KR20050024873A - Novel streptomyces sp. producing antibacterial and antifungal agent - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: An antibacterial and antifungal agent producing Streptomyces sp. is provided, which Streptomyces sp. has a wide range of antimicrobial activity against human pathogenic bacteria and plant pathogenic bacteria and does not cause side effects by residence and accumulation of toxicity in human body. CONSTITUTION: The Streptomyces sp.(KACC 91017) producing an antibacterial and antifungal agent against human pathogenic bacteria and plant pathogenic bacteria is provided, wherein the human pathogenic bacterium is selected from Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Micrococcus luteus, Mycobactereium tuberculosis, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium abscessus and Candida albicans; and the plant pathogenic bacterium is selected from Streptomyces scabiei, Streptomyces acidiscabies and Streptomyces turgidiscabies.

Description

항진균 및 항세균 물질을 생산하는 스트렙토마이세스 속 균주{NOVEL STREPTOMYCES SP. PRODUCING ANTIBACTERIAL AND ANTIFUNGAL AGENT}NOVEL STREPTOMYCES SP. Strain of Streptomyces genus that produces antifungal and antibacterial substances. PRODUCING ANTIBACTERIAL AND ANTIFUNGAL AGENT}

[발명이 속하는 기술분야][TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION]

본 발명은 항진균 및 항세균 물질을 생산하는 스트렙토마이세스 속 균주에 관한 것으로, 보다 상세하게는 인체 병원성 균 및 식물 병해균에 대하여 항균활성을 가지는 항균물질을 생산하여, 인체 독성 및 잔류 및 축적으로 인한 부작용을 야기하지 않는 환경 친화적 미생물 제제에 관한 것이다. The present invention relates to a strain of Streptomyces genus that produces antifungal and antibacterial substances, and more particularly, to produce antibacterial substances having antimicrobial activity against human pathogenic bacteria and plant diseases, human body toxicity and residual and accumulated It relates to an environmentally friendly microbial preparation that does not cause side effects.

[종래기술][Private Technology]

항생물질은 틴달(Tyndall)에 의해서 미생물 상호간의 길항 작용이 관찰된 후, 1929년 플레밍에 의해 발견된 페니실린을 기초로 하여 1940년에 스트렙토마이세스 안티바이오티커스(Streptomyces antibioticus)에서 엑티노마이신이 분리되었고, 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus)에서 스트렙토마이신을 분리하여 폐결핵의 치료약으로 사용하게 되었다. 스트렙토마이신이 발견된 이후로 많은 연구자들에 의해 스트렙토마이세스 속 균주로부터 많은 종류의 항생물질이 발견되고 있으며, 최근에는 재조합기술을 이용하여 항생제를 생산하는 연구로 이루어지고 있다. 이에 스트렙토마이세스 속을 포함한 방선균류(Actinomycetes)는 항생물질의 생산균으로서 산업적 또는 의학적인 측면에서 매우 중요한 미생물로 자리잡게 되었다.Antibiotics were observed in 1940 based on penicillin, which was discovered by Fleming in 1929 after antagonism between microorganisms was observed by Tyndall, and the actinomycin was introduced in Streptomyces antibioticus in 1940. Streptomyces was isolated from Streptomyces griseus and used as a treatment for pulmonary tuberculosis. Since the discovery of streptomycin, many researchers have discovered many kinds of antibiotics from Streptomyces spp., And recently, researches on producing antibiotics using recombinant technology have been conducted. Actinomycetes, including the genus Streptomyces, have become an important microorganism in industrial and medical terms as an antibiotic producing bacterium.

스트렙토마이세스 속 균주는 다양한 2차 대사산물을 포함하여 생산하는 생리활성도 매우 다양하다. 특히 지금까지 미생물로부터 탐색된 100,000여종의 생리활성 물질 가운데 약 2/3에 해당되는 64 % 정도가 스트렙토마이세스 속 균주로부터 발견되었으며, 세균으로부터는 약 13 %, 곰팡이로부터는 약 23 %가 발견되어 각종 생리활성 물질의 탐색에 있어서 이들 균이 차지하는 비중은 매우 높다. Strains of the genus Streptomyces have a wide variety of biological activities, including various secondary metabolites. In particular, about two-thirds of the 100,000 bioactive substances detected by microorganisms were found in Streptomyces spp., About 13% in bacteria and 23% in fungi. These bacteria occupy a very high proportion in the search for various bioactive substances.

최근, 항생물질의 대한 내성균의 잦은 출현으로 인하여 새로운 항생제의 개발이 시급히 요구되고 있다. 특히 스타필로코코스 아우레우스(Staphylococcus aureus)는 그람 양성균 중에서 가장 주된 병원균이나, 메티실린에 대하여 내성을 나타내거나 심지어 최후의 치료약이라고 여겨지는 반코마이신에도 내성을 나타내기도 하여 새로운 항생제의 개발이 매우 시급하다. 또한 결핵을 유발하는 마이코박테리움 튜버쿨로시스(M. tuberculosis) 역시 다약재 내성 결핵균으로 출현되고 있어, 새로운 항결핵제가 개발에 필요성을 입증하고 있다.Recently, the development of new antibiotics is urgently required due to the frequent appearance of resistant bacteria against antibiotics. In particular, Staphylococcus aureus is the most important pathogen among Gram-positive bacteria, and it is also resistant to methicillin or even vancomycin, which is considered to be the last therapeutic agent, so the development of new antibiotics is very urgent. . Tuberculosis-inducing mycobacterium tuberculosis ( M. tuberculosis ) has also emerged as a multi-drug resistant tuberculosis bacterium, proving the need for new anti-tuberculosis drugs.

또한 인체 점막에 칸디다증(candidiasis)을 유발하는 진균인 칸디다 알비칸은 피부질환이나 여성에게서 질염과 외음부염을 유발하는 것으로 알려져 있으나, 부신스테로이드나 항종양제의 사용으로 인한 면역억제 상태에서는 피부 이외의 조직에 기회감염으로 작용하기도 하고, 후천성 면역결핍증환자 같은 면역저하상태의 환자에게서는 전신성 질환을 유발하기도 한다. Candida albican, a fungus that causes candidiasis in the mucous membrane of the human body, is known to cause vaginitis and vulvitis in skin diseases or in women.However, tissues other than skin in immunosuppressive conditions caused by the use of adrenal steroids or antitumor drugs It also acts as an opportunistic infection and may cause systemic disease in immunocompromised patients such as people with acquired immunodeficiency syndrome.

이에, 다양한 병원성 미생물에 대하여 강력한 항균활성을 나타내는 항생제를 생산하는 신규 균주의 개발이 요구된다.Accordingly, there is a need for the development of new strains that produce antibiotics exhibiting strong antimicrobial activity against various pathogenic microorganisms.

한편, 생물체로부터 생산되는 대사산물로서의 항생물질은 병원균에 대해서만 항진균 활성을 나타내고 인간, 가축, 식물 등에는 거의 영향을 끼치지 않으며, 환경에 잔류되지 않는 장점이 있다. 따라서, 상기와 같이 생물체로부터 생산되는 항생물질은 환경친화적이고 잔류 독성이 없다는 이점에 의하여 유기합성계 농약의 대안으로 부각되고 있다.On the other hand, antibiotics as metabolites produced from living organisms have antifungal activity only against pathogens, have little effect on humans, livestock, plants, etc., and do not remain in the environment. Therefore, antibiotics produced from living organisms are emerging as an alternative to organic synthetic pesticides due to the advantages of being environmentally friendly and free of residual toxicity.

특히, 감자의 경우 재배시 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 에시디스카비에이(Streptomyces acidisscabies)에 의하여 감자 더뎅이병이 빈번히 발생된다. 감자 더뎅이병이 발생되면 감자의 생육이 잘 이루어지지 않아 감자 생산농가에 경제적인 손실을 미치나 이를 효과적으로 방제할 수 있는 미생물 제제에 대한 연구는 미흡한 실정이다.In particular, in the case of potatoes, potato beetle disease is frequently caused by Streptomyces scabies and Streptomyces acidisscabies . Potato scallops cause economic losses to potato farmers because of poor growth of potatoes, but research on microbial agents that can effectively control them is insufficient.

따라서, 본 발명은 인체의 병원성 균에 대한 항균활성을 가지는 신규 방선균을 제공하는 것을 목적으로 한다.Therefore, an object of the present invention is to provide a novel actinomycetes having antimicrobial activity against pathogenic bacteria of the human body.

또한 본 발명은 감자 더뎅이균에 대하여 항균활성을 가지는 신규 방선균을 제공하는 것을 목적으로 한다. In addition, an object of the present invention is to provide a novel actinomycetes having antimicrobial activity against potato beetle.

또한 본 발명은 잔류독성이 없으며, 부작용을 야기하지 않는 환경 친화적 항균제 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is also an object of the present invention to provide an environmentally friendly antimicrobial composition that does not have residual toxicity and does not cause side effects.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 인체 병원성 균 및 식물 병해균에 대한 항균물질을 생산하는 스트렙토마이세스 속 균주(KACC 91017)을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a strain Streptomyces sp. (KACC 91017) that produces antibacterial substances against human pathogenic bacteria and plant diseases.

또한 본 발명은 스트렙토마이세스 속 균주(KACC 91017), 이의 배양액 및 이의 배양여액으로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택된 것을 포함하는 항균제 조성물을 제공한다.The present invention also provides an antimicrobial composition comprising one or more selected from the group consisting of Streptomyces sp. Strain (KACC 91017), its culture solution and its culture filtrate.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 인체 병원성 균 및 식물 병해균에 대하여 항균활성을 가지는 항균물질을 생산하는 스트렙토마이세스 속 균주, 및 상기 균주를 이용한 미생물 제제에 관한 것이다.The present invention relates to a strain of Streptomyces sp., Which produces an antibacterial substance having antibacterial activity against human pathogenic bacteria and plant diseases, and a microbial preparation using the strain.

본 발명의 스트렙토마이세스 속 균주는 토양시료로부터 분리된 균주이며, 형태적 특성(도 1) 및 16S rDNA 염기서열 분석(서열번호 3)으로 동정하였다. 스트렙토마이세스 속 균주는 계통분류학적 위치를 분석하였을 때, 계통수 상에서 스트렙토마이세스 속에 속하지만 다른 스트렙토마이세스 균주와는 모두 1 % 이상의 염기서열상 차이를 가지는 독립적인 가지를 형성하였다(도 2 및 3). 즉, 본 발명의 스트렙토마이세스 속 균주는 스트렙토마이세스에 속에 속하는 신종 균주이다.Streptomyces genus strain of the present invention is a strain isolated from soil samples, it was identified by the morphological characteristics (Fig. 1) and 16S rDNA sequencing (SEQ ID NO: 3). When strains of Streptomyces genus were analyzed for phylogenetic location, they formed an independent branch belonging to Streptomyces in the phylogenetic tree but having a sequence difference of at least 1% from other Streptomyces strains (FIG. 2 and 3). That is, the strain Streptomyces genus of the present invention is a new strain belonging to the genus Streptomyces.

본 발명의 스트렙토마이세스 속 균주는 스트렙토마이세스 속 2-15로 명명하고, 이를 대한민국 경기도 수원시 권선구에 소재한 농용미생물보존센터에 2002년 12월 5일자로 기탁하여 기탁번호 KACC 91017를 부여받았다.The strain Streptomyces genus of the present invention is named Streptomyces genus 2-15, and was deposited on December 5, 2002 at the Agricultural Microorganisms Preservation Center located in Gwonseon-gu, Suwon-si, Gyeonggi-do, South Korea received the accession number KACC 91017.

본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15는 방선균 배양배지에서 생육시킬 수 있으며, 배양조건은 25 내지 30 ℃에서 7 일 내지 14일간 암배양이다. 대표적인 배양배지로는 벤넷(Benntt's medium)가 있다.Streptomyces genus 2-15 of the present invention can be grown in actinomycetes culture medium, the culture conditions are cancer culture for 7 to 14 days at 25 to 30 ℃. Representative culture medium is Bennett's medium.

스트렙토마이세스 속 2-15는 인체 병원성 균 및 식물 병해균에 대하여 항균활성을 가지는 항균물질을 생산한다. 특히 인체 병원성 균으로는 스타필로코코스 속 균주, 마이코박테리아 속 균주 및 진균이며, 바람직하기로는 스트렙토마이세스 속 2-15는 스타필로코코스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코코스 에피터미디스(Staphylococcus epidermidis), 마이크로코코스 루테우스(Micrococcus luteus), 마이코박테리움 튜버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 마이코박테리움 포튜이툼(Mycobacterium fortuitum), 마이코박테리움 엡세슈스(Mycobacterium abscessus) 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항균물질을 생산한다. 상기 식물 병해균으로는 스트렙토마이세스 스카비에이 (Streptomyces scabiei), 스트렙토마이세스 에시디스카비에스 (Streptomyces acdiscabies) 및 스트렙토마이세스 터지디스카비에스 (Streptomyces turgidiscabies)가 있으며, 스트렙토마이세스 속 2-15 으로부터 생산되는 항균물질은 상기 3종의 식물 병해균에도 역시 항균활성을 나타낸다.Streptomyces spp. 2-15 produces antimicrobial agents with antimicrobial activity against human pathogenic bacteria and plant diseases. In particular, the body pathogenic bacteria is Staphylococcus Cocos spp, Mycoplasma spp, and bacteria and fungi, preferably genus Streptomyces 2-15 Coconut Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Staphylococcus epi Cocos terminal display (Staphylococcus epidermidis , Micrococcus luteus , Mycobacterium tuberculosis , Mycobacterium fortuitum , Mycobacterium abscessus and Candida albicans Produces antimicrobial agents against Candida albicans . The plant pests include Streptomyces scabiei , Streptomyces acdiscabies and Streptomyces turgidiscabies , Streptomyces genus 2-15 The antimicrobial material produced from the above also exhibits antimicrobial activity against the three plant diseases.

스트렙토마이세스 속 2-15으로부터 생산되는 항균물질은 세포외로 분비될 수 있다. 이에 본 발명에서는 스트렙토마이세스 속 2-15, 이의 배양액 및 이의 배양여액으로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택된 것을 유효성분으로 포함하는 항균제 조성물을 제공한다. 상기 항균제 조성물중 유효성분의 함량은 사용목적 및 사용방법 등을 고려하여 적절히 선택할 수 있으며, 예를들면 0.01 중량%이상 일 수 있다. 또한 상기 항균제 조성물은 통상적으로 사용되는 첨가제를 더욱 포함할 수 있다.Antimicrobials produced from Streptomyces genus 2-15 can be secreted extracellularly. Accordingly, the present invention provides an antimicrobial composition comprising at least one selected from the group consisting of Streptomyces genus 2-15, its culture solution and its culture filtrate as an active ingredient. The content of the active ingredient in the antimicrobial composition may be appropriately selected in consideration of the purpose of use and the method of use, for example, may be 0.01% by weight or more. In addition, the antimicrobial composition may further include an additive commonly used.

상기 배양액은 스트렙토마이세스 속 2-15를 액체배양배지상에서 25 내지 30 ℃로 7 내지 14 일 배양하여 수득할 수 있으며, 이를 액상으로 또는 건조시킨 고체상으로 항균제 조성물에 포함될 수 있다. The culture solution may be obtained by culturing Streptomyces genus 2-15 on a liquid culture medium at 25 to 30 ° C. for 7 to 14 days, and may be included in the antimicrobial composition in a liquid or dried solid phase.

상기 배양여액은 상기 배양액에서 균체를 제거한 상청액으로, 원심분리 또는 여과를 통하여 수득할 수 있다. 배양여액은 액상으로 또는 건조시킨 고체상으로 항균제 조성물에 포함될 수 있다. The culture filtrate is a supernatant from which the cells are removed from the culture solution, and can be obtained by centrifugation or filtration. The culture filtrate may be included in the antimicrobial composition in liquid form or in a dried solid phase.

본 발명의 항균제 조성물은 상기한 유효성분이외에 사용용도, 목적 및 방법에 따라 담체를 더욱 포함할 수 있다. 항균제 조성물은 식품 첨가제, 약제 또는 미생물 농약제로 사용할 수 있으므로, 상기한 용도에 적절한 통상의 담체가 포함될 수 있다. The antimicrobial composition of the present invention may further comprise a carrier according to the use, purpose and method in addition to the above-mentioned effective ingredient. Since the antimicrobial composition may be used as a food additive, a medicament or a microbial pesticide, a conventional carrier suitable for the above use may be included.

항균제 조성물이 식품 첨가제인 경우, 식품의 항균 및 보존을 위한 목적으로 사용되며, 이의 제형은 액제, 과립제 산제, 에어로졸제, 유제 도는 환제일 수 있다. 식품 첨가제의 사용용량은 식품의 종류 및 사용방법에 따라 적절히 조절하는 것이 좋으며, 일예로 식품중량에 0.01 중량%이상으로 사용할 수 있다.When the antimicrobial composition is a food additive, it is used for the purpose of antimicrobial and preservation of food, the formulation thereof may be a liquid, granule powder, aerosol, emulsion or pill. The amount of the food additive used may be properly adjusted according to the type of food and the method of use. For example, the food additive may be used in an amount of 0.01% by weight or more.

항균제 조성물이 약제인 경우, 항균제 조성물은 경구 또는 비경구용으로 사용되며, 담체로는 약리학적으로 허용가능한 부형제를 사용한다. 항균제 조성물의 제형은 환자의 상태 및 사용방법에 따라 적절히 조절하는 것이 좋으며, 제형의 일예인 액제, 과립제, 산제, 시럽제, 에어로솔제, 엑스제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 정제, 주사제, 캅셀제, 크림제 또는 환제로 사용할 수 있다. 항균제 조성물의 투여량은 1일 10 내지 1000 ㎎ 일 수 있으나, 이에 한정되진 않는다. When the antimicrobial composition is a medicament, the antimicrobial composition is used for oral or parenteral use, and a pharmacologically acceptable excipient is used as a carrier. The formulation of the antimicrobial composition is appropriately adjusted according to the condition of the patient and the method of use. Examples of the formulation include liquid, granule, powder, syrup, aerosol, extract, ointment, liquid extract, emulsion, suspension, premises, It can be used as a tablet, an injection, a capsule, a cream, or a pill. The dosage of the antimicrobial composition may be 10 to 1000 mg per day, but is not limited thereto.

항균제 조성물이 미생물 농약제인 경우, 항균제 조성물의 제형은 사용방법에 따라 분제, 입제, 액제, 훈증제, 또는 훈연제일 수 있으며, 농약에 통상적으로 사용되는 증량제 또는 전착제를 담체로 포함할 수 있다. 항균제 조성물의 사용방법은 토양내 투입법 또는 대상작물에 직접 접종하는 방법이다. 그 외 사용량 및 사용시기는 적용작물에 따라 조절하는 것이 좋다. 적용작물은 스트렙토마이세스 스카비에이, 스트렙토마이세스 에시디스카비에스 또는 스트렙토마이세스 터지디스카비에스에 의하여 병반을 나타내는 작물이며, 대표적인 작물은 감자이다. 상기 3종의 균주는 토양에 서식하여 주로 수확기에 감자 더뎅이병을 야기시킨다. 따라서, 감자 더뎅이병은 본 발명의 항균제 조성물을 감자 심기전에 토양에 살포하거나 수확시기, 특히 괴경형성기에서 비대기에 작물 또는 토양에 주기적으로 살포하는 것이 좋다. 항균제 조성물의 살포량은 병반 정도 및 시비시기에 따라 적절히 조절하여 사용할 수 있으나, 토양 또는 작물에 충분히 시비되도록 사용할 수 있다. 이때 물 또는 그밖에 비료, 농약 첨가제에 희석시켜 사용가능하다. 항균제 조성물은 적용 작물의 종류에 따라 공지된 방법을 채택하여 적용하는 것이 가장 바람직하다.When the antimicrobial composition is a microbial pesticide, the formulation of the antimicrobial composition may be a powder, granules, liquids, fumigations, or fumigants, depending on the method of use, and may include an extender or electrodeposition agent commonly used in pesticides as a carrier. The method of using the antimicrobial composition is a method of inoculating the soil or directly inoculating the target crop. The amount and timing of use should be adjusted according to the crops applied. Applicable crops are crops which are diseased by Streptomyces Scavies, Streptomyces escidica Vyce or Streptomyces tergidis cavies, and the representative crop is potato. The three strains inhabit soil and cause potato beetle disease mainly at harvest. Therefore, potato beetle disease is preferably sprayed on the soil prior to planting the antimicrobial composition of the present invention, or periodically to the crop or soil during the harvesting period, in particular during the tuber forming period. The spray amount of the antimicrobial composition can be used to be appropriately adjusted according to the degree of disease and fertilization time, but can be used to fertilize the soil or crops sufficiently. At this time, it can be used diluted with water or other fertilizer, pesticide additives. The antimicrobial composition is most preferably applied by adopting a known method according to the type of crop applied.

본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15는 인체 병원성 균 및 식물 병해균에 대하여 항균활성을 가지는 항균물질을 생산하여, 인체 독성 및 잔류 및 축적으로 인한 부작용을 야기하지 않는 환경 친화적 미생물 제제이다.The genus Streptomyces genus 2-15 of the present invention is an environmentally friendly microbial agent that produces antibacterial substances having antimicrobial activity against human pathogenic bacteria and plant diseases, and does not cause side effects due to human toxicity and residual and accumulated.

이하 본 발명의 실시예를 기재한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, examples of the present invention will be described. The following examples are only for illustrating the present invention and the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1: 균주의 분리 및 동정Example 1 Isolation and Identification of Strains

1-1. 균주 분리1-1. Strain isolate

제주도 토양시료를 수집하고, 수집한 토양시료로부터 벤넷한천배지(Benntt's agar medium: Glucose 10 g, Yeast extract 1 g, Bactptone 2 g, Beef extract 1 g, Agar 15-20 g, 증류수 1L, 비타민(thimine-HCl, riboflavin, niacin, pyridoxin-HCl, inositol 및 Ca-pantothenate, aminobenzoic acid 각각 0.5 ㎎ 및 biotin 0.25 ㎎), Cycloheximide 50ppmNalidixic acid 10 ppm, pH 7.2) 를 이용하여 스타필로코코스 아우레우스, 칸디다 알비칸스 및 스트렙토미세스 스카비아이에 공통적으로 강한 항균력을 나타내는 가장 우수한 한 균주를 선별하였다.Collected soil samples from Jeju Island, Bennett agar medium (Benntt's agar medium: Glucose 10 g, Yeast extract 1 g, Bactptone 2 g, Beef extract 1 g, Agar 15-20 g, distilled water 1L, vitamin (thimine) -HCl, riboflavin, niacin, pyridoxin-HCl, inositol and Ca-pantothenate, aminobenzoic acid 0.5 mg and biotin 0.25 mg), Cycloheximide 50 ppm Nalidixic acid 10 ppm, pH 7.2), Staphylococcus aureus, Candida albicans And one of the best strains showing strong antibacterial activity in common to Streptomyces scaviai.

1-2. 균주 동정1-2. Strain Identification

상기에서 선별한 균주에 대한 동정을 하기와 같이 실시하였다.Identification of the strains selected above was carried out as follows.

가. 형태적 특성end. Morphological characteristics

선별한 균주는 벤넷배지에 접종한 후 28 ℃에서 7 일간 배양하고, 색채색차계(CR-300 Chroma, Minolta Camera Co. Ltd., Japan)를 이용하여 균주와 배지의 색상을 관찰하였다. 도 1은 선별한 균주를 배양한 콜로니와 배지 사진이며, 색체색차계를 이용하여 색상을 관찰하는 과정을 나타낸 것이다. 선별한 균주는 어두운 다홍색( 10.0R V 2.1, C 0.5)의 콜로니를 형성시켰으며, 선별한 균주가 생산한 2차 대사산물은 배지에 확산되어 어두운 주황색(2.0YR V 3.1, C 5.9)을 나타내었다.The selected strains were inoculated in Bennett medium and incubated at 28 ° C. for 7 days, and the colors of the strains and the medium were observed by using a color difference meter (CR-300 Chroma, Minolta Camera Co. Ltd., Japan). 1 is a photograph of colonies and cultured cultures of selected strains, and shows a process of observing color using a colorimetric colorimeter. The selected strains formed dark dark red (10.0RV 2.1, C 0.5) colonies, and the secondary metabolite produced by the selected strains diffused into the medium, showing a dark orange color (2.0YR V 3.1, C 5.9). .

나. 16S rDNA 염기서열 분석I. 16S rDNA Sequencing

선별한 균주의 계통분류학적인 위치를 확인하기 위하여 전체 16S rDNA 염기서열의 98 % 이상의 염기서열에 해당되는 1519 bp의 염기서열을 분석하였다.In order to confirm the phylogenetic location of the selected strains, 1519 bp sequences corresponding to 98% or more of the 16S rDNA sequences were analyzed.

선별한 균주로부터 16S rDNA 분절을 서열번호 1 및 2의 프라이머 세트로 PCR하여 증폭시킨 후, 증폭산물을 정제하여 TOPO TA Cloning  키트(Invitrogen)에 삽입(ligation)하고, 이를 대장균에 형질전환하였다. 형질전환된 대장균으로부터 플라스미드를 추출한 후 자동염기서열 분석장치 (Applied Biosystems model 373A automatic sequencer)와 키트(BigDye Terminator Cycle Sequencing kit, Perkin-Elmer Applied Biosystems)를 이용하여 염기서열을 분석하였다.16S rDNA fragments from the selected strains were amplified by PCR with primer sets of SEQ ID NOs: 1 and 2, and then purified by amplification products, TOPO TA Cloning   It was inserted into a kit (Invitrogen) and transformed into E. coli. After extracting the plasmid from transformed E. coli, the nucleotide sequence was analyzed using an Applied Biosystems model 373A automatic sequencer and a kit (BigDye Terminator Cycle Sequencing kit, Perkin-Elmer Applied Biosystems).

선별한 균주의 16S rDNA는 서열번호 3으로 나타내었으며, 유전자은행의 블라스트 프로그램를 이용하여 상동성을 분석하였다. Genbank의 BLAST 프로그람을 이용하였다. 그 결과 선별된 균주는 스트렙토마이세스 속 VTT E-99-1326(GenBank No. 429390)와 가장 높은 98 %의 상동성을 나타내었으며, 16S rDNA 상동성상에서 기존의 분석된 균종들과 모두 1 % 이상의 염기서열 변이를 보이기 때문에 본 발명의 균주는 신규한 스트렙토미세스 속 균주인 것으로 확인되었다.16S rDNA of the selected strain is shown in SEQ ID NO: 3, and homology was analyzed using the Blast program of the GenBank. Genbank's BLAST program was used. As a result, the selected strain showed the highest homology of 98% with VTT E-99-1326 (GenBank No. 429390) of Streptomyces genus, and more than 1% of all the previously analyzed fungi on 16S rDNA homology. The strain of the present invention was found to be a novel Streptomyces genus strain because of the sequence variation.

다. 16S rDNA 염기서열 계통수 구축All. 16S rDNA sequence tree construction

계통분류학적인 위치를 분석하기 위하여, 기존의 이미 분석된 스트렙토미세스 균주 35 주와 스트렙토마이세스 균주와 계통학적으로 비슷한 키타사토스포라 (Kitasatospora) 13 주 및 마이크로모노스포라(Micromonospora) 1 주, 총 49 주의 16S rDNA의 염기서열을 유전자은행에서 취하여 본 발명에서 분석된 선별 균주의 16S rDNA 1450 bp의 염기서열과 서로 비교분석하였다.To analyze the phylogenetic location, 35 strains of previously analyzed Streptomyces strain and 13 strains of Kitasatospora and 1 strain of Micromonospora, which were systematically similar to the Streptomyces strain, were included. The base sequence of 16S rDNA of 49 strains was taken from the gene bank and compared with the base sequence of 16S rDNA 1450 bp of the selected strain analyzed in the present invention.

이들 총 50 주의 16S rDNA 염기서열은 메가린 패키지(Megalign package, Window version 3.12e; DNASTAR, Madison, Wis)의 다중 정렬알고리즘(multiple alignment algorithm)을 사용하여 다정렬하였고, 다정렬된 염기서열은 근린결합분석(Neighbor-Joining, MEGA version 2.1)법으로 계통수를 완성하였다. 계통수의 구조(topology)를 평가하기 위하여 마이크로모노스포라 속(AJ560637)을 외집단 (outgroup)으로 하여 1000회 반복적으로 부트스트랩(bootstrap)을 수행하였다. The 16S rDNA sequences of all 50 strains were multi-aligned using the multiple alignment algorithm of the Megaalign package (Window version 3.12e; DNASTAR, Madison, Wis). The phylogenetic tree was completed by Neighbor-Joining (MEGA version 2.1). In order to evaluate the topology of the phylogenetic tree, 1000 times of bootstrap was performed using the micromonospora genus AJ560637 as an outgroup.

도 2는 본 발명의 선별 균주의 16S rDNA 유전자 염기서열을 근간으로 한 작성한 계통수이다. 본 발명의 선발균주는 계통수 상에서 스트렙토마이세스 속에 속하지만, 다른 스트렙토마이세스 균주와는 모두 1 % 이상의 염기서열상 차이를 가지는 독립적인 가지를 형성하였다. 즉, 상기 계통수 분석으로 본 발명의 선별균주는 스트렙토마이세스에 속에 속하는 신종 균주임을 확인할 수 있다. Fig. 2 is a generated phylogenetic tree based on the 16S rDNA gene nucleotide sequence of the selected strain of the present invention. Although the strain of the present invention belongs to Streptomyces on the phylogenetic tree, all of the other strains formed an independent branch having a sequence difference of 1% or more. That is, the phylogenetic strain of the present invention can be confirmed by the phylogenetic tree is a new strain belonging to the genus Streptomyces.

라. 세포벽 지방산 분석la. Cell Wall Fatty Acid Analysis

선별 균주의 종(species) 및 속(genus) 수준으로 동정하기 위하여, 균주의 세포벽의 지방산을 MIDI 자동 미생물 동정 시스템(automated Microbial Identification System: MIS)와 GC(gas chromatography)로 분석하였다. 또한 MIS ACTIN1 library(version 3.8)의 데이터베이스를 사용하였다.In order to identify species and genus levels of the selected strains, the fatty acids in the cell walls of the strains were analyzed by MIDI automated microbial identification system (MIS) and gas chromatography (GC). In addition, the database of MIS ACTIN1 library (version 3.8) was used.

그 결과는 도 3에 크로마토그래피로 나타내었다. 본 발명의 스트렙토마이세스 속 신규 균주는 지방산 성분 분석을 통한 동정을 수행한 결과, 기존의 데이터베이스에 모두 0.4 미만으로 일치하였다. 특히 S. 아우레오팩시엔스(S. aureofaciens)와 가장 높은 상동계수(similarity indexes) 0.363을 나타내었는데, 이는 MIS ACTIN1 library상에서 같은 균종으로 인정하는 범위 0.400 미만에 해당되어 본 발명의 스트렙토마이세스 속 선별 균주는 신종 균주임을 알 수 있다. The result is shown by chromatography in FIG. The novel strain of Streptomyces sp. Of the present invention was identified through fatty acid component analysis, and all of them matched the existing database to less than 0.4. In particular, S. aureofaciens and the highest homology index (similarity indexes) 0.363, which is within the range of 0.400 recognized as the same species on the MIS ACTIN1 library, the genus Streptomyces of the present invention It can be seen that the selection strain is a new strain.

상기와 같은 동정결과를 토대로, 본 발명의 선별 균주는 스트렙토마이세스 속 2-15로 명명하였고, 이를 대한민국 경기도 수원시 권선구에 소재한 농용미생물보존센터에 2002년 12월 5일자로 기탁하였으며, 기탁번호 KACC 91017를 부여받았다. Based on the above identification results, the selected strain of the present invention was named Streptomyces genus 2-15, which was deposited on December 5, 2002 to the Agricultural Microorganisms Conservation Center located in Gwonseon-gu, Suwon-si, Gyeonggi-do, Korea accession number KACC 91017 was granted.

실시예 2: 스트렙토마이세스 속 2-15의 항균활성 검증Example 2 Validation of Antimicrobial Activity of Streptomyces spp. 2-15

2-1. 스트렙토마이세스 속 2-15의 배양2-1. Culture of Streptomyces genus 2-15

스트렙토마이세스 속 2-15는 벤넷 고체배지에 접종하여 7일간 28 ℃에서 암 배양한 후 하나의 콜로니를 수득하고, 이를 벤넷 액체배지(Yeast extract 1g /L, Beef extract 1 g/ℓ, Tryptone 2 g/ℓ, Glycerol 10 g/ℓ, pH 7.2)에서 접종하였다. 배양은 암조건, 28 ℃에서 2주간 180 rpm으로 교반하여 실시하였다. 배양액은 4 ℃에서 10,000 rpm으로 30분간 원심분리하여 상등액으로 분리하였고, 이를 길항성 물질 분리에 이용하였다.Streptomyces spp. 2-15 was inoculated in a Bennett solid medium and cultured at 28 ° C. for 7 days to obtain one colony, which was Bennett liquid medium (Yeast extract 1g / L, Beef extract 1g / L, Tryptone 2 g / l, Glycerol 10 g / l, pH 7.2). The culture was performed by stirring at 180 rpm for 2 weeks at 28 ° C. under dark conditions. The culture was centrifuged at 10,000 rpm for 30 minutes at 4 ° C to separate the supernatant, which was used for antagonist separation.

2-2. 인체 병원성 균에 대한 항균활성 검정2-2. Antimicrobial Activity Assay for Human Pathogenic Bacteria

인체 병원성 균인 그람양성균, 그람음성균, 마이코박테리움 속 균종, 및 진균 4 개의 그룹에 해당되는 균종에 대한 항균활성을 확인하였다. The antimicrobial activity of the fungi belonging to four groups, Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, Mycobacterium spp. And fungi, was identified.

그람양성균으로는 스타필로코코스 아우레우스, 스타필로코코스 에피터미디스, 마이크로코코스 루테우스, 그람 음성균으로는 에서리키아 콜리, 쉬겔라 디젠테리에, 슈도모나스 에루지노사, 미코박테리움 속 균종으로는 마이코박테리움 튜버쿨로시스, 마이코박테리움 포튜이툼, 마이코박테리움 엡세슈스 및 진균으로는 칸디다 알비칸스으로, 총 10종의 균종을 가지고 생육저지 실험을 실시하였다.Gram-positive bacteria include Staphylococcus aureus, Staphylococcus epithemis, Micrococcus luteus, Gram-negative bacteria, E. coli, Shigella disgenteri, Pseudomonas aeruginosa, and mycobacteria. Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium ephesus and fungi were Candida albicans, and growth inhibition experiments were carried out with a total of 10 species.

상기 그람양성균, 그람음성균 및 진균은 모두 서울대학교 의과대학 미생물학교실에서 보관중인 표군 균주를 사용하였으며, 마이코박테리아 속에 속하는 3종은 모두 결핵연구원에서 보관중인 표준 균주를 사용하였다.The Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and fungi were all used in the group of strains stored in the Department of Microbiology, College of Medicine, Seoul National University, and all three species belonging to the mycobacteria were used standard strains stored in the tuberculosis research institute.

생육저지 실험에 사용한 평판배지는 그람양성균, 그람음성균 및 진균에 대해서는 영양한천배지(Beef extract 3 g/ℓ, peptone 5 g/ℓ, agar 15 g/ℓ)를, 미코박테리움 속 균주에 대해서는 Middlebrook 7H10 한천배지(7H10 agar (Difco): 21 g/ℓ, OADC supplement 10 ㎖/ℓ)를 사용하였다. Plate media used for growth inhibition experiments were nutrient-positive agar (Beef extract 3 g / l, peptone 5 g / l, agar 15 g / l) for Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria and fungi, and Middlebrook for strains of Mycobacterium spp. 7H10 agar medium (7H10 agar (Difco): 21 g / l, OADC supplement 10 ml / l) was used.

평판배지에 스트렙토마이세스 속 2-15의 배양 상등액 40 ㎕을 올려놓고 30 분간 건조시킨 후 자외선을 약 5분간 쬐어 멸균시켰다. 여기에 각 병원성 균 배양액 50 ㎕을 50 ℃ 항온기에 준비된 3 %의 한천을 포함하는 증류수에 첨가하여 잘 혼합한 후, 상기의 평판배지에 다시 분주하여 항온기에서 배양하였다. 배양은 균주에 따라 달리하였는데, 그람음성균, 그람양성균, 진균, 마이코박테리움 포튜이툼 및 마이코박테리움 엡세슈스를 포함하는 총 9 균주는 37 ℃에서 3일간 배양하였고, 그 외 마이코박테리움 튜버쿨로시스는 성장속도가 느리므로 37 ℃에서 30일간 배양하였다. 배양후 평판배지에 형성된 생육저해환(투명환)을 확인하여 스트렙토마이세스 속 2-15의 항균활성을 확인하였다. 40 μl of the culture supernatant of Streptomyces genus 2-15 was placed on a plate medium, dried for 30 minutes, and sterilized by exposure to ultraviolet light for about 5 minutes. Here, 50 μl of each pathogenic bacterial culture solution was added to distilled water containing 3% agar prepared in a 50 ° C. incubator, mixed well, and then aliquoted to the plate medium and incubated in the incubator. The cultures were different depending on the strains. A total of 9 strains, including Gram-negative bacteria, Gram-positive bacteria, fungi, Mycobacterium potitumum and Mycobacterium epsisus, were incubated at 37 ° C. for 3 days. Leeum tuberculosis was incubated for 30 days at 37 ℃ because of the slow growth rate. After the culture, the growth inhibition ring (transparent ring) formed on the plate medium was confirmed to confirm the antimicrobial activity of Streptomyces genus 2-15.

각 균주별 생육저해환의 직경을 측정하여 하기 표 1에 나타내었다.The diameter of growth inhibition ring for each strain was measured and shown in Table 1 below.

검정 대상균Test target bacteria 활성정도Activity level 그람양성균Gram-positive bacteria 스타필로코코스 아우레우스Staphylococcus aureus ++++++ 스타필로코코스 에피터미디스Staphylocokos Epitermidis ++++ 마이크로코코스 루테우스Micrococos Luteus ++++++++ 그람음성균Gram-negative bacteria 에서리키아 콜리From Lycian collie NN 쉬겔라 디젠테리에Shigella Disgenterie NN 슈도모나스 에루지노사Pseudomonas Eruzinosa NN 마이코박테리움Mycobacterium 마이코박테리움 튜버쿨로시스 ATCC 27294Mycobacterium tubeculosis ATCC 27294 ++++++++ 마이코박테리움 포튜이툼 ATCC 6841Mycobacterium Potitumum ATCC 6841 ++++++ 마이코박테리움 엡세슈스 CAP97E-03Mycobacterium Absesus CAP97E-03 ++++++ 진균Fungus 칸디다 알비칸스Candida albicans ++++++++ * 활성정도++++:25 ㎜이상, +++: 21 - 25 ㎜, ++:16 - 20 ㎜, +:10 - 15 ㎜, N: 0 ㎜* Activity degree ++++: 25 mm or more, +++: 21-25 mm, ++: 16-20 mm, +: 10-15 mm, N: 0 mm

표 1에서, 본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15는 병원내 감염의 주요한 원인균인 스타필로코코스 아우레우스를 그람양성균, 결핵의 주요한 원인균인 마이코박테리움 튜버쿨로시스를 비롯한 마이코박테리움 속 균주 및 인체 감염을 일으키는 주요한 진균인 칸디다 알비칸스에 대하여 강력한 항균활성을 나타내었다. In Table 1, Streptomyces spp. 2-15 of the present invention is Mycobacterium including Staphylococcus aureus, a major causative agent of hospital infection, Mycobacterium tuberculosis, Gram-positive bacteria, and a major causative agent of tuberculosis. It showed strong antibacterial activity against the genus strain and Candida albicans, the main fungus causing human infection.

도 4는 스트렙토마이세스 속 2-15의 칸디다 알비칸스에 대한 항균활성을 나타낸 생육억제환 사진으로, A는 스트렙토마이세스 속 2-15 배양액의 상등액을 사용한 경우이고 B는 스트렙토마이세스 속 2-15 배양액의 상등액을 프로테나제K(PK) 또는 열처리(100 ℃, 5분)한 후 사용한 경우이다. 4 is a growth inhibitory ring photograph showing antimicrobial activity against Candida albicans of Streptomyces genus 2-15, where A is the supernatant of 2-15 culture medium of Streptomyces and B is Streptomyces genus 2- 15 The supernatant of the culture was used after proteinase K (PK) or heat treatment (100 DEG C, 5 minutes).

도 4에서 스트렙토마이세스 속 2-15가 생산하는 항진균성 물질이 단백질 성분이 아니며, 열에 매우 안정함을 확인할 수 있다.In Figure 4 it can be seen that the antifungal substance produced by Streptomyces genus 2-15 is not a protein component, and is very stable to heat.

2-3. 감자 더뎅이 병원성균에 대한 항균활성 검정2-3. Antimicrobial Activity Assay against Potato Beetle Pathogenic Bacteria

식물병인 감자 더뎅이 병원성 균으로 스트렙토마이세스 스카비에이, 스트렙토마이세스 에시디스카비에스 및 스트렙토마이세스 터지디스카비에스를 실험대상으로 사용하였다. 상기 균주들은 모두 제주농업시험장이 보유하고 있는 ATCC 표준 균주이며, 벤넷 배지에서 배양하였다.As the pathogens of potato beetle pathogenic bacteria which are plant diseases, Streptomyces scavies, Streptomyces essidica Viece and Streptomyces tergidis cavies were used as test subjects. All the strains are ATCC standard strains possessed by Jeju Agricultural Research Institute, and were cultured in Bennett's medium.

생육저지 실험은 상기와 동일하게 실시하였고, 감자 더뎅이 병원성 균들은 각각 28 ℃에서 3일간 배양하였다. 실험결과는 하기 표 2에 나타내었다.Growth inhibition experiment was carried out in the same manner as above, potato beetle pathogenic bacteria were incubated for 3 days at 28 ℃, respectively. The experimental results are shown in Table 2 below.

검정 대상균Test target bacteria 활성정도Activity level 감자더뎅이병Potato beetle disease 스트렙토마이세스 스카비에이Streptomyces Skabiei ++++++++ 스트렙토마이세스 에시디스카비에스Streptomyces Esidicascars ++++++ 스트렙토마이세스 터지디스카비에스Streptomyces turjidiscabies ++++++ * 활성정도++++:25 ㎜이상, +++: 21 - 25 ㎜, ++:16 - 20 ㎜, +:10 - 15 ㎜, N: 0 ㎜* Activity degree ++++: 25 mm or more, +++: 21-25 mm, ++: 16-20 mm, +: 10-15 mm, N: 0 mm

표 2에서, 본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15는 감자 더뎅이 병원성 균들에 대하여 강력한 항균활성을 나타냄을 확인할 수 있었다.In Table 2, Streptomyces genus 2-15 of the present invention was confirmed to exhibit a strong antimicrobial activity against potato beetle pathogenic bacteria.

도 5는 스트렙토마이세스 속 2-15의 스트렙토마이세스 스카베이에 대한 항균활성을 나타낸 생육억제환 사진으로, A는 스트렙토마이세스 속 2-15 배양액의 상등액을 사용한 경우이고 B는 스트렙토마이세스 속 2-15 배양액의 상등액을 프로테나제K(PK) 또는 열처리(100 ℃, 5분)한 후 사용한 경우이다. 상기 결과로, 스트렙토마이세스 속 2-15가 생산하는 항 세균성 물질이 단백질 성분이 아니며, 열에 매우 안정함을 확인할 수 있다. Figure 5 is a growth inhibitory picture showing the antimicrobial activity against Streptomyces Skabei of Streptomyces genus 2-15, A is the case of using the supernatant of 2-15 culture medium of Streptomyces and B is Streptomyces spp. The supernatant of 2-15 culture solution is used after proteinase K (PK) or heat treatment (100 ° C, 5 minutes). As a result, it can be seen that the antibacterial substance produced by the genus Streptomyces 2-15 is not a protein component and is very stable to heat.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15(KACC 91017)는 다양한 종류의 인체 병원성 균과 감자 더뎅이 병원성 균에 대하여 광범위한 항균활성을 가지며, 인체 독성 및 잔류 및 축적으로 인한 부작용을 야기하지 않는 환경 친화적 미생물 제제이다.As described above, Streptomyces genus 2-15 (KACC 91017) of the present invention has a wide range of antibacterial activity against various types of human pathogenic bacteria and potato beetle pathogenic bacteria, and does not cause side effects due to human toxicity and residual and accumulated It is an environmentally friendly microbial agent.

도 1은 본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15 균주를 벤넷 한천 배지에서 배양한 사진이다.Figure 1 is a photo of the culture Streptomyces genus 2-15 strain cultured in Bennett agar medium.

도 2는 본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15 균주의 16S rDNA 유전자를 근간으로 작성한 계통수이다.Figure 2 is a phylogenetic tree based on the 16S rDNA gene of 2-15 strain Streptomyces genus of the present invention.

도 3은 본 발명의 스트렙토마이세스 속 2-15 균주의 지방산 성분을 분석한 결과이다.Figure 3 is a result of analyzing the fatty acid component of the strain Streptomyces genus 2-15 of the present invention.

도 4는 스트렙토마이세스 속 2-15의 칸디다 알비칸스에 대한 항균활성을 나타낸 생육억제환 사진이다.Figure 4 is a growth inhibition ring photograph showing the antimicrobial activity against Candida albicans of Streptomyces genus 2-15.

도 5는 스트렙토마이세스 속 2-15의 스트렙토마이세스 스카베이에 대한 항균활성을 나타낸 생육억제환 사진이다.5 is a growth inhibitory photograph showing the antimicrobial activity against Streptomyces scabeyd of Streptomyces genus 2-15.

<110> LIVER RESEARCH FOUNDATION OF KOREA <120> NOVEL STREPTOMYCES SP. PRODUCING ANTIBACTERIAL AND ANTIFUNGAL AGENT <130> dpp20032312kr <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 gagagtttga tcctggctca g 21 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 aaggaggtga tccagccgca 20 <210> 3 <211> 1519 <212> DNA <213> 16S rDNA gene sequences of Streptomyces sp. 2-15 <400> 3 agagttttat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac 60 gatgaagccc ttcggggtgg attagtggcg aacgggtgag taacacgtgg gcaatctgcc 120 cttcactctg ggacaagccc tggaaacggg gtctaatacc ggatacgacc cggaagcgca 180 tgcttctggg tggaaagctc cggcggtgaa ggatgagccc gcggcctatc agcttgttgg 240 tggggtaatg gcctaccaag gcgacgacgg gtagccggcc tgagagggcg accggccaca 300 ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat attgcacaat 360 gggcgaaagc ctgatgcagc gacgccgcgt gagggatgac ggccttcggg ttgtaaacct 420 ctttcagcag ggaagaagcg aaagtgacgg tacctgcaga agaagcgccg gctaactacg 480 tgccagcagc cgcggtaata cgtagggcgc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag 540 agctcgtagg cggcttgtca cgtcggatgt gaaagcccgg ggcttaaccc cgggtctgca 600 ttcgatacgg gctagctaga gtgtggtagg ggagatcgga attcctggtg tagcggtgaa 660 atgcgcagat atcaggagga acaccggtgg cgaaggcgga tctctgggcc attactgacg 720 ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa 780 acgttgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct aacgcattaa 840 gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga cgggggcccg 900 cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta ccaaggcttg 960 acatataccg gaaacggcca gagatggtcg cccccttgtg gtcggtatac aggtggtgca 1020 tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct 1080 tgttctgtgt tgccagcatg cccttcgggg tgatggggac tcacaggaga ctgccggggt 1140 caactcggag gaaggtgggg acgacgtcaa gtcatcatgc cccttatgtc ttgggctgca 1200 cacgtgctac aatggccggt acaatgagct gcgatgccgt gaggcggagc gaatctcaaa 1260 aagccggtct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagtcg gagttgctag 1320 taatcgcaga tcagcattgc tgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt 1380 cacgtcacga aagtcggtaa cacccgaagc cggtggccca accccttgtg ggagggagct 1440 gtcgcaaggt gggactggcg attgggacga agtcgtaaca aggtagccgt accggaaggt 1500 gcggctggat cacctcctt 1519<110> LIVER RESEARCH FOUNDATION OF KOREA <120> NOVEL STREPTOMYCES SP. PRODUCING ANTIBACTERIAL AND ANTIFUNGAL AGENT <130> dpp20032312kr <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 gagagtttga tcctggctca g 21 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 aaggaggtga tccagccgca 20 <210> 3 <211> 1519 <212> DNA <213> 16S rDNA gene sequences of Streptomyces sp. 2-15 <400> 3 agagttttat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac 60 gatgaagccc ttcggggtgg attagtggcg aacgggtgag taacacgtgg gcaatctgcc 120 cttcactctg ggacaagccc tggaaacggg gtctaatacc ggatacgacc cggaagcgca 180 tgcttctggg tggaaagctc cggcggtgaa ggatgagccc gcggcctatc agcttgttgg 240 tggggtaatg gcctaccaag gcgacgacgg gtagccggcc tgagagggcg accggccaca 300 ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat attgcacaat 360 gggcgaaagc ctgatgcagc gacgccgcgt gagggatgac ggccttcggg ttgtaaacct 420 ctttcagcag ggaagaagcg aaagtgacgg tacctgcaga agaagcgccg gctaactacg 480 tgccagcagc cgcggtaata cgtagggcgc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag 540 agctcgtagg cggcttgtca cgtcggatgt gaaagcccgg ggcttaaccc cgggtctgca 600 ttcgatacgg gctagctaga gtgtggtagg ggagatcgga attcctggtg tagcggtgaa 660 atgcgcagat atcaggagga acaccggtgg cgaaggcgga tctctgggcc attactgacg 720 ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa 780 acgttgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct aacgcattaa 840 gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga cgggggcccg 900 cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta ccaaggcttg 960 acatataccg gaaacggcca gagatggtcg cccccttgtg gtcggtatac aggtggtgca 1020 tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct 1080 tgttctgtgt tgccagcatg cccttcgggg tgatggggac tcacaggaga ctgccggggt 1140 caactcggag gaaggtgggg acgacgtcaa gtcatcatgc cccttatgtc ttgggctgca 1200 cacgtgctac aatggccggt acaatgagct gcgatgccgt gaggcggagc gaatctcaaa 1260 aagccggtct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagtcg gagttgctag 1320 taatcgcaga tcagcattgc tgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt 1380 cacgtcacga aagtcggtaa cacccgaagc cggtggccca accccttgtg ggagggagct 1440 gtcgcaaggt gggactggcg attgggacga agtcgtaaca aggtagccgt accggaaggt 1500 gcggctggat cacctcctt 1519

Claims (5)

인체 병원성 균 및 식물 병해균에 대한 항균물질을 생산하는 스트렙토마이세스 속 균주(KACC 91017).Streptomyces sp. Strain (KACC 91017), which produces antimicrobial agents against human pathogenic bacteria and plant diseases. 제 1항에 있어서, The method of claim 1, 상기 인체 병원성 균은 스타필로코코스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코코스 에피터미디스(Staphylococcus epidermidis), 마이크로코코스 루테우스(Micrococcus luteus), 마이코박테리움 튜버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 마이코박테리움 포튜이툼(Mycobacterium fortuitum), 마이코박테리움 엡세슈스(Mycobacterium abscessus) 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans)로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토마이세스 속 균주(KACC 91017).The human pathogenic bacteria Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Staphylococcus epidermidis , Micrococcus luteus , Mycobacterium tuberculosis , Mycobacterium tuberculosis Streptomyces genus strain (KACC 91017) selected from the group consisting of Mycobacterium fortuitum , Mycobacterium abscessus and Candida albicans . 제 1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 식물 병해균은 스트렙토마이세스 스카비에이(Streptomyces scabiei), 스트렙토마이세스 에시디스카비에스(Streptomyces acdiscabies) 및 스트렙토마이세스 터지디스카비에스(Streptomyces turgidiscabies)로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토마이세스 속 균주(KACC 91017).The plant disease bacterium Streptomyces Scar ratio A (Streptomyces scabiei), CD Scar bieseu (Streptomyces acdiscabies) and genus Streptomyces strain selected from the group consisting of a discharge car bieseu (Streptomyces turgidiscabies) Streptomyces burst in Streptomyces (KACC 91017). 제 1항의 스트렙토마이세스 속 균주(KACC 91017), 이의 배양액 및 이의 배양여액으로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택된 것을 포함하는 항균제 조성물.Claim 1 Streptomyces genus strain (KACC 91017), an antimicrobial composition comprising at least one selected from the group consisting of its culture solution and its culture filtrate. 제 4항에 있어서, 상기 항균제 조성물은 식품 첨가제, 약제 또는 미생물 농약인 것인 항균제 조성물. The antimicrobial composition of claim 4 wherein the antimicrobial composition is a food additive, a medicament or a microbial pesticide.
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