KR20040065065A - Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum - Google Patents

Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum Download PDF

Info

Publication number
KR20040065065A
KR20040065065A KR1020030002567A KR20030002567A KR20040065065A KR 20040065065 A KR20040065065 A KR 20040065065A KR 1020030002567 A KR1020030002567 A KR 1020030002567A KR 20030002567 A KR20030002567 A KR 20030002567A KR 20040065065 A KR20040065065 A KR 20040065065A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
probio
growth
probiotic
microorganisms
kctc
Prior art date
Application number
KR1020030002567A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR100523255B1 (en
Inventor
박용하
이인선
윤정훈
Original Assignee
주식회사 프로바이오닉
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 프로바이오닉 filed Critical 주식회사 프로바이오닉
Priority to KR10-2003-0002567A priority Critical patent/KR100523255B1/en
Publication of KR20040065065A publication Critical patent/KR20040065065A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR100523255B1 publication Critical patent/KR100523255B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Abstract

PURPOSE: An acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppress the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum is provided, thereby suppressing the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum within the intestines and body of animals, and stabilizing intestinal flora, so that diseases caused by pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum can be treated. CONSTITUTION: The acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048(KCTC 10390BP) can suppress the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum, wherein Enterococcus faecium Probio-048(KCTC 10390BP) is isolated from the contents within the large intestine of chicken. A pharmacological, veterinary and nutritional composition comprises the acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048(KCTC 10390BP), wherein the composition is orally administered to poultry or animals to prevent and treat poultry disease caused by Salmonella gallinarum or diarrhea of animals caused by pathogenic microorganisms.

Description

가금티푸스 유발 살모넬라 갈리나룸 및 유해 병원성 미생물 생육 억제능을 갖는 신규 내산성 엔테로코커스 훼시움 Probio-048 및 이를 함유한 생균활성제{Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum}Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum}

본 발명은 가금티푸스 유발 살모넬라 갈리나룸 및 유해 병원성 미생물 생육억제능을 갖는 신규 내산성 엔테로코커스 훼시움 Probio-048(Enterococcus faeciumProbio-048 KCTC 10390BP) 및 이를 함유한 생균활성제에 관한 것으로, 보다 상세하게는 가금의 대장으로부터 분리된 신규 미생물로서 내 산성, 내 담즙산성, 항생제저항성을 지니면서 동시에 가금티푸스 원인균 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum)과 유해 미생물의 생육을 효과적으로 억제할 수 있는 엔테로코커스 훼시움 Probio-048(Enterococcus faeciumProbio-048 KCTC 10390BP)과 상기 미생물을함유하는 가축용 생균활성제 및 이를 이용한 가금티푸스 예방 및 치료방법에 관한 것이다.The present invention relates to a novel acid resistant enterococcus fascium Probio-048 ( Enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP) and a probiotic containing the same, which have the ability to inhibit the growth of poulticepus-induced Salmonella gallinarum and harmful pathogenic microorganisms. As a new microorganism isolated from the large intestine, enterococcus fascidium Probio-048 (acid, bile acid, antibiotic resistance, and at the same time, effectively inhibit the growth of the caustic bacterium Salmonella gallinarum and harmful microorganisms). Enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP) and a probiotic bioactive agent containing the microorganism, and a method for preventing and treating poulticepus using the same.

국내·외 가금 사육현장에서 산발적으로 발생하는 가금티푸스(Fowl typhoid)는 급. 만성의 전염병으로 모든 일령에서 나타나며, 패혈증에 의한 높은 폐사율이 특징인 질병으로, 살모넬라균의 일종인 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum)이 원인균이다. 살모넬라에 의한 질병은 현재 항생제를 사용하여 치료하고 있으나 완치가 불가능하며, 사균 백신으로 예방하고 있으나, 완벽한 예방이 불가능한 실정이다. 또한 치료의 목적으로 사용하는 항생제는 체외로 완전히 배설이 되지 않고 숙주 내에 잔존하게 되며 지속적인 투여시 병원균들이 내성을 가지게 되므로 효과적인 치료가 불가능하고 인류의 보건에 치명적인 항생물질 내성 병원균의 발생을 야기한다. 일반적인 증상은 추백리와 비슷하나 추백리가 어린 병아리에 주로 폐사를 일으킨다면 가금티푸스는 중추 및 성계 등 모든 일령의 닭에 감염되어 높은 폐사를 일으키는 것이 특징이므로 경제적인 손실이 막대한 실정이다.Fowl typhoids occur sporadically at home and abroad. It is a chronic infectious disease that occurs at all ages and is characterized by high mortality caused by sepsis. The causative agent is Salmonella gallinarum , a type of Salmonella. Salmonella-related diseases are currently being treated with antibiotics, but they cannot be cured. They are prevented with a bacteriophage vaccine, but they cannot be completely prevented. In addition, antibiotics used for the purpose of treatment are not completely excreted in vitro and remain in the host, and the pathogens become resistant during continuous administration, which causes the occurrence of antibiotic-resistant pathogens that cannot be treated effectively and are fatal to human health. The general symptoms are similar to Chubaekri, but if Chubaekri causes mortality in young chicks, poultry fever infects chickens of all ages, including the central and sexual systems, causing high mortality.

인체 및 동물체의 장내에는 다양한 미생물들이 존재하면서 장내의 미생물 균총을 이루고 있다. 이러한 미생물 중에는 숙주 동물에 유용한 것으로 알려져 온 유산균 등의 유익한 미생물들이 있는가 하면 반대로 숙주에 직접적 또는 잠재적인 유해성을 가지는 대장균, 살모넬라, 포도상구균 등의 미생물들이 있다. 인체 및 동물체의 경우 스트레스의 증가, 유해세균의 감염, 외부 환경의 변화에 의해서 장내 미생물 균총이 파괴될 경우 유해 미생물들의 급격한 성장을 초래하여, 숙주동물의 건강상태를 악화시키게 된다. 이러한 변화는 설사에서부터 심지어는 폐사의 위험으로까지 진행될 수 있으며, 이때 치료의 목적으로 항생제를 투여하게 되고, 사용된 항생제는 체외로 완전히 배설이 되지 않고 숙주 내에 잔류하며, 지속적인 투여 시 유해미생물들이 내성을 가지게 되므로 효과적인 치료를 할 수 없게 된다. 또한 현재는 가축의 경우 육류, 우유, 난 등의 항생제 잔존량에 대한 규제가 갈수록 엄격해지고 있으므로 계속적인 항생제의 사용 및 남용은 재고해야 할 문제로 이미 대두 되어왔다. 이에 대한 대안으로 현재 생균활성제인 프로바이오틱스에 대한 관심이 증대되고 있다. 생균활성제인 프로바이오틱스는 인체나 동물의 장내에 서식하는 유익한 미생물을 분리하여 제제화한 것으로 호기성균군, 혐기성균군, 유산균, 효모균들이 사용되고 있으나 유산균들이 주요 균주로 이용되고 있다. 이러한 유산균들은 전통적으로 식품의 발효와 가공과정에 다양하게 이용되었으며, 그들의 안전성은 오래 전부터 인지되어 미국의 FDA는 GRAS(Generally recognized as safe) 목록에 이들 중의 일부를 포함시키고 있다. 따라서 유산균을 이용한 생균활성제 프로바이오틱스는 항생제 남용으로 인해 발생할 수 있는 부작용을 일으키지 않고, 장내 유해세균의 이상발효를 억제하여 안정된 장내 균총을 유지하며 유해 미생물의 감염으로 인한 질병을 감소시킬 수 있다. 또한 생균활성제의 지속적인 투여는 사료효율을 높여주고 건강 유지를 통해 증체량의 증대를 꾀할 수 있다. 생균활성제로서의 효과적인 사용을 위해서는 유해한 미생물에 대한 억제 활성뿐만 아니라 내 산성, 내 담즙산성을 지니는 것이 매우 중요하다. 동물체에 생균활성제를 투여할 후 경우 장에 도착할 때까지는 강산인 위액을 만나게 되고 그 다음 담즙산을 만나게 된다. 이들 위액과 담즙산은 일반적으로 세균을 죽이거나 활성을 떨어뜨리기 때문에 투여된 생균활성제가 무사히 장에 도달하여 그 기능을 발휘하기 위해서는 위액과 담즙산에 견딜 수 있는 성질을 가지고 있어야 한다.Various microorganisms exist in the intestine of the human body and the animal, forming a microbial flora in the intestine. Some of these microorganisms include beneficial microorganisms, such as lactic acid bacteria, which are known to be useful for host animals, while microorganisms such as Escherichia coli, Salmonella, and Staphylococcus bacteria have direct or potential harmful effects on the host. In the case of the human body and animals, when the intestinal microbial flora is destroyed by an increase in stress, infection of harmful bacteria, and changes in the external environment, the growth of harmful microorganisms causes a rapid growth of the host animal and worsens the health of the host animal. These changes can progress from diarrhea to even mortality, in which antibiotics are administered for therapeutic purposes, and the antibiotics used remain in the host rather than completely excreted in vitro, and resistance to harmful microorganisms with continued administration. You will not have effective treatment. In addition, the regulation of antibiotic residues such as meat, milk, eggs, etc. is becoming more and more strict in the case of livestock, and the continuous use and abuse of antibiotics has already emerged as a problem to be reconsidered. As an alternative, there is a growing interest in probiotics, which are currently probiotic. Probiotics, a probiotic, are prepared by separating beneficial microorganisms that live in the intestine of humans or animals. Aerobic bacteria, anaerobic bacteria, lactic acid bacteria and yeasts are used, but lactic acid bacteria are used as the main strains. These lactic acid bacteria have traditionally been used in a variety of food fermentation and processing processes, and their safety has long been recognized, and the US FDA has included some of them on the General Recognized as Safe (GRAS) list. Therefore, the probiotic probiotics using lactic acid bacteria do not cause side effects that can occur due to antibiotic abuse, inhibit the abnormal fermentation of harmful bacteria in the intestine to maintain a stable intestinal flora and reduce diseases due to infection of harmful microorganisms. In addition, continuous administration of probiotic may increase feed efficiency and increase weight gain through healthy maintenance. For effective use as a probiotic it is very important to have acid and bile acid resistance as well as inhibitory activity against harmful microorganisms. After the probiotic is administered to the animal, it meets gastric juice, which is a strong acid, until it reaches the intestine, followed by bile acids. Since these gastric juices and bile acids generally kill bacteria or reduce their activity, the administered probiotic must reach the intestines and function properly to withstand the gastric juice and bile acids.

본 발명자들은 기존의 생균활성제 보다 유해 미생물들을 더욱 효과적으로 억제할 수 있고 내 산성, 내 담즙산성을 지니며, 특히 가금티푸스(Fowl typhoid)의 원인균인 살모넬라 갈리나룸의 생육을 탁월하게 억제하는 신규 프로바이오틱 미생물의 탐색을 시도한 결과, 닭의 대장으로부터 유해 미생물에 대한 억제활성과 내산성, 내 담즙산성 능력이 뛰어날 뿐만 아니라, 살모넬라 갈리나룸의 생육을 효과적으로 억제할 수 있는 균주를 혐기적으로 분리 동정하였으며, 이 균주가 엔테로코커스 훼시움 Probio-048(Enterococcus faeciumProbio-048)이라는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention can more effectively inhibit harmful microorganisms than existing probiotic, have acid and bile acid resistance, and especially probiotics that prohibit the growth of Salmonella gallinarum, a causative agent of fowl typhoid. As a result of the search for tick microorganisms, we have anaerobicly identified and identified strains capable of effectively inhibiting the growth of Salmonella gallinarum, as well as excellent inhibitory activity, acid resistance and bile acid resistance against harmful microorganisms from chicken colon. The present invention was completed by confirming that the strain is Enterococcus faecium Probio-048.

따라서, 따라서, 본 발명의 목적은 인간 및 동물에는 해가 없고, 내 산성 및 내 담즙성이 뛰어난 신규 프로바이오틱 엔테로코커스 훼시움 Probio-048 KCTC 10390BP(Enterococcus faeciumProbio-048 KCTC 10390BP)을 제공하는 것이다.Accordingly, it is therefore an object of the present invention to provide a new probiotic enterococcus fascium Probio-048 KCTC 10390BP ( Enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP) which is harmless to humans and animals and is excellent in acid and bile resistance. will be.

본 발명의 다른 목적은 기존 항생제의 대체용으로 가축에게 투여하거나, 의약품, 사료첨가제, 동물약품 등으로 사용하여 가금티푸스(Fowl typhoid)의 원인균인 살모넬라 갈리나룸의 생육을 탁월하게 억제할 뿐만 아니라, 장내의 유해한 병원성 미생물도 억제할 수 있는 생균활성제 함유 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is not only to inhibit the growth of Salmonella gallinarum, which is a causative agent of fowl typhoid, by administering to livestock as a substitute for the existing antibiotics, or used as medicines, feed additives, animal drugs, etc. It is to provide a probiotic-containing composition that can also inhibit harmful pathogenic microorganisms in the intestine.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 분리 미생물을 이용하여 가금티푸스를 유발하는 살모넬라 갈리나룸에 의한 질병을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a method for preventing and / or treating a disease caused by Salmonella gallinarum, which induces gamma typhoid using the isolated microorganism.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 분리 미생물을 이용하여 장내 유해 병원성 미생물의 생육을 억제하거나 이들 미생물에 의한 장내 질병을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a method for inhibiting the growth of harmful enteric pathogenic microorganisms or preventing and / or treating enteric diseases caused by these microorganisms using the isolated microorganisms.

이하, 본 발명의 구성 및 작용을 상세히 설명한다. 본 발명의 다른 목적들 및 잇점들은 하기 구성을 통해 보다 명백히 이해될 것이다.Hereinafter, the configuration and operation of the present invention will be described in detail. Other objects and advantages of the present invention will be more clearly understood through the following configuration.

도 1은 본 발명 엔테로코커스 훼시움 Probio-048에 의해 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum) 생육이 억제되어 형성된 억제환의 모습을 나타내는 그림이다.1 is a view showing the appearance of the inhibitory ring formed by the growth of Salmonella gallinarum ( Salmonella gallinarum ) by the enterococcus fascium Probio-048.

본 발명의 상기 목적은 가금티푸스(Fowl typhoid)의 원인균인 살모넬라 갈리나룸의 생육을 탁월하게 억제하고, 유해한 병원성 미생물을 억제할 수 있는 내 산성, 내 담즙산성 신규 프로바이오틱 미생물인 엔테로코커스 훼시움 Probio-048 KCTC 10390BP(Enterococcus faeciumProbio-048 KCTC 10390BP), 상기 프로바이오틱 미생물을 포함하는 식품, 의약품, 동물약품, 사료첨가제 등의 식품학적 또는 약리학적 조성물, 상기 미생물을 이용하여 가금티푸스(Fowl typhoid)의 원인균인 살모넬라의 생육과 장내 서식 유해 미생물의 생육을 억제할 수 있는 방법을 제공함으로써 달성되었다.The object of the present invention is enterococcus fascium, a novel acid-resistant, bile acid-resistant probiotic microorganism capable of inhibiting the growth of Salmonella gallinarum, the causative agent of fowl typhoid, and inhibiting harmful pathogenic microorganisms. Probio-048 KCTC 10390BP ( Enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP), food or pharmaceutical composition including food, pharmaceuticals, animal drugs, feed additives including the probiotic microorganisms, poultry fever (Fowl) using the microorganism It was achieved by providing a method to inhibit the growth of Salmonella, the causative agent of typhoid), and the growth of harmful microorganisms in the intestine.

본 발명 신규 미생물인 엔테로코커스 훼시움 Probio-048은 닭에서 유래한 장내세균으로, 혐기 상태에서 생존할 수 있으며 가금티푸스(Fowl typhoid)의 원인균인 살모넬라 갈리나룸 및 다른 해로운 장내 세균들의 생육을 억제할 수 있어, 결과적으로 가축의 설사병을 예방 및 치료 할 수 있는 것으로 나타났다.Enterococcus fascium Probio-048, a novel microorganism of the present invention, is an enteric bacterium derived from chickens, which can survive anaerobic conditions and inhibit the growth of Salmonella gallinarum and other harmful enteric bacteria, which are the causative agents of fowl typhoid. As a result, it has been shown that it is possible to prevent and treat diarrhea in livestock.

본 발명은 가금류, 특히 닭 급,만성 전염병으로 패혈증에 의한 높은 폐사율이 특징인 살모넬라 균 감염에 의한 질환의 예방 또는 치료 개선 방법을 연구한 것으로, 현재 살모넬라에 의한 질병은 항생제 및 사균백신으로는 치료 및 예방이 불가능하고, 항생제의 경우는 체내 잔류 및 내성 숙주 출현을 야기시키는 문제점이 있어 아직 완벽한 예방이나 치료방법이 개발되지 못하고 있는 실정인데, 본 발명은 이러한 가금티푸스 원인균인 살모넬라 및 장내 유해 미생물들의 감염과 관련된 가 금류 질병을 치료할 수 있는 효과적이고 잠재력 있는 프로바이오틱 미생물을 제공한다. 그러므로, 본 발명 프로바이오틱 미생물 및 이를 함유한 생균활성제는 가축의 장내 서식하거나 침입하는 가금티푸스 원인균 및 장내 유해 미생물의 수를 감소시키는데 사용될 수 있다.The present invention is a study on the improvement of the prevention or treatment of diseases caused by Salmonella infection characterized by high mortality due to sepsis with poultry, especially chicken-grade, chronic infectious diseases, and the disease caused by Salmonella is currently treated with antibiotics and And it is impossible to prevent, and in the case of antibiotics, there is a problem that causes the appearance of residual and resistant host in the body has not yet developed a complete prevention or treatment method, the present invention is the Salmonella and intestinal harmful microorganisms such as causative bacteria It provides effective and potential probiotic microorganisms to treat poultry diseases related to infection. Therefore, the probiotic microorganisms of the present invention and the probiotic containing the same can be used to reduce the number of the causative organisms and intestinal harmful microorganisms that enter or invade the intestines of livestock.

본 발명 신규 프로바이오틱 미생물인 엔테로코커스 훼시움 Probio-048은 장세포에 흡착할 수 있을 뿐만 아니라, 다음과 같은 프로바이오틱 특성을 보유한다.Enterococcus fascium Probio-048, a novel probiotic microorganism of the present invention, can not only adsorb to enterocytes but also possess the following probiotic properties.

- 가금티푸스 원인균인 살모넬라 및 다른 장내 유해미생물의 생장 억제능-Growth inhibition of Salmonella and other intestinal harmful microorganisms

- 호기적, 혐기적 조건 및 다양한 pH에서의 생장능; 이러한 성질은 위장관내에서 변화되는 다양한 생리적 및 병리적 조건에 잘 적응할 수 있는 능력을 부여한다.Growth ability at aerobic, anaerobic conditions and various pHs; This property confers the ability to adapt well to various physiological and pathological conditions that change in the gastrointestinal tract.

- 위산 및 담즙산 내성-Stomach acid and bile acid resistance

- 동결건조에서의 생균활성 보유능-Probiotic retention in lyophilization

또한, 본 발명 신규 미생물은 공지의 다른 예방 또는 치료방법과 같이 항생제 내성이나 생물 독성 등의 부작용이 없는 것이 특징이다.In addition, the novel microorganism of the present invention is characterized by no side effects such as antibiotic resistance or biotoxicity as in other known prevention or treatment methods.

본 발명에 있어서, '프로바이오틱(probiotic)' 은 ' 사람을 포함한 동물의위장관내에서 숙주의 장내 미생물 균형을 개선하여 숙주에 유익한 영향을 미치는 살아있는 미생물' 의 의미로 이해된다. 프로바이오틱 미생물은 프로바이오틱 활성을 갖는 살아 있는 미생물로 단일 또는 복합균주 형태로 사람이나 동물에 건조된 세포 형태나 발효산물 형태로 급여될 경우, 숙주의 장내 균총에 유익한 영향을 미칠 수 있다.In the present invention, 'probiotic' is understood to mean 'living microorganisms which have a beneficial effect on the host by improving the intestinal microbial balance of the host in the gastrointestinal tract of animals including humans'. Probiotic microorganisms are living microorganisms with probiotic activity that can have a beneficial effect on the intestinal flora of the host when fed in the form of dried cells or fermented products to humans or animals in the form of single or complex strains.

본 발명에 있어서 "살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum)"은 닭과 칠면조 등의 가금류에서 패혈증을 일으키는 급, 만성전염병인 가금티푸스(Fowl typhoid)의 원인체로 알려져 있으며, 현재 혈청학적으로 추백리균의 표준형과 구분이 불가능하므로 혈청검사만으로는 추백리와 티푸스의 구별이 잘 되지 않는 특징이 있다.In the present invention, " Salmonella gallinarum " ( Salmonella gallinarum ) is known as a causative agent of Fowl typhoid, a graded and chronic infectious disease that causes sepsis in poultry such as chickens and turkeys, and currently serologically Because it is not possible to distinguish serum test alone, Chubaekli and typhoid is not distinguishable features.

본 발명에 있어서 "가금티푸스(Fowl typhoid)"는 병아리에서는 추백리와 증상이 유사하며 성계에서는 패혈증을 주증으로 하고 있는 소화기전염병으로서, 난계대전염을 하며, 주요 증상으로는 벼슬이 창백하고 웅크리고 눈을 감은채 앉아 있으며 황색 또는 푸른설사 증상을 보이며 사료섭취가 떨어지고 산란율이 감소되며 폐사가 어느 한 지점을 중심으로 지속적으로 확산되는 경향이 있으며, 주로 여름철에 더위로 인한 스트레스로 인해 발병이 증가하는 것으로 알려져 있다.In the present invention, "Fowl typhoid" (chicken fowl typhoid) is a gastrointestinal disease with symptoms similar to Chubaekri in chicks, and sepsis in the sexual system, the egg symptom transmission, the main symptom is pale, curled eyes Sitting on the ground, showing yellow or blue diarrhea, decreased feed intake, decreased egg laying rate, and mortality tends to continue to spread around one point, mainly due to heat stress during summer. Known.

구체적으로, 가금티푸스 원인균인 살모넬라 갈리나룸 및 장내 유해 미생물 생육억제 활성을 가지면서, 내 산성, 내 담즙산성을 보유한 미생물을 탐색하는 과정은 다음과 같았다. 즉, 혐기백 (상품명 Gas Pack pouch; BBL사 제품)에 닭의 대장 내용물을 채취하여 호모게나이저로 균질화시키고 3g을 취하여 pH 2로 조정한 혐기 희석액 27㎖에 넣어 1:10 의 비율로 희석한 다음, 진탕기를 이용하여 120분간 진탕하였다. 진탕액 1㎖를 옥스갈 (디프코사 제품, 상품명) 0.5%를 첨가한 BL 고체배지 (일본 영연화학사 제품)에 도말하고, 37℃에서 48시간 혐기장치를 이용하여 배양하였다. 배양이 끝난 후 형성된 집락(colony) 350개를 선발하여 GAM semi-agar 배지 (일본 일수제약사 제품)에 옮겨 배양한 뒤, 영하 80℃에서 보존하면서 실험에 사용하였다.Specifically, the process of searching for microorganisms having acidic and bile acid resistance while having Salmonella gallinarum and intestinal harmful microbial growth inhibitory activity, which are caustic bacteria, was as follows. In other words, the contents of the large intestine of the chicken were collected in an anaerobic bag (trade name Gas Pack pouch; manufactured by BBL), homogenized with a homogenizer, 3 g of the solution was added to 27 ml of an anaerobic dilution adjusted to pH 2, and diluted to a ratio of 1:10. Then, shaking for 120 minutes using a shaker. 1 ml of the shake solution was spread on a BL solid medium (manufactured by Young Yeon Chemical Co., Ltd.) to which 0.5% of Oxgal (Diffco Co., Ltd.) was added, and incubated at 37 ° C. using an anaerobic device for 48 hours. After the incubation, 350 colonies formed were selected, transferred to GAM semi-agar medium (manufactured by Nihon Pharmaceutical Co., Ltd.), and cultured, and then used for experiments while preserving at -80 ° C.

분리된 미생물들을 대상으로 한 유해미생물의 생장억제실험은 구로이와 등의 문헌(Kuroiwa et al., 감염증학지, 64, 257, 1990)을 변형하여 cylinder plate 법으로 실시하였다. 배양 후 나타난 억제환의 직경을 측정하여 분리균주의 병원성 미생물에 대한 생장 억제능을 비교하였다. 항생제 평가시 사용되는 미생물 10종은 한국생명공학연구소에서 분양받아 사용하였으며, 그 종류는 다음과 같다 :E. coliKCTC 2441,Klebsiella pneumoniaeKCTC 2208,Staphylococcus aureusKCTC 1621,Staphylococcus epidermidisKCTC 1917,Shigella flexeriKCTC 2008,Salmonella gallinarum,Enterobacter cloaceaKCTC 2361,Salmonella typhimurium, Citrobacter freundiiKCTC 2006,Methylosinus trichosporiumKCTC 2591. 위의 유해 미생물들을 NB(nutrient broth) 액체배지에서 배양한(37℃, 18시간) 후 배양액 0.1㎖를 취하여 NA(nutrient agar) 고체배지에 도말하고 건조시킨 다음 지름 8mm의 cylinder를 배지 위에 올려 놓았다. 분리한 미생물들은 MRS 액체배지에서 혐기적으로 배양한(37℃, 18시간) 후, 분리한 미생물이 생산하는 항균물질을 추출하기 위하여 분리 균주 배양액에 같은 양의 차가운 아세톤을 넣고, 24시간을 방치한 다음 원심분리하고, 상등액을 감압 농축하여 항균력 측정에 사용하였다. 위의 NA(nutrient agar) 배지에 올려 놓은 지름 8mm의 cylinder에 농축액 30㎕를 접종하고 배양(37℃, 24시간)하였다. 일정 시간의 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제 환(clear zone)을 측정하여 대조구와 비교하고, 유해한 병원성미생물의 생육억제활성이 가장 우수한 균주를 선별하여 Probio-048로 명명하였다.Inhibitory experiments on the growth of harmful microorganisms on isolated microorganisms were carried out using a cylinder plate method modified from Kuroiwa et al. (Kuroiwa et al. The diameter of the inhibitory ring after culture was measured to compare the growth inhibition ability against the pathogenic microorganisms of the isolate. Ten microorganisms used for the evaluation of antibiotics were distributed from Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, and their types were as follows: E. coli KCTC 2441, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Shigella flexeri KCTC 2008, Salmonella gallinarum , Enterobacter cloacea KCTC 2361, Salmonella typhimurium, Citrobacter freundii KCTC 2006, Methylosinus trichosporium KCTC 2591. After incubating the above harmful microorganisms in NB (nutrient broth) liquid medium (37 ℃, 18 hours) It was taken, plated in NA (nutrient agar) solid medium and dried, and a cylinder of 8 mm diameter was placed on the medium. The isolated microorganisms were anaerobicly cultured in MRS liquid medium (37 ℃, 18 hours), and then the same amount of cold acetone was added to the isolated strain culture medium to extract the antimicrobial substances produced by the isolated microorganisms, and left for 24 hours. After centrifugation, the supernatant was concentrated under reduced pressure and used for antibacterial activity. Inoculated with 30 μl of the concentrate in an 8 mm diameter cylinder placed on the nutrient agar (NA) medium and incubated (37 ° C., 24 hours). After the cultivation of a certain period of time, the growth inhibition ring (clear zone) formed was measured and compared with the control, and the strains with the best growth inhibitory activity of harmful pathogenic microorganisms were selected and named as Probio-048.

본 발명의 균주 엔테로코커스 훼시움 Probio-048 (Enterococcus faeciumProbio-048)이 유해한 병원성 미생물의 생장을 억제하는 억제환의 지름은 다음과 같았다.E. coliKCTC 2441에 대해 19mm,Klebsiella pneumoniaeKCTC 2208에 대해 15mm,Staphylococcus aureusKCTC 1621에 대해 16mm,Staphylococcus epidermidisKCTC 1917에 대해 18mm,Salmonella gallinarum에 대해 25mm,Enterobacter cloaceaKCTC 2361에 대해 16mm,Salmonella typhimurium에 대해 20mm,Citrobacter freundiiKCTC 2006에 대해 15mm,Shigella flexneriKCTC 2008에 대해 13mm,Methylosinus trichosporiumKCTC 2591에 대해 18mm로 나타났다. 본 발명 Probio-048에 의해Salmonella gallinarum생육이 억제되어 형성된 억제환의 모습은 도 1과 같다.The diameter of the inhibitory ring inhibiting the growth of harmful pathogenic microorganisms by the strain Enterococcus faecium Probio-048 ( Enterococcus faecium Probio-048) of the present invention was as follows. To 16mm, Salmonella typhimurium about 19mm, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208 for about 15mm, Staphylococcus aureus KCTC 1621 about 16mm, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917 about 18mm, Salmonella gallinarum 25mm, Enterobacter cloacea KCTC 2361 for E. coli KCTC 2441 20 mm, 15 mm for Citrobacter freundii KCTC 2006, 13 mm for Shigella flexneri KCTC 2008, and 18 mm for Methylosinus trichosporium KCTC 2591. Salmonella gallinarum growth is inhibited by the present invention Probio-048 form of the inhibitory ring is shown in FIG.

Probio-048 균주를 동정하기 위하여, 상기에서 선별된 균주들을 배양한 후, 형태; 생리· 생화학적 특성; 16S rRNA 유전자의 염기 서열 결정 및 분석 실험 등을 수행하였다.In order to identify Probio-048 strains, after culturing the strains selected above, the form; Physiological and biochemical properties; Nucleotide sequencing and analysis of the 16S rRNA gene were performed.

Probio-048의 형태 및 생리· 생화학적 특성을 조사한 결과, Probio-048은 그람양성 세균으로 호기적인 조건과 혐기적인 조건에서 동시에 성장하며 포자를 형성하지 않고 운동성이 없으며, 세포의 형태는 간균이다. 상기 균주의 성장 조건으로는 30∼37℃이 바람직하였다.Probio-048 is a Gram-positive bacterium that grows simultaneously in aerobic and anaerobic conditions. It does not form spores, has no motility, and forms cells. As growth conditions of the said strain, 30-37 degreeC was preferable.

Probio-048의 16S rRNA 유전자의 염기 서열은 서열번호 1로 기재된다. 16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통분류학적 분석에서 Probio-048은 엔테로코커스(Enterococcus) 속에 속하는 균주로서 99.5%의 16S rDNA 상동성으로 엔테로코커스 훼시움(Enterococcus faecium)의 표준 균주에 가장 높은 분자계통학적 유연관계를 보여주는 균주로 동정되었다. 따라서 이상의 결과에 기초하여 Probio-048을 엔테로코커스 훼시움 Probio-048(Enterococcus faeciumProbio-048)균주로 동정하고, 한국생명공학연구원 유전자은행에 기탁하였다(수탁번호: KCTC 10390BP). 본 발명 미생물은 장기간 안정적으로 보존하기 위해 글리세롤 성분을 포함하여 영하 80℃에 보관하거나 멸균된 10% 탈지유에 현탁하여 동결 건조하는 것이 바람직하다. 본 발명 균주는 통상적인 물리화학적 돌연변이 방법 등에 의해 이와 동등한 활성을 갖고 필드 안정성이 뛰어나거나 또는 보다 뛰어난 항바이러스 활성을 나타내도록 개선 또는 개량될 수 있음은 당업자에게 충분히 이해될 것이다.The base sequence of the 16S rRNA gene of Probio-048 is set forth in SEQ ID NO: 1. Based on 16S rDNA sequencing, Probio-048 is a strain belonging to the genus Enterococcus , with 99.5% 16S rDNA homology, which is the highest in the standard strain of Enterococcus faecium . It was identified as a strain showing a flexible relationship. Therefore, based on the above results, Probio-048 was identified as Enterococcus faecium Probio-048 strain and deposited in the Korea Biotechnology Research Institute Gene Bank (Accession Number: KCTC 10390BP). The microorganism of the present invention is preferably stored at minus 80 ℃ containing a glycerol component or suspended in sterile 10% skim milk to freeze-dried for long-term stable storage. It will be fully understood by those skilled in the art that the strain of the present invention can be improved or improved to have equivalent activity and excellent field stability or to exhibit better antiviral activity by conventional physicochemical mutation methods and the like.

본 발명 Probio-048 균주의 특성을 조사해본 결과, 가금티푸스 원인균인 살모넬라 갈리나룸의 생육을 탁월하게 억제할 뿐만 아니라, 장내 유해 미생물 생육 억제 실험결과 이들 위장관내 유해 미생물들에 대해서도 생장 억제능이 우수하며, 항생제에 대한 감수성 실험결과 다양한 가축 항생제에 대해 저항성이 있고 내산성 및 내담즙산염 특성이 있는 것으로 확인되었으며, 특히, 본 발명 미생물은 이미 지적한 바와 같이 가금류인 닭의 장관으로부터 분리된 것으로 정상적인 장내 미생물균총을 형성하기 때문에 특히 가금류의 사육에 더욱 잇점이 있다.As a result of investigating the characteristics of the present invention Probio-048 strain, not only inhibits the growth of salmonella gallinarum, which is the causative agent of poultice, but also inhibits the growth of harmful microorganisms in the intestine, and shows excellent growth inhibitory ability against these harmful microorganisms in the gastrointestinal tract. As a result of the susceptibility test for antibiotics, it has been found that they are resistant to various livestock antibiotics, have acid resistance and bile salt characteristics, and in particular, the microorganism of the present invention has been isolated from the intestinal tract of poultry chickens as already pointed out. It is particularly advantageous in the breeding of poultry.

본 발명의 한 유익한 측면에 있어서, 본 발명은 신규의 프로바이오틱 미생물인 엔테로코커스 훼시움 Probio-048(Enterococcus faeciumProbio-048)을 함유하는 식품, 의약품, 동물약품, 사료첨가제를 제공한다. 본 발명 미생물은 허용 가능한 담체와 함께 독립적으로, 또는 첨가되어 사용되거나 가금류가 섭취하기에 적합한 조성물 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명 미생물은 다른 프로바이오틱 세균을 함유하지 않은 식품(첨가되어 프로바이오틱 활성을 부여함) 및 이미 몇 가지의 프로바이오틱 세균을 함유한 식품(첨가되어 프로바이오틱 활성을 증강시키거나 보완함)에 첨가되어 사용될 수 있다.In one advantageous aspect of the invention, the invention provides a food, pharmaceutical, animal drug, feed additive containing Enterococcus faecium Probio-048, a novel probiotic microorganism. The microorganisms of the present invention may be used alone or in addition to an acceptable carrier or in the form of a composition suitable for ingestion by poultry. That is, the microorganism of the present invention is added to foods that do not contain other probiotic bacteria (added to give probiotic activity) and foods that already contain some probiotic bacteria (added to enhance probiotic activity. Or complementary).

본 발명의 약학적, 수의학적 또는 영양학적 조성물은 분리된 프로바이오틱 세균으로 엔테로코커스 훼시움 Probio-048(Enterococcus faeciumProbio-048) 또는 이와 함께 2종 이상의 다른 유익한 균주와 적당한 담체를 함께 포함할 수 있다.The pharmaceutical, veterinary or nutritional composition of the present invention is an isolated probiotic bacterium comprising Enterococcus faecium Probio-048 or two or more other beneficial strains together with a suitable carrier. Can be.

예컨대, 본 발명 조성물에 본 발명 균주와 함께 사용 가능한 다른 미생물들은 동물이 섭취하기에 적합하고 섭취시 유해 바이러스나 병원성 유해세균을 억제하거나 포유동물 장관 내의 미생물 균형을 개선시킬 수 있는 프로바이오틱 활성을 갖는 것들이 바람직하다. 그러한 프로바이오틱 미생물의 예로는Saccharomyces, Candida, Pichia및Torulopsis를 포함하는 효모(yeasts),Aspergillus, Rhizopus, Mucor, Penicillium등과 같은 곰팡이 및Lactobacillus, Bifidobacterium,Clostridium, Leuconostoc, Bacteroides, Staphylococcus, Lactococcus, Bacillus, Streptococcus, Fusobacterium, Propionibacterium, Enterococcus, Pediococcus그리고Micrococcus속 세균들이 있다. 적당한 프로바이오틱 미생물의 구체적인 예로는Saccharomyces cereviseae, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckii, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Micrococcus varians, Pediococcus acidilactici, 및Staphylococcus xylosus등을 들 수 있다. 바람직하게는 우수한 프로바이오틱 활성을 가지면서 가금티푸스병을 유발하는 살모넬라 갈리나룸 억제능을 나타내는 엔테로코커스 훼칼리스 Probio-048(KCTC 10391BP) 또는 이들 프로바이오틱 미생물 혼합균을 본 발명 조성물에 추가로 포함할 수 있다. 본 발명 조성물에 함유될 수 있는 담체의 예로는 증량제, 고섬유 첨가제, 캡슐화제, 지질 등일 수 있으며 이러한 담체들의 예는 당업계에 충분히 공지되어 있다. 본 발명 엔테로코커스 훼시움 Probio-048 균주는 동결건조되거나 캡슐화된 형태 또는 배양현탁액이나 건조분말 형태일 수 있다.For example, other microorganisms that can be used with the strains of the present invention in the compositions of the present invention are suitable for ingestion by animals and have probiotic activity that can inhibit harmful viruses or pathogenic harmful bacteria or improve microbial balance in the mammalian intestine upon ingestion. Those having are preferred. Examples of such probiotic microorganisms are yeasts including Saccharomyces, Candida, Pichia and Torulopsis , molds such as Aspergillus, Rhizopus, Mucor, Penicillium and Lactobacillus, Bifidobacterium , Clostridium, Leuconostoc, Bacteroides, Staactococcus, Lactusoccus Streptococcus, Fusobacterium, Propionibacterium, Enterococcus, Pediococcus and Micrococcus are bacteria. Specific examples of suitable probiotic microorganisms include Saccharomyces cereviseae, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Lactobacillcillus caseus ruciusus lucus alitususus , Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Micrococcus varians, Pediococcus acidilactici , and Staphyus et al. Preferably, further comprising enterococcus faecalis Probio-048 (KCTC 10391BP) or a mixture of these probiotic microorganisms having excellent probiotic activity and showing Salmonella gallinarum inhibiting ability to induce poulticepus disease. can do. Examples of carriers that may be contained in the compositions of the present invention may be extenders, high fiber additives, encapsulating agents, lipids, and the like and examples of such carriers are well known in the art. Enterococcus fascium Probio-048 strain of the present invention may be in lyophilized or encapsulated form or in culture suspension or dry powder form.

통상적인 항생제 대신에, 본 발명 신규 미생물 및 조성물은 생균활성제로 동물에 투여되거나 식품, 의약품, 동물약품, 또는 사료첨가제와 함께 동물에 투여될 수 있다. 이러한 생균활성제는 기존 항생제의 대체용으로 장내 유해한 미생물을 억제하며 안정된 장내 균총의 유지를 통해 동물체의 건강상태를 양호하게 하고 가축의 증체량과, 육질을 개선시키며, 산유량 및 면역력을 증가시키는 등의 목적으로 사용할 수 있다. 본 발명 조성물은 또한 장내 미생물 균총을 유지하기 위해 항생제 투여 후에도 투여될 수 있다.Instead of conventional antibiotics, the novel microorganisms and compositions of the present invention may be administered to animals as probiotic or in combination with foods, pharmaceuticals, veterinary drugs, or feed additives. These probiotic agents are used to replace harmful antibiotics, to inhibit harmful microorganisms in the intestine, to maintain stable intestinal flora, to improve the health of animals, to improve the weight gain and quality of livestock, and to increase production and immunity. Can be used as The composition of the present invention may also be administered after antibiotic administration to maintain the intestinal microflora.

특히, 살모넬라 갈리나룸 생육 억제능을 갖는 본 발명 신규 미생물은 특히, 다른 치료법이 비효과적이거나 임상적으로 부작용이 있는 가금티푸스 및 장내 유해미생물 감염의 감염에 의해 유발된 대부분의 증상 완화나 치료에 매우 유용하다.In particular, the novel microorganisms of the present invention having Salmonella gallinarum growth inhibitory ability are particularly useful for alleviating or treating most symptoms caused by infections of poultice and intestinal noxious microbial infections in which other therapies are ineffective or have clinical side effects. Do.

그리하여, 본 발명은 신규 미생물 또는 이를 유효량 함유한 조성물을 사용하여 살모넬라 갈리나룸 감염에 의한 가금티푸스의 발생을 저지하거나 장내 유해 미생물 감염에 의한 위장염 및 설사 등을 치료하는 방법을 제공한다.Thus, the present invention provides a method for preventing the occurrence of gamma typhoid due to Salmonella gallinarum infection or treating gastroenteritis and diarrhea due to intestinal harmful microbial infection using a novel microorganism or a composition containing an effective amount thereof.

이하, 실시 예를 통하여 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 단, 하기 실시 예는 본 발명을 예시하기 위한 목적으로 발명의 권리범위가 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and the effect of the present invention through the embodiment will be described in more detail. However, the following examples are not intended to limit the scope of the invention for the purpose of illustrating the present invention is limited to the following examples.

실시예 1 : 내 산성, 내 담즙산성 특성을 갖는 세균의 분리Example 1 Isolation of Bacteria with Acid and Bile Acid Resistance Properties

닭의 대장 내용물을 채취하여 혐기백 (상품명 Gas Pack pouch; BBL사 제품)을 이용하여 혐기적으로 운반하였다. 채취한 위 내용물을 호모게나이저로 균질화시키고, 3g을 pH 2로 조정한 혐기 희석액 (0.78% K2HPO4, 염혼합액 37.5㎖, L-cystein 0.5g, 25% L-ascorbic acid 2㎖, 8% Na2CO350㎖, 0.1% resazurin 1㎖를 증류수 860㎖에 녹이고, agar 0.5g을 첨가) 27㎖에 1:10 의 비율로 희석하고, 진탕기를 이용하여 120분간 진탕하였다. 진탕액 1 ㎖를 옥스갈 (디프코사 제품, 상품명) 0.5%를 첨가한 BL 고체배지 (일본 영연화학사 제품)[ Lab-lemco powder 2.4g, Proteose peptone No.3 10g, Trypticase 5g, Phytone peptone 3g, yeast extract 5g, liver extract 150ml, glucose 10g, soluble starch 0.5g, sol.A 10㎖, sol.B 5㎖, 10% FS antifoam F-20 5㎖, Tween 80 1g, L-cystein 0.5g, horse serum 50㎖를 증류수 1000㎖에 녹이고, agar 15g을 첨가; sol.A 의 조성, 10% KH2PO4과 10% K2HPO4을 혼합한 것이며; sol.B의 조성, 황산마그네슘 10g, 황산철 0.5g, 소금 0.5g, 황산망간 0.337g을 증류수 250㎖에 녹임) 에 도말하고, 37℃에서 48시간 배양하였다. 일정시간이 지난 후 나타나는 콜로니를 350개 선발하여 GAM semi-agar 배지 (일본 일수제약사 제품) [peptone 10g, Soya peptone 3g, Proteose peptone No.3 10g, Peptonized whale serum 13.5g, yeast extract 5g, Beef extract 2.2g, liver extract 1.2g, KH2PO42.5g, NaCl 3g, L-cystein 0.3g, Na thioglycolate 0.3g, glucose 2g를 증류수 1000㎖에 녹이고, agar 1.5g을 첨가] 에 옮겨 37℃에서 배양한 뒤, 영하 80℃에서 보존하였다.The contents of the large intestine of the chicken were collected and transported anaerobicly using an anaerobic bag (trade name Gas Pack pouch; manufactured by BBL). The collected gastric contents were homogenized with a homogenizer, and 3 g of the anaerobic dilution adjusted to pH 2 (0.78% K 2 HPO 4 , salt mixture 37.5 ml, L-cystein 0.5 g, 25% L-ascorbic acid 2 ml, 8 50 ml of% Na 2 CO 3 and 1 ml of 0.1% resazurin were dissolved in 860 ml of distilled water, and 0.5 g of agar was added) and diluted to a ratio of 1:10 in 27 ml. The mixture was shaken for 120 minutes using a shaker. BL solid medium containing 0.5 ml of oxal (made by Diffco Co., Ltd.), 1 ml of shaking liquid (manufactured by Young Yeon Chemical Co., Ltd.) [Lab-lemco powder 2.4 g, Proteose peptone No. 3 10 g, Trypticase 5 g, Phytone peptone 3 g , yeast extract 5g, liver extract 150ml, glucose 10g, soluble starch 0.5g, sol.A 10ml, sol.B 5ml, 10% FS antifoam F-20 5ml, Tween 80 1g, L-cystein 0.5g, horse Dissolve 50 ml of serum in 1000 ml of distilled water and add 15 g of agar; a composition of sol.A, 10% KH 2 PO 4 and 10% K 2 HPO 4 ; The composition of sol.B, 10 g of magnesium sulfate, 0.5 g of iron sulfate, 0.5 g of salt, and 0.337 g of manganese sulfate were dissolved in 250 ml of distilled water) and incubated at 37 ° C for 48 hours. 350 colonies appearing after a certain period of time were selected and GAM semi-agar medium (manufactured by Japan Pharmaceutical Co., Ltd.) 2.2 g, liver extract 1.2 g, KH 2 PO 4 2.5 g, NaCl 3 g, L-cystein 0.3 g, Na thioglycolate 0.3 g, and glucose 2 g are dissolved in 1000 ml of distilled water, and 1.5 g of agar is added to it. After that, it was stored at minus 80 ℃.

실시예 2 : 분리 동정한 미생물의 열안정성Example 2 Thermal Stability of Isolated Microorganisms

〈재료 및 방법〉〈Materials and Methods〉

분리한 미생물의 내열성을 측정하기 위하여, 2차 계대한 미생물 배양액을 80℃ water bath에서 10분간 열처리한 다음 급냉시킨 후, 0.85% NaCl 용액에 10진 희석하여 생균수를 측정하였으며, 생균수 측정용 배지는 BCP를 사용하였다. 열처리후 생존한 균수를 Log survivors(%)로 표시하였으며, 그 결과는 표 1과 같다.In order to measure the heat resistance of the isolated microorganisms, the secondary passage microbial culture solution was heat-treated in an 80 ℃ water bath for 10 minutes and then quenched, and the number of viable cells was measured by diluting the decimal in 0.85% NaCl solution. BCP was used as the medium. The number of viable cells after heat treatment was expressed as Log survivors (%), and the results are shown in Table 1.

실시예 3 : 분리된 미생물의 유해 미생물 생장 억제 실험Example 3 Experiment of Inhibiting Harmful Microorganism Growth of Isolated Microorganisms

분리된 미생물들을 대상으로 한 유해미생물의 생장억제실험은 구로이와 등(Kuroiwa et al., 감염증학회지, 64, 257, 1990) 의 방법을 이용하여 항생제 평가시 사용되는 다음의 미생물 10종을 대상으로 하였다. :E. coliKCTC 2441,Klebsiella pneumoniaeKCTC 2208,Staphylococcus aureusKCTC 1621,Staphylococcus epidermidisKCTC 1917,Shigella flexneriKCTC 2008,Salmonella gallinarum , Enterobacter cloaceaKCTC 2361,Salmonella typhimurium, Citrobacter freundiiKCTC 2006,Methylosinus trichosporiumKCTC 2591. 위의 유해한 병원성 미생물들을 NB(nutrient broth) 액체배지에서 배양한(37℃, 18시간) 후 배양액 0.1㎖를 취하여 NA(nutrient agar) 고체배지에 도말 하고 건조시킨 다음 지름 8mm의 cylinder를 배지 위에 올려 놓았다. 분리한 미생물들은 MRS 액체배지에서 혐기적으로 배양한(37℃, 18시간) 후, 분리한 미생물이 생산하는 항균물질을 추출하기 위하여 분리 균주 배양액에 같은 양의 차가운 아세톤(4℃)을 넣고, 24시간을 방치한 다음 원심분리하고, 상등액을 감압 농축하여 항균력 측정에 사용하였다. 위의 NA(nutrient agar) 배지에 올려 놓은 지름 8mm의 cylinder에 농축액 30㎕를 접종하고 배양(37℃, 24시간)하였다. 일정 시간의 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제 환(clear zone)을 측정하여 대조구와 비교하였으며, 유해한 병원성미생물에 대한 억제 활성을 표 2에 나타내었다.Inhibitory experiments on the growth of harmful microorganisms on isolated microorganisms were carried out on the following 10 microorganisms used for antibiotic evaluation using Kuroiwa et al. (Kuroiwa et al., Journal of Infectious Diseases, 64, 257, 1990). It was. : E. coli KCTC 2441, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Shigella flexneri KCTC 2008, Salmonella gallinarum, Enterobacter cloacea KCTC 2361, Salmonella typhimurium, Citrobacter freundii KCTC 2006, Methylosinus trichosporium KCTC 2591. The above After harmful pathogenic microorganisms were cultured in NB (nutrient broth) liquid medium (37 ° C, 18 hours), 0.1 ml of the culture medium was taken, plated and dried on a nutrient agar (NA) solid medium, and a cylinder having a diameter of 8 mm was placed on the medium. The isolated microorganisms were anaerobicly cultured in MRS liquid medium (37 ℃, 18 hours), and then the same amount of cold acetone (4 ℃) was added to the isolated strain culture medium to extract the antimicrobial substances produced by the isolated microorganisms. After standing for 24 hours, centrifugation was carried out, and the supernatant was concentrated under reduced pressure and used for measuring antibacterial activity. Inoculated with 30 μl of the concentrate in an 8 mm diameter cylinder placed on the nutrient agar (NA) medium and incubated (37 ° C., 24 hours). The growth zones formed after the cultivation of a certain time period were measured and compared with the control, and the inhibitory activity against harmful pathogenic microorganisms is shown in Table 2.

표 2에서 알 수 있는 바와 같이 Probio-048은 사용된 유해미생물 10종에 대해서 생육 억제 활성을 지니며, 특히 가금티푸스 원인균인Salmonella gallinarum에 대해서 강한 항균능력을 지닌 매우 유용한 미생물인 것으로 확인되었다.As can be seen in Table 2, Probio-048 has a growth inhibitory activity against 10 harmful microorganisms used, and was found to be a very useful microorganism with strong antibacterial activity against Salmonella gallinarum, which is a causative agent of poultice .

실시예 4 : 분리한 미생물 probio-48의 동정Example 4 Identification of Isolated Microbial Probio-48

실시예 1에서 분리된 Probio-48 균주를 MRS 배지(Difco사 제품)에서 37℃ 조건으로 배양하였다. Probio-48 균주를 동정하기 위하여, Probio-48의 형태 및 생리학적 특성은 윤 등(Yoon et al, Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 904, 1997)의 방법과 API 32A 및 CHL 키트(바이오메리오사 제품)를 사용하여 결정하였다. 16S rRNA유전자의 염기서열 결정 및 분석은 윤 등(Yoon et al., Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 933, 1997)의 방법을 사용하였다.Probio-48 strain isolated in Example 1 was incubated in 37 ° C conditions in MRS medium (Difco). To identify Probio-48 strains, the morphology and physiological properties of Probio-48 were determined by Yoon et al, Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 904, 1997 and the API 32A and CHL kits. Biomerio Co., Ltd.). The sequencing and analysis of the 16S rRNA gene was performed by Yoon et al., Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 933, 1997.

Probio-048은 그람양성의 세균으로 호기적인 조건과 혐기적인 조건에서 동시에 성장하며 포자를 형성하지 않고 운동성이 없으며, 세포의 형태는 구균이다. 상기 균주의 성장 조건으로는 30℃∼37℃가 바람직하다. 가스와 인돌을 생성하지 않으며, 용혈성을 나타내지 않고 질산을 환원하지 않는다. 또한, 0.5% 담즙산에 내성을 나타낸다.Probio-048 is a Gram-positive bacterium that grows simultaneously in both aerobic and anaerobic conditions. It does not form spores and lacks motility. As growth conditions of the said strain, 30 degreeC-37 degreeC is preferable. It does not produce gases and indole, does not show hemolysis and does not reduce nitric acid. It is also resistant to 0.5% bile acids.

Probio-048의 16S rRNA 유전자의 염기 서열은 서열번호 1로 기재된다. 16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통분류학적 분석에서 Probio-048은 엔테로코커스(Enterococcus) 속에 속하는 균주로서 99.5%의 16S rDNA 상동성으로 엔테로코커스 훼시움(Enterococcus faecium)의 표준 균주에 가장 높은 분자계통학적 유연관계를 보여주는 균주로 동정되었다. 따라서 이상의 결과에 기초하여 Probio-048은 엔테로코커스 훼시움(Enterococcus faecium)의 균주로 동정하고, 한국생명공학연구원유전자은행에 2002년 12월 6일자로 기탁하였다(기탁번호: KCTC 10390BP).The base sequence of the 16S rRNA gene of Probio-048 is set forth in SEQ ID NO: 1. Based on 16S rDNA sequencing, Probio-048 is a strain belonging to the genus Enterococcus , with 99.5% 16S rDNA homology, which is the highest in the standard strain of Enterococcus faecium . It was identified as a strain showing a flexible relationship. Therefore, based on the above results, Probio-048 was identified as a strain of Enterococcus faecium , and was deposited on December 6, 2002 with the Korea Biotechnology Research Institute Gene Bank (Accession Number: KCTC 10390BP).

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 엔테로코커스 속의 신규 미생물인 엔테로코커스 훼시움 Prebio-048 KCTC 10390BP(Enterococcus faeciumProbio-048 KCTC 10390BP)은 가금티푸스 원인균인Salmonella gallinarum및 병원성 세균을 억제하는 프로바이오틱스로 동물의 체내 및 장내에서 유해한 성질을 나타내는 여러종의 병원성 세균을 효과적으로 억제하고 내 산성, 내 담즙산성의 특성을 가지고 있어서 기존 항생제의 대체용으로 인체 및 각종 가축에게 투여하면 장내미생물 균총의 안정화를 이루어 장내 유해한 미생물의 이상발효에 의하여 발생할 수 있는 증상들을 치료하거나 사전에 예방할 수 있다. 또한 건강상태를 양호하게 하고 가축의 증체량과 육질의 개선, 산유량 및 면역력 증가 등의 효과를 얻을 수 있다.As described above, Enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP, a novel microorganism of the genus Enterococcus of the present invention, enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP is a probiotic that inhibits Salmonella gallinarum , which is a causative agent of poultry fever, and probiotics. It effectively inhibits various pathogenic bacteria that have harmful properties in the body and intestine, and has the characteristics of acid and bile acid resistance, and when administered to humans and various livestock as a substitute for the existing antibiotics, it stabilizes the intestinal microflora and intestinal harmful microorganisms Symptoms that can be caused by abnormal fermentation can be treated or prevented. In addition, it is possible to improve the health status and improve the weight gain and meat quality of the livestock, and increase the milk yield and immunity.

<110> Probionic Inc. <120> Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum <130> probio-48 <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1430 <212> DNA <213> Enterococcus faecium Probio-048 <220> <221> rRNA <222> (1)..(1430) <223> rRNA gene <400> 1 gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gcttcttttt ccaccggagc 60 ttgctccacc ggaaaaagag gagtggcgaa cgggtgagta acacgtgggt aacctgccca 120 tcagaagggg ataacacttg gaaacaggtg ctaataccgt ataacaatcg aaaccgcatg 180 gttttgattt gaaaggcgct ttcgggtgtc gctgatggat ggacccgcgg tgcattagct 240 agttggtgag gtaacggctc accaaggcca cgatgcatag ccgacctgag agggtgatcg 300 gccacattgg gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc 360 ggcaatggac gaaagtctga ccgagcaacg ccgcgtgagt gaagaaggtt ttcggatcgt 420 aaaactctgt tgttagagaa gaacaaggat gagagtaact gttcatccct tgacggtatc 480 taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc 540 gttgtccgga tttattgggc gtaaagcgag cgcaggcggt ttcttaagtc tgatgtgaaa 600 gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggag acttgagtgc agaagaggag 660 agtggaattc catgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatat ggaggaacac cagtggcgaa 720 ggcggctctc tggtctgtaa ctgacgctga ggctcgaaag cgtggggagc aaacaggatt 780 agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttggagg gtttccgccc 840 ttcagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacgaccg caaggttgaa 900 actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 960 acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctttgaccac tctagagata gagcttcccc 1020 ttcgggggca aagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1080 gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat tgttagttgc catcattcag ttgggcactc 1140 tagcaagact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc 1200 cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tgggaagtac aacgagtcgc gaagtcgcga 1260 ggctaagcta atctcttaaa gcttctctca gttcggattg caggctgcaa ctcgcctgca 1320 tgaagccgga atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc 1380 ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgtaacac ccgaagtcgg 1430<110> Probionic Inc. <120> Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can          suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella          gallinarum <130> probio-48 <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1430 <212> DNA <213> Enterococcus faecium Probio-048 <220> <221> rRNA (222) (1) .. (1430) <223> rRNA gene <400> 1 gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gcttcttttt ccaccggagc 60 ttgctccacc ggaaaaagag gagtggcgaa cgggtgagta acacgtgggt aacctgccca 120 tcagaagggg ataacacttg gaaacaggtg ctaataccgt ataacaatcg aaaccgcatg 180 gttttgattt gaaaggcgct ttcgggtgtc gctgatggat ggacccgcgg tgcattagct 240 agttggtgag gtaacggctc accaaggcca cgatgcatag ccgacctgag agggtgatcg 300 gccacattgg gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc 360 ggcaatggac gaaagtctga ccgagcaacg ccgcgtgagt gaagaaggtt ttcggatcgt 420 aaaactctgt tgttagagaa gaacaaggat gagagtaact gttcatccct tgacggtatc 480 taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc 540 gttgtccgga tttattgggc gtaaagcgag cgcaggcggt ttcttaagtc tgatgtgaaa 600 gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggag acttgagtgc agaagaggag 660 agtggaattc catgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatat ggaggaacac cagtggcgaa 720 ggcggctctc tggtctgtaa ctgacgctga ggctcgaaag cgtggggagc aaacaggatt 780 agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttggagg gtttccgccc 840 ttcagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacgaccg caaggttgaa 900 actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 960 acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctttgaccac tctagagata gagcttcccc 1020 ttcgggggca aagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1080 gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat tgttagttgc catcattcag ttgggcactc 1140 tagcaagact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc 1200 cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tgggaagtac aacgagtcgc gaagtcgcga 1260 ggctaagcta atctcttaaa gcttctctca gttcggattg caggctgcaa ctcgcctgca 1320 tgaagccgga atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc 1380 ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgtaacac ccgaagtcgg 1430

Claims (7)

가금티푸스 원인균인 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum) 및 장내 서식 유해미생물의 생육을 억제하는 엔테로코커스 훼시움 Probio-048 KCTC 10390BP(Enterococcus faeciumProbio-048 KCTC 10390BP). Enterococcus faecium Probio-048 KCTC 10390BP which inhibits the growth of intestinal inhabitants such as Salmonella gallinarum and intestinal habitat harmful microorganisms. 허용 가능한 담체 및 유효량의 상기 제 1항 프로바이오틱 엔테로코커스 훼시 움 Probio-048을 포함하고 프로바이오틱 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 약학적, 수의학적 또는 영양학적 조성물.A pharmaceutical, veterinary or nutritional composition comprising an acceptable carrier and an effective amount of the probiotic enterococcus fasium Probio-048 and having probiotic activity. 제 2항에 있어서, 상기 조성물이 엔테로코커스 훼칼리스 Probio-053(KCTC 10391BP) 또는 이와 1종 이상의 프로바이오틱 미생물을 추가로 포함하는 조성물.The composition of claim 2, wherein said composition further comprises Enterococcus faecalis Probio-053 (KCTC 10391BP) or one or more probiotic microorganisms thereof. 제 2항 또는 제 3항에 있어서, 상기 조성물이 구강 섭취 시 가금류에서의 가금티푸스 예방 또는 치료에 유용한 조성물.4. The composition of claim 2 or 3, wherein said composition is useful for the prevention or treatment of poultry fever in poultry upon oral ingestion. 상기 제1항의 엔테로코커스 훼시움 Probio-048, 또는 상기 제2항이나 제 3항의 프로바이오틱 조성물을 유효량으로 포함하는 식품, 의약품, 동물약품, 또는 사료첨가제.A food, pharmaceutical, animal drug, or feed additive comprising the enterococcus fascium Probio-048 of claim 1 or an effective amount of the probiotic composition of claim 2 or 3. 상기 제1항의 엔테로코커스 훼시움 Probio-048, 또는 상기 제2항이나 제3항의 프로바이오틱 조성물을 이용하여 살모넬라 갈리나룸에 의한 가금티푸스를 예방 또는 치료하는 방법.The method of claim 1, wherein the enterococcus fascium Probio-048 or the probiotic composition of claim 2 or 3 is used for preventing or treating gamma typhoid caused by Salmonella gallinarum. 상기 제 1항의 엔테로코커스 훼시움 Probio-048, 또는 상기 제2항이나 제3항의 프로바이오틱 조성물을 이용하여 장내 유해 병원성미생물의 생육을 억제하거나 상기 미생물에 의한 설사를 예방 또는 치료하는 방법.A method of inhibiting the growth of harmful enteropathogenic microorganisms in the intestine or preventing or treating diarrhea caused by the microorganism using the enterococcus fascium Probio-048 of claim 1 or the probiotic composition of claim 2 or 3.
KR10-2003-0002567A 2003-01-14 2003-01-14 Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum KR100523255B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2003-0002567A KR100523255B1 (en) 2003-01-14 2003-01-14 Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2003-0002567A KR100523255B1 (en) 2003-01-14 2003-01-14 Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20040065065A true KR20040065065A (en) 2004-07-21
KR100523255B1 KR100523255B1 (en) 2005-10-24

Family

ID=37355438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2003-0002567A KR100523255B1 (en) 2003-01-14 2003-01-14 Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100523255B1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101374019B1 (en) * 2012-04-30 2014-03-12 서울대학교산학협력단 New Pediococcus acidilactici, the Method of isolating the strain and Composition for prevention and treation of fowl typhoid using it

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100692207B1 (en) 2006-10-11 2007-03-12 우리생명과학(주) Novel microorganism streptomyces fradiae wr and probiotics containing thereof for preventing and treating fowl typhoid
KR101040226B1 (en) 2008-05-27 2011-06-09 (주)비온디 Novel Burkholderia cepacia SE-490 and Method for Preparing a Antibacterial Substance Coated Egg Trays Using the Culture extracts of Antagonistic Bacteria against Salmonella Species Using the Same
KR102055916B1 (en) * 2018-10-31 2019-12-13 에프앤씨바이오 주식회사 Enterococcus faecium FNC2 or Composition for preventing or treating porcine salmonellosis comprising the same

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101374019B1 (en) * 2012-04-30 2014-03-12 서울대학교산학협력단 New Pediococcus acidilactici, the Method of isolating the strain and Composition for prevention and treation of fowl typhoid using it

Also Published As

Publication number Publication date
KR100523255B1 (en) 2005-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7192581B2 (en) Lactobacillus reuteri useful as probiotics
ASML A et al. The beneficial role of probiotics in monogastric animal nutrition and health
WO2005007834A1 (en) Acid tolerant probiotic lactobacillus plantarum probio-38 that can suppress the growth of pathogenic microorganism and tge coronavirus
BR112014025119B1 (en) BACILLUS COMPOSITION AND METHODS FOR THE PRODUCTION OF AN ANIMAL FOOD OR A PREMIXTURE AND FOR AN ANIMAL FEEDING
WO1995016461A1 (en) PROBIOTIC FOR CONTROL OF $i(SALMONELLA)
JP2006514019A (en) Antibacterial compounds from Bacillus subtilis for use against animal and human pathogens
KR20130113037A (en) Novel bacillus subtilis
CN113040390A (en) Probiotic and salt-tolerant Lactobacillus johnsonii strain and application thereof in prevention and treatment of pathogenic bacteria in livestock and poultry aquaculture
Wulandari et al. Quality and probiotic lactic acid bacteria diversity of rabbit meat Bekasam-fermented meat
KR101068531B1 (en) Novel bacteriocin-producing lactic acid bacteria and mixed microbial composition using it for livestocks
KR101047948B1 (en) Lactobacillus Producing Bacteriocin and Probiotic Composition Containing the Same
KR100557397B1 (en) Acid tolerant probiotic Lactobacillus reuteri Probio-054 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms
KR100585391B1 (en) Acid tolerant probiotic Lactobacillus plantarum Probio-38 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and TGE coronavirus
Al-Faragi et al. Isolation and identification of Bacillus subtilus as (probiotic) from intestinal microflora of common carp Cyprinus carpio L
KR100523255B1 (en) Acid tolerant probiotic Enterococcus faecium Probio-048 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum
KR100513167B1 (en) Acid tolerant probiotic Enterococcus faecalis Probio-053 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and Salmonella gallinarum
KR100513168B1 (en) Acid tolerant probiotic Enterococcus faecalis Probio-056 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and PED coronavirus
KR101616530B1 (en) Lactococcus lactis KR-W.W-2 as a novel strain with antibacterial activity and use thereof
US9107938B2 (en) Methods of selecting and using therapeutic and prophylactic probiotic cultures to reduce bacterial pathogen loads
KR101201337B1 (en) A feed additive containig novel Lactobacillus spp. complex
KR20050041808A (en) Leuconostoc citreum km20 that can suppress the growth of pathogenic microorganisms and suppressed tumour growth
KR100585392B1 (en) Acid tolerant probiotic Lactobacillus slivarius Probio-37 that can suppresses the growth of pathogenic microorganisms and TGE coronavirus
KR20030070319A (en) Novel acid tolerant probiotic lactobacillus acidophilus Probio-40 with probiotic activities
KR100490284B1 (en) New acid tolerant probiotic enterococcus faecalis probio-64 that can suppress the growth of porcine reproductive and respiratory syndrome virus
KR101633909B1 (en) Lactobacillus plantarum mz-1 strain with antimicrobial activity against harmful bacteria to hatchery fish

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130415

Year of fee payment: 8

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140114

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160310

Year of fee payment: 11

LAPS Lapse due to unpaid annual fee