KR20050004785A - 조직 인자의 억제제 또는 길항제의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환의 치료 또는 예방용 약물의 제조에 있어서 조직 인자인 TF 억제제 또는 길항제의 용도에 관한 것이다. 상기 억제제 또는 길항제는 I 형 또는 II 형 당뇨병 각각 뿐만 아니라, II 형 당뇨병에 선행하는 물질대사 증후군으로 고통받는 당뇨병 환자의 치료용으로 주로 의도된다. 상기 억제제 또는 길항제는 TF 생성을 완전히 또는 부분적으로 억제하는 제제이고, 예컨대, 항-TF 항체 또는 TF 유전자에 대해서 작용하는 안티센스 구축물이다.

Description

조직 인자의 억제제 또는 길항제의 용도 {USE OF AN INHIBITOR OR ANTAGONIST AGAINST TISSUE FACTOR}

항상성 (Haemostasis)은 생존을 위해 중요하다. 혈관 벽의 손상과 같은 지혈 균형에 있어서의 임의의 장애는 응고 시스템의 즉각적인 활성을 야기한다. 생체 내 응고 시스템은 주로, VIIa 로의 VII 인자의 분리, 응고의 조직 인자 (외인성) 경로인 VIIa 인자의 단백질 가수분해 기능을 위한 보조인자 (co-factor) 및 수용체로서 작용하는 47-kDAa 막관통 글리코프로테인 조직 인자 (TF)에 의해 촉발된다. TF 는 시토카인 수용체 대집단 (superfamily)에 속하고, VIIa 인자와 연합되는 경우, 혈관생성, 혈구누출 및 염증에 수반되는 세포간 신호 전달을 촉발하는 것으로 나타났다. TF 는 혈관 외막, 및 또한, 풍부하게 혈관이 발달된 조직, 예컨대, 태반, 뇌 및 허파 내의 세포에 의해 구조적으로 발현된다. 통상적으로는, 혈관에 노출된 세포, 예컨대, 내피 세포 및 단핵세포는 TF 를 발현시키지 않으나, 특정 염증성 자극, 예컨대, LPS, 면역 복합체 및 사이토카인은 이러한 세포 내에서 TF 발현을 야기할 수 있다. TF 는 혈액 내 조직 인자 경로 억제제 (TFPI) 에 의해 엄격히 조절된다. 최근 몇몇 공개공보는 미확인 자극에 의해 활성화될 수 있는 혈액내 미소량의 미지 TF 의 증거를 제시하였다. 혈액 유래 TF 는 응고 연속단계 (cascade)가 즉시 활성화되도록 하는 것으로 간주되나, 또한, 세동맥경화 플라크 (plaque)에서 발견되는 TF 의 기여자일 수 있다. 혈액 유래 TF 의 기원은 아직까지 알려지지 않았다.

고인슐린혈증/고혈당증과 응고 연속단계 활성 간에는 잠재적인 연관성이 있다. Ceriello 등은 응고 활성이 식사 후에 증가되는 것으로 보고하였다. 이는 글루코오스를 주입하는 경우, 정상 대상체 내에서, TF 경로 활성을 나타내는 FVIIa, 및 트롬빈의 발생이 일시적으로 증가하는 것을 나타내는 연구에 의해 더욱 분명해졌다. 상기 효과는 장기간의 고혈당증/고인슐린혈증을 갖는, 2 형 당뇨병 환자에서 더더욱 분명하였다. 주목하게도, 내부 인슐린 분비를 감소시키는 인슐린의 동시 주입과 연합된 동일 수준의 고혈당증은 TF 경로 활성을 폐기하였다. 2 형 당뇨병을 가진 개인 뿐만 아니라, 높은 BMI 를 가진, 즉, 인슐린 저항성을 가져 순환 인슐린의 생성 및 수준이 증가된 개인은 TF 경로 활성을 증가시켰다.2 형 당뇨병 환자에서의 상기 고응고성 상태는 상기 환자군에서 당뇨성 혈관 합병증 위험이 증가되는 것을 설명하는 것이 가능하도록 한다.

TF 와 랑게르한스섬 간의 또다른 잠재적인 결합은 랑게르한스섬 임상 이식 및 실험 연구 모두에서 ABO 적합성 혈액에 노출된 랑게르한섬에 의해 촉발되는 클로팅 (clotting) 반응이다. 순간 혈액-매개 염증 반응 (IBMIR)으로 명명되는 상기 반응은 응고 및 보조 시스템의 초기 활성, 혈소판의 빠른 결합 및 활성, 백혈구 결합에 의해 특징지워지고, 이는 함께 랑게르한스 섬의 본모습을 붕괴시키고, 랑게르한스섬을 둘러싼 혈전에 이르게한다.

수년간, 랑게르한스섬 임상 이식은 1 년 후의 당뇨병 완치율 (insulin-independence)로 평가되는 성공율이 대략 10 % 였다. 작년, Shapiro 등은 큰 발전을 이룩했는데, 그들은, 2 명 이상의 제공자로부터의 반복 이식으로 환자를 치료하는 경우, 당뇨병을 완치시킬 수 있다는 것을 제시하였다. 추후의 연구에서, 동일 그룹은, 이식 환자가 2 명 이상의 제공자로부터 랑게르한스섬을 제공받았다 하더라도, 상기 환자는 단지 건강한 개인의 20 % 에 해당하는 β-세포 기능을 가지는 것을 제시하였다. 이를 결합하여, 상기 발견은 이식 조직이 손실될 수 있는 불리한 과정이 반드시 수반되는 것을 분명히 하였다.

발명의 개요

놀랍게도, 본 발명자는 조직 인자가 인간의 랑게르한스섬에서 발현되는 것을 발견하였다. 조직 인자는 랑게르한스섬 내부의 내분비 세포 대부분에서 발견되었으나, 외분비 조직의 세포에서는 발견되지 않았다. TF 가 랑게르한스섬 내의내분비 세포에서 발현되고 생성된다 ("랑게르한스섬 생성 TF")는 예상치 못한 발견은 TF 가 인슐린 방출과 연합하여 방출된다는 것을 나타낸다. 아마도, 상기 TF 는 II 형 당뇨병 또는 이의 전단계를 갖는 환자, 및 손상된 글루코오스 내성을 갖는 대상체에서 죽상판 및 심장혈관 질환 위험이 증가하는 원인일 것이다. 따라서, 랑게르한스섬에서의 TF 생성, 또는 랑게르한스섬으로부터의 조직 행위체 (actor) 또는 적어도 이의 활성 형태의 방출에 대한 억제제 또는 길항제를 사용하여 상기 환자들에게서 죽상판 및 심장혈관 질환을 예방할 수 있다.

IBMIR 이 랑게르한스섬 임상 이식 중 발생하는 초기 조직의 손실을 설명하는 것으로 생각하는 것이 타당하다. IBMIR 의 유인은 알려지지 않았으나, 본 발명자는 IBMIR 이 시험관 내에서 트롬빈 억제제인 멜라가트란 (Melagatran)에 의해 폐기될 수 있다는 것을 제시했고, 이는 IBMIR 이 트롬빈 활성에 중요하게 의존하는 것을 나타낸다. 트롬빈은 하기의 2 가지 경로로 발생될 수 있다: 조직 인자 경로 (외인성 경로), 및 내인성 경로를 수반하는 증폭 루프 (loop). 따라서, 인간 랑게르한스섬에서 TF 의 국부적 생성이 아마도 IBMIR 의 개시제일 것이다. 따라서, TF 의 억제제 또는 길항제가 IBMIR 을 억제 또는 제거할 수 있고, 상기 방법을 랑게르한스섬 이식과 연관된 I 형 당뇨병 환자의 치료를 위해 사용하여, 이식된 랑게르한스섬의 생존율을 높이고, 거부반응을 피할 수 있다.

따라서, 첫번째 양태에서, 본 발명은 당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환의 치료 또는 예방을 위한 약물 제조에 있어서, 조직 인자인 TF 의 억제제 또는 길항제의 용도 또는 이를 사용하는 방법에 관한 것이다. "당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환" 이란 표현에는, 인슐린이 비정상적으로 생성 (예를 들면, 인슐린 과다분비)되는, 손상된 글루코오스 내성 또는 인슐린 저항성, 및 세동맥경화증, 심장혈관 질환 (예를 들면, 급성 심근경색증) 및 뇌혈관 질환 (예를 들면, 출혈 및 경색증)과 같은 물질대사 장해로 인한 질환이 포함된다.

억제제/길항제는 DNA, RNA 또는 단백질 수준 상의 TF 에 영향을 주는 임의의 제제일 수 있고, 따라서, 비록 상기 제제가 이에 제한되지 않으나, 공지된 TF 억제제 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 내용 중, "TF 억제" 란 표현은 랑게르한스섬으로부터의 TF 생성 뿐만 아니라, TF, 특히, 이의 활성 형태의 방출을 완전히 또는 부분적으로 억제하는 것을 의미한다. 본 발명은, 추가로, 방출된 랑게르한스섬 생성 TF 를 억제하는 것을 포함한다. "억제제" 는 TF 를 상기와 같이 억제할 수 있는 물질을 의미한다.

첫번째 구현예에서, 본 발명은 인슐린 의존 당뇨병, IDDM 환자에게로의 인슐린 생성 세포의 이식과 연합하여 투여하기 위한 약물을 제조하는데 있어서 상기와 같은 용도를 제공한다.

두번째 구현예에서, 본 발명은 심장혈관 질환 및/또는 세동맥경화증 치료용 약물을 제조하기 위한 TF 억제제/길항제의 용도를 제공한다. 유리 TF 는 세동맥경화 플라크에 결합하고, 예를 들면, 심근경색증에서 혈전증 위험을 증가시키는데 공헌한다. 상기 용도는 II 형 당뇨병 또는 이의 전단계를 갖는 환자의 치료에 특히 중요할 것으로 예상된다.

TF 억제제 또는 길항제는 TF, 특히, 랑게르한스섬 생성 TF 를 구속하는 생물학적 효과를 갖는 항-TF 항체일 수 있다.

또한, TF 억제제 또는 길항제는 TF 의 합성을 블로킹할 수 있는 제제, 예컨대, TF 유전자를 블로킹하는 안티센스 구축물 (antisense construct) 일 수 있다.

선택적 구현예에서, TF 억제제 또는 길항제는 항응고제, 예컨대, 헤파린, 또는 그의 분획 또는 유도체와 조합되어 사용된다. 다른 가능한 조합물은 트롬빈 억제제 및/또는 혈소판 억제제를 포함한다.

두번째 측면에서, 본 발명은 필요로 하는 대상체에 조직 인자인 TF 의 억제제 또는 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은, 예를 들면, 당뇨병 환자 및 손상된 글루코오스 내성을 갖는 환자를 치료하기 위해 의도된다. 상기 방법은 랑게르한스섬 내의 TF 생성 또는 랑게르한스섬으로부터의 TF 방출을 완전히 또는 부분적으로 억제하는 항-TF 제제를 투여하는 것을 포함한다.

세번째 구현예에서, 본 발명은 랑게르한스섬 내의 TF 생성 또는 랑게르한스섬으로부터의 TF 방출을 완전히 또는 부분적으로 억제하는 특성을 갖는 억제제/길항제 그 자체에 관한 것이다.

본 발명은 당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환의 치료 또는 예방용 약물을 제조하기 위한, 조직 인자인 TF 의 억제제 또는 길항제의 용도에 관한 것이다. 억제제 또는 길항제는, 주로, I 형 또는 II 형 당뇨병 각각 뿐만 아니라 II 형 당뇨병에 선행하는 물질대사 증후군으로 고통받는 당뇨병 환자의 치료를 위해 의도된다.

전자 (I 형 당뇨병)의 경우, 길항제 또는 억제제는 I 형 환자에게 랑게르한스섬을 이식하는 것과 연합하여 사용되어, 랑게르한스 섬의 생존율을 향상시킨다. 후자의 경우, 길항제 또는 억제제는 II 형 당뇨병 환자에게 나타나는 세동맥경화증 및 심장혈관 질환을 예방하는데 사용된다.

본 발명은 이제, 그 내용이 하기에 간략히 기술된, 수반되는 도면과 연합하여 기술될 것이다:

도 1: 패널 a. mAb #4509 로 염색된 인간 이자의 절편이 이자의 랑게르한스섬의 뚜렷한 염색을 나타낸다.

패널 b. mAb 항-TF #4509 로 염색된, 단리된 인간 랑게르한스섬 절편. TF 는 랑게르한스섬 세포 대부분에서 발견된다.

패널 c. 3 명으로부터의 순수한 인간 랑게르한스섬을 mAb 항-TF #4503 또는 4509 로 면역침전시키고, SDS-PAGE, 및 토끼의 폴리클로날 항-TF#4502 를 사용한 웨스턴 블롯팅 (Western blotting)을 시행하였다. 1-6 레인 (lane)은 mAb 4503 (레인 1, 3, 5) 및 mAb 4509 (레인 2, 4, 6)로 침전된 3 쌍의 TF 를 나타내고; 레인 7 은 항체만을 침전시킨 것이다.

패널 d. 6 명으로부터의 단리된 인간 랑게르한스섬의 RT-PCR (레인 2 내지 7)은 0.3 kb 의 생성물을 산출하였다. 레인 7 은 분자량 표준을 함유한다.

패널 e. 0, 2 및 7 일 동안 배양된 인간 랑게르한스섬 내의 TF 의 정량화 (n=3).

도 2. 단리된 랑게르한스섬으로부터의 절편 상에 mAb 항-TF #4509 로 면역-골드 (immuno-gold) 표지한 대표적 결과를 나타내는 전자현미경사진. 모든 골드입자는 직경이 15 nm 이다. 모든 바 (bar)는 100 nm 를 표시한다.

a) β세포의 평활 세포질세망 내에 표시된 TF 분자 (화살표) (×54000)

b) 골드 입자가 골지 더미 (stack) (화살표 머리), 골지 전이 지역 (Golgi trans region)으로부터 시작된 일시적 소포 (큰 화살표) 및 분비 과립 (작은 화살표) 내의 TF 분자를 나타내는, α-세포 내의 골지체 (×36000).

c) β-세포 과립 코어 내의 TF (화살표) 저장소 (×36000).

d) α-세포 과립 내에 무작위 분포된 TF (화살표) 저장소 (× 54000).

도 3: 패널 a: 인간 랑게르한스섬에 의해 촉발된 클로팅 시간에 대한 항-TF 의 효과. 4 ㎕ 의 인간 랑게르한스섬을 배지, 비-억제 mAb 항-TF #4503 (대조 mAb), 및 억제 항-TF #4509 로 실온에서 10 분간 예비처리하였다. 그 후에, 상기 랑게르한스섬을 250 ㎕ 의 비-항응고된 (non-anticoagulated) 인간 혈장으로 배양하였고, 클로팅 시간을 ReoRox^TM장치로 모니터링하였다 (n=7). IBMIR 이 튜빙 루프 모델 (tubing loop model) 내의 랑게르한스섬에 의해 유도되었다. 상기 랑게르한스섬을 배지 (흰색 정사각형), 비-억제 mAb 항-TF#4503 (대조 mAb) (백색 삼각형), 및 억제 항-TF#4509 (흑색 원)으로 실온에서 10 분간 예비처리하였다. 랑게르한스섬이 없는 배지를 흑색 다이아몬드로 표시하였다. 그 후에, 4 ㎕의 인간 랑게르한스섬을 헤파린화된 튜빙 루프에서 비-항응고된 인간 ABO-적합성 혈액 5 ml 로 배양하였다. IBMIR 을 b) 혈소판 개수로 모니터링하였고, c) TAT, d) F 1+2 및 e) FXIa-AT 에 대하여 EIA 를 실시하였다.

도 4: 250 ㎕ 의 인간 시트레이트 혈장을 다양한 부피의 인간 랑게르한스섬 배양 배지와 혼합하였다. 혈장을 재석화 (recalcification)시킨 후에 클로팅 시간을 ReoRox^TM장치로 측정하였다. 패널 a 가 하나의 랑게르한스섬 배치 (batch) 배지의 대표적인 순차적 희석인 반면, 패널 b 는 PBS, mAb 4503 또는 mAb 4509 로 처리된 60 ㎕ 의 상이한 3 명의 랑게르한스섬 배양 배지이다 (평균 ±SEM).

도 5 : 인간 랑게르한스섬에 의해 촉발된 IBMIR 이 항-TF 및 iFVIIa 에 의해 블로킹되었다. IBMIR 이 튜빙 루프 모델 내의 랑게르한스섬에 의해 야기되었다. 상기 랑게르한스섬을 PBS(), 비-억제 항-TF mAb 4503 (대조 mAb;), 또는 억제 항-TF mAb 4509() 로 예비처리하였다.은 랑게르한스섬이 없는 배지를 나타낸다. 상기 랑게르한스섬을 비-항응고된 인간 ABO-적합성 혈액으로 헤파린화된 튜빙 루프 내에서 배양하였다. IBMIR 을 a) 혈소판 계수로 모니터링하였고, b) TAT, 및 c) FXIa-AT 에 대해 EIA 를 실시하였다 (랑게르한스섬만을 함유하는 루프와 비교하는 경우 *p < 0.05). 선택적으로, 랑게르한스섬 배양을 40pmol/L 의 iFVIIa 의 존재 () 또는 부재 () 하에 수행하였다.은 랑게르한스섬이 없는 배지를 나타낸다. IBMIR 을 d) 혈소판 개수로 모니터링하였고, EIA 를 e) TAT 및 f) FXIa-AT 에 대해 실시하였다 (iFVIIa 없는 루프와 비교하는 경우 *p < 0 05).

도 6 : 니코틴아미드를 함유하는 배지 내에서 배양한 후의 세포간 TF 농도 (대조군과 비교하여 평가됨).

도 7 : 응고 활성을 반영하는 TAT 의 발생.

도 8 : 각각 에날라프릴 (Enalapril) (40 ㎍/ml), 시클로스포린 A (Cyclosporin A) (10 ㎛ol/L), L-아기닌 (L-Aginine) (1 mmol/L), 니코틴아미드 (Nicotinamide) (10 mmol/L)를 함유하는 배지 내에서 배양한 후의 세포간 TF 농도 (대조군과 비교하여 평가됨).

인간 랑게르한스섬 내의 TF 의 발현 및 생성

TF 의 존재를 나타내기 위하여 인간 이자 절편을 mAb 4509 로 염색하였다 (도 1a). TF 는 랑게르한스섬 내분비 세포의 전부는 아니나 대부분에 분포되어 있다는 것을 발견하였다. 염색 패턴은 TF 가 랑게르한스섬 세포 대부분의 과립 내에 위치한다는 것을 제안하였다. 또한 단리된, 인간 이자의 랑게르한스섬은, TF 발현이 단리 과정에 영향을 받지 않는다는 것을 제시하는 유사한 TF 분포를 나타내었다 (도 1b). TF 는 또한 보다 큰 혈관의 외막 내에서 발견되었다. 내피 세포는 염색되지 않았는데, 이는 TF 가 임의의 염증 신호에 반응하여 발현되지 않는다는 것을 나타냈다. TF 는 외분비 이자의 샘꽈리세포 내에서 발견되지 않았다.

TF 가 인간 랑게르한스섬 내에 존재하는 것을 확인하기 위하여, 2 개의 상이한 mAb(#4503 및 4509) 항-TF 항체를 사용하여 순수한 랑게르한스섬의 용해질로부터 상기 단백질을 끌어내었다. 상기 항체 결합된 단백질에 SDS-PAGE 를 실시하고, 이후에, 웨스턴 블로팅을 실시하였다. 침전된 단백질을 폴리클로날 항-TF 를 사용하여 동정하였다. 유사한 실험에서, 폴리클로날 항-TF 를 사용하여 TF 를 끌어내었고, 2 개의 mAbs (제시되지 않음) 중 하나로 동정하였다. 상기 폴리펩티드는 TF 의 분자량과 동일한 47 kDa 의 분자량을 가졌다 (도 1c). 배양된 랑게르한스섬 하나당 TF 함량은 ELISA 에 의해 용해질 내에서 TF 를 정량화한 후에 계산되었다 (도 1d). 랑게르한스섬 단리 직후의 양은 13 pg/랑게르한스섬이었다. 2 일째에 배양내에서 일시적으로 3 배로 증가하였으나 (42 pg/랑게르한스섬), 7 일째에는 현저히 저하되었다 (21 pg/랑게르한스섬). 정선된 순수 단리 랑게르한스섬에 수행된 RT-PCR 을 통해 mRNA 수준 상에서의 TF 발현을 또한 확인하였다. (도 1e).

인간 랑게르한스섬 내 TF 의 전자 현미경 탐지

저온 처리된 로우이크릴 (Lowicryl) 삽입 표본 상에 면역-골드법을 사용하여, 2 개의 정상 이자로부터의 랑게르한스섬 그 자체 및 단리된 랑게르한스섬의 두 배치 상의 TF 를 전자현미경적으로 나타내었다 (도 2). 조사된 모든 랑게르한스섬 내의 내분비 세포는, 비록 상기 조직이 오스뮴 처리되지 않아 세포간 구조의 콘트라스트가 최적이 아닐지라도, 초구조적 수준 (ultrastructural level) 에서 양호하게 보존되었다. 이자 랑게르한스섬 그 자체 및 단리된 란게르한스섬 모두에서, 골드 입자는 α-세포 및 β-세포 모두에서 TF 가 존재함을 나타내었다. 양 세포 유형에서, TF 는 평활 세포질세망 (도 2a), 골지 더미 및 전이-골지 더미의 일시적 소포 발아 (도 2b), 및 또한 α- 및 β-세포의 호르몬 과립 (도 2c 및 d) 내에 위치하였다. TF 분자는 β-세포 과립, 바람직하게는 전자 밀집 코어에서 중간 농도로 탐지되나, α-세포 과립 매트릭스 전체에 걸쳐 보다 높은 농도로 무작위로 분포하였다. TF 면역반응성은 δ- 또는 PP-세포에서 나타나지 않았다. 모든 음성 대조 표시 실험은 음성이었다.

항-TF 항체를 사용한 IBMIR 의 봉쇄

비-항응고된 인간 혈장과 접촉한 인간 랑게르한스섬은, 점도계로 관측시, 60분 이내에 클로팅을 유발하지 않는 버퍼만을 갖는 대조군에 비하여 약 9.5 분 후에 겔화 (gelation)를 유발시켰고, 이는 랑게르한스섬이 응고 활성을 유발시킬 수 있음을 나타낸다 (도 3a). 랑게르한스섬의 TF 의 발현과 전구응고 (procoagulant) 활성을 연결시키기 위하여, 항-TF 항체를 사용하여 활성을 블로킹하는 시도를 하였다. 억제 항-TF (mAb 4509)의 존재 하에서, 겔화는, TF 의 비기능성 에피토프 (epitope) 에 대한 대조 mAb (mAb 4503)의 1.8 배 지연에 비하여, 5.6 배인 53 분까지 지연되었다.

TF 가 IBMIR 을 촉발하는지를 조사하기 위하여, 인간 랑게르한스섬을 30 분간 튜빙 루프 모델 내에서 신선한 인간 ABO-적합성 혈액과 주변융합시켰다 (도 3). 랑게르한스섬을 항-TF 항체로 10 분간 배양한 후, 튜빙 루프에 첨가하기 전에 3 번 세척하였다. 배지 대조군 내에서 및 비-억제 항-TF (4503) 을 사용한 경우, 클로팅이 15 분 이내에 발생하였으나, 억제 항-TF (4509)를 사용하는 경우, 클로팅은 관찰 기간 전체에 걸쳐 억제되었다. 이는 혈소판의 소비 (혈소판 개수), 혈소판 α-과립 내용물 (b-트롬보글로블린)의 방출, 및 4503 이 아닌 4509 에 의해 모두 억제되는, 트롬빈-항트롬빈, 프로트롬빈 단편 (fragment) 1+2 및 인자 XIa-항트롬빈 복합체의 발생에 반영되었다 (도 3; 표 I). 상기 발견은 TF 가 IBMIR 의 촉발제라는 것을 나타낸다.

배양된 이자 랑게르한스섬으로부터 방출된 TF 에 의한 인간 혈장의 클로팅

배지가 인간 혈장과 혼합되는 경우, 전구응고 활성이 배양된 랑게르한스섬의 배양 배지 내에서 발견되었다 (도 4). 배양 배지의 존재 하에, 상기 혈장은 5분 내에 클로팅되었다. 클로팅 활성이 mAb 4509 에 의해 블로킹되는 반면, mAb 4503 은 영향을 주지 않았다. 상청이 ×100.000 g 에서 초원심분리되는 경우 상청으로는 클로팅이 나타나지 않은 반면, 펠렛은 분리되지 않은 배양 배지에 비해 2 배의 활성을 가졌다. 이는 TF 활성이 고분자량 분획과 관련되고, TF 가 막관통 부분을 갖는 막결합 단백질이기 때문에, 상기 단백질은 미세입자와 관련될 수 있다는 것을 나타냈다.

항-TF 항체 및 iFVIIa 를 사용한 IBMIR 봉쇄

첨가제가 없는 신선한 인간 혈장을 사용한 인간 랑게르한스섬의 배양은 대략 9ㆍ5 분 후에 겔화를 유발 (점도계로 관찰시)한 반면, 버퍼 단독은 60 분 후에 클로팅을 유발하지 않았고, 이는 랑게르한스섬이 응고 활성을 유발할 수 있다는 것을 나타낸다 (n=7; 제시되지 않음). 랑게르한스섬 내의 TF 의 발현과 전구응고 활성을 연관짓기 위하여, 본 출원인은 항-TF 항체를 사용하여 겔화를 블로킹하는 시도를 하였다. TF 의 비기능성 에피토프에 대한 대조 mAb (mAb 4503)에 노출된 랑게르한스섬의 경우 1.8 배 더 느린 것에 비하여, 억제 항-TF (mAb 4509)의 존재 하에서는 5.6 배 더 느리게 (53 분 후) 겔화되었다.

관찰된 TF 가 IBMIR 을 촉발시키는지 여부를 조사하기 위하여, 본 출원인은 인간 랑게르한스섬을 30 분간 튜빙 루프 모델 내에서 신선한 인간의 ABO-적합성 혈액과 주변융합시켰다 (도 5). 랑게르한스섬을 억제 또는 비억제 항-TF mAb 로 10 분간 배양한 후, 튜빙 루프에 첨가하기 전에 3 번 세척하였다. 대조 샘플 (랑게르한스섬만을 갖거나 또는 비억제 항-TF mAb 4503 을 갖는 혈액) 내에서, 클로팅이 15 분 이내에 발생하였으나, 억제 항-TF (4509)를 사용하는 경우, 클로팅은 관찰 기간 전체에 걸쳐 억제되었다. 상기 차이는 혈소판의 소비 (혈소판 개수), 혈소판 α-과립 내용물 (β-트롬보글로블린)의 방출, 및 비억제 mAb 4503 이 아닌 억제 mAb 4509 에 의해 모두 억제되는, TAT, F1+2 및 FXIa-AT 의 발생에 반영되었다 (도 5 a-c; 표 I). 유효한 TF 활성 억제제인 iFVIIa 를 사용하는 경우 IBMIR 이 더더욱 분명히 억제되었다. 40 pmol/L iFVIIa 를 함유하는 혈액이 혈소판 개수의 감소 및 TAT, FXIa-AT, 및 C3a 의 증가를 완전히 억제하였다 (도 5d-h). 상기 두 억제제의 효과는 TF 가 IBMIR 의 촉발제임을 강력히 시사한다.

항-TF 항체 및 부위-불활성화 FVIIa

인간의 조직 인자에 대한 항체 (mAb 4509 및 4503, 및 폴리클로날 항체 4502)를 American Diagnostica Inc. (Greenwich, Connecticut) 사로부터 입수하였다. MAb 4509 는 TF 활성을 억제하고, mAb 4503 은 TF 의 비기능성 에피토프를 인식한다. 폴리클로날 염소 항-마우스/10 및 15 nm Au (GAM-G10/15), 및 폴리클로날 염소 항-토끼/10 및 15 mu Au (GAR-G 10/15) 를 Amersham International (Amersham, Bucks, England)사로부터 입수하였다. 부위 불활성화된 인자 VIIa (iFVIIa)를, Wildgoose 등에 따라 FVIIa (NovoSeven, Novo Nordic, Denmark) 를 단실-Glu-Gly-Arg 클로로메틸 케톤으로 불활성화시켜 수득하였다.

논의

본 연구의 결과는 일치하게 랑게르한스섬의 α- 및 β-세포에 의해 TF 가 생성되고 분비된다는 것을 나타낸다. 면역침전, RT-PCR 및 전자 현미경 연구는,δ 또는 PP 세포가 아닌, α- 및 β-세포 모두에 의해 TF 가 발현됨을 지적한다. 배양 상청에서 발견된 TF 활성은 TF 가 랑게르한스섬으로부터 방출되는 것을 나타낸다. α- 및 β-세포 과립으로의 TF 국부화는 TF 가 인슐린 및 글루카곤과 함께 방출됨을 나타낸다. 그러나, TF 합성의 제어는 알려지지 않았다.

대부분의 IBMIR 진행이 트롬빈에 의해 작동 및 증폭된다는 최근의 발견과 결합된, IBMIR 이 항-TF 에 의해 억제됐다는 사실은, 본 출원인이 결코 그 가설에 속박되는 것으로 간주되지 않고, 그 가설이 청구범위에서 정의된 바와 같은 본 발명의 범주를 좁히는 것으로 이해되지 않아야 함에도 불구하고, 상기 반응이 어떻게 진행되는 지의 가설을 제안할 수 있도록 한다. 랑게르한스섬-발현 TF 에 의한 트롬빈의 초기 발생 후에, 트롬빈-활성된 혈소판이 랑게르한스섬 표면에 결합하기 시작한다. 혈소판을 랑게르한스섬 표면에 결합시키는 리간드는 아직 확인되지 않았지만, 콜라겐 유형 I, III, IV, 및 V 가 인간의 랑게르한스섬을 둘러싸는 것으로 보고되어왔다. 콜라겐은 혈소판 결합 및 활성의 공지된 매개체이다. 이어서, 혈액에서 혈소판이 빠르게 손실된다. 인자 XI 및 활성 혈소판을 포함하는 증폭 루프를 통하여, 더 많은 트롬빈이 형성되고, 이는 랑게르한스섬을 둘러싼 피브린 캡슐을 발생시킨다.

이식 전 랑게르한스섬 결합된 TF 활성의 억제는 랑게르한스섬 임상 이식에서 IBMIR 을 예방할 것이다. TF 발현 모두를 블로킹할 수 있는 제제 (항-TF 항체) 및 TF 합성을 블로킹할 수 있는 제제, 예를 들면, 안티-센스로 이루어진 예비처리 프로토콜이 가까운 미래에 개발될 것이 예상된다. 이식 전 랑게르한스섬의 예비처리는 확실한 임상적 잇점을 갖는데, 이는 수령자의 항상성에 악영향을 끼치지 않기 때문이다.

혈액 유래 TF 의 잠재적 공급원은 미세입자 결합 TF 를 생성하는 것으로 공지된 백혈구이다. 정상의 인간 내에서 글루코오스 주입에 반응하여 TF 경로 활성이 증가한다는 발견은 TF 활성이 선택적 글루코오스 감지 메카니즘에 의해 초기화된다는 것을 나타낸다. 인슐린과 함께 TF 의 방출은 개인 내의 불명확한 염증 진행 과정과 매우 밀접한 연관성을 제공한다. 파열된 세동맥경화 플라크는 TF 를 함유하고, TF 함량은 플라크의 혈전형성과 상호관련된다. TF 의 농도가 플라크의 내강 (luminal) 표면 근처에서 증가되기 때문에, 플라크-관련 TF 가 혈액으로부터 유래되는 것으로 제안되었다. 상기 발견을 지지하며, 혈액 유래 TF 는 세동맥경화 플라크에 결합하고, 이는 이어서 국부 동맥 혈전증의 발현을 개시할 수 있다. 본 연구는 적어도 혈액 유래 TF 의 일부가 이자 랑게르한스섬 세포로부터 발생하는 것을 제안한다. 2 형 당뇨병 환자 및 가능하게는 인슐린 저항성을 갖는 다른 개인에서 고혈당증에 반응하여 트롬빈의 발생이 증가된 것을 고려하면, 더욱 활성인 TF 가 존재하고 세동맥경화 플라크에 결합할 수 있을 것이다. 이는 상기 상태를 갖는 환자에게서 혈전증의 위험을 증가시킨다.

본 발명의 추가적 양태에 따르면, TF 생성 및/또는 이의 방출은 인슐린 생성을 감소시키는 인슐린 또는 다른 물질을 투여하여 억제될 수 있다.

인슐린을 제공받은 환자는 현저히 저하된 심장혈관 질환율을 나타낸다는 것이 발견되었다. 제안된 설명은, TF 가 인슐린이 생성되는 랑게르한스섬 내의인슐린과 밀접하게 연관되기 때문에, 인슐린 방출의 감소에 부수하여 랑게르한스섬으로부터의 TF 방출률이 감소될 것이라는 것이다.

수반되는 제안된 메카니즘은, 인슐린이 혈액 내 글루코오스 수준을 감소시키고, 글루코오스 감지 시스템이 상기 감소된 글루코오스 수준을 알게되어, 랑게르한스섬으로부터의 인슐린 추가 방출을 촉발시키지 않아 TF 의 방출을 또한 감소시킨다는 것이다.

현재는, 2 형 당뇨병으로 고통받는 환자를 인슐린으로 치료하지 않는다. 대신, 그들에게 랑게르한스섬으로부터 인슐린의 방출을 촉발시키는 약제를 제공하는데, 이는 TF 의 방출을 수반하고, CHD 가 발생할 위험을 증가시킨다.

이는, CHD 에 걸릴 위험을 갖는 환자, 예를 들면, 2 형 당뇨병 및 그의 전구증 상태인 인슐린 저항성을 갖는 환자에게서 CHD 를 예방하기 위해 사용될 수 있다는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명은 인슐린의 생성 및/또는 방출을 감소시키는 것을 특징으로 하나 TF 억제를 통하여 작용할 수 있는 물질을 투여하는 것을 포함하는 상기 환자의 신규 치료 방법을 제공한다.

본 발명 범주 내의 또다른 중요한 발견은 2 형 당뇨병 환자에서 고인슐린혈증과 심장혈관 질환 사이에 관련성이 있다는 것이다. 따라서, 랑게르한스섬 내의 TF 발현과 2 형 당뇨병 환자에서 심장동맥성 심질환 (CHD) 위험의 주지된 증가 사이의 관련성의 발견은, 본 발명의 범주 내에서, 약제 및 치료를 제공하기 위한 목적으로 사용될 수 있다.

고인슐린혈증은 2 형 당뇨병 및 그의 전구증 상태인 인슐린 저항성 모두에서공통적인 특징이다. 양 상태에서, 이자 랑게르한스섬의 α-세포는 인슐린 증가량을 생성하여, 점진적으로 증가한 인슐린 저항성의 결과인 상대적 고혈당증을 조절한다. 상기 상태 모두는 CHD 위험의 증가와 관련된다. 그에 의해, 다른 면에서는 건강한 2 형 당뇨병 환자에서의 심근경색증 위험은 이미 경색증을 겪은 환자에서의 그것과 마찬가지로 높다.

응고 활성이 식후 발생하는다는 것이 몇몇 공보에서 보고되었다. 상기 발견은 추가로, 정상의 대상체 내에서 글루코오스의 주입이 TF 경로 활성을 반영하는 FVIIa 의 발생 및 트롬빈 발생의 일시적 증가를 유발한다는 보고에 의해 지지되었다. 상기 효과는 장기간의 고혈당증/고인슐린혈증을 경험하는, 당뇨병 2 형 환자에서 더더욱 분명하다. 특히 흥미로운 것은 동일 수준의 고혈당증이, 내인성 인슐린 분비를 감소시키기 위한 인슐린의 동시 주입과 결합되는 경우, TF 경로 활성을 폐기할 수 있는 것이 관찰된다는 것이고, 이는 인슐린의 내인성 생성이 응고 활성의 필요조건인 것을 나타낸다.

미세입자 결합된 TF 의 혈소판으로의 결합은 혈전의 진행에 중요한 것으로 사료된다. 특히, 혈액 유래 TF 는 만성 심근경색증 및 불안정한 협심증 (angina) 환자에서 현저하게 증가된다.

장기간의 고혈당증에 반응한 인간 랑게르한스섬 내에서의 국부적 TF 생성 및 분비는 고인슐린혈증 도중 전신 TF 경로 활성에 대한 가설을 제공한다.

동맥경화 플라크는 TF 를 함유하고, TF 양은 플라크의 혈전발생과 상호 관련된다. 상기 플라크 내의 TF 의 기원은 완전히 이해되지 않았으나, 플라크 지질코어 내의 평활근 세포 및 거품 세포 모두가 TF 를 생성하는 것이 공지되어 있다. 세동맥경화 플라크는 2 가지 방식으로 혈전 형성을 촉발시킬 수 있다: 플라크가 그의 TF 함유 지질 코어를 분열시키고 노출시키거나, 또는 플라크의 내피 표면이 벗겨지는 방식, 및 하부 (underlying) 조직이 혈전 형성을 유발하는 방식. 후자의 경우에, 혈액 운반 TF 는 내피밑 표면에 부착되어 혈전증을 촉발시킬 수 있다.

따라서, 본 발명의 하나의 양태에 따르면, TF 억제제의 리스트에는 인슐린 분비를 감소시킬 수 있어서 랑게르한스섬으로부터의 TF 방출을 저하시키는 물질이 포함된다. 상기 물질의 예에는 인슐린 저항성을 감소시키는 티아졸린디온, 및/또는 천연 또는 재조합형 외인성 인슐린 또는 인슐린 유사체가 포함된다.

물질 및 방법

랑게르한스섬 단리

본 출원인은 리버라제 관류 (Liberase perfusion) 를 사용하고, 이후에, 냉장된 COBE 2991 원심분리기 (COBE Blood Component Technology, Lakewood, CO, 미국) 내에서 연속 밀도 피콜 구배 정제 (ficoll gradient purification)하여, 인간 시체 제공자로부터 다른 곳에 기재된 바와 같이 랑게르한스섬을 단리시켰다 (윤리 위원회로부터 승인받음). 상기 랑게르한스섬 준비물을 1 내지 7 일 동안 37 ℃ (5% CO₂) 에서 배양 배지 (CMRL 1066; ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA) 내에 보관하였다. 부피 및 순도는 디페닐티오카르바존으로 염색한 후에 현미경 정립(sizing)에 의해 측정하였다. 생존력 (viability)은 동적 주변융합 시스템 내에서 글루코오스 투여 (1.67, 16.7 및 다시 1.67 ㎛ol/L 글루코오스)에 반응하는 인슐린 분비로서 측정하였다.

항-TF 항체

인간 조직 인자에 대한 항체 (mAb #4509, #4503 및 폴리Ab #4502) 는 American Diagnostica Inc. (Greenwich, CT, 미국) 사로부터 구입하였다.

면역조직화학적 염색

이자 전체 및 단리된 랑게르한스섬 조각을 포매 (embedding) 배지 (Tissue-Tek; Miles, Eckhart, IN) 내에서 채취하고, 액체 질소 내에서 즉시 냉동시켰다. 상기 샘플을 박편 (section)화시키고, mAb# 4509 로 염색한 후에, HRP-공액된 돼지 항-마우스 Ig (DAKO A/S, Glostrup, 덴마크)로 염색하였다.

정제된 인간 랑게르한스섬으로부터 TF 의 면역침전

2,000 개의 랑게르한스섬을 실온 (RT)에서 9 ×g 의 원심분리에 의해 5 mM EDTA, 10 mM 벤즈아미딘, 0.1 mg/ml 의 대두 트립신 억제제 및 1 mM PMSF 를 함유하는 PBS 를 사용하여 5 회 세척하였다. 펠렛을 37 ℃ 에서 30 분간 1 % Triton X-100 (Sigma)가 보충된 동일한 버퍼 0.5 ml 내에서 배양하였다. 이후에, 세포 파편을 5 분간 10,000 ×g 에서 원심분리시켜 제거하였다. 3 ㎍ 의 mAb #4509 또는 #4503 을 37 ℃ 에서 30 분간 250 ㎕ 의 세포 용해질로 배양하고, Protein G Sepharose (Pharmacia Upjohn, Stockholm, 스웨덴)으로 침전시켰다. 샘플에 SDS-PAGE, 및 토끼를 사용한 폴리Ab #4502 및 토끼 면역글로불린에 대한HRP-공액된 항체 (Dako A/S)를 사용한 웨스턴 블롯 (Western blot) 분석을 실시하였다.

전자 현미경

초구조적 분석을 위하여, 2 명의 남성 환자로부터의 정상 이자 조직 표본 및 2 명의 시체-제공자로부터의 단리된 랑게르한스섬을 샘플화시켰다. 상기 환자 및 제공자 어느 누구도 임의의 물질대사 질환을 겪지 않았고, 모든 이자는 육안으로 및 현미경으로 관찰하여 정상이었고, 임의의 아밀로이드 침착을 나타내지 않았다. 항원성을 보존하기 위하여, 표본을 저온법으로 처리하였다. 니켈 그리드 (grid) 상에 위치한 초박편을 면역-골드법으로 면역표시하였다. TF 항체 mAb #4509, #4503 및 pAb #4502 (1: 25 희석) (또한 표 1 에 제시됨), 및 10 또는 15 nm 콜로이드성 골드 입자를 전자-밀집 마커 (marker)로 사용하였다. 박편을 Philips 201 전자 현미경으로 조사하기 전에 우라닐 아세테이트 및 납 시트레이트로 콘트라스트시켰다.

클로팅 시간

혈장 내 클로팅 시간을 GHI 사(Global Haemostasis Institute AB,Linkping, 스웨덴)의 4 채널 자유 진동 레오미터 (rheometer), ReoRox 4 로 측정하였다.

모델로서의 튜빙 루프

본 출원인은 전술한 모델의 변형을 사용한다. PVC 튜빙 (직경 = 6.3, 길이 390mm)으로 제조된 루프에 제조자의 권고에 따라 콜린 (Corline) 헤파린 표면 (Corline, Uppsala, 스웨덴)을 제공하였다.

4 ㎕ (∼4,000 IEQ) 의 세척된 랑게르한스섬 (CMRL 1066 로 두번)을 실온에서 10 분간 15 ㎕ 의 mAb #4509, 대조 mAb #4503 으로 또는 PBS 로 예비 배양시켰다. 3 번의 세척 단계 후에, 랑게르한스섬을 150 ㎕ 의 CMRL 1066 에 재현탁시키고, 루프 내에 위치시킨 후, 신선한 ABO-적합성 인간 혈액 (5mL)을 첨가하였다. 대략 100 mL/분의 혈류를 발생시키기 위하여, 본 출원인은 상기를 록킹 (rocking) 장치상에 두고, 30 분간 37 ℃ 의 배양기 내에 위치시켰다. 본 출원인은 또한 랑게르한스섬 없이 150 ㎕ 의 CMRL 1066 으로 보충된 혈액을 함유하는 대조 루프를 포함하였다. 관류 전, 및 5, 15 및 30 분에, 본 출원인은 추가 분석을 위하여 EDTA (4.1 mM, 최종 농도) 내에 혈액 샘플을 채취하였다.

혈액 및 혈장 분석

혈액내 혈소판 및 분화성 백혈구를 Coulter AcT diff 분석기 (Beckman Coulter, FL, 미국)를 사용하여 계수하였다.

프로트롬빈 단편 1+2 (F1+2) 및 트롬빈-항트롬빈 복합체 (TAT) 의 혈장 수준을 시판되는 EIA-키트 (EnzygnostFl+2 및 TAT, Dade Behring, Marburg, 독일)를 사용하여 정량화하였다. 혈장 FXIa-AT 복합체는 Sanchez 등에 따라 정량화되었다. β-트롬보글로불린 (β-TG)는 Asserachom (Diagnostica Stago, Asnieres-sur-Seine, 프랑스)을 사용하여 분석되었다. 보충 활성 산물 C3a 및 sC5b-9 를 전술한 바와 같이 측정하였다.

RT-PCR 분석

랑게르한스섬으로부터의 세포질 RNA 를 전술한 바와 같이 단리시켰다.단일 사슬 cDNA 를 올리고 (dT) 프라이밍 (priming) (Amersham Pharmacia)을 사용하여 제공하였다. PCR 프라이머를 결합시켜, 2 이상의 TF 전사 엑손 (exon)을 스패닝 (spanning) 하는 PCR 산물을 생성하여 게놈 DNA 의 흔적량이 아닌 cDNA 만을 증폭시켰다. 고성능 PCR 성분 (Expand, Boehringer-Mannheim, Germany)을 사용하여 RT-PCR 을 35 순환 동안 수행한 후, 생성물을 0.5 ㎍/ml 의 에티디움 브로마이드를 사용하여 3% 아가로즈 겔 상에서 분석하였다.

통계 분석

모든 결과는 평균 ±SEM 으로 표시하였다. 평균값은 Friedman ANOVA 를 사용하여 비교된다. 유의수준은 α= 0.05 에서 측정되었다.

사용된 항체	기원
1. 모노클로날 항-인간 조직 인자 항체 (#4509)	마우스
2. 폴리클로날 항-인간 조직 인자 항체 (#4502)	토끼
3. 모노클로날 항-인간 조직 인자 항체 (#4503)	마우스
4. 모노클로날 항-인간 인슐린 (XX)	마우스
5. 폴리클로날 염소 항-마우스/10 nm Au (GAM-G10)	염소
6. 폴리클로날 염소 항-토끼/15 nm Au (GAM-G15)	염소
1, 2, 3 및 4: American Diagnostica Inc., Greenwich, CT, 미국5 및 6: Amersham International, Amersham, Bucks, England

TF 합성 및 분비 억제

랑게르한스섬을, 랑게르한스섬 배양용으로 사용되는 표준 배지인, 10 mM 니코틴아미드를 함유하는 CMRL-배지 내에서 24 시간 동안 배양하였다. 그 후에, 상기 배지를 니코틴아미드 없는 CMRL-배지로 바꿨다. 또다른 24 시간의 기준 기간 후에, TF 양의 분석을 위해 랑게르한스섬을 정선하였다. 단핵세포 및 내피세포 내의 TF 발현에 영향을 주는 것으로 공지된 제제를 함유하는 배지로 48 시간 동안 배양을 계속하였다. 상기는 L-아르기닌 (L-Arginin), 시클로스포린 A (Cyclosporin A), 에날라프릴 (Enalapril), 아세틸시스테인 및 니코틴아미드였다. 랑게르한스섬을 채취하고, 시판되는 EIA 키트를 사용하여 TF 양을 분석하고, 랑게르한스섬을 시험관 내 루프 모델에서 시험하였다.

비타민 B 니코틴아미드와 함께한 랑게르한스섬 배양은 조직 인자의 합성 및 분비를 감소시켰다. 랑게르한스섬이 0 내지 50 mM 범위 농도의 니코틴아미드와 함께 배양되는 경우, 조직 인자의 생성은 랑게르한스섬 내에서 투여량 의존적으로 억제되었다 (도 1A). 유사하게, 인간 혈액과 접촉된 시험관 내 루프 모델에서 시험되는 경우, 세포간 TF 양은 TAT 발생으로 반영되는 응고 활성과 서로 관련이 있었다 (도 1B). 이는 랑게르한스섬 세포의 TF 양 및 TF 분비가 투여량 의존적인 방식으로 니코틴아미드에 의해 억제됨을 나타낸다. 면역억제성 약물 시클로스포린 A (도 2), 아미노산 L-Arg (도 2), 안지오텐신 전환 효소 억제제 에날라프릴 (Enalapril) (도 2), 및 항산화 아세틸시스테인 (제시되지 않음)을 사용하여 유사한 효과를 수득하였다.

도 6∼8 은 니코틴아미드의 효과를 나타낸다.

랑게르한스섬을 0, 10, 25 및 50 mM 니코틴아미드 (Nicotinamid)를 함유하는 배지 내에서 48 시간 동안 배양하고, 세포간 TF 농도를 측정하였다 (도 6 참조). 또한, 상기 랑게르한스섬을 시험관 내 루프 모델 내에서 신선한 인간 ABO-적합성 혈액에 노출시켰다. 샘플을 5, 15, 30 및 60 분 후에 회수하고, TAT 에 대해서 분석하였다 (도 7 참조).

랑게르한스섬을 에날라프릴 (Enalapril) (40 ㎍/ml), 시클로스포린 A (Cyclosporin A) (10 ㎛ol/L), L-아르기닌 (L-Aginine) (1 mmol/L), 니코틴아미드 (Nicotinamid) (10 mmol/L)을 함유하는 배지 내에서 48 시간 동안 배양하고, 세포간 TF 농도를 측정하였다. TF 의 농도는 비처리 대조군의 백분율로 표시한다 (도 8 참조).

또한, 니코틴아미드는, 그의 활성의 원인인 메카니즘에서 중요한 인자인, 항산화 특성을 갖는 것으로 주목된다. 따라서, 상기 물질군 내의 기타 화합물이 본 발명에 따라 이용될 수 있다는 것이 이해된다. 상기 화합물의 추가적인 예는 비타민 E, 글루타티온, 아세틸시스테인, 피롤리딘 디티오카르바메이트, 피리티온, 펜톡시필린, 헴옥시게나아제-1/CO-빌리루빈, 프로스타글란딩 A1 (Prostaglanding A1)이고, 상기 열거에 제한되지 않는다.

Claims (14)

1. 당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환의 치료 또는 예방용 약물의 제조에 있어서 조직 인자인 TF 의 억제제 또는 길항제의 용도.
2. 제 1 항에 있어서, 인슐린 의존 당뇨병, IDDM 환자에게로의 인슐린 생성 세포 이식과 연합하여 투여하기 위한 약물 제조에 있어서의 용도.
3. 제 1 항에 있어서, 심장혈관 질환 및/또는 세동맥경화증 (artheriosclerosis) 치료용 약물의 제조에 있어서의 용도.
4. 제 3 항에 있어서, 2 형 당뇨병 또는 그의 전단계 환자를 치료하기 위한 용도.
5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, TF 억제제 또는 길항제가 TF 를 구속하는 생물학적 효과를 갖는 항-TF 항체인 용도.
6. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제가 랑게르한스섬으로부터의 TF 생성 및/또는 방출을 억제하는 물질인 용도.
7. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, TF 억제제 또는 길항제가 TF 의 합성을 블로킹할 수 있는 제제인 용도.
8. 제 7 항에 있어서, 상기 제제가 TF 유전자를 블로킹하는 안티센스 구축물 (antisense construct)인 용도.
9. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, TF 생성 및/또는 방출을 억제하는 물질이 랑게르한스섬 내의 인슐린 생성을 저하시키는 것을 특징으로 하는 용도.
10. 제 9 항에 있어서, 상기 물질이 인슐린 또는 인슐린 유사체인 용도.
11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, TF 억제제 또는 길항제가 헤파린, 또는 그의 분획 또는 그의 유사체와 같은 항응고제와 배합되어 사용되는 용도.
12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, TF 억제제 또는 길항제가 트롬빈 억제제와 배합되어 사용되는 용도.
13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, TF 억제제 또는 길항제가혈소판 억제제와 배합되어 사용되는 용도.
14. 조직 인자인 TF 억제제 또는 길항제를 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병 또는 당뇨병 관련 질환의 치료 또는 예방 방법.