KR20050036665A - 면역 거세용 재조합 폴리펩타이드 및 이를 포함하는 백신 - Google Patents
면역 거세용 재조합 폴리펩타이드 및 이를 포함하는 백신 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 재조합 폴리펩타이드에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 동물에서 GnRH에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 재조합 폴리펩타이드 및 이를 이용한 면역 거세 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 재조합 폴리펩타이드에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 동물에서 GnRH에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 재조합 폴리펩타이드 및 이를 이용한 면역 거세 방법에 관한 것이다.
면역거세가 가금류들에 있어서 성공적으로 수행되어 왔으며, 애완동물들에게 있어서도 외과적 거세에 관련된 문제들을 해결할 수 있도록 한다. 본 발명자들은 애완동물들의 거세를 위해서 상위 호르몬들을 조절하여 고환의 발달을 억제하는 백신을 발명했다.
약 20년 전부터 경제적인 이유와 동물학대 방지 측면에서 특히 수소와 수퇘지의 외과적 거세에 대한 해결책으로 여러 종류의 가금류에 대한 면역거세가 대안으로 제안되어 왔으나 (Oonk et al., 1998; Ladd. 1993), 애완동물들에 대해서는 거의 관심이 없었다. 그러나 애완동물에 있어서도 외과적 거세는 다음과 같은 목적들을 위하여 끊임없이 수행되어 왔다. 예를 들면 애완동물의 거세는 성적 충동으로 야기되는 배회, 땅파기, 성적 행동, 난폭한 행동 등을 감소시키고 testicular, prostatic, rectal cancer들을 방지하기 위한 건강상의 목적과 애완동물의 과도한 개체 증가를 방지하기 위한 목적이다. 외과적 거세는 간단하고 쉬운 방법이지만 systemic anesthesia의 위험과 동물학대의 논란의 여지가 있다.
상술한 전통적인 외과적 거세 기술의 문제점을 해결하는 방법으로서 Immunocastration이 개발되었다. 한편, 오스트레일리아는 외과적으로 웅돈을 거세하는 대신에 Immunocastration을 시행하는 최초의 국가가 되었다 (Pig progress, 16(3):8(2000)).
Immunocastration 방법은 대부분 GnRH (Gonadotropin Releasing Hormone)에 대한 immune response를 유도할 수 있는 백신을 이용하여 실시되고 있다.
WO 92/19746은 GnRH 또는 그의 analogue 및 T-cell epitope를 포함하는 recombinant polypeptide를 이용한 animal의 immunocastration method를 개시하고 있고, WO 02/22659는 A peptide that comprises a modified GnRH decapeptide sequence which allows for a an immunogenic response that allows for discrimination between different types of GnRH, preferably between GnRH-I and GnRH-Ⅱ 및 이를 이용한 a method for the immunocastration of pigs을 개시하고 있다. 한편, USP 5837268은 leukotoxin과 GnRH polypeptide를 포함하는 chimeric protein을 이용하여 GnRH에 대한 immunogenicity를 개선하는 방법을 개시하고 있다.
그러나, GnRH에 대한 백신으로서 동물에 투여하는 경우, 보다 강력한 immune response를 유도하여 거세 효과를 달성할 수 있는 백신에 대한 요구가 현재까지도 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 특허문헌 및 논문이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 특허문헌 및 논문의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 면역 거세 백신을 개선하고자 예의 연구 노력한 결과, 그림스바이 바이러스 (Grimsby virus: GRV) (Lee et al., 2003)의 VP6 (Redmond et al., 1990)와 CDV(canine distemper 바이러스의 잠정적인 T-세포 에피토프로 보고되었던 P35 region의 P35) (Ghosh et al., 2001)를 GnRH에 대한 carrier로서 이용하고, GnRH로부터 유래된 펩타이드를 적절하게 변형시켜 이용하는 경우에는 보다 개선된 immunogenicity를 갖으면서도 비교적 저가로 면역 거세 백신을 제조할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 동물에서 GnRH에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 재조합 폴리펩타이드를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기한 재조합 폴리펩타이드를 포함하는 면역거세 용 백신 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기한 면역거세 용 백신 조성물을 이용한 면역거세 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) gonadotropin releasing hormone (GnRH)으로부터 유래된 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 멀티머; 및 (b)GRV의 VP6 단백질 또는 CDV의 P35를 포함하며, 동물에서 GnRH에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 재조합 폴리펩타이드를 제공한다.
본 발명자들은 다양한 포유동물에서 GnRH에 대한 면역반응을 효과적으로 유도할 수 있는 펩타이드를 개발하고자 연구를 하였고, 다양한 GnRH의 서열로부터 얻어낸 일정 서열을 펩타이드 또는 그의 변이체가 이러한 기능을 함을 확인하였다.
본 발명의 재조합 폴리펩타이드에서, GnRH-유래 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 멀티머와 GRV의 VP6 또는 CDV의 P35의 이러한 융합 형태는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 construction 할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 이용되는 펩타이드는 SEQ ID NO:1에 표시된 아미노산 서열을 갖는다. 본 발명의 다른 변형예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 SEQ ID NO:1에 표시된 아미노산 서열 중 1-3개의 아미노산 서열이 point mutation된 서열을 갖으며, 상기 점 돌연변이는 SEQ ID NO:1의 펩타이드 보다 GnRH에 대하여 높은 immunogenicity를 유발하도록 하는 것이다.
본 발명의 펩타이드 중 SEQ ID NO:1에 표시된 아미노산 서열에서 변이된 것의 바람직한 예는 SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 또는 SEQ ID NO:4로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드이다.
본 발명의 재조합 폴리펩타이드는 상술한 아미노산 서열의 one copy 보다는 two or more copies를 갖는 것이 바람직하며, 이러한 경우에는 상술한 여러 펩타이드 중 1 종 이상의 펩타이드를 갖는 것이 보다 바람직하다. 이러한 multiple copy를 갖는 경우, 이에 의해 촉발되는 GnRH에 대한 immune reaction이 보다 크게 된다. 이러한 멀티머-typed 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 및 SEQ ID NO:4로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 펩타이드를 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 2종 이상의 펩타이드를 포함하는 것이다. 본 발명의 가장 바람직한 구현예에 따르면, 상기 펩타이드의 멀티머는 SEQ ID NO:6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 재조합 폴리펩타이드에 포함되는 GRV의 VP6 단백질 또는 CDV의 P35는 캐리어의 역할을 수행한다.
본 발명의 재조합 폴리펩타이드에서, GnRH-유래 펩타이드 및 VP6 단백질은 VP6-GnRH와 P35-GnRH 또는 GnRH-VP6와 GnRH-P35의 순서로 연결될 수 있으며, 바람직하게는 VP6-GnRH와 P35-GnRH의 순서로 연결되어 있는 것이다.
본 발명의 캐리어 단백질은 VP6와 P35를 모두 사용될 수 있으나 앞서 CDV에 대하여 백신을 접종한 개에 있어 VP6 보다 P35를 캐리어로 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 재조합 폴리펩타이드는 challenged host에서 GnRH에 대한 면역 반응을 효과적으로 유도할 수 있는 장점이 있으며, 저가의 비용으로 제조할 수 있는 장점이 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 상술한 재조합 폴리펩타이드; 및 (b) 약제학적 허용 가능한 담체를 포함하는 면역거세용 백신 조성물을 제공한다.
본 발명의 백신 조성물은 상술한 본 발명의 재조합 폴리펩타이드를 유효 성분으로 포함하기 때문에, 상술한 재조합 폴리펩타이드와 공통되는 내용은 본 명세서의 과도한 중복에 의한 복잡성을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.
본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육내 주입 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 근육내 주입으로 투여하는 것이다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은, 아쥬번트 (adjuvant)를 추가적으로 포함하는 것이 바람직하다. 아쥬번트의 예는 알루미늄 히드록시드, 프로이드 완전 또는 불완전 아쥬번트, DEAE 덱스트란, 레바미솔, PCG 및 poly I:C 또는 poly A:U를 포함한다.
본 발명의 발명은 체액성 또는 선택적으로 세포-매개성 면역 반응 및/또는 상기 두 면역반응의 조합을 유도할 수 있다.
본 발명의 백신 조성물의 다양한 양태는 Remington's Pharmaceutical Science, 18th ed., Mach Publishing, Easton, Pennsylvania, U.S.A.를 참조할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 백신 조성물을 포유 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 면역 거세 방법을 제공한다.
본 발명의 방법은 어떠한 포유 동물에도 적용될 수 있으며, 예컨대, 소, 돼지, 개, 고양이, 염소, 양, 말, 토끼 또는 쥐에 적용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 방법에 있어서, 투여는 2 회 이상 실시하는 것이 바람직하다. 예컨대, initial vaccination 후에 booster injections을 1-10 주 간격으로 1-4 회 정도 실시한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1
GnRH의 conserved region을 조사하기 위하여, 기존에 알려진 동물들의 GnRH의 conserved region들을 비교하여, 가장 높은 유사성을 나타내는 peptide (QHWSYGLRPG)를 선발하였고, 이들을 기준으로 삼아 본 발명에 사용할 GnRH 펩타이드의 기본 서열을 결정하였다. 디자인된 펩타이드는 conserved sequence가 6회 반복된 GnRH-유사 펩타이드로 구성되도록 디자인하였다. 그리고 합성 DNA를 프라스미드 벡터에 도입하기 위하여 restriction site 중 SphI site가 삽입되도록 하였다. GnRH-유사 펩타이드의 항원성을 높이기 위하여 point mutation에 의한 방법으로 상기의 GnRH의 기본 서열을 변경시켰다.
실시예 2
기존에 알려진 Hemophilus somnus의 leukotoxin 보다 면역 보조 효과(adjuvanticity)가 더 좋은 단백질을 선발한 후, 여기에 실시예 1에서 합성된 GnRH결합시켜, 본 발명의 가장 바람직한 백신 단백질을 제공할 수 있는 벡터 시스템을 제조하였다. 일반적으로, ovalbumin이 면역 adjuvanticity가 좋은 것으로 알려져 있으나, 본 발명자들의 연구에 의하면 로타바이러스 VP6 단백질도 ovalbumin에 상응하는 면역 보조 효과가 있기 때문에, VP6 단백질을 GnRH 펩타이드의 캐리어로 사용하였다. 또한 CDV의 P35 단백질을 CDV 백신을 접종한 개에 있어 VP6 보다 P35를 캐리어로 사용할 경우 면역효과가 두 배 이상 향상되며 홍역백신을 접종한 개의 경우에 있어서 효과가 나타나므로 원하지 않는 개체들에 사고로 거세백신이 적용되었을 경우에도 거세 백신의 효과가 낮아 안전하다.
실시예 2-1:
우선, 건국대학교 수의미생물학교실에서 분리 보관 중인 GR 바이러스와 CD 바이러스를 입수하여 이 바이러스를 주형으로 하여 RT-PCR을 실시함으로써 CDV의 P35를 다음과 같이 조건에서 증폭하였다. P35의 PCR을 위하여 primer로는 5'-GAATTCACTGCTGCTCAG-3' (18-mer)의 염기서열을 갖는 forward primer와 5'-GTCGACTCAGAGCTCATT-3' (18-mer)의 염기서열을 갖는 reverse primer를 사용하였다. PCR 조건은 denaturation step: 95℃, 40sec, annealing step: 48℃, 40sec, extension step: 72℃, 70sec로 이 3단계를 35cycle 수행하여 반응을 완결하였다. 증폭한 PCR 산물을 EcoRI과 SalI으로 절단하여 회수한 것과 동일한 제한효소로 절단한 pGEX-4T1 벡터 (Pharmacia)를 적절한 비율로 혼합한 후 ligation buffer (Roche Diagnostics GmbH) 및 T4 DNA ligase(Roche Diagnostics GmbH)를 첨가하여 1 시간 동안 실온에서 반응시켰다. 이어, 반응물을 CaCl2로 처리된 E. coli DH5a (Promega)에 형질전환 시킨 후, 앰피실린 (100 mg/㎖)이 포함된 LB 배지에서 배양한 다음, 앰피실린 저항성을 지닌 균주를 선별하고 각 플라스미드 DNA를 분리하였다. P35가 삽입된 플라스미드는 Birnboim & Doly, (1979)의 방법을 이용하여 분리한 후 제한효소 처리 분석을 하여 확인하였으며, 이렇게 분리, 확인된 플라스미드를 "pGSTP35"로 명명하였다.
실시예 2-2:
실시예 2-1에서 제작된 pGSTP35를 SacI과 SalI으로 절단한 후, 실시예 1의 GnRH-유사 유전자를 제한효소 SacI과 SalI으로 절단한 것을 적적한 비율로 혼합하였다. 이 혼합물을 실시예 2-1과 동일한 방법으로 리게이션 한 다음, E. coli DH5a에 형질전환 시켰다. 이어, 앰피실린 (100 mg/㎖)이 포함된 LB 배지에서 배양한 다음, 앰피실린 저항성을 지닌 균주를 선별하고 플라스미드 DNA를 분리하였다. GnRH-유사 펩타이드 및 P35가 삽입된 플라스미드는 Birnboim & Doly, (1979)의 방법을 이용하여 분리한 후 제한효소 처리 분석을 이용하여 확인하였으며, 이렇게 분리된 플라스미드를 "pGSTP35GnRH"로 명명하였다. pGSTP35GnRH에서, GnRH-유사 유전자는 P35 유전자의 뒤에 인 프레임으로 연결되어 있다.
실시예 3
상기 실시예 2-2에서 클로닝된 pGSTVP6GnRH 와 pGSTP35GnRH의 E. coli DH5a 형질전환체들로부터 플라스미드를 추출하였다. 추출된 플라스미드 각각을 E. coli BL21(DE3)pLysS에 형질전환 시킨 후, 앰피실린 (100 mg/㎖)이 포함된 LB 배지에서 배양한 다음, 앰피실린 저항성을 지닌 균주를 선별하고 플라스미드 DNA를 분리하고, 해당하는 플라스미드의 존재를 확인하였다.
각각의 플라스미드에 대한 E. coli BL21(DE3)pLysS 형질전환체들을 앰피실린의 최종농도 100 mg/㎖이 포함된 LB 액체 배지에 접종하여 16시간 동안 37℃에서 종 배양하였다. 종 배양액을 앰피실린 (최종농도 100 mg/㎖)이 포함된 100 ㎖의 LB 액체 배지에 1% 되도록 접종하여 37℃에서 1.5 시간 동안 배양한 후, IPTG (최종농도 0.5 mM)를 첨가하고 3-4 시간 동안 발현유도를 하였다. 배양이 종료된 후 4500 x g에서 40분 동안 원심분리하여 세포를 회수하였다. 일차적으로 발현된 단백질의 확인을 위하여 회수한 세포들을 초음파 파쇄하여 0.8% 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 방법으로 각 플라스미드 construct에 해당하는 단백질들의 발현을 도 7과 같이 확인하였다.
더 나아가, 회수한 대장균으로부터 다음과 같은 방법으로 단백질을 분리하였다: 세포 침전물에 3.5 ㎖의 현탁 용액 (100 mM NaCl; 50 mM /Tris/HCl, pH 8.0; 1 mM EDTA, pH 8.0)을 첨가하여 세포 현탁액을 조제한 후 현탁된 세포들을 초음파쇄기를 사용하여 9초 pulse와 9초 pause를 반복하며 20 분 동안 파쇄하였다. 파쇄액을 원심분리 (17,000 ×g, 4℃, 40분)하여 상등액을 버리고, 확보한 펠렛에 3 ㎖ 라이시스 용액 (1% 라이소자임, 3% 트리톤 X-100)을 첨가하였다. 이 용액을 잘 현탁시켜 앞의 예와 동일한 방법으로 다시 파쇄를 실시한 후 실온에서 가볍게 섞으며 30분간 배양하였다. 배양액을 원심분리 (17,000 ×g, 4℃, 40분)하여 봉입체(inclusion body)를 분리하고, 1 ㎖ osmotic shock 용액 (8M 우레아를 포함하는 현탁용액)을 첨가하여 균질화 하였다. 균질화된 단백질 용액을 4℃에서 조심스럽게 1시간 동안 교반한 후 원심분리 (17,000 ×g, 4℃, 40분)하여 상등액을 회수하였다. 상등액 내에 존재하는 우레아 등을 제거하기 위하여 인산염 완충용액을 사용하여 투석 (4℃, 24시간)을 실시하였다.
실시예 4
실시예 3에서 확보한 pGSTVP6GnRH 와 pGSTP35GnRH의 단백질을 사용하여 거세 백신의 효능을 검사하였다.
adjuvant로는 Freund's adjuvant를 사용했다. 최초의 면역에는 CFA (complete Freund's adjuvant)를 사용하고, 2, 3 및 4차 면역에는 IFA (Incomplete Freund's adjuvant)를 사용하였다. 상기 단백질과 동량의 adjuvant를 tuberculin syringe를 사용하여 emulsion시켜 필요한 양만큼 취하여 접종하였다. 접종은 근육내 주사 (IM) 방법으로 실시하였고, 투여량은 50 ㎍, 100 ㎍ 및 200 ㎍으로 하였다. 따라서, 실험군은 총 9 군 )으로 하였고, 각 군은 2 rat로 구성하였다. 실험동물은 WD rat을 사용하였고, 3주령에 들여와서 1주일간 acclimation 시켰다.
4 주령부터 면역을 시작하여 2주 간격으로 총 4회에 걸쳐 접종하였고, 최후의 접종 1주일 후에 도살하여 생식 기관의 검사를 실시하였다
pGSTVP6GnRH construct를 포함한 대장균에서 분리한 재조합 단백질을 사용한 면역 실험에서 현저한 거세 백신 효과를 나타내고 있다
시험군들 중 고환과 부고환의 축소 효과를 나타내는 것은 pGSTVP6GnRH에 의한 재조합 단백질을 100 ㎍, 200 ㎍ 및 400 ㎍을 사용한 시험군들로 사용량의 증가에 비례하여 고환과 부고환의 축소를 보여주고 있다. 동일한 재조합 단백질에 의하여 전립선과 정낭선의 생성도 억제되는 것이 관찰되었다
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
이상에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명은 동물에서 GnRH에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 재조합 폴리펩타이드 및 이를 이용한 면역 거세 방법을 제공한다.
<110> Nexgen Biotechnologies, Inc.
<120> Recombinant Polypeptide for Immunocastration and Vaccine
Comprising the Same
<130> P
<160> 5
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> peptide derived from gonadotropin releasing hormone in a variety of animals
<400> 1
Gln His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly
1 5 10
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> peptide with point-mutated amino acids in peptide of SEQ ID NO:1
<400> 2
Gln His Trp Ser Gly Gly Leu Arg Pro Gly
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> peptide with point-mutated amino acids in peptide of SEQ ID NO:1
<400> 3
Glu His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> peptide with point-mutated amino acids in peptide of SEQ ID NO:1
<400> 4
Glu Asp Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly
1 5 10
<210> 5
<211> 68
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mutimer of GnRH-like peptide
<400> 5
Gln His Trp Ser Gly Gly Leu Arg Pro Gly Gly Ser Ser Glu His Trp
1 5 10 15
Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly Ser Gly Gln His Trp Ser Tyr Gly Leu
20 25 30
Arg Pro Gly Gly Gly Ser Glu Asp Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly
35 40 45
Ser Gln His Trp Ser Tyr Gly Leu Gln His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg
50 55 60
Pro Gly Met Leu
65
Claims (12)
- (a) gonadotropin releasing hormone (GnRH)으로부터 유래된 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 멀티머; 및 (b) GRV의 VP6 단백질 또는 CDV의 P35를 포함하며, 동물에서 GnRH에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 SEQ ID NO:1에 표시된 아미노산 서열을 갖거나, 또는 SEQ ID NO:1에 표시된 아미노산 서열 중 1-3개의 아미노산 서열이 점 돌연변이된 서열을 갖으며, 상기 점 돌연변이는 SEQ ID NO:1의 펩타이드 보다 GnRH에 대하여 높은 immunogenicity를 유발하도록 하는 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 2 항에 있어서, 상기 점 돌연변이가 발생된 펩타이드는 SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 및 SEQ ID NO:4로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드의 멀티머는 상기 제 2 항에 기재된 펩타이드 중 1 종 이상의 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 4 항에 있어서, 상기 펩타이드의 멀티머는 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 및 SEQ ID NO:4로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 4 항에 있어서, 상기 펩타이드의 멀티머는 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 및 SEQ ID NO:4로 구성된 군으로부터 선택되는 2종 이상의 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 5 항에 있어서, 상기 펩타이드의 멀티머는 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 및 SEQ ID NO:4로 구성된 군으로부터 선택되는 2종 이상의 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 제 7 항에 있어서, 상기 펩타이드의 멀티머는 SEQ ID NO:6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 폴리펩타이드.
- 다음을 포함하는 면역거세 용 백신 조성물:(a) 상기 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 재조합 폴리펩타이드; 및(b) 약제학적 허용 가능한 담체.
- 제 9 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 아쥬번트를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
- 상기 제 9 항의 백신 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 면역 거세 방법.
- 제 11 항에 있어서, 상기 포유동물은 소, 돼지, 개, 고양이, 염소, 양, 말, 토끼 또는 쥐인 것을 특징으로 하는 면역 거세 방법.
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