KR20050014455A - 참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법 - Google Patents
참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법Info
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Abstract
본 발명은 참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 참지누아리의 성숙엽체를 효율적인 포자 방출을 위하여 음건시킴으로써 포자를 대량으로 방출시켜 종사에 부착시키는 단계; 2) 종사에 부착된 포자를 배양하여 포자의 반상근을 형성하게 하는 단계; 및 3) 반상근이 부착된 종사를 배양하여 반상근을 성장시키는 단계를 포함하는 참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 참지누아리의 종묘 생산 방법은 자연 생산량에만 의존하고 최근에는 남획 등으로 인하여 자원량이 급속히 감소하고 있는 참지누아리의 대량 양식에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 참지누아리의 종묘 생산 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 유도 및 방출시킨 참지누아리 포자를 종사에 부착시켜 지누아리의 종묘를 생산하는 방법에 관한 것이다.
지누아리과는 세계 각지에 널리 분포되고, 우리 나라에도 6속 21종이 동해안과 남해안에 걸쳐 서식하는 것으로 알려져 있으며, 진정홍조강 지아누리목으로 분류된다. 몸은 각상근에서 다소 뭉쳐 나며 짧은 줄기가 있는 편평한 선상의 형태이다. 높이는 20 내지 30 cm, 폭은 2 내지 3 mm이며 다소 뚜렷한 주축이 하나 있어서 양연에서 우상으로 분기한다. 주축의 가지 상부는 대체로 길게 뻗어나서 작은 가지가 없으며 때로는 표면에서 작은 가지가 나는 수도 있다.
참지누아리의 엽체의 모양은 반상근에서 모여나고 1개의 뚜렷한 주축이 있으며 주축 양옆으로 1 내지 2회 분기하였고, 줄기 하부는 실질이나 상부는 편압되어 있고 점질로 채워져 있다. 주축은 가지보다 폭이 넓고 굵으며 상부로 올라갈수록 원주상이 되어 길어지고 뾰족하여진다. 엽체의 색상은 선홍색 내지 담홍색이며 하부는 연골질이며 부드럽고 미끄러우며, 엽체의 내부는 피층과 내층으로 구분되고 세포열은 10 내지 11열에 달한다. 우상분기하는 엽체의 피층은 6 내지 8 세포층이며 내부로 갈수록 세포가 커지며 세포는 5 내지 7 ㎛이고, 길이는 7 내지 15 ㎛이다.
참지누아리는 체형의 변화가 있으며 이에 속하는 식물로는 개지누아리(G. prolongata), 뼈지누아리(G. divaricata), 털도박(G. okamurai), 미끌도박(G. turuturu) 등이 있으며 식용 또는 호료 등으로 이용된다.
현재 참지누아리는 10월초에서 3월 중순까지 채취되어 고가에 판매되고 있으나 자연 생산량에만 의존하고 있어 어업인의 소득이 한정되어 있을 뿐만 아니라 최근에는 남획으로 자원량이 급속히 감소하고 있는 추세이다. 따라서, 인공종묘 생산 등을 통한 지누아리의 대량 생산 방법의 개발이 시급한 실정이다.
한편, 해조류양식과 관련한 종래 기술로는 포자를 이용한 풀가사리속 홍조류의 인공양식 방법(대한민국 특허출원 제1986-5332호) 등이 있으며, 최근 조직 배양에 의한 홍조 지누아리사촌(Grateloupia acuminate)의 종묘 생산 방법이 특허 출원된 바 있다(특허 공개 제2002-82233호). 상기 특허는 지누아리 사촌의 조직 배양에 관한 것으로서, 바다에서 지누아리사촌을 채취하여 사분포자체를 얻고 이를 잘라 조직 배양하여 재생체를 얻어 다시 사분포자를 얻어 배양하는 방법을 사용하였다. 가까운 일본에서도 지누아리(Grateloupia filicina)의 엽체 조각을 조직 배양하여 실험실에서 한달 간 키운 후 이를 로프에 끼워 키우는 방법이 보고된 바 있다(Seiji Migita, 1988, Nippon Suisan Gakkaishi). 상기 방법에서는 과포자 및 사분포자의 성숙 엽체로 분화시켜 지누아리 엽체로 만들고 이 때의 엽체를 많은 절편으로 자른 후, 각 조직 절편을 배양 접시(petri-dish)에 배양하여 재분화시켜 새로운 지누아리 엽체를 얻는다. 35일 배양 후에, 엽체는 약 1.2 mm로 성장하게 되며 매해 조직 절편으로 엽체의 재분화를 반복하여 많은 엽체를 얻은 후, 이를 굴껍질(oyster shells)이나 김의 합성 꼰실(synthetic twine) 위에 뿌려서 한 달간 실험실에서 키운다. 여기서 많은 엽체들이 자라게 되고 2달 후에 약 15 cm 정도가 되면 바다로 옮겨서 배양하게 된다. 그러나, 지누아리 엽체조직을 배양하여 이를 바다에 양식하는 방법은 모조가 제대로 바다 안에 정착하여 자라기 어려운 단점을 가지고 있어 보다 개선된 지누아리의 양식 방법이 요구되고 있다.
해조류의 종묘를 생산하기 위해서는 종사에서 종묘를 키워야 하는데, 상기한 바와 같이 엽체 조직을 배양한 후 엽체조직 절편을 종사에 심는 방법은 조직 절편을 일일이 종사에 심는 것도 어렵고 조밀하게 심기는 더욱 어려운 일이다. 이와 같이 조직절편을 조밀하게 심는 것도 어려운 일일 뿐더러, 심어놓은 조직은 아직 뿌리가 없기 때문에 뿌리가 자라나기 전에 바닷물에 유실되어 종사에 정착하여 자라는 종묘의 비율이 매우 낮아 아직까지 지누아리의 양식이 실질적으로 성공하지는못하였다.
이에, 본 발명자들은 참지누아리의 성숙엽체로부터 유도된 포자를 대량으로 방출할 수 있는 방법을 고안함으로써 종사에 포자를 대량으로 부착시킬 수 있고, 이들 포자가 부착된 종사를 배지에서 배양하여 뿌리를 내릴 수 있는 조건을 확립함으로써 참지누아리의 종묘를 대량 생산하는 방법을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 유도 및 방출시킨 참지누아리 포자를 종사에 부착시켜 대량으로 참지누아리의 종묘를 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
도 1은 서식지에서의 지누아리(A) 및 지누아리(B), 조직절단으로 본 사분포자 및 영양세포에서의 사분포자(C 및 D), 조직절단으로 본 과포자낭 및 방출직전의 과포자낭(E 및 F) 모습을 보여주는 사진이고,
도 2는 과포자낭을 가진 참지누아리 엽체의 월별 성장을 나타낸 그래프이고,
도 3은 성성숙기의 참지누아리 과포자체의 월별 성장을 나타낸 그래프이고,
도 4는 성성숙기의 참지누아리 사분포자체의 월별 성장을 나타낸 그래프이고,
도 5는 성성숙기의 참지누아리 사분포자체 및 과포자체의 엽장의 크기를 비교하여 나타낸 그래프이고,
도 6은 참지누아리 사분포자체 및 과포자체의 모습을 관찰한 비교 사진이고,
도 7은 참지누아리의 월별 성성숙 시기와 성숙유형을 나타낸 그래프이고,
도 8a 및 도 8b는 지누아리의 과포자 방출(A), 분리직전의 사분포자낭(B), 세포이동(C), 세포이동 및 가근형성(D), 가근발아 초기(E), 가근발아(F), 반상근 형성(G), 가근과 반상근(H) 및 엽체발아(I 및 J)로 이어지는 포자발달 및 엽체 발아 모습을 보여주는 사진이고,
도 9는 방출 유도 조건에 따른 지누아리 포자방출량을 비교한 그래프이고,
도 10은 구라론사에 부착시킨 지누아리 포자가 구라론사에서 성장(A), 실외대배양(B) 및 항온 대량 배양(C)을 통해 참지누아리 종묘를 대량 배양하는 실험을 보여주는 사진이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 1) 참지누아리의 성숙엽체를 포자를 대량으로 방출시켜 종사에 부착시키는 단계; 2) 종사에 부착된 포자를 배양하여 포자의 반상근을 형성하게 하는 단계; 및 3) 반상근이 부착된 종사를 배양하여 반상근을 성장시키는 단계를 포함하는 참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은
1) 참지누아리의 성숙엽체를 포자를 대량으로 방출시켜 종사에 부착시키는 단계;
2) 종사에 부착된 포자를 배양하여 포자의 반상근을 형성하게 하는 단계; 및
3) 반상근이 부착된 종사를 배양하여 반상근을 성장시키는 단계를 포함하는 참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법을 제공한다.
단계 1에 있어서, 성숙엽체는 효과적인 포자방출을 위하여 10 내지 12시간동안 음건 처리한 엽체인 것이 바람직하며, 12시간동안 음건 처리한 엽체인 것이 더욱 바람직하다.
단계 2에 있어서, 포자는 과포자 또는 사분포자가 사용될 수 있으며, 과포자인 것이 더욱 바람직하다. 종사는 구라론사, 차광막, 팜사 및 나이론으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 구라론사인 것이 더욱 바람직하다. 또한, 배지는 PES 배지인 것이 바람직하다.
아울러, 배양 조건은 온도 15 내지 20℃인 것이 바람직하며, 조도는 3,000 내지 3500 lux인 것이 바람직하고, 광주기는 10 내지 12L : 14 내지 12D인 것이 바람직하다. 따라서, 최적의 배양 조건은 20℃, 3000 lux 및 12L : 12D 광주기 환경에서 배양하는 것이 가장 바람직하다. 상기 광주기에서, L 및 D는 각각 밝음(light) 및 어두움(dark)을 나타낸다.
상기의 방법을 통하여 제조된 종사에 부착된 반상근 및 포자를 실내배양하면참지누아리의 인공종묘 생산이 가능하다.
본 발명에서는, 참지누아리의 과포자체 또는 사분포자체의 포자를 구로론사에 부착시켜 대량 배양하였다. 과포자체에서 배양한 실험구에서는 배양 20일째에 반상근이 형성되었다(도 8a 및 도 8b 참조).
우리나라 동해안의 지누아리의 분포 및 분포 환경을 조사한 결과, 지누아리의 생존 조건을 확인하였다. 9월에서 2월에 걸쳐 사분포자 및 과포자가 출현하였으며, 포자 배양 시험 결과 20℃, 3000 lux, 12L:12D조건에서 하루만에 세포질의 이동이 시작되었고 2일후 가근이 발아되기 시작하여 13일이 경과한 후에 가근의 길이가 100 ㎛로 발달되었으며 과포자와 사분포자는 동일한 발달 형태를 보였다(도 8a 및 도 8b 참조). 사분포자 및 과포자는 약 30일 경과후 반상근의 형태로 발달되었으며 크기는 약 80 내지 120 ㎛(평균 97 ㎛)이었고, 40일 경에 직립엽체가 발아하였다(표 2 참조).
본 발명자들은 강원도 고성군 대진, 양양군 동산, 삼척시 호산, 포항 구룡포에서 2월부터 11월까지 2개월 간격으로 지누아리의 분포 및 서식 환경을 조사하였다. 지아누리 서식 장소의 수온, 염분, 용존 산소, pH 및 Chl-a(엽록소량을 나타내는 단위로서 식물프랑크톤의 량을 나타냄)를 YSI 6000(Yellow Spring Incorporated 사, USA) 및 흡광계(spectrophotometer)(Varian australia PTY LTD,Australia)를 이용하여 측정하였다. 동해안 지누아리 분포지역의 환경을 하기 표 1에 요약하였다.
| 지역 | 수온(℃) | 염분(0/00) | 용존산소(mg/ℓ) | pH | Chl-a(㎍/ℓ) |
| 고성군 대진 | 6.4∼25.5 | 32.2∼33.9 | 5.8∼8.3 | 7.6∼8.5 | 0.8∼1.9 |
| 양양군 동산 | 6.8∼25.8 | 32.5∼33.2 | 6.8∼8.5 | 7.7∼8.3 | 0.7∼1.8 |
| 삼척시 호산 | 6.6∼25.7 | 18.6∼25.1 | 6.5∼8.6 | 7.5∼8.0 | 0.9∼2.0 |
| 포항 구룡포 | 7.0∼26.8 | 32.5∼32.9 | 6.3∼8.2 | 7.4∼8.1 | 0.7∼1.5 |
상기 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 지누아리류의 서식지 환경의 수온은 6.4 내지 26.9℃를 나타내었고 염분은 18.6 내지 33.9를 나타내었다. 삼척시 호산 지역의 경우에만 담수의 영향으로 18.6 내지 25.1로 저염분을 나타내었다. 또한, 용존산소는 5.8 내지 8.6 mg/ℓ로 나타났다.
지누아리의 생활사를 확인하기 위해서, 강원도 고성군 대진, 속초시 장사동, 삼척시 호산에서 매월 각 지역별로 참지누아리를 채취하여 관찰하였다.
그 결과, 참지누아리는 정소에서 만들어지는 정자와 조과기에서 만들어지는 난자와의 수정에 의해 조세포가 만들어졌고, 조과기에는 수정모가 있으며 연결사를 통하여 수정이 이루어졌다. 조세포는 조세포사시원세포가 발달하여 과포자체로 발달하였고, 이 때의 과포자낭의 크기는 70 내지 98 ㎛(평균 87 ㎛)로 나타났다(도1E). 방출되어진 과포자는 15 내지 23 ㎛(평균 18 ㎛)로 둥근 형태였다(도 1F).
수정을 통하여 과포자낭을 가진 엽체는 9월경부터 나타났으며 이 때 엽체 크기는 12.4±4.45 ㎝ 이었다(도 2). 과포자낭을 가진 엽체는 다음해 1월까지 지속되었으며 이후 방출을 마치고 4월부터 끝녹음이 발생되기 시작할 때의 엽체 크기는 7.6±5.4 ㎝ 이었다. 6월과 7월에는 엽체를 발견할 수가 없었고 8월에 출현되기 시작하였으며 8.8±2.3 ㎝의 크기를 나타내었다.
사분포자낭을 가진 엽체도 과포자낭을 가진 엽체와 같은 시기인 9월부터 출현하였으며 이 때의 사분포자의 크기는 16 내지 22 ㎛(평균 17㎛)로 과포자의 15 내지 23 ㎛(평균 18㎛)와 유사한 모양과 색상을 나타내어 둘 간의 구분이 어려웠다. 과포자체와 같은 시기에 끝녹음 현상과 출현이 나타나 과포자에 의한 엽체 발생과 사분포자에 의한 엽체 발생이 동시에 이루어지고 있는 것으로 보였다(도 3 및 도 4).
성성숙기의 사분포자체와 과포자체의 엽체를 조사한 결과, 사분포자체는 18.95±6.1 ㎝, 과포자체는 15.61±4.8 ㎝로 나타나 크기에 차이가 있었으며(도 5) 사분포자체는 매끈하나 과포자체는 약간 돌출된 모습과 거친 엽체 모형을 하고 있어 외관상 어느정도 구분이 가능하였지만 정확한 구분을 위해서는 조직 절단에 의한 현미경 관찰에서 가능하였다(도 6). 월별 성성숙기의 사분포자체와 과포자체의 분포비율을 조사한 결과, 성성숙이 시작되는 9월에는 사분포자체가 30%, 과포자체가 20%, 미성숙 상태인 영양세포를 가진 엽체가 50% 이었고 반면, 10월에는 사분포자체가 60%, 과포자체가 40% 이었고 2월에는 사분포자체가 42%, 과포자체가 23% 로나타났으며 나머지는 성숙유형이 명확하지 않았다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실험예 1> 참지누아리 성숙 엽체의 포자 방출
샘플된 엽체는 여과 멸균 해수에서 붓을 이용하여 3차례에 걸쳐 깨끗이 세척한 다음 10% 포비돈-요오드(Povidone-iodine) 용액에 1분간 소독 처리를 1회씩 실시하여 조직 절단에 의한 성성숙도를 판정하였다. 얻어진 포자를 이용하여 배양을 위하여 플레이트(12×3 cm)에서 PES (Provasoli's Enriched Seawater) 배지 원액을 여과 멸균해수(121℃, 1.2 ㎏/㎠)에 희석하여 배양하였으며, 20℃, 3,000 lux, 12L:12D 환경을 설정하였다.
PES 배지의 제조방법은 하기와 같다.
먼저, Na2글리세로포스페이트(glycerophosphate) 1.00 g, NaNO37.00 g, Tris HCl 8.14 g 및 Tris Base 1.86 g 또는 Tris 10 g (pH 7.8)을 970 ㎖의 증류수에 용해시켜 스톡(stock) 용액을 제조하였다. 상기 스톡 용액에 필터로 멸균시킨 B 비타민 혼합액 20 ㎖, 멸균한 Fe (as EDTA 1:1 molar solution) 500 ㎖, 멸균된PⅡ 미량 금속 혼합액 500 ㎖ 및 KI 용액 (0.25 ㎎/㎖) 10 ㎖을 혼합한 후 멸균된 4 ㎖의 GeO2스톡 용액을 첨가하여 PES 배지 원액을 제조하였다. 20 ㎖의 PES 배지 원액을 1,000 ㎖의 멸균된 해수에 희석하여 지누아리 엽체의 배양에 사용하였다.
B 비타민 혼합액, Fe (as EDTA 1:1 molar solution), PⅡ 미량 금속 혼합액 및 GeO2스톡 용액의 조성을 하기에 나타내었다.
| ① B 비타민 혼합액Vitamin B121.0 ㎎Thiamine 50.0 ㎎Biotin 0.5 ㎎-------------------------증류수 100 ㎖ |
| ② Fe (as EDTA 1 : 1 molar solution)Fe(NH4)2(SO4)*6H2O 1.40 g (alternative)Fe2(NH4)2(SO4)*24H2O 2.12 gNa2EDTA 1.32 g-------------------------------증류수 2,000 ㎖ |
| ③ PⅡ 미량 금속 혼합액Boric acid (H3BO3) 2.24 gFe(FeCl3)*6H2O 0.096 gMn(MnSO4) 0.24 gZn(ZnSO4)*7H2O 0.044 gCo(CoSO4)*7H2O 0.0096 gNa2EDTA 2.00 g------------------------------------증류수 2,000 ㎖ |
| ④ GeO 2 스톡 용액 (optional)GeO20.25 g--------------------------------------증류수 1,000 ㎖ |
상기와 같은 방법에 의해 유도된 과포자 및 사분포자는(도 8a의 A 및 B) 20℃, 3000 lux, 12L:12D의 배양 조건에서 하루만에 세포질의 이동이 시작되었고(도 8a의 C) 2일후 가근이 발아되기 시작하여(도 8a의 D 및 E) 13일이 경과한 후에 가근의 길이가 100 ㎛로 동일한 발달 형태를 보였다(도 8a의 F). 사분포자 및 과포자는 약 30일 결과 후 반상근의 형태로 발달되었으며(도 8b의 G 및 H) 이때의 크기는 약 80 내지 120 ㎛(평균 97 ㎛)이었고 엽체로 발달되었다(도 8b의 I 및 J).
<실험예 2> 온도에 따른 포자 발달 비교 실험
포자의 적정 배양 온도를 규명하기 위해, 5℃, 10℃, 15℃, 20℃, 25℃ 및 30℃로 온도를 설정하여 플레이트(12×3cm)에 엽체와 함께 슬라이드글라스를 넣은 후 1주일 간격으로 PES 배지를 교환하며 현미경 관찰을 실시하였다. 온도에 따른 포자 방출, 세포 이동, 가근 발아, 가근 소멸, 반상근 및 엽체발아 정도를 비교하였다(표 2).
| 발달환경 | 포자방출 | 세포이동 | 가근발아 | 가근소멸 | 반상근60㎛ | 반상근100㎛ | 엽체발아 |
| 5℃ | 2:20 분 | 1.5 | 4 | 28 | 고사 | _ | _ |
| 10℃ | 2:00 분 | 1.3 | 2.5 | 25 | 36 | 45 | 반상근 |
| 15℃ | 1:30 분 | 20:00 분 | 2.2 | 23 | 30 | 38 | 반상근 |
| 20℃ | 1:10 분 | 15:00 분 | 1.6 | 20 | 25 | 30 | 40 |
| 25℃ | 1:00 분 | 10:00 분 | 1 | 15 | 60% 고사 | 80% 고사 | _ |
| 30℃ | 0:30 분 | 7:00 분 | 23:00분 | 고사 | - | _ | _ |
그 결과, 5℃에서는 발달 속도가 타 시험구에 비하여 매우 느렸고 포자 방출은 2시간 20분경에 이루어졌으며 세포이동은 1.5일이 소요되었다. 가근 발아는 4일후에 이루어졌고 가근 소멸은 28일이 소요되었으며 반상근을 형성하지 못하고 고사되기 시작하였다. 10℃ 시험구에서는 포자방출은 2시간만에 이루어졌고 세포이동은 1.3일이 소요되었다. 가근발아는 2.5일, 반상근 형성은 36일이 소요되었으며 반상근 크기가 100 ㎛ 될 시점은 45일이 소요되었다. 15℃ 시험구에서는 포자방출이 1시간 30분, 세포이동은 20시간만에 이루어졌으며 엽체발아는 40일 이후에도 이루어지지 않았다. 20℃ 시험구는 포자방출이 1시간 10분경에 이루어졌고 세포이동도 15시간만에 이루어졌으며 반상근 형성도 25일만에 이루어졌으며 40일 경에 직립 엽체가 발아되기 시작하였다. 25℃ 시험구는 1시간 후 포자방출이 이루어졌고 세포이동은 10시간 만에, 가근발아는 1일 후부터 시작되었으나 반상근이 형성될 무렵에는 60%가 고사되었고 이후 모두 고사되었다. 30℃ 시험구는 30분 만에 포자방출이 이루어졌고 세포이동이 7시간만에 이루어지는등 빠른 발달 속도를 보였으나 가근이 소멸될 때 모두 고사되었다. 상기 결과로부터, 포자의 적정한 배양 온도는 20℃ 임을 확인하였다.
<실험예 3> 성숙된 엽체의 조건에 따른 포자의 방출량 비교
포자의 적정 배양 환경을 규명하기 위해, 조건에 따른 포자 방출량을 비교하였다. 성숙된 과포자체(습중량 약 20 g, 엽장 12±3 cm 내외)를 플레이트에 넣은 후 20℃, 3000 lux, 12L:12D 환경하에서 2시간, 4시간 및 6시간 간격으로 샘플링 한 후 즉시 포자 방출을 유도한 경우, 30분 햇빛 노출한 경우, 12시간 냉장(4℃)처리한 경우 및 12시간 실내 음건 처리한 경우로 나누어 각각의 포자 방출량을 비교하였다.
그 결과, 즉시 포자 방출을 유도한 시험구는 30 ±4개, 30분 햇빛 노출한 시험구는 33 ±5개, 12시간 냉장 처리한 시험구는 42 ±3개 및 12시간 실내 음건 처리한 시험구는 78 ±5개의 포자가 방출되었다(도 9). 상기 결과로부터, 12시간 실내 음건 처리한 경우의 포자 방출량이 가장 높음을 확인하였으며, 6시간 처리한 경우는 소량의 포자만이 방출되어 시험 자료에서 제외하였다.
<실시예 1> 포자를 이용한 참지누아리 종묘의 생산
포자의 대량 생산을 위하여 5 ℓ아크릴수조에 자외선 조사 여과 해수(1 ㎛ 필터)를 사용하여 습중량 50 g의 성숙된 과포자체 및 사분포자체를 분리하여 배양하였다. 5 ℓ아크릴수조에 종사인 구라론사 및 슬라이드 글라스를 넣은 후 20℃, 12L:12D, 3,000 lux 환경을 설정하여 12시간 동안 음건처리하여 배양하였다(도 10의 A 내지 C). 그 결과, 배양 20일째에 구라론사에 반상근이 형성된 모습이 관찰되었다. 현미경으로 관찰했을 때, 과포자체에서 배양한 시험구의 반상근이 5 내지 7개, 사분포자체는 3 내지 5 개로 나타나 과포자체에서 배양한 경우에 더 많은 포자가 생기는 것을 확인하였다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 참지누아리의 종묘 생산 방법은 자연생산량에만 의존하고 최근에는 남획 등으로 인하여 자원량이 급속히 감소하고 있는 지누아리의 종묘의 대량 생산에 유용하게 사용될 수 있다.
Claims (10)
1) 참지누아리의 성숙엽체의 포자를 대량으로 방출시켜 종사에 부착시키는 단계;
2) 종사에 부착된 포자를 배양하여 포자의 반상근을 형성하게 하는 단계; 및
3) 반상근이 부착된 종사를 배양하여 반상근을 성장시키는 단계를 포함하는 참지누아리의 포자로부터 종묘를 생산하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 1의 성숙엽체는 12시간 음건 처리한 엽체인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 2의 상기 포자는 과포자 또는 사분포자인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 2의 종사는 구라론사인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 2의 배지는 PES 배지인 것을 특징으로 하는 방법.
제 5항에 있어서, PES 배지는 Na2글리세로포스페이트, NaNO3, Tris HCl, Tris Base, B 비타민 혼합액, Fe 용액 (as EDTA 1:1 molar solution), PⅡ 미량 금속 혼합액, KI 용액 및 GeO2스톡 용액을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 2의 배양 조건은 15 내지 20℃의 온도 범위인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 2의 배양 조건은 3,000 내지 3,500 lux의 조도 범위인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 단계 2의 배양 조건은 10 내지 12L : 14 내지 12D 광주기인 것을 특징으로 하는 방법.
제 7항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 배양 조건은 20℃, 3,000 lux 및 12L : 12D 광주기인 것을 특징으로 하는 방법.
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