KR20050043751A

KR20050043751A - 항암 조성물

Info

Publication number: KR20050043751A
Application number: KR1020047006819A
Authority: KR
Inventors: 야기타아키쿠니
Original assignee: 오리엔트 캔서 세라피 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2001-11-06
Filing date: 2002-11-05
Publication date: 2005-05-11
Also published as: CN1596116A; CA2469818A1; WO2003039567A1; US20040248772A1; JPWO2003039567A1

Abstract

본 발명은 항암 조성물을 제공하는 것에 관한 것으로, 보다 상세하게는, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨(immutol, 상품명)을 함유하는 조성물이, 종래에 없던 효과적인 IL-12 유발제인 것을 새롭게 발견하고, 또한 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 경구투여에 의해, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물인 것을 새롭게 발견하고, 본 발명의 구성과 같은 항암 조성물의 제공에 성공하였다.

Description

항암 조성물 {Anticancer compositions}

본 출원은 참조에 의해 여기에 원용되는 바의, 일본특허출원번호 2001-341115, 2002-046694, 2002-191474로부터 우선권을 청구한다.

본 발명은, 신규한 항암 조성물의 제공에 관한 것이다. 보다 상세하게는, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨(immutol,상품명)을 함유하는 IL-12 유도제에 관한 것이다. 또한 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 경구투여에 의해, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물에 관한 것이다.

암(malignant neoplasma)(cancer)의 예방 또는 치료를 위한 유용한 물질의 선별에는, 종래 암 세포에의 그 직접적 작용이 중요시되어 왔다. 면역부활제가 암 치료에 유용하다는 사실은 인정되고 있었으나, 면역부활제로서 얻어진 화합물은 모두 그 항암 효과가 미약하며, 면역치료법 단독 또는 화학요법과의 병용치료에 의하여도 암의 충분한 치료효과는 달성되지 않는다.

본 발명자인 의학박사 야기타(八木田)는, 먼저 암 치료에 있어서 획기적인 수법으로서, 인터루킨-12(이하 IL-12)를 생체내에서 유발하는 물질의 유용성에 착안하여, 추용균사체(椎茸菌絲體) 가공물이 그 기능을 갖는 것을 발견하고, 신면역요법(Novel Immunotherapy for cancer, NITC)이라 할 수 있는 암치료법을 확립하였다. 종래 IL-12는, 항암효과가 있지만 생체 내에 IL-12 자체를 직접 투여한 경우에는 부작용을 발생시키므로 환자가 치료를 견디지 못하는 사실이 있어, 그 자체를 항암제로서 사용할 수 없었다. 그러나 야기타가 보고한 추용균사체 가공물을 함유하는 제제는 암 치료에 있어서 현저한 치료·생명연장 효과를 달성하였다. 즉, 야기타는 IL-12를 생체 내에서 유발할 수 있는 유효량의 추용균사체 가공물을 투여함으로써, 암 치료목적을 달성하였다(일본 특개평 10-139670호 공보).

IL-12는, TNFα->IFNγ->IL-12->CTL 활성이라는 경로로 킬러 T세포의 활성화 효과와 증강효과를 갖는다. 즉 IL-12의 생산증강에 의해, 킬러 T세포의 활성화와 증강효과가 얻어지므로, 그 결과로서 항암효과가 기대된다.

야기타는, IL-12의 생산증강의 계(系)와는 별도로 NKT 세포의 활성화가 항암효과에 유용하다는 것을 보고한 바 있다. 오야구찌(谷口) 등은 NKT 세포가 갖는 Vα24Vβ11이라고 하는 특이적인 T세포 항원수용체(TCR)가 인식하는 특이적인 당지질 항원을 발견하고, 이 항원이 α갈락토실세라미드인 것을 보고한 바 있다. 더구나, α갈락토실세라미드를 투여한 암에 걸린 마우스에서는 NKT 세포가 활성화되어, 암의 소실까지는 아니어도 전이가 억제되는 것을 증명했다.

NKT 세포에는 또 하나의 수용체로서 NK 세포항원 수용체(NKR-P1; 자연살해 수용체-P1)가 있는 것이 보고된 바 있다(특집 NKT 세포의 기초와 임상: 최신의약 55권 4호 2000년 818-823 페이지). NKR-P1도 NKT 세포의 활성화에 관여하며, 이 활성화의 항암효과가 보다 우위임을 야기타는 발견한 바 있다.

NK 세포도 생체의 항암작용에 관여한다는 보고가 있으나, 지금까지 NK 세포의 활성과 임상적인 항암효과는 상관관계가 없으며 IL-12의 생산유발량과 NK 세포의 활성이 완전한 역상관관계를 나타낸다는 것이 야기타에 의해 증명된 바 있어, 사람의 항암작용에 있어서 NK 세포의 관여는 의문시되고 있다.

지금까지 의학박사 야기타는, 여러 종류의 IL-12 생체내 유발제의 검토를 진행하고, 암주기와의 관계를 고려한 시마만넨 버섯 균사체 유래의 신규한 IL-12 유발제를 발견한 바 있다(ILY 등록상표: 주식회사 오리엔트 캔서 테라피 상품명). 의학박사 야기타는, β-1,3/1,6-글루칸을 함유하는 버섯 균사체에 항종양 효과가 있으며, 그 항종양성이 Th1계 면역을 종합적으로 활성화하는 사이토카인(IL-12)에서 기인하는 것이라는 사실을 발견하고, 상품명 AHCC, ILX, ILY, 그레스친, SPG 등의 제품을 새로운 용도에 관한 특허출원으로 한 바 있다.

도 1은 종양체적에 대한 영향을 나타낸다. 6d는 6일째의 결과이다.

도 2는 종양체적에 대한 영향을 나타낸다. 9d, 13d는 각각 9일째, 13일째의 결과이다.

도 3은 IL-12 유도량에 대한 영향을 나타낸다. 7d는 7일째의 결과이다.

도 4는 IL-12 유도량에 대한 영향을 나타낸다. 10d, 14d는 각각 10일째, 14일째의 결과이다.

도 5는 임상례 1이다.

도 6은 임상례 2이다.

도 7은 임상례 3이다.

도 8은 임상례 4이다.

도 9는 임상례 5이다.

도 10은 임상례 6이다.

도 11은 이뮤톨 투여 전후에 있어서, IL-12 생산능력의 변화를 도식화한 것이다(투여전 261예, 투여후 248예).

도 12는 카테고리 별 이뮤톨 투여 전후에 있어서, IL-12 생산능력의 변화를 도식화한 것이다. 효과 있음은 카테고리가 상승한 증상예에 해당(예 PR->CR, PD->NC 등). 현상유지는 카테고리가 변화하지 않은 증상예에 해당(예 CR->CR, NC->NC 등). 효과 없음은 카테고리가 떨어진 증상예에 해당(예 CR->PR, NC->PD).

도 13은 이뮤톨 투여 전후에 있어서, NK 세포수(CD3-CD161+)의 변화를 도식화한 것이다(투여전 244예, 투여후 234예).

도 14는 이뮤톨 투여 전후에 있어서, NKT 세포수(CD3+CD161+)의 변화를 도식화한 것이다(투여전 261예, 투여후 247예).

도 15는 이뮤톨 투여 전후에 있어서, 혈관내피세포 증생인자(BEGF)의 변화를 도식화한 것이다(투여전 259예, 투여후 255예).

본 발명은, 더욱 유용한 IL-12 유도제, 특히 암의 진행도가 중증이고 위독한 경우(진행성암, 말기암)에도, 보다 효과적인 IL-12 유발제를 제공하는 것, 또한 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 경구투여에 의해, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물을 제공하는 것을 과제로 한다.

본 발명은 신규한 재료로서 효모를 검토하고, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨을 함유하는 조성물이, 종래에 없던 효과적인 IL-12 유도제인 것을 새롭게 발견하고, 또한 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 경구투여에 의해, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물인 것을 새롭게 발견하고, 본 발명의 구성과 같은 항암 조성물의 제공에 성공하였다.

즉, 본 발명은,

1. β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨(immutol, 상품명)을 함유하는 IL-12 유도제.

2. β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 함유하는 NK 세포 및/또는 NKT 세포 활성화제.

3. 생체 섭취량으로서 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨을 10 mg~2000 mg/체중kg/일 로 경구섭취하는 상기 1의 유도제 또는 상기 2의 활성화제.

4. 상기 1~3 기재의 경구섭취용 건강보조식품제제.

5. β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 함유하는 IL-12 유도능, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 및/또는 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물.

6. 경구로 투여하는 형태인 것을 특징으로 하는 상기 5의 조성물을 함유하는 암 치료제.

7. IL-12 유도능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.

8. NK 세포 및/또는 NKT 세포의 활성화능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.

9. 종양신생혈관 저해능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.

10. IL-12 유도능, 종양신생혈관 저해능, NK 세포 활성화능, 및/또는 NKT 세포 활성화능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.

11. 상기 6~10의 정보를 자연법칙을 이용한 매체에 담지한 상업용 매체.

12. 상기 11의 상업용 매체를 이용한 상업방법.

으로 구성된다.

본 발명의 주성분 NBG 또는 이뮤톨(immutol)은, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모이다. 상세하게는, 빵효모(Saccharomyces cerevisiae) 유래의 상품명 NBG(NBG: Norwegian Beta GlucanTM) 또는 이뮤톨(β-1,3/1,6-글루칸, 만노오스 불포함, 효모 세포벽 단백 유래물 불포함 : 제조원 ImmunoCorp)이다. 검토 결과, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모는, 강력한 IL-12 유도제이며, 특히 진행성, 말기성 암에 있어서 강력한 IL-12 유도제인 것을 발견했다. 또한, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 경구투여에 의해, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물인 것을 새롭게 발견했다.

본 발명자는, IL-12 생산유발제에는, AHCC와 같이 초기암 환자에 특히 효과적인 IL-12 생산유발을 일으키는 물질 외에, 본 발명인 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모 유래물과 같이 진행성 암 또는 말기암 환자에도 특징적으로 IL-12 생산 유발 효과를 발휘하는 물질의 존재를 발견했다.

본 발명의 조성물 또는 경구섭취용 건강보조식품제제는, 폐암, 폐선종, 흉선종, 갑상선암, 방광암, 결장암, 직장암, 맹장암, 요관암, 유방암, 자궁경부암, 뇌종양, 설암, 인두암, 비강암, 후두암, 위암, 간암, 담관암, 정소암, 난소암, 자궁체암, 악성흑색종, 지방육종 등의 치료에 유효하나, 이들 암에 한정되지는 않는다. 특히, AHCC(주식회사 아미노업) 등의 IL-12 생산 유발제를 투여하여도 IL-12 양이 낮은 수치(예를 들어 7.8 pg/mL 이하)인 사람에게 바람직하게 투여된다.

본 발명에 관련된 IL-12 생산유도제, NK 활성화제, NKT 활성화제는, 면역측정법에 의한 결과를 지표로 하여, 그 활성화를 유도 또는 증강하고, 또한 활성화를 유지할 수 있는 처방에 이용된다. 즉, 지표를 근거로, 그 활성화를 유도 또는 증강하고, 또한 활성화를 유지할 수 있는 투여량 및 투여기간을 선택하여 이용된다. 상기 IL-12 생산유도제, NK 활성화제, NKT 활성화제는, 바람직하게는 경구섭취된다. 물론 투여량을 감소시켜, 이들을 비경구적으로 할 수 있는 품질로 제조함으로써 비경구섭취(정맥내 또는 근육내 투여 등을 포함)도 가능하다.

또한, 이뮤톨의 투여가, 투여 전후의 면역에 미치는 영향을 이하의 마커를 사용하여 측정, 검토하였다.

(1) 혈관신생 저해작용

혈관신생 저해작용은, 혈관내피세포 증식인자(VEGF)[-VEGF : VEGF(혈관신생증생인자)의 반수(反數)(VEGF 측정수치에 마이너스 1을 하여 산출한 파라미터 수치)]를 측정함으로써 그 효과는 판정이 가능하며, VEGF 수치의 마이너스(負) 수치(-VEGF)로 평가할 수 있다. 이 VEGF 수치 대신에 FGF, HGF 등 그 외의 혈관증식인자를 이용해도 혈관신생 저해능을 평가하는 것이 가능하다.

또한 VEGF 대신에 혈관신생 저해작용의 정수치(正數値)로도 그 평가가 가능하다(예를 들면 엔도스타틴 수치).

(2) IL-12 생산능력

CTL 활성은 CD8 (+) 퍼포린 생산능력으로 판정이 가능하나, 이 CD8 (+) 퍼포린 수치에는 세포장해성 T 세포(CTL)와 면역억제성 T 세포(STC; Suppressor T cell)가 있으며, 전자는 암 세포를 장해하고, 후자의 활성화는 결과적으로 암의 증식으로 이어진다. 따라서 그 절대치로는 평가는 할 수 없다. 그러나 전자는 IFNγ가 10 IU/mL 이상 또는 IL-12 수치가 7.8 pg/mL 이상이면 CTL이며, IFNγ와 IL-12가 낮은 수치이면 STC라고 판정된다. 따라서 CTL 활성은, IFNγ생산능력(IFNγ수치) 또는 IL-12 생산능력(IL-12 수치)으로 평가가 가능하다.

(3) NK 와 NKT 세포 활성화능

NK 와 NKT 세포는 NKR-P1(NK 세포수용체 CD161(+))을 공유하고 있으며, 전자는 CD3(-)CD161(+)의 표면 마커로 NK 세포수는 측정가능하며, 그 활성화는 CD3(-)CD161(+)퍼포린 생산능력으로 판정이 가능하다. 한편 후자인 NKT 세포는 CD3(+)CD161(+)로 그 세포수 측정이 가능하며, 그 활성화는 퍼포린 생산능력으로 측정이 가능하다.

따라서 암 치료에 있어서 신면역요법(NITC)이어도 일반적인 면역요법이어도 이하의 측정항목으로 각각의 이펙터(effector) 세포를 평가하는 것이 가능하다. 구체적으로는, CTL 활성은 IFNγ또는 IL-12의 유도생산능력으로 평가가 가능하다. NK 세포의 활성화는 CD3(-)CD161(+) 또는 CD3(-)CD161(+)퍼포린 수치로도 평가 가능하다. NKT 세포의 활성화는 CD3(+)CD161(+) 또는 CD3(+)CD161(+)퍼포린 수치로도 평가 가능하다.

세포 및 각 마커의 측정방법을 이하에서 예시한다.

(NKT 세포의 측정) (NK 세포의 측정) (CD8의 측정)

NKR-P1을 갖는 NKT 세포의 측정은, NKT 세포의 세포표면에 특이적으로 존재하는 세포표면항원(CD3 및 CD161)을 측정함으로써 실시할 수 있다. 구체적으로는, 말초혈 중의 림프구에 대해, CD3이 양성이며 CD161이 양성(CD3(+)CD161(+))인 세포를 검정한다. 즉, NKT 세포의 세포표면항원인 CD3 및 CD161을, 모노클로날 항체를 이용하여 플로 사이토메트리를 사용하는 Two Color 검사에 의해 측정한다. 여기서 NKT 세포가 활성화되어 있다는 것은, 림파구 중에서 CD3(+) CD161(+) NKT 세포의 비율이 10% 이상, 보다 바람직하게는 16% 이상인 것을 말한다. NKT 세포 활성화능이란, NKT 세포의 비율을 10% 이상, 보다 바람직하게는 16% 이상으로 증가시키는 기능, 또는 어느 물질을 투여하기 전의 NKT 세포의 비율보다 더욱 증강시키는 기능을 의미한다.

마찬가지로 (CD3(-)CD161(+))란 CD3이 음성이고 CD161이 양성인 세포를 검정하는 것이다. 이 방법이 본 발명에서는 NK 세포의 측정에 유용함을 확인하였다.

또한 CD8(+)이란 CD8이 양성인 세포를 검정하는 것이다. 이 방법이 본 발명에서는 CTL 활성의 측정에 유용함을 확인하였다.

실시예에서는 암 환자의 혈액을 이용하여, 혈중 세포에 대해 세포표면항원인 CD3, CD161, CD8에 대해 양성·음성으로 구별하고, 각 세포의 비율을, 플로 사이토메트리를 이용한 Two Color 검사에 의해 통상적인 방법대로 측정하였다. 이 때 CD3, CD161, CD8에 대한 모노클로날 항체는, 각각 콜타社 제품 또는 벡톤디킨슨社 제품을 사용하였다.

(퍼포린 생산세포의 측정)

말초혈 중의 림프구에 대해, 세포표면항원인 CD3, CD161, CD8 중 2개와 퍼포린에 대해 플로 사이토메트리를 이용한 Three Color 검사에 의해 통상의 방법대로 측정한다. 구체적으로는, 채취한 혈액에 고정액을 첨가하여 세포를 고정하고, 막투과액을 첨가 후 항퍼포린 항체(Pharmingen사 제품)을 첨가하여 반응시키고, 또한 PRE-Cy5 표지 2차항체(DAKO사 제품)을 첨가하여 반응시키고, 이어서 항CD3-PE(Coulter 6604627) 항체 및 항CD161-FITC(B-D) 항체를 첨가하여 반응시키고, 그런 다음 플로 사이토메트리로 측정한다. 도면 중에서 약어는 PERF라고 표시했다.

(사이토카인을 측정하기 위한 시료의 조제)

우선, 혈액으로부터 단핵구분획을 분리 조제한다. 헤파린 첨가 말초혈을 인산완충생리식염수(Phosphate Buffered Saline) (PBS)으로 2배로 희석하여 혼화시킨 후, Ficoll-Conray액(비중 1.077) 위에 중층(重層)하고, 400G로 20분간 원침(遠沈) 후, 단핵구분획을 채취한다. 세정 후, 10% 우태아혈청(FBS)을 첨가한 RPMI-1640배지를 첨가하고, 세포수를 1x10⁶개가 되도록 조제한다. 얻어진 세포부유액 200㎕에 피토헤마글루티닌(Phytohemagglutinin) (DIFCO사 제품)을 20 ㎍/mL의 농도가 되도록 첨가하고, 96공 마이크로플레이트에서 5% CO₂ 존재 하, 37℃에서 24시간 배양하고, 배양한 세포용액 중의 사이토카인을 측정하는 시료로 한다.

(IL-12양의 측정)

유발되는 IL-12 양의 측정은, 후술하는 마우스를 이용한 실험예에서는 혈청중에 충분한 IL-12 양의 유발이 있어, 사람에서와 같이 간접적인 측정을 하는 일 없이 직접효소면역측정법(ELISA)에 의한 측정 키트로 측정 가능하다. 마우스를 이용한 이 계통(系)에서는, 경구에 의해 IL-12 생산 유발물질을 계속적으로 섭취시켜, 그 후의 혈중 IL-12 양의 증가에 의해 IL-12 생산 유발능을 검정할 수 있다.

또한 사람에 있어서는, 혈중에 있어서 저해제의 존재에 의해, 직접 혈액중의 IL-12 양은 측정할 수 없고, 예를 들어 암환자에 있어서 유발되는 IL-12 양의 측정은, 해당 암환자의 혈액으로부터 분리 조제한 말초혈 단핵구에 자극물질을 가해 배양한 후 원침시켜 세포를 제거한 배양액에 대해 실시한다. 배양에 이용하는 세포의 수는 0.5x10⁶개/mL~1x10⁷개/mL이며, 바람직하게는 1x10⁶개/mL이다. 또한, 세포를 자극하는 물질로서는, 종래 사용되던 마이토젠인 피토헤마글루티닌(PHA)를, 최종농도 0.1~100 ㎍/mL, 바람직하게는 1~20 ㎍/mL가 되도록 첨가하여 배양한다. 세포를 자극하는 물질로는, PHA에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 목적을 달성하기 위해, 세포를 자극하여 면역생리활성물질을 생산시킬 수 있는 물질이면 좋으며, PMA(Phorbol 12-Myristate-13-Acetate), PMA+Ionomycin, LPS(Lipopolysaccharide), PWM(Poke Weed Mitogen) 등을 들 수 있다. IL-12 양의 측정은 자체 공지의 임상, 생화학적 검사를 이용할 수 있으나, R&D SYSTEMS사나 MBL사로부터 입수할 수 있는 효소면역측정법(ELISA)에 의한 측정 키트가 사용된다. 여기서 IL-12 생산유발능이란, 말초혈 단핵구가 자극에 의해 생산하는 IL-12 양을, 7.8 pg/mL 이상으로 증강시킬 수 있는 기능, 또는 어떤 물질을 투여하기 전의 IL-12 생산량보다 증강시킬 수 있는 기능을 의미한다.

(혈관신생저해능의 측정)

(혈관내피세포 증식인자, VEGF와 염기성 섬유아세포 증식인자, bFGF 및 혈관신생저해인자 엔도스타틴, endostatin의 측정)

시판되는 키트의 각 효소면역고상법(ELISA : enzyme linked immuno sorbent assay) (ACCUCYTE Human VEGF, ACCUCYTE Human bFGF, ACCUCYTE Human Endostatin: CYTIMMUNE Sciences Inc.)으로 혈청중 농도를 측정했다.

본 발명의 경구섭취용 조성물은, IL-12 생산유발능을 갖는 활성성분으로서 NBG 또는 이뮤톨을 함유하며, 그것은 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모 유래 성분이다.

본 발명의 IL-12 생산을 유발시킬 수 있는 활성성분으로서 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨을 함유하는 경구섭취용 조성물은, 암의 각 진행단계에서 IL-12 생산유발능에 있어서 공지의 AHCC와 큰 차이를 나타낸다. 본 발명의 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모 유래 성분을 유효성분으로 하는 것은, 암의 초기단계에서도 충분한 IL-12 생산유발능을 나타내며, 특징적으로는 진행된 말기암에 있어서도 동등 또는 보다 강력한 IL-12 생산유발능을 발휘한다. 한편, AHCC는, 암의 초기단계에 있어서는 특징적인 IL-12 생산유발능을 발휘하나, 암의 진행과 함께 그 유발능을 감퇴해 간다.

본 발명의 경구섭취용 조성물의 투여량은, 1일 당 1~2000 mg/kg체중, 보다 바람직하게는 10~2000 mg/kg체중 정도이며, 10일~1년, 1~수회/일(day)로, 바람직하게는 경구섭취된다. 물론, 투여량을 감소시켜, 화합물을 비경구적으로 할 수 있는 품질로 제조함으로써, 비경구섭취도 가능하다.

본 발명의 주성분인 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨은, 식품소재로서 공지된 것이다. 예를 들면 NBG 또는 이뮤톨(ImmunoCorp) 등을 예로 들 수 있다. 또한, 본 발명에서는, 시판품을 샘플로 했다.

경구제제는, 정제, 산제, 캡슐제, 시럽제 등으로 조제된다. 정제는, 물론 공지의 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제 등 필요한 첨가물을 배합하여, 상투수단을 사용함으로써 제제화할 수 있다. 또한 필요에 따라, 교미제(矯味濟), 착색제, 향료, 안정제, 살균제, 방부제 등의 첨가도 가능하다.

이상 설시한 바와 같이 본 발명은, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖고 있는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨을 유효성분으로 하는 경구섭취용 조성과 암의 진행단계에 따른 IL-12 생산유발능과의 관계를 명백히 밝혔고, 또한 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 투여와 IL-12 생산능 증강, 혈관신생 저해작용, NK 세포 및/또는 NKT 세포 활성화의 관계를 명확히 밝힌 것이므로, 이들을 상업적 매체에 담지시키면, 해당 제품의 가치에 대해 차별화 수단이 된다. 따라서, 이들 정보를 상업적 매체에 담지시킨 것은, 매우 유용성이 높은 것이다. 또한 이들 정보를 상업적으로 이용하면, 해당 제품의 가치에 대해 차별화 수단이 되므로, 이들 정보를 이용한 상업방법은, 매우 유용성이 높은 것이다.

이상과 같은 정보는, 자연법칙을 이용한 매체에 담지하면 유용한 상업용 매체가 되며, 또한 그 상업용 매체는 유용한 상업방법을 제공한다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하나, 본 발명은 본 실시예에만 한정되는 것은 아니다.

(실시예 1)

β-1,3/1,6-글루칸을 갖는 빵효모(알펜로제 실용 빵효모(300 mg/kg), 및 노르웨이산 빵효모 추출물(NBG 10 mg/kg)로 면역학적 항종양 작용과 IL-12 생산능력을 검토하였다. 또한 각각의 투여량은 각 군에 있어서 β-1,3/1,6-글루칸의 함유량이 동량이 되도록 조제하여 투여하였다.

실험은, B10 마우스(C57BL/10)에 3LL 종양을 2x10⁶ cells/mouse 이식하여 13일째 종양체적 및 IL-12 생산량으로 비교하였다.

종양이식 후 물을 강제 경구투여한 대조군(A)이 239.41±150 mm³(13일째)임에 비해, 보통 빵효모·건조효모(B)(300 mg/kg)는 대조군(control)과 비교하여, 증대 경향이 확인되었다.

NBG(10 mg/kg) 투여례는 (71.887±44.592 mm³)로 유의적으로 축소하였다 (P<0.0393). 도 1 및 도 2.

혈중 IL-12 농도에 관해서는 NBG(10 mg/kg)는 대조군(A)과 비교하여 유의적으로 IL-12 농도의 증가를 나타냈다. IL-12 농도는 Amersham Pharmacia의 Biotrak RPN2702Interleukin-12total{(m)IL-12}, (p40 and p70), mouseELISAsystem 키트로 측정하였다.

즉, 물 강제 경구투여 대조군(A')와 비교하여, 실험군은 모두 IL-12가 높은 수치를 나타냈고, NBG는 유의적으로 IL-12 농도의 증가를 나타냈다(도 3 및 도 4).

임상례

이하에서는, 임상례를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하나, 본 발명은 본 임상례에만 한정되는 것은 아니다. 또한 이용한 요법의 유효성을, 일본국 후생성의 GCP에 근거한 항암제의 효과판정기준(Standard for judgement of the efficacy of anti-cancer agent under GCP of the Japan Ministry of Health and Welfare)에 의거하여, 완전치료(CR), 부분치료(PR), 무반응(암의 진전없음)(NC: No Change), 또는 무효(PD: Progressive Disease)로서 나타냈다.

(임상례 1)

I.Y. 60y.o. 직장암, 간 전이, 폐 전이

환자는, 직장암으로 간 전이와 폐 전이가 확인되고 있다. 200X년 9월 12일부터 벡터샤크 MC와 ILX(등록상표) 6.0g/일, ILY(등록상표) 3.0g/일, 크레스틴(Krestin) 3.0g/격일 로 버섯균자체의 β-1,3-글루칸 투여를 개시했다. 이 치료법은 야기타가 NITC라 명명하고 있다. NITC를 개시하고 5개월 간은 NC 상태가 유지되었으나 6개월째에 들어서 종양 마커의 대부분이 상승했다.

따라서 효모 유래의 β-1,3-글루칸인 이뮤톨 6T/일의 투여를 개시했다. 이뮤톨 개시 후 2개월에 IFNγ와 IL-12는 현저히 증가하고, 종양 마커도 감소하는 것으로 변했다. 투여 3개월째에도 종양 마커는 더욱 개선되어 PR 상태를 유지하고 있다.

본 증상예에서 버섯균자체로는 NC 그리고 PD가 된 증상예에 효모 β-1,3-글루칸을 추가 투여함으로써 종양 축소를 유도하는 것이 가능했다.

상세한 데이타는 도 5에 나타내었다.

(임상예 2)

N.H. 56y.o. 유방암, 액와 림프절 전이

환자는, 50세 여성으로 200&년 7월 21일에 오른쪽 유방암으로 유방절제와 액와 림프절 전이소 절제를 받았다(癌硏에서). 200&년 11월, 간 전이가 출현하여, 200X년 3월 26일 간 부분절제를 받았다. 200X년 4월 20일부터 NITC를 개시했다. 헤이세이 200X년 6월 12일에는 간 절제단에 여러 개의 간 전이와 양쪽 폐 전이가 확인되었다. 따라서 ILY 3.0 g/격일 투여를 개시한다. 7월 13일부터 ILY 3.0 g/매일 로 변경한다. 1개월 후인 8월 4일, 종양 마커는 CEA가 773 ng/mL, NCC 13 U/mL, I CTP 7.7 ng/mL이고, 일부 마커가 저하되어 있다. HER-2가 (+++)였으므로, 암연구소(癌硏)에서 8월 7일부터 팍리탁셀(paclitaxel)+허셉틴(Herceptin)의 매주 투여를 개시한다. 이후, CEA는 순조롭게 저하하고 200X년 11월에는 4.3 ng/mL, SLX-1도 30 U/mL, 모두 정상치가 되어 CR로 판정받았다. 그러가 그 이후 CEA 수치는 증가하였기 때문에 탁솔을 중지하고 허셉틴 단독으로 했다.

면역활성력을 강화하기 위해 이뮤톨 4T/일을 200Y년 3월 23일부터 개시한다.

그 후 CEA 수치는 1개월 후 81.8 ng/mL로 상승했으나, 2개월 후 55.7 ng/mL, 3개월 후 27.4 ng/mL로 저하하여 PR로 판정받았다.

이 사실은 버섯균자체인 ILX 6.0 g/일, 크레스틴 3.0 g/격일로 ILY를 추가 투여하고, 또한 탁솔과 허셉틴을 투가 투여함으로써 종양 마커는 현저히 감소하여 일시적으로 CR이 되었으나, 200Y년 1월부터 다시 상승하여 PD로 판정되었다.

따라서 효모 β-1,3-글루칸인 이뮤톨 4T/일을 추가 투여하고, 종양 마커는 현저히 저하하여 PR로 판정되었다.

이러한 사실은 효모 β-1,3-글루칸의 면역활성에 의한 것이라 생각된다.

상세한 데이터는 도 6에 나타내었다.

(임상례 3)

M.H. 32세, 폐선암, 간 전이

환자는, 오른쪽 폐선암으로 간에 3개의 전이가 확인되어 면역요법을 희망하고 내원하였다. 200X년 7월 27일부터 혈관신생저해제인 베타샤크 MC와 버섯균자체 β-1,3-글루칸인 ILX(6.0 g/일), ILY(3.0 g/일), 크레스틴(3.0 g/격일)의 복용을 개시했다. 종양 마커인 CEA가 9.2 g/mL로 높은 수치를 나타내어, 에코(Echo) 검사와 흉부 CT로도 간 전이 3개, 오른쪽 폐에 3cm 크기의 폐선암이 확인되었다. 9월 21일까지는 IL-12가 상승하고 CEA 수치도 저하 경향을 나타냈으나, 200Y년 1월 11일에 SCC가 8.0이라는 이상수치를 나타냈으므로, 효모인 이뮤톨(6T/일) 투여를 개시했다. 그 후 CEA 수치와 SCC 수치는 저하하기 시작하여 200Y년 6월 8일에는 모든 종양 마커가 정상치를 나타내고, 간 전이도 폐선암도 소실하여 CR로 판정되었다. 이 사실은 버섯균자체인 ILX, ILY 및 크레스틴으로 종양의 진행은 정지했으나 충분한 면역활성화는 얻어지지 않았던 것을, 효모 (β-1,3-글루칸)을 투여함으로써 NC에서 CR로 유도하는 것이 가능했다는 것을 나타낸다.

상세한 데이터는 도 7에 나타내었다.

(임상례 4)

T.K. 66세, 남성 폐선암

66세 남성으로 폐선암의 진단을 받고 200X년 10월 3일부터 NITC(ILX 6.0 g/일, ILY 3.0 g/일, 베타샤크 LO 20 g/일)을 개시한다.

1개월 후에 CEA(5.0 ng/mL 이하가 정상치)가 13.2 ng/mL로 상승했으나 이후 6개월째까지 CEA 수치는 일정했다.

그러나 9개월째부터 CEA 수치는 상승하여 10개월간 상승하고 이 기간은 PD로 판정되었다.

따라서 효모제제인 이뮤톨 6캅셀(1.2g)/일 (3회로 나누어) 경구투여가 개시되었다.

이후 CEA 수치는 점차 감소하기 시작해, IL-12의 높은 생산능력은 유지되기 시작함과 동시에, NK 세포(CD3-CD161+)와 NKT 세포(CD3+CD161+)도 세포수의 증가와 함께 활성의 증강이 얻어졌다.

상세한 데이터는 도 8에 나타내었다.

(임상례 5)

I.Y. 72세, 남성 폐선암

72세의 남성으로 폐선암의 증상예이다.

200X년 6월 3일부터 NITC(ILX 6.0 g/일, ILY 3.0 g/일, 베타샤크 LO 20 g/일)을 개시한다.

이후 5개월간은 CEA를 시작으로 각 종양 마커는 점차 증가하여 PD로 판정되었다. 그 후 9개월째까지는 마커는 불변으로 NC로 판정되었으나 그 후 4개월간은 PR이었다. 그 후 14개월째부터 20개월째까지 PD가 되었다.

20개월째부터 이뮤톨 3CAP(0.6g)/일 (3회로 나누어)의 추가 투여가 실시되었으나 종양 마커가 상승했으므로 이뮤톨을 6CAP(1.2g)/일 (3회로 나누어)로 증량했다. 그 후 종양 마커는 점차 감소하기 시작하고 있다. 이뮤톨의 최적량은 3CAP보다도 6CAP이라 추정되었다.

면역력은 이뮤톨의 증량에 의해 IL-12 생산능력의 증강이 확인되고 있다.

상세한 데이터는 도 9에 나타내었다.

(임상례 6)

T.F. 52세, 여성 상행결장암(上行結腸癌)

52세 여성으로, 상행결장암으로 간장과 폐에 전이가 있어, 200Y년 5월 21일부터 NITC(ILX 6.0 g/일, ILY 3.0 g/일, 베타샤크 LO 20 g/일)가 개시되었다.

6개월간 NC 상태가 계속되었으나 8개월과 9개월째에 종양 마커가 상승하여 PD로 판정되었다.

따라서 이뮤톨 6CAP(1.2g)/일 (3회로 나누어)의 투여가 개시되었다.

이뮤톨 6CAP/일 투여 후 2개월째에 IL-12 생산능력의 상승과 함께 NK 세포 수와 활성도 유지되고, CEA, Ca19-9, Span-1 모두 정상수치 안에 들어와 CR로 판정되었다.

상세한 데이터는 도 10에 나타내었다.

(시험례)

이뮤톨 투여가 면역에 미치는 영향

임상례와 같은 방법으로, 이뮤톨 투여 전후에 있어서 각 마커 수치의 변화를 측정, 검토하였다. 또한, IL-12 생산능력을 카테고리 별(이뮤톨 투여에 따른 효과 별)로 평가하였다.

도 11은, 이뮤톨 투여 전후에 있어서, IL-12 생산능력의 변화를 나타낸 것이다 (투여전 261예, 투여후 248예). 전체로는 치료전의 수치 27.90±2.65 pg/mL와 비교하여, 치료후의 수치 32.43±2.53 pg/mL가 상승 경향이 확인되었으나(p=0.204), 유의차는 나타나지 않았다.

도 12는, 카테고리 별 이뮤톨의 투여 전후에 있어서, IL-12 생산능력의 변화를 나타낸 것이다. 효과 있음 그룹(101예 이뮤톨 투여에 의해 개선)의 투여전 27.0607±2.7835 pg/mL와 비교하여, 치료후의 수치 39.2038±4.8113 pg/mL로 유의적인 상승을 나타냈다(p<0.01).

도 13은, 이뮤톨 투여 전후에 있어서, NK 세포수의 변화를 나타낸 것이다 (투여전 244예, 투여후 234예). 치료전의 수치 12.39±0.42%와 비교하여, 치료후의 수치는 15.48±0.48%로 유의적인 개선이 확인되었다 (p<0.001).

도 14는, 이뮤톨 투여 전후에 있어서, NKT 세포수의 변화를 나타낸 것이다 (투여전 261예, 투여후 247예). 치료전 수치 12.09±0.29%와 비교하여, 치료후 수치는 13.03±0.32%로 유의적인 개선이 확인되었다 (p<0.001).

도 15는, 이뮤톨 투여 전후에 있어서, 혈관내피세포 증생인자(VEGF)의 변화를 나타낸 것이다 (투여전 259예, 투여후 255예). 치료전 수치 426.12±26.06 pg/mL와 비교하여, 치료후 수치는 380.79±19.16 pg/mL로 유의적으로 저하했다 (p<0.05).

이상의 결과로부터, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 투여가 임상에 있어서 유효하다는 것을 확인하였다. 또한, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 투여와 IL-12 생산능 증강, 종양신생혈관 저해능, NK 세포 활성화능, 및/또는 NKT 세포 활성화능에 상관관계가 관찰되었다. 그 결과, IL-12 유도능, 종양신생혈관 저해능, NK 세포 활성화능, 및/또는 NKT 세포 활성화능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것이 암 치료에 유효하다는 것을 확인하였다.

β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨을 함유하는 조성물이, 종래에 없던 효과적인 IL-12 유도제인 것을 새롭게 발견하고, 또한 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)의 경구투여에 의해, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물인 것을 새롭게 발견하고, 본 발명의 구성과 같은 항암 조성물의 제공에 성공하였다.

Claims

β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨(immutol, 상품명)을 함유함을 특징으로 하는 IL-12 유도제.
β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 함유함을 특징으로 하는 NK 세포 및/또는 NKT 세포 활성화제.
생체 섭취량으로서 β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 NBG 또는 이뮤톨을 10 mg~2000 mg/체중kg/일 로 경구섭취함을 특징으로 하는 상기 제1항의 유도제 또는 상기 제2항의 활성화제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 경구섭취용 건강보조식품제제임을 특징으로 하는 유도제 또는 활성화제.
β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 함유하는 IL-12 유도능, NK 세포 활성화능, NKT 세포 활성화능, 및/또는 종양신생혈관 저해능을 기대할 수 있는 항암 조성물.
경구로 투여하는 형태인 것을 특징으로 하는 상기 제5항의 조성물을 함유하는 암 치료제.
IL-12 유도능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.
NK 세포 및/또는 NKT 세포의 활성화능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.
종양신생혈관 저해능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.
IL-12 유도능, 종양신생혈관 저해능, NK 세포 활성화능, 및/또는 NKT 세포 활성화능을 치료 마커로 하여, β-1,3/1,6-글루칸 구조를 갖는 효모 유래 성분 이뮤톨(상품명)을 섭취시키는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.
제6항 내지 제10항 중 어느 한 항의 정보를 자연법칙을 이용한 매체에 담지한 상업용 매체.
제11항의 상업용 매체를 이용한 상업방법.