안정성을 상당히 증가시킬 수 있다. 어떤 경우에는 단백질들의 활동성 또는 물리적 안정성이 펩티드들 또는 단백질 약물 수용액에 첨가되는 다양한 첨가제에 의해 강화될 수 있다. 예를 들면, 폴리올들(설탕과 같은), 아미노산, 콜라겐과 젤라틴 같은 단백질, 그리고 다양한 염들이 첨가제로 사용될 수 있다.

어떤 첨가제들-특히 설탕과 다른 폴리올들-은 또한 동결건조된(건조한) 단백질에 상당한 물리적 안정성을 준다. 이들 첨가제들은 본 발명 내에서 동결건조되는 동안 뿐만 아니라 건조 상태로 저장되는 동안에도 단백질의 뭉침을 방지하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 수크로오스와 피콜 70(수크로오스로 이루어진 폴리머)은 다양한 조건 하의 고체상 인큐베이션 동안 펩티드 또는 단백질의 뭉침을 방지하는 것을 알 수 있다. 이들 첨가제들은 또한 폴리머 매트릭스 내에 삽입된 고체 단백질들의 안정성을 강화시킬 수 있다.

또 설탕과 같은 부가적 첨가제들은 온도가 올라간 습한 대기에서 고체상 뭉침에 대항하여 단백질을 안정화시키는데, 이는 본 발명의 지효성 포뮬레이션(sustained release formulation)에서 나타날 수 있다. 젤라틴과 콜라겐과 같은 단백질들은 또한 불안정한 단백질들의 안정화시키는 약제 또는 단백질의 변성과 뭉침을 감소시키기는 데 중요한 영향을 미치는 약제로 쓰인다. 이 첨가제들은 폴리머 용해 과정들과 상기 발명의 조성물들에 포함된다. 예를 들면, 폴리펩티드 마이크로 입자들은 간단하게 동결건조하여 준비하거나 위에 기술한 다양한 안정화 첨가제들을 포함하고 있는 용액을 분무하고 건조하여 준비할 수 있다. 그에 따라 뭉치지 않은 펩티드들과 단백질들의 느린 방출은 연장된 시간을 초과하여 얻을 수 있다.

특정 포뮬레이션 첨가제들 뿐만 아니라 다양한 부가적 예비 조성물들과 방법들이 여기에 제공되고, 이것은 뭉치기 쉬운 펩티드들과 단백질의 점막 전달을 위한 포뮬레이션들을 만든다. 상기 펩티드와 단백질은 용해제를 사용하여 실질적으로 순수하고 뭉치지 않은 형태로 안정화되어 있다. 조성물들과 첨가제들의 범위는 위 방법들과 포뮬레이션들 내에서 사용하기 위해 연구되었다. 용해제들의 예는 폴리펩티드들의 소수성 사이드 체인이 선택적으로 결합된 사이클로덱스트린의 연결된 다이머들(CDs)이다. 상기 CD 다이머들은 단백질의 소수성 부분들에 결합하여 단백질의 뭉침을 상당히 저해하는 것으로 알려졌다. 이러한 저해는 CD 다이머와 그에 관련된 단백질에 대해서 선택적이다. 이러한 단백질 뭉침의 선택적 저해는 비내 전달 방법과 조성물에 관한 상기 발명에 부가적인 장점을 제공한다. 본 발명에서 사용하는 첨가제에는 펩티드들과 단백질의 뭉침을 확실하게 막는 링커에 의해 조절된 다양한 구조를 가진 CD 삼중합체와 사중합체가 포함된다. 또한 상기 발명에서 혼합에 관한 용해제들과 방법들에는 펩티드의 사용과 선택적으로 단백질-단백질 반응을 막는 펩티드 모사체가 포함된다. 한 가지 면에서 보면, CD 멀티머에서 알려진 소수성 사이드 체인의 특정 결합은 유사하게 단백질 뭉침을 막는 펩티드들과 펩티드 모사체의 사용을 거쳐 단백질까지 확장된다. 다양한 범위의 적당한 방법들과 뭉침 방지 약제는 상기 발명의 조성물과 그 과정에 혼합하여 이용할 수 있다.

전하 변환과 pH 조절제들과 방법들

상기 발명은 또한 소수성 점막을 통과하는 전달력을 강화하기 위한 생물학적 활성제(Y2 수용체-결합 펩티드, 다른 활성 펩티드들 그리고 단백질들, 그리고 고분자와 저분자 약물 포함)의 수송 능력을 개선하기 위해서 여기에 기술하는 선택된 생물학적 활성제 또는 전달-강화제의 전하 변환에 관한 시약과 기술을 제공한다. 이 점에 대해서, 고분자의 상대적 침투성은 일반적으로 그것들의 분배 계수와 관련이 있다. 분자의 이온화도는 분자의 pKa와 점막 세포막 표면의 pH에 의존하고, 또한 분자의 침투성에 영향을 미친다. 점막 전달이 전하의 변화나 활성제 또는 침투제의 전하 분산에 의해 촉진될 수 있기 때문에, 생물학적 약제(Y2 수용체-결합 펩티드 그리고 상기 발명의 유사체들을 포함)의 침투와 분배가 이루어진다. 예를 들면, 대전된 기능기 그룹들의 변화, 전달 매개체 또는 전달 운반체가 들어 있는 용액의 pH의 변화에 의해 침투와 분배가 이루어진다.

일반적인 교수법과 일치하게, Y2 수용체-결합 펩티드와 다른 생물학적 활성 펩티드들과 단백질을 포함하는 대전된 고분자의 점막 전달은 활성제가 실질적으로 이온화되지 않거나 중성의 또는 전기적 대전 상태의 점막 표면에 전달될 때 상기 발명의 범위 내에서 상당히 개선된다.

어떤 Y2 수용체-결합 펩티드와 다른 생물학적 활성 펩티드 그리고 상기 발명의 범위 내에서 사용하는 점막 포뮬레이션들의 조성물과 단백질 조성물들은 전하가 바뀌어서 상기 펩티드와 단백질의 양전하 밀도가 증가하게 된다. 이와 같은 전하의 변화로 펩티드와 단백질 접합물, 매개체 그리고 여기에 공지된 다른 전달 물질들이 양이온화된다. 양이온화는 본 발명의 범위 내에서 단백질들과 고분자들의 수송 성질과 그 분포를 바꾸는 편리한 수단을 제공한다. 양이온화는 활성제의 생물학적 활성도를 실질적으로 보존한다는 의미로 시작되고, 조직에 치명적이거나 독성이 나타나는 것과 같은 부작용을 잠재적으로 억제한다.

분해효소 저해제들과 방법들

점막 전달 조제에 포함되는 다른 첨가제는 분해효소 저해제(Degradative Enzyme Inhibitor)이다. 상기 발명의 점막 전달 포뮬레이션들과 방법들에 사용되는 기본적인 점막 흡착 폴리머-저해제 복합체(mucoadhesive polymer-enzyme complexes)에는 다음과 같은 것들이 포함되나 이것에 한정되는 것은 아니다. 카르복시메틸셀룰로오즈-펩스타틴(안티 펩신 활동성을 가짐); 폴리(아크릴산)-바우만­버크 저해제(안티-키모트립신); 폴리(아크릴산)-키모트립신(안티 키모트립신); 폴리(아크릴산)-엘라스타티날(안티 엘라스타아제); 카르복시메틸셀룰로오즈 엘라스타티날(안티 엘라스타아제); 폴리카보필--엘라스티날(안티 엘라스타아제); 키토산--안티페인(안티트립신); 폴리(아크릴산)--바시트라신(안티 아미노펩티다아제 N); 키토산--EDTA(안티 아미노펩티다아제N, 안티 카르복시펩티다아제 A); 키토산--EDTA-- 안티페인(안티 트립신, 안티 키모트립신, 안티 엘라스타아제). 하기에서 상세히 기술하는 바와 같이, 상기 발명의 어떤 실시례는 새로운 키토산 유도체 또는 화학적으로 변형된 키토산 구조와 결합한다. 본 발명에서 사용하는 이와 같은 새로운 유도체는 β- [l →4]-2-구아니디노-2-디옥시-D-글루코오스 폴리머(폴리-GuD)라고 명명한다.

생물학적 활성제를 보호하기 위해 효소의 활성을 저해하는 저해제는 본 발명의 조성물과 방법들에서 유용하게 쓰일 수 있다. 생물학적 활성 단백질들과 펩티드들을 보호하는 데 유용한 효소 저해제가 포함된다. 예를 들면, 콩 트립신 저해제, 이자 트립신 저해제, 키모트립신 저해제, 그리고 감자 (solanum tuberosum L.) 괴경에서 분리한 크리모트립신 저해제이다. 저해제들의 조합이나 혼합이 사용될 수 있다. 프로테오라이틱(proteolytic) 효소의 첨가적 저해제에는 오보뮤코이드 효소(ovomucoid-enzyme), 가백제이트메실레이트(gabaxatemesylate), 알파-안티트립신, 아프로티닌(aprotinin), 아마스타틴(amastatin), 베스타틴(bestatin), 퓨로마이신(puromycin), 바시트라신(bacitracin), 류펩신(leupepsin), 알파2-마크로글로불린, 펩스타틴 그리고 계란 흰자 또는 콩 트립신 저해제가 포함된다.

이들과 다른 저해제들은 단독 또는 조합해서 사용될 수 있다. 상기 저해제(들)는 코 점막과 접촉하기 위해 복용 형태로 표면에 막이 씌워진 친수성 폴리머와 같은 매개체와 결합되거나 혼합될 수도 있고 혹은 그 표면막에 혼합될 수 있다. 이 때 생물학적 활성제로 조합되거나 투여된 포뮬레이션 형태(예를 들면 투여되기 전)로 분리되어 결합되거나 혼합되는 것이다.

본 발명의 조성물과 선택적으로 결합하는 프로테아제 저해제와 같은 저해제의 양은 다음과 같은 것에 다양하게 의존한다. (a)특정 저해제의 성질들, (b)모노머를 형성하는 하이드로겔을 가진 코폴리머화(copolymerization)에 필요한 에틸렌 불포화를 유도하기 위해 반응될 수 있는 분자에 존재하는 기능 그룹들의 수, 그리고 (c)저해제 분자에 존재하는 글리코시드와 같은 렉틴 그룹의 수, 또한 투여 목적의 특정 치료제에 의존한다. 일반적으로, 효소 저해제의 유용한 양은 포뮬레이션(즉, 각각의 프로테아제 저해제 포뮬레이션 또는 저해제와 생물학적 활성제의 조합으로 된 포뮬레이션) 약 0.1 mg/ml에서 약 50 mg/ml, 종종 약 0.2 mg/ml 에서 약 25 mg/ml, 그리고 더 일반적으로 약 0.5 mg/ml에서 부터 5 mg/ml이다.

트립신 저해의 경우, 적당한 저해제는 다음과 같은 예에서 선택될 수 있다. 아프로티닌(aprotinin), BBI, 콩 트립신 저해제, 닭 오보뮤코이드( ovomucoid), 닭 오보저해제(ovoinhibitor), 인간 이자 트립신 저해제, 카모스태트 메실레이트(camostat mesilate), 플라보노이드 저해제, 안티페인, 류페틴, p-아미노벤자마이딘, AEBSF, TLCK(토실리신 클로로메틸케톤), APMSF, DFP, PMSF, 그리고 폴리(아크릴레이트) 유도체들을 예로 들 수 있다. 키모트립신 저해의 경우, 적당한 저해제는 다음과 같은 예에서 선택될 수 있다. 아프로티닌, BBI, 콩 트립신 저해제, 키모스타틴, 벤질록시카보닐-Pro-Phe-CHO, FK-448, 닭 오보저해제, 설탕(sugar) 바이페닐보로닉산 복합체(biphenylboronic acids complexes), DFP, PMSF, β-페닐프로피오네이트, 그리고 폴리(아크릴레이트) 유도체들과 같은 예가 있다. 엘라스타아제 저해의 경우, 적당한 저해제는 다음과 같다. 엘라스타티날, 메소옥시숙시닐(methoxysuccinyl)-Ala-Ala-Pro-Val-클로로메틸케톤(MPCMK), BBI, 콩 트립신 저해제, 닭 오보저해제, DFP, 그리고 PMSF를 예로 들 수 있다.

본 발명의 범위 내에서 사용하는 첨가적 효소 저해제는 그 독성과 효능의 정도가 다양한 넓은 범위의 비단백질 저해제에서 선택된다. 하기에서 상세히 기술하는 바와 같이, 매트릭스 또는 다른 전달 운반체 부속제의 비유동성 또는 화학적으로 변형된 유사체들의 발생은, 그들이 만났을 때 쉽게 환원되거나 독성을 없앨 수 있게 해 준다. 상기 발명의 범위 내에서 사용하는 장차 효소 저해제가 될 넓은 그룹 중에서 디이소프로필플루로포스페이트 (DFP)와 페닐메틸술포닐 플루오라이드(PMSF)와 같은 것은 유기인산 저해제들(organophosphorous inhibitors)인데, 이는 잠재적이고 비가역적인 세린 단백질 분해요소(예를 들면, 트립신과 키모트립신)이다. 이들 화합물에 의한 아세틸콜리네스테라아제의 첨가적 저해는 조절되지 않은 전달 세팅에서 그들의 독성을 높이게 된다. 또 다른, 장차 저해제가 될 후보로서, 4-(2-아미노예틸)-벤젠술포닐 플로라이드(AEBSF)는 DFP와 PMSF와 비교되는 저해 활동성을 가지지만 그 독성은 현저히 적다.(4-아미노페닐)-메탄술포닐 플로라이드는 트립신의 또 다른 저해제이나 조절되지 않은 세팅에서 독성이 있다. 이 저해제들과 반대로, 4-(4-이소프로필피퍼래디노아디노카르보닐)페닐 1, 2, 3, 4,-테트라하이드로-1-나프토에이트 메탄술포네이트(FK-448)는 저독성 기질로서, 키모트립신의 잠재적이고 특징적인 저해제이다. 비단백질성 저해제 후보이고 또한 낮은 독성을 나타내는 더 대표적인 것은 카모스태트 메실레이트 (N, N'-디메틸카바모일메틸-p-(p'-구아니디노-벤조이록시)페닐라세테이트 메탄-술포네이트)이다.

또한 본 발명의 방법들과 조성물의 범위 내에서 사용하는 효소 저해제의 다른 형태는 아미노산과 특정 치료 화합물의 효소 분해에 관여하는 변형된 아미노산이다. 본 발명에서 사용하는 아미노산과 변형된 아미노산은 상당히 비독성이고 저렴한 비용으로 생산할 수 있다. 그러나 아미노산은 분자 크기가 작고 잘 녹기 때문에 쉽게 희석되고 점막 환경에 쉽게 흡수된다. 그럼에도 불구하고 적당한 조건하에서 아미노산은 프로테아제들의 경쟁적 저해제로서 가역적으로 행동할 수 있다. 어떤 아미노산들은 아주 강한 저해 활동성을 나타낸다. 본 발명에서 바람직한 변형된 아미노산은 '전이상태 저해제(transition-state inhibitor)'로 알려져 있다. 이 화합물들의 강한 저해 활동성은 전이상태 구조에서 기질과 구조적 유사성을 가지고 있기 때문인데, 이 화합물들은 일반적으로 기질 그 자체보다 효소의 활성 사이트에 훨씬 높은 친화도를 가지도록 선택되었다. 전이상태 저해들은 가역적이고 경쟁적 저해제이다. 이러한 유형의 저해제의 예로는 보로-루신(boro-leucine), 보로-발린(boro-valine) 그리고 보로-알라닌(boro-alanine)과 같은 α-아미노보론산(α-aminoboronic acid) 유도체들이다. 이 유도체들에서 보론 원자는 아미노펩티다아제에 의해 가수분해되는 동안의 단백질의 전이상태와 비슷하다고 생각되는 4면체의 브로네이트 이온의 형태를 띨 수 있다. 이 아미노산 유도체들은 아미노펩티다아제의 가역적이고 경쟁적 저해제이다. 그리고 보로-루신은 베스타틴(bestatine)보다 100배 이상의 효소 저해 효과가 있고 퓨로마이신(puromycine)보다 1000배 이상의 효과가 있다고 알려졌다. 또 다른 강한 프로테아제 저해 활동성을 가지고 있다고 알려져 있는 변형된 아미노산은 N-아세틸시스테인인데, 이는 아미노펩티다아제 N의 효소 활동성을 저해한다. 이 부가제는 또한 본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 점액 확산이 장애되는 효과를 감소시키기 위해 쓰이는 점액 용액성(mucolytic properties)을 나타낸다.

지금까지 본 발명의 대등한 투여 방법들과 결합 포뮬레이션들의 범위 내에서 사용하는 유용한 다른 효소 저해제들은 펩티드들과 변형된 펩티드 효소 저해제들로부터 선택되었다. 상기 저해제군에 속하는 중요하고 대표적인 것은 사이클릭 도데카펩티드(dodecapeptide), Bacillus licheniformis에서 얻은 바시트라신(bacitracin)이다. 이 펩티드 타입들에 더하여, 어떤 디펩티드들과 트리펩티드들은 일부 프로테아제를 향해 약한 비특징적 저해 활동을 보여준다. 아미노산과의 유사성에 의해 그들의 저해 활동은 화학적 변형에 의해 향상될 수 있다. 예를 들면, 포스피닉산 디펩티드(phosphinic acid dipeptid) 유사체들은 또한 아미노펩티다아제에 대해 강한 저해 활동을 하는 '전이-상태' 저해제이다. 전하는 바에 의하면, 그들은 비내 투여된 루신 엔케팔린(leucine enkephalin)을 안정화시키는 데 사용되어 왔다. 전이 상태 유사체의 다른 예는 변형된 펜타펩티드 펩스타틴인데, 이것은 매우 잠재적인 펩신 저해제이다. 많은 합성 유사체의 저해 활동 테스트에 의한 펩스타틴의 구조적 분석은 상기 분자의 저해 활동을 대표하는 주요한 구조적-기능적 특징들을 보여준다. 변형된 펩티드의 다른 특별한 형태는 그들 구조의 끝 부분에 알데히드기가 위치한 저해제를 포함한다. 예를 들면, 키모트립신의 필요조건으로 알려진 첫 번째와 두 번째 특이성을 만족시키는 상기 분자 서열 벤질옥시카르보닐-Pro-Phe-CHO는 이 타겟 프로테아제의 잠재적인 가역적 저해제가 됨이 알려져 있다. 안티페인, 류펩틴, 키모스타틴 그리고 엘라스타티날과 같이 끝에 알데히드기를 가진 다른 저해제들의 화학적 구조는 이미 알고 있는 다른 구조들과 마찬가지로, 포스포라미돈, 베스타틴, 퓨로마이신, 아마스타틴처럼 가역적이며 변형된 펩티드로 이 분야에서 알려져 있다.

폴리펩티드 프로테아제 저해제는 그 분자량이 상대적으로 크기 때문에 이보다 작은 화합물보다 약물-매개체 매트릭스에서 더 쉽게 농축 전달을 할 수 있다. 본 발명의 포뮬레이션들과 방법들의 범위 내에서 프로테아제 저해를 위한 첨가제는 복합제(complexing agent)의 사용을 필요로 한다. 이 약제들은 많은 프로테아제의 보조인자인 2가 양이온을 비내 환경(또는 조제 또는 치료 조성물)으로부터 빼앗아 효소 저해를 매개한다. 예를 들면, 대등하게 투여되거나 결합적으로 포뮬레이티드된 부가제로서 복합제 EDTA와 DTPA는 적당한 온도에서 선택된 프로테아제를 저해하여 본 발명에 따른 생물학적 활성제의 비내 전달을 충분히 강화시킬 것이다. 이 분류에 속하는 저해제의 더 대표적인 예는 EGTA, 1, 10-페난트롤린(phenanthroline)과 하이드록시키놀린(hydroxychinoline)이다. 게다가 이 복합제들은 2가 양이온을 킬레이트화하려는 경향이 있어서 이들과 다른 복합제들은 본 발명에서 직접적인 흡수-촉진제로 유용하다.

본 명세서의 다른 곳에 더 자세히 설명되어 있는 바와 같이, 특히 점막흡착 폴리머들과 같은 다양한 폴리머는 본 발명의 대등한 투여, 멀티 프로세싱 포뮬레션 및/또는 결합 포뮬레이션 방법들과 조성물의 범위 내에서 효소 저해제로 사용하기위해 연구되었다. 예를 들면, 폴리(아크릴산)과 폴리카르보필과 같은 폴리(아크릴레이트) 유도체들은 트립신, 키모트립신을 포함한 프로테아제의 활동성에 영향을 줄 수 있다. 이 폴리머들의 저해 효과는 Ca 와 Zn와 같은 2가 양이온 복합체에 기초한다. 이 폴리머들은 상기 언급한 바와 같이 첨가적 효소 저해제에서 결합 파트너 또는 매개체로서 쓰일 수 있다는 것이 더 연구되었다. 예를 들면, 키토산-EDTA 결합이 개발되어 왔고 이는 아연 의존적 프로테아제의 효소 활동에 대해 강한 저해 효과를 나타낸다는 점에서 본 발명의 범위 내에서 유용하다. 본 발명의 다른 효소 저해제의 공유 부착이 일어난 후에 폴리머들의 점막흡착 성질은 실질적으로 손상되지 않을 것으로 보이고, 생물학적 활성제인 전달 운반체와 같이 본 발명의 범위 내에서 감소할 것으로 기대되는 일반적인 효용성을 가지는 것도 아니다. 이에 반하여, 독성과 그에 따른 다른 부작용뿐만 아니라 바람직하지 않은 저해제의 희석 효과도 최소화하면서 공유결합 효소 저해제가 약물 전달 사이트에 농축된 형태로 유지되는 동안, 점막흡착 메커니즘에 의해 점막 표면과 전달 운반체 사이의 거리가 감소하여 활성제의 예비침투적 물질대사가 최소화될 것이다. 이에 의하여 희석 효과가 배제되기 때문에 대등하게 투여되는 효소 저해제의 효과적인 양이 감소할 수 있다.

본 발명의 점막 포뮬레이션들과 방법들의 범위 내에서 유용한 점막흡착 폴리머-효소 저해제의 대표적인 예에는 다음과 같은 것들이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다. 카르복시메틸셀룰로로스-펩스타틴(안티펩신 활동성을 가진); 폴리(아크릴산)-바우만(Bowman)-버크(Birk) 저해제(안티- 키모트립신) ; 폴리(아크릴산)-키모스타틴(안티-키모트립신); 폴리(아크릴산)-엘라스타티날(안티-엘라스타제); 카르복시메틸셀룰로오즈-엘라스티날(안티-엘라스타제); 폴리카르보필-엘라스타티날(안티-엘라스타제); 키토산-안티페인(안티-트립신); 폴리(아크릴산)-바시트라신(안티-아미노펩티다아제 N); 키토산-EDTA(안티-아미노펩티다아제N, 안티-카르복시펩티다아제 A); 키토산-EDTA-안티페인(안티-트립신, 안티-키모트립신, 안티-엘라스타제).

점액용해제들과 점액제거제들 및 방법들

비내 투여를 경유한 생체 치료제의 효과적은 전달은 비(nasal) 점막 보호를 위한 점액을 가로지르면서 감소하는 약물 수송율과 점막층의 글리코프로테인과의 결합에 의한 약물 손실을 고려해야만 한다. 정상적인 점액은 물, 전해질, 뮤신, 고분자, 그리고 끈적한 상피세포로 이루어진 겔과 같은 점탄성의 액이다. 이것은 일차적으로 아래 점막 조직을 덮으면서 세포 보호 및 윤활제 역할을 한다. 되는 대로(randomly) 분비되는 점액은 코 상피와 다른 점막 상피세포에 있는 분비세포에 분산된다. 점막의 구조적 유니트는 뮤신(mucine)이다. 다른 고분자들도 점액의 점탄성에 기여하지만 이 글리코프로테인이 점탄성을 나타내는 주요한 것이다. 기도 점액에서 이러한 고분자는 국소적으로 생산된 분비 IgA, IgM, IgE, 리소자임, 그리고 브론코트랜스페린을 포함하는데, 이것들은 또한 숙주 방어 메커니즘에서 중요한 역할을 한다.

본 발명의 대등한 투여 방법은 효과적인 점액용해제 또는 점액제거제를 적절하게 포함하는데, 비내로 투여된 생체치료제의 흡수를 촉진하여 비내 점막 표면으로부터 점액을 분해하거나 얇게 하거나 없어지게 한다. 상기 방법들의 범위 내에서 점액용해제 또는 점액제거제는 생물학적 활성제의 비내 전달을 강화하기 위한 보조물로서 대등하게 투여된다. 이 외에 상당한 양의 효과적인 점액용해제나 점액제거제는 비내 점액 장애 효과를 감소시킴으로써 생체치료적 화합물의 비내 전달 강화를 위한 개선된 포뮬레이션을 제공하기 위해, 본 발명의 멀티 프로세싱 방법의 범위 내에서 프로세싱 약제로 포함되거나 본 발명의 결합 포뮬레이션들의 범위 내에서 첨가제로 포함된다.

다양한 점액용해제나 점액제거제는 본 발명의 방법들 및 조성물들의 범위 내에 포함될 수 있다. 그들의 활동 메커니즘에 기초하여, 점액용해제 또는 점액제거제는 종종 다음과 같은 그룹으로 분류할 수 있다. 뮤신 글리코단백질의 단백질 코어를 쪼개는 프로테아제(예: 프로나제, 파파인); 뮤코프로테인 디설피드 연결을 쪼개는 설프하이드릴(sulfhydryl) 화합물; 그리고 점액 내의 비공유결합을 깨는 세제들(예: Triton X-100, Tween 20), 담즘염과 소듐 디옥시콜레이트, 소듐 타우로디옥시콜레이트, 소듐 글리콜레이트 및 리소포스패티딜콜린과 같은 계면활성제는 본 발명의 부가적 화합물에포함되나 이것들에 제한되는 것은 아니다.

점액의 구조적 분해를 일으키는 담즙의 효과는 순서대로 디옥시콜레이트> 타우로콜레이트> 글리코콜레이트 순이다. 본 발명의 방법들에 따라 비내 전달 강화를 위해 점액의 점도 또는 흡착력을 감소시키는 다른 효과적인 약제에는 작은 체인 지방산들, 킬레이션에 의해 작용하는 점액용해제, N-아실콜라겐펩티드들과 같은 것, 담즙염, 그리고 사포닌(점액 층구조에 중요한 역할을 하는 Ca 및/또는 Mg의 킬레이팅에의한 부분적인 후반 기능)이 있다.

본 발명의 방법들과 조성물들에 쓰이는 부가적 점액용해제에는 N-아세틸-L-시스테인(ACS)이 있는데, 이것은 기관지 점액의 점도와 흡착력을 모두 감소시키고 마취된 쥐(7.5%에서 12.5%까지)에서 인간 성장 호르몬의 비내 생체 효용성을 상당히 증가시킨 것으로 알려졌다. 이것과 다른 점액용해제 또는 점액제거제는 전형적으로 약 0.2에서 20 mM의 농도 범위에서 생물학적 활성제로 체내에 투여되어 코 점막과 접촉하여 비내 점막의 극성 점도 및/또는 탄성을 감소시킨다.

또한 다른 점액용해제나 점액제거제는 점액 글리코프로테인의 글리코시드 결합을 끊을 수 있는 글리코시다아제 효소의 범위에서 선택될 수 있다. α-아밀라아제와 β-아밀라아제는 비록 그들의 점액용해 효과는 제한될 수 있어도 상기 효소군에 속하는 대표적인 것이다. 반대로, 박테리아 글리코시다아제는 박테리아 숙주의 점액층을 통과할 수 있다.

펩티드와 단백질, 비이온성 세제를 포함하여 본 발명의 범위 내에서 대부분의 생물학적 활성제를 결합하여 사용하는 것은, 일반적으로 또한 점액용해제나 점액제거제로서도 유용하다. 이 약제들은 치료적 폴리펩티드의 활동성을 변형시키지 않을 것이고 또는 실질적으로 손상시키지 않을 것이다.

섬모정지제들(Ciliostatic Agents)과 방법들

점막 섬모의 세척작용에 의해 코 점막 조직과 같은 조직은 자기정화(self-cleaning) 능력을 가진다. 이는 먼지, 알레르겐, 박테리아와 같은 물질에 대해 보호 작용으로서 필요하기 때문에, 일반적으로 이러한 기능은 점막 투여에 의해 손상되어서는 안 된다고 생각되었다. 호흡관에서의 점막 섬모운동은 감염에 대한 방어 메커니즘으로서 특히 중요하다. 이러한 일을 수행하기 위해 코와 기도에서의 섬모운동은 점막을 따라 점액층으로 이동하여 외부에서 들어온 입자나 미생물을 제거한다.

본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 섬모정지제는 점막(예를 들면, 비내)에 투여된 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체와 모사체, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제들이 생체 내에서 머무르는 시간을 증가시키는 데 사용된다. 점막 세포의 섬모운동을 억제하는 기능을 하는 하나 또는 그 이상의 섬모정지제의 동등 투여 또는 이들의 결합 포뮬레이션은 점막에 투여된 생물학적 활성제들이 생체 내에 머무르는 시간을 일시적이고 가역적으로 증가시킨다. 이러한 점에서 본 발명 범위 내의 상기 전달 약제들이 상당히 강화된다. 위와 같은 관점을 가지고 본 발명 내에서 상기 섬모 정지 인자를 사용하는 것은, 이것이 특징적이거나 비간접적이거나, 적당한 양(농도, 지속기간, 전달 상태에 의존함)이 장차 섬모정지제로 성공적으로 사용될 수 있다. 그리하여 상기 섬모정지제는 투여가 이루어지는 점막 사이트의 점막 섬모운동의 가역적 감소나 중단을 가져와서 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체와 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제들의 전달을 강화시킨다. 받아들일 수 없는 부작용도 없다.

더욱 자세한 관점에서, 특정 섬모정지 인자는 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질, 유사체와 모사체, 및/또는 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제를 가진 조합된 포뮬레이션 또는 동등한 투여 프로토콜에 사용된다. 여기에서 기술되고 분리된 다양한 박테리아 섬모정지 인자가 본 발명의 실시예에 사용될 수 있다. 박테리움 Pseudomonas aerugiytosa에서 나온 섬모정지 인자는 페나진(phenazine) 유도체, pyo 화합물, (2-알킬-4-하이드록시퀴놀린), 그리고 람놀리피드(rhamnolipid; 헤모리신으로 알려짐)를 포함한다. 상기 pyo 화합물은 농도 50 ㎍/ml에서 섬모정지가 나타나고 명확한 구조외적 상처는 없다. 페나진 유도체 역시 섬모운동을 억제하나 실질적으로 농도 400 ㎍/ml 이상에서 일부 막의 파열을 유발했다. 상기 람놀리피드 기관 외식편의 제한적 노출로 섬모정지가 나타났고, 이것은 변형된 섬모막과 관계가 있다. 람놀리피드의 더욱 확장된 노출은 축사에서부터 디아닌 팔(dynein arm)의 노출과 관계된다.

표면활성제들과 방법들

상기 발명의 상세한 면에서, 하나 또는 그 이상의 막 침투 강화제는 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질, 유사체들, 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제의 점막 전달을 강화하기 위하여 본 발명의 점막 전달 방법과 포뮬레이션에 사용될 수 있다. 본 발명에서 막 침투 강화제는 다음에서 선택될 수 있다. (i)표면활성제, (ii)담즙염, (ii)인지질 첨가제, 혼합된 마이셀(mixed micelle), 리포솜, 또는 매개체, (iii)알코올, (iv)에나민(enamine), (v)NO 공여자 화합물(donor compound), (vi) 긴 체인 양친매성 분자(a long-chain amphipathic molecule) (vii)작은 소수성 침투강화제; (viii)소듐 또는 살리실리산 유도체; (ix)아세토아세트산의 글리세롤 에스테르, (x)사이클로덱스트린 또는 베타-사이클로덱스트린 유도체, (xi)중간 체인 지방산, (xii)킬레이트제, (xiii)아미노산 또는 그에 따른 염, (xiv)N-아세틸아미노산 또는 그에 따른 염, (xv)선택된 막 조성물을 분해하는 효소, (ix)지방산 합성의 저해제, 또는 (x)콜레스테롤 합성의 저해제; 또는 (xi) 상기 (i)-(x)에서 인용된 막 침투 강화제의 조합.

어떤 표면 활성제는 점막 흡수 강화제로서 점막 전달 포뮬레이션들과 방법들 내에 쉽게 포함된다. 동등하게 투여되거나 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제와 결합하여 포뮬레이티드될 수 있는 상기 약제는 넓은 표면활성제 집단에서 선택될 수 있다. 표면활성제는 일반적으로 3 그룹으로 나눈다.

(1)비이온성 폴리옥시에틸렌 에스테르; (2)소듐 글리코레이트(SGC)와 데옥시콜레이트(DOC)와 같은 담즙; (3)소듐 타우로디하이드로후시디트(STDHF)와 같은 후시딘산 유도체들이 그것이다. 상기 다양한 표면활성제들의 반응 메커니즘은 생물학적 활성제의 용해성을 포함한다. 종종 뭉친 형태를 띠는 단백질들과 펩티드들에서는 흡수 촉진제의 표면 활성 때문에 단백질들 사이에 반응이 일어나 모노머로 막이 씌워진 표면활성제와 같은 더 작은 유니트가 용액에서 더욱 쉽게 유지될 수 있다. 다른 표면활성제의 예들로는 L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(L-α-Phospharidycholine Didecanoyl; DDPC) 폴리소르베이트(polysorbate) 80과 폴리소르베이트 20이 있다. 생각건대, 이 모노머들은 뭉쳐있는 것들 보다 더 운반가능한 유니트들이다. 두 번째 잠재적 메커니즘은 점막 환경에서 프로테아제에 의해 펩티드나 단백질이 분해되는 것을 막는 메커니즘이다. 알려진대로, 담즙염과 일부 후시딘산 유도체들은 단백질 흡수 강화를 위해 필요한 양이나 그 보다 낮은 농도의 비(nasal) 호모제네이트에 의해 단백질 분해가 저해된다. 이 프로테아제는 짧은 생물학적 반감기을 가진 펩티드들에게 특히 중요하다.

지방산 및 콜레스테롤 합성의 분해 효소들과 저해제들

본 발명과 연관된 측면에서, 점막 투여를 위한 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 활성제는 분해 효소 또는 물질대사 자극제 또는 지방산과 스테롤 합성의 저해제 또는 다른 상피막 조성물, 미국특허 제 6,190,894호로부터 선택된 침투 강화제를 이용해 동등하게 투여되거나 포뮬레이티드된다. 예를 들면 포스포리파아제, 하이얼우로디나아제(hyalurodinase), 뉴라미니나아제(neuramininase), 그리고 콘드로이티나아제(chondroitinase)와 같은 분해 효소는 점막에 비가역적인 손상을 입히지 않고 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 활성제의 점막 침투를 강화하기 위해 사용된다. 여기에 제공된 방법 또는 발명 내의 한 실시예에서 콘드로이티나아제는 점막 침투막의 구성 성분인 글리코단백질, 글리코리피드의 변형을 위해 사용된다. 그에 의하여 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제의 점막 흡수가 강화된다.

점막 구성물 합성의 저해제에 관하여 살펴보면, 이것은 상피 지방 무게의 20-25%에 달하는 자유 지방산으로 알려졌다. 자유 지방산의 생합성에서 두 개의 속도 제한 효소는 아세틸 CoA 카르복시라아제와 지방산 합성효소이다. 본 발명의 방법들과 조성물들에서 사용하는 자유 지방산 합성과 물질대사의 저해제는 다음과 같으나 이에 한정되지는 않는다.

5-테트라데실옥시-2-후란카르복시산(TOFA)과 같은 아세틸 CoA 카르복시라아제의 저해제; 지방산 합성효소의 저해제; 고미신 A, 2-(p-아밀신아밀) 아미노-4-클로로벤조산, 브로펜아실 브로마이드, 모노알리드, 7, 7-디메틸-5, 8-에이코사디에노익산, 니세르골린, 세파란틴, 니카르디피네, 쿠에르세틴, 디부티릴-사이클릭 AMP, R-24571, N-올레오일에탄올아민, N-(7-니트로-2, 1, 3-벤조사디아졸-4-yl) 포스포스티딜 세린, 사이클로포린 A, 국소 마취제, 디부카인 포함, 프레닐아민, 레티노이드, 올-트랜스 그리고 13-cis-레티노산, W-7, 트리플루로페라진, R-24571(칼미다졸리움), 1-헥사도실-3-트리플루오로에틸 글리세로-sn-2-포스포멘톨(MJ33)과 같은 포스로리파아제 A의 저해제들; 니카디핀, 베라파밀, 딜티아젬, 니페디핀, 그리고 니모디핀을 포함하는 칼슘 채널 차단제(blocker); 퀴나크린을 포함하는 안티말라리아, 메파크린, 클로로퀸 그리고 하이드록시클로로퀸; 프로파나롤과 라베타롤을 포함하는 베타 차단제; 칼모듈린 길항제들; EGTA; 티머솔; 덱사메타손과 프레드니솔론을 포함하는 글루코티코스테로이드; 그리고 인도메타신과 나프록센을 포함하는 비스테로이드 항염제.

콜레스테롤과 같은 자유 스테롤은 상피 지방 무게의 20-25%에 해당한다. 콜레스테롤 생합성의 속도 제한 효소는 3-하이드록시-3-메틸글루타릴(HMG) CoA 환원효소이다. 본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 사용하는 콜레스테롤의 저해제들은 다음과 같으나 이에 한정되지만은 않는다.

콜레스테롤 올레이트, 콜레스테롤 설페이트와 포스페이트, 그리고25-OH-- 및 26-OH--콜레스테롤과 같은 산소 처리된 (HMG) CoA 환원효소 저해제들 및 심바스타틴, 로바스타틴, 플루인도스타틴(플루바스타틴)과 같은 (HMG) CoA 환원효소의 경쟁적 저해제들; 스쿠알렌 합성효소 저해제들; 스쿠알렌 에폭시다아제 저해제들; 22,25-디아자콜레스테롤, 20,25-디아자콜레스테롤, AY9944, 그리고 트리파라놀과 같은 DELTA7 또는 DELTA24 환원효소의 저해제들.

지방산 합성의 각 저해제들 또는 스테롤 합성 저해제들은 동등하게 투여되거나 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 활성제의 상피 침투를 강화하기 위해 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제(들)과 결합하여 포뮬레이티드된다. 점막 전달을 위한 치료적 또는 부가적 포뮬레이션에서 스테롤 저해제의 효과적인 농도 범위는 일반적으로 총무게의 약 0.0001%에서 약 20%이며, 더 구체적으로는 약 0.01%에서 약 5%이다.

일산화질소 공여제들과 방법들

본 발명의 다른 관련된 측면에서 일산화질소(NO)공여자는 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고활성제의 상피 침투를 강화하기 위해 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제의 점막 전달을 강화하기 위한 막 침투 강화제로 선택된다. 알려진 다양한 NO 공여자는 본 발명의 방법들과 조성물들 범위 내에 효과적인 농도에서 유용하다. NO 공여자의 예는 다음과 같으나 이에 한정되지만은 않는다.

니트로글리세린, 니트로플루시드, NOC5[3-(2-하이드록시-l-(메틸-에틸)-2-니트로소하그라지노)-1-프로파나민], NOC12[N-에틸-2-(1-에틸-하이드록시-2-트로소하이드라지노)-에탄아민], SNAP[S-니트로소-N-아세틸-DL-페니실아민], NORI 그리고 NOR4.

본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서, 선택된 NO 공여자는 효과적인 양이 점막 상피를 통과하여 혹은 그 속으로 동등하게 투여되거나, 또는 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 및/또는 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제와 결합하여 점막 상피를 통과하거나 혹은 그 속으로 포뮬레이트된다.

상피 접합 구조 및/또는 생리 기능 조절제들

본 발명은 약학적 조성물을 제공하는데, 이 조성물은 점막 전달을 위한 약의 제조로 포뮬레이트되어, 여기에 공개된 점막 전달 강화제와 결합한 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 다른 생물학적 활성제를 포함한다.

침투제는 대체적으로 피험체의 점막 상피 표면에서 점막 접합 구조 및/또는 생리 기능 조절에 의해 점막 상피 세포간 수송을 가역적으로 강화한다. 이 효과는 이웃하는 상피 세포들의 상피 막 흡착 단백질 사이에서 동형 또는 이형결합을 하는 침투제에 의한 저해를 수반한다. 동형 또는 이형결합의 이러한 차단에 적합한 타겟 단백질은 다양하게 연결되어 접합한 흡착 분자(Junctional adhesion molecule; JAMs), 오클루딘(occludins), 클라우딘(claudins)으로부터 선택된다.

또한 상세한 실시예에서, 본 발명은 점막 상피간 수송을 강화하기위한 침투 펩티드들과 펩티드 유사체들과 모사체들을 제공한다. 시험용 펩티드들과 단백질들은 본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 포유류 피험체의 상피 접합 구조 및/또는 생리 기능을 조절하는 작용을 한다. 상기 펩티드들과 펩티드 유사체들과 모사체는 접합한 흡착 분자(JAMs), 오클루딘, 클라우딘에서 추출한 상피 막 흡착 단백질의 동형 및/또는 이형결합을 효과적으로 저해한다.

광범위하게 연구된 이러한 약제는 "폐쇄띠 독소(zonula occludens toxin)"(ZOT)로 알려진 비브리오 콜레라에서 추출한 박테리아 독소이다. 이 독소는 증가한 비내 점막 침투성을 조절하고 이 독소에 감염된 피험체에서 설사를 유발한다. Fasano et al, Proc. Nat. Acad.Sci., U. S. A., 8: 5242-5246(1991). 토끼 회장(ileal) 점막에 테스트했을 때, ZOT는 세포내의 타이트한 접합을 조절하여 침투성을 증가시켰다. 또한 ZOT는 비내 점막의 타이트한 접합을 가역적으로 열 수 있다는 것이 알려졌다. 미국특허 제 5,908,825호.

본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 ZOT 및 ZOT 활성의 작동체들과 길항체들로 작용하는 다양한 ZOT 유사체들과 모사체들은 코 점막을 가로질러서 그리고 코 점막 속으로 세포간 흡수를 증가시켜서 생물학적 활성제의 비내 전달을 강화시키는 데 유용하다. 본 발명에서 ZOT는 실제적으로 접합 단백질 ZO1의 변경된 부위가 특징적인 타이트한 접합의 구조적 재배열을 야기함으로써 활성화된다. 이 측면들 내에서 ZOT는 동등하게 투여되거나 실제적인 부작용 없이 코 점막 침투성을 가역적으로 증가시켜 활성제의 흡수를 상당히 강화시키는 효과적인 양의 생물학적 활성제와 결합하여 포뮬레이트된다.

혈관확장제들과 방법들

본 발명의 결합 조성물들과 방법들 및 대등한 투여의 범위 내에서 유익한 용도를 보여주는 또 다른 흡수-촉진제들은 혈관확장 조성물, 더 명확하게는 혈관확장제이다. 본 발명에서 이 조성물들은 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들, 그리고 점막 상피를 통과(또는 점막 상피에서)하여서(또는 점막 상피나) 특정 타겟 조직 또는 구획(예를 들면, 전신 순환 또는 중추신경계)에 이르는 다른 생물학적 활성제의 수송율을 증가시키면서 점막하 맥관(mucosal vasculature)의 구조와 생리 기능을 조절한다.

본 발명에서 사용하는 혈관확장제는 실제적으로 일산화질소(NO)를 증가시켜 세포질내의 칼슘을 감소시키거나 미오신 광체인 키나아제를 저해하여 점막하 혈관을 이완시킨다. 이들은 일반적으로 9가지 종류로 나뉜다. 칼슘 길항제들; 포타슘 채널 개방제들; ACE 저해제들; 앤지오텐신-II 수용체 길항제들; α-아드레날린과 이디다졸 수용체 길항제들; β1-아드레날린 길항제들, 포스포디에스테라아제 저해제들, 에이코사노이드와 NO 공여자.

화학적 차이에도 불구하고 칼슘 길항제들의 약물동력성은 유사하다. 시스템 순환시 흡수도가 높아서 이 약제들은 간에서 첫 번째로 통과되는데, 약물동력의 개인차가 다양하게 나타난다. 디하이드로피리딘 타입(예를 들면, 아믈로디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 닐바디핀, 니솔디핀 그리고 니트렌디핀)의 더욱 새로운 약물을 제외하고 칼슘의 반감기은 짧다. 그리하여, 이들의 효과적인 약물 농도를 유지하기 위해서는 본 명세서의 다른 곳에서 기술하는 멀티플 복용, 또는 서서히 효과가 나타나는(controlled-release) 방출 포뮬레이션들에 의한 전달이 필요할 것이다. 포타슘 채널 개방제 미녹시딜 처리는 잠재적 부작용에 때문에 방법과 투여 수준이 제한될 것이다.

ACE 저해제들은 길항제I에서 길항제II로의 전환을 막고 레닌 생성물이 증가될 때 가장 효과적이다. ACE는 잠재적인 내생적 혈관 확장제 브래디키닌(bradykinin)을 불활성화 시키는 키나아제-II와 동일하기 때문에, ACE 저해는 브래디키닌 분해를 감소시킨다. ACE 저해제들은 동물모델에서 심장 섬유형성과 심실비대증을 후퇴시켜서 심장에 도움을 주고 심장을 회복시키는 부가적인 효과를 제공한다. ACE 저해제들의 유력한 제거 경로는 신장배출을 통해서이다. 그러므로 신장손상은 제거가 감소하는 것과 관련되고 보통 수준에서 심각한 수준의 신장질환을 가진 환자들에게는 25%에서 50%까지의 복용량 감소가 요구된다.

NO 공여자와 관련해서, 이들은 본 발명에서 점막침투라는 부가적 효과에서 유용하다. 상기 언급한 NO 공여자에 첨가하여 NO/뉴클레오필(nucleophiles) 또는 NONO에이트(NONOates)라 불리는 핵친화성을 가진 NO 복합체는 생리적 pH 상태의 수용액에서 분해될 때 자연적이고 비효소적으로 NO를 방출한다. NONO에이트는 한정된 양을 지닌 NO를 방출하고 예상 가능한 속도 범위는 디에틸아민/NO는 < 3 minutes이고 디에틸렌트리아민/NO(DETANO)은 약 20시간이다.

본 발명의 일부 발명들과 조성물들의 범위 내에서 대등하게 투여되거나(예를 들면, 전신에 또는 비내에, 동시적으로 또는 효과적인 일시적 결합으로), 피험체의 타겟 조직 또는 체내 구획(예를 들면, 간, 간문맥, 중추신경계 조직 또는 체액, 또는 혈청)에 도달할 수 있도록 활성제의 점막 흡수를 강화하기에 효과적인 양의 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들 그리고 다른 생물학적 활성제(들)이 조합적으로 포뮬레이티드된다.

선택적 수송 강화제들과 방법들

본 발명의 조성물들과 방법들은 적절하게 하나 또는 그 이상의 생물학적 활성제의 수송을 촉진하는 선택적 수송 강화제를 추가한다. 이 수송 강화제들은 조합 포뮬레이션 혹은 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 여기에 공개된 유사체들과 모사체들에서 사용된다. 그리고 상기 수송 강화제들은 점막을 가로지르는 하나 또는 그 이상의 첨가적 생물학적 활성제의 전달 강화를 위해, 타겟 조직 또는 피험체의 체내 구획(예를 들면, 점막 상피, 간, 중추신경계 조직 또는 체액, 또는 혈청)에 도달할 수 있도록 점막 전달을 강화하기 위해 사용된다. 택일적으로, 상기 수송 강화제는 조합 포뮬레이션에 사용될 수 있다. 혹은 강화된 첨가적 생물학적 활성제를 가진 또는 가지지 않은 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체와 모사체들의 점막 전달을 직접적으로 강화하기 위한 동등한 투여 프로토콜에 사용된다.

본 발명에서 사용하는 선택적 수송 강화제의 대표적인 예는 다음과 같은 것을 포함하지만 이에 한정되지 만은 않는다. 글리코시드, 당을 포함하는 분자들, 그리고 특히 상피 수송막과 반응하는 것으로 알려진 렉틴 결합제와 같은 결합제. 예를 들면, 특정 "생흡착(bioadhesive)" 리간드들은 다양한 식물과 박테리아 렉틴에 들어있는데, 수용체-매개 반응에 의해 세포 표면의 당류 일부와 결합한다. 이와 같이 결합된 것이 본 발명에 나타난 생물학적 활성제의 점막 전달(예를 들면, 비내 점막 전달) 강화에 쓰이는 매개체 또는 접합된 수송 조절자(mediator)로 사용된다. 본 발명에서 사용하는 어떤 생흡착 리간드들은 분화된 세포 수송과정(엔도사이토시스, 트랜스사이토시스)에 의한 흡착 리간드의 선택적 흡수를 일으키는 상피 타겟 세포에 생물학적 신호를 보내는 것을 조절할 것이다. 따라서 이 수송 조절자들은 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체와 모사체들, 그리고 점막 상피를 속으로 및/또는 점막상피를 통과하는 다른 생물학적 활성제(들)의 흡수를 자극하거나 선택적 흡수를 지시하는 "매개체 시스템(carrier system)"으로 사용될 수 있다. 이것들과 다른 선택적 수송 강화제들은 본 발명에서 고분자 생약물들(특히 펩티드들, 단백질들, 올리고뉴클레오티드들, 그리고 폴리뉴클레오티드 벡터들)의 점막 전달을 상당히 강화시킨다. 렉틴은 진핵세포의 글리코프로테인과 글리코리피드 표면에서 발견된 특정 당과 결합하는 식물 단백질이다. 고농도의 렉틴 용액은 "점막 당김 효과 (mucotractive effect)"를 가지며 다양한 연구들이 렉틴과 렉틴 접합물들(예를 들면, 콜로이드 골드 입자와 접합된 콘카나발린 A)의 빠른 수용체 매개 엔도사이토시스(rapid mediated endocytocis; RME)를 증명하고 있다. 이에 더해 렉틴 메커니즘의 흡수는 생체 내에서(in vivo) 장 약물 타겟팅에 유용할 수 있다는 연구 결과가 보고되었다. 이 연구들 중 일부에서, 폴리스틸렌 나노입자(500 nm)는 토마토 렉틴과 공유결합을 하고 쥐(rat)에게 구강　투여한 후 개선된 전신 흡수효과가 나타났음이 보고되었다.

식물 렉틴들에 추가하여, 미생물 흡착물들과 침투 인자들은 상기 발명의 점막 전달 방법들과 조성물들의 범위 내에서 흡착적/선택적 수송 매개체로 사용할 수 있는 풍부한 후보 소스들이다. 박테리아 흡착 과정에 필요한 두 가지 물질은 '어드히신(adhesin)'(흡착 또는 이식 인자)과 숙주세포 표면의 수용체이다. 점막을 감염을 유발하는 박테리아는 점막 상피세포에 스스로 부착되기 전에 점액층을 침투할 필요가 있다. 이러한 부착은 비록 다른 세포 성분이 그 과정에 참여하고 있다고 해도 박테리아의 돌기나 선모 구조에 의해 매개된다. 흡착 박테리아는 증폭과 형질도입을 통해( 독소들의 도움을 받거나 도움없이) 타겟 세포내에서 연속적인 생화학 반응을 개시하여 점막 상피를 이식한다. 이 침투 메커니즘과 관련하여, 다양한 종류의 생흡착적 단백질들(예를 들면, 인바신, 인터날린)은 알려진 다양한 박테리아나 바이러스에서 먼저 생산된다. 이 단백질들은 숙주세포와 더 나아가 특정 타겟 조직에 특별한 선택성을 가진 미생물들이 세포외 흡착이 가능하게 해 준다. 이러한 수용체-리간드 반응에 의해 전달된 신호들은 엔도-또는 트랜스사이토시스 과정에 의해 손상되지 않은 살아있는 미생물들이 상피 세포속으로(궁극적으로는 상피세포를 통과하여) 이동할 수 있도록 한다. 이러한 자연 발생 현상은 생물학적 활성제가 상피를 거치거나 상피를 가로질러서/또는 약물 반응이 일어날 수 있는 목적지인 타겟 사이트로 전달되는 것을 강화할 수 있도록 본 명세서에서 제시된 방법에 따라 이용될 수 있다(예를 들면, 어드히신을 가진 Y2 수용체-결합 펩티드와 같은 생물학적 합성제의 복합에 의하는 것).

또한 특이적이고 렉틴-유사 방법으로 상피 표면에 결합하는 다양한 박테리아와 식물 독소들은 본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 유용하다. 예를 들면, 디프테리아 톡신(DT)은 RME에 의해 빠르게 숙주세포에 들어간다. 비슷하게, 대장균(E. Coli)의 B 서브유니트는 매우 특이적이고 렉틴-유사 방법으로 불안정한 독소 덩어리들을 장 상피세포의 막까지 들뜨게 한다. 이 독소의 흡수와 상피세포(enterocytes)의 기저외측면(basolateral)으로의 트랜스사이토시스가 생체 내 상태(in vivo)와 무생물 상태(in vitro)에서 보고되었다. 다른 연구들은 말토오스-결합 퓨전 단백질들과 이들이 결합해서 고(high)-Mw-폴리-L-라이신으로서 대장균에서 디프테리아 독소의 트랜스멤브레인 도메인을 나타냈다. 이러한 결과로 나타난 복합물은 무생물 상태에서 리포터 유전자의 흡수를 매개하기 위해 성공적으로 사용되어 왔다. 이 예들에 첨가하여, Staplaylococcus aureus는 수퍼항원들과 독소들로 작용하는 단백질 세트[예를 들면, 스타피로코컬 엔테로톡신 A <staphylococcal enterotoxin A (SEA)>, SEB, 독성 쇼크 증후군 독소 1<toxic shock syndrome toxin 1 (TSST-1)>]를 생산한다. 이 단백질들과 관련된 연구들에서 복용 의존적(dose-dependent), Caco-2 cells에서 SEB와 TSST-I의 촉진된 트랜스사이토시스가 보고되었다.

바이러스성 해마글루티닌(viral haemagglutinins)은 본 발명의 방법들과 조성물들 범위 내의 생물학적 활성제들의 점막 전달을 촉진하기 위한 또 다른 형태의 수송제를 포함한다.

많은 바이러스성 감염의 초기 단계는 점막 세포에서 표면 단백질(해마글루티닌)과의 결합이다. 이 결합 단백질들은 대부분의 바이러스에서 확인되는데, 로타바이러스(rotaviruses), 바리셀라 조스터 바이러스(varicella zoster virus), 셈리키 포리스트 바이러스(semliki forest virus), 아데노바리러스(adenoviruses), 포테이토 리프롤 바이러스(potato leafroll virus), 그리고 레오바이러스(reovirus)를 포함한다. 이들과 다른 대표적인 바이러스성 해마글루티닌은 결합 포뮬레이션(예를 들면, 혼합 또는 접합 포뮬레이션)에서 사용될 수 있다. 또는 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드, 여기에 공개되어 있는 유사체들과 모사체들로 이루어진 동등한 조제 프로토콜에 사용된다. 또는 하나 또는 그 이상의 첨가적 생물학적 활성제의 점막 전달을 동등하게 강화하기 위해 사용된다. 이와 달리, 바이러스성 해마글루티닌은 첨가된 생물학적 활성제의 강화된 전달성을 가지거나 가지지 않으면서 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들의 점막 전달을 직접적으로 강화하기 위한 결합 포뮬레이션들 또는 동등한 조제 프로토콜에 사용될 수 있다.

체내의 다양한 곳에, 본 발명 범위 내에서 선택적 수송-매개 인자(transport-mediating factors)가 사용될 수 있다. 포유류 세포들은 특정 기질과 이에 맞는 타겟 흡수를 촉진하기 위해 잘 갖추어진 메커니즘들을 발생시켜왔다. 집합적으로, 이 막 변형 과정들은 '엔도사이토시스'라 하고, 파고사이토시스(phagocytosis), 피노사이토시스(pinocytosis), 수용체가 매개된 엔도사이토시스(클라트린 매개된 RME), 그리고 포토사이토시스(클라트린 매개되지 않은 RME)를 포함한다. REM은 매우 특이적인 세포적이고 효소를 가진 생물학적 과정인데, 이에 의해, 그 이름에서 내포하듯, 다양한 리간드가 세포 표면에 결합하고 세포 내에 계속적으로 흡수되고 희생된다. 많은 세포에서 상기 엔도사이토시스 과정은 활동적으로 일어나 30분도 채 안되어서 전체 막 표면이 흡수되고 대체된다. 두 종류의 수용체들이 세포막에서의 그들의 유래에 기초하여 제안된다. 제 1형 수용체의 아미노 말단은 세포막 외에 위치하는 반면에 제 2형 수용체의 말단은 세포 내에 존재한다.

본 발명의 다른 실시예는 점막에 전달된 생물학적 활성제 RME의 매개체 또는 자극제로 트렌스페린(transferrin)을 이용한다. 트렌스페린은 80kDa의 철 운반 글리코프로테인으로, RME에 의해 효과적으로 세포에 흡수된다. 트렌스페린 수용체들은 대부분 증식세포 표면, 적아세포에서 올라간 것들, 그리고 많은 종류의 종야에서 발견된다. 트렌스페린(TF)과 트렌스페린 접합물의 트랜스사이토시스는, 전하는 바에 의하면, 브레페들린 A(Brefedlin A; BFA), 곰팡이 대사물의 존재시 강화된다고 한다. 다른 연구에서 BFA 처리는 MDCK 세포들에서 리신(ricin)과 HRP의 정점(apical) 엔도사이토시스를 빠르게 증가시키는 것으로 보고되고 있다. 그리하여 BFA와 수용체-매개 수송을 자극하는 다른 약제들은 본 발명의 방법들의 범위 내에서 결합적으로 포뮬레이트 되는 것으로 사용된다. 그리고/또는 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들을 포함한 생물학적 활성제들의 수용체-매개 수송을 강화하기 위해 동등하게 투여되는 약제로서 사용된다.

폴리머 전달 운반체들(Polymeric Delivery Vehicles)과 방법들

본 발명의 어떤 측면에서, Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 여기에 공개된 다른 생물학적 약제들, 그리고 상기에서 기술한 전달-강화제들은 매개체나 염기로서 생체호환성 폴리머 기능을 나타내는 점막(예를 들면, 비점막)에 투여된 포뮬레이션들의 범위내에 개별적 또는 결합적으로 포함된다. 이러한 폴리머 매개체들은 다른 폴리머 형태들 중에서 폴리머 파우더, 매트릭스 또는 미세입자로 된 전달 매개체들을 포함한다. 상기 폴리머는 식물, 동물, 또는 합성된 것일 수 있다. 종종 상기 폴리머는 교차결합된다. 게다가, 이들 전달 시스템에서 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들은 폴리머와 공유결합하여서 간단한 세척에 의해서도 폴리머와 분리되지 않을 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 폴리머는 효소 저해제 또는 생물학적 활성제(들) 및/또는 전달 강화제(들)을 분해하는 다른 약제들을 가지고 화학적으로 변형될 수 있다. 어떤 포물레이션들에서 상기 폴리머는 부분적으로 또는 전체적으로 물에 용해되지 않으나 하이드로겔과 같은 수분 팽창성(water swellable) 폴리머이다. 본 발명에서 유용한 폴리머들은 바람직하게 물과 반응하고/또는 상당한 양의 물을 흡수할 수 있도록 자연 상태에서 친수성이다. 상기 폴리머들은 종종 물과 평형상태에 도달하기 위한 충분한 시간 동안 물 또는 다른 수분 매개체와 접촉하여 하이드로겔 형태를 나타낸다. 더 상세한 실시예에서, 상기 폴리머는 과다한 물에 접촉하였을 때 실온의 평형 상태에서 최소한 그 무게의 2배의 물을 흡수하는 하이드로겔이다. 미국특허 제6,004,583호.

생분해 폴리머들에 기초한 약물 전달 시스템들은 많은 생체의학적 기술에서 선호되는데, 그 이유는 이러한 시스템들이 가수분해 또는 비독성 분자들에 대한 효소반응에 의해 깨어지기 때문이다. 상기 분해율은 생분해적 폴리머들(biodegradable polymers) 매트릭스의 조성물조작에 의해 조절된다. 그러므로 이 시스템 타입들은 어떤 생물학적 활성제의 장기간 방출을 위한 세팅에 사용될 수 있다. 폴리(글리콜산)(PGA), 폴리-(락티산)(PLA), 그리고 폴리(D,L-락티-코-글리콜산)과 같은 생분해적 폴리머들은 가능한 약물 전달 운반체로서 주의를 끌어왔는데, 그 이유는 이 폴리머들의 분해 산물이 비독성을 나타내기 때문이었다. 정상적인 체내 물질대사 동안에 이 폴리머들은 이산화탄소와 물로 분해된다. 이 폴리머들은 또한 아주 훌륭한 생체호환성을 보여준다. 선택적 전달 강화제들 뿐만 아니라 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제들의 생물학적 활성을 연장하기 위해서, 이 약제들은 폴리오르토에스테르(polyorthoester), 폴리무수물들(polyanhydrides), 또는 폴리에스테르(polyester)와 같은 폴리머 매트릭스와 결합될 수 있다. 이것은 활성을 유지할 수 있게 하고 폴리머 매트릭스의 분해에 의해 결정된 활성제와 같은 것을 배출할 수 있게 한다. 비록 합성 폴리머를 가진 생체치료 분자의 캡슐화가 저장과 전달이 이루어지는 동안 이들을 안정화시킬 수 있음에도 불구하고, 폴리머에 기초한 방출 기술의 가장 큰 장애는 종종 열, 초음파처리, 유기용매들을 포함하는 포뮬레이션 과정 동안의 치료 분자들의 활성 손상이다.

본 발명에서 사용할 수 있도록 연구된 흡수-촉진 폴리머들은 자연 발생 또는 합성 폴리머들, 수지, 합성수지, 그리고 다른 약제와 더불어 앞서 언급한 폴리머들 및 이 물질들 각각 또는 다른 폴리머들과의 혼합물들의 유도체들과 화학적으로 또는 물리적으로 변형된 버전들을 포함한다. 이들의 변경, 변형 또는 혼합이 일어나는 동안 물 흡수, 하이드로겔 형성, 및/또는 유용한 기술에 적합한 화학적 안정성과 같은 원하는 성질에 나쁜 영향을 끼치지 않는다. 본 발명의 더 상세한 면에서, 나일론, 아클릴란, 그리고 다른 정상적 소수성 합성 폴리머들과 같은 폴리머들은 수분 팽창성이 되기 위한 및/또는 수용액 매개물에서 안정한 겔을 형성하기 위한 반응에 의해 충분히 변형될 수 있다.

본 발명의 흡수-촉진 폴리머들은 다음과 같은 비닐 모노머의 다양한 조함들에 기초한 호모-또는 코폴리머 그룹들의 폴리머를 포함할 수 있다. 아크릴산들과 메타아크릴산들, 아크릴아마이드 , 메타크릴아마이드, 하이드록실에틸아크릴레이트 또는 메타크릴레이트, 비닐피롤리돈들 및 폴리비닐알코올 그리고 이것의 코- 그리고 터르폴리머들(terpolymers), 폴리비닐아세테이트, 상기 기술된 모노머들과 2-아크릴아미도-2메틸-프로판술폰산(AMPSㄾ)를 가진 CO-그리고 터르폴리머들. 매우 유용한 것은 직선 또는 가지 친 체인 알킬, 아릴에서 유도된 에스테르 그룹들이 있는 아크릴 또는 메타크릴아마이드 아크릴레이트 또는 메타크릴레이트 에스테르들과 같이 코폴리머화할 수 있는 기능을 가진 상기 기술된 모노머들의 코폴리머들이다. 상기 직선 또는 가지 친 체인 알킬, 아릴은 1에서 6탄소의 알킬 치환물-스테로이드, 황산염, 인산염, 또는 N,N-디메틸아미노알킬(메트)아크릴아마이드, 디메틸아미노알킬(메트)아클릴레이트, (메트)아크릴옥시알킬트리메틸암모니움 클로라이드, (메트)아크릴옥시알킬메틸벤질암모니움 클로라이드와 같은 양이온 모노머들을 포함할 수 있는 방향 고리를 4개까지 가진다.

본 발명에서 사용하는 첨가적 흡수-촉진제는 덱스트란, 덱스트린, 천연 고무(natural gums)와 수지(resins)와 같은 자연 물질, 가공된 콜라겐, 키틴, 키토산, 풀라란(ullalan), 주글란(zooglan), 알기네이트(alginate) 그리고"켈로코젤(Kelocogel)"과 같은 켈콜로이드(Kelcoloid; 변형된 알기네이트인 폴리프로필렌 글리콜)"젤란 고무(gellan gum)와 같은 변형된 알기네이트, 그리고 "켈트롤(Keltrol)"과 같은 자나탄 고무(Xanathan gum),에스타스틴(estastin), 알파 하이드록시 뷰티레이트, 그리고 이것의 코폴리머들, 히알루로니산(hyaluronic acid)과 그 유도체들, 폴리락티산과 글리콜산과 같은 천연 폴리머들에서 나온 종류이다.

본 발명에서 응용할 수 있는 폴리머 종류는 올레핀-불포화 카르복시산으로, 이것은 적어도 하나의 활성화된 탄소-탄소 올레핀 이중결합, 그리고 적어도 하나의 카르복시 그룹을 포함하고 있다. 즉 산 혹은 다음과 같은 기능기 그룹을 말하는데, 이 기능기 그룹이란 모노머 분자에서 존재하고, 카르복시 그룹에 관계하여 알파-베타 위치에 존재하고, 또는 말단 메틸렌 그룹핑의 일부이기 때문에 쉽게 폴리머화할 수 있는 올레핀 이중결합을 함유한 산으로 쉽게 전환할 수 있는 것을 말한다. 이와 같은 올레핀-불포화된 산들은 아크릴산 자체에 의해 예시되는 아크릴산, 알파-시아노 아크릴산, 베타메틸아크릴산(크로토니산<crotonic acid>), 베타-아크릴옥시 프로피온산(beta-acryloxypropionic acid), p-클로로 신남산(p-chloro cinnamic acid), 1-카르복시-4-페닐부타디엔-1,3-이타콘산, 시트라콘산, 메사콘산, 글루타콘산, 아코니트산, 푸마르산, 말산, 트리카르복시 에틸렌과 같은 물질을 포함한다.

여기에서 사용된 것과 같이, "카르복시산"이라는 용어는 폴리카르복시산과 이들의 무수물들, 말레산무수물들과 같은 것을 포함하는데, 여기서 무수물 그룹들은 같은 카르복시산 분자에 위치한 두 개의 카르복시 그룹으로부터 물 분자 한 개를 제거함으로써 형성된다.

본 발명에서 흡수-촉진제로 사용하는 대표적인 아크릴레이트에는 메틸아크릴레이트, 에틸 아크릴레이트, 프로필 아크릴레이트, 이소프로필 아크릴레이트, 부틸 아크릴레이트, 이소부틸 아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 메틸 에타크릴레이트, 에틸 메타크릴레이트, 옥틸 아크릴레이트, 헵틸 아크릴레이트, 옥틸 메타크릴레이트, 이소프로필 메타크릴레이트, 2-에틸헥싱 메타크릴레이트, 노닐 아크릴레이트, 헥실 아크릴레이트, n-헥실 아크릴레이트, 기타 등등이 포함된다. 더 많은 수의 알킬 아크릴산은 데실 아크릴레이트, 이소데실 메타크릴에이트, 라우릴 아크릴레이트, 스티어릴 아크릴레이트, 베헤닐 아크릴레이트, 멜리실 아크릴레이트 그리고 그에 따른 메타클릴레이트 버전들을 포함한다. 2개 혹은 3개 또는 그 이상의 긴 체인 아클릴레이트의 혼합물들은 카르복시 모노머들 중의 하나와 성공정으로 폴리머화될 것이다. 다른 코모노머들은 알파 올레핀들, 비닐 에테르들, 비닐 에스테르들, 그리고 그에 따른 혼합물을 함유하는 올레핀들을 포함한다.

아크릴 니트릴들을 포함하는 다른 비닐리덴 모노머들은 본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 활성제(들)의 전달과 흡수를 강화하기 위해 사용된다. 피험자의 타겟 조직 또는 간, 간문맥, 중추 신경계 조직 또는 체액, 혈청과 같은 곳에 활성제(들)의 전달을 강화하는 것을 포함한다. 유용한 알파, 베타-올레핀 불포화된 니트릴들은 바람직하게는 아크릴니트릴들, 메타크릴니트릴들, 기타 등등과 같은 3에서 10 탄소 원자들을 가지는 모노올레핀 불포화된 니트릴들이다. 가장 바람직한 것은 아크릴니트릴과 메타크릴니트릴들이다. 모노올레핀 불포화된 아마이드를 포함하는 3에서부터 35 탄소 원자들을 함유하는 아크릴 아마이드들이 또한 사용될 수 있다. 대표적인 아마이드들은 아크릴아마이드, 메타크릴아마이드, N-t-부틸 아크릴아마이드, N-사이클로헥실 아크릴아마이드, 더 높은 수의 아크릴 아마이드, 8에서 32 탄소 원자들을 가지는 질소 위의 알킬 그룹, N-메틸올 아크릴아마이드, N-프로파놀 아크릴아마이드, N-메티올 아크릴아마이드, N-메티올 메타크릴아마이드, N-메티올 말레이마이드, N-메티올 말레이아미산 에스테르들, N-메티올-p-비닐 벤자마이드, 기타 등등과 같은 4에서 10 탄소 원자들을 가지는 것을 포함하는 알파, 베타-올레핀 불포화된 카르복시산의 N-알킬올 아마이드들을 포함한다.

또한 부가적으로 유용한 흡수 촉진 물질들은 2에서 18 탄소 원자들, 더 바람직하게는 2에서 8 탄소 원자들을 함유하는 알파-올렌들로; 4에서 10 탄소 원자들을 함유하는 디엔들(dienes); 비닐 아세테이트와 같은 비닐 에스테르와 알릴 에스테르; 스티렌, 메틸 스티렌, 클로로 스티렌과 같은 비닐 방향족들; 비닐과 알릴 에테르 그리고 비닐 메틸 에테르와 같은 케톤들과 메틸 비닐 케톤; 클로로아크릴레이트; 알파 시아노메틸 아크릴레이트, 그리고 알파-, 베타-, 감마-시아노프로필아크릴레이트들과 같은 시아노알킬 아크릴레이트; 메토옥시 에틸 아크릴레이트와 같은 알콕시아크릴레이트; 클로로에틸 아크릴레이트와 같은 할로아크릴레이트들; 비닐 할로겐화물들과 비닐 클로라이드, 비닐리덴 클로라이드 기타 등등; 디비닐들, 디아크릴레이트들, 그리고 디비닐 에테르, 디에틸렌 글리콜 디아크릴레이트, 에틸렌 글리콜디메타크릴레이트, 메틸렌-비스-아크릴아마이드, 알리펜타에리트리톨, 기타 등등과 같은 다른 다기능적 모노머들; 그리고 비스 (베타-클로로에틸)비닐 포스포네이트 그리고 이 분야의 다른 기술들에 알려진 기타 등등과 같은 비스(베타-할로알킬)알케닐 포스포네이트들이 있다. 모노머를 함유하는 상기 카르복시가 있는 코폴리머들은 부차적인 성분이고, 다른 비닐리덴 모노머들이 주된 성분들로서 여기에 공개된 방법들에 맞게 쉽게 준비된다.

본 발명의 범위에서 흡수 촉진제들로 사용된 하이드로겔들은 아크릴 그룹, 메타아크릴산들, 아크릴아마이드, 하이드록시메틸아크릴레이트(HEA) 또는 메타크릴레이트(HEMA), 그리고 물과 반응하고 수분 팽창성을 가지는 비닐 피롤리돈들로부터 만들어진 합성 코폴리머들로 구성될 수 있다. 유용한 폴리머들의 예들은, 특히 펩티드들과 단백질들을 전달하기 위한, 다음과 같은 폴리머 타입들이다. (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1 에서 99 wt %(메트)아크릴산; (메트)아크릴아마이드들과 0.1-75 wt % (메트)아크릴옥시에틸 트리메티암모니움 클로라이드; (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1-75 wt % (메트)아크릴아마이드; 아크릴산과 0.1-75 wt % 알킬 (메트)아크릴레이트들; (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1-75 wt % AMPS. RTM. (Lubrizol사의 상표) ; (메트)아크릴아마이드 그리고 0 to 30 wt % 알킬(메트)아크릴아마이드들 그리고 0.1-75 wt % AMPS. RTM.; (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1-99 wt. % HEMA; (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1에서 75 wt % HEMA 그리고 0.1에서 99% (메트)아크릴산; (메트)아크릴산 그리고 0.1-99 wt % HEMA; 50몰 % 비닐 에테르 그리고 50몰 % 말레이산 무수물; (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1에서 75 wt % (메트)아크릴옥시알킬 디메틸 벤질암모니움 클로라이드; (메트)아크릴아마이드 그리고 0.1에서 99 wt % 비닐 피롤리돈; (메트)아크릴아마이드 그리고 50 wt % 비닐 피롤리돈 그리고 0.1-99. 9 wt % (메트)아크릴산; (메트)아크릴산 그리고 0.1에서 75 wt % AMPS. RTM. 그리고 0.1-75 wt % 알킬(메트)아크릴아마이드. 상기 예들에서, 알킬은 C에서 C을, 바람직하게는, C에서 C, 직선과 가지 친 사이클릭 C에서 C; (메트)가 사용되는 곳은 포함된 메틸 그룹을 가진 및 가지지 않은 모노머들을 의미한다. 다른 매우 유용한 하이드로겔 폴리머들은 팽창성이 있으나 폴리(비닐 피롤리돈)스타치, 카르복시메틸 셀룰로오즈 그리고 폴리비닐 알코올의 가용성 버전들이다.

본 발명의 범위 내에서 유용한 부가적 폴리머 하이드로겔 물질들은 (폴리) 하이드록시알킬 (메트) 아크릴레이트: 음이온과 양이온 하이드로겔: 폴리 (일렉트로라이트) 복합물들; 낮은 아세테이트 잔기를 가지는 폴리 (비닐 알코올들): 교차결합된 아가(agar)의 팽창성(swellable) 혼합물과 교차결합된 카르복시메틸 셀룰로오즈: 부족하게 교차결합된 아가와 혼합된 메틸 셀룰로오즈를 구성하는 팽창성 조성물; 스티렌, 에틸렌, 프로필렌, 오리소부틸렌을 가진 잘 분리된 코폴리머의 분산에 의해 생산된 수분 팽창성 코폴리머; N-비닐 락탐들의 수분 팽창성 폴리머; 카르복시메틸 셀룰로오즈의 팽창성 소듐 염들; 기타 등등을 포함한다.

본 발명의 범위 내에서 생물학적 약제의 점막 전달에 적합한 친수성 하이드로겔을 형성하기에 유용한 다른 겔이 될 수 있는(gelable), 분비액을 흡수하고 보유하고 있는 폴리머들은 펙틴; 아가, 아카시아, 카라야(karaya), 트라가센트(tragacenth), 알긴(algins) 그리고 당과 그들의 교차결합된 버전들과 같은 다당류들(polysaccharides); 아크릴산 폴리머들, 코폴리머들 그리고 염 유도체들,폴리아크릴아마이드들; 수분 팽창성 물 인딘 말레이산 무수물 폴리머들; 스타치 융합 코폴리머들; 자기 무게의 약 2에서 400배의 물 흡수성을 가지는 아클릴레이트 타입 폴리머들과 코폴리머들; 폴리글루칸의 디에스테르들; 교차결합된 폴리(비닐 알코올) 그리고 폴리 (N-비닐-2-피롤리돈)의 혼합물; 폴리옥시부틸렌-폴리에틸렌 블록(block) 코폴리머 겔들; 캐러브 고무(carob gum); 폴리에스테르 겔들; 폴리 우레아 겔들(poly urea gels); 폴리에테르 겔들; 폴리아마이드 겔들; 폴리이미드 겔들; 폴리펩티드 겔들; 폴리아미노산 겔들; 폴리 셀룰로오즈 겔들(poly cellulosic gels); 교차결합된 인딘-말레이산 무수물 아크릴레이트 폴리머들; 그리고 다당류들을 포함한다.

본 발명에서 사용하는 합성 하이드로겔 폴리머들은 다양한 비율로 많은 모노머들의 무제한 조합에 의해 만들 수 있다. 상기 하이드로겔은 교차결합될 수 있고 일반적으로 흡수 능력이 있어서 체액을 흡수하고 팽창 또는 확대된 평형상태까지 확장된다. 하이드로겔은 실제적으로 코 점막표면에 전달시 자기 무게의 약 2-5, 5-10, 10-50, 50-100배까지 혹은 그이상의 물을 흡수하여서 팽창하거나 부피가 증가한다. 주어진 하이드로겔의 적정한 팽창성의 정도는 서로 다른 생물학적 약제에 의해 결정되는데, 상기 약제들은 분자량, 크기, 가용성 그리고 폴리머에 의해 매개되거나 폴리머에 묶여있거나 폴리머와 캡슐화된 약제들의 확산 그리고 특정 공간과 각각의 폴리머들과 결합되어진 협동적 체인 운동과 같은 인자에 의해 서로 다른 특성을 나타낸다.

본 발명에서 유용한 친수성 폴리머들은 물에 녹지 않으나 수분 팽창성이 있다. 이러한 수분을 흡수하여 팽창된 폴리머들은 전형적으로 하이드로겔 또는 겔로 언급된다. 이러한 겔들은 적당한 크로스링킹 약제에 의해 폴리머의 크로스링킹 과정을 거쳐 물에 용해될 수 있는 폴리머로부터 편리하게 생산될 수 있다. 그러나 또한 안정적인 하이드로겔은 정해진 pH, 온도 및/또는 이온 농도 조건들 하에서 이 학문분야에서 알려진 방법들에 따라 특정 폴리머들로부터 형성될 수 있다. 실제적으로 상기 폴리머들은 좋은 친수성을 가질때까지 교차결합되어서 물리적 통합력을 향상시키고(같은 또는 비슷한 타입의 교차결합되지 않은 폴리머들과 비교하여), 적당한 위치와 시간에서 약제들을 배출시키는 능력을 유지하는 동안 중요한 생물학적 약제와 사이토킨 또는 효소 저해제와 같이 투여용 첨가적 조성물들을 겔 네트워크 내에서 유지하기 위한 능력을 향상시킨다.

일반적으로 본 발명에서 사용하는 하이드로겔 폴리머들은 교차결합되는데, 코폴리머를 형성하는 모노머 무게에 기초하여 크로스링킹 약제 무게의 0.01에서 25%의 양이 두 개의 기능기가 교차결합하고 더 바람직하게는 무게의 0.1에서 20%, 더 일반적으로는 0.1에서 15%가 크로스링킹한다. 크로스링킹 약제의 또 다른 유용한 양은 그 무게의 0.1에서 10%이다. 트리, 테트라 또는 그 이상의 다기능 크로스링킹 약제가 또한 사용될 수 있다. 이러한 반응제가 활성화될 때, 더 낮은 양이 평형 상태의 크로스링킹 밀도- 즉 크로스링킹의 정도 혹은 생물학적 활성제를 효과적으로 함유기에 충분한 네트워크 성질들을 얻기 위해 필요로 될 수 있다.

상기 교차결합들은 체액을 포함한 물에서 팽창할 수 있는 폴리머를 가지고 공유결합, 이온결합, 수소결합을 할 수 있다. 이러한 크로스링커들과 크로스링킹 반응은 이 분야에서 숙려된 것으로 알려졌고 많은 경우에 폴리머 시스템에 의존한다. 이러한 교차결합된 네트워크는 불포화된 모노머들의 자유 라디컬 코폴리머화에 의해 형성될 수 있다. 폴리머 하이드로겔은 알코올들, 산들, 글리옥살과 같은 그룹을 가지는 아민들, 포름알데히드 또는 글루타르알데히드, 비스 무수물들 그리고 기타 같은 종류의 폴리머들에서 발견되는 기능기 그룹들의 반응에 의해 크로스링킹하는 폴리머들에 의해 형성될 수 있다.

상기 폴리머들은 또한 예를 들면 다음과 같은 폴리엔과 교차결합될 수 있다. 디카디엔 오르트리비닐 사이클로헥산(decadiene ortrivinyl cyclohexane); N, N-메틸렌-비스 (아크릴아마이드)와 같은 아크릴아마이드들; 트리메틸올 프로판 트리아크릴레이트와 같은 다기능적 아크릴레이트들; 또는 최소한 2 말단 CH2 < 그룹들(예를 들면, 디비닐 벤젠, 디비닐 나프틀렌(naphthlene), 알릴 아크릴레이트 기타 등등을 포함)을 포함하는 다기능적 비닐이딘(vinylidene) 모노머. 어떤 실시예에서, 코폴리머를 조제하기 위해 사용하는 크로스-링킹 모노머들은 분자당 한 개 이상의 알케닐 에테르 그룹핑을 가지는 폴리알케닐 폴리에스테르인데, 이것은 말단 메틸렌 그룹핑(예를 들면, 최소한 2개의 탄소 원자와 2개의 하이드록시 그룹을 가지는 폴리하이드릭 알코올의 에테르화에 의해 만들어짐)에 붙기 위해 존재하는 올레틴 이중결합이 있는 알케닐 그룹을 선택적으로 가진다고 볼 수 있다. 이 종류에 속하는 조성물들은 하나 또는 그 이상의 폴리하이드릭 알코올의 알칼린 수용액에서 알릴 클로라이드 또는 알릴 브로마이드와 같은 알케닐 할로겐화물과의 반응에 의해 생산될 수 있다. 상기 생산물은 다양한 에테르 그룹들을 가진 폴리에테르 복합물이 될 수 있다. 상기 폴리 에스테르 크로스-링킹 약제는 분자의 잠재적인 폴리머화 그룹들의 수를 증가시킨다. 실제적으로, 분자당 평균 1개 또는 그 이상의 알케닐 에테르 그룹핑을 포함하는 폴리에스테르들이 사용된다. 다른 크로스-링킹 모노머들은 다음과 같은 것을 포함한다. 디알릴 에스테르, 디메탈릴 에스테르(dimethallyl esthers), 알릴 또는 메탈릴 아클릴레이트(methallyl acrylates) 그리고 아크릴아마이드들, 테트라비닐 실란(tetravinyl silane),폴리알케닐 메탄들(polyalkenyl methanes), 디아크릴레이트들(diacrylates), 그리고 디메타크릴레이트들(dimethacrylates), 디비닐 벤젠과 같은 디비닐 화합물, 폴리알릴 포스페이트(polyallyl phosphate), 디알릴옥시 화합물들(diallyloxy compounds) 그리고 포스파이트 에스테르(phosphite esters) 그리고 기타 등등. 전형적인 약제는 알릴 펜타에리트리톨(allyl pentaerythritol), 알릴 수크로오스, 트리메틸올프로판 트리아크릴레이트, 1,6-헥산에디올 디아크릴레이트(hexanediol diacryllate), 트리메틸올프로판 디알릴 에테르, 펜타에리트리톨 트리아크릴레이트, 테트라메틸렌 디메타크릴레이트, 에틸렌 디아크릴레이트, 에틸렌 디메타크릴레이트, 트리에틸렌 글리콜 디메타크릴레이트, 기타 등등. 알릴 펜타에리트리톨, 트리메틸올프로판 디알릴에테르 그리고 알릴 수크로로스가 적당한 폴리머를 제공한다. 크로스-링킹 약제가 있을 때, 폴리머 혼합물들은 총 카르복시산 모노머와 다른 모노머들을 합한 크로스-링킹 모노머들 무게의 약 0.01에서 20%, 예를 들면, 1%, 5%, 또는 10% 또는 그 이상의 무게 %를 항상 포함한다.

본 발명의 더 상세한 면에서, Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제의 점막 전달은 약제를 느리게 방출하거나 또는 효소적 혹은 생리학적 보호 매개체 혹은 운반체 (예를 들면, 효소 분해 활동으로부터 약제들을 보호하는 하이드로겔)로 보존하는 것에 의해 강화된다. 어떤 실시례에서, 활성제는 화학적 수단에 의해 운반체 또는 매개체에 결합되고, 또한 효소 저해제들, 사이토킨 등과 같은 첨가적 약제에 부가적으로 혼합되거나 결합된다. 상기 활성제는 대안적으로 폴리머 매트릭스와 같은 매개자 또는 매개체 내에 아주 물리적으로 잡혀서 운동성이 없어질 수 있다.

본 발명에서 유용한 하이드로겔들과 같은 폴리머들은 여기에서 포뮬레이트된 활성제의 비내 생체이용성을 강화하기 위한 폴리머와 화학적으로 결합한 글리코시드들과 같을 기능적으로 링크된 약제와 결합할 수 있다. 이러한 글리코시드들의 예는 다음과 같다. 프룩토시드(fructosides), 갈락토시드(galactosides), 아라비노시드(arabinosides),마믈로시드(mamlosides) 그리고 그들의 알킬 치환 유도체들과 알부틴(albutin), 플로리진(phlorizin), 아미그달린(amygdalin), 디지토닌(digitonin), 사포닌(saponin), 그리고 인디칸(indican)과 같은 천연 글리코시드. 전형적인 글리코시드들이 폴리머와 결합할 수 있는 다양한 방법들이 있다. 예를 들면, 글리코시드 또는 다른 유사한 탄수화물의 하이드록시 그룹의 하이드로젠은 에테르를 형성하기 위해 하이드로겔 폴리머로부터 알킬 그룹으로 대체될 수 있다. 또한, 글리코시드들의 하이드록시 그룹은 인 시츄(in situ)에서 폴리머 에스테르를 형성하기 위해 폴리머 하이드로겔의 카르복시 그룹들을 에스테르화하기 위해 반응될 수 있다. 다른 접근은 말레이산 코폴리머의 콜레스트(cholest)-5-엔-3베타-올을 가진 아세토브로모글루코오스(acetobromoglucose)의 응축을 이용하는 것이다. N-치환된 폴리아크릴아마이드들은 오메가-아미노알킬글리코시드들을 가진 활성화된 폴리머들의 반응에 의해 합성될 수 있다: (1) (탄수화물-스페이서) (n) -폴리아크릴아마이드, 가짜 다당류들(pseudopolysaccharides) ; (2) (탄수화물 스페이서) (n) -포스파티딜에탄올아민(m)- 폴리아크릴아마이드, 네오글리코리피드들, 포스파티딜에탄올아민의 유도체들; (3) (탄수화물- 스페이서) (n) -바이오틴(m) -폴리아크릴아마이드. 이 비오티닐레이트된(biootinylated) 유도체들은 폴리머-캡슐화된 Y2 수용체-결합 펩티드와 같은 생물학적 활성제의 흡수를 촉진하기 위해 점마 표면의 렉틴에 부착할 수 있다.

본 발명의 더욱 상세한 면에서, 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들, 및/또는 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제 (프로테아제 저해제(들), 사이토긴(들), 세포간 연결 생리 기능의 첨가적 조절자와 같은 2차 활성제 등을 선택적으로 포함)는 변형되거나 폴리머성 매개체나 매트릭스에 결합된다. 예를 들면, 이것은 펩티드 또는 단백질 활성제의 화학적 결합 그리고 교차결합된 폴리머 네트워크 범위 내에서 다른 선택적 약제에 의해 이루어진다. 또한 상기 폴리머를 글리코시드를 포함하는 분자와 같은 반응제에서 분리하는 화학적 변형도 가능하다. 어떤 면들에서, 상기 생물학적 활성제(들), 그리고 선택적인 2차 활성제(들)은 적당한 반응 그룹이 있는 곳에서 또는 활성제(들)가 화학적으로 첨가된 곳에서 기능화될 수 있다. 대부분 에틸렌 폴리머화 가능 그룹(ethylenic polymerizable group)이 첨가되고 기능화된 활성제는 그 다음에 모노머들과 크로스링킹 약제와 코폴리머화되는데, 이 약제는 용액 폴리머화(일반적으로 물에서), 에멀젼, 서스펜션 또는 디스퍼젼 폴리머화와 같은 표준적인 폴리머화 방법에서 사용하는 것이다. 종종 기능화 약제는 활성제의 많은 부분들이 기능화될 수 있도록 충분히 높은 농도의 기능기 또는 폴리머화 가능 그룹들을 가지고 있다. 예를 들면, 16 아민 사이트를 가지는 폴리펩티드에서, 일반적으로 최소한 2,4,5,7, 그리고 8까지 또는 그 이상의 사이트들에서 기능화되는 것이 바람직하다.

기능화 후에, 기능화된 약제(들)은 모노머들과 중요한 폴리머들을 형성하는 약제로 구성된 크로스링킹 약제와 혼합된다. 폴리머화는 그 다음에 이러한 매개에서 결합된 활성제(들)을 포함하는 폴리머를 만들기 위해 유도된다. 이 폴리머는 그 다음에 물이나 다른 용매로 씻겨지고 아니면 불순물들을 제거하기 위해 정제된다. 그리고 필요하다면, 원하는 크기를 얻기 위해 젓기, 그물 망사에 통과시키기, 초음파처리와 같은 물리적 수단으로 빻거나 부순다. 그 다음에 물과 같은 용매는 활성제(들)의 분해나 변성을 막기 위해 제거된다. 바람직한 방법은 동결건조이나 다른 방법들도 유용하고 사용될 수 있다(예를 들면, 진공 건조, 공기 건조, 스프레이 건조 등).

본 발명에서 펩티드들, 단백질들 그리고 다른 활성제의 폴리머화 가능한 그룹을 유도하기 위해 유효 아미노, 하이드록실, 티올, 그리고 불포화된 그룹들을 포함하고 있는 일렉트로필(electrophiles)을 가진 다른 반응 그룹들과 반응할 수 있다. 예를 들면, N-하이드록시 숙시니미딜 그룹들을 포함하고 있는 불포화된 모노머들, p-니트로페닐 카보네이트와 같은 활성 카보네이트들, 트레실레이트(tresylate), 옥시카보닐이미다졸(oxycarbonylimidasols), 에폭사이드(epoxide), 이소시아네이트(isocyanates)와 알데하이드, 그리고 불포화된 카르복시 메틸 아지드화물 그리고 이 범주의 약제에 속하는 불포화된 오르토피리딜-디설피드(orthopyridyl-disulfide)이다. 불포화된 약제의 예들은, 알릴 글리시딜 에테르, 알릴 클로라이드, 알릴브로마이드, 알릴 이오다이드, 아크릴로일 클로라이드(acryloyl chloride), 알릴 이소시아네이트(allyl isocyanate), 알릴술포닐 클로라이드(allylsulfonyl chloride), 말레이산 무수화물, 말레이산 무수화물의 코폴리머들과 알릴 에테르, 기타 등등이다.

알데하이드를 제외한 모든 리신(lysine) 유도체들은 일반적으로 히스티딘의 이미다졸 그룹들과 티로신의 하이드록시 그룹들과 시스틴의 티올 그룹들과 같은 다른 아미노산들과 반응할 수 있는데, 이 그룹의 핵친화성이 강화되면 반응할 수 있다.

기능화하는 약제를 포함하는 알데하이드는 리신 특이적이다. 리신들, 시트테인들, 티로신에서 유효한 그룹들과 반응할 수 있는 타입들은 본 명세서에 광범위하게 기록되어 있고 이 분야의 숙련된 기술로 알려져 있다.

아미노 그룹들을 포함하고 있는 생물학적 약제의 경우, 아크릴로일 클로라이드와 같은 아실로일 클로라이드(acyloyl chloride)와 쉽게 반응할 수 있고 반응돤 약제에서 폴리머화 가능한 아크릴 그룹을 유도한다. 그 다음으로 아크릴아마이드와 아크릴산의 코폴리머가 크로스링킹하는 동안과 같은 폴리머를 조제하는 동안에 아크릴 그룹을 통과하는 기능화 활성제는 폴리머에 붙어서 결합된다.

본 발명의 다른 부가적인 면에서, 펩티드들, 단백질, 핵산들, 그리고 생체 내에서 생활성적인 다른 분자들을 포함하는 생물학적 약제는, 하나 또는 그 이상의 약제(들)가 선형 폴리알킬렌 글리콜과 같은 일부 친수성인 폴리머 부분과 일부 친지방성 폴리머 부분(미국특허 제5,681, 811호 참고)으로 된 폴리머와 공유결합하여 접합-안정화된다. 어떤 면에서, 생물학적 활성제는 다음과 같이 이루어진 폴리머와 공유적으로 연결된다.(i) 선형 폴리알킬렌 글리콜 일부 그리고 (ii) 활성제 내의 일부 친지방성 선형 폴리알킬렌 글리콜 일부, 그리고 친지방성 분자 일부는 서로 관계하여 조합적으로 배열되어서 활성 치료제가 효소 분해에 대한 강화된 생체 내 저항성을 가지게 된다(즉, 폴리머가 짝을 이루지 않은 비접합 형태와 유사한 조건 하에서의 생물학적 치료제의 안정성에 관한 것.). 다른 면에서, 접합-안정화된 포뮬레에션은 생물학적 활성제가 다음과 같이 구성된 폴리소르베이트 복합물과 공유적으로 연결되면서 3차원 배열을 가진다. 폴리소르베이트 복합물은 (i)선형 폴리알킬렌 글리콜 일부 그리고 (ii) 활성제 내의 친지방성 일부 분자, 선형 폴리알킬렌 글리콜 일부 그리고 선형 폴리알킬렌 글리콜 일부 그리고 친지방성 분자는 서로 관계하여 조합적으로 배열되어서 (a)친지방성 분자는 3차원 배열에서 외부적으로 이용되고, (b) 조성물 속의 활성제는 효소 분해에 대한 강화된 생체 내 저항성을 가진다.

좀 더 깊게 살펴보면, 트리글리세리드 백본 일부의 탄소 원자에 결합된 폴리알킬렌 글리콜 스페이서 그룹을 통하여 트리글리세리드 백본 일부와 공유적으로 결합된 생물학적 활성제로 이루어진 멀티리간드된 접합 복합물이 제공되고, 적어도 한 개의 지방산 일부는 트리글리세리드 백본 일부의 탄소 원자에 직접적으로 부착되거나 폴리알킬렌 글리콜 스페이서 일부를 통하여 공유적으로 연결된다(미국특허 제5,681, 811호 참고). 이러한 멀티리간드 접합된 치료제 복합물에서, 일부 생체반응적 트리글리세리드의 알파'와 베타 탄소 원자들은 폴리알킬렌 글리콜 스페이서 일부를 통하여 직접적으로 또는 간접적으로 공유결합하여 부착된 지방산 일부를 가진다. 이와 또 다르게, 생체반응적 치료제가 직접적으로 또는 간접적으로 폴리알킬렌 스페이서 일부를 통하여 연결되면서 트리글리세리드 백본 일부의 감마 탄소 원자와 공유적으로 연결되면, 지방산 일부는 직접적으로 또는 폴리알킬렌 스페이서 일부를 통하여 트리글리세리드 백본 일부의 알파와 알파'탄소들에 공유적으로 부착될 수 있다. 본 발명의 범위 내에서 트리글리세리드 백본 일부를 구성하는 멀티리간드 치료제 복합물에 적합한 다양한 구조적, 조성적 , 배열적 형태가 가능하다는 것을 알 수 있을 것이다. 더 언급하면, 이러한 멀티리간드 접합된 치료제 복합물, 생물학적 활성제(들)는 본 발명의 범위에서 알킬 스페이서 그룹들, 또는 이외에 다른 수용가능한 스페이서 그룹들을 통하여 트리글리세리드의 변형된 백본 일부와 공유적으로 연결될 수 있다. 본 발명에서 사용되듯이, 수용가능한 스페이서 그룹은 입체적이고 화합물이고 특이적 수용가능성을 이용하여 최종 사용한다.

본 발명의 부가적인 면에서, 접합-안정화된 복합물들이 제공된다. 접합-안정화 복합물들은 알파, 알파'그리고 베타 탄소 원자의 기능화 그룹들과 공유적으로 연결된 트리글리세리드 백본을 포함하는 폴리 소르베이트 일부로 구성되는 폴리 소르베이트 복합물을 구성한다. 상기 언급한 기능화 그릅들에는 (i) 지방산 그룹; 그리고 (ii) 생물학적 활성제 또는 그 일부가 공유 결합된(예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 그룹의 적당한 기능기와 결합) 폴리에틸렌 글리콜 그룹을 포함한다. 이러한 공유결합은 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 그룹의 하이드록시 말단 기능기에서 직접적으로 되거나, 카르복시 기능기 스페이서 그룹을 가진 폴리에틸렌 글리콜 그룹의 하이드록시 말단이 캡핑(capping) 반응을 하여 캡이 씌워진 폴리에틸렌 글리콜 그룹이 말단 카르복시 기능기를 가셔서 생물학적 활성제나 그 일부가 공유적으로 결합할 수 있는 것과 같이 간접적으로 이루어진다.

본 발명의 다른 부가적인 면에서, 안정적이고 수용성인 접합-안정화된 복합물이 제공된다. 이 복합물은 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 및/또는 글리코리피드 일부를 변형한 생리적으로 호환가능한 폴리에틸렌 글리콜(PEG)에 공유적으로 연결된 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제(들)로 이루어진다. 이러한 복합물에서, 생물학적 약제(들)는 자유 아미노산 그룹이 공유 결합을 쉽게 할 수 있어서 글리코리피드 일부를 변형한 생리적으로 호환가능한 PEG에 공유적으로 연결될 수 있는데, 여기서 쉽게 이루어진 공유결합은 생체 내에서 생화학적 가수분해 및/또는 단백질 가수분해에 의해 분리될 수 있다. 상기 글리코리피드 일부를 변형한 생리학적으로 호환가능한 PEG는 모노팔미테이트, 모노라우레이트, 디팔미테이트, 모놀라우레이트, 디라우레이트, 트리라우레이트, 모놀리에이트, 디올리에이트, 트리올리에이트, 모노스티어레이트, 디스티어레이트, 트리스티어레이트로 이루어진 그룹에서 선택된 지방산 에스테르 그룹으로 구성된 폴리소르베이트 폴리머와 같은 폴리소르베이트 폴리머를 유리하게 구성할 수 있다. 이 복합물에서, 상기 글리코리피드 일부를 변형한 생리학적으로 호환가능한 PEG는 지방산의 폴리에틸렌 글리콜 에스테르들, 그리고 예를 들면 라우르산, 팔미티산, 올레산, 스테아르산에서 추출된 지방산과 같은 지방산의 폴리에틸렌 글리콜 에스테르로 이루어진 그룹에서 선택된 폴리머를 적당하게 구성할 수 있다.

물질의 저장

본 발명의 어떤 면에서, 상기 결합적 포뮬레이션들 및/또는 동등한 투여 방법들은 펩티드들과 단백질의 효과적인 양을 제시하는데, 이 펩티드와 단백질들은 용기 속에서 대전된 유리에 부착하여 효과적인 농도를 감소시킬 수 있다. 실란화된(silanized) 용기들, 예를 들면, 실란화된 유리 용기들은 유리 용기에 폴리펩티드 또는 단백질이 흡수되는 것을 감소시켜 완성물을 저장한다.

또한 본 발명의 부가적인 면에서, 포유류 환자 치료용 킷(kit)은 환자의 점막에 전달되기 위해 포뮬레이트된 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 조성물(들)의 안정적인 약물적 조성으로 이루어진다. 여기서 상기 조성물은 비만, 암, 또는 영양실조 또는 암과 관련된 파괴와 같은 증상(들)을 효과적으로 완화시킨다. 킷을 이루는 또 하나는 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 조성물을 담는 약제병이다. 약제병은 제약용 폴리머, 유리 다른 적당한 물질들로 이루어진다. 약제병은 예를 들면, 실란화된 유리병이다. 킷을 이루는 다른 것은 환자의 점막 표면에 조성물을 전달할 수 있는 전달 구멍이다. 전달 구멍은 제약용 폴리머, 유리 또는 다른 적당한 물질로 이루어진다. 전달 구멍은 예를 들면, 실란화된 유리이다.

저압력에서 실란화 과정을 거쳐 실란화되기 위한 표면에 적합한 특별한 세척 기술이 실란화 기술에 결합한다. 실란은 가스 상태이고 실란화되기 위한 표면에서 온도가 높다. 상기 방법은 안정적이고 균일하고 기능적인 단일층으로된 실란층을 가진 재생가능한 표면을 제공한다. 실란화된 표면은 본 발명의 폴리펩티드들 또는 점막 전달 강화제들이 유리에 결합하는 것을 방지한다.

상기 과정은 본 발명의 Y2 수용체-결합 펩티드 조성물을 유지하기 위한 실란화된 제약병을 준비한는데 유용하다. 유리 접시(tray)는 사용 전에 두 번 증류된 물(ddHO)로 세척한다. 실란 접시는 그 다음에 95%EtOH로 씻고 아세톤 접시는 아세톤으로 씻는다. 제약병은 아세톤에서 10분간 초음파처리한다. 아세톤 초음파 처리 후에, 약제병은 ddHO로 최소한 두 번 씻는다. 약제병들은 0.1M NaOH에서 10분간 초음파 처리한다. 약제병이 NaOH에서 초음파 처리되는 동안 실란 용액이 후드에서 만들어진다. (실란 용액: 95% 에탄올 800 mL; 빙산 초산 96 L ; 글리시드옥시프로필트리메트옥시 실란 25 mL). NaOH 초음파 처리 후에, 약제병은 ddHO 접시에서 최소한 두 번 씻는다. 상기 약제병은 살린 용액에서 3분에서 5분 동안 초음파처리된다. 상기 약제병은 100% EtOH 접시에서 씻는다. 약제병은 미리 정제한 N 가스로 건조하고 사용 전에 100℃ 오븐에 2시간 동안 저장한다.

생흡착 전달 운반체들과 방법들

본 발명의 어떤 면은 조합 포뮬레이션들 및/또는 동등한 투여 방법들은 비독성 생흡착 물질의 효과적인 양을 제시하는데, 생흡착 물질은 하나 또는 그 이상의 생물학적 활성제(들)의 점막 전달을 강화하기 위한 부속 조성물 또는 매개물이다. 본 발명에서 생흡착제는 하나 또는 그 이상의 조성물 또는 타겟 점막의 표면에 일반적으로 또는 특이적으로 흡착한다. 생흡착제는 점막 상피를 통과하거나 점막 상피를 거쳐서 펩티드들과 단백질들과 같은 큰 분자들이 잘 침투할 수 있도록 생물학적 활성제의 바람직한 농도 구배를 유지시킨다. 실제적으로, 본 발명의 조성물들과 방법들에서 생흡착제를 사용하여 점막 상피를 통과하거나 점막 상피를 거쳐서 펩티드들과 단백질들이 침투할 수 있는 능력을 2에서 4배, 종종 5에서 10배 증가시켰다. 이러한 점막 침투의 강화는 큰 분자들이 효과적으로 점막간 전달이 이루어지게 하는데, 예를 들면 기부에서 코 상피 또는 근접한 세포외 구획 또는 혈청 또는 중추신경계 조직 또는 체액으로의 점막 침투이다

이 강화된 전달은 생체활성 펩티드들, 단백질들 그리고 다른 고분자 치료 물질의 획기적으로 개선된 효과를 나타낸다. 이 결과는 조성물의 친수성 부분에 의존할 것이어서 물에 녹지 않는 조성물들과 비교하여서 친수성 물질들은 아주 높은 침투성을 나타낼 것이다. 이 효과들에 더해, 점막 표면에서 약물 지속성을 강화하기위한 생흡착제들의 사용은 연장된 약물 전달에 적합한 저장 메커니즘을 유도할 수 있고, 그에 의하여 조성물들은 상기 점막 조직을 침투할 뿐만 아니라 점막 표면에서 상기 조성물이 없어지기 시작하면 점막 표면으로 다시 확산된다.

경구 투여에 적합한 다양한 흡착체들이 본 발명 분야에서 공개되어　있는데, 미국특허 제3,972, 995; 4,259, 314; 4,680, 323; 4,740, 365; 4,573, 996; 4,292, 299; 4,715, 369; 4,876, 092; 4,855, 142; 4,250, 163; 4,226, 848; 4,948, 580호; 미국특허 재공고 제3,093호, 여기서 본 발명의 새로운 조성물들과 방법들의 범위내에서 사용하는 것을 발견한다. 본 발명의 방법들과 조성물들의 범위 내에서 코 점막과 같은 점막의 전달 플랫폼으로서 잠재적인 다양한 생흡착 폴리머들은 생물학적 활성제의 결합 후에 점막 표면과 반응할 수 있는 그들의 용량 및 Y2 수용체-결합 펩티드의 보유와 방출 능력에 의해 쉽게 평가될 수 있다. 게다가 잘 알려진 방법들은 선택된 폴리머들의 점막 투여 사이트 조직과의 생체호환성을 결정하기 위해 적용될 것이다. 타겟 점막이 점액에 덮였을 때(즉, 점막분해 또는 점액제거제가 없을 때), 생흡착제들은 점막 상피 하부에서 연결 링크로 작용할 수 있다. 그러므로 여기에서 사용하는 "생흡착제"라는 용어는 본 발명의 생 그러나 점액 겔 층에 붙어서 점막 조직에 흡착하는 것은 빠른 점액 제거가 일어나는 코 표면과 같이 점액층과 그 아래 조직 사이의 불완전 또는 일시적인 부착에 의해 제한될 수 있다. 이 점에 관해, 뮤신 글리코프로테인들은 계속 분비되고, 세포나 분비선에서 방출되자마자 즉시, 점탄성겔을 형성한다. 상기 흡착 겔층의 루미날(luminal) 표면은 그러나 기계적, 효소적 및/또는 섬모 운동에 의해 계속 마모된다. 그러한 활성이 더 지배적인 부분 또는 긴 흡착 시간이 바람직한 부분에서, 여기에서 공개된 바와 같이 본 발명의 동등한 투여 방법들과 조합 포뮬레이션 방법들은 점막분해 및/또는 섬모정지 방법들 또는 약제를 더욱 구체화할 것이다.

실제적으로, 본 발명에서 사용하는 점막흡착 폴리머들은 비특이적인 복합물 메커니즘들에 의해 젖은 점막 조직 표면에 붙는 천연적 또는 합성분자들이다. 이 점막흡착 폴리머들에 더해서 상기 발명은 또한 특이적, 수용체-매개된 것을 포함하는, 반응에 의해서 점액 보다는 세포 표면에 직접 흡착하는 생흡착제들을 포함하는 방법들과 조성물들을 보여준다. 특이적 기능을 하는 생흡착제의 한 예는 렉틴들(lectins)로 알려진 혼합물 그룹이다. 이들은 특이적 인식을 하여 당분자들, 글리코프로테인들, 글리코리피드들과 같은 것과 반응할 수 있고 비내 상피 세포막의 일부가 되어서 "렉틴 수용체들"로 인식될 수 있다.

본 발명의 어떤 면에서, 생물학적 활성제의 비내 전달 강화를 위한 생흡착제는 젖은 점막 표면에 흡착할 수 있는 수용성 또는 수분 팽창성과 같은 친수성 폴리머 매트릭스 또는 폴리머들의 혼합물로 이루어진다. 이 흡착제들은 연고, 하이드로겔(위를 참고) 얇은 막, 그리고 다른 외용 형태로 포뮬레이트될 수 있다. 종종, 이 흡착제들은 활성제의 국부적 전달이나 느린 반응을 유효하게 하는 혼합된 생물학적 활성제를 가진다. 어떤 것은 개인의 순환계 같은 곳에서 코 점막으로 활성제의 침투를 촉진하기 위해 부가적 성분이 포뮬레이트된다.

천연적인 그리고 합성한 다양한 폴리머들은 생리적 조건 하에서 점막 및/또는 점막 상피 표면들에 중요한 결합을 한다. 이러한 반응의 세기는 기계적인 벗기기나 자르기 테스트들에 의해 쉽게 측정할 수 있다. 습한 점막 표면에 바를 때 많은 건조한 물질들은 동시에, 최소한 가볍게 붙을 것이다. 초기의 이러한 접촉 후에 일부 친수성 물질들은 흡수, 팽창 또는 모세관 힘에 의해 물을 끌어들이기 시작한다. 그리고 만약 이 물이 하부 기질로부터 또는 폴리머-조직 사이로부터 흡수된다면 상기 흡착은 생물학적 활성제의 점막 흡수 강화라는 목적을 충분히 달성할 수 있을 것이다. 이러한 "수화에 의한 흡착"은 아주 강할 것이나 이 메커니즘을 사용하기 위해 개조된 포뮬레이션들은 수화된 점액 상태에서 복용된 것의 변형을 계속하는 팽창성을 잡아야만 한다. 이것은 본 발명의 많은 하이드로콜로이드, 특히 수화 전 상태에서 일반적으로 비흡착성인 일부 셀룰로오즈 유도체들에 계획된다. 그럼에도 불구하고, 생흡착 약물이 건조한 폴리머 가루, 마이크로스피어, 또는 막 타입의 전달 형태로 이용될 때 점막 투여를 위한 생흡착 약물 전달 시스템들은 본 발명에서 매우 효과적이다.

다른 폴리머들은 건조한 상태뿐만 아니라 과다한 물이 있는 완전히 가수된 상태에서도 점막 표면에 붙는다. 그래서 점막흡착제의 선택은 생리-화학적 조건뿐만 아니라 생리적 조건들의 적당한 검토가 필요하며, 그 조건 아래서 조직에 붙는 것이 형성되고 유지될 것이다. 특별히, 흡착이 의도되는 사이트에 항상 존재하는 습기 또는 물의 양, 그리고 지배적인 pH는 서로 다른 폴리머들의 점막흡착 세기에 큰 영향을 주는 것으로 알려져 있다.

많은 폴리머 생흡착 약물 시스템이 지난 20년 동안 연구되어 왔지만 항상 성공적이진 않았다. 다양한 매개체들이, 그러나, 최근에 치과, 안과, 정형외과, 그리고 외과용으로 중요하게 이용된다. 예를 들면, 아크릴에 기초한 하이드로겔은 생흡착 도구로 광범위하게 사용되고 있다. 아크릴에 기초한 하이드로겔은 부분적으로 팽창 상태에서 유동성과 비마모성을 가지기 때문에 생흡착에 아주 적당한데, 접촉시에 조직의 마모를 일으키는 손상을 감소시킨다. 더욱이, 팽창 상태에서 그들의 높은 침투성은 반응하지 않은 모노머, 교차결합되지 않은 폴리머 체인들, 그리고 폴리머화 이후에 매트릭스에서 씻겨나가는 개시자들을 허락하는데, 이는 본 발명에의 생흡착 물질들의 선택에서 중요한 특징이다. 아크릴에 기초한 도구들은 매우 높은 흡착 결합력을 보인다. 펩티드와 단백질 약물들의 조절된 점막 전달을 위해 본 발명의 방법들과 조성물들은 선택적으로 단백질 가수분해로부터 생물학적 약제를 보호하는 기능을 부분적으로 가지는 폴리머성 전달 운반체들을 포함하고, 동시에 코 점막을 거치거나 코 점막을 통하여 펩티드나 단백질의 강화된 침투를 위해 제공된다. 본 발명에서 생흡착 폴리머들은 경구 약물 전달 강화에 관해 상당한 잠재력이 있음이 증명되었다. 예를 들면, 9-데스글리신아마이드, 8-아르기닌 바소프레신(DGAVP)을 1%(W/V) 살린을 뿌린 점막흡착 폴리(아크릴산) 유도체 폴리카보필과 함께 쥐의 십이지장 내부에 주사하면 이것의 생체이용성은 이 폴리머가 없는 펩티드 수용액과 비교하였을 때 3-5배 증가한다.

폴리(아크릴산)-타입의 점막흡착 폴리머들은 일부 장내 단백질 가수분해의 잠재적 저해제들이다. 효소 저해 메커니즘은 이 종류의 폴리머들의 칼슘, 아연과 같은 2가 양이온에 대한 강한 친화도 때문인데, 이것은 트립신과 키모트립신과 같은 메탈로-프로테이나아제들(metallo-proteinases)의 필수적인 보조인자들인다. 이 조절인자들에서 폴리(아크릴산)에 의한 프로테아제의 제거는 효소 활성의 상실이 따르는 효소 단백질의 비가역적인 구조적 변활를 유도한다고 보고되었다. 동시에, 다른 점막흡착 폴리머들(예를 들면, 일부 셀룰로오즈 유도체들과 키토산)은 어떤 조건하에서 단백질 가수분해 효소들을 저해하지 않을 것이다. 본 발명에서 사용을 위해 연구된 다른 효소 저해제들(예를 들면, 아프로티닌, 베스타틴)과 반대로, 이것은 상대적으로 작은 분자들이고, 이 분자들의 크기의 관점에서 보면 저해제 폴리머들의 비내 흡수는 최소화되어 가능한 부작용들이 제거될 것이다. 그리하여, 점막흡착 폴리머들은, 특히 폴리(아크릴산)-타입과 같은, 특히 안전한 장치가 고려되었을 때 펩티드와 단백질 약물들의 조절된 전달을 강화하기 위해 흡수-촉진 흡착제와 효소 보호제 양쪽으로 작용할 것이다.

효소 분해의 방지에 더하여서, 본 발명에서 사용하는 생흡착제들과 다른 폴리머성 또는 비폴리머성 흡수-촉진제는 생물학적 활성제의 점막 침투성을 직접적으로 증가시킬 것이다. 큰 친수성 분자들의 코 상피 막을 지나는 수송을 촉진하기 위해, 점막흡착 폴리머들과 다른 생물학적 약제들은 점막 전달 시스템에서 점막에 오기 전에 머물렀던 시간이 연장된 것에 의해 야기된 것을 제외하고 침투 효과를 강화하기 위해 요구되어 왔다. 약물 플라스마 농축의 시간 과정은 전하는 바에 의하면, 생흡착 마이크로스피어들이 코 점막을 지나는 인슐린의 침투성을 격렬하지만 일시적으로 증가시킨다는 것을 가르쳐 준다. 전하는 바에 의하면 본 발명에서 사용하는 예를 들면, 키토산과 같은 다른 점막흡착 폴리머들은 수용액이나 겔 상태에서 이용되었을 때라도 점막 상피의 침투성을 강화시킨다. 상피 침투에 직접적으로 영향을 미치는 또 다른 점막흡착 폴리머는 히야루로산과 그에 따른 에스테르 유도체들이다. 본 발명의 대등한 투여 및/또는 조합 포뮬레이션 방법들과 조성물들 범위에서 특히 유용한 생흡착제는 키토산 및 이것의 유사체들과 유도체들이다. 키토산은 비독성이고, 생체호환적이고 생분해적 폴리머로 낮은 독성과 좋은 생체호환성 때문에 제약과 의약용으로 광범위하게 사용된다. 천연 폴리아미노사카리드는 알칼리를 가진 N-아세틸레이션에 의해 키틴으로부터 조제된다. 본 발명의 방법들과 조성물들에 사용하는 바와 같이, 키토산은 점막 사이트에서 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제의 보유를 증가시킨다. 이 투여 방법은 또한 환자 순응성과 수용성을 개선할 수 있다. 여기에 더 제공된 바와 같이 본 발명의 방법들과 조성물들은 선택적을 새로운 키토산 유도체 또는 화학적으로 변형된 키토산 형태를 포함한다. 본 발명에서 사용하는 새로운 유도체는 (3-[1-4]-2-구아니디노-2-디옥시-D-글루코오스 폴리머(poly-GuD)라고 명명한다. 키토산은 키틴의 N-디아세틸레이트된 산물이고, 자연적으로 발생하는 폴리머로서 경구 또는 비내 포뮬레이션들의 마이크로스피어들 조제에 광범위하게 사용되어 왔다. 키토산 폴리머는 또한 비경구 약물 전달의 가용성 매개체로서 제안되어 왔다. 본 발명의 한 측면에서, o-메틸이소우레아는 키토산 아민을 그것의 구아니디니움 일부로 전환하는 것에 사용되었다. 상기 구아니디움은 예를 들면, pH 8 이상에서 키토산과 o-메틸이소우레아의 평형-정상(equi-normal) 용액 사이의 반응에 의해서 조제된다.

상기 구아니디움 산물은 -[14]-구아니디노-2-디옥시-D-글루코오스 폴리머이다. 본 발명에서는 Poly-GuD라고 약칭한다. (키토산 아민의 모노머 F. W. = 161 ; Poly-GuD 구아니디움의 모노머 F. W. = 203).

본 발명에서 사용하는 Poly-GuD 조제 방법은 다음 프로토콜을 포함한다.

용액들:

0.5% 아세트산 용액(0.088N)의 준비 :

500 mL 부피의 플라스크에 빙초산 2.5 mL을 피펫으로 넣고, 정수된 물로 희석한다.

2N NaOH 용액의 준비:

정수된 물 약 150 mL를 가진 비이커에 약 20 g의 NaOH 펠릿을 넣는다. 실온에서 용해시키고 냉각시킨다. 이 용액을 250 mL 부피 플라스크에 넣고 정수된 물로 희석한다.

O-메틸이소우레아 설핏(0.4N 우레아 그룹 당량):

O-메틸이소우레아 설핏 약 493 mg을 10 mL 부피 플라스크에 옮겨 용해시키고 정수된 물로 희석한다.

이 용액의 pH는 4.2이다.

바륨 클로라이드 용액(0.2M)의 준비:

50 mL 부피 플라스크에 바륨 클로라이드 약 2.086 g을 넣고 정수된 물로 희석한다.

키토산 용액(0.06N 아민 당량)의 준비:

50 mL 비이커에 키토산 약 100 g을 넣고 0.5% 아세트산(0.088N) 10 mL를 첨가한다. 완전히 용해될 때까지 저어준다.

이 용액의 pH는 약 4.5이다.

O-메틸이소우레아 클로라이드 용액(0.2N 우레아 그룹 당량)의 준비:

O-메틸이소우레아 설핏 용액(0.4 N 우레아 그룹 당량) 5.0 mL을 피펫으로 비이커에 넣고 0.2 M 바륨 클로라이드 용액 5 mL를 비이커에 넣는다. 침전물이 형성된다. 이에 1분 동안 계속해서 용액을 섞는다. 0.45 m 필터로 용액을 거르고 침전물은 버린다. 윗물액에서 O-메틸이소우레아 클로라이드 용액의 농도는 0.2 우레아 그룹 당량이다.

이 용액의 pH는 4.2이다.

방법 :

2.5 섹션에서 설명한 것과 같이 준비된 키토산 용액(0.06 N 아민 당량) 10 mL에 2N NaOH 1.5 mL를 넣는다. 2N NaOH를 이용하여 상기 용액의 pH를 약 8.2에서 8.4로 조절한다. 이 용액을 10분 동안 저어준다. 상기에서 설명한 O-메틸이소우레아 클로라이드 용액(0.2 N 우레아 그룹 당량) 3.0 mL를 첨가한다. 용액을 밤새 저어준다.

0.5% 아세트산(0.088 N)을 이용하여 용액의 pH를 조절한다.

정수된 물을 이용해 용액의 부피가 25 mL이 되도록 용액을 희석한다.

상기 용액에서 Poly-GuD의 농도는 5 mg/mL, 0.025 N (구아니디움 그룹) 당량이다.

본 발명에서 생흡착제로 분류되는 부가적인 물질들은 특정 반응을 매개하는 일을 하는데, 실제적으로 생흡착제 조성물의 보완적 구조들과 점막 상피 표면의 구성 성분 사이에서 "수용체-리간드 반응"을 한다고 분류된다. 렉틴-당 반응들과 같은 예에서 볼 수 있듯이 많은 자연적인 예들이 특정 결합을 하는 생흡착의 모습을 제시한다.

많은 식물 렉틴들이 흡수 촉진 약제로 연구되어 왔다. 한 식물 렉틴은 Phaseolusvulgaris hemagglutinin (PHA)로, 쥐에게 먹였을 때 10% 이상의 경구 생체호환성을 보여준다. 토마토(Lycopersicon esculeutum) 렉틴 (TL)은 다양한 투여 방법에 대해 안전성을 나타낸다.

요약하면, 앞서 말한 생흡착제들는 본 발명의 조합 포뮬레이션들과 대등한 투여 방법들에 유용하다. 본 발명은 지속성을 연장하기 위한 생흡착제의 형태와 효과적인 양을 포함하며, 그렇지 않다면 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 약제의 점막 흡수를 강화시킨다. 어떤 실시예에서, 상기 생흡착제는 '접착 약제'로 행동하고, 반면에 다른 실시예에서는 생흡착제의 부속 전달 또는 조합 포뮬레이션은 코 점막에 대한 생물학적 활성제의 접촉을 강화시킨다. 상피 세포 "수용체"와 특정 수용체-리간드의 반응을 촉진시키거나 전달이 이루어지는 타겟 사이트(간, 혈청, 혹은 중추신경계 조직 또는 체액과 같은)에서 측정되는 약물 농도 구배를 상당히 증가시키기 위해 상피 침투성을 증가시키는 방법들에 의해 상기 접촉을 강화시키는 것이다. 또한 본 발명에서 사용하는 부가적 생흡착제는 조합 포뮬레이션 또는 대등하게 전달되어 점막에 투여된 생체치료제의 안정성을 강화하기 위해 효소(예를 들면, 프로테아제)를 저해하는 역할을 한다.

리포좀들과 마이셀 상태의 전달 운반체(Micellar Delivery Vehicles)

본 발명의 대등한 투여 방법들과 조합 포뮬레이션들은 선택적으로 매개체들, 프로세싱 약제들, 또는 전달 매개체들에 기초한 지방 또는 지방산을 포함하여, Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 활성제들의 점막 전달을 강화하기 위한 개선된 포뮬레이션을 제공한다. 예를 들면, 다양한 포뮬레이션들과 방법들은 점막 전달에 제공되는데, 점막 전달은 점막 전달시 생물학적 활성제의 화학적, 생리적 안정성을 강화시키고 이 약제들의 반감기을 증가시키기(예를 들면, 단백질 가수분해, 화학적 변형 및/또는 변성에 대한 민감성을 감소시켜서)위해 리포솜, 혼합된 마이셀 형태의 매개체에 의해 혼합되거나 캡슐화된 펩티드 또는 단백질과 같은 활성제들로 이루어진다.

본 발명의 어떤 면에서, 생물학적 약제의 분화된 전달 시스템들은 리포좀이라 알려진 작은 지방 운반체들로 이루어진다. 이것들은 실제적으로 천연저, 생분해적, 비독성, 그리고 면역성의 지방 분자들이고, 펩디드들과 단백질을 포함하는 약물 분자들과 이 분자들의 막을 지나서 또는 막 위에서 효율적으로 결합한다. 본 발명의 펩티드와 단백질 전달 시스템으로서 리포좀은, 리포좀 막이 캡슐화된 단백질을 단백질 가수분해 또는 다른 변성 인자들로부터 보호하는 동안 상기 운반체들 안에서 캡슐화된 단백질이 선호하는 수용액 환경을 유지할 수 있다는 사실에 의해 더욱 그 매력이 증가한다. 비록 펩티드들과 단백질들의 물리적, 화학적 성질 때문에 알려진 모든 리포좀 조제 방법이 펩티드들과 단백질들의 캡슐화에 들어맞지 않더라도, 많은 방법들은 실질적인 불활성화가 일어나지 않고 이들 고분자들의 캡슐화를 가능하게 한다.

본 발명에서 사용 가능한 여러 가지 리포좀 조제 방법은 미국특허 제 4,235, 871,4, 501,728, 그리고 4,837, 028호이다. 리포좀 전달을 이용하면 생물학적 활성제는 리포좀 또는 지방 운반체에 붙잡히거나 상기 운반체의 외부에 결합한다.

리포좀들과 같이, 불포화된 긴 체인 지방산들은 또한 점막 흡수 활성을 강화하여 이중층 구조와 유사한 구조를 가진 폐쇄된 운반체를 형성할 수 있다(그래서 유파솜<ufasomes>이라 불린다). 이들은 본 발명에서 비내 점막과 같은 점막의 전달에 적합한 생물학적 활성 펩티드들과 단백질들을 붙잡기 위해, 올레산을 이용하여 형성될 수 있다.

본 발명에서 사용하는 다른 전달 시스템들은 천연 폴리머 피브린 내의 캡슐화와 같은 폴리머와 리포좀 양쪽의 장점을 결합하기 위해 폴리머와 리포좀의 사용을 조합한다. 게다가, 이 전달 시스템에서 생체치료적 물질의 방출은 공유 교차결합의 이용과 피브린 폴리머에 항피브린분해제의 첨가에 의해 조절될 수 있다.

본 발명에서 사용하는 더 단순화된 전달 시스템들은 전달 운반체들 또는 매개체로서 양이온 지방들을 사용하는 것인데, 양이온 지방들은 단백질들과 폴리음이온 핵산과 같은 대전된 생물학적 활성제와 지방 매개체 사이에 정전기 반응을 제공하기 위해 효과적으로 사용된다. 이것은 효력이 있는 약물 다발이 점막 투여 및/또는 연속적인 전달 시스템내 구획에서 적당한 형태가 되도록 한다.

본 발명에서 사용하는 부가적 전달 운반체들은 지방산 마이셀들과 혼합된 계면활성제들 뿐만 아니라 긴 체인과 중간 체인의 지방산을 포함한다. 에스테르 형태에서 자연적으로 발생하는 대부분의 리피드들은 점막 표면을 가로지르는 그들 자신의 수송능력과 중요한 관계가 있다. 자유 지방산들과 극성 그룹이 붙어 있는 자유 지방산들의 모노글리세리드들은 혼합된 마이셀 형태에서 장 표면막의 침투 강화제로 작용한다는 것이 증명되었다. 자유 지방산들(12에서 20 탄소 원자들까지 다양한 길이의 체인을 가지는 카르복시산들)의 기능을 변화시키는 막의 발견과 그들의 극성 유도체 때문에 점막 흡수 강화제로 이 약제들을 사용하기 위한 광범위한 연구가 촉발하였다.

본 발명의 방법에서 사용하는 긴 체인 지방산, 특히 용해성 지방산들(불포화 지방산과 올레산, 리놀레산, 모노올레인과 같은 모노글리세리드들)은 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제들의 점막 전달을 강화하기 위한 유용한 매개체를 제공한다. 중간 체인 지방산들(C6에서 C12)과 모노글리세리드들은 또한 장내 약물 흡수를 강화하는 것을 보여주어서 본 발명의 점막 전달 포뮬레이션들과 방법들에 사용하기 위해 채택될 수 있다. 게다가 중간과 긴 지방산들의 소듐 염들은 본 발명의 생물학적 활성제의 점막 전달에 적합한 효과적인 전달 운반체이고 흡수 강화제이다. 그리하여, 지방산은 소듐염의 수용액 형태로 사용될 수 있거나 폴리옥시에틸레이티드 하이드로제네이티드 카스토르 오일, 소듐 타우로콜레이트 등과 같은 비독성 윗물액의 결합에 의해 사용될 수 있다. 다른 지방산 그리고 본 발명에서 유용한 혼합된 마이셀 형태의 조제물들에는 다음과 같은 것이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다. Na 카프릴레이트(C8), Na 카프레이트(C10), Na 라우레이트(C12) 또는 Na 올레이트(C18),글리코콜레이트와 타우로콜레이트와 같은 담즙염들이 선택적으로 조합된 것.

페길레이션(Pegylation)

본 발명 범위 내에서 제공되는 부가적인 방법들과 조성물들은 생물학적 활성 펩티드들과 단백직드의 화학적 변형을 포함하는데, 이러한 변성은 덱스트란, 폴리비닐, 글리코펩티드들, 폴리에틸렌글리콜 그리고 폴리 아미노산들과 같은 폴리머성 물질들의 공유결합에 의한 것이다. 이러한 결과로 접함된 펩티드들과 단백질들은 점막 투여시 그들의 생물학적 활성과 가용성을 보유한다. 다른 실시예에서, Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 활성 펩티드들과 단백질들은 폴리알킬렌옥사이드 폴리머들, 특히 폴리에틸렌글리콜(PEG)와 접합된다. 미국특허 제 4,179, 337호.

본 발명에서 사용하는 아민-반응 PEG 폴리머들은 분자량 2000,5000, 10000,12000의 SC-PEG and 20000 ; U-PEG-10000; NHS-PEG-3400- biotin ; T-PEG-5000; T-PEG-12000; 그리고 TPC-PEG-5000를 포함한다. 생물학적 활성 펩티드들과 단백질들의 페길레이션(PEGylation)은 카르복시 사이트들(예를 들면, 카르복시 말단에 더하여 아스파르트산 또는 글루탐산 그룹들)의 변형에 의해 이루어진다. 산성 조건 하에서 카보디이미드-활성화된 단백질 카르복시 그룹들의 선택적 변형에서 PEG-하이드라지드(PEG-hydrazide)의 유용성은 기술되어 있다. 대안적으로, 생물학적 활성제 펩티드들과 단백질들의 두 가지 기능의 PEG 변형이 사용될 수 있다. 어떤 과정에서, 리신, 아스파르트산, 글루탐산을 포함하는 대전된 아미노 잔기는 단백질 표면에서 용매 접근성을 가지는 명확한 경향성을 가진다.

활성제의 안정화를 위한 다른 변형들

페길레이션에 더하여, 본 발명에서 사용하는 펩티드들과 단백질들과 같은 생물학적 활성제들은, 다른 보호 혹은 안정화 조성물과 접합하여 활성제를 보호함으로써 반감기가 순환하는 것을 강화시키는데, 예를 들면 하나 또는 그 이상의 면역 글로불린 체인들과 같이 하나 또는 그 이상의 매개 단백질들과 연결된 활성 펩티드, 유사체 혹은 모사체를 가지고 혼합 단백질을 만드는 방법에 의한다.

포뮬레이션과 투여

본 발명의 점막 전달 포뮬레이션들은 Y2 수용체-결합 펩티드, 유사체들과 모사체들, 실질적으로 하나 또는 그 이상의 약학적으로 수용가능한 매개체들 그리고 선택적으로 다른 치료 성분으로 이루어진다. 매개체(들)은 포뮬레이션의 다른 성분들과 호환되어야 한다는 의미에서 "약학적으로 수용가능"해야만 하고 환자가 받아들일 수 없는 해로운 효과를 내서는 안 된다. 이러한 매개체들은 상기에 묘사되거나 혹은 그렇지 않으면 제약 분야에서 잘 알려진 것들이다. 바람직하게는, 상기 포뮬레이션은 생물학적 약제와 함께 투여되면 비호환성을 가지는 것으로 알려진 효소 또는 산화제와 같은 물질을 포함해서는 안 된다. 상기 포뮬레이션들은 제약 분야에서 잘 알려진 방법들에 의해서 조제될 수 있을 것이다.

본 발명의 조성물들과 방법들의 범위 내에서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제는 구강, 직장, 질, 비 내, 폐 내, 피부 통과, 혹은 눈, 귀, 피부 또는 다른 점막 표면에서의 국소적인 전달 방법을 포함하는 다양한 점막 투여 방법에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 선택적으로, Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 여기에 공개된 다른 생물학적 약제들은 근육 내, 피부 밑, 정맥 내, 동맥 내, 관절 내, 복막 내, 혹은 비경구적인 루트를 포함하는 비점막 루트들에 의해 대등하게 투여되거나 보조적으로 투여될 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 생물학적 활성제(들)는, 예를 들면 적당한 액체 또는 고체 매개체에서 생물학적 활성제를 포함하는 생체 외 상태의 조직 또는 기관 치료제 포뮬레이션 조성물로서, 생체 외 상태에서 직접적으로 포유류 환자에게서 유래한 세포, 조직 혹은 기관들에 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물들은 종종 코나 폐에 뿌리기위한 수용액으로 투여되고 이 분야에서 알려진 다양한 방법들에 의해 스프레이 형태로 조제된다. 코에 분무하기 위한 조제액을 만들기 위하여 선호하는 시스템은 미국특허 제4,511, 069호이다. 포뮬레이션들은 예를 들면, 미국특허 제4,511, 069호에 공개된 밀봉된 조제 시스템과 같은 멀티-복용 용기에 있을 수 있다. 이에 더하여, 압축 공기-, 제트-, 초음파-, 그리고 피에조전기 분무기와 같은 공기 전달 형태들이 포함될 수 있는데, 이것은 물, 에탄올, 혹은 그에 따른 혼합물과 같은 제약 용매 속에 현탁되거나 용해된 생물학적 약제를 전달한다.

본 발명의 코와 폐에 분무하는 용액은 비이온성 계면활성제(예를 들면, 폴리소르베이트-80), 그리고 하나 또는 그 이상의 완충액으로 선택적으로 포뮬레이트된 약물 또는 전달 약물로 이루어진다. 본 발명의 일부 실시예에서, 코 분무 용액은 또 추진제로 이루어진다. 코에 분무하는 용액의 pH는 선택적으로 약 pH 3.0과 6.0 사이, 바람직하게는 5.0 ±0.3이다. 본 조성물에 사용하는 적당한 완충액들은 상기에 기술한 것이고 혹은 아니면 이 분야에 알려진 것이다. 다른 조성물들은 화학적 안정성을 강화하거나 유지하기 위해 첨가될 수 있을 것이다. 이러한 조성물들에는 보존제들, 표면활성제들, 분산제들 또는 가스들이 포함된다. 적당한 보존제들은 페놀, 메틸 파라벤, 파라벤, m-크레솔, 티오메르살, 클로로부탄올, 벤질알코니멈 클로라이드, 기타 등등인데, 이에 한정되는 것은 아니다. 적당한 표면활성제는 올레산, 소르비탄 트리올리에트, 폴리소르베이트, 레시틴, 포스포티딜 콜린들, 그리고 다양한 긴 체인 디글리세리드들 그리고 인지질인데, 이에 한정되는 것은 아니다. 적당한 분산제들에는 에틸렌디아민에테르아세트산, 그와 같은 종류의 것들이 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 적당한 가스들은 질소, 헬륨, 불화염화탄소(CFCs), 불화탄화수소 (HFCs), 이산화탄소, 공기, 기타 등등이 있는데, 이에 한정되지는 않는다.

다른 실시예에서, 점막 포뮬레이션들은 건조한 가루 포뮬레이션들로 투여되는데, 이 포뮬레이션들은 적당한 크기 또는 비내 전달에 적당한 크기 범위 내에서 건조된 형태, 보통 동결건조 형태로 생물학적 활성제를 구성한다. 코나 폐를 통과하는 범위 내에서 증착에 적합한 최소한의 입자 크기는 보통 약 0.5 μ 공기역학적 질량중간동등값(mass median equivalent aerodynamic diameter; MMEAD), 일반적으로 약 1 μMMEAD, 그리고 더 실제적으로는 약 2 μMMEAD이다. 코를 통과하는 범위 내에서 증착에 적합한 최대 크기는 약 10 μMMEAD, 일반적으로 약 8 μMMEAD, 더 실제적으로는 약 4 μMMEAD이다. 이 크기 범위 내에서 비내 호흡 가능한 가루는 제트 분쇄(jet milling), 분무 건조, 용매 침천, 초임계 체액 농축, 기타 등등과 같은 편리한 기술에 의해 생산될 수 있다. 적당한 MMEAD를 가진 건조 가루들은 편리한 건조 가루 흡입제(DPI)를 통해 환자에게 투여될 수 있는데, 이는 에어러졸화된 양의 가루들을 분산시키기 위해 폐 또는 코 흡입에 기초한 환자의 호흡에 의한다. 또 이와 달리, 건조 가루는 공기의 도움을 받는 기구를 통하여 투여될 수 있는데, 에어러졸화된 양의 가루를 분산시키기 위해 피스톤 펌프와 같은 외부 파워소스를 이용한다.

건조 가루를 위한 도구들은 실제적으로 에어러졸화된 양 1회분("퍼프")을 생산하기위해 약 1 mg에서 20 mg의 가루를 필요로 한다. 만약 필요하거나 원하는 생물학적 활성제의 양이 이보다 적다면 가루로 된 활성제는 실제적으로 제약용 건조 벌킹 가루와 혼합하여 총 파우더 질량을 맞출 수 있다. 벌킹 가루로 선호되는 것은 당, 락토오스, 덱스트로오스, 만니톨, 글리신, 트레할로스, 인간 알부민 혈청(HSA), 그리고 녹말이다. 다른 적당한 건조 벌킹 가루는 셀로바이오스, 덱스트란, 말토트리오스, 펙틴, 소듐 시트레이트, 기타 등등이다.

본 발명 범위 내의 점막 전달을 위한 조성물들을 포뮬레이션하기 위해서, 생물학적 활성제의 분산을 위한 매개체 또는 염뿐만 아니라 약학적으로 수용가능한 다양한 첨가제들이 상기 활성제와 결합될 수 있다. 바람직한 첨가제들은 아르기닌, 소듐 하이드록사이드, 시트르산 등과 같은 pH 조절제인데, 상기 기술한 예에 한정되지는 않는다. 이에 더하여, 국소 마취제(예: 벤질 알코올), 등장화제 (예: 염화나트륨, 만니톨, 소르비톨), 흡수 저해제들(예: 트윈 80), 용해성 강화제 (예: 사이클로덱스트린들과 그에 따른 유도체들), 안정제(예: 알부민 혈청), 그리고 환원제제(예:글루타티온)이 포함될 수 있다. 점막 전달 조성물이 액체일 때, 상기 포뮬레이션의 긴장성(tonicity)은 포뮬레이션과의 일관성을 유지하기 위해 0.9% (W/V) 생리적 살린 용액의 긴장성을 참고하여 측정될 수 있는데, 이 긴장성은 투여되는 코 점막 사이트에서 유도될 수 있을 실질적이고 비가역적인 부작용이 없을 때까지 그 긴장치가 실제적으로 조절될 수 있다. 일반적으로, 용액의 긴장성은 그 긴장치가 약 1/3에서 3, 더 실제적으로는 1/2에서 2, 그리고 가장 많은 경우는 3/4에서 1.7이다.

상기 생물학적 활성제는 염기 또는 운반체에서 분산될 수 있는데, 염기 또는 매개체는 상기 약제와 다른 원하는 첨가제들을 분산하는 능력이 있는 친수성 조성물들로 이루어질 것이다. 상기 염기는 여러 가지 적당한 매개체들로부터 선택될 것이다. 매개체들에는 폴리카르복시산의 코폴리머 또는 그에 따른 염들, 다른 모노머들(예: 메틸(메트)아크릴레이트, 아크릴산 등)을 가진 카르복시산 무수무들(예: 말레이산 무수물), 폴리비닐 아세테이트와 같은 친수성 비닐 폴리머들, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시셀룰로오즈와 같은 셀룰로오즈 유도체들, 하이드록시프로필셀룰로오즈, 기타 등등etc., 그리고 키토산과 같은 천연 폴리머들, 콜라겐, 소듐 알기네이트, 젤라틴, 히야루로산, 그리고 그에 따른 비독성 금속염들이 있는데 이에 한정되는 것은 아니다. 종종, 생분해적 폴리머들은 베이스 또는 매개체로서 선택될 수 있는데, 예를 들면, 폴리초산, 폴리(락트산-글리콜산) 코폴리머 ,폴리하이드록시부티르산, 폴리(하이드록시부티르산-글리콜산) 코폴리머 그리고 그에 따른 혼합물들이다. 대안적으로 또는 부가적으로, 폴리글리세린 지방산 에스테르들, 수크로오스 지방산 에스테르들과 같은 합성 지방산들은 매개체로 사용될 수 있다. 친수성 폴리머들과 다른 매개체들은 단독으로 또는 결합해서 사용될 수 있다. 그리고 구조적 통합성을 강화시켜서 부분적 결정화, 이온 결합, 교차결합, 그와 비슷한 것에 의해 상기 매개체가 분배될 수 있다. 상기 매개체는 코 점막에 직접 닿기 위해 체액, 점탄성 용액들, 겔들, 반죽들, 가루들, 마이크로스피어들, 그리고 막과 같은 다양한 형태로 제공될 수 있다. 본 발명에서 선택된 매개체들의 사용으로 생물학적 활성제의 흡수가 촉진될 것이다.

상기 생물학적 활성제는 다양한 방법에 따라 상기 염기 또는 매개체와 결합될 수 있다. 그리고 이 활성제의 방출은 확산, 상기 매개체의 분산 또는 수분 채널을 가진 포뮬레이션과 결합하는 것에 의해 이루어질 것이다. 어떤 경우에, 상기 활성제는 이소부틸 2-시아노아크릴레이트와 같은 적당한 폴리머로 조제한 마이크로캡슐들(마이크로스피어들) 또는 나노캡슐들(나노스피어들)에서 분산되고 코 점막에 닿은 생체호환성 분산 매개체에서 분산되는데, 이는 연장된 시간 이상의 지속적인 전달과 생물학적 활성을 나타낸다.

본 발명의 제약용 약제의 점막 전달을 더욱 강화하기 위해, 활성제로 이루어진 포뮬레이션들은 친수성 저분자량을 지닌 구성물인 염기나 첨가물과 같은 것을 포함할 수 있을 것이다. 이러한 친수성 저분자 물질들의 통과 매개물을 제공하는데, 이것은 생리적 활성 펩티드 또는 단백질과 같은 수용성 활성제로서 염기를 통하여 활성제가 흡수되는 신체 표면으로 확산한다. 친수성 저분자 물질은 선택적으로 점액 또는 투여시의 공기로부터 습기를 흡수하여 수용성 활성 펩티드를 용해시킨다. 친수성 저분자 물질의 분자량은 10000 이하이고 바람직하게는 3000 이하이다. 대표적인 친수성 저분자 물질은 올리고-, 디- 그리고 수크로오스, 만니톨, 소르비톨, 락토오스, L-아라비노스, D-에리트로스, D-리보오스, D-크실로스, D-만노오스, 트리할로오스, D-갈락토오스, 락툴로오스, 셀로바이오스, 젠티바이오스, 글리세린과 같은 단당류들 그리고 폴리에틸렌 글리콜이 있다. 본 발명에서 매개체로 유용한 친수성 저분자 물질들의 다른 예들로는 N-메틸피롤리돈, 그리고 알코올들 (예를 들면, 올리고비닐 알코올, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 등)이 있다. 이 친수성 저분자 물질들은 단독으로 또는 서로 결합하여 또는 비내 포뮬레이션의 다른 활성 혹은 불활성 조성물과 결합하여 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물들은 대안적으로 적당한 생리적 조건들에 필요한 물질로서 약학적으로 수용가능한 매개체들을 포함할 것인데, pH 조절제와 완충제, 긴장조절제, 습윤제, 기타 등등이 있다. 예를 들면, 소듐 아세테이트, 젖산 나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 소르비탄 모노라울레이트, 트리에탄올아민 올레이트 등이 있다. 고체 조성물들에서 편리하게 약학적으로 수용가능한 매개체들이 사용될 수 있다. 예를 들면, 제약용 등급 만니톨, 락토오스, 녹말, 마그네슘 스테아린산염, 사카린 나트륨, 활석, 셀룰로오즈, 글루코오스, 수크로오스, 탄산마그네슘, 기타 등등이 있다.

투여하는 생물학적 활성제의 치료 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 또는 고농도의 활성 성분에 적합한 잘 갖추어진 구조로 포뮬레이션될 수 있다. 상기 매개체는 물, 에탄올, 폴리올(예: 글리세롤 프로필렌, 글리콜, 그리고 액체 폴리에틸렌 글리콜, 기타 등등), 그리고 그에 따른 혼합물들과 같은 것을 포함하는 용매 또는 분산 매개물이 될 수 있다. 용액의 적당한 유동성은 다음과 같은 예들에 의해 유지될 수 있는데, 레시틴과 같은 것으로 코팅하여 사용하거나 분산가능한 포뮬레이션들의 경우 원하는 입자 크기의 유지에 의하거나, 표면활성제의 사용에 의하는 것과 같은 것이 그것이다. 많은 경우에, 조성물에 당들, 폴리암코올들(만니톨, 소르비톨, 혹은 염화나트륨)과 같은 등장제를 포함하는 것이 바람직하다. 생물학적 약제의 흡수는 조성물에 모노스테아린산 염들, 젤라틴과 같은 물질의 흡수를 지체시켜서 연장시킬 수 있다.

본 발명의 어떤 실시예에서, 생물학적 활성제는 지속적으로 방출되는 포뮬레이션(time-release formulation)으로 투여된다. 예를 들면, 조성물이 느린 방출을 하는 폴리머를 포함하는 것이다. 상기 활성제는 폴리머, 마이크로캡슐화된 전달 시스템 혹은 생흡착 겔을 가지는 매개체들로 조제될 수 있다. 본 발명의 여러 가지 조성물에서 스테아린산 알루미늄 하이드로겔과 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 약제를 조성물에 포함하여 생물학적 활성제의 전달을 연장할 수 있다. 생물학적 활성제가 일정 시간을 두고 서서히 효과를 나타내기를 원할때는, 본 발명에 사용하기 적합한 반응을 서서히 나타내는 결합제를를 포함하는데, 이 결합제는 활성제를 불활성화시키고 생물학적 활성제와 결합할 수 있는 생체호환적으로 반응을 서서히 나타내는 물질들이다. 위와 같은 물질들을 이 분야에 많이 알려져 있다. 반응을 서서히 나타내는 결합제로 유용한 것은 이들이 비내에 전달된 다음에(예를 들면, 코 점막 표면, 또는 점막간 전달 후에 신체적인 유동성 상태에 있을 때) 생리적 조건 하에서 천천히 대사되는 물질이다. 적당한 결합제는 지효성 포뮬레이션 기술 분야에서 전에 사용된 생체호환적 폴리머들과 코폴리머들이 있는데, 이에 한정되지는 않는다. 이러한 생체호환적 조성물들은 비독성이고 주위 조직에 불활성을 나타내며, 코 염증, 면역 반응, 염증, 기타의 심각한 부작용을 일으키지 않는다. 이것들은 역시 생체호환적이며 체내에서 쉽게 배출되는 대사물질에 대사된다.

본 발명에서 사용하는 폴리머 물질들의 예로는 가수분해 가능한 에스테르 연결을 가진 코폴리머와 호모폴리머 에스테르로부터 유도된 폴리머 매트릭스를 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 많은 상기 폴리머 물질들이 생분해적이고 독성이 없거나 적은 분해 산물을 만든다고 이 분야에 알려져 있다. 폴리머들의 예로는 폴리글리콜산들(PGA) 그리고 폴리 락트산들 (PLA), 폴리(DL-락트산-코-글리콜산) (DL PLGA), 폴리(D-락트산-코글리콜산) (D PLGA) 그리고 폴리(L-락트산-코-글리콜산)(L PGA)이 있다. 다른 유용한 생분해성 또는 생마모성 폴리머들은 다음과 같은 것이 있는데 이에 한정되지는 않는다. 폴리(엡실론-카프로락톤), 폴리(엡실론-아프로락톤-CO- 락트산), 폴리(E-아프로락톤-CO-글리콜산), 폴리(베타 -하이드록시 부티르산), 폴리(알킬-2-시아노아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸 메타아크릴레이트)하이드로겔들, 폴리아미드들, 폴리(아미노산들)(즉, L-루신, 글루탐산, L-아스파라트산 기타 등등), 폴리(에스테르 우레아), 폴리(2-하이드록시에틸 DL-아스파르트아미드), 폴리아세탈 폴리머들, 폴리오르토에스테르들, 폴리카보네이트, 폴리말레아미드들, 다당류들 그리고 그에 따른 코폴리머들이 그것이다. 이러한 포뮬레이션들을 조제하는 많은 방법들이 이 분야에서 일반적으로 알려졌다. 다른 유용한 포뮬레이션들에는 마이크로캡슐들과 같은 서서히 효과를 나타내는 조성물들, 미국특허 제4,652, 441호와 4,917, 893호, 마이크로캡슐들과 다른 포뮬레이션을 만드는 데 유용한 락트산-글리콜산코폴리머, 미국특허 제4,677, 191호와 4,728,721호, 그리고 수용성 펩티드들에 맞는 지효성 조성물들(sustained-release compositions), 미국특허 제4,675, 189호가 있다.

무균 용액은 위에서 열거한 하나 또는 그 이상의 성분들의 결합으로 이루어진 적당한 양의 용매에서 필요한 양의 활성물이 결합하여 조제되는데, 이는 여과된 무균화 과정 이후에 일어난다. 일반적으로, 분산은 기본적인 분산 매개물과 위에서 열거한 성분 중 요구되는 일부 성분들을 포함한 무균 매개체들이 활성제와 결합하여 준비된다. 미생물들(microorganisms)들의 활성은 파라벤(parabens), 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살, 기타 등등과 같은 다양한 항박테리아제 또는 항곰팡이제에 의해 막을 수 있다.

본 발명에 따른 점막 투여는 투여량과 부작용을 조절하고 감시하는 충분한 안전책이 있다면 환자 스스로가 효과적으로 투여할 수 있다. 점막 투여는 또한 다른 투여 형태의 약점을 극복할 수 있는데, 주입과 같은 방법은 고통스럽고 환자가 감염에 노출될 수 있어 약물 생체이용성의 문제를 나타낼 수도 있다. 코와 폐 전달을 위해서, 분무하는 치료액의 공기중 분산을 조절하는 시스템들은 잘 알려져 있다. 한 실시예에서, 계량된 일정량의 활성제가 특별히 설계된 기계적 펌프에 의해 전달된다(미국특허 제4,511,069호).

투여(투여)

예방과 치료 목적으로, 여기에 공개된 생물학적 활성제는 전달될 1회 분량이 환자에게 투여된다. 확장된 시간을 초과하여 계속적으로 전달하는 방법(예: 계속적인 피부사이, 점막, 또는 정맥 내 전달)에 의하거나 반복적인 투여 프로토콜(예: 1시간 마다, 매일, 또는 주간, 반복되는 투여 프로토콜)에 의하는 것이다. 본 발명에서, 치료에 효과적인 생물학적 활성제의 복용량은연장된 예방 또는 처치 계획 내의 반복되는 투여를 포함하며, 이는 위에서 열거한 해당 질병 또는 조건과 관련되어 하나 또는 그 이상의 증상이나 감지되는 조건들을 완화시키는 중요한 결과를 낳는다. 본 발명에서 효과적인 복용량의 결정은 실제적으로 인간을 치료하는 것에 앞서 동물 모델에 기초하였고, 피험체의 해당 질병의 증상 또는 조건의 발생 혹은 격렬함을 상당히 감소시키는 효과적인 양에 의해 좌우되었다. 이와 관련된 적당한 모델들은, 예를 들면, 뮤린, 쥐(rat), 돼지, 고양이, 인간이 아닌 영장물, 그리고 이 분야에서 알려진 다른 수용가능한 동물 피험체들이다. 이와 다르게, 효과적인 복용량은 생체외 모델(예: 면역학적 그리고 조직병리학적 분석)을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 모델들을 사용하여도 단지 일반적인 계산과 조절만이 치료에 효과적인 생물학적 활성제의 양(예: 원하는 효과를 내기위해 비내에서 효과적인 양, 피부간 전달에 효과적인 양, 정맥내에서 효과적인 양, 점액내에서 효과적인 양)의 투여를 위한 양과 농도 결정에 실제적으로 필요하게 된다.

생물학적 활성제의 실제적인 복용량은 환자의 질병 증상이나 특별한 상태(예: 환자의 나이, 크기, 건강 상태, 증상의 정도, 감염성 인자 등), 투여 시간이나 경로, 현재 투여되고 있는 다른 약물이나 치료제뿐만 아니라 환자에게서 원하는 활성이나 생물학적 반응을 나타내기 위한 생물학적 활성제의 특정 약리학에 따라 물론 다양하다. 복용 처치법은 적당한 예방적 또는 치료적 반응을 나타내기 위해 조절될 수 있을 것이다. 치료에 효과적인 생물학적 활성제의 양은 또한 치료에 유익한 양이 활성제의 어떤 독성 또는 부작용보다 더 중요하다. 본 발명의 방법들과 포뮬레이션들의 범위 내에서 치료에 효과적인 Y2 길항제의 제한 없는 범위는 0.7 ㎍/kg에서 25 ㎍/kg이다. 체중 손실을 촉진하기 위해, Y2 수용체-결합 펩티드의 비내 복용은 포만감을 촉진할 만큼 높고 구역질같은 원하지 않는 부작용을 유발하지 않을 만큼의 양이 투여된다. PYY_3-36의 선호되는 투여량은 환자 체중의 약 1 ㎍-10 ㎍/kg이고, 가장 바람직하게는 환자 체중의 약 1.5 ㎍/kg에서 3 ㎍/kg이다. 환자가 받을 평균 복용량은 50 ㎍에서 1600 ㎍, 더 바람직하게는 75 ㎍에서 800 ㎍, 가장 바람직하게는 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍에서 약 400 ㎍이다. 이와 달리 제한 없는 치료에 효과적인 생물학적 활성제의 양의 범위는 약 50.01 pmol/체중(kg)에서 약 10 pmol/체중( kg)사이, 약 0.1 pmol/체중(kg)에서 약 5 pmo/체중(kg)사이, 약 0.5 pmol/체중(kg)에서 약 1.0 pmol/체중(kg) 사이이다. 이 범위 내의 복용량에서 한번 또는 여러 번의 투여가 가능한데, 예를 들어 하루 중 또는 주간 단위로 여러 번 투여하는 것이다. 투여할 때마다, 평균 인간 환자에게 생물학적 활성제(예를 들면, 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 그리고 다른 생물학적 약제)는 최소한 1마이크로그램을 투여하는 것이 바람직하며, 더 실제적으로 약 10 ㎍에서 5.0 ㎍ 사이, 그리고 어떤 실시예에서는 약 100 ㎍ 그리고 1,0 또는 2.0 mg이다. 어떤 경구용 투여에서는, 0.5 mg/체중(kg)의 높은 복용량이 적당한 혈장 수준을 얻는데 필요로 될 것이다. 환자의 개인적 요구와 침투화할 수 있는 펩티드들과 다른 생물학적 활성제의 투여를 조절 혹은 감독하는 전문적인 판단에 따라 시간을 두고 특정 복용량이 평가되고 조절되어야 한다고 보고되었다. PYY의 비내 복용량은 50 ㎍에서 1600 ㎍의 범위에 있고 바람직하게는 75 ㎍에서 800 ㎍, 더 바람직하게는 100 ㎍에서 400 μ이고 가장 바람직하게는 100 ㎍에서 200 ㎍이며 150 ㎍에서 가장 높은 효과를 낼 것으로 생각된다. 본 발명의 포뮬레이션들의 비내에의 반복적인 복용은 0.1시간에서 24시간 사이, 바람직하게는 0.1에서 2.0시간 사이의 복용인데, Y2 수용체-결합 펩티드가 과다한 노출과 부작용의 위험을 최소화하면서 치료 효과를 최대화 할 수 있는 약효가 지속적으로 나타나도록 하는 수준을 표준적으로 유지할 것이다. 이것은 하루에 여러 번 복용할 수 있고, 바람직하게는 식사 전 한시간 반 또는 배고픔을 느낄 때 복용하는데 포만감을 촉진시킨다.

PYY와 같은 Y2 길항제들의 복용량은, 만약 처방전 없는 투여량을 스스로 투여한다면, 임상의 또는 환자를 관찰한 결과에 의해 매우 다양하게 나타날 수 있으며 타겟 사이트에서 원하는 농도를 유지한다.

또 다른 실시예에서, 본 발명은 Y2 수용체-결합 펩티드의 비내 전달을 위한 조성물들과 방법들을 제공하는데, 여기서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 조성물(들)은 비내에서 효과적인 양이 반복적으로 투여되는데, 이는 투여가 연장된 기간 동안 Y2 수용체-결합 펩티드에 기인한 맥박의 박동을 치료에 효과적이도록 완화하고 낮게 유지하기 위해 일일 또는 주간 단위 동안 환자에게 Y2 수용체-결합 펩티드가 여러번 투여된다. 상기 조성물들과 방법은 Y2 수용체-결합 펩티드 조성물(들)을 제공하는데, 이것은 매일 2번에서 6번 간격으로 코를 통해 환자 스스로 투여하여서, 8시간에서 24시간의 투여가 연장된 기간동안 Y2 수용체-결합 펩티드에 기인한 맥박의 박동을 치료에 효과적이도록 완화하고 낮게 유지한다.

키트들(Kits)

본 발명은 또한 상기 기술한 약제 조성물, 활성 성분들, 및/또는 포유류 환자들의 질병과 다른 상태를 예방하고 치료하는 데 사용하는 투여 수단들을 포함하는 키트들, 용기들 그리고 다용도 용기(multicontainer)를 포함한다. 요약하면, 이 키트나 용기들은 하나 또는 그 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드 단백질들, 유사체들과 모사체들, 및/또는 점막 전달을 위해 조제되어 포뮬레이션되어서 여기에 공개된 다른 생물학적 활성제들의 조합물을 포함하는 용기나 포뮬레이션을 포함한다.

본 발명의 비내 포뮬레이션들은 어떤 스프레이병이나 주사기를 이용하여 투여될 수 있다. 비 스프레이병의 예는 "비 스프레이 펌프 w/ Safety Clip, Pfeiffer SAP # 60548"로, 이것은 분사당 0.1 mL 분량을 전달하고 36.05 mm의 계심관 길이를 가진다. 이것은 미국 뉴저지주 프린스틴의 Pfeiffer에서 구입할 수 있다. PYY와 같은 Y2 수용체-결합 펩티드의 비내 투여량은 0.1 ㎍/kg에서 약 1500 ㎍/kg이다. 비내 스프레이와 같은 것으로 투여될 때, 분무에 적당한 입자 크기는 10-100 ㎛(마이크론들)가 적절하고, 바람직하게는 20-100 ㎛이다.

체중 감소를 촉진하기 위해 Y2 수용체-결합 펩티드 PYY의 1회 투여량은 포만감을 촉진할만큼 높고 구역질과 같은 부작용을 유도하지 않을 만큼 낮게 투여한다. PYY(3-36)과 같은 Y2 수용체-결합 펩티드의 바람직한 투여량은 환자 체중당 약 3 ㎍-10 ㎍/kg이고, 가장 바람직하게는 약 환자 체중당 약 6 ㎍/kg이다. 환자 표준 투여량은 50 ㎍에서 800 ㎍, 더 바람직하게는 100 ㎍에서 400 ㎍, 가장 바람직하게는 150 ㎍에서 약 200 ㎍이다. 상기 PYY(3-36)과 같은 Y2 수용체-결합 펩티드는 구역질을 방지하기 위해 단지 식사 전 12시간에서 24시간을 제외하고 식사 전 최소한 10분에서 1시간 사이에 적절히 투여된다. 상기 환자는 원하는 만큼의 체중 감소가 나타낼 때까지 모든 식사 이전에 최소한 하루에 한 번 복용하는 것이 좋다. 환자는 그 다음에 최소한 일주일 바람직하게는 하루에 한 번 감소된 체중을 유지할 수 있는 일정량을 받는다.

하기의 실시예들의 데이터가 보여주는 바와 같이, 본 발명의 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션을 사용하여 인간의 비내에 투여되었을 때 PYY(3-36)은 식욕을 감소시킨다. 상기 실시예들은 또한 최초로 PYY 펩티드의 식후 생리적 레벨은, PYY(3-36)이 Y2 수용체-결합 펩티드인 본 발명의 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션을 사용하여 비내에 투여되어 비내 경로를 통하여 도달될 수 있음을 보여 준다.

하기의 실시예들은 실례로서 제공되며, 제한되지 않는다.

실시예 1

즉각적인 특징의 가르침이 준비되고 평가되는 것에 따른 펩티드 YY의 비 점막 전달을 강화하기 위한 전형적인 포뮬레이션은 다음과 같다.

[표 1]

실시예 2: 비 점막 전달-침투 반응속도와 세포독성

1. 유기적 타입 모델

하기의 방법들은 비 점막 전달 파라미터, 효능을 결정하는 것과 같은 본 발명의 방법과 포뮬레이션 내에서 펩티드 YY의 반응속도와 부작용 그리고 연동적 포뮬레이션 또는 펩티드 YY와의 동등한 투여에 대한 여기에서 공개된 다양한 비내 전달-강화제의 특징을 평가하는데 유용하게 사용된다.

침투 반응속도와 세포독성은 또한 효능을 결정하고 연동적 포뮬레이션 또는 펩티드 YY와의 동등한 투여에 대한 여기에서 공개된 다양한 점막 전달-강화제의 특징들에 대해 유용하다. 하나의 전형적인 프로토콜에서 침투 반응속도와 받아들일 수 없는 세포독성의 결여는 생물학적 활성 치료제와 결합하여 앞에서 공개된 비내 전달-강화제에 의해 증명되고, 펩티드 YY에 의해 예증된다.

에피에어웨이 시스템(Epiairway system)은 표면 가중층상피 호흡기관의 모델과 같이 MatTek Corp (Ashland, MA)에 의해 개발되었다. 상피세포는 에어-리퀴드 인터페이스에서 셀 배양 삽입물에 근거한 다공성 세포에서 자랐으며, 결과적으로 고분열되는 형태로 상기 셀들의 차이점이 된다. 정점의 공간은 미세융모 미세구조와 상피세포가 생산하는 점액(면역블로팅에 의해 확인되는 뮤신의 존재)과 함께 섬모가 있게 된다. 상기 삽입물은 0.875cm의 직경을 가지고, 0.6cm²의 공간 영역을 제공한다. 상기 셀은 선적되기 전에 약 3주간 팩토리에서 삽입물 위에 플레이트된다. 하나의 키트(kit)은 24 유니트로 구성된다.

A. 도착해서, 유니트는 6-웰 마이크로플래이트 내에 무균토대 상에 위치된다. 각각의 웰은 독점권을 가진 배지의 5mL를 받는다. 이 DMEM 에 근거한 액은 혈청은 없으나 표피 성장인자와 다른 인자들이 추가된다. 상기 액은 언제나 어떠한 시토카인 또는 성장인자의 내인성 레벨에 대해 테스트되며 비내 전달에 대해 고려되나 인슐린을 제외하고 지금까지 연구된 어떠한 시토카인들과 성장인자들에 자유로웠다. 5 mL 부피는 단지 그들의 위치상에서 유니트들의 바닥에 접촉하는 것을 제공하는 데 충분하게 되지만, 상피세포의 정점의 공간이 공기와 직접 접촉하는 여지를 남기도록 허락된다. 무균 핀셋들은 이 스텝과 유니트들의 바닥과 상기 액 사이에 공기가 없게 트랩되는 것이 확신되는 리퀴드를 포함하는 웰로 유니트들을 옮기는 것을 포함하는 모든 부수적 스텝들에 사용된다.

B. 플레이트들안에 있는 유니트들은 공기 중의 CO₂가 5%인 대기를 가지는 인큐베이터 내에서 37℃로 24시간 동안 유지된다. 이 시간이 끝나면 상기 액은 새로운 액으로 교환되고 유니트들은 인큐베이터로 돌아가 24시간 더 있게 된다.

2. 실험적 프로토콜-침투 반응속도

A. 24개 에피에어웨이 유니트들 중의 한 키트은 일상적으로 다섯 개의 다른 포뮬레이션들을 평가하기 위해 소비될 수 있으며, 각각은 사중의 웰에 적용된다. 각각의 웰은 침투 반응속도 (4 시간 포인트들), 상피통과 저항, MTT 환원에 의해 측정되는 미토콘드리아 환원효소 활성, 그리고 LDH 방출에 의해 측정되는 세포 용해의 결정을 위해 소비된다. 추가적인 웰들의 셋은 조절군으로 사용되고, 그리고 그것은 침투 반응속도의 결정 동안에 가(sham)로 취급되나 다른 방법으로 테스트 샘플을 포함하는 상피통과 저항과 생존능력의 결정을 위한 유니트들로 동일하게 취급된다. 조절군 상의 결정은 역시 일상적으로 사중의 유니트들로 구성되나 때때로 조절을 위해 삼중의 유니트들을 소비하였고 취급되지 않은 유니트들 상의 상피통과 저항과 생존능력의 측정을 위한 키트 내에 잔존하는 네 개의 유니트들이 바쳐지고 또는 얼려지고 녹여진 100% 세포 용해를 위한 참조로 사용하는 전체 LDH 레벨들의 결정을 위한 유니트들을 가진다.

B. 모든 실험들에서, 연구되는 비 점막 전달 포뮬레이션은 100 ㎕의 부피 내의 각각의 유니트의 정점의 공간으로 적용되고, 그것은 정점의 공간 전체를 커버하는 데 충분하다. 정점의 공간으로 적용되는 농도에서 테스트 포뮬레이션의 적절한 부피는(일반적으로 100 ㎕ 이상을 필요로 하지 않는) ELISA 또는 다른 계획된 분석에 의한 활성 물질의 농도의 다음의 결정을 위해 무시된다.

C. 유니트들은 실험을 위해 놓여진 것을 제외하고 6 웰 플레이트들 내에 배치된다: 각각의 웰은 상기 유니트의 다공성 세포막 바닥과 접촉하는데 충분하지만 상기 유니트상의 어떤 중요한 유체정역학적 압력의 상승이 발생하지 않도록 0.9 mL의 액을 포함한다.

D. 에러의 잠재적 원인을 최소화하고 어떤 농도 경사도의 형성을 피하기 위해서, 유니트들은 연구 내의 각 시간의 포인트에서 하나의 0.9 mL 포함하는 웰로부터 다른 것으로 옮겨진다. 이러한 전이는 정점의 공간에 적용되는 테스트 물질의 100 ㎕ 부피에서의 0시간을 기초로 다음의 시간 포인트에서 이루어진다: 15분, 30분, 60분, 그리고 120분.

E. 시간 포인트 사이내의 그들의 플레이트들 내의 유니트들은 37℃ 인큐베이터 내에서 유지된다. 각 웰당 0.9 mL의 액을 포함하는 플레이트들은 플레이트들이 제거되고 유니트들이 무균 핀셋을 사용하여 하나의 웰로부터 다른 것으로 옮겨지는 시기의 단기간 동안 일어나는 온도의 변화를 최소화하기 위해 역시 인큐베이터 내에서 유지된다.

F. 각 시간 포인트의 완결시, 액은 이전된 각 유니트에서의 웰로부터 제거되며 만약 테스트 물질이 세포독성, 세포질 효소의 방출, 락트산 탈수소 효소, 상피로부터인 경우 침투 테스트 물질의 농도의 결정을 위해 2개의 튜브(한 튜브는 700 ㎕를 다른 하나는 200 ㎕를 받는다)로 분별된다. 이러한 샘플들은 만약 분석이 24시간동안 수행되면 냉장고 내에서 유지되고 또는 상기 샘플들은 부수적으로 분별되고 분석을 위해 한 번 녹일 때까지 -80℃로 유지된다. 반복적인 냉동-해동 사이클은 피해야 한다.

G. 에러를 최소화하기 위해 모든 튜브들, 플레이트들, 그리고 웰들은 실험전에 미리 레이블한다.

H. 120분 시간 포인트의 끝에서, 유니트들은 마지막 0.9 mL 포함하는 웰들로부터 각 웰당 0.3 mL 액을 포함하는 24-웰 마이크로플레이트들로 옮겨진다. 이 부피는 다시 유니트들의 바닥과 접촉하기에 충분하지만 상기 유니트상의 어떤 중요한 유체정역학적 압력의 상승이 미치지 않도록 한다. 유니트들은 상피통과 저항의 측정 이전에 인큐베이터로 넣어진다.

3. 실험적 프로토콜-상피통과 저항

A. 호흡기 기도 상피 세포들은 시험관 내에서와 같이 생체 내에서 조직을 관통하는 용질의 흐름을 제한하는 치밀이음부를 형성한다. 이러한 이음부들은 절개된 기도 조직 내에서 수백 ohms ×cm²의 상피통과 저항을 준다. MatTek 에피에어웨이 유니트들에서, 상기 상피통과 저항(TER)은 제작자에 의해 일반적으로 1000 ohms ×cm² 부근에 이르도록 요구된다. 약간 낮은(700-800 ohms ×cm²) 침투 연구에서 스텝들의 차례 동안에 가노출되는 에피에어웨이 유니트들 조절의 TER이 발견되었으나, 작은 분자의 침투는 TER의 역으로 비례하므로 이 값은 침투에 대한 중요한 방해물의 공급은 여전히 충분히 높다. 셀을 제외한 다공성 세포막-바닥 유니트들은 반대로, 단지 최소한의 침투 세포막 저항(5-20 ohms ×cm²)을 공급한다.

B. TER의 정확한 측정은, 저항계의 전극들은 세포막의 위와 아래의 중요한 표면 공간위에 위치되고, 세포막으로부터의 전극들의 거리는 재생적으로 조절되는 것을 필요로 한다. MatTek에 의해 추천되고 모든 실험들에 대해 사용되는 TER 결정을 위한 방법은 여기에서 "EVOM"^TM 상피 볼트저항계와 World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL로부터의 "ENDOHM"^TM 조직저항 측정 챔버(chamber)를 필요로 한다.

C. 챔버는 TER 결정 이전에 최소한 20분 동안 전극을 평형으로 하기 위해 처음에 Dulbecco's 포스페이트 버퍼된 염(phosphate buffered saline(PBS))으로 채워진다.

D. TER의 결정은 챔버 내의 1.5 mL의 PBS와 측정되는 세포막-바닥 유니트 내의 350 ㎕의 PBS로 구성된다. 제일 위쪽의 전극은 단지 셀을 포함하지 않는 유니트(그러나 350 ㎕의 PBS를 포함하는)의 세포막 위로 조정되고 그리고 다음에 확실한 재생적 위치로 고정된다. 셀이 없는 유니트의 저항은 일반적으로 5-20 ohms ×cm²("바탕저항")이다.

E. 한 번 챔버가 준비되고 바탕저항이 기록되면, 단지 침투 결정들에 사용되었던 24-웰 플레이트 내의 유니트들은 인큐베이터로부터 제거되고 TER 결정을 위해 챔버 내에 각자 배치된다.

F. 각각의 유니트는 처음에 세포막 바닥이 축축해졌는지를 확인하기 위한 PBS를 포함하는 패트리 접시로 옮겨진다. 350 ㎕ PBS의 분별은 유니트에 더해지며 그리고 다음에 정점의 공간을 닦기 위해 레이블된 튜브로 조심스럽게 빨아낸다. 350 ㎕ PBS의 두 번째 세척은 다음에 유니트로 적용되고 같은 컬렉션 튜브내로 빨아들여진다.

G. 유니트는 단지 챔버(새로운 1.5 mL PBS의 분별을 포함하는)에 놓여지기 이전에 천천히 과량의 PBS로 그것의 외부 표면상의 더러움을 없게 한다. 350 ㎕ PBS의 분별은 제일 위쪽의 전극이 챔버상에 놓여지고 TER이 EVOM미터에 의해 읽혀지기 이전에 유니트로 더해진다.

H. 유니트의 TER이 ENDOHM 챔버 내에서 읽혀진 후에 유니트는 제거되고, PBS는 빨려지고 저장되며, 유니트는 정점의 공간상의 에어 인터페이스와 함께 웰당 0.3 mL의 액을 포함하는 24-웰 플레이트로 되돌려진다.

I. 유니트들은 다음의 시퀀스 내에서 읽혀진다: 모든 가취급된 조절군들, 다음에 모든 포뮬레이션 취급된 샘플들에 의해, 다음에 각각의 상기 가취급된 조절군들의 두 번째 TER 읽기에 의한다. 모든 TER 결정들이 완결된 후, 24-웰 마이크로플레이트 내의 유니트들은 MTT 환원에 의해 생존능력을 결정하기 위해 인큐베이터로 되돌려진다.

4. 실험적 프로토콜-MTT 환원에 의한 생존능력

MTT는 미토콘드리얼 탈수소효소 활성에 의해 환원되고 온전한 미토콘드리얼 기능과 함께 생육할 수 있는 셀들에 의해 녹지 않고 색을 띈 포르마잔으로 또는 호흡터짐 생성 능력이 있는 셀들로부터의 비미토콘드리아 NAD(P)H 탈수소효소 활성에 의해 셀-침투할 수 있는 테트라졸리윰 염이다. 포르마잔의 형성은 상피세포들의 생존능력의 좋은 지시약인데 왜냐하면 이러한 세포들은 중요한 호흡 터짐을 생성하지 않기 때문이다. 우리는 그들의 유니트들이 생존능력에 접근하기 위한 MatTek Corp에 의해 준비된 MTT 시약 키트를 사용했다.

A. MTT 시약은 농축한 형태로 공급되고 생존능력에 대한 분석이 일어나는 날 적절한 DMEM을 기초로 한 희석제 내로 희석된다(전형적으로 그 날의 오후에는 침투 반응속도 그리고 아침에는 TER이 결정된다). 녹지 않는 시약은 사용하기 전 간단한 원심분리에 의해 제거된다. 마지막 MTT 농도는 1 mg/mL 이다.

B. 마지막 MTT 용액은 웰당 300 ㎕의 부피에서 24-웰 마이크로플레이트의 웰들로 추가된다. 앞에서 강조하였듯이, 이 부피는 에피에어웨이 유니트들의 세포막들과 접촉하기에 충분하지만 셀들 상의 중요한 양의 유체정역학적 압력이 없도록 한다.

C. 유니트들은 TER 측정 후에 그들이 있던 24-웰 플레이트로부터 제거되고, 그리고 유니트들의 외부표면으로부터 어떤 과량의 액을 제거한 후 그들은 MTT 시약을 포함하는 플레이트로 옮겨진다. 플레이트 내의 유니트들은 다음에 공기중의 CO₂가 5%인 대기를 가지는 인큐베이터 내에서 37 ℃로 3시간동안 놓여진다.

D. 3시간의 인큐베이션이 끝나면, 생육할 수 있는 셀들을 포함하는 유니트들은 시각적으로 보라색으로 변할 것이다. 불용성의 포르마잔은 양적으로 MTT 환원의 범위인 정도로의 그들의 유니트들 내의 셀들로부터 추출되어야만 한다. 포르마잔의 추출은 유니트들 웰당 2 mL 추출액을 포함하는 24-웰 마이크로플레이트로 옮김으로서 달성되며, 후에 전과같이 상기 유니트들의 외부표면으로부터 과량의 액체를 제거한다. 이 부피는 세포막과 유니트들의 정점의 공간 둘 다를 완벽히 커버하는데 충분하다. 추출은 실온의 빛이 통하지 않는 챔버 내에서 밤새도록 진행되도록 한다. MTT 추출액은 전통적으로 높은 농도의 세제를 포함하고, 그리고 셀들을 파괴한다.

E. 추출이 끝난 후, 각 유니트 사이로부터의 유체와 그 웰 주위의 유체는 합쳐지고 다음에 96-웰 마이크로플레이트(200 ㎕ 분별이 적절하다)로의 분별과 VMax 멀티 웰 마이크로플레이트 스펙트로포토미터상의 570 nm에서의 흡수의 결정을 위해 튜브로 옮겨진다. 흡수에 기여하지 않는 추출된 유니트들로부터 온 잔해로부터의 혼탁도를 확실히 하기 위해, 650 nm에서의 흡수는 역시 VMax 내의 각 웰에 대하여 결정되고 570 nm에서의 흡수로부터 자동적으로 제거된다. 포르마잔 흡수의 결정을 위한 "블랭크"는 아무 유니트도 드러나지 않은 추출액의 200 ㎕ 분별액이다. 이러한 흡수값은 제로 생존능력을 구성하는 것으로 여겨진다.

F. 24 에피에어웨이 유니트들의 각각의 키트으로부터의 두 개의 유니트들은 침투 반응속도와 TER의 결정 동안에 처리되지 않고 방치된다. 이러한 유니트들은 100% 셀 생존능력을 위한 양적인 조절같은 곳에 사용된다. 우리가수행한 모든 연구들에서, 이러한 처리되지 않은 유니트들 내의 셀들 대 침투 반응속도를 위해 가로 처리되고 TER 결정들이 수행된 조절된 유니트들 내의 셀들의 생존능력에서 통계적인 중요한 차이점은 없었다. 테스트 포뮬레이션들로 처리된 모든 유니트들의 흡수는 MTT와의 인큐베이션 시간에 유니트들 내의 셀들의 퍼센트 생존능력에 선형적으로 비례한다고 여겨진다. 강조되어야만 하는 것은 이 분석은 전형적으로 정점의 공간으로 테스트 물질의 소개 후, 4시간이 넘지 않게 수행되어야 하며 다음으로 TER 결정 동안 유니트들의 정점의 공간의 세척이 일어난다.

5. LDH 방출에 의한 생존능력의 결정

셀 생존능력의 예민한 탐침인 MTT 환원에 의한 미토콘드리아 환원 활성의 측정 동안, 분석은 셀들을 파괴할 것을 요구하고 그리고 따라서 단지 각 연구의 말단에서 수행될 수 있다. 셀들의 괴사 용해가 수행될 때, 그들의 세포질 내용물은 주변액으로 흘러들어가고, 락트산 탈수소효소와 같은 세포질 효소는 이러한 액에서 검출될 수 있다. 액에서의 LDH에 대한 분석은 침투 반응속도의 2시간 결정의 각 시간 포인트에서 제거된 액의 샘플들에서 수행될 수 있다. 따라서 중요한 시간동안 개발되지 않은 포뮬레이션들의 세포독성 효과는 기도 상피로 최초로 수 분간 노출되어 세포 용해를 유도하는 포뮬레이션들의 효과와 같이 검출될 수 있다.

A. 에피에어웨이 유니트들의 세포 용해의 평가를 위해 추천되는 LDH 분석은 NAD로부터 NADH의 생성과 함께 피루브산염으로의 락트산의 전환에 근거한다. NADH는 다음에 테트라졸리윰 염 INT의 동시적인 환원에 따라 재산화되고, 조 "디아포라아제" 준비에 의해 촉진된다. INT의 환원으로부터 형성된 포르마잔은 용해성이므로 LDH 활성에 대한 전체의 분석은 락트산, NAD, 디아포라아제, 그리고 INT를 포함한 균일한 수용액 내에서 수행될 수 있다.

B. LDH 활성에 대한 분석은 에피에어웨이 유니트를 둘러싼 "윗물" 액의 샘플들로부터의 50㎕ 분별액상에서 수행되고 각 시간 포인트에서 수집된다. 이러한 샘플들은 냉장고 내에서 24시간이 넘지 않게 보관하거나 수집 후에 몇 시간동안 얼린 후에 해동된다. 각각의 에피에어웨이 유니트는 테스트 물질의 적용 후에 15분, 30분, 1시간, 그리고 2시간에 수집된 윗물액의 샘플들을 생성한다. 분별액은 모두 96 웰 마이크로플레이트로 옮겨진다.

C. 유니트로 드러난 적이 없는 50 ㎕의 분별액은 "블랭크" 또는 0% 세포독성의 음의 조절과 같이 제공된다. 우리는 드러나지 않은 액과 함께 분석 시약 혼합물의 반응 후에 이 "내인성" LDH의 명백한 레벨은 실험적 에러 사이에서 침투 반응속도 연구를 수행하기 위해 필요한 2시간의 전적인 시간 코스를 넘은 모든 가취급된 조절 유니트들에 의해 방출된 LDH의 명백한 레벨과 같은 것을 발견하였다. 따라서 실험적 에러 사이에서, 이러한 가취급된 유니트들은 침투 반응속도의 시간 코스를 넘은 상피세포들의 세포 용해를 보여주지 않는다.

D. 용해를 갖는 유니트 내에서 100%의 셀들이 방출된 후 LDH의 레벨을 반사하는 윗물액의 샘플을 준비하기위한, 어떠한 이전의 취급이 없었던 유니트에 침투 반응속도의 결정을 위한 프로토콜 내에서와 같은 0.9 mL의 액을 포함하는 웰이 추가된다. 유니트를 포함하는 상기 플레이트는 -80℃에서 얼려지고, 상기 웰의 용량은 다음에 해동하게 된다. 이 냉동-해동 사이클은 효과적으로 셀들을 녹이고 LDH를 포함한 그들의 세포질을 윗물액으로 방출시킨다. 얼려지고 해동된 셀들로부터의 50 ㎕의 분별액은 100% 세포독성을 반사하는 양의 조절과 같이 96-웰 플레이트로 더해진다.

E. 윗물액의 분별액을 포함하는 각각의 웰로 LDH 분석 시약의 50 ㎕의 분별액이 더해진다. 플레이트는 다음에 암실에서 30분간 배양된다.

F. 반응은 1 M 아세트산의 "정지"용액의 첨가에 의해 중지되고, 정지 용액의 첨가의 한 시간 사이에 플레이트의 흡수는 490 nm에서 결정된다.

G. 퍼센트 세포 용해의 계산은 세포 용해를 위한 참조와 같이 홀로 주어지는 액으로부터 획득되고, 100% 세포 용해를 위한 참조와 같이 주어지는 냉동과 해동 유니트를 둘러싼 액으로부터 획득된 흡수와 세포 용해사이의 선형관계의 가정에 근거한다.

6. ELISA 결정들

동등한 점막 전달-강화제의 시행 또는 본 발명의 조합 포뮬레이션과 공동으로 활성제의 증가된 침투를 평가하기 위한 테스트 물질과 같은 생물학적 활성제의 농도들을 결정하기 위한 공정은 일반적으로 상술한 것과 같고 알려져 있는 방법들과 각각의 독특한 분석에 사용되는 ELISA 키트의 특별한 제작 지시와 일치한다. 생물학적 활성제의 침투 반응속도는 일반적으로 생물학적 활성제가 정점의 상피세포 표면과 접촉하게 된 후(아마도 동시적으로, 또는 순차적으로, 점막 전달-강화제(들)로의 정점의 세포 표면의 노출)다중의 시간 포인트들(예를 들어 15분. 30분, 60분, 그리고 120분)에서 측정되는 것에 의해서 결정된다.

펩티드 YY 뉴로펩티드 Y의 농도들을 결정하기 위한 공정, 그리고 혈청 내의 췌장 펩티드, 중추신경계통(CNS) 조직들 또는 체액, 뇌척수액(CSF), 또는 포유류 환자의 다른 조직들 또는 체액들은 펩티드 YY 뉴로펩티드 Y 그리고 췌장 펩티드에 대한 면역적 분석에 의해 결정될 것이다. 펩티드 YY 뉴로펩티드 Y의 농도들을 결정하기 위한 공정, 그리고 점막 전달-강화제의 동등한 투여와 연계한 활성제의 강화된 침투 평가에 대한 테스트 물질들 같은 췌장 펩티드 또는 본 발명의 조합 포뮬레이션은 일반적으로 상술되었고, 방사선 면역측정법(RIA), 효소 면역측정법(EIA), 그리고 면역조직화학 또는 펩티드 YY, 뉴로펩티드 Y, 그리고 췌장 펩티드(Bachem AG(King of Prussia, PA)에 대한 면역형광항체에 대한 항체 시약에 대한 알려진 방법들과 특별한 제조자의 지시와 일치한다.

에피에어웨이^TM 조직 세포막들은 페놀레드와 히드로코르티손이 없는 배지(MatTek Corp., Ashland, MA)에서 배양된다. 조직 세포막들은 조직들이 평형이 되도록 하기위해 37℃에서 48시간동안 배양된다. 각각의 조직 세포막은 혈청이 없는 배지의 0.9 mL를 포함하는 6-웰 플레이트의 개개의 웰에 배치된다. 포뮬레이션의 100 ㎕(테스트 샘플 또는 조절)는 세포막의 정점의 공간 에 적용된다. 각각의 테스트 샘플 (생물학적 활성제, 펩티드 YY와 결합되는 점막 전달-강화제) 그리고 조절 (생물학적 활성제, 펩티드 YY, 단독)의 삼중 또는 사중으로 복제된 샘플들은 각각의 분석에서 평가된다. 각각의 시간 포인트(15, 30, 60 and 120분)에서 조직 세포막들은 신선한 배지를 포함하는 새로운 웰들로 옮겨진다. 0.9 mL 배지에 기초한 샘플들은 각각의 시간 포인트에서 획득되고 ELISA와 락트산 탈수소효소(LDH) 분석에 사용하기 위해 4℃에서 보관된다.

ELISA 키트들은 전형적인 두 단계 샌드위치 ELISA들이다: 연구된 약제의 면역활성 형태는 처음에 96-웰 마이크로플레이트 상에서 움직이지 않는 항체에 의해 "포획"되고나서 웰들 밖의 결합되지 않은 물질을 씻어내고, "검출" 항체는 결합된 면역 활성제와 반응되는 것을 허용한다. 이 검출 항체는 전형적으로 효소와 짝지어지고(대부분 주로 홍당무과 산화효소) 면역 복합체 내에서 플레이트로 결합한 효소의 양은 색소성 약제와 함께 그 활성이 측정된다. 침투 반응속도 연구 내에서 각각의 시간 포인트들에서 수집된 위에 뜨는 배지의 샘플들에 더하여, 활성 연구의 시작점에서 유니트들의 정점의 공간으로 적용되는 포뮬레이션의 적절히 희석된 샘플들(생물학적 활성 테스트 약제를 대상으로 포함하는 등)은 또한 일련의 제조자 제공 표준에 따라 ELISA 플레이트 내에서 분석된다. 각각의 위에 뜨는 배지 샘플은 일반적으로 ELISA(사중의 유니트들은 침투 반응속도 결정 내에서 각각의 포뮬레이션에 대해 필요로 되고 모든 네 개의 시간 포인트들에서 수집된 위에 뜨는 배지의 총 16개의 샘플들을 생성하는 것을 상기하는)에 의해 복제된 웰들에서 분석된다.

A. 위에 뜨는 배지의 샘플들내 또는 ELISA의 완성 후에 기준들의 농도들의 영역 외로 지나는 유니트들의 정점의 공간으로 적용되는 물질의 희석된 샘플들에 대한 활성 테스트 약제의 명백한 농도들은 일반적이다. 실험적 샘플들 내에 존재하는 물질의 농도들이 아닌 것은 기준들의 농도들 이상의 예측에 의해 결정된다; 다소, 샘플들은 반복되는 ELISA내에서 표준들 사이의 삽입에 의해 좀 더 정확하게 결정될 수 있는 테스트 물질의 생성되는 농도들로 적절히 희석된다.

B. 생물학적 활성 테스트 약제에 대한 ELISA, 예를 들어, 펩티드 YY는 그 디자인과 바람직한 프로토콜 내에서 독특하다. 대부분의 키트들과 달리, ELISA는 하나는 포획하기 위한 것이고, 다른 하나는 생물학적 활성 테스트 약제(이 항체는 홍당무과 산화효소와 짝지어진다)에 대해 중복되지 않은 결정인자를 향해 직접 연결되는 두 개의 단일 클론 항체를 사용한다. 분석의 상한 아래에 위치한 펩티드 YY의 농도들의 정도로 실험적 샘플들이 주어지고, ELISA 플레이트 동시에 주어지는 두 개의 항체들과 함께 ELISA 상의 샘플들의 배양을 허용하는 분석 프로토콜은 제조자의 지시에 대하여 사용된다. 샘플내의 펩티드 YY 레벨들이 상한선보다 중요하게 높아질 때, 면역활성 펩티드 YY 레벨들은 아마도 배양 혼합액 내에서 항체의 양들이 증가할 것이고, 검출 항체 결합을 가지는 어떤 펩티드 YY가 포획되지 않는 동안에 검출 항체 결합을 가지지 않는 어떤 펩티드 YY는 플레이트상에서 포획될 것이다.

이것은 샘플(분석의 상한에서 현저히 아래에 위치한 어떤 샘플내의 펩티드 YY 레벨들을 나타내는) 내에서 펩티드 YY 레벨들의 중요한 과소평가를 이끈다. 이러한 가능성을 제거하기 위해 분석 프로토콜이 수정되어 왔다:

B.1. 어떤 검출 항체의 부재중에 희석된 샘플들은 처음에 움직이지 않게 포획된 항체를 포함하는 ELISA 플레이트상에서 한 시간 동안 배양된다. 한 시간 배양 후에, 웰들은 결합되지 않은 물질이 없도록 세척된다.

B. 2. 검출 항체는 모든 포획된 항원과 함께 면역 복합체의 형성을 수행하기 위해 한 시간 동안 플레이트와 함께 배양된다. 검출 항체의 농도는 포획된 항체에 의해 결합된 펩티드 YY의 최고의 레벨과 함께 반응하는데 충분하다. 플레이트는 다음에 어떤 결합되지 않은 검출 항체를 제거하기 위해 다시 세척된다.

B. 3. 과산화 효소 기질은 플레이트로 추가되고 색 발생이 일어나는 것을 허용하기 위해 15분 동안 배양된다.

B. 4. "중지"용액은 플레이트에 가해지고 흡수는 VMax 마이크로플레이트 분광측정기 내에서 450 nm 뿐만 아니라 490 nm에서 읽혀진다. 490 nm에서 색을 띤 생성물의 흡수는 450 nm에서의 그것보다 훨씬 낮지만 각각의 파장에서의 흡수는 여전히 생성물의 농도에 비례한다. 두 개의 읽음은 VMax 기기(비록 상기 기기가 0에서 3.0 OD의 영역을 넘어서도 정확하다는 것이 보고되었지만 우리는 일상적으로 영역을 0에서 2.5OD로 제한한다)의 작업 영역을 넘은 결합된 펩티드 YY의 양과 선형적으로 관련되는 것을 확실하게 한다. 샘플들 내의 펩티드 YY의 양은 ELISA 내에 포함되는 다른 표준들을 위하여 획득된 OD 값들 사이에 삽입되는 것에 의해 결정되어진다. 반복되는 ELISA내에서 표준들을 위해 획득된 영역외 OD 읽음과 함께 샘플들은 재희석되고 실행되어진다.

결 과

TER 분석에 의한 상피통과 저항의 측정:

마지막 분석 시간 포인트들 후에, 세포막들은 클린 배지 0.3 mL내의 24 웰 배양 플레이트의 개개의 웰들 내에 위치되고 상피통과 전기저항(TER)은 EVOM 상피적 전압기 그리고 Endohm 챔버(World Precision Instruments, Sarasota, FL)를 사용하여 측정된다. 탑 전극은 세포막의 제일 윗 표면과 가까워지지만 접촉하지는 않도록 조절된다. 조직들은 그들의 개개의 웰들로부터 한번에 제거되고 기저 표면들은 클린 PBS 내에서 잠김에 의해 세척된다. 정점의 공간들은 PBS와 함께 천천히 두 번 세척된다. 조직 유니트는 Endohm 챔버 내에 위치되고, 25 0㎕의 PBS가 추가로 삽입되고, 탑 전극은 재배치되고 그리고 저항은 측정되고 기록된다.

측정 후에, PBS는 버려지고 조직 삽입은 배양 플레이트로 되돌려진다. 모든 TER 값들은 조직의 표면 영역의 기능과 같이 보고된다.

최종 숫자들은 다음과 같이 계산된다:

셀 세포막의 TER = (세포막과 삽입의 저항(R) - 블랭크 삽입의 R) ×세포막의 영역 (0.6cm²).

에피에어웨이^TM 셀 세포막 (점막 상피세포층)을 관통하는 TER 측정상의 펩티드 YY와 비내 전달-강화제로 구성되는 약학적 포뮬레이션들의 효과를 도1에 나타내었다. decrease in TER value relative to the 조절값(조절 = 약 1000 ohms-cm²; 100으로 표준화된다)과 관계되는 TER값 내의 감소는 셀 세포막 저항내의 감소와 점막 상피세포 침투성내의 증가를 나타낸다.

전형적인 펩티드 YY 포뮬레이션, 포뮬레이션 P는 셀 세포막 저항 내의 엄청난 감소를 보여준다. (표 2). 결과는 전형적인 포뮬레이션(예를 들면, 포뮬레이션 P)이 테스트된 농도에서 조절의 1%보다 낮도록 세포막의 저항이 감소하는 것을 나타낸다. 상기 값들이 보여주는 것은 각각의 포뮬레이션의 삼중의 평균이다. 포뮬레이션들A 와 B는 pH 7.4 또는 5.0에서 포스페이트완충 식염수 100 ml 내에서 펩티드Y_3-36 60 ㎍을 포함하는 복원된 펩티드 YY(Bachem AG, King of Prussia, PA)에 의해 준비된 조절들이다. 점막 전달 증진인자를 제외한 펩티드 YY는 저항이 감소되지 않는다.

상기 결과는 펩티드 YY(예를 들면, 포뮬레이션 P)의 증진된 비내 전달을 위한 전형적인 포뮬레이션이 셀 세포막 저항을 감소시키고 점막 상피세포들 침투성이 현저하게 증가되는 것을 나타낸다. 전형적인 포뮬레이션들은 혈청 또는 중추신경계통 조직 또는 체액으로의 펩티드 YY의 비내 전달을 증진할 것이다. 상기 결과는 이러한 전형적인 포뮬레이션들이 점막상피 수율과 접촉할 때에 펩티드 YY로의 점막 상피세포 침투성 내에서 현저한 증가가 있는 것을 나타낸다.

[표2]

ELISA 분석에 의한 침투 반응속도:

펩티드 YY와 에피에어웨이 셀 세포막 (점막 상피세포층)을 관통하는 펩티드 YY의 침투상의 비내 전달- 강화제로 구성된 본 발명의 약학적 포뮬레이션들의 효과는 상기한 바대로 측정된다. 그 결과를 표 3에 나타내었다. 에피에어웨이 셀 세포막을 관통하는 펩티드 YY의 침투는 ELISA 분석에 의하여 측정된다.

본 발명의 전형적인 비내 포뮬레이션들 (예를 들면, 포뮬레이션 P)에 대하여, 표 3에서 보여주는 바와 같이 펩티드 YY 침투에서의 엄청난 증가는 포뮬레이션 P에서 일어난다. 상기 공정은 다중의 시간 포인트들 상에서의 주변 배지 내로의 상피세포들을 침투한 생물학적 활성 펩티드 YY의 농도를 결정하기 위해 ELISA 분석을 사용한다. 상기 결과는 포뮬레이션 A 또는 B (펩티드 YY 조절 포뮬레이션; pH 7.4 또는 5.0에서 포스페이트완충식염수 100 ml 내에서 펩티드YY_3-36 60 ㎍; Bachem AG, King of Prussia, PA)와 비교한 포뮬레이션 P내에서 펩티드 YY의 침투증가를 보여준다. 120 분들에서 전형적인 비내 포뮬레이션 포뮬레이션 P를 사용한 침투의 점증적인 증가의 평균은 포뮬레이션들 A 또는 B 조절들보다 훨씬 큰 1195배이다.

[표3]

MTT 분석:

MTT 분석은 MTT-100, MatTek 키트를 사용하여 수행된다. 300 mL 의 MTT 용액이 각각의 웰로 가해진다. 조직 인서트들은 깨끗한 PBS와 천천히 닦이고 MTT 용액 내에 배치된다. 상기 샘플들은 37℃에서 3시간동안 배양된다. 배양 후 셀 배양 인서트들은 다음에 각 인서트를 완전히 덮도록 각 웰당 2.0 mL의 추출용액에 잠겨진다. 상기 추출 플레이트는 증발을 감소시키기 위해 덮여지고 밀봉된다. 추출은 실온에서 암실조건으로 밤새도록 진행된다. 추출 기간이 완료된 후, 상기 추출용액은 혼합되고 96-웰 마이크로타이터 플레이트내로 피펫으로 옮긴다. 각 샘플의 삼중체는 추출 블랭크와 같이 로드된다. 샘플들의 광학적 밀도는 다음에 플레이트 리더(Molecular Devices) 상에서 550 nm 에서 측정된다.

조절 포뮬레이션(포뮬레이션들 A or B)과 비교되고 즉석의 특징(예를 들면, 포뮬레이션 P)의 가르침이 따르는 펩티드 YY의 강화된 비내 점막전달을 위한 MTT 분석상의 전형적인 포뮬레이션은 표 4에서 보여진다. 펩티드 YY와 하나 또는 그 이상의 비내 전달 강화제로 구성되는 포뮬레이션들에 대한 결과들, 예를 들어, 포뮬레이션 P(세 개의 복합체 내에서 수행되는 실험)는 점막 상피 조직의 생존 능력상의 이 전형적인 구체예의 최소한의 독성 효과가 있다는 것을 나타낸다.

[표4]

LDH 분석:

즉석의 특징(예를 들면, 포뮬레이션 P)의 가르침을 따르는 펩티드 YY의 강화된 비내 점막 전달을 위한 전형적인 포뮬레이션 상의 LDH 분석은 표 5에서 보여진다. 포뮬레이션 P의 세 개의 복합체에 대한 결과는 점막 상피 조직의 생존 능력상의 이 전형적인 구체예가 최소한의 독성효과가 있다는 것을 나타낸다.

[표5]

실시예 3: 트리암시놀론 아세토나이드 코티코스테로이드와 결합하여 본 발명의 포뮬레이션 P(펩티드 YY)는 세포 생존 능력을 개선한다

현재의 예는 스테로이드 구성과 결합한, 예를 들어, 트리암시놀론 아세토나이드, 그리고 하나 또는 그 이상의 비내 전달-강화제와 더 결합한 비내적으로 투여된 펩티드 YY, 예를 들어, 인간 펩티드 YY 의 상피점막염증 내의 침투성과 환원을 결정하기 위한 시험관 내 분석을 제공한다. 상기 분석은 TER 분석에 의한 상피세포 침투성의 결정과 펩티드 YY와 트리암시놀론 아세토나이드로 구성된 구체예의 적용에 의한 MTT분석 내의 세포 생존능력에 의해 측정되는 것과 같은 상피점막염증 내의 환원을 포함한다.

포뮬레이션 P(상기표 1에 도시하였다)는 0.5, 2.0, 5.0, 또는 50 ㎍의 투여량에서 트리암시놀론 아세토나이드와 함께 포뮬레이션과 결합된다. 계절알레르기비염에 대한 트리암시놀론 아세토나이드(Nasacort^®, Aventis Pharmaceuticals)의 일반적인 복용량은 스프레이당 55 ㎍이다. 트리암시놀론 아세토나이드 코티코스테로이드와 결합한 TER과 ELISA 분석에 의해 측정되는 것과 같은 상피세포 침투성을 유지하는 동안 포뮬레이션 P는 MTT 분석에 의해 측정되는 것과 같은 세포 생존 능력을 개선한다.

본 발명의 방법들과 포뮬레이션들에 따르면, 트리암시놀론 아세토나이드의 존재 또는 부존재시 포뮬레이션 P의 침투성의 측정은 에피에어웨이^TM 세포 세포막 내에서 침투상피 전자적 저항(TER) 분석에 의해 수행된다. 스프레이당 0.5, 2.0, 5.0, 또는 50 ㎍의 농도에서 포뮬레이션 P 플러스 트리암시놀론 아세토나이드의 TER 분석은 펩티드 YY 침투성이 감소되지 않고 포뮬레이션 P 단독의 침투성과 동일하다는 것을 나타낸다. 스프레이당 0과 50 ㎍의 트리암시놀론 아세토나이드 농도 사이에서 포뮬레이션 P 플러스 트리암시놀론 아세토나이드는 전형적으로 최소한 포뮬레이션들 A 또는 B(펩티드 YY 조절)의 침투성보다 10배에서 100배가 된다.

본 발명의 방법들과 포뮬레이션들에 따르면, 트리암시놀론 아세토나이드의 존재 또는 부존재시 포뮬레이션 P의 침투성의 측정은 에피에어웨이^TM 세포 세포막내의 ELISA 분석에 의해 수행된다. 상기 TER 분석과 비슷하게, 스프레이당 0.5, 2.0, 5.0, 또는 50 ㎍의 농도에서 포뮬레이션 P 플러스 트리암시놀론 아세토나이드의 ELISA 분석은 펩티드 YY 침투성이 감소되지 않고 포뮬레이션 P 단독의 침투성과 동일하다는 것을 나타낸다. 스프레이당 0과 50 ㎍의 트리암시놀론 아세토나이드 농도 사이에서 포뮬레이션 P 플러스 트리암시놀론 아세토나이드는 전형적으로 포뮬레이션들 A 또는 B(펩티드 YY 조절)의 침투성보다 훨씬 크다.

본 발명의 방법들과 포뮬레이션들에 따르면, MTT 분석은 트리암시놀론 아세토나이드의 존재 또는 부존재시 포뮬레이션 P의 셀 생존능력을 측정한다. 전형적으로, 포뮬레이션 P로의 트리암시놀론 아세토나이드(스프레이당 0.5, 2.0, 5.0, 또는 50 ㎍의 농도에서)의 첨가는 트리암시놀론 아세토나이드의 부존재시 포뮬레이션 P와 비교한 셀 생존능력을 개선한다.

포뮬레이션 P로의 트리암시놀론 아세토나이드의 첨가는 세포 생존능력을 증가시키고 트리암시놀론 아세토나이드의 부존재시 포뮬레이션 P와 비교한 TER 분석에 의한 측정과 같은 상피 침투성을 유지한다.

비내적으로 투여한 펩티드 YY의 상피점막염증 내의 환원은 전형적으로 고효능 화합물 또는 포뮬레이션들뿐만 아니라 어떤 예들인 배지 효능, 또는 저효능 화합물 또는 포뮬레이션들인 하나 또는 하나 이상의 스테로이드 또는 코티코스테로이드 화합물(들)과 결합한 펩티드 YY의 비내 포뮬레이션과 함께 성취된다. 전체적으로 고효능(동등한 투여량), 배지, 그리고 저효능 스테로이드가 주어진다. 전형적으로, 고효능 스테로이드 구성과 결합하는 펩티드 YY의 비내 포뮬레이션은 제한되지는 않지만 베타메타손(0.6에서 0.75 mg 투여량), 또는 덱사메타손(0.75 mg 투여량)을 포함한다. 선택적인 포뮬레이션에서, 배지 효능 스테로이드 구성과 결합하는 펩티드 YY의 비내 포뮬레이션은 제한되지는 않지만 메틸프레드니솔론(4 mg 투여량), 트리암시놀론(4 mg 투여량), 또는 프레드니솔론(5 mg 투여량)을 포함한다. 더 선택적인 포뮬레이션에서, 저효능 스테로이드 구성과 결합하는 펩티드 YY의 비내 포뮬레이션은 제한되지는 않지만 하이드로코티손(20 mg 투여량) 또는 코티손(25 mg 투여량)을 포함한다.

실시예 4: 프로틴인 안정제의 PYY 포뮬레이션 프리의 제조

프로틴인 안정제의 실질적으로 프리한 PYY의 비내 투여에 적합한 PYY 포뮬레이션은 하기 리스트의 포뮬레이션을 가지고 제조된다.

1. 비이커에 약 물 3/4을 가하고 교반 플레이트상에서 교반 바와 함께 휘저어 주고 소듐 시트레이트를 그것이 완전히 녹을 때까지 가한다.

2. 다음에 EDTA를 가하고 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

3. 다음에 시트르산을 가하고 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

4. 메틸-β-사이클로덱스트린 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

5. 다음에 DDPC를 가하고 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

6. 다음에 락토오스를 가하고 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

7. 다음에 소르비톨를 가하고 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

8. 다음에 클로로부탄올을 가하고 그것이 완전히 녹을 때까지 휘젓는다.

9. PYY3-36을 가하고 그것이 녹을 때까지 천천히 휘젓는다.

10. pH가 5.0 ±0.25가 확신하도록 pH를 측정한다. pH를 조절하기 위해 묽은 HC1 또는 묽은 NaOH를 가한다.

11. 최종 부피가 되도록 물을 가한다.

[표6]

포뮬레이션 pH 5+/- 0.25

오스몰농도∼250

실시예 5

PYY3-36의 농도를 제외한 상기와 같이 제조된 두 번째 포뮬레이션을 하기 표 7에 나타내었다.

[표7]

포뮬레이션 pH 5+/- 0.25

실시예 6: PYY의 최적의 pH의 결정

40℃에서 5일간 PYY_3-36 안정도에 대한 pH의 결정

A. 포뮬레이팅 PYY(3-36) /pH 안정도 분석 샘플에 대한 프로토콜

오스몰농도: 목표 250 mM

시트레이트/소듐 시트레이트, 트라이-베이직 버퍼, 10 mM을 사용

오스몰농도 = 입자수 ×몰농도=(1 + 4) ×l0 mM = 50 mM

따라서 100 mM NaCl(2입자들)과 함께 오스몰농도를 250 mM로 가져온다.

B. 하기와 같이 안정한 샘플을 만듦(3500 ㎕)

최종 농도

시트레이트 버퍼 1400 ㎕ 25 mM(촤종 pH에 필요한) l0 mM

PYY 700 ㎕ 1.5 mg/mL 300ug/ml

클로로부탄올 350 ㎕ 2.5%, 0.25%

NaCl, 350 ㎕ 1.0 M, l00 mM

pH를 체크하고 필요하다면 조절한다.

물과 함께 Q. S.를 3500 ㎕로 한다.

공정:

오토샘플러 바이알 내에 200 ㎕ 액으로 인서트된 120 ㎕ 샘플

3 풀스(pulls)/시간 포인트

샘플들은 40℃에서 5일간 배양된다.

C. 안전 혼합물의 목표와 실제 최종 pH의 비교

Target pH Actual pH

3.0 2.99

3.5 3.47

4.0 3.90

4.5 4.42

5.0 4.90

7.0 7.38

D. HPLC 공정

컬럼: 워터스 C18 본다팩(bondapak) 10 ㎛ 4.6 ×300 mm

HPLC 시스템: 워터스 얼라이언스 2690

디텍터: 워터스 2487 220 nm에서의 이중 파장

흐름속도: l ml/mim

주입 부피: 30 ㎕

컬럼 온도. 30 ℃

이동상:

버퍼 A: 물내에 0.1% TFA, 1% 아세토니트릴

버퍼 B: 아세토니트릴내에 0.11% TFA

경사도:

시간(분) %A %B

0 75 25

17 42 58

19 75 25

28 75 25

E. 결과와 결론:

결과는 이 분석에서 사용한 독특한 조건하에서 안정도를 위한 적절한 pH는 4,90 인 것을 나타낸다. pH가 2.99에서 4.90으로 증가함과 함께 안정도도 76에서 87%로 증가한다.

높은 pH에서는, 예를 들면 7.38, 단지 15%의 영점 잔존 시간(time zero remaining)과 함께 PYY_3-36의 안정도에 큰 하락이 있다.

실시예 7: 비내 포뮬레이션 개발

펩티드들과 단백질들은 낮은 분자량의 치료제와 비교하여 상대적으로 약한 분자이다. 포뮬레이션 개발상의 목적은 비내 전달에 적합한 후보 포뮬레이션을 확인하기 위해서이다. 이러한 목적을 달성하기 위해, 수많은 후보들이 적절한 약물 안정성, 비내 점막을 관통하는 전달, 독성과 보관 효과와 함께 포뮬레이션을 확인하기 위하여 테스트된다.

초기에, pH의 효과는 검증되었다. 도1은 pH 3.0에서 7.4의 다양한 pH와 높은 온도(40℃)에서 PYY_3-36의 안정성을 도시하였다. 생리학적인 pH에서는, 온도가 올라갈 때 약물의 잠재적 손실이 있다. 최고의 안정성은 약 pH 5.0에서 달성된다. 더욱 포뮬레이션의 최적화를 위해 이 pH가 선택된다.

안정성을 더욱 최적화하기 위해, 다양한 안정화 약제가 비내 점막을 관통하는 약물의 운반을 촉진하는 그들의 능력에 대하여 테스트된다. 테스트된 증진인자는 제한된 세포적 독성과 함께 치밀이음부를 개방하는 그들의 능력에 기초하여 선택된다. 이것을 달성하기 위하여, 기본적인 인간 상피 셀 모델(에피에어웨이, MatTek, Inc., AshlandMA)이 필요로 된다. 이 셀라인은 코에서 발견된 호흡상피와 비슷한 치밀이음부와 함께 가상의 중충원주상피세포 층을 형성한다. 약물 포뮬레이션들은 조직층의 옆쪽 끝상에 배치되고, 약물 정량은 기저조건에 대하여 수행된다. 치밀이음부 개방의 범위는 침투상피전기저항 내의 감소에 의해 측정된다. 셀 생존능력과 세포독성은 각각 MTT와 LDH 분석에 의해 모니터된다. 대표적 스크리닝 실험으로부터의 데이터가 도2-5에 묘사되었다.

도2는 TEER에 대한 데이터를 보여준다. 어떤 예에서 TEER을 조절과 비교했을 때 작거나 감소는 없으며, 여전히 닫혀있는 치밀이음부를 나타낸다. 다른 예들에서는 치밀이음부 개방을 나타내는 TEER에 잠재적으로 떨어진다. 결과들은 시험관내 셀 모델이 치밀이음부를 개방하는데 대한 다른 포뮬레이션들의 능력을 차별화할 수 있다는 것을 나타낸다.

후보 포뮬레이션들을 테스트하면 셀 생존능력은 좋았고 세포독성은 낮았다.

전체에서, 시험관내 스크리닝 모델의 고완료 성향을 반영하여 200개가 넘는 다른 포뮬레이션들이 테스트된다. 모든 가용한 데이터를 사용하여, 다변량 분석들이 각 포뮬레이션 구성이 각 7 출력변수(약물 침투성, 오스몰농도, 냉동되고 촉진된 조건들에서의 안정도, TEER, 그리고 MTT와 LDH 분석들)상에 미치는 효과를 밝히기 위해 수행된다. 다변량 분석들은 출력 파라미터들(p < 0.1)과 상호관계를 갖는 어떤 레벨을 위한 각 포뮬레이션 구성의 초기 분석들로 구성된다. 밝혀진 부분과 함께, 선형 퇴화 또는 단계적 논리적 선택 모델이 사용된다. 결과들은 하나의 부형제는 오스몰 농도와 독성(r²=0.91과 0.27, 각각)에 관계되고, 둘은 PYY_3-36 침투(r² = 0.44)에 관계되며, 셋은 안정도(r² = 0.24)에 영향을 주고, 그리고 다섯은 세포주위 저항(r² = 0.55)에 영향을 준다는 것을 제안한다. 최고의 포뮬레이션들은 이 간단한 버퍼 용액에 비해 최소한 30-75배 PYY_3-36 운반이 증가한 공정에 의해 결정된다.

이러한 분석들에 근거하여, 최적화된 PYY_3-36 포뮬레이션이 더 개발되기 위해 선택된다. 이러한 최적화된 포뮬레이션은 두 개의 안정제, 두 개의 침투 증진인자, 하나의 킬레이트제, 그리고 하나의 pH 5.0 소듐아세테이트 버퍼내의 보존제를 포함한다.

이 포뮬레이션은 USP 보존 효과 테스트(USP Preservative Effectiveness Test)를 통과한다. 약물 침투상의 다양한 구성들의 시너지틱 기여도를 도5에 나타내었다.

같은 오스몰농도에℃서 간단한 버퍼 포뮬레이션들과 비교하면, 최적화된 포뮬레이션은 약물 침투가 100배 이상 증가하는 것으로 나타난다.

마지막으로, 최적화된 포뮬레이션의 전임상과 임상 뱃치는 최종 생성물 포장에서 5℃와 25℃에서 안전하게 준비되고 배치된다. 표 8에 묘사된 기본적인 데이터는 5℃ 또는 25℃에서 한 달간 약물의 본래의 손실이 없음을 밝혀준다.

요약하면, 포뮬레이션 개발의 우리 공정은 적절한 약물 안정성, 비내 점막을 관통한 전달, 그리고 독성과 4 kD 펩티드의 전달할 수 있는 보존 효과와 함께 PYY_3-36 포뮬레이션을 생산한다.

전임상 연구

하루에 쥐, 토끼, 그리고 개에서 일련의 6 전임상 연구가 완료되었다. 모든 종에서 혈장 PYY_3-36 레벨들은 유효한 상품 방사선 면역 측정법에 의해 결정된다.

쥐에서의 생체이용률(혈장내에서 비내적으로 투여된 양에 의해 나누어지는 약물의 몰부분)은 약 6%로, 그리고 토끼에서는 약 8%로 결정된다. 샘플링 이전에 혈장내에서 어떠한 펩티드 퇴화, 또는 단백질 분해효소 저해제의 존재에도 불구하고 샘플링 후 퇴화되는 것과 같이 이러한 값들은 아마도 실제 생체이용률보다 작게 말해지며, 측정된 상기 생체이용률은 감소할 것이다.

비내 독성은 50 ×mg/kg를 기본으로 하는 예상되는 인간 임상복용량의 복용량들에서 14일 연속적으로 쥐와 토끼 모델들에서 측정되었다. 테스트 논문과 관계되는 현미경적이나 육안적인 병리적 발견은 없었다. 임상 관찰들은 없었다.

정맥내 투여에 따른 구조적 독성은 쥐와 토끼 모델에서 평가되었다. IV에서 복용량들은 약 160 ×예상되는 인간 복용량(쥐에서 400 ㎍/kg, 토끼에서 205 ㎍/kg)에 달하며 테스트 논문과 관계되는 현미경적이나 육안적인 발견은 없었다.

심장혈관적 독성은 복용량영역 연구디자인으로 마취된 개에서 평가된다. 최고의 복용량은 33 ×육체 표면 영역에 근거한 예상되는 인간 복용량과 일치하는 60분 이상 24 ug/kg의 PYY_3-36의 주입이다. 결과적인 혈장 레벨들, 30 ng/mL는 약 380 ×기저 송곳니 혈장 레벨이다. 이 혈장 레벨에서는, 동맥혈압의 효과가 없고, 대퇴 혈속도, 또는 QTc 그리고 심장속도(123에서 증가하여 148 bpm방법)에서 단지 작은 변화와 호흡 속도(54 에서 36으로 감소)가 중요해진다.

약동학 데이터는 이러한 전임상 연구들로부터 수집된다. 쥐의 한 연구로부터, 다양한 복용량들에서 비내 투여후의 혈장 레벨들을 도6, 7 그리고 8에 나타내었다. 도6은 5분 간격으로 혈장내에서 보여지는 PYY_3-36, 10-15분에서 도달되는 혈장 농도들(Tmax), 그리고 약 15분인 최종제거 반감기을 도시한다. C_max와 AUC_0-t는 비내 복용량에 대해서 선형적이다.

임상 연구

복용량 영역 임상시험은 PYY_3-36의 비내 포뮬레이션의 안정성, PK, 그리고 생체이용률의 목적과 함께 시작된다. 하루에, 환자들은 처음에 다섯 중 둘의 복용량 그룹들에 가입된다. 한 환자는 그의 목구멍 뒤쪽에서 맛을 느낄 때 보고된다; 하루에 다른 반대되는 이벤트들은 없다.

결 론

포뮬레이션, 전임상, 그리고 초기의 임상실험은 PYY_3-36의 비내 포뮬레이션상에서 시작된다. 포뮬레이션으로의 접근은 세포적 독성의 증가없이 이 4 kD 펩티드의 침투세포막 침투성이 100배 이상이 되는 결과로 된다. 전임상 연구들은 코, 심혈관, 그리고 PYY_3-36에 대한 구조적 독성에 대하여 고려할만한 안전 마진을 나타낸다. 진행중인 복용량 영역 임상연구에 근거하여, 끊임없는 투여 체중손실 연구들이 계획되었다.

실시예 8a

임상 프로토콜

건강한 인간 대상의 비내 펩티드 YY _3-36 (PYY _3-36 )의 코흡수

본 연구의 목적:

본 연구의 목적은 코로부터 혈류로 비내적으로 투여된 PYY_3-36의 흡수를 평가하기 위해서이다. 이것은 임상 1상에서, 단일 복용량, 급속의, 보통의, 건강한 남성과 여성 지원자를 포함하는 복용량들 증대 연구이다. PYY_3-36의 비내의 증가하는 복용량은 안정성 평가, 코내성, 그리고 PYY_3-36의 흡수를 위해 20 ㎍과 200 ㎍사이에서 평가된다. 각각의 독립적인 감각성향의 평가는 또한 측정된다.

PYY_3-36는 각 독립적인 3명의 5 그룹으로 나누어진 15명의 건강한 인간들에게 투여된다.

Group I.

처음의 그룹은 0.1 ml 용액에서 PYY_3-36의 비내 스프레이 20 ㎍에 의해 투여된다.

Group II

두 번째 그룹은 0.1 ml 용액에서 비내적으로 50 ㎍의 PYY_3-36을 받는다.

Group III

세 번째 그룹은 0.1 ml 용액에서 비내적으로 100 ㎍의 PYY_3-36을 받는다.

Group IV

네 번째 그룹은 0.1 ml 용액에서 비내적으로 150 ㎍의 PYY_3-36을 받는다.

Group V

다섯 번째 그룹은 0.1 ml 용액에서 비내적으로 200 ㎍의 PYY_3-36을 받는다.

혈액 샘플들은 수집되고 PYY의 혈장 농도들은 0(예를 들어, 복용전)과 복용 후 5, 7.5, 10, 15, 20, 30, 45, 60 분들에서 결정된다. 대상은 다음에 흡수되고 혈액 샘플을 채취하고 PYY의 농도는 식후 30분에 결정된다. PYY_3-36의 혈장 농도는 유효하게 된 분석 공정을 사용하여 결정된다.

모델 독립적 접근에 따라 각 대상에 대하여, PK 파라미터들 이후는 계산되고, 언제든지 가능하면, PYY_3-36의 혈장 농도에 근거한다:

C_max 최대로 관찰된 농도

t_max 최대 농도에 대한 시간

AUC_o-t 시간 0으로부터 최후의 측정된 농도의 시간까지 선형 사다 리꼴 법칙에 의해 계산되는 농도-시간 커브하의 영역

차후의 파라미터들은 이러한 파라미터들의 정확한 측정이 수행되는 데이터일 때 계산된다:

AUC_0-∽반응식을 사용하여 계산한 무한대로 외삽하는 농도-시간 커브하의 영역:

C_t는 마지막 측정된 농도이고 K_e는 명백한 최종 상속도 상수이다.

K_e 명백한 최종 상 속도상수, K_e는 최종 상 동안 로그 농도대 시간 프로파일의 선형적 퇴화의 기울기의 중요성이다.

t_1/2 명백한 최종 상 반감기(언제든지 가능하면), t_1/2=(1n2)/K_e.

PK 계산들은 WinNonlin(Pharsight Corporation, Version 3.3, or higher)은 상업적 소프트웨어를 사용하여 수행된다. 결과들은 하기의 그래프에 보여진다.

논의와 결과

배경:

각 복용 그룹은 합성과 파이로젠이 없는 인간 PYY_3-36의 특별한 복용량을 포함하는 본 발명의 포뮬레이션과 함께 비내적으로 투여되는 세 개의 대상을 포함한다. 다섯의 투여 그룹은 포뮬레이션 내에서 PYY_3-36의 특별한 복용량의 증가와 함께 조직된다. 혈액 샘플들은 리튬 헤파린(응고를 방지하기 위해)과 아프로토닌(PYY_3-36을 보존하기 위한)을 포함하는 혈액 수집 튜브들로 특별한 인터벌에서 그어진다. 각 혈액 샘플로부터의 혈장은 원심분리기에 의해 수집되고 얼어있는 정제수안에서 보존된다. 각 혈액 샘플의 하나의 얼어있는 정제수는 나스택 분석 서비스(Nastech Analytical Services)로 보내지고 얼어있는 상태로 도착한다. 각 샘플은 방사선면역측정법(RIA)에 의해 PYY농도에 대하여 분석되는 동안 얼려있는 상태로 보관된다.

관찰들:

Group 1: 이 대상의 그룹은 20 마이크로그램의 PYY_3-36가 복용되었다. "20 pg/ml보다 낮은"(방사선면역측정법의 양적인 낮은 제한보다 낮은)의 최소로부터 159 pg/ml의 최대까지 대상에 대한 혈장 PYY 농도들은 다양하다. 측정된 농도들의 경향은 연구대상의 혈액으로의 약물의 중요한 흡수와 일치하지 않는다.

Group 2: 이 대상의 그룹은 50 마이크로그램의 PYY_3-36가 복용되었다. "50 pg/ml보다 낮은"(방사선면역측정법의 양적인 낮은 제한보다 낮은)의 최소로부터 255 pg/ml의 최대까지 대상에 대한 혈장 PYY 농도들은 다양하다. 측정된 농도들의 경향은 연구대상의 혈액으로의 약물의 중요한 흡수와 일치하지 않는다.

Group 3: 이 대상의 그룹은 100 마이크로그램의 PYY_3-36가 복용되었다. "87 pg/ml보다 낮은"(방사선면역측정법의 양적인 낮은 제한보다 낮은)의 최소로부터 785 pg/ml의 최대까지 대상에 대한 혈장 PYY 농도들은 다양하다. 측정된 농도들의 경향은 연구대상의 혈액으로의 약물의 중요한 흡수와 일치하지 않는다.

Group 4: 이 대상의 그룹은 150 마이크로그램의 PYY_3-36가 복용되었다. "45 pg/ml보다 낮은"(방사선면역측정법의 양적인 낮은 제한보다 낮은)의 최소로부터 2022 pg/ml의 최대까지 대상에 대한 혈장 PYY 농도들은 다양하다. 측정된 농도들의 경향은 연구대상의 혈액으로의 약물의 중요한 흡수와 일치하지 않는다.

Group 5: 이 대상의 그룹은 200 마이크로그램의 PYY_3-36가 복용되었다. "48 pg/ml보다 낮은"(방사선면역측정법의 양적인 낮은 제한보다 낮은)의 최소로부터 1279 pg/ml의 최대까지 대상에 대한 혈장 PYY 농도들은 다양하다. 측정된 농도들의 경향은 연구대상의 혈액으로의 약물의 중요한 흡수와 일치하지 않는다.

이러한 결과들은 복용량 독립적인 PYY_3-36의 흡수와 일치하지 않는다.

추가적인 관찰과 데이터:

발견의 요약:

● 50 ug-200 ug의 비내 복용량들에서, 복용량과 독립적인 PYY 흡수 혈장이 있다.

● 55분에서의 제거 반감기와 함께, 상승하는 혈장 농도들의 존속은 예측된 것보다 상당히 길다.

● C_max 와 AUC_0-t는 복용량과 좋은 선형관계를 보인다.

● 주어진 복용량에서 상당한 내적-대상 변이성이 있다.

● 놀랍게도, 본 연구는 비록 실제로 먹은 음식의 양을 측정하지 않고 만약 먹은 음식의 양이 너무 작아 관측이 설명되더라도 PYY의 식후 상승을 측정하는데 실패했다.

● 시각적-신호 스케일 배고픔 의문은 PYY의 복용량의 증가와 배고픔의 감소를 제안한다.

● PYY의 매우 높은 혈장 농도와 관련하여 구역질과 어지러움증이 나타난다.

● 분석에 기초한 값들은 이전에 문헌에서 보고된 그것보다 2-3배 높게 이러한 특징이 나타나는 것들을 설명한다.

주석:

● 어떤 예들 pMol/L은 used as the PYY 측정 유니트들과 같이 사용된다; 다른 분석에서, pg/mL가 사용된다. 변환인자는 pmol/L * 4.05 = pg/mL.

● 어떤 예들에서는, 150분 시간 포인트는 플롯에 디스플레이된다. 엄밀히 말하면, 이것은 식후 데이터점이고, 그리고 아마도 결국 PK 평가를 혼동시킨다. 그러나, 예측하지 못한 발견은 보다 자세한 아래가 식후 30분 시간점이고 이것은 베이스라인값과 다르지 않음을 설명해준다.

PYY 혈장 농도들:

PYY분석은 그 자신의 PYY 혈장 농도분석에 대한 증거들이 되는 이러한 특징을 설명한다. 이 분석을 사용하면, 각 시간점으로부터의 샘플들은 삼중으로 분석된다. 주의할 것은 180개의 데이터점외에서, 3개(1.6%)는 생물학적으로 미심쩍은 "외부자"로 나타난다. 이러한 기초적 분석을 통한 데이터는 이러한 세 개의 데이터점들이 제거된 데이터셋을 사용한다.

[표9]

PK 플롯 의미의 검사는 50-200 ug 복용량들로부터의 복용량 반응을 제안하나, 20 ug 복용량은 노이즈에 들어간다. 따라서 많은 부수적 분석들은 단지 50-200 ug 복용량들로부터 근거한 데이터가 될 것이다. 우리가 또한 제안하는 것은, PYY는 내인성 분자이고, AUC0-t는 AUC0-inf보다 관계가 있기 때문이다.

Tmax 및 Tl/2(반감기의 제거):

비적 생성물에 대하여 24분의 Tmax는 전형적이다. 55분의 반감기의 제거는 예측한 것보다 상당히 길다. 참조문헌은 5-10분의 전형적인 t1/2을 나타낸다. 반감기의 제거는 아마 또한 이후에 일어나는 비내 점막으로부터의 어떤 연속적인 흡수와 펩티드 대사 효과가 있는 포뮬레이션 구성들에 의해 영향을 받는다. 선택적으로, 왜냐하면 분석은 추출공정이 필요한 이러한 특징들을 설명해주고 상기 분석이 추출을 사용하지 않고 기본적인 자유 부분을 분석하는 반면 상기 분석은 자유와 프로틴 결합된 PYY를 둘 다 잡을 것이기 때문이다.

베이스라인(10, 30, 그리고 60분 값들은 마이너스 베이스라인의 의미)대 복용량으로부터의 VAS 변화의미의 이 분석으로부터, 한 관찰:

VAS Q1 "당신은 얼마나 배고픔을 느끼십니까?" 에 대한 대상은 높은 PYY 복용량을 받은 후에 배고픔을 덜 느낀다.

VAS Q3, "당신은 얼마나 먹을 수 있다고 생각합니까?"에 대한 대상은 높은 PYY 복용량을 받은 후에 그들이 덜 먹을 수 있다고 생각한다.

그러나, VAS Q2 "얼마나 배부르다고 생각합니까?"에 대한 대상은 높은 PYY 복용량을 받은 후에 덜 배부르다고 느낀다.

이는 PYY 투여 후의 느낌에 배부름, 포만감, 또는 가스에 의한 고수축은 포함하지 않는 것을 제안한다.

실시예 8a

PYY 인간 투여와 체중 감소

PYY 비내 포뮬레이션은 다음과 같이 만들어진다.

포뮬레이션 pH 5 +/- 0.25

하나 또는 두 개의 스프레이들은 10일 기간 이상 하루마다 인간 대상에 대하여 투여되고 2.5 파운드의 체중 손실이 기록되었다. 기간 동안 10분에서 12시간의 영역에서 투여 후 대상의 배고픔 감소를 기록하였다.

실시예 9

PYY3-36의 볼 포뮬레이션(예측)

이중상의 타블렛은 다음의 방법에 의해 준비된다. 점착성 층은 70 중량부의 폴리에틸렌 옥사이드(Polyox 301N; Union Carbide), 20 중량부의 폴리아크릴산(Carbopol 934P; B. F. Goodrich), 그리고 10 중량부의 압축성 자일리톨/카복시메틸 셀룰로오즈 필터(Xylitab 200; Xyrofin)에 의해 준비된다. 이러한 성분들은 3분간 용기에서 돌려 혼합된다. 혼합물은 다음에 증발접시에 옮기고 재빨리 그래뉼을 무수 에탄올로 반-반죽-정도의 점성이 되도록 적신다. 이 덩어리를 즉시 그리고 재빨리 젖은 그래뉼이 점착되는 14 메쉬(1.4 mm 개방) 스테인레스 스틸 스크린을 통하도록 가한다. 스크린은 구멍뚫린 알루미늄 호일로 덮이고, 그리고 젖은 그래뉼들은 30℃에서 밤새도록 건조된다. 건조된 그래뉼들은 스크린으로부터 제거되고 다음에 그래뉼의 크기를 더 감소시키기 위해 20 메쉬(0.85 mm 개방) 스크린을 통하도록 가한다. 20 메쉬 스크린을 통과하지 못한 입자들은 미세한 것의 양을 최소화하도록 분쇄기와 막자로 간결하게 땅에 놓여지고 다음에 20 메쉬 스크린을 통과하도록 된다. 결과 입자들은 혼합용기에 넣어지고, 0.25 중량부의 스테릭산과 0.06 중량부의 민트 향료가 가해지고 다음에 그래뉼로 블렌드된다.

성분들의 최종 중량부는 69.78% 폴리에틸렌 옥사이드, 9.97% 압축성 자일리톨/카복시메틸 셀룰로오즈 필터, 19.94% 폴리아크릴산, 0.25% 스테릭산, 그리고 0.06% 민트 향료이다. 이 혼합물의 양 50 mg은 0.375인치 지름 다이에 놓여지고 점착성 층의 형성을 위한 3초 끌림 시간을 위해 카버 프레스 모델 C(Carver Press Model C)에서 전압축된다.

활성층은 49.39 중량부의 만니톨, 34.33 중량부의 하이드록시프로필 셀룰로오즈(Klucel L F; Aqualon,Wilmington, Del.) 그리고 15.00 중량부의 소듐 타로콜레이트(Aldrich, Milwaukee, Wis.)로 준비되며, 그리고 3분간 용기 내에서 돌려서 혼합한다. 혼합물은 다음에 증발접시에 옮기고 재빨리 그래뉼을 무수 에탄올로 반-반죽-정도의 점성이 되도록 적신다. 이 덩어리를 즉시 그리고 재빨리 젖은 그래뉼이 점착되는 14 메쉬(1.4 mm 개방) 스테인레스 스틸 스크린을 통하도록 가한다. 스크린은 구멍뚫린 알루미늄 호일로 덮이고, 그리고 젖은 그래뉼들은 30℃에서 밤새도록 건조된다. 건조된 그래뉼들은 다음에 입자의 크기를 더 감소시키기 위하여 20, 40(0.425 mm 개방), 그리고 60(0.25 mm 개방) 메쉬 스크린을 통과하도록 한다. 스크린을 통과하지 못한 입자들은 미세한 것의 양을 최소화하도록 분쇄기와 막자로 간결하게 땅에 놓여지고 다음에 20 메쉬 스크린을 통과하도록 된다. 스크린된 입자들은 중량이 계측되고, 다음에 0.91 중량부의 PYY3-36과 0.06 중량부의 FD&C yellow #6HT 알루미늄 레이크 염료는 기하학적 묽힘에 의해 순차적으로 건조된 입자와 블렌드된다. 염색된 그래뉼은 다음에 혼합용기 내에 놓여지고 3분간 돌림에 의해서 0.25 중량부의 마그네슘 스테레이트(윤활유)와 0.06 중량부의 민트 향료와 함께 블렌드된다. 이 물질의 50 mg 샘플은 부분적으로 압축된 점착성 층의 상부에 놓여지고 두 층은 다음에 볼 전달을 용이하게 하는 이중층의 타블렛을 얻기 위해 3초간의 끌림 시간에 대하여 1.0 톤의 압력으로 압축된다.

이 공정은 활성층이 0.91 중량부의 PYY3-36, 15 중량부의 NaTC, 그리고 84.09 중량부의 필터, 윤활제, 착색제, 포뮬레이션 보조, 또는 향료 약제를 포함하는 잇몸의 타블렛의 결과를 낳는다.

실시예 10

연구는 엔도톡신-프리 PYY3-36대 예1의 공정에 따른 기관지 상피로 침투하는 넌-엔도톡신-프리 PYY3-36A의 능력을 비교하여 수행한다. 그것은 엔도톡신을 포함한 PYY3-36 포뮬레이션을 비교하는 것처럼 기관지 상피를 침투하는 엔도톡신-프리 PYY3-36의 두 배의 양에 대하여 결정한다.

양 포뮬레이션들은 클로로부탄올 2.5 mg/ml, 2 mg/ml의 DDPC, 10 mg/ml의 알부민, l mg/ml의 EDTA 그리고 45 mg/ml의 M-B-CD를 포함한다. 하나의 포뮬레이션은 엔도톡신-프리 PYY3-36 그리고 70 EUs 또는 엔도톡신의 양을 포함하는 다른 포뮬레이션을 포함한다

엔도톡신-프리 PYY3-36 포뮬레이션이 100.16%의 평균 MTT를 가지는 동안 엔도톡신을 포함하는 PYY3-36 포뮬레이션의 평균 MTT는 91.72% 였다.

엔도톡신-프리 PYY3-36 포뮬레이션의 평균 침투가 10.75%인 동안 엔도톡신을 포함하는 PYY3-36 포뮬레이션의 평균 침투는 5.36%이다.

수많은 알려진 점막 전달 강화 부형제들은 엔도톡신-프리 Y2 수용체 결합 펩티드들, 특별히 엔도톡신-프리 PYY3-36와 효과적으로 결합되고, 비흡수 포뮬레이션들, 특별히 구강 전달을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 어떤 부형제들은 참조에 포함되는 다음의 특허출원에 포함된다: 미국특허 제 20030225300, 20030198658, 20030133953, 20030078302, 20030045579, 20030012817, 20030012817, 20030008900, 20020155993, 20020127202, 20020120009, 20020119910, 20020065255, 20020052422, 20020040061, 20020028250, 20020013497, 20020001591, 20010039258, 20010003001.

Y2수용체-결합 펩티드의 구강 포뮬레이션

Y2 수용체-결합 펩티드의 구강 포뮬레이션은 다음의 공정에 따라 준비될 수 있다. 구강 전달을 위한 선호되는 포뮬레이션은 약 0.5 mg/kg 엔도톡신-프리 PYY와 100과 약 200 mg/kg 사이의 하나 또는 그 이상의 점막 전달 강화 부형제를 포함한다.

(예측)

실시예 11

N-사이클로헥사노일페닐알라닌의 제조:

페닐알라닌 메틸 에스터(1 g., 0.0046 몰)을 피리딘 5 mL에 녹인다. 사이클로헥사노일 클로라이드(0.62 mL)가 첨가되고 혼합물은 2시간 동안 교반된다. 반응 혼합물은 염산(1N)과 얼음에 붓는다. 수용액 혼합물은 톨루엔으로 두 번 추출된다. 톨루엔 추출물을 진공하에서 농축하여 1.1 g의 정제되지 않은 N-사이클로헥사노일 페닐알라닌 메틸 에스터를 얻었다.

N-사이클로헥사노일 페닐알라닌 메틸 에스터(0.5 g)은 에틸렌 글리콜 디메틸 에터(20 mL)에 녹는다. 용액은 -70℃로 냉각되고 디아이소부틸알루미늄하이드라이드(2.04 mL of a 1.5M 용액 in 톨루엔)가 가해진다. 결과 반응 혼합물은 -70℃에서 교반된다. 반응은 2N 염산을 방울로 가해 중지된다. 혼합물은 차가운 에틸아세테이트와 함께 추출된다. 에틸아세테이트 용액은 브라인으로 씻어주고 소듐 설페이트로 건조된다. 진공하에서 농축하고 실리카젤 크로마토그래피에 의해 최종적으로 흰색 고체를 얻는다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d6): 9.5(s, 1H), 8.2(d, 1H), 7.2(m,5H), 4.2(m, 1H), 3.2(d, 1H), 2.7(d, 1H), 2.1(m, 1H), 1.6(br. m, 4H), 1.2(br. m, 6H). IR(KBr): 3300, 3050, 2900, 2850, 2800, 1700, 1600, 1500 cm^-1.

Mass Spec.: M+1 m/e 261.

실시예 12

N-아세틸페닐알라닌 알데하이드의 제조:

N-아세틸페닐알라닌 메틸 에스터(4.2 g, 19 mmol)는 에틸렌글리콜디메틸 에터에 녹여진다. 용액은 -70℃로 냉각되고 디아이소부틸알루미늄하이드라이드(25.3 mL of a 1.5M 용액 in 톨루엔, 39 mmol)가 가해진다. 결과 반응 혼합물은 -70℃에서 교반된다. 반응은 2N 염산을 방울로 가해 중지된다. 혼합물은 차가운 에틸아세테이트와 4번, 톨루엔과 4번 추출된다. 에틸아세테이트 용액은 브라인으로 씻어주고 소듐 설페이트로 건조된다. 진공하에서 농축하고 실리카젤 크로마토그래피에 의해 최종적으로 2.7 g의 흰색 고체를 얻는다. NMR은 문헌 Biochemistry, 18 : 921-926(1979)에 보고된 것이다.

실시예 13

3-아세트아미도-4-(p-하이드록시)페닐-2-부타논(N-아세틸타이로신)의 제조:

타이로신(28.9 g, 16mmol), 무수아세트산(97.9 g, 96 mmol) 그리고 피리딘(35 g, 16 mmol)의 혼합물은 100℃로 1시간동안 가열된다. 반응혼합물을 진공하에서 농축하면 최종적으로 노란 오일을 얻는다. 오일을 감압하에서 증류하여 최종적으로 29.9 g의 오일을 얻었다.

¹H NMR(DMSO-d6): NMR(d6-DMSO); 8.2(d, 1H), 7.3(d, 2H), 7.0(d, 2H), 4.4(m, 1H), 3.1(dd, 1H), 2.7(dd, 1H), 2.3(s, 3H), 1.8(s, 3H)

실시예 14

3-아세트아미도-7-아미노-2-부타논(N-아세틸라이시논)의 제조:

예3의 공정에 따라 라이신이 N-아세틸라이시논으로 변환된다.

¹H NMR(DMSO-d6): 8.1(d, 1H), 7.8(br. m. 1H), 4.1(m, 1H), 3.0(m, 2H), 2.0(s, 3H), 1.9(s, 3H) and 1.3(br. m, 6H).

실시예 15

3-아세트아미도-5-메틸-2-부타논(N-아세틸루시논)의 제조:

예3의 공정에 따라 루신이 N-아세틸루시논으로 변환된다.

¹H NMR(DMSO-d6): 8.1(d, 1H), 4.2(m, 1H), 2.0(s, 3H), 1.8(s, 3H), 0.8(d, 6H).

실시예 16

벤젠 설포닐 클로라이드를 이용한 4-(4-아미노페닐)뷰티릭산의 변경:

4-(4-아미노페닐)뷰티릭산(20 g 0.11 moles)을 110 mL의 2N 소듐 하이드록사이드 수용액에 녹인다. 실온에서 약 5분간 교반한 뒤 벤젠 설포닐 클로라이드(14.2 mL, 0.11 moles)는 아미노산 용액에 약 15분간 방울로 가해진다. 실온에서 약 3시간 교반후에 혼합물은 염산의 첨가에 의해 pH 2로 산성화된다. 필터에 의한 분리에 의해 최종적으로 밝은 갈색의 침전물을 얻는다. 침전물은 따뜻한 물로 세척되고 건조된다. 녹는점은 123-25℃이다.

만약 필요하다면 변경된 아미노산은 재결정이나 크로마토그래피에 의해 변경된다.

실시예 17

벤젠 설포닐 클로라이드를 이용한 4-(4-아미노벤조익산)의 변경:

예6의 공정에 따라 4-아미노벤조익산이 4-(페닐설폰아미도)벤조산으로 변환된다.

실시예 18

벤젠 설포닐 클로라이드를 이용한 4-아미노페닐아세트산, 4-아미노히퓨릭산, 그리고 4-아미노메틸벤조산의 변경:

예6의 공정에 따라, 4-아미노페닐아세트산, 4-아미노히퓨릭산, 그리고 4-아미노메틸벤조산은 각각 4-(페닐설폰아미도)페닐아세트산, 4-(페닐설폰아미도)히퓨릭산, 그리고 4-(페닐설폰아미도메틸)벤조산으로 변환된다.

실시예 19

벤젠 설포닐 클로라이드와 아미노산의 변경:

16 아미노산의 혼합물이 이전의 화학적 변경으로 준비되었다. 혼합물의 구성요소를 하기의 표에 요약되었다. 65 g의 아미노산 혼합물([--NH2]그룹의 전체농도 = 0.61 몰)은 실온에서 760 mL의 1N 소듐 하이드록사이드 용액(0.7625 당량)에 녹인다. 20분간 교반한 후, 벤젠 설포닐 클로라이드(78 ml, 1 당량)가 약 20분간 가해진다. 반응 혼합물은 다음에 가열없이 2.8시간동안 교반된다. 약간의 침전이 일어난다면, 추가적인 NaOH 용액을 pH 9.3에 이르도록 가하게될 것이다. 반응 혼합물은 실온에서 밤새도록 교반한다. 그런 후, 혼합물은 묽은 염산(38%, 1:4)을 사용하여 산성화되고 크림색의 물질이 침전된다. 침전 결과물은 따르기에 의해 분리되고 소듐 하이드록사이드(2N)에 녹는다. 이 용액은 다음에 진공하에서 감소되어 동결건조기에서 건조시켜 노란색의 고체를 얻는다.

[표10]

실시예 20

벤젠 설포닐 클로라이드를 사용한 5 아미노산 혼합물의 변경:

86.1 g(0.85 moles of NH₂)의 아미노산 혼합물(하기의 표에 나타냄)은 643 mL의 2N 소듐하이드록사이드 수용액(1.5 당량)에 녹여진다. 실온에서 30분간 교반후 벤젠 설포닐 클로라이드(108 mL, 0.86 moles)를 아미노산 용액에 약 15분간 부분적으로 가한다. 실온에서 2,5 시간동안 교반후, 반응 혼합물의 pH(pH 5)는 추가적인 2N 소듐 하이드록사이드 용액으로 pH 9로 조절된다. 반응 혼합물은 실온에서 밤새도록 교반된다. 그런 후, 반응 혼합물의 pH를 추가적인 묽은 염산 수용액(4:1, H₂0 : HC1) 으로 pH 2.5로 조절하면 변경된 아미노산의 침전이 형성된다. 상층은 버려지고 따르기에 의해 결과물인 노란 고체가 분리되며, 물로 세척하고 2N 소듐하이드록사이드 용액에 녹인다. 용액은 진공하에서 감소되며 밤새도록 동결건조하면 노란색의 고체를 얻는다.

[표11]

실시예 21

벤조일 클로라이드를 사용한 5 아미노산 혼합물의 변경:

86.1 g(0.85 moles of NH₂)의 아미노산 혼합물(예20의 표에 나타냄)은 647 mL의 2N 소듐 하이드록사이드 수용액(1.5 당량)에 녹여진다. 실온에서 10분간 교반후 벤조일 클로라이드(99 mL, 0.85 moles)를 아미노산 용액에 약 10분간 부분적으로 가한다. 실온에서 2,5 시간동안 교반후, 반응 혼합물의 pH(pH 12)는 추가적인 묽은 염산 수용액(4:1, H₂0 : HC1)으로 pH 2.5로 조절하면 변경된 아미노산의 침전이 형성된다. 1시간동안 침전 후, 따르기에 의해 결과물인 침전물이 분리되며, 물로 세척하고 2N 소듐 하이드록사이드 용액에 녹인다. 용액은 진공하에서 감소되며 흰색의 고체로 정제되지 않은 변경된 아미노산을 얻는다(예상수율 220.5 g).

실시예 22

벤젠 설포닐 클로라이드를 사용한 L-발린의 변경:

L-발린(50 g, 0.43 mol)은 실온에서 10분간 교반에 의해 376 mL의 2N 소듐 하이드록사이드 수용액(0.75 당량)에 녹여진다. 다음에 벤젠 설포닐 클로라이드(68.7 mL, 0.38 몰, 1.25 당량)를 실온에서 아미노산 용액에 약 20분간 가한다. 실온에서 2 시간동안 침전이 형성된다. 침전물을 추가적인 200 mL의 2N 소듐 하이드록사이드 용액이 더해지는 것에 의해 녹는다. 30분간 더 교반해 준 후, 묽은 염산 수용액(4:1, H₂0 : HCl)을 반응 혼합물의 pH가 2.6에 이르도록 가해진다. 변경된 아미노산의 침전물이 형성되고 따르기에 의해 회복된다. 이 물질을 2N 소듐 하이드록사이드 용액에 녹이고 진공하에서 건조하면 흰색 고체가 분리되며, 정제되지 않은 변경 아미노산의 예상수율은 84.6 g(77%)이다.

실시예 23

벤젠 설포닐 클로라이드를 사용한 페닐알라닌 메틸 에스터의 변경:

L-페닐알라닌 메틸 에스터(15 g, 0.084 mol)은 디메틸포름아마이드(DMF)(100 mL)와 여기에 첨가된 피리딘(30 mL)에 녹는다. 히퓨릴 클로라이드(16.6 g, 100 mL DMF에서 0.084 mol)의 용액은 두 부분으로 아미노산 에스터 용액에 즉시 가해진다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반한다. 반응 혼합물은 다음에 진공하에서 감소되고 1N 소듐하이드록사이드 용액에 녹는다. 용액은 메틸 에스터가 프리 카복실산으로 가수분해 되도록 70℃에서 3시간동안 가열된다. 그런 후, 용액은 묽은 염산 수용액(3:1, H₂0/HCl)을 사용하여 pH 2.25로 산성화한다. 검과 같은 침전물이 형성되고 이것은 회수된 후 1N 소듐 하이드록사이드 용액에 녹인다. 용액을 진공하에서 감소시키면 예측되는 18.6 g의 정제되지 않은 변경된 아미노산 생성물을 얻는다. 아세토니트릴로부터 재결정한 후, 순수한 변경된 페닐알라닌(예상되는 수율 12 g)이 희색 파우더로 회수된다. m.p. 223-225℃.

실시예 24

PYY(3-36)의 복용용액의 준비

테스트 튜브내의 568 mg의 아세틸 페닐알라닌 알데하이드, 132 mg의 카보메톡시 페닐알라닐루신, 그리고 100 mg의 아세틸-Phe-Leu-Leu-Arg 알데하이드에 2.9 ml 의 15% ethanol이 가해진다. 용액은 교반되고 NaOH(1.0 N)가 가해져 pH가 7.2로 올라간다. 물이 가해져 전체 부피가 4.0mL가 되게 한다. 샘플은 200 mg/mL의 매개체 농도를 갖는다. PYY(3-36)(800 ㎍) 이 용액에 가해진다. 전체 PYY3-36 농도는 200g/mL이다.

비슷한 공정에 따라 매개체 구성성분으로 668 mg의 아세틸 페닐알라닌 알데하이드와 132 mg의 카보메톡시 페닐알라닐루신을 가지는 두 번째 용액과 매개체로서 아세틸 페닐알라닌 알데하이드를 가지는 세 번째 용액이 준비된다. 각 용액은 200 ug/mL의 엔도톡신-프리 PYY(3-36) 농도를 갖는다.

실시예 25

변경된 아미노산/PYY(3-36) 구성성분의 준비

보호된 엔도톡신-프리 PYY3-36을 포함하는 변형된 아미노산 마이크로구의 준비

예 9와 동일하게 제조된 변형된 아미노산 혼합물은 40℃에서, 100 mg/ml의 농도에서 증류된 물(pH 7.2)에 녹는다. 용액은 다음에 0.2 micron 필터와 필터되고 온도는 40℃로 유지된다. PYY3-36(Bachem)은 150 mg/ml의 농도에서 시트르산(1.7N)과 젤라틴(5%)의 수용액에 녹는다. 이 용액은 다음에 40℃로 가열된다.

두 개의 가열된 용액은 다음에 1:1(v/v)로 혼합된다. 마이크로구 서스펜션 결과는 다음에 유리솜과 함께 필터되고 1000 g에서 50분간 원심분리된다. 펠렛은 원래의 부피보다 5에서 7배 부피가 되도록 0.85N 시트르산에 재부유된다. 재부유된 펠렛의 PYY3-36 농도는 HPLC에 의해 결정된다. 추가적인 마이크로구는 PYY3-36를 제외하고 상기 공정에 따라 제조된다. 이러한 "빈 마이크로구"는 만약 필요하다면 최종 복용 서스펜션으로 보호된 연어빛 PYY3-36 마이크로구 제조를 희석하는데 사용된다.

(b) 용해성의 변형된 아미노산 매개체/PYY3-36 시스템의 제조

PYY3-36를 포함하는 용해성 아미노산 복용 제조는 적절한 농도로 증류된 물(pH 8)에 변형된 아미노산 물질을 녹이는 것에 의해 제조된다. 용액은 40℃로 가열되고 다음에 0.2 micron 필터와 필터된다. PYY3-36은 또한 증류된 물에 녹고, 다음에 구강 투여 이전에 변형된 아미노산 용액으로 가해진다.

PYY3-36의 폐 전달

(예측)

하기 서술된 것처럼 제조되는 전달체 화합물은 아마도 폐 전달에 대한 엔도톡신-프리 Y2 수용체-결합 펩티드와 하나 또는 하나이상의 화합물 또는 염, 폴리 아미노산 또는 펩티드를 간단히 혼합하는 것에 의해 전달 매개체처럼 직접적으로 사용될 것이다.

투여 혼합물들은 투여 직전에 활성 성분의 수용액과 매개체의 수용액을 혼합하는 것에 의해 제조된다. 선택적으로, 매개체와 생리적 또는 화학적 활성 성분은 제조공정 동안 혼합될 수 있다. 용액은 선택적으로 포스페이트 버퍼염, 시트르산, 아세트산, 젤라틴, 그리고 검 아카시아와 같은 부가물들을 포함힐 것이다.

수많은 알려진 폐 전달 방법들은 폐로 PYY의 전달을 개선하기 위해 엔도톡신-프리 Y2 수용체-결합 펩티드들, 특별히 PYY3-36을 사용할 수 있다. 다음의 제한 없는 특허출원들은 페 전달에 대한 여기서의 참조에 포함된다: 미국특허 제 20030223939, 20030215514, 20030215512, 20030209243, 20030203036, 20030198601, 20030183228, 200301885765, 20030150454, 20030124193, 20030094173.

실시예 26

매개체의 제조

2-(4-(N-살리실로일)아미노페닐)프로파노익 산(매개체 B)의 제조

58.6 g(0.355 mol)의 2-(4-아미노페닐)프로파노익 산과 500 ml의 메틸렌 클로라이드의 슬러리는 90.11 ml(77.13 g. 0-710 mol)의 트리메틸실릴 클로라이드와 처리되고 120분간 환류되도록 가열한다. 반응 혼합물은 0℃로 냉각되고 184.44 ml(107.77 g, 1.065 mol)의 트리에틸아민으로 처리된다. 5분간 교반한 후, 이 혼합물은 70.45 g(0.355 mol)의 O-아세틸살리실로일 클로라이드와 150 ml의 메틸렌 클로라이드의 용액과 함께 처리된다. 반응 혼합물은 25℃로 따뜻해지고 64시간 동안 교반된다. 휘발성 물질들은 진공하에서 제거된다. 잔여물은 2N 소듐 하이드록사이드 용액에서 한시간 동안 교반하고 2 M 황산 수용액과 산성화된다. 고체는 에탄올/물로부터 두 번 재결정되어 갈색의 고체를 얻는다. 필터에 의한 분리는 53.05 g(52% 수율)의 2-(4-(N-살리실로일)아미노페닐)프로파노익 산의 예측되는 수율 내이다. 특성. 용해도: 200 mg/m: 200 mg+350 ㎕ 2N NaOH+650 ㎕ H₂0-pH-7.67. 분석: C, 67.36; H, 5.3; N, 4.91.

소듐 2-(4-(N-살리실로일)아미노페닐)프로피오네이트(매개체 B의 소듐염)의 제조

53.05 g(0.186 mol)의 2-(4-(N-살리실로일)아미노페닐)프로파노익 산과 300 ml의 에탄올의 용액은 22 ml의 물에 녹은 7.59 g(0.190 mol)의 NaOH로 처리된다. 반응 혼합물은 25℃에서 30분간 교반하고 0℃에서 30분간 교반한다. 결과물인 엷은 노란색 고체는 필터에 의해 분리되어 52.61 g 의 소듐 2-(4-(N-살리실로일)아미노페닐)프로피오네이트를 준다. 특성. 용해도: 200 mg/ml 깨끗한 용액, pH=6.85. 분석 C, 60.45; H, 5.45; N, 3.92; Na, 6.43. 녹는점 236-238℃

매개체 C의 소듐염의 제조

자석 교반기를 장비한 2L 둥근바닥 플라스크와 환류 콘덴서에 디클로로메탄(250 ml)내의 3-(4-아미노페닐)프로피오닉 산(15.0 g. 0.084 moles, 1.0 당량)의 서스펜션이 맡겨진다. 클로로트리메틸실란(18.19 g, 0.856 moles, 2.0 당량)은 한번에 가해지고, 혼합물은 아르곤하에서 1.5 시간동안 환류되도록 가열된다. 반응은 실온으로 냉각되도록 하고 얼음 용기(내부 온도 < 10℃)에 놓여진다. 환류 콘덴서는 트리에틸아민(25.41 g, 0.251 moles, 3.0 당량)을 포함하는 추가적인 퍼넬(funnel)과 대치된다. 트리에틸아민은 약 15분간 방울로 가해지고, 첨가하는 중에 노란색 고체가 형성된다. 퍼넬은 디메톡시벤조 클로라이드(8.31 g, 0.091 moles, 1.09 당량)의 용액(100 mL)을 포함하는 또다른 추가 퍼넬에 의해 대치된다. 용액은 약 30분간 방울로 가해진다. 반응은 또 다른 30분간 얼음용기에서 교반되고 실온에서 3시간 교반된다. 디클로로메탄은 진공에서 증발시키고 갈색 오일을 얻는다. 갈색 오일은 얼음용기에서 냉각되고 포화된 소듐 비카보네이트의 얼음-차가운 용액(250 ml)이 가해진다. 얼음용기는 제거되고, 반응은 1시간 동안 교반하여 깨끗한 갈색 용액을 얻는다. 용액은 농축된 HCl로 산성화하고 1시간 동안 ca SC에서 보관된다. 혼합물은 디클로로메탄(3 times, 100 mL)에 의해 추출되고 소듐 설페이트로 건조한 다음, 염은 필터하여 제거하고 디클로로메탄은 진공하에서 제거한다.

12 g의 매개체 C 산은 따뜻함과 함께 에탄올 75 mL에 녹는다. 이 용액에 8.5 M의 소듐 하이드록사이드(1.02 몰당량, 1.426 g in 4.5 mL 물)용액이 가해진다. 혼합물은 15분간 교반된다. 약 3/4의 에탄올이 진공하에서 제거되고 100 mL의 n-헵탄 오일결과물에서 침전의 형성을 일으키기 위해 가해진다. 고체는 50℃ 진공하에서 건조된다.

Analysis: C₁₉H₂₀NO₅Na0.067H₂O: C, 62.25; H, 5.54; N, 3.82; Na, 6.27.

N-(4-메틸살리실노일)-8-아미노카프릴릭 산(매개체 D)의 제조

(a) 올리고의 제조(4-메틸살리실레이트)

무수아세트산(32 mL, 34.5 g, 0.338 mol, 1.03 eq), 4-메틸살리실릭 산(50 g, 0.329 mmol, 1.00 eq), 그리고 자일렌(100 mL)을 1L, 자석 교반 바, 온도계, 그리고 콘덴서를 장치한 네 가지 목이 있는 플라스크에 가해진다. 플라스크는 뿌연 흰색 혼합물의 가열이 시작되는 모래용기에 배치된다. 반응 혼합물은 90℃부근에서 깨끗한 노란색 용액으로 된다. 대부분의 휘발성 유기물질(자일렌과 아세트산)은 3시간 이상 Dean-Stark 트랩에서 증류된다(135-146℃). 증류는 용기 온도가 204℃까지 천천히 증가하는 동안 또 다른 한 시간 동안 계속되고 증류된 물질이 천천히 똑똑 떨어지도록 한다. 잔여물은 희고 여전히 뜨거운 알루미늄 트레이에 부어진다. 식히면 깨지기 쉬운 노란색 유리가 형성된다. 고체는 세밀한 파우더로 남아있다. 올리고 (4-메틸살리실레이트)는 더 이상의 정제없이 사용되도록 얻는다.

(b) N-(4-메틸살리실노일)-8-아미노카프릴릭 산의 제조

포타슘 카보네이트(45 mL, 43.2 g, 0.313 mol, 0.95 당량), 8-아미노카프릴릭 산(41.8 g, 262 mol, 798 당량), 그리고 물(20 mL)의 7M 용액을 자석 교반 바, 콘덴서, 추가적 퍼넬이 장치된 1 L 둥근 바닥 플라스크에 가한다. 흐린 흰색의 혼합물은 올리고(4-메틸살리실레이트)(44.7 g, 0.329 mmol 1.0 당량)와 다이옥산(250 mL)이 용액을 30분 이상 첨가해 처리된다. 반응 혼합물은 3시간 동안(이 시간에 반응은 HPLC에 의해 완결되었는지 결정된다) 90℃로 가열된다. 깨끗한 오렌지 반응 혼합물은 30℃로 냉각되고 50% 황산 수용액(64 g)으로 pH=2로 산성화 된다. 고체 결과물은 필터에 의해 분리된다. 흰색 고체는 1170 mL의 50% 에탄올-물에서 재결정된다. 고체는 필터에 의해서 회수되고, 50℃의 진공 오븐에서 18시간 이상 건조된다. N-(4-메틸살리실노일)-8-아미노카프릴릭 산은 흰색 고체로 분리된다(30.88 g, 52%); mp=113-114℃. Analysis: C₆H₂₃NO₄ : C, 65.51; H, 7.90; N, 4.77.

PYY(3-36)의 수용액은 다음에 제조되고 PYY(3-36) 구성을 생성하기위해 폐안으로 스프레이될 수 있는 하나 또는 하나 이상의 매개체와 혼합된다. 구성 결과에 대한 PYY3-36의 적절한 농도는 약 400 pg/mL이 되어야 한다. 미국특허출원 제20030072740호를 보라.

실시예 27

혈장내의 PYY의 농도의 결정을 위한 전체 추출 방사선면역측정법

1.0 서론:

방사선면역측정법은 인간 혈장내에서 인간 펩티드 YY(3-36)(hPYY)의 농도를 측정하기 위해 개발되었다. 샘플들은 항응혈제(EDTA)와 단백질 분해효소 저해제(aprotinin)와 함께 수집되고 냉동된다. 분석은 4일 공정이다. 첫째 날에는 샘플들, 조절들, 그리고 표준물질들이 알코올로 추출되고 건조된다. 둘째 날에 모든 샘플들은 재구성되고 hPYY에 직접 반대되는 다클론 토끼 항혈청과 혼합된다. 셋째 날에는 요오드표식 hPYY가 가해진다. 넷째 날에는 특별한 침전약제(염소 항토끼 IgG과 보통 토끼 혈청)가 가해진다. 원심분리에 의해 프리 트레이서와 분리되고, 그리고 결합 트레이서는 감마 카운터내에서 카운트된다. 농도는 표준 커브의 삽입에 의해 계산되며 분석수행은 질 조절 샘플들에 의해 조절된다.

2.0 물질들:

2.1 페닌슐러 (Peninsula) PYY 키트(Peninsula Laboratories, Cat. No. S-2043-0001)

2.2 알코올 시약(Fisher Inc., Cat. No. A995-4)(또는 동등한)

2.3 벗겨진 인간 혈장 (리튬 헤파린과 함께, 단식되고, 혼주된) Golden West Biologies Inc.(Cat. No.,SD1020-H) (Analytical SOP &num; A-003)

2.4 얼음배스(Ice Baths)(Fisher, Cat No. 11-676-36)(또는 동등한)

2.5 10 mL 피펫(Fisher Cat. No.13-678-11E)(또는 동등한)

2.6 Nastech QC (3-36)로부터의 표준제조 인간 PYY (Bachem Cat. No. H8585)

2.7 증류된 물(Milli-Q Millipore, Cat. No. ZMQ56VFT1)(또는 동등한)

2.8 트리톤(Triton) X-100(Sigma, Cat. No. T-9284)(또는 동등한)

2.9 알루미늄 호일(Fisher, Cat. No.01-213-3)(또는 동등한)

2.10 아프로티닌 (Aprotinin)(ICN Biomedicals Inc. Cat. No. 190779)(또는 동등한)

2.11 2x75 mm 튜브(Evergreen Scientific, Cat. No. 214-2023-010)(또는 동등한)

2.12 12x75 mm 튜브 캡들(Evergreen Scientific, Cat. No. 300-2912-G20)(또는 동등한)

2.13 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브들(Fisher, Cat. No.05-402-25) (또는 동등한)

2.14

3.0 기기들:

3.1 Wallac WIZARD 1470 자동적 감마 카운터(Perkin Elmer, Model No. 1470-002)(또는 동등한)

3.2 Isotemp Basic Freezer, -70℃(Kendro Laboratory Products, Model No. C90-3A31)(또는 동등한)

3.3 CentriVap 농축기 (Labconco, Cat. No.7810000)(또는 동등한)

3.4 VX-2500 다중튜브 보텍서(VWR, Cat. No. 58816-115)(또는 동등한)

3.5 Marathon21000R 원심분리기(Fisher, Cat. No. 04-977-21000R)(또는 동등한)

3.6 스윙 버키트 로터(Fisher, Cat. No. 04-976-006)(또는 동등한)

3.7 모터로 된 피펫-에이드(Fisher, Cat. No. 13-681-15E)(또는 동등한)

3.8 Eppendorf 마이크로피펫

3.8.1 2 ㎕ - 20 ㎕(Fisher, Cat. No. 21-371-6)(또는 동등한)

3.8.2 20 ㎕-200 ㎕(Fisher, Cat. No.21-371-10)(또는 동등한)

3.8.3 100 ㎕ - 1000 ㎕(Fisher, Cat. No. 21-371-13)(또는 동등한)

3.9 Eppendorf 반복 피펫기(Fisher, Cat. No. 21-380-9)(또는 동등한)

3.10 Eppendorf 반복 피펫기 조화-팁들

3.10.1 2.5 mL(Fisher, Cat. No. 21-381-331)(또는 동등한)

3.10.2 25 mL(Fisher, Cat. No. 21-381-115)(또는 동등한)

3.11 양적인 이동 피펫(Fisher, Cat. No. 21-169-10A)(또는 동등한)

4.0 공정

DAY 1

4.1 분석에 필요한 시약과 샘플들을 녹인다. 만약 충분한 양이 필요하지 않으면 1 ×농도(RIAB)로 RIA 버퍼를 제조한다.

4.2 혼주되고 벗겨진 인간 혈장내에서 표준 커브 샘플들을 제조한다. 만약 12.8 ㎍g/mL의 시작 농도를 사용한다면 다음과 같이 제조한다.

4.2.1 튜브 O로 990 ㎕ RIAB를 가한다.

4.2.2 튜브 A로 990 ㎕ 혼주된 혈장을 가한다.

4.2.3 튜브들 B-H로 500 ㎕ 혼주된 혈장을 가한다.

4.2.4 튜브O 보텍스로 10 ㎕ 12.8 g/mL 표준을 가한다.

4.2.5 튜브 A 보텍스로 튜브 O로부터의 10 ㎕ 용액을 가한다.

4.2.6 튜브 B 보텍스로 튜브 A로부터의 500 ㎕ 용액을 가한다.

4.2.7 튜브 C 보텍스로 튜브 B로부터의 500 ㎕ 용액을 가한다.

4.2.8 튜브 H를 통하여 4.2.7과 같이 반복 희석된다(도식 #1에 도시하였다).

4.3 만약 필요한 경우 테스트하기 위한 미지의 인간 혈장 샘플을 희석한다. 샘플들은 혼주되고 벗겨진 인간 혈장내로 희석되어야 한다.

4.4 테스트되기 위한 NSB, TB, 모든 표준들, QC 샘플들, 그리고 인간 혈장 샘플들에 대한 빈 튜브들에 1.2 mL의 차가운 알코올을 가한다.

4.5 NSB와 TB 튜브들 캡, 보텍스에 400㎕의 혼주되고 벗겨진 인간 혈장을 가한다.

4.6 개개의 표준 커브 튜브들 H-A(도식 #1에 도시하였다) 캡 보텍스로 400㎕의 4.2.5 로부터 4.2.8에서 각각 제조된 표준 샘플을 가한다.

4.7 개개의 튜브들 캡 보텍스로 400 ㎕의 QC 샘플들을 가한다.

4.8 샘플 400 ㎕의 테스트된 각각의 샘플들의 겔을 그것의 개개의 튜브들 캡 보텍스에 가한다.

4.9 모든 샘플들은 30-60분간 얼음위에서 배양한다.

4.10 압축기상의 차가운-트랩 스위치를 켠다.

4.11 모든 튜브들은 3000 rpm, 4℃에서 15분간 원심분리 한다.

4.12 위에 뜨는 각 샘플로부터 새로운 비어있는 튜브들의 셋으로 1.3 mL의 위에 뜨는 것을 이동한다. 만약 즉시 돌리지 않는다면 얼음배스 또는 2-8℃에서 보관한다.

4.13 압축기에 샘플들을 놓는다.

4.14 샘플들은 40℃에서 2시간동안, 다음에 실온에서 전체 5시간 또는 건조되는 동안에 대하여 돌려야만 한다.

4.15 건조된 샘플들을 제거하고 2-8℃에서 밤새도록 보관한다.

DAY 2

4.16 2-8℃ 냉각기로부터 건조된 튜브들을 제거한다.

4.17 각 튜브에 100 ㎕의 4ㅧRIA 버퍼 농도를 가한다.

4.18 각 튜브에 30초 동안 모든 추출물이 완전히 재구성된 것을 확신하도록 100 ㎕의 0.6% TX100을 가한다(부착 #1).

4.19 모든 샘플들은 30-60분간 얼음위에서 배양한다.

4.20 물 각 튜브 보텍스에 200 ㎕의 증류된 물을 가한다.

4.21 개개의 튜브로 100 ㎕의 각 샘플 추출물을 운반한다.

주의: NSB, TB, TC, 표준 커브 샘플들, 그리고 QC들은 전형적으로 삼중의 반응이 되므로 각 샘플당 3개의 튜브를 필요로 한다. 인간 혈장 샘플들은 샘플 유용성에 의존하여 어떠한 변동에서 테스트되는 경우가 많다.

4.22 Peninsula Laboratories 키트 인서트에 서술된 대로 토끼 항 PYY를 제조한다.

4.23 각 NSB 튜브에 100 ㎕의 RIAB를 가한다.

4.24 각 TC 튜브에 200 ㎕의 RIAB를 가한다.

4.25 모든 남아있는 튜브들 보텍스에 대한 100 ㎕의 토끼 항 PYY를 가한다.

4.26 호일로 덮고 2-8℃에서 밤새도록 보관한다.

DAY 3

4.27 2-8℃ 냉각기로부터 튜브들을 제거한다.

4.28 ¹²⁵I-펩티드 YY 트레이서(부착 #2)를 제조한다.

4.29 모든 튜브들, 캡 그리고 보텍스에 100 ㎕의 제조된 트레이서를 가한다.

4.30 2-8℃에서 밤새도록 보관한다.

DAY 4

4.31 2-8℃ 냉각기로부터 튜브들을 제거한다.

4.32 Peninsula Laboratories 키트 인서트에 서술된 대로 염소 항토끼 IgG 혈청(GARGG)과 보통 토끼 혈청(NRS)을 제조한다.

4.33 각 튜브(TC 튜브들을 제외하고)에 100 ㎕의 GARGG를 가한다.

4.34 각 튜브(TC 튜브들을 제외하고), 보텍스에 100 ㎕의 NRS를 가한다.

4.35 실온에서 90-120분 배양한다.

4.36 튜브들(TC 튜브들을 제외하고), 보텍스에 500 ㎕의 RIAB를 가하고 즉시 원심분리한다.

주의: 500 ㎕의 RIAB는 단지 원심분리 이전에 튜브들로 가해져야 한다. 단지 원심분리가 준비된 튜브들에 대하여 RIAB를 가한다. 500 ㎕의 RIAB는 추가적인 튜브들이 원심분리가 준비되었을 때 가해야만 한다.

4.37 튜브들(500 ㎕의 RIAB를 포함한)은 3000 rpm, 4℃에서 15분간 원심분리 한다. TC 튜브들은 원심분리 하지 않는다.

4.38 위에 뜨는 원심분리된 튜브들로부터 위에 뜨는 것을 빨아낸다.

4.39 튜브들은 감마 카운터상에서 카운팅하기 위해 디자인된 검은 랙들에 놓는다. 첫 번째 랙은 적절한 프로그램 번호를 붙여야만 한다. 다음에 모든 랙들은 아무런 프로그램 번호도 포함하지 않는다. 샘플들은 다음의 순서에 의해 가해져야 한다:

4.39.1 NSB 튜브들

4.39.2 TB 튜브들

4.39.3 TC 튜브들

4.39.4 표준 튜브들(증가농도)

4.39.5 QC 샘플들(3 농도들)

4.39.6 미지의 인간 샘플들

4.39.7 QC 샘플들(3 농도들)

4.40 모든 샘플들이 카운트된 후 비어있는 검은 랙에는 중지 표시를 부착한다.

4.41 카운팅을 시작하기 위해 감마 카운터 키패드상의 '시작'을 누른다.

4.42 CPM 결과를 보기위해서는 엔터에 대한 감마 카운터 키패드상의 E'를 누른다.

5.0 결과의 평가

5.1 다음의 가이드는 분석에서 분리물의 확인과 거절에 적용된다. 분리물과 같이 결과를 한정하고 결과의 마지막 계산을 포함되지 않게 하기위해 따르는 조건들의 모든 것은 만나야 한다.

5.1.1 QC들과 미지의 샘플들:

5.1.1.1 모든 복제물들의 % CV는 20%가 넘어야 한다.

5.1.1.2 평가를 위해 최소한 3개의 결과가 있어야 한다.

5.1.1.3 의심스런 분리물과 다음의 가장 가까운 값 사이의 차이는 20%가 넘어야 한다.

5.1.1.4 여분의 결과의 높음과 낮음의 차이는 20%보다 낮아야 한다.

5.1.2 표준 커브 샘플들:

5.1.2.1 모든 복제물들의 % CV는 15%보다 훨씬 커야한다.

5.1.2.2 평가를 위해 최소한 3개의 결과가 있어야 한다.

5.1.2.3 의심스런 분리물과 다음의 가장 가까운 값 사이의 차이는 20%가 넘어야 한다.

5.1.2.4 여분의 결과의 높음과 낮음의 차이는 15%보다 낮아야 한다.

6.0 분석 특징

6.1 QC 샘플들은 다음의 농도들에서 제조된다. 각 농도에서 두 개의 샘플이 분석에서 테스트된다. 테스트된 6개의 QC 샘플들중 4개는 다음의 영역(보통 농도의 30%)안에 들어와야 한다. 어떠한 농도에서 테스트된 두 개의 QC들 중 최소한 하나는 받아들여질 수 있는 데이터를 위한 분석의 영역 안에 있어야 한다.

6.1.1 QC1(100 pg/mL) 70-130 pg/mL

6.1.2 QC2(200 pg/mL) 140-260 pg/mL

6.1.3 QC3(500 pg/mL) 350-650 pg/mL

6.2 표준 커브 파라미터는 TBD를 필요로 한다.

2. 도식 #1

PYY RIA 표준:

부착 #1

0.6% TX-100

시약: 0.6% TX-100

물질: Milli-Q 증류된 물

TX-100 제조: 1) 50 mL의 Milli-Q 증류된 물 측정

2) 양적인 이동 피펫을 사용하여 300㎕의 TX-100을 가한다.

3) 웰을 혼합한다.

부착 #1

¹²⁵I-펩티드 PYY 트레이서

시약:¹²⁵I-펩티드 PYY 트레이서

물질: l ×RIA 버퍼

¹²⁵I-펩티드 PYY

제조: 1) 1mL의 l ×RIA 버퍼와 트레이서를 재구성한다.

2) 감마 카운터상의 트레이서의 양을 측정한다. 트레이서 튜브로 10 ㎕의 재구성된 트레이서를 운반한다. 프로그램 번호 30이 부착된 감마 카운터에 대한 검은 랙에 놓는다.

3) 뒤쪽의 정지 랙과 함께 감마 카운터상에 랙을 놓는다.

4) 시작을 위하여 시작'을 다음에 CPM 결과를 보기 위하여 'E'를 누른다.

5) 다음과 같이 제조를 위한 트레이서 (X ㎕)의 양과 필요로 하는 RIAB를 결정한다:

6) X ㎕의 ¹²⁵I-펩티드 YY와 Y mL의 RIAB를 결합한다. 웰을 혼합한다.

실시예 28

단백질인 안정제의 NPY 포뮬레이션 프리의 제조

단백질인 안정제의 잠재적 프리인 NPY의 비내 투여에 적절한 PYY 포뮬레이션은 하기에 서술한 포뮬레이션을 가지므로 제조된다.

12. 물 약 3/4이 비이커에 가해지고 교반 플레이트상에서 교반 바와 교반되고 그리고 소듐 시트레이트가 완벽히 녹을 때까지 가해진다.

13. EDTA가 다음에 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

14. 다음에 시트르산이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

15. 메틸-(3-사이클로덱스트린)이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

16. 다음에 DDPC가 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

17. 다음에 락토오스가 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

18. 다음에 소르비톨이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

19. 다음에 클로로부탄이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

20. 다음에 NPY(3-36)이 가해지고 녹을 때까지 천천히 교반된다.

21. pH가 확실히 5.0 ±0.25이 되는지 체크한다. 묽은 염산 또는 묽은 NaOH를 가해 pH를 조절한다.

22. 최종 부피가 되도록 물을 가한다.

[표12]

포뮬레이션 pH 5 +/-0. 25

오스몰농도∼250

실시예 29

아래의 표 13에서 보여주는 바와 같이 NPY(3-36)의 농도가 15 mg/mL인 것을 제외하고 두 번째 포뮬레이션이 상기한 바대로 제조된다.

[표13]

포뮬레이션pH 5 +/-0. 25

실시예 30

단백질인 안정제의 췌장 펩티드(PP) 포뮬레이션 프리의 제조

단백질인 안정제의 잠재적 프리인 PP의 비내 투여에 적절한 PYY 포뮬레이션은 하기에 서술한 포뮬레이션을 가지므로 제조된다.

23. 물 약 3/4이 비이커에 가해지고 교반 플레이트상에서 교반 바와 교반되고 그리고 소듐 시트레이트가 완벽히 녹을 때까지 가해진다.

24. EDTA가 다음에 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

25. 다음에 시트르산이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

26. 메틸-(3-사이클로덱스트린)이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

27. 다음에 DDPC가 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

28. 다음에 락토오스가 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

29. 다음에 소르비톨이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

30. 다음에 클로로부탄이 가해지고 완벽히 녹을 때까지 교반된다.

31. 다음에 NPY (3-36)이 가해지고 녹을 때까지 천천히 교반된다.

32. pH가 확실히 5.0 ±0.25이 되는지 체크한다. 묽은 염산 또는 묽 은 NaOH를 가해 pH를 조절한다.

33. 최종 부피가 되도록 물을 가한다.

[표14]

포뮬레이션 pH 5 +/-0. 25

오스몰농도∼250

실시예 31

아래의 표 15에서 보여주는 바와 같이 PP(3-36)의 농도가 15 mg/mL인 것을 제외하고 두 번째 포뮬레이션이 상기한 바대로 제조된다.

[표15]

포뮬레이션 pH 5 +/-0. 25

본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 이용될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.

[발명의 배경]

비만과 그에 관련된 질병들은 미국을 비롯한 전 세계에서 일반적으로 매우 심각한 공공의 건강을 위협하는 문제들이다. 과체중은 제2형 당뇨병으로 알려진 질환의 심각한 위험 인자이자, 심장 질환의 중요한 위험 인자이다. 비만은 고혈압, 동맥경화, 뇌일혈, 발작, 담낭 질환, 골관절염, 심장마비, 다낭성난소증후군, 유방암, 전립선암과 같은 생식기 질환 및 일반적 마비의 증가된 발병율에 대한 인식된 위험 인자이다. 그것은 평균 수명을 단축시키고 상기 언급한 심각한 공동-병적상태의 주요 인자로서 작용한다. 또한 그것은 감염, 정맥류, 흑색 극세포증, 습진, 운동부적응성, 인슐린 저항성, 고혈압 고콜레스테롤혈증, 담석증, 정형외과적 손상, 및 혈전 색전성 질환과 같은 이상을 초래한다. 또한 비만은 "X 증후군" 또는 인슐린 저항성 증후군으로 불리는 상황에 대한 주요 위험 인자이다.

Y2 수용체와 결합하는 어떤 종류의 펩티드들은 포유류에 말초적으로 투여되었을 때 체중을 감소시키는 결과를 보여준다. 상기 Y2 수용체-결합 펩티드들은 상기 Y2 수용체에 결합하는 뉴로펩티드들이다. 뉴로펩티드들은 펩티드성 뉴론들과 내분비계/파라크린 세포들에 의해 합성된 커다란 전구체 단백질들로부터 유래된 작은 펩티드들이다. 종종 상기 전구체들은 다양한 생물학적인 활성을 가진 펩티드들을 포함한다. 뇌에는 매우 다양한 뉴로펩티드들이 존재하는데, 이것은 첫 번째 유전자 전사의 선택적인 스플라이싱과 다양한 전구체 과정에 기인하는 결과이다. 상기 뉴로펩티드 수용체들은 적절한 신호를 활성화하고 리간드들 사이에서 구별되기 위하여 제공된다. 이러한 Y2 수용체-결합 펩티드들은 YY 펩티드(PYY), 뉴로펩티드 Y(NPY) 및 췌장 펩티드(PP)를 포함한 펩티드 군에 속해 있다.

NPY는 36-아미노산 펩티드이며 포유류 뇌에서 식별되는 가장 풍부한 뉴로펩티드이다. NPY는 중앙과 말초신경계 양자에서 중요한 조종자이며 정신운동상 활동, 음식물 섭취량, 중앙 내분비계 분비 및 심장혈관계에서 활동성에 영향을 미치는 생리적 변수의 다양한 영역에 영향을 미친다. 고농도 NPY는 관상동맥, 대뇌, 및 신장 혈관에 공급되는 교감신경계에서 발견되며 혈관수축을 야기시킨다. NPY 결합 자리들은 비장, 장막, 뇌, 대동맥 평활근, 신장, 고환, 및 태반을 포함한 다양한 조직들에서 식별되었다.

뉴로펩티드 Y(NPY) 수용체 약리학은 현재 상기 췌장 폴리펩티드 군 내에서 구조 활성 관계에 의해 정의된다. 이러한 군은 NPY를 포함하는데, 이것은 처음에는 뉴론들에서 합성되며; PYY, 이것은 처음에는 소화관에 있는 내분비계 세포들에 의해 합성되고; PP, 이것은 처음에는 상기 췌장에 있는 내분비계 세포들에 의해 합성된다. 이러한 약 36개의 아미노산 펩티드들은 상기 펩티드의 중앙 부분에 "PP-폴드"를 가진 복잡한 헬리카 구조로 이루어져 있다. 특징은 잔기 1 내지 8번에서 폴리프롤린 헬릭스를, 잔기 9 내지 14번에서 베타-턴을, 잔기 15 내지 30번에서 알파-헬릭스를, 잔기 30 내지 36번에서 외부로 돌출된 C-말단을, 그리고 생물학적 활성에 중요한 것으로 나타나는 카르복시 말단 아미드를 포함하는 것이다. 상기 펩티드들은 Y1, Y2, Y3, Y4 및 Y5로 알려진 적어도 다섯 개의 수용체 서브타입으로 정의되어진다. NPY에 의한 Y1 수용체 인식은 상기 펩티드의 N-말단과 C-말단 모두에 작용한다; 34번째에서 글루타민의 프롤린으로의 전환이 적절하게 잘 이루어진다. NPY에 의한 Y2 수용체 인식은 초기에는 상기 펩티드의 4개의 C-말단 잔기들(아르기닌³³-글루타민³⁴-아르기닌³⁵-트립토판³⁶-NH₂)에 의존하며 알파-헬릭스에 의해 진행된다; 34번째에서 글루타민의 프롤린으로의 전환이 적절하게 잘 이루어지지 않는다. Y1과 Y2를 구별하는 약리적 특성 중 하나는 상기 Y2 수용체(상기 Y1 수용체가 아님)가 상기 NPY 펩티드 카르복시-말단 단편 NPY(13-36 및 상기 PYY 단편 PYY 22-36에 대한 높은 친화력을 가지고 있다는 점이다.

펩티드 YY(1-36)[PYY(1-36)]으로 알려진 36개의 아미노산[YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY,SEQ ID NO. : 1]은 개인적으로 주사에 의해 말초적으로 투여되는 경우 체중을 감소시키는 결과를 생성시키는 것으로 공지되어 있다. 따라서 이는 비만 및 그와 관련된 질병을 치료하기 위한 약제로 사용될 수 있다{Morley, J. Neuropsychobiology 21 : 22-30 (1989)}. 그것은 이후 Y2 수용체에 PYY를 결합시키는 효과를 생성시키는 것으로 밝혀졌는데, 상기 Y2 수용체에 Y2 길항제의 결합은 탄수화물, 단백질 및 식사 분량의 섭취를 감소시키는 결과를 야기시켰다 {Leibowitz, S. F. et al.Peptides, 12. 1251-1260 (1991)}. PYY의 선택적인 분자형태는 PYY(3-36) IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY [SEQ ID NO.: 2]이다{Eberlein, Eysselein et al. Peptides 10 : 797-803, (1989)}. 이러한 단편은 인간과 개 장 추출물에서 전체 PYY와 교차면역반응 약 40% 및 한끼 식사 후 대략 50% 이상 빠른 상태에서 전체 혈청 PYY 교차면역반응 약 36%로 이루어진다. 그것은 디펩티딜 펩티다아제-IV(DPP4) 작용에 의한 PYY의 생성물인 것 같다. PYY3-36은 공지된 바에 의하면 상기 Y2 및 Y5 수용체에서 선택된 리간드인데, 이것은 절단된 N-말단(예를 들어, C-말단 단편) NPY 유사물을 선택하는 데 약리적인 특징을 나타낸다. 그것은 또한 잔여기를 단지 22-36개만 가지는 PYY 단편이 여전히 상기 Y2 수용체에 결합할 수 있는 것을 나타낸다. 그러나 만약 상기 펩티드의 어떤 카르복시 말단이 분해된 경우라면, 상기 Y2 수용체에 결합할 수 있는 능력을 상실하게 된다. 그러므로 PYY 길항제는 PYY 전체-길이 중에서 일부 서열을 가진 펩티드이며, 상기 시상하부의 정확한 핵에서 Y2 수용체와 결합할 수 있다. 상기 사실에 비추어 보건대, 상기 PYY라는 용어는 PYY 전체-길이 및 Y2 수용체와 결합하는 어떤 PYY 단편을 모두 지칭하는 의미이다. PYY 및 PYY3-36은 특별히 엔도톡신에 의해 야기되고 쇼크를 발생함으로써 생명을 위협하는 저혈압을 치료하기 위해 정맥주사 및 피하주사 형태로 투여될 수 있는데(미국특허 제4,839,343호), 이는 포유류에 있어서 액체, 비경구적인 방법, 정맥주사, 또는 피하주사에 의한 투여에 의해 췌장암의 증식을 저해할 수도 있으며(미국특허 제5,574,010호), 그리고 비만을 치료할 수도 있다(Morley, J. Neuropsychobiology 21 : 22-30 (1989) 및 미국특허출원 제20020141985호). 또한 PYY는 나트륨-의존성 공전달 영양분의 위장내 흡수를 강화시킴에 의해 상기 언급된 환자의 체중을 감소시키기 위하여 효과적인 복용량을 사육 동물 또는 인간에게 비경구적, 경구적, 비내, 직장내, 및 국부적인 루트로 투여될 수 있음이 개시되어 있다(미국특허 제5,912, 227호). 그러나 상기 비만 및 당뇨병을 포함한 관련 질병의 치료를 위하여, 상기 투여 방법은 정맥주사 IV 형태에 제한되었는데, PYY3-36의 선택적인 투여에 대해 어떠한 다른 형태의 투여도 적절하게 효과적이지 않았기 때문이다. 상기 선행 기술 중에서 어떠한 것도 점막(예를 들어, 비내, 입가, 경구내) 전달을 강화하기 위해 변형된 첨가제들과 결합한 PYY 또는 PYY(3-36)를 포함한 형태를 제공하지 않았으며 나아가 그것들은 어떠한 투여 방법을 위한 펩티드 형태와 결합하는 엔도톡신-프리 Y2-수용체의 가치를 기술하지도 않았다. 따라서 PYY3-36 투여에 대한 포뮬레이션과 방법을 개발할 필요가 요구되었다.

[발명의 요약]

본 발명은 비만을 치료하고 한 개체의 체중-감소를 증진시키고, 당뇨병을 예방 또는 치료하기 위하여 PYY, 췌장 펩티드(PP) 및 NPY와 같은 Y2 수용체-결합펩티드의 점막, 특히 비내 전달용으로 효과적이고 새로운 방법 및 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 Y2 길항제가 비내 투여될 때, 포유류의 혈청에서 5 pmol 이상, 바람직하게는 10 pmol 이상의 상기 Y2 수용체-결합펩티드의 농도를 증가시킬 수 있게 하기 위하여 상기 비내 점막 포뮬레이션으로 상기 Y2 수용체-결합펩티드가 전달된다. 나아가 바람직한 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 비내 투여될 때, 포유류의 혈청에서 상기 Y2 수용체-결합펩티드의 농도가 10 pmol 이상, 더욱 바람직하게는 20 pmol 이상까지 증가시킬 수 있었다. 150 ㎍이 비내 투여되었을 때, 포유류 혈청 내에서 상기 Y2 길항제의 농도는 혈청 1ℓ당 40 pmol 이상까지 증가될 수 있었다. 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 200 ㎍ 비내 투여되었을 때, 본 발명의 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 혈청 1ℓ당 80 pmol 이상까지 증가가 유도된다.

상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 PP, PYY 또는 NPY 펩티드가 바람직하고 상기 포유류는 인간이 바람직하다. 가장 바람직한 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY 펩티드인 PYY(3-36)이며, 포유류는 인간이다.

또한 본 발명은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 50 ㎍ 이상을 포함한 약물 복용량이 상기 포유류에 투여되었을 때, 포유류 혈청 내에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 5 pM 이상까지 증가시킬 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 100 ㎍ 이상을 포함한 약물 복용량이 상기 포유류에 투여되었을 때, 포유류 혈청 내에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 20 pM 이상까지 증가시킬 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 150 ㎍ 이상을 포함한 약물 복용량이 상기 포유류에 투여되었을 때, 포유류 혈청 내에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 30 pM 이상까지 증가시킬 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션에 관한 것이다.

또한 본 발명은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 200 ㎍ 이상을 포함한 약물 복용량이 상기 포유류에 투여되었을 때, 포유류 혈청 내에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 60 pM 이상까지 증가시킬 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션에 관한 것이다.

또한 본 발명은 포뮬레이션을 안정화시키는 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드들인 상기 Y2 수용체-길항제의 비내 포뮬레이션에 직접적으로 관련된 것이다. 더욱 구체적으로 상기 포뮬레이션은 알부민과 같은 단백질 및 젤라틴과 같은 콜라겐-유도 단백질이 바람직하다.

본 발명에 따른 점막제 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물 및 pH 3-6.5인 용해제로 이루어져 있다. 상기 용해제는 사이클로덱스트린이 바람직하다.

본 발명에 따른 실시예에서 점막제 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물, 용해제(바람직하게는 사이클로덱스트린) 및 적어도 하나의 폴리올(바람직하게는 2개의 폴리올들)로 이루어져 있다. 선택적인 실시예에서 상기 포뮬레이션은 다음에 언급하는 하나 또는 모든 시약을 포함한다: 킬레이트제, 표면-작용제(표면활성제) 및 완충제.

본 발명에 따른 다른 실시예에서 상기 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물, 킬레이트제 및 용해제로 이루어져 있다.

본 발명에 또 따른 다른 실시예에서 상기 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물 및 pH 3-6.5인 킬레이트제로 이루어져 있다.

본 발명에 또 따른 다른 실시예에서 상기 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물, 킬레이트제 및 적어도 하나의 폴리올(바람직하게는 2개의 폴리올들)로 이루어져 있다. 나아가 다른 실시예는 다음에 언급하는 하나 이상의 시약을 포함한다: 표면-작용제, 용해제 및 완충제.

본 발명에 또 따른 다른 실시예에서 상기 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물 및 적어도 2개의 폴리올들(락토오스 및 소르비톨과 같은)로 이루어져 있다. 상기 포뮬레이션에 부가된 첨가제들은 용해제, 킬레이트제, 하나 이상의 완충제 및 표면-작용제를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 방법 및 조성물에 따른 Y2 수용체-결합 펩티드 길항제의 비내 전달 강화는 포유류 질환자에 있어서 다양한 질병과 상태를 치료하기 위하여 이러한 시약들의 효과적인 약학적 사용에 적용된다.

본 발명은 액체 또는 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션을 제공함에 의해 상기의 필요성을 충족시킨다. 상기 포뮬레이션은 실질적으로 폴리펩티드 또는 단백질인 안정제가 없다. 상기 액체 PYY 포뮬레이션은 물, PYY 및 폴리올들, 표면-작용제들, 용해제들 및 킬레이트제들로 이루어진 군으로부터 적어도 하나 이상 선택된 첨가제로 이루어져 있다. 상기 포뮬레이션의 pH는 3-7이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 4.5-6.0 이고, 가장 바람직하게는 5.0 ±0.3 이다.

본 발명의 다른 실시예는 본 발명의 수용성 Y2 수용체-결합 포뮬레이션인데, 이는 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 폴리올 및 표면-작용제로 이루어지는데, 상기 포뮬레이션의 pH는 약 3-6.5 이며, 상기 포뮬레이션은 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

본 발명의 다른 실시예는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션인데 이는 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 폴리올 및 용해제로 이루어지는데, 상기 포뮬레이션의 pH는 약 3-6.5 이며, 상기 포뮬레이션은 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

발명의 다른 실시예는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션인데 이는 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 용해제 및 표면-작용제로 이루어지는데, 상기 포뮬레이션의 pH는 약 3-6.5 이며, 상기 포뮬레이션은 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

본 발명의 다른 실시예는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션인데 이는 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 용해제, 폴리올 및 표면-작용제로 이루어지는데, 상기 포뮬레이션의 pH는 약 3-6.5 이며, 상기 포뮬레이션은 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

본 발명의 다른 측면에서, 상기 안정한 수용성 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드 및 폴리올들, 표면-작용제들, 용해제들 및 킬레이트제들로 이루어진 군으로부터 적어도 하나 이상 선택된 첨가제로 이루어진 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드포뮬레이션을 생성하기 위하여 탈수된다. 상기 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드포뮬레이션은 알부민, 콜라겐과 같은 단백질 또는 폴리펩티드 또는 콜라겐과 같은 콜라겐-유도 단백질인 안정제가 없다. 상기 탈수반응은 동결건조, 분사건조, 염-유도 침전법 및 건조, 진공 건조, 회전식 증발법 또는 초임계 CO₂ 침전법과 같은 다양한 방법에 의해 이루어진다.

한 실시예에서 상기 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드는 Y2 수용체-결합 펩티드, 폴리올 및 용해제로 이루어지는데, 상기 포뮬레이션은 실질적으로 단백질인 안정제가 없다.

다른 실시예에서 상기 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 폴리올 및 표면-작용제로 이루어지는데, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

다른 실시예에서 상기 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 표면-작용제 및 용해제로 이루어지는데, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

본 발명의 다른 실시예에서 상기 탈수된 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 폴리올, 표면-작용제 및 용해제로 이루어지는데, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 실질적으로 단백질 또는 폴리펩티드인 안정제가 없다.

어떠한 용해제도 사용될 수 있지만, 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란, 메틸-β-사이클로덱스트린 및 키토산으로 이루어진 군으로부터 하나 선택되는 것이 바람직하다.

일반적으로 폴리올은 락토오스, 소르비톨, 트리할로오스, 수크로오스,만노오스 및 그에 따른 유도체 및 동족체로 이루어진 군으로부터 선택된다.

표면-작용제는 L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC), 폴리소르베이트 20(Tween 20), 폴리소르베이트 80(Tween 80), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 세틸 알코올, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리비닐 알코올(PVA), 라놀린 알코올 및 소르비탄 모노올레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.

바람직한 포뮬레이션에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드포뮬레이션은 또한 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA) 또는 에틸렌 글리콜 테트라아세트산(EGTA)과 같은 킬레이트제로 이루어져 있다. 또한 클로로부탄올 또는 벤질코니움 클로라이드와 같은 방부제는 미생물의 생육을 억제하기 위하여 상기 포뮬레이션에 첨가될 수 있다.

상기 pH는 일반적으로 시트르산 나트륨, 시트르산, 아세트산나트륨 및 아세트산과 같은 완충제를 사용하여 조절된다. 선택적인 완충제는 아세트산 및 아세트산나트륨 또는 숙신산 및 수산화나트륨이다.

바람직한 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY, PP 또는 NPY 펩티드이며, PYY(3-36) 펩티드가 더욱 바람직하다.

본 발명은 또한 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도가 0.1-15.0 mg/mL인 포뮬레이션을 포함하는데, 1.0-2 mg/mL이 바람직하고, 상기 수용성 용액의 pH는 3.0-6.5인데, 바람직하게는 pH가 5.0 ±0.3인 경우이다.

나아가 본 발명은 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션을 포함하는데 이때 상기 폴리올의 농도는 약 0.1~10% (w/v)이고 특별한 경우는 약 0.1~3% (w/v)이다.

본 발명은 또한 상기 표면-작용제의 농도가 약 0.00001~5% (w/v)인 포뮬레이션을 포함하는데, 바람직하게는 약 0.0002~0.1% (w/v)이다.

본 발명은 또한 상기 용해제의 농도가 약 1~10% (w/v)인 포뮬레이션을 포함하는데, 바람직하게는 약 2~5% (w/v)이다.

상기 완성된 용액은 여과될 수 있으며 본 발명이 속한 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 널리 알려져 있는 방법 및 동결건조 장치의 제조자의 지시에 따른 방법을 사용하여 냉동건조, 동결건조 될 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에서 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드와 약리적으로 수용 가능한 매개체로 이루어져 있는데, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 생체내 조직 침투율 분석에 있어서, 물, 염화나트륨, 완충제 및 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성된 조절 포뮬레이션에 비하여 적어도 1% 이상, 바람직하게는 3%, 더욱 바람직하게는 6%라는 더 높은 침투율을 가지는데, 이는 경상피 전기 저항 분석에 의해 결정되며 실험예 2 및 7에서 나타나고 있다. 바람직한 실시예에서, 상기 Y2 수용체-결합 포뮬레이션은 나아가 표면-작용제, 용해제, 폴리올 및 킬레이트제로 이루어진 군에서 적어도 하나 선택된 첨가제로 이루어진다. 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY 펩티드, NPY 펩티드 또는 PP 펩티드가 바람직하다.

본 발명에 따른 다른 구체예에서 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 포뮬레이션 100 ㎍이 포유류의 비내에 투여되었을 때, 포유류 혈장 내에서 혈장 1ℓ당 적어도 5 pmole 이상, 바람직하게는 10, 20, 40, 60, 80 pmole 이상 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 농도를 증가시킬 수 있다.

실시예에서, 본 발명에 따른 상기 강화된 전달 방법 및 조성물들은 포유류 환자에 있어서 비만 및 섭식 장애의 예방과 치료를 위하여 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 길항제의 효과적인 점막 전달 치료를 제공한다. 본 발명의 한 관점에서, 비내 투여에 적합한 약학적 포뮬레이션들은 Y2 수용체-결합 펩티드 및 상기에서 기술된 하나 이상의 비내 전달 강화제들의 치료에 효과적인 복용량을 결정하는데, 이러한 포뮬레이션들은 포유류 환자에 있어서 비만 및 섭식 장애의 발병과 진행을 예방하기 위한 본 발명의 비내 점막 전달 방법에 특히 효과적이다. Y2 수용체-결합 펩티드 길항제 및 하나 이상의 비내 전달 강화제들의 치료에 효과적인 비내 점막 전달 복용량은, 환자의 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 길항제의 농도를 높이고 포유류 환자에 있어 음식물 섭취량을 조절하게 하여 비만 또는 섭식 장애 증상을 완화시킨다.

본 발명에 따른 상기 강화된 전달 방법들 및 조성물들은 포유류 환자에 있어서 다양한 질병과 상태의 예방 및 치료를 위하여 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 전달 치료에 효과적이다. Y2 수용체-결합 펩티드는 다양한 점막 경로를 통해 투여될 수 있는데, 예를 들어 비내 점막 상피 조직, 기관지 조직 또는 폐 점막 상피, 상기 경구 표면 또는 상기 경구 및 소장 점막 표면에 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 접촉됨에 의해 이루어진다. 구체적인 실시예에서 상기 방법들과 조성물들은 직접 전달되거나 비내 전달(예컨대, 비(nasal) 점막 전달 또는 비내(intranasal) 점막 전달)로 포뮬레이션되어 전달된다.

본 발명의 한 관점에서, 비내 투여에 적합한 약학적 포뮬레이션들은 Y2 수용체-결합 펩티드 및 상기에서 기술된 하나 이상의 비내 전달 강화제들의 치료에 효과적인 복용량을 결정하는데, 이러한 포뮬레이션들은 포유류 환자에 있어서 비만, 당뇨병, 암 또는 영양부족 또는 암과 관련된 소모성 질환의 발병과 진행을 예방하기 위한 본 발명의 비내 점막 전달 방법에 특히 효과적이며 또한 알츠하이머병, 대장암, 결장선암, 췌장암, 췌관상피암, 유방암을 치료하는 것과 마찬가지로 비만에 대한 만성적으로 널리 알려진 하나 이상의 증상을 완화시키는데 효과적이다.

본 발명의 다른 관점에서 약학적 포뮬레이션들 및 방법들은 비타민 E 숙신산과 결합한 Y2 수용체-결합 펩티드 길항제의 직접적인 투여다. 비타민 E 숙신산과 결합한 Y2 수용체-결합 펩티드 길항제는 암(예를 들어, 대장암, 췌관상피암 또는 유방암)의 발병율을 감소시키거나 진통을 예방 또는 완화하기 위하여 투여될 수 있다.

본 발명의 다른 관점에서 엔도톡신-프리 Y2 수용체 결합 펩티드들(예를 들어, PYY(3-36))의 사용은 엔도톡신이 제거되지 않은 펩티드들에 비하여 점막 전달을 증가시킨다. 따라서 약학적 포뮬레이션에서 상기 엔도톡신-프리 Y2 수용체 결합 펩티드들의 사용은 비강, 구강, 폐, 질, 직장 등과 같은 점막 전달을 포함한 비-주사 방식의 투여에 적합하다.

상술한 점막 Y2 수용체-결합 펩티드포뮬레이션들 및 본 발명에 따른 전달과 준비 방법들은 포유류 환자들에 있어서 Y2 수용체-결합 펩티드의 점막 전달을 증가시킨다. 상기 조성물들과 방법들은 조합된 포뮬레이션을 제공하고 하나 이상의 점막 전달 강화제들과 함께 하나 이상의 Y2 수용체-결합 펩티드의 투여에 관여한다. 상기 점막 전달 강화제들은 다음과 같은 포뮬레이션들과 방법들이 달성되기 위하여 선택된다 (a) 용해제들; (b) 전하 변환제들; (c) pH 조절제들; (d) 분해효소 저해제들; (e) 점성 또는 점액제거제들; (f) 섬모정지제들(ciliostatic agents); (g) 세포막 침투 강화제들 (예를 들어, (i) 계면활성제, (ii) 담즙염, (ii) 인지질 또는 지방산 첨가제, 혼합된 마이셀, 리포솜, 또는 매개체, (iii) 알코올, (iv) 에나멜제, (v) NO 공여자 화합물, (vi) 긴 체인 양친매성 분자 (vii) 작은 소수성 침투 강화제; (viii) 나트륨 또는 살리실산 유도체; (ix) 아세토아세트산의 글리세롤 에스테르 (x) 사이클로덱스트린 또는 베타-사이클로덱스트린 유도체, (xi) 중간길이 사슬 지방산, (xii) 킬레이트제, (xiii) 아미노산 또는 그에 따른 염, (xiv) N- 아세틸아미노산 또는 그에 따른 염, (xv) 선택된 세포막 성분에 대한 분해효소, (ix) 지방산 합성 저해제, (x) 콜레스테롤 합성 저해제; 또는 (xi) (i)-(x)의 세포막 침투 강화 화합물 시약들; (h) 일산화질소(NO) 자극제들, 키토산, 및 키토산 유도체들과 같은 상피조직 연결 생리학에 관한 조절제들; (i) 혈관확장제들;(j) 선택적인 전달-강화제들; 및 (k) 안정된 전달 매체, 매개체, 지지물들 또는 복합-형상 형질. 그리고 상기 Y2 수용체-결합 펩티드(들)는 점막 전달 강화를 위하여 상기 활성화제를 안정화시키기 위해 효과적으로 구조화되고, 결합되며, 포함되고, 캡슐화되거나 결속된다.

본 발명에 따른 다양한 실시예에서 펩티드 YY는 하나, 둘, 셋, 넷 또는 그 이상으로 상기 (a)-(k)에서 언급된 상기 점막 전달 강화제와 결합된다. 이러한 점막 전달-강화제는 단독으로 또는 펩티드 YY 또는 약학적으로 수용가능한 포뮬레이션에서 관련 결합된 다른 물질 또는 전달 매체와 함께 혼합될 수 있다. 상기 기술에 따른 하나 이상의 점막 전달-강화제를 가진 상기 펩티드 YY의 포뮬레이션은 포유류 환자의 점막 표면에 상기 물질을 전달함에 있어서 상기 펩티드 YY의 생리적 수용가능성의 증가를 제공한다.

따라서 본 발명은 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 포뮬레이션을 점막을 통하여 투여함으로써 포유류에 있어서 식욕을 억제하고, 체중 감소를 촉진하며, 음식물 섭취를 감소시키거나 비만 및/또는 당뇨병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 Y2 수용체 50 ㎍이 상기 포유류 점막에 투여되었을 때, 상기 포유류 혈장 내 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도는 혈장 1ℓ당 적어도 5 pmol 이상 증가하고 바람직하게는 혈장 1ℓ당 10 pmol 이상 증가한다. 그러한 포뮬레이션들의 예들이 상기에 기술되었다.

나아가 본 발명은 포유류에 있어서 식욕을 억제하고, 체중 감소를 촉진하며, 음식물 섭취를 감소시키거나 비만을 치료하는 Y2 수용체-결합 펩티드 투여, 점막흡수용 약제 생산에 대한 Y2 수용체-결합 펩티드의 사용을 제공한다. 상기 Y2 수용체 50 ㎍이 상기 포유류 점막에 투여되었을 때, 상기 포유류 혈장 내 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도는 혈장 1ℓ당 적어도 5 pmol 까지 증가한다. 상기 Y2 수용체 100 ㎍이 상기 포유류 점막에 투여되었을 때, 상기 포유류 혈장 내 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도는 혈장 1당 적어도 20 pmol까지 증가한다. 상기 150 ㎍이 투여되었을 때, 상기 농도

본 발명에 따른 상기 약학적 포뮬레이션 내에서 펩티드 YY의 점막흡수용으로 효과적인 투여량은 예를 들어, 신체 1 kg당 약 0.001~100 pmol, 또는 신체 1 kg당 약 0.01~10 pmol, 또는 신체 1 kg당 약 0.1~5 pmol이다. 다른 실시예에서 펩티드 YY의 투여량은 신체 1 kg당 약 0.5~10 pmol 이다. 바람직한 실시예에서 비내 투여량은 50~400 ㎍이며, 더욱 바람직하기로는 100~200 ㎍이며, 가장 바람직하기로는 약 100~150 ㎍이다. 본 발명의 상기 약학적 포뮬레이션들은 하루에 한 번 이상 투여될 수 있으며, 또한 일주일에 세 번 또는 한 주 및 적어도 96주 사이에 주에 한 번 또는 상기 환자의 생애 동안 규칙적으로 투여될 수 있다. 어떤 구체예에서, 본 발명의 상기 약학적 포뮬레이션들은 하루에 한 번 이상, 하루에 두 번, 하루에 네 번, 하루에 여섯 번, 또는 하루에 여덟 번 투여되었다.

비내 전달-강화제들은 비강 내 점막 표면 속이나 표면을 가로 질러서 펩티드 YY 전달을 강화하는 기능을 한다. 수동적으로 약물들을 흡수시키는데, 약제 전달에 상기 세포 주위 및 세포를 통과한 경로들이 상기 pKa, 분배 계수, 분자 반경들 및 상기 약제의 복용량, 이러한 약제는 상기 흡수된 표면 영역과 약제가 전달된 상기 혈관 환경의 pH에 의존적이다. 본 발명의 상기 비내 전달-강화제는 pH 조절제일 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 포뮬레이션의 pH는 약물 전송에 있어서 세포 주위 및 세포를 통과한 경로들을 경유한 펩티드 YY의 흡수에 영향을 미치는 인자이다. 한 구체예에서 본 발명의 상기 약학적 포뮬레이션의 pH는 약 3~6.5로 적용된다. 다른 구체예에서, 본 발명의 상기 약학적 포뮬레이션의 pH는 약 4.0~5.0으로 적용된다. 일반적으로 상기 pH는 5.0±0.3 범위이다.

[도면의 간단한 설명]

제1도는 고온인 40℃ 에서 PYY3-36의 안정성에 미치는 3.0~7.4까지 pH값의 영향력을 도시하고 있다.

제2도는 침투 강화제의 TEER에 대한 데이터를 도시하고 있다.

제3도는 시험 PYY 포뮬레이션들의 세포 생존력을 도시하고 있다.

제4도는 시험 포뮬레이션들의 사이토톡식 효과들을 도시하고 있다. 제2도에서 제4도에 언급된 약어는 다음과 같이 정의된다.

EN1= PBS pH 5. 0

EN2 = L-아르기닌(10% w/v)

EN3 = 폴리-L-아르기닌(0.5% w/v)

EN4 = 감마-사이클로덱스트린(1% w/v)

EN5 = 알파-사이클로덱스트린(5% w/v)

EN6 = 메틸-베타-사이클로덱스트린(3% w/v)

EN7 = n-카프르산 나트륨(0.075% w/v)

EN8 = 키토산(0.5% w/v)

EN9 = L-알파-포스파티딜콜린 디데카닐(3.5% w/v)

EN10 = S-니트로소-N-아세틸페니실아민,(0.02% w/v)

EN11 =팔모토일-DL-카르니틴(0.5% w/v)

EN12 = 플루로닉-127(0.3%w/v)

EN13 = 소듐 니트로프루시드(0.3% w/v)

EN14 = 소듐 글리코콜레이트(1% w/v)

제5도는 약물 침투에 대한 상기 다양한 조성 성분들의 서너지 효과를 나타낸다. 상기 제5도에 있어서 EN1은 DDPC이고, EN2는 메틸-β-사이클로덱스트린이며, EX1은 EDTA이다.

제6도는 쥐 혈장 내에서의 PYY3-36 농도를 나타내고 있는데, □은 투여량이 4.1 ㎍/kg인 경우이고, △은 투여량이 41 ㎍/kg인 경우이며, ○는 투여량이 205 ㎍/kg인 경우를 도시하고 있다.

제7도는 쥐에 PYY3-36를 비내 투여한 결과 투여량 ㎍/kg과 혈중 농도 Cmax- Cbas pg/mL에 따른 투여량 리니어티(linearity)를 도시하고 있다.

제8도는 쥐에 PYY3-36를 비내 투여한 결과 투여량 ㎍/kg과 AUC에 따른 투여량 리니어티를 도시하고 있다.

제9도는 20 ㎍의 PYY(3-36)를 각각 비내 투여한 3명의 인간 지원자들에 있어서 시간에 따른 PYY의 평균 혈장 농도를 도시하고 있다.

제10도는 50 ㎍의 PYY(3-36)를 각각 비내 투여한 3명의 인간 지원자들에 있어서 시간에 따른 PYY의 평균 혈장 농도를 도시하고 있다.

제11도는 100 ㎍의 PYY(3-36)를 각각 비내 투여한 3명의 인간 지원자들에 있어서 시간에 따른 PYY의 평균 혈장 농도를 도시하고 있다.

제12도는 150 ㎍의 PYY(3-36)를 각각 비내 투여한 3명의 인간 지원자들에 있어서 시간에 따른 PYY의 평균 혈장 농도를 도시하고 있다.

제13도는 200 ㎍의 PYY(3-36)를 각각 비내 투여한 3명의 인간 지원자들에 있어서 시간에 따른 PYY의 평균 혈장 농도를 도시하고 있다.

제14도는 비내적으로 PYY(3-36)를 받은 5 그룹의 건강한 인간 지원자들에 대한 시간에 따른 PYY의 농도를 도시하고 있다. 상기 PYY3-36 투여량은 각각 200 ㎍, 150 ㎍, 100 ㎍, 50 ㎍ 및 20 ㎍이다.

제15도는 인간 지원자들에 투여된 PYY3-36 투여량에 따른 혈중 PYY 최대 농도인 Cmax pg/mL에 대한 투여량 리니어티를 도시하고 있다.

제16도는 인간 지원자들에 투여된 PYY3-36 투여량에 따른 PYY 평균 AUG에 대한 투여량 리니어티를 도시하고 있다.

제17도는 인간 지원자들에 투여된 PYY3-36 투여량에 따른 비쥬얼 아날로그 스케일(VAS)을 도시하고 있다. 질문은 "당신은 얼마나 배가 고픈가?"이다. 상대적으로 배가 덜 고픈 개체는 100 포인트 스케일보다 낮은 값을 가졌다.

제18도는 인간 지원자들에 투여된 PYY3-36 투여량에 따른 비쥬얼 아날로그 스케일(VAS)을 도시하고 있다. 질문은 "당신은 얼마나 많이 먹을 수 있는가?"이다. 상대적으로 배가 덜 고픈 개체는 100 포인트 스케일보다 낮은 값을 가졌다.

제19도는 인간 지원자들에 투여된 PYY3-36 투여량에 따른 비쥬얼 아날로그 스케일(VAS)을 도시하고 있다. 질문은 "당신은 얼마나 포만감을 느끼는가?"이다. 상대적으로 포만감을 덜 느낀 개체는 100 포인트 스케일보다 낮은 값을 가졌다.

제20도는 엔도톡신-프리 PYY(3-36)에 대한 엔도톡신을 포함한 PYY(3-36)의 침투 %를 도시하고 있다.

<110> Nastech Pharmaceutical Company Inc. Quay, Steven C. Brandt, Gordon Kleppe, Mary S. 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Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 1 5 10 15 Arg Gln Arg Tyr 20 <210> 39 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg 1 5 10 15 Gln Arg Tyr <210> 40 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln 1 5 10 15 Arg Tyr <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg 1 5 10 15 Tyr <210> 42 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 43 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 44 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 <210> 47 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Ala Ser Leu Glu Pro Glu Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 1 5 10 <210> 49 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Leu Glu Pro Glu Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala 1 5 10 15 Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro 20 25 30 Arg Tyr <210> 50 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Glu Pro Glu Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln 1 5 10 15 Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg 20 25 30 Tyr <210> 51 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Pro Glu Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr 1 5 10 15 Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 30 <210> 52 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Glu Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala 1 5 10 15 Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 30 <210> 53 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala 1 5 10 15 Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 30 <210> 54 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu 1 5 10 15 Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 <210> 55 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu 1 5 10 15 Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 <210> 56 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg 1 5 10 15 Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 <210> 57 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Asn Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg 1 5 10 15 Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 <210> 58 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Ala Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 25 <210> 59 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Thr Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile 1 5 10 15 Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 <210> 60 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Pro Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn 1 5 10 15 Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 <210> 61 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met 1 5 10 15 Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 20 <210> 62 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu 1 5 10 15 Thr Arg Pro Arg Tyr 20 <210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 1 5 10 15 Arg Pro Arg Tyr 20 <210> 64 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg 1 5 10 15 Pro Arg Tyr <210> 65 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro 1 5 10 15 Arg Tyr <210> 66 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg 1 5 10 15 Tyr <210> 67 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 68 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 69 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 1 5 10 <210> 70 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 1 5 10 <210> 71 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr Arg Pro Arg Tyr 1 5 10 <210> 72 <211> 36 <212> PRT <213> Rat <400> 72 Tyr Pro Ala Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 73 <211> 36 <212> PRT <213> Pig <400> 73 Tyr Pro Ala Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 74 <211> 36 <212> PRT <213> Guinea pig <400> 74 Tyr Pro Ser Lys Pro Glu Ala Pro Gly Ser Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 75 <211> 36 <212> PRT <213> Rat <400> 75 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 76 <211> 36 <212> PRT <213> Rabbit <400> 76 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 77 <211> 36 <212> PRT <213> Dog <400> 77 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 78 <211> 36 <212> PRT <213> Pig <400> 78 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Leu Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 79 <211> 36 <212> PRT <213> Cow <400> 79 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Leu Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 80 <211> 36 <212> PRT <213> Sheep <400> 80 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Asp Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Leu Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 81 <211> 36 <212> PRT <213> Guinea pig <400> 81 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 82 <211> 36 <212> PRT <213> Sheep <400> 82 Ala Pro Leu Glu Pro Val Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 83 <211> 36 <212> PRT <213> Pig <400> 83 Ala Pro Leu Glu Pro Val Tyr Pro Gly Asp Asp Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 84 <211> 36 <212> PRT <213> Dog <400> 84 Ala Pro Leu Glu Pro Val Tyr Pro Gly Asp Asp Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 85 <211> 36 <212> PRT <213> Cat <400> 85 Ala Pro Leu Glu Pro Val Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 86 <211> 36 <212> PRT <213> Cow <400> 86 Ala Pro Leu Glu Pro Glu Tyr Pro Gly Asp Asp Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 87 <211> 36 <212> PRT <213> Rat <400> 87 Ala Pro Leu Glu Pro Met Tyr Pro Gly Asp Tyr Ala Thr His Glu Gln 1 5 10 15 Arg Ala Gln Tyr Glu Thr Gln Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Thr Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 88 <211> 36 <212> PRT <213> mouse <400> 88 Ala Pro Leu Glu Pro Met Tyr Pro Gly Asp Tyr Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Met Ala Gln Tyr Glu Thr Gln Leu Arg Arg Tyr Ile Asn Thr Leu Thr 20 25 30 Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 89 <211> 37 <212> PRT <213> Guinea pig <400> 89 Ala Pro Leu Glu Pro Val Tyr Pro Gly Asp Asn Ala Thr Pro Glu Gln 1 5 10 15 Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Met Arg Arg Tyr Ile Asn Met Leu 20 25 30 Thr Arg Pro Arg Tyr 35 <210> 90 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Asp Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu 1 5 10 15 Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 <210> 91 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Thr Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu 1 5 10 15 Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 <210> 92 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Val Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr 1 5 10 15 Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 <210> 93 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Glu Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His 1 5 10 15 Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 <210> 94 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Asp Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 1 5 10 15 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 <210> 95 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Val Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala 1 5 10 15 Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 30 <210> 96 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Asp Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 30 <210> 97 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Gln Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg 1 5 10 15 Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg 20 25 30 Tyr <210> 98 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Arg Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg 1 5 10 15 Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg 20 25 30 Tyr <210> 99 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Asn Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg 1 5 10 15 Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg 20 25 30 Tyr <210> 100 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Val Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 101 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Leu Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 102 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Asp Asp Ala Ser Pro Asp Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 1 5 10 15 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 <210> 103 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Asp Ala Pro Gly Glu Asp Ala Thr Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 20 25 30 <210> 104 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Asn Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Asp Glu Leu Asn Arg 1 5 10 15 Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg 20 25 30 Tyr <210> 105 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapeins <400> 105 Leu Lys Pro Glu Ala Pro Gly Asp Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr

Claims (177)

1. 최소한 50 ㎍의 Y2 수용체-결합 길항제를 포함하는 1회분의 투여량이 포유류의 점막에 흡수되기 위해 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 최소한 혈장 리터당 5 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
2. 제1항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 펩티드 YY(PYY), 뉴로펩티드 Y(NPY) 그리고 췌장 펩티드(PP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 다음과 같이 이루어진 군으로부터 선택된 최소한 하나의 점막 전달 강화제를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션:

   (a) 용해제;

   (b) 전하 변환제;

   (c) pH 조절제;

   (d) 분해효소 저해제;

   (e) 점막용해제 또는 점액제거제;

   (f) 섬모정지제;

   (g) 다음으로부터 선택된 막침투-강화제; (i) 표면활성제, (ii) 담즙염, (ii) 인지질 첨가제, 혼합된 마이셀, 리포좀, 또는 매개체, (iii) 알코올, (iv) 에나민, (v) NO 공여자 화합물, (vi) 긴 체인 양극성 분자 (vii) 작은 소수성 침투강화제; (viii) 소듐 또는 살리실리산 유도체; (ix) 아세토아세트산의 글리세롤 에스테르 (x) 사이클로덱스트린 또는 베타-사이클로덱스트린 유도체, (xi) 중간 체인 지방산, (xii) 킬레이트제, (xiii) 아미노산 또는 그에 따른 염, (xiv) N-아세틸아미노산 또는 그에 따른 염, (xv) 선택된 막 조성물을 분해하는 효소, (ix) 지방산 합성의 저해제, 또는 (x) 콜레스테롤 합성의 저해제; 또는 (xi) 상기 (i)-(x)에서 인용된 막 침투 강화제의 조합;

   (h) 상피 연결 생리기능의 조절제;

   (i) 혈관확장제;

   (j) 선택적 수송-강화제; 및

   (k) 안정화하는 전달 운반체, 매개체, 지지 또는 복합물-형성 종류들.
4. 제1항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 비내 포뮬레이션인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
5. 제4항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 물과 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 수용성 포뮬레이션인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
6. 제5항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY 펩티드, NPY 펩티드, 및 PP 펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
7. 제6항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY 펩티드이고, 상기 PYY 펩티드는 SEQ ID NOs:1-21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 구성되는 펩티드인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 최소한 하나의 점막흡수 전달제를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
9. 제8항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 다음과 같이 이루어진 군으로부터 선택된 최소한 하나의 점막 전달제를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션:

   (a) 용해제;

   (b) 전하 변환제;

   (c) pH 조절제;

   (d) 분해효소 저해제;

   (e) 점막용해제 또는 점액제거제;

   (f) 섬모정지제;

   (g) 다음으로부터 선택된 막침투-강화제; (i) 표면활성제, (ii) 담즙염, (ii) 인지질 첨가제, 혼합된 마이셀, 리포좀, 또는 매개체, (iii) 알코올, (iv) 에나민, (v) NO 공여자 화합물, (vi) 긴 체인 양친매성 분자 (vii) 작은 소수성 침투강화제; (viii) 소듐 또는 살리실리산 유도체; (ix) 아세토아세트산의 글리세롤 에스테르 (x) 사이클로덱스트린 또는 베타-사이클로덱스트린 유도체, (xi) 중간 체인 지방산, (xii) 킬레이트제, (xiii) 아미노산 또는 그에 따른 염, (xiv) N-아세틸아미노산 또는 그에 따른 염, (xv) 선택된 막 조성물을 분해하는 효소, (ix) 지방산 합성의 저해제, 또는 (x) 콜레스테롤 합성의 저해제; 또는 (xi) 상기 (i)-(x)에서 인용된 막 침투 강화제의 조합;

   (h) 상피 연결 생리기능기능의 조절제;

   (i) 혈관확장제;

   (j) 선택적 수송-강화제; 및

   (k) 안정화하는 전달 운반체, 매개체, 지지 또는 복합물-형성 종류들.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 최소한 두 개의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
11. 제10항에 있어서, 상기 폴리올들은 락토오스 및 소르비톨인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
13. 제12항에 있어서, 킬레이트제는 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합펩티드 포뮬레이션.
15. 제14항에 있어서, 상기 용해제는 사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 표면활성제 를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
17. 제16항에 있어서, 상기 표면활성제는 L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC)인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 Y2 수용체 길항제가 PYY 펩티드인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
19. 제18항에 있어서, 상기 PYY 펩티드는 SEQ ID NOs: 1-21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 구성되는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
20. 제18항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 상기 PYY 펩티드가 PYY3-36인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
21. 제20항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
22. 제21항에 있어서, 상기 용해제는 사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
23. 제22항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린은 메틸-β-사이클로덱스트란인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 물을 포함하는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
25. 제24항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 pH가 약 3-6인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
26. 제25항에 있어서, 상기 포뮬레이션의 pH 범위는 5.0 ±0.3인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
27. 최소한 50 ㎍의 PYY 펩티드를 포함하는 1회분의 투여량이 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 개체의 혈장에서 PYY의 농도를 최소한 혈장 리터당 5 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 상기 PYY 펩티드로 이루어지는 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
28. 제27항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 점막 강화제를 포함하는 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
29. 제28항에 있어서, 상기 점막 강화제는 다음과 같이 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션:

    (a) 용해제;

    (b) 전하 변환제;

    (c) pH 조절제;

    (d) 분해효소 저해제;

    (e) 점막용해제 또는 점액제거제;

    (f) 섬모정지제;

    (g) 다음으로부터 선택된 막침투-강화제; (i) 표면활성제, (ii) 담즙염, (ii) 인지질 첨가제, 혼합된 마이셀, 리포좀, 또는 매개체, (iii) 알코올, (iv) 에나민, (v) NO 공여자 화합물, (vi) 긴 체인 양친매성 분자 (vii) 작은 소수성 침투강화제; (viii) 소듐 또는 살리실리산 유도체; (ix) 아세토아세트산의 글리세롤 에스테르 (x) 사이클로덱스트린 또는 베타-사이클로덱스트린 유도체, (xi) 중간 체인 지방산, (xii) 킬레이트제, (xiii) 아미노산 또는 그에 따른 염, (xiv) N-아세틸아미노산 또는 그에 따른 염, (xv) 선택된 막 조성물을 분해하는 효소, (ix) 지방산 합성의 저해제, 또는 (x) 콜레스테롤 합성의 저해제; 또는 (xi) 상기 (i)-(x)에서 인용된 막 침투 강화제의 조합;

    (h) 상피 연결 생리기능의 조절제;

    (i) 혈관확장제;

    (j) 선택적 수송-강화제; 및

    (k) 안정화하는 전달 운반체, 매개체, 지지 또는 복합물-형성 종류들.
30. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 포뮬레이션은 최소한 두 개의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
31. 제30항에 있어서, 상기 폴리올들은 락토오스 및 소르비톨인 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
32. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
33. 제32항에 있어서, 상기 용해제는 사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
34. 제33항에 있어서, 상기 용해제는 메틸-β-사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
35. 제27항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 포뮬레이션은 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
36. 제35항에 있어서, 상기 비내 포뮬레이션은 상기 킬레이트제가 EDTA인 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
37. 제27항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 포뮬레이션은 표면활성제를 포함하는 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
38. 제38항에 있어서, 상기 비내 PYY 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 DDPC인 것을 특징으로 하는 비내 PYY 포뮬레이션.
39. 제27항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 PYY 포뮬레이션은 수용성 포뮬레이션인 것을 특징으로 하는 비내 PYY 포뮬레이션.
40. 제39항에 있어서, 상기 비내 PYY 포뮬레이션은 수용성 포뮬레이션의 pH가 3-6인 것을 특징으로 하는 비내 PYY 포뮬레이션.
41. 제40항에 있어서, 상기 포뮬레이션의 pH 범위는 5.0 ±0.3인 것을 특징으로 하는 비내 포뮬레이션.
42. 제27항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 PYY 포뮬레이션은 상기 PYY가 PYY3-36(SEQ ID NO: 2)인 것을 특징으로 하는 비내 PYY 포뮬레이션.
43. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비내 PYY 포뮬레이션은 안정제인 폴리펩티드 또는 단백질이 실질적으로 없는 것을 특징으로 하는 비내 PYY 포뮬레이션.
44. 최소한 50 ㎍의 Y2 수용체-결합 길항제를 포함하는 1회분의 투여량이 포유류의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 최소한 혈장 리터당 5 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 비만 치료제 또는 체중감소 유도제인 비내 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
45. 제44항에 있어서, 상기 방법은 Y2 수용체-결합 펩티드가 펩티드 YY(PYY), 뉴로펩티드 Y(NPY) 및 췌장 펩티드(PP)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
46. 제45항에 있어서, 상기 방법은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 PYY 펩티드, NPY 펩티드, 및 PP 펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
47. 제46항에 있어서, 상기 방법은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 PYY펩티드이고, 상기 펩티드는 SEQ ID NOs:1-21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 구성되는 펩티드인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
48. 제44 내지 47항에 있어서, 상기 방법은 상기 약제가 최소한 하나의 점막흡수 전달제를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
49. 제48항에 있어서, 상기 방법은 상기 점막흡수 전달제가 다음과 같이 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도:

    (a) 용해제;

    (b) 전하 변환제;

    (c) pH 조절제;

    (d) 분해효소 저해제;

    (e) 점막용해제 또는 점액제거제;

    (f) 섬모정지제;

    (g) 다음으로부터 선택된 막침투-강화제; (i) 표면활성제, (ii) 담즙염, (ii) 인지질 첨가제, 혼합된 마이셀, 리포좀, 또는 매개체, (iii) 알코올, (iv) 에나민, (v) NO 공여자 화합물, (vi) 긴 체인 양친매성 분자 (vii) 작은 소수성 침투강화제; (viii) 소듐 또는 살리실리산 유도체; (ix) 아세토아세트산의 글리세롤 에스테르 (x) 사이클로덱스트린 또는 베타-사이클로덱스트린 유도체, (xi) 중간 체인 지방산, (xii) 킬레이트제, (xiii) 아미노산 또는 그에 따른 염, (xiv) N-아세틸아미노산 또는 그에 따른 염, (xv) 선택된 막 조성물을 분해하는 효소, (ix) 지방산 합성의 저해제, 또는 (x) 콜레스테롤 합성의 저해제; 또는 (xi) 상기 (i)- (x)에서 인용된 막 침투 강화제의 조합;

    (h) 상피 연결 생리기능의 조절제;

    (i) 혈관확장제;

    (j) 선택적 수송-강화제; 및

    (k) 안정화하는 전달 운반체, 매개체, 지지 또는 복합물-형성 종류들.
50. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제는 최소한 두 개의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
51. 제50항에 있어서, 상기 폴리올들은 락토오스 및 소르비톨인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
52. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제는 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
53. 제52항에 있어서, 상기 킬레이트제는 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
54. 제44항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
55. 제54항에 있어서, 상기 용해제는 사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
56. 제44항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제는 표면활성제를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
57. 제56항에 있어서, 상기 표면활성제는 L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC)인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
58. 제44항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제의 Y2 수용체 길항제가 PYY 펩티드인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
59. 제58항에 있어서, 상기 PYY 펩티드는 SEQ ID NOs: 1-21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 구성되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
60. 제58항에 있어서, 상기 PYY 펩티드가 PYY3-36(SEQ ID NO: 2)인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
61. 제60항에 있어서, 상기 약제는 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
62. 제61항에 있어서, 상기 용해제는 사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
63. 제62항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린은 메틸-β-사이클로덱스트란인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
64. 제44항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제는 물을 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
65. 제64항에 있어서, 상기 약제는 pH가 약 3-6인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
66. 제65항에 있어서, 상기 약제의 pH 범위는 5.0 ±0.3인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
67. 제44항 내지 66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 50 ㎍에서 800 ㎍이 상기 포유류 개체의 비만 치료 또는 체중 감소 유도 또는 구역질을 유도하기 위해 투여되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
68. 제67항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 75 ㎍에서 약 400 ㎍이 상기 포유류 개체의 비만 치료 또는 체중 감소 유도 또는 구역질을 유도하기 위해 투여되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
69. 제68항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 100 ㎍에서 약 300 ㎍이 상기 포유류 개체의 비만 치료 또는 체중 감소 유도 또는 구역질을 유도하기 위해 투여되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
70. 제69항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 150 ㎍에서 약 200 ㎍이 상기 포유류 개체의 비만 치료 또는 체중 감소 유도 또는 구역질을 유도하기 위해 투여되는 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
71. 제44항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY 펩티드, NPY 펩티드, 또는 PP 펩티드인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
72. 제71항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드는 PYY 펩티드인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
73. 제72항에 있어서, 상기 PYY 펩티드는 SEQ ID NOs:1-21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 구성되는 펩티드인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
74. 제73항에 있어서, 상기 PYY 펩티드는 PYY-36(SEQ ID:2)인 것을 특징으로 하는 상기 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
75. 제1항 내지 75항의 어느 한 항에 있어서, 상기 포뮬레이션과 용도는Y2 수용체-길항제가 인간 유전자 배열이고 상기 언급한 포유류가 인간인 것을 특징으로 하는 포뮬레이션과 용도.
76. 폴리펩티드 또는 단백질로 된 안정제가 실질적으로 없는 Y2 수용체-결합 펩티드, 물 및 용해제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
77. 제76항에 있어서, 상기 용해제는 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
78. 제76항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 하나 또는 그 이상의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
79. 제76항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 하나 또는 그 이상의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
80. 제76항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 하나 또는 그 이상의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
81. 제80항에 있어서, 상기 폴리올은 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스, 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
82. 제76항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 표면활성제 및 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
83. 제82항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
84. 폴리펩티드 또는 단백질로 된 안정제가 실질적으로 없고 pH가 약 3에서 약 6.5인, 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 킬레이트제, 하나 또는 그 이상의 폴리올들로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
85. 제84항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
86. 제84항 또는 85항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
87. 제86항에 있어서, 상기 용해제는 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
88. 제84항 내지 제 87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 표면활성제을 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
89. 제88항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
90. 폴리펩티드 또는 단백질로 된 안정제가 실질적으로 없고 pH가 약 3에서 약 6.5인, Y2 수용체-결합 펩티드, 물, 킬레이트제, 및 용해제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
91. 제90항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
92. 제90항 또는 제91항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 하나 또는 그 이상의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
93. 제92항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
94. 폴리펩티드 또는 단백질로 된 안정제가 실질적으로 없고 pH가 약 3에서 약 6.5인, Y2 수용체-결합 펩티드, 물, 킬레이트제 및 표면활성제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
95. 제94항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
96. 제94항 또는 제95항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
97. 제96항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
98. 폴리펩티드 또는 단백질로 된 안정제가 실질적으로 없고, pH가 약 3에서 약 6.5인, 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 킬레이트제, 하나 또는 그 이상의 폴리올들 및 표면활성제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
99. 제98항에 있어서, 상기 수용성 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 트윈 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
101. 제98항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 용해제와 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
102. 제101항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
103. 폴리펩티드 또는 단백질로 된 안정제가 실질적으로 없고 pH가 약 3에서 약 6.5인, 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 하나 또는 그 이상의 폴리올들 및 용해제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
104. 제103항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
105. 제103항 또는 제104항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 용해제와 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
106. 제105항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
107. 제103항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
108. 단백질 또는 폴리펩티드로 된 안정제가 실질적으로 없고, pH가 약 3에서 약 6.5인, 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 용해제 및 표면활성제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
109. 제108항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
110. 제108항 또는 제109항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
111. 제108항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 하나 또는 그 이상의 폴리올들 및 킬레이트제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
112. 제111항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
113. pH가 약 3에서 약 6.5인, 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 용해제, 하나 또는 그 이상의 폴리올들 및 표면활성제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
114. 제113항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 두 개의 폴리올들 및 킬레이트제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
115. 제113항 또는 제114항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
116. 제115항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 소르비톨 및 락토오스인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
117. 제113항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
118. 제117항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 메틸-β-사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
119. 제113항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
120. 제119항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 킬레이트제인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
121. 단백질 또는 폴리펩티드로 된 안정제가 실질적으로 없고, pH가 약 3에서 약 6.5인, 물, Y2 수용체-결합 펩티드, 및 킬레이트제로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
122. 제121항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
123. 제122항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
124. 제121항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 용해제를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
125. 제124항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
126. 제121항 내지 제 125항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 하나 또는 그 이상의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
127. 제126항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 락토오스, 소르비톨, 트레할로스, 수크로오스, 만노오스 및 말토오스 그리고 유도체들 및 그에 따른 동족체들로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
128. 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 킬레이트제가 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA) 또는 에틸렌 글리콜 테트라아세트산(EGTA)인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
129. 제76항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 PYY 펩티드, NPY 펩티드 또는 PP 펩티드인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
130. 제129항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 SEQ ID NOs:1-21, SEQ ID NOs: 72,73 그리고 74, 및 SEQ ID NOs: 90-104로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 이루어진 PYY 펩티드인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
131. 제129항 또는 제130항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 PYY 펩티드가 PYY(3-36)인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
132. 제129항 또는 제130항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 PYY 펩티드가 PYY(3-36)인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
133. 제129항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 SEQ ID NOs:2, 3 및 SEQ ID NOs: 90-105로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 이루어진 PYY(3-36)을 가지는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
134. 비주입식 투여에 적당한 엔도톡신-프리 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 것을 특징으로 하는 제약 포뮬레이션.
135. 제134항에 있어서, 비주입식 투여에 적당한 점막 전달 강화 첨가제들을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약 포뮬레이션.
136. 제76항에 있어서, 이미 언급한 Y2 수용체-결합 펩티드는 NPY, PP, PYY로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
137. 제78항에 있어서, 상기 포뮬레이션은 이미 언급한 펩티드가 PYY(3-36)인 것을 특징으로 하는 포뮬레이션.
138. 제77항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 코, 입, 장, 구강, 기관지폐, 질, 및/또는 직장을 통한 비주입식 투여를 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
139. 제76항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 경구 투여를 위해 약 0.5 mg/kg의 엔도톡신-프리 PYY 및 100에서 약 200 mg/kg 사이의 하나 또는 그 이상의 점막 전달 강화 첨가제로 이루어지는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
140. 제76항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 피하 주사, 근육 주사, 복막 주사에 의한 비주입식 투여인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
141. 제80항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 코에 투여하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
142. 제80항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 구강에 투여하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
143. 제80항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 폐에 투여하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
144. 최소한 10일 동안 매일 투여하였을 때 2.5 파운드까지 체중 감소를 가져오기에 충분한 양의 엔도톡신-프리 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어지는 것을 특징으로 하는 제약 포뮬레이션.
145. 제85항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 투여당 약 50에서 250 마이크로그램의 농도의 PYY3-36으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
146. 제85항에 있어서, 상기 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 코에 투여하는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
147. 물, 염화나트륨, 완충액, 및 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 조절군 포뮬레이션보다 생체 외의 조직 침투 분석에서 최소한 1% 더 높은 침투성을 나타내는 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드와 약학적으로 수용 가능한 매개체를 가진 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
148. 제147항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 물, 염화나트륨, 완충액, 및 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 조절군 포뮬레이션보다 생체 외의 조직 침투 분석에서 최소한 2% 더 높은 침투성을 나타내는 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드와 약학적으로 수용 가능한 매개체를 가진 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
149. 제147항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 물, 염화나트륨, 완충액, 및 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 조절군 포뮬레이션보다 생체 외의 조직 침투 분석에서 최소한 3% 더 높은 침투성을 나타내는 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드와 약학적으로 수용 가능한 매개체를 가진 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
150. 제147항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 물, 염화나트륨, 완충액, 및 Y2 수용체-결합 펩티드로 이루어진 조절군 포뮬레이션보다 생체 외의 조직 침투 분석에서 최소한 6% 더 높은 침투성을 나타내는 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드와 약학적으로 수용 가능한 매개체를 가진 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
151. 제147항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 표면활성제, 용해제, 폴리올, 및 킬레이트제로 이루어진 군으로부터 적어도 하나의 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
152. 제151항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 표면활성제가 포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC), 폴리소르베이트, 도데실에테르, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG, 세틸 알코올, PVP, PVA, 라놀린 알코올, L-α-포스파티딜콜린 디데카노일(DDPC) 및 소르비탄 모노올레이트, 소듐 콜레이트로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
153. 제147항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드, 물, 및 최소한 두 개의 폴리올들을 포함하는 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
154. 제153항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 폴리올이 하나의 당 및 하나의 당 알코올인 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
155. 제154항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 당이 락토오스이고 당 알코올은 소르비톨인 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
156. 제151항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 킬레이트제가 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA) 또는 에틸렌 글리콜 테트라아세트산(EGTA)인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
157. 제151항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 용해제가 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트란, 술포부틸에테르-β-사이클로덱스트란 및 메틸-β-사이클로덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
158. 제151항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 pH가 약 3에서 약 6.5의 범위인 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
159. 제147항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 Y2 수용체-결합 펩티드가 PYY 펩티드, NPY 펩티드, 또는 PP 펩티드인 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
160. 제147항 내지 159항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드가 SEQ ID NOs:1-21, SEQ ID NOs: 72,73 그리고 74, 및 SEQ ID NOs: 90-105로 이루어진 PYY 펩티드인 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
161. 제159항 또는 제160항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 PYY 펩티드가 PYY(3-36) 펩티드인 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
162. 제161항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 PYY(3-36)펩티드가 SEQ ID NOs:2, 3 및 SEQ ID NOs: 90-105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 배열로 구성되는 것을 특징으로 하는 수용성 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
163. 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 5 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
164. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 10 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
165. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 20 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
166. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 40 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
167. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 60 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
168. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 80 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
169. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 100 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
170. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 120 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
171. 제163항에 있어서, 상기 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션은 100 ㎕의 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션이 포유류 개체의 비내에 투여되었을 때, 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 140 pmol 또는 그 이상까지 올릴 수 있는 것을 특징으로 하는 점막흡수 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
172. 제163항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유류가 인간인 것을 특징으로 하는 Y2 수용체-결합 펩티드 포뮬레이션.
173. Y2 수용체-결합 펩티드가 분무액으로 투여되고 물방울의 크기가 10에서 100 ㎛이며, 100 ㎕의 분무액이 인간의 비내에 투여되었을 때, 이 분무액이 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 최소 5 pmol까지 올릴 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
174. Y2 수용체-결합 펩티드가 분무액으로 투여되고 물방울의 크기가 10에서 100 ㎛이며, 100 ㎕의 분무액이 인간의 비내에 투여되었을 때, 이 분무액이 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 최소 10 pmol까지 올릴 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
175. Y2 수용체-결합 펩티드가 분무액으로 투여되고 물방울의 크기가 10에서 100 ㎛이며, 100 ㎕의 분무액이 인간의 비내에 투여되었을 때, 이 분무액이 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 최소 20 pmol까지 올릴 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
176. Y2 수용체-결합 펩티드가 분무액으로 투여되고 물방울의 크기가 10에서 100 ㎛이며, 100 ㎕의 분무액이 인간의 비내에 투여되었을 때, 이 분무액이 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 최소 30 pmol까지 올릴 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.
177. Y2 수용체-결합 펩티드가 분무액으로 투여되고 물방울의 크기가 10에서 100 ㎛이며, 100 ㎕의 분무액이 인간의 비내에 투여되었을 때, 이 분무액이 상기 포유류의 혈장에서 상기 Y2 수용체-결합 펩티드의 농도를 혈장 리터당 최소 40 pmol까지 올릴 수 있는 Y2 수용체-결합 펩티드로 구성되는 약제 제조용 Y2 수용체-결합 펩티드의 용도.