KR20030051890A - 아데노신 ａ₁, ａ₂ａ 및 ａ₃ 수용체에 특이적인 화합물및 그의 용도 - Google Patents

아데노신 ａ₁, ａ₂ａ 및 ａ₃ 수용체에 특이적인 화합물및 그의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 아데노신 A1, A2A및 A3수용체를 특이적으로 억제하는 화합물, 및 환자에게 치료 유효량의 상기 화합물을 투여함을 포함하는 상기 환자에서 A1, A2A및 A3수용체와 관련이 있는 질병을 치료하기 위한 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

Description

아데노신 Ａ₁, Ａ₂Ａ 및 Ａ₃ 수용체에 특이적인 화합물 및 그의 용도{COMPOUNDS SPECIFIC TO ADENOSINE A1, A2A AND A3 RECEPTOR AND USES THEREOF}
아데노신은 특히 심혈관계 및 신경계 내에 편재된 다수의 생리학적 활동들에대한 조절인자이다. 아데노신의 효과는 특정한 세포 표면 수용체 단백질들에 의해 매개되는 듯 하다. 아데노신은 다양한 생리 기능들, 예를 들어 진정 작용의 유도, 혈관 확장, 심박 수 및 수축의 억제, 혈소판 응집의 억제, 글루코스 신합성의 자극 및 지질분해의 억제를 조절한다. 아데닐레이트 사이클라제에 대한 효과 이외에, 아데노신은 수용체-매개된 기전을 통해 칼륨 채널을 개방하고, 칼슘 채널을 통한 흐름을 감소시키며, 포스포이노시티드 교체를 억제 또는 자극하는 것으로 나타났다(예를 들어 문헌[C.E. Muller and B. Stein. "아데노신 수용체 길항물질: 구조 및 잠재적인 치료 용도," Current Pharmaceutical Design, 2:501(1996) and C.E. Muller "A1-아데노신 수용체 길항물질," Exp. Opin. Ther. Patents 7(5):419(1997)]을 참조하시오).
아데노신 수용체는 현재 P1(아데노신)과 P2(ATP, ADP 및 다른 뉴클레오티드) 수용체로 세분되는 퓨린 수용체의 상과에 속한다. 뉴클레오사이드 아데노신에 대한 4 개의 수용체 서브유형들은 지금까지 인간을 포함한 다양한 종들로부터 클로닝되어왔다. 2 개의 수용체 서브유형(A1및 A2a)은 나노몰 범위로 아데노신에 대한 친화성을 나타내는 반면, 2 개의 다른 공지된 서브유형 A2b및 A3은 친화성이 낮은 수용체로, 아데노신에 대한 친화성은 저 마이크로몰 범위이다. A1및 A3아데노신 수용체 활성화는 아데닐레이트 사이클라제 활성의 억제를 도출시킬 수 있는 반면, A2a및 A2b활성화는 아데닐레이트 사이클라제를 자극한다.
몇몇 A1길항물질들이 인지 질환, 신부전 및 심 부정맥의 치료를 위해 개발되었었다. A2a길항물질은 파킨슨 병을 앓고 있는 환자에게 유리할 수 있음이 제시되었다. 특히 국소 전달 가능성에 비추어, 아데노신 수용체 길항물질은 알레르기성 염증 및 천식의 치료에 귀중할 수 있다. 입수할 수 있는 정보(예를 들어, 문헌[Nyce & Metzger "동물 모델에서 친식에 대한 DNA 안티센스 요법" Nature (1997) 385:721-5])는 이러한 병태 생리학적 상황에서 A1길항물질이 호흡기 상피 하부의 평활근의 수축을 차단하는 반면, A2b또는 A3수용체 길항물질은 비만 세포 탈과립을 차단하여, 히스타민 및 다른 염증성 매개자의 방출을 누그러뜨릴 수 있다. A2b수용체는 위장관 전체를 통해, 특히 결장 및 장 상피에서 발견되었다. A2b수용체는 cAMP 반응을 매개함이 제시되었다(Strohmeier et al., J. Bio. Chem. (1995) 270:2387-94).
아데노신 수용체들은 또한 소, 돼지, 원숭이, 래트, 기니 피그, 마우스, 토끼 및 인간을 포함한 다양한 포유동물 종들의 망막 상 존재함이 입증되었다(예를 들어, Blazynski et al., 포유동물 망막에서 아데노신 수용체들의 불연속적인 분포, Journal of Neurochemistry, volume 54, pages 648-655(1990); Woods et al., 소 망막 중의 아세노신 A1-수용체 결합 부위의 특성화, Experimental Eye Research, volume 53, pages 325-331(1991); and Braas et al., 망막의 신경절 세포에 집중된 내생적인 아데노신 및 아데노신 수용체, Proceedings of the National Academy ofScience, volume 84, pages 3906-3910(1987)). 최근에, 윌리암스(Willians)는 배양된 인간 망막 세포 주에서 아데노신 운반 부위의 관찰을 보고하였다(Williams et al., SV-40 항원 유전자에 의해 확립된 배양된 인간 망막 세포 주 중의 뉴클레오사이드 운반 부위, Current Eye Research, volume 13, pages 109-118(1994)).
아데노신의 흡수를 조절하는 화합물들은 이미 망막 및 시신경유두 손상의 치료에 가능한 치료제로서 제안되었다. 샤데(Shade)의 미국 특허 제 5,780,450 호에서, 샤데는 눈 질환의 치료를 위한 아데노신 흡수 억제제의 용도를 논의하고 있다. 샤데는 특이적인 A3수용체 억제제의 용도는 개시하고 있지 않다. 미국 특허 제 5,780,450 호의 내용 전체는 본 발명에 참고로 인용되어 있다.
추가의 아데노신 수용체 길항물질들이 약리학적 도구로서 요구되며 상기 언급한 질병 상태 및/또는 질환에 대한 약물로서 상당한 관심을 끌고 있다.
본 출원은 2000년 12월 1일자로 출원된 미국 특허 출원 제 09/728,316 호, 2000년 12월 1일자로 출원된 제 09/728,607 호 및 2000년 12월 1일자로 출원된 제 09/728,616 호의 일부 계속 출원이고 이에 대한 우선권을 주장하며, 이들 출원은 각각 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용되어 있다.
본 출원 전체를 통해, i) 아데노신 A1수용체(예를 들어, 특히 4 내지 76 페이지, 130 내지 175 페이지 및 257 내지 287 페이지), ii) 아데노신 A2A수용체(예를 들어, 특히 176 내지 201 페이지 및 288 내지 293 페이지) 및 아데노신 A3수용체(예를 들어, 특히 202 내지 256 페이지 및 294 내지 300 페이지)에 특이적으로 결합하는 화합물들을 언급한다.
발명의 요약
본 발명은 환자에게 치료 유효량의 아데노신 A1수용체에 선택적으로 결합하는 화합물을 투여함으로써, 상기 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하는 화합물을 기본으로 한다. 상기 치료하려는 질병은 인지 질환, 신부전, 심 부정맥, 호흡기 상피, 전달물질 방출, 진정작용, 혈관수축, 서맥, 심 수축 감소 및 변조 감소, 기관지수축, 호중구 화학주성, 역류 질환 또는 궤양성 질환과 관련이있다.
본 발명은 적어도 부분적으로, 하기 개시되는 특정한 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 사용하여 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태를 치료할 수 있다는 발견을 기본으로 한다. 상기와 같은 상태의 예로는 아데노신 수용체의 활성이 증가된 상태, 예를 들어 기관지염, 위장 장애 또는 천식이 있다. 이러한 상태들은 아데노신 수용체 활성화가 아데닐레이트 사이클라제 활성을 억제 또는 자극할 수 있음을 특징으로 할 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법은 거울상 이성체적으로 또는 부분 입체 이성체적으로 순수한 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 포함한다. 바람직한 N-6 치환된 7-데아자퓨린에는 아세트아미드, 카복스아미드, 치환된 사이클로헥실, 예를 들어 사이클로헥사놀, 또는 알킬렌 쇄를 통해 N-6 질소에 결합된 우레아 잔기를 갖는 것들이 있다.
본 발명은 포유동물에게 치료 유효량의 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 투여하여 아데노신 수용체 활성의 조절이 일어나게 함으로써, 상기 포유동물의 아데노신 수용체(들)를 조절하는 방법에 관한 것이다. 적합한 아데노신 수용체들에는 A1, A2또는 A3의 계열이 포함된다. 바람직한 실시태양에서, N-6 치환된 7-데아자퓨린은 아데노신 수용체 길항물질이다.
본 발명은 또한 포유동물에게 치료 유효량의 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 투여하여 상기 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 질환, 예를 들어 천식, 기관지염, 알레르기성 비염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 신장 질환, 위장 장애 및 눈 질환이치료되도록 함으로써, 상기 포유동물에서 상기 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 적합한 N-6 치환된 7 데아자퓨린으로는 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염이 있다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R1및 R2는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이거나, 또는 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성하고,
R3는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이고,
R4는 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이고,
R5및 R6은 각각 독립적으로 할로겐 원자, 예를 들어 염소, 블소 또는 브롬, 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이거나, 또는
R5는 카복실, 카복실의 에스테르 또는 카복스아미드이거나, 또는
R4및 R5또는 R5및 R6은 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 또는 카보사이클릭 고리를 형성한다.
특정의 실시태양에서, R1및 R2는 각각 독립적으로 치환되거나 비 치환된 사이클로알킬 또는 헤테로아릴알킬 잔기일 수 있다. 다른 실시태양에서, R3는 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 헤테로아릴 잔기이다. 더욱 다른 실시태양에서, R4, R5및 R6은 각각 독립적으로 헤테로아릴 잔기일 수 있다. 바람직한 실시태양에서, R1은 수소 원자이고, R2는 사이클로헥사놀, 예를 들어 트랜스-사이클로헥사놀이고, R3는 페닐이고, R4는 수소 원자이고, R5는 메틸 그룹이고, R6은 메틸 그룹이다. 더욱 또 다른 실시태양에서, R1은 수소 원자이고, R2는
이고, R3는 페닐이고, R4는 수소 원자이고, R5및 R6은 메틸 그룹이다.
본 발명은 또한 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태, 예를 들어 천식, 기관지염, 알레르기성 비염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 신장 질환, 위장 장애 및 눈 질환을 치료하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 치료 유효량의 N-6 치환된 7-데아자퓨린 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
본 발명은 또한 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태를 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 패키징된 약학 조성물은치료 유효량의 하나 이상의 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 보유하는 용기 및 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태를 치료하기 위한 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린의 사용 설명서를 포함한다.
본 발명은 또한
R1이 수소이고;
R2가 치환되거나 비 치환된 사이클로알킬, 치환되거나 비 치환된 알킬이거나, 또는 R1및 R2가 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
R3가 비 치환되거나 치환된 아릴이고;
R4가 수소이고;
R5및 R6이 각각 독립적으로 수소 또는 알킬
인 화학식 I의 화합물, 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.
상기 실시태양의 데아자퓨린은 유리하게는 선택적인 A1수용체 길항물질일 수 있다. 이들 화합물은 다수의 치료 용도, 예를 들어 천식, 심 부전과 관련된 신장 부전 및 녹내장의 치료에 유용할 수 있다. 특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 생체 내에서 예를 들어 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 유효 약물로 대사될 수 있는 수용성 전구약물이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 세포를 N-6 치환된 7-데아자퓨린(예를 들어 바람직하게는 아데노신 수용체 길항물질)과 접촉시킴으로써 상기 세포에서아데노신 수용체(예를 들어 A3)의 활성을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 동물(예를 들어 인간)에게 유효량의 화학식 I의 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 투여함으로써 상기 동물의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 바람직하게는, 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린은 동물의 세포에서 A3아데노신 수용체의 길항물질이다. 상기 손상은 망막 또는 시신경유두에 대한 것이며 급성 또는 만성적인 것일 수 있다. 상기 손상은 예를 들어 녹내장, 부종, 국소빈혈, 저산소증 또는 외상의 결과일 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 I의 N-6 치환된 화합물을 포함하는 약학 조성물을 특징으로 한다. 바람직하게는, 상기 약학 제제는 눈 제형(예를 들어 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형, 전신 제형 또는 외과용 관주액)이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 하기 화학식 II의 화합물을 특징으로 한다:
[화학식 II]
상기 식에서,
X는 N 또는 CR6이고;
R1및 R2는 각각 독립적으로 수소, 또는 치환되거나 비 치환된 알콕시, 아미노알킬, 알킬, 아릴 또는 알킬아릴이거나, 또는 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성하나, 단 R1및 R2가 모두 수소는 아니며;
R3는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴알킬 또는 아릴이고;
R4는 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이고;
L은 수소, 치환되거나 비 치환된 알킬이거나, 또는
R4및 L은 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 또는 카보사이클릭 고리를 형성하고;
R6은 수소, 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 할로겐이고;
Q는 CH2, O, S 또는 NR7이고, 여기에서 R7은 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이고;
W는 비 치환되거나 치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 비아릴, 헤테로아릴, 치환된 카보닐, 치환된 티오카보닐 또는 치환된 설포닐이나, 단
R3가 피롤리디노인 경우, R4는 메틸이 아니다.
본 발명은 또한 본 발명 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염 및 전구약물에 관한 것이다.
유리한 실시태양에서, 화학식 II에서 X는 CR6이고 Q는 CH2, O, S 또는 NH이며, 이때 R6는 상기 정의한 바와 같다.
화학식 II의 또 다른 실시태양에서, X는 N이다.
본 발명은 또한 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시킴으로써 상기 세포에서 아데노신 수용체(예를 들어 A2b아데노신 수용체)의 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 화합물은 상기 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 동물에게 유효량의 화학식 II의 화합물(예를 들어 A2b의 길항물질)을 투여함으로써 상기 동물에서 위장 장애(예를 들어 설사) 또는 호흡기 질환(예를 들어, 알레르기성 비염, 만성 폐쇄성 폐 질환)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 동물은 인간이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 전구약물 유도체, 또는 생물학적으로 활성인 대사산물을 특징으로 한다:
[화학식 IV]
상기 식에서,
R1은 트랜스-4-하이드록시 사이클로헥실, 2-메틸아미노 카보닐아미노 사이클로헥실, 2-메틸아미노 카보닐아미노 사이클로헥실, 아세트아미도 에틸 또는 메틸아미노 카보닐아미노 에틸이고;
Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원의 고리이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, Ar은 페닐, 피롤, 티오펜, 푸란, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 1,2,4-트리아졸, 피리딘, 2(1H)-피리돈, 4(1H)-피리돈, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이소티아졸, 이속사졸, 옥사졸, 테트라졸, 나프탈렌, 테트랄린, 나프티리딘, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 2,3-디하이드로인돌, 1H-인돌, 인돌린, 벤조피라졸, 1,3-벤조디옥솔, 벤즈옥사졸, 퓨린, 쿠마린, 크로몬, 퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 벤즈이미다졸, 퀴나졸린, 피리도[2,3-b]피라진, 피리도[3,4-b]피라진, 피리도[3,2-c]피리다진, 퓨리도[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸[3,4-d]피리미딘, 프테리딘, 2(1H)-퀴놀론, 1(2H)-이소퀴놀론, 1,4-벤즈이속사진, 벤조티아졸, 퀴녹살린, 퀴놀린-N-옥사이드, 이소퀴놀린-N-옥사이드, 퀴녹살린-N-옥사이드, 퀴나졸린-N-옥사이드, 벤즈옥사진, 프탈라진, 신놀린이거나 또는 하기 화학식을 갖는다:
상기 식에서,
Y는 탄소 또는 질소이고;
R2및 R2'는 독립적으로 H, 치환되거나 비 치환된 알킬, 치환되거나 비 치환된 아릴, 할로겐, 메톡시, 메틸 아미노 또는 메틸 티오이고;
R3는 H, 알킬, 차환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고,
상기 치환된 알킬은 -C(R7)(R6)XR5이고, 이때
X는 O, S 또는 NR6이고,
R7및 R8은 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고,
R5및 R6은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는
R5, R6및 질소가 함께 치환되거나 비 치환된 4 내지 7 원의 고리를 형성하고;
R4는 H, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬이나; 단
R1이 아세틸아미노 에틸인 경우, Ar은 4-피리딜이 아니다.
본 발명은 또한 하기 화학식 V의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 V]
상기 식에서,
R1은 아릴, 치환된 아릴, 또는 헤테로아릴이고;
R2는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R3는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고;
상기 치환된 알킬은 -C(R6)(R7)NR4R5이고, 이때
R6및 R7은 각각 H 또는 알킬이고,
R4및 R5는 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는
R4, R5및 질소는 함께 4 내지 7 원의 고리 시스템을 형성한다.
본 발명은 또한 세포를 상기 언급한 화합물들과 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
상세한 설명
본 발명의 특징들 및 다른 상세한 내용들을 이제 보다 구체적으로 개시할 것이며, 청구의 범위에서 지적할 것이다. 본 발명의 특정 실시태양들을 단지 예시로서 나타내었으며 본 발명을 제한하는 것은 아님은 물론이다. 본 발명의 본질적인 특징들을 본 발명의 범위로부터 이탈됨 없이 다양한 실시태양들에 사용할 수 있다.
본 발명은 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태가 치료되도록 치료 유효량의 하기 개시되는 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 상기포유동물에게 투여함을 포함한다.
"N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태"란 용어는 하기 개시되는 바와 같은 본 발명의 N-6 치환된 7-데아자퓨린에 의한 치료에 대한 반응성을 특징으로 하는 질병 상태 또는 질환을 포함하며, 예를 들어 상기 치료는 본 발명의 N-6 치환된 7-데아자퓨린에 의해 성취되는 상태의 하나 이상의 증상 또는 효과의 현저한 감소를 포함한다. 전형적으로는 상기와 같은 상태는 숙주가 종종, 비 제한적으로 독소의 방출, 염증, 혼수상태, 수분저류, 체중 증가 또는 손실, 췌장염, 기종, 류마티스성 관절염, 골 관절염, 다발성 기관 기능 부전, 유아 및 성인 호흡기 피로 증후군, 알레르기성 비염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 눈 질환, 위장 장애, 피부 종양 촉진, 면역 결핍 및 천식을 포함한 생리학적 증상들을 경험하게 되는 상기 숙주 내에서의 아데노신의 증가와 관련된다(예를 들어 문헌[C.E. Muller and B. Stein "아데노신 수용체 길항물질: 구조 및 잠재적인 치료 용도", Current Pharmaceutical Design, 2:501(1996) 및 C.E. Muller "A1-아데노신 수용체 길항물질", Exp. Opin. Ther. Patents 7(5):419(1997) 및 I. Feoktistove, R. Polosa, S.T. Holgate and I. Biaggioni "아데노신 A29수용체: 천식에서 신규의 치료 표적" TiPS 19:148(1998)]을 참조하시오). 상기와 같은 증상들과 관련된 효과들로는 종종 비 제한적으로 발열, 숨가뿜, 오심, 설사, 허약, 두통 및 심지어 사망이 있다. 하나의 실시태양에서, N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태에는 아데노신 수용체, 예를 들어, A1, A2a, A2b, A3등 의 자극에 의해 매개되어, 세포 중의 칼슘 농도 및/또는 PLC(포스포리파제 C)의 활성화가 조절되는 질병 상태가 포함된다. 바람직한 실시태양에서, N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태는 아데노신 수용체(들)와 관련 있으며, 예를 들어 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린은 길항물질로서 작용한다. 본 발명의 화합물, 예를 들어 생물학적 효과를 매개하는 아데노신 수용체 서브유형들에 의해 치료될 수 있는 적합한 민감성 상태의 예로는 중추 신경계(CNS) 효과, 심혈관 효과, 신장 효과, 호흡기 효과, 면역학적 효과, 위장 효과 및 대사 효과가 있다. 환자에서 아데노신의 상대적인 양은 하기 열거된 효과들과 관련될 수 있다, 즉 증가된 아데노신 수준은 효과, 예를 들어 바람직하지 못한 생리학적 반응, 예를 들어 천식적 발작을 촉발시킬 수 있다.
CNS 효과는 감소된 전달물질 방출(A1), 진정작용(A1), 감소된 이동물 활성(A2a), 항경련 활성, 화학수용체 자극(A2) 및 통각과민을 포함한다. 본 발명 화합물의 치료 용도에는 치매, 알쯔하이머 병의 치료 및 기억력 향상이 포함된다.
심혈관 효과는 혈관 확장(A2a), (A2b) 및 (A3), 혈관 수축(A1), 서맥(A1), 혈소판 억제(A2a), 심 수축 감소 및 변조 감소(A1), 부정맥, 심계 항진 및 혈관형성을 포함한다. 본 발명 화합물의 치료 용도에는 예를 들어 심장의 국소빈혈 유도된 손상의 예방 및 강심, 심근 조직 보호 및 심장 기능의 회복이 포함된다.
신장 효과는 감소된 GFR(A1), 혈관사이세포 수축(A1), 항이뇨(A1) 및 레닌 방출의 억제(A1)를 포함한다. 본 발명 화합물의 적합한 치료 용도는 이뇨제, 나트륨뇨 배설촉진, 칼륨절약, 신장-보호/급성 신부전의 예방, 고혈압 치료제, 부종 억제제 및 신염 치료제로서의 본 발명 화합물의 용도를 포함한다.
호흡기 효과는 기관지 확장(A2), 기관지 수축(A1), 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염, 점액 분비 및 호흡기 기능 저하(A2)를 포함한다. 본 발명 화합물의 적합한 치료 용도에는 천식 억제 용도, 이식 후 폐 질환의 치료, 및 호흡기 질환의 치료가 포함된다.
위장 효과는 면역억제(A2), 호중구 화학주성(A1), 호중구 과산화물 발생(A2a) 및 비만 세포 탈과립(A2b및 A3)을 포함한다. 길항물질의 치료 용도에는 알레르기성 및 비 알레르기성 염증, 예를 들어 히스타민 및 다른 염증 매개인자의 방출이 포함된다.
위장 효과는 산 분비의 억제(A1)를 포함한다. 치료 용도는 역류 및 궤양성 질환들을 포함할 수 있다. 위장 효과는 또한 결장, 장 및 설사 병, 예를 들어 장 염증과 관련된 설사 병(A2b)을 포함한다.
눈 질환은 망막 및 시신경유두 손상 및 외상 관련 질환(A3)을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 눈 질환은 녹내장이다.
본 발명 화합물의 다른 치료 용도로는 비만(지질분해성), 고혈압의 치료, 울증의 치료, 진정작용, 불안 완화, 간질치료제 및 하제로서, 예를 들어 설사의 유발 없이 자동력을 실행하는 하제로서의 용도가 있다.
"질병 상태"란 용어는 원치 않는 수준의 아데노신, 아데닐일 사이클라제 활성, 아데노신 수용체의 이상 자극과 관련된 증가된 생리 활성 및/또는 cAMP의 증가에 의해 야기되거나 또는 이와 관련된 질환들을 포함하고자 한다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병 상태는 예를 들어 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염, 기관지염, 신장 질환, 위장 장애 또는 눈 질환이다. 추가적인 예로는 만성 기관지염 및 낭성 섬유증이 있다. 염증 질환의 적합한 예로는 비 림프구성 백혈병, 심근 허혈, 협심증, 경색, 뇌혈관 허혈, 정맥 고혈압, 정맥류, 정맥 궤양 및 죽상경화증이 있다. 손상된 재 관류 상태로는 예를 들어 임의의 수술, 예를 들어 재건 술, 혈전용해 또는 혈관성형술 후의 외상이 있다.
"N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태의 치료" 또는 "N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태를 치료하는"이란 용어는 상술한 바와 같은 질병 상태 또는 질환의 변화, 예를 들어 포유동물에서 생리학적 증상이 현저하게 감소 또는 최소화될 수 있음을 포함하고자 한다. 상기 용어는 또한 비정상적인 양의 아데노신과 관련된 생리학적 증상 또는 효과의 제어, 예방 또는 억제를 포함한다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 상기 질병 상태 또는 질환의 제어는 상기 질병 상태 또는 질환을 근절시키는 것이다. 또 다른 바람직한 실시태양에서, 상기 제어는 다른 생리학적 시스템 및 변수들에는 영향을 미치지 않으면서 비정상적인 수준의 아데노신 수용체 활성은 제어되도록 선택적이다.
"N-6 치환된 7-데아자퓨린"이란 용어는 당해 분야에 인식되어 있으며, 하기 화학식 I의 화합물들을 포함한다:
[화학식 I]
"N-치환된 7-데아자퓨린"은 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하며, 하나의 실시태양에서, 또는 본 원에 개시된 몇몇 N-6 치환된 퓨린들을 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린은 치환된 N-6 벤질도 N-6 페닐에틸도 아니다. 다른 실시태양에서, R4는 치환된 벤질도 페닐에틸도 아니다. 바람직한 실시태양에서, R1및 R2가 모두 수소 원자는 아니다. 더욱 다른 바람직한 실시태양에서, R3는 수소 원자가 아니다.
하기 개시되는 N-6 치환된 7-데아자퓨린의 "치료 유효량"이란 용어는 포유동물 내에서 그의 목적하는 기능을 수행하기에, 예를 들어 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태 또는 질병 상태를 치료하기에 충분하거나 필요한 치료 화합물의 양을 의미한다. 치료 화합물의 유효량은 포유동물 중에 이미 존재하는 원인 인자의 정도, 포유동물의 연령, 성 및 체중, 및 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태에 작용할 수 있는 본 발명의 치료 화합물의 능력에 따라 변할 수 있다.
당해 분야의 통상적인 숙련가는 상기 언급한 인자들을 연구하고 과도한 실험없이 치료 화합물의 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 생체 외 또는 생체 내 분석을 또한 하기 개시된 치료 화합물의 "유효량"을 결정하는데 사용할 수 있다. 통상적인 숙련가는 상기 언급한 분석에 사용하기 위해 또는 치료학적 처리로서 상기 치료 화합물의 적합한 양을 선택할 것이다.
치료 유효량은 바람직하게는 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태 또는 질환과 관련된 하나 이상의 질환 또는 효과를 비 처리된 환자에 비해 약 20% 이상(보다 바람직하게는 약 40% 이상, 더욱 더 바람직하게는 약 60% 이상, 훨씬 더 바람직하게는 약 80% 이상)까지 치료되도록 감소시킨다. 당해 분야의 숙련가는 상기와 같은 증상 및/또는 효과의 감소를 측정하기 위한 분석을 구상할 수 있다. 상기와 같은 변수를 측정할 수 있는 임의의 당해 분야에 인식된 분석을 본 발명의 일부로서 포함시키고자 한다. 예를 들어, 천식이 치료하려는 상태인 경우, 환자의 폐로부터 소진된 공기의 부피를 당해 분야에서 인식된 기법을 사용하여 부피의 증가를 측정하기 위한 처리 전후에 측정할 수 있다. 마찬가지로, 염증이 치료하려는 상태인 경우, 염증이 일어난 부위를 당해 분야에서 인식된 기법을 사용하여 염증이 생긴 부위의 감소를 측정하기 위한 처리 전후에 측정할 수 있다.
"세포"란 용어는 원핵 세포 및 진핵 세포 모두를 포함한다.
"동물"이란 용어는 아데노신 수용체를 갖는 임의의 유기체 또는 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태에 민감한 임의의 유기체를 포함한다. 예로서 효모, 포유동물, 파충류 및 조류가 있다. 또한 트랜스제닉 동물도 포함한다.
"포유동물"이란 용어는 당해 분야에 인식되어 있으며, 동물, 보다 바람직하게는 온혈 동물, 가장 바람직하게는 소, 양, 돼지, 말, 개, 고양이, 래트, 마우스 및 인간을 포함한다. 예를 들어 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태, 염증, 기종, 천식, 중추 신경계 질환 또는 급성 호흡 곤란 증후군에 민감한 포유동물이 본 발명의 일부로서 포함된다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 포유동물에게 치료 유효량의 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 투여하여, 상기 포유동물에서 아데노신 수용체의 조절이 일어나게 함으로써 상기 포유동물에서 아데노신 수용체(들)를 조절하는 방법에 관한 것이다. 적합한 아데노신 수용체는 A1, A2또는 A3계열을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, N-6 치환된 7-데아자퓨린은 아데노신 수용체 길항물질이다.
"아데노신 수용체를 조절한다"라는 용어는 화합물이 아데노신 수용체(들)와 상호작용하여, 아데노신 수용체와 관련된 생리 활성들을 증가 또는 감소시키거나, 또는 비정상적으로 만들거나, 또는 상기 아데노신 수용체의 조절로부터 생성되는 후속적인 단계적 영향들을 발생시키는 경우를 포함한다. 아데노신 수용체와 관련된 생리 활성들에는 진정작용의 유도, 혈관확장, 심박 수 및 수축의 억제, 혈소판 응집의 억제, 글루코스 신합성의 자극, 지질분해의 억제, 칼륨 채널의 개방, 칼슘 채널의 흐름 감소 등이 포함된다.
"조절", "조절한다" 및 "조절하는"이란 용어는 예를 들어 본 발명의 치료 방법에 관하여 아데노신 수용체의 비정상적인 자극과 관련하여 생성되는 바람직하지 못한 생리 활성들의 증가를 예방, 근절 또는 억제함을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 조절이라는 용어는 길항 효과들, 예를 들어 아데노신 수용체(들)의 과도한 자극으로부터 발생하는 알레르기 및 알레르기성 염증의 조절인자의 활성 또는 생산을 감소시킴을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 치료 상의 데아자퓨린은 아데노신 수용체와 상호 작용하여 예를 들어 아데닐레이트 사이클라제 활성을 억제할 수 있다.
"비정상적인 아데노신 수용체 활성을 특징으로 하는 질환"이란 용어는 아데노신 수용체의 비정상적인 자극과 관련된 질병, 장애 또는 질환들을 포함함, 즉 상기 수용체의 자극이 상기 질병, 장애 또는 질환과 직접적으로 또는 간접적으로 관련된 생화학적으로 및/또는 생리학적으로 연쇄된 사건들을 일으킴을 포함한다. 이러한 아데노신 수용체의 자극은 상기 질병, 장애 또는 질환의 단독적인 원인 인자일 필요는 없으며, 단지 치료하려는 상기 질병, 장애 또는 질환과 전형적으로 관련된 일부 증상들의 일으키는 원인일 수는 있다. 상기 수용체의 비정상적인 자극이 단독적인 인자이거나, 또는 하나 이상의 다른 인자가 상기 치료하려는 상태에 관련이 있을 수 있다. 증상의 예로는 상기 열거된 질병 상태들, 예를 들어 염증, 위장 장애, 및 증가된 아데노신 수용체 활성의 존재에 의해 나타나는 증상들이 있다. 바람직한 예로는 천식, 알레르기성 비염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 기종, 기관지염, 위장 장애 및 녹내장이 있다.
"비정상적인 아데노신 수용체 활성을 특징으로 하는 질환의 치료"란 용어는 상기 질환과 전형적으로 관련된 하나 이상의 증상을 완화 또는 감소시킴을 포함한다. 상기 치료는 또한 하나 이상의 증상의 완화 또는 감소를 포함한다. 바람직하게는, 치료는 상기 질환과 관련된 증상들을 치유, 예를 들어 실질적으로 제거한다.
본 발명은 하기 화학식 I의 N-6 치환된 7-데아자퓨린 화합물에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R1및 R2는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이거나, 또는 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성하고,
R3는 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이고,
R4는 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이고,
R5및 R6은 각각 독립적으로 할로겐 원자, 예를 들어 염소, 블소 또는 브롬, 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이거나, 또는
R4및 R5또는 R5및 R6은 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 또는 카보사이클릭 고리를 형성한다.
또한 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린의 약학적으로 허용 가능한 염들을 포함한다.
특정의 실시태양에서, R1및 R2는 각각 독립적으로 치환되거나 비 치환된 사이클로알킬 또는 헤테로아릴알킬 잔기일 수 있다. 다른 실시태양에서, R3는 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 헤테로아릴 잔기이다. 더욱 다른 실시태양에서, R4, R5및 R6은 각각 독립적으로 헤테로아릴 잔기일 수 있다.
하나의 실시태양에서, R1은 수소 원자이고, R2는 치환되거나 비 치환된 사이클로헥산, 사이클로펜틸, 사이클로부틸 또는 사이클로프로판 잔기이고, R3는 치환되거나 비 치환된 페닐 잔기이고, R4는 수소 원자이고, R5및 R6은 모두 메틸 그룹이다.
또 다른 실시태양에서, R2는 사이클로헥사놀, 사이클로헥산디올, 사이클로헥실설폰아미드, 사이클로헥산아미드, 사이클로헥실에스테르, 사이클로헥센, 사이클로펜탄올 또는 사이클로펜탄디올이고, R3는 페닐 잔기이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, R1은 수소 원자이고, R2는 사이클로헥사놀이고, R3는 치환되거나 비 치환된 페닐, 피리딘, 푸란, 사이클로펜탄 또는 티오펜 잔기이고, R4는 수소 원자, 치환된 알킬, 아릴 또는 아릴알킬 잔기이고, R5및 R6은 각각 독립적으로 수소 원자, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, R1은 수소 원자이고, R2는 치환되거나 비 치환된 알킬아민, 아릴아민 또는 알킬아릴아민, 치환되거나 비 치환된 알킬아미드, 아릴아미드 또는 알킬아릴아미드, 치환되거나 비 치환된 알킬설폰아미드, 아릴설폰아미드 또는 알킬아릴설폰아미드, 치환되거나 비 치환된 알킬우레아, 아릴우레아 또는 알킬아릴우레아, 치환되거나 비 치환된 알킬카바메이트, 아릴카바메이트 또는 알킬아릴카바메이트, 치환되거나 비 치환된 알킬카복실산, 아릴카복실산 또는 알킬아릴카복실산이고, R3는 치환되거나 비 치환된 페닐 잔기이고, R4는 수소 원자이고, R5및 R6은 메틸 그룹이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, R2는 구아니딘, 변경된 구아니딘, 시아노구아니딘, 티오우레아, 티오아미드 또는 아미드이다.
하나의 실시태양에서, R2는
일 수 있고, 여기에서
R2a내지 R2c는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 포화되거나 불포화된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이고,
R2d는 수소 원자 또는 포화되거나 불포화된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기, NR2eR2f또는 OR2g이고, 여기에서 R2e내지 R2g는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 포화되거나 불포화된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기이다.
한편으로, R2a및 R2b가 함께 약 3 내지 8 원의 고리 크기를 갖는 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭, 예를 들어 사이클로프로필, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 그룹을 형성할 수 있다.
본 발명의 하나의 태양에서, R5및 R6은 메틸 그룹이 아니며, 바람직하게는 R5및 R6중 하나는 알킬 그룹, 예를 들어 메틸 그룹이고, 다른 하나는 수소 원자이다.
본 발명의 또 다른 태양에서, R4가 1-페닐에틸이고, R1이 수소 원자일 때, R3는 페닐, 2-클로로페닐, 3-클로로페닐, 4-클로로페닐, 3,4-디클로로페닐, 3-메톡시페닐 또는 4-메톡시페닐이 아니거나, 또는 R4및 R1이 1-페닐에틸일 때, R3는 수소 원자가 아니거나, 또는 R4가 수소 원자이고 R3가 페닐일 때, R1은 페닐에틸이 아니다.
본 발명의 또 다른 태양에서, R5및 R6이 함께 카보사이클릭 고리, 예를 들어
또는 피리미도[4,5-6]인돌을 형성하는 경우, R4가 1-(4-메틸페닐)에틸, 페닐이소프로필, 페닐 또는 1-페닐에틸일 때 R3는 페닐이 아니거나, 또는 R4가 1-페닐에틸일 때 R3는 수소 원자가 아니다. R5및 R6에 의해 형성된 카보사이클릭 고리는 방향족이거나 지방족일 수 있고 4 내지 12 개의 탄소 원자(예를 들어 나프틸, 페닐사이클로헥실 등), 바람직하게는 5 내지 7 개의 탄소 원자(예를 들어 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실)를 가질 수 있다. 한편으로, R5및 R6은 함께 헤테로사이클릭 고리, 예를 들어 하기 개시하는 것들을 형성할 수 있다. 전형적인 헤테로사이클릭 고리는 4 내지 12 개의 탄소 원자, 바람직하게는 5 내지 7 개의 탄소 원자를 포함하고, 방향족이거나 지방족일 수 있다. 상기 헤테로사이클릭 고리는 상기 고리 구조의 하나 이상의 탄소 원자가 하나 이상의 헤테로원자로 치환된 것을 포함하여, 추가로 치환될 수 있다.
본 발명의 더욱 또 다른 태양에서, R1및 R2는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 전형적인 예로는 비 제한적으로 하기 열거되는 헤테로사이클릭 고리들, 예를 들어 모르폴리노, 피페라진 등, 예를 들어 4-하이드록시피페리딘, 4-아미노피페리딘이 있다. R1및 R2가 함께 피페라지노 그룹을 형성하는 경우,
(여기에서 R7은 수소 원자 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 잔기일 수 있)이다.
본 발명의 더욱 또 다른 태양에서, R4및 R5는 함께 헤테로사이클릭 고리, 예를 들어
를 형성할 수 있으며, 여기에서 헤테로사이클릭 고리는 방향족이거나 지방족일 수 있고, 4 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 고리, 예를 들어 나프틸, 페닐사이클로헥실 등을 형성할 수 있으며 방향족이거나 지방족, 예를 들어 사이클로헥실, 사이클로펜틸일 수 있다.
상기 헤테로사이클릭 고리는 추가로 치환될 수 있으며, 예를 들어 고리 구조의 탄소 원자가 하나 이상의 헤테로원자로 치환될 수 있다. 한편으로, R4및 R5는 함께 헤테로사이클릭 고리, 예를 들어 하기 개시된 것들을 형성할 수 있다.
특정한 실시태양에서, 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린은 치환된 N-6 벤질도 N-6 페닐에틸도 아니다. 다른 실시태양에서, R4는 치환된 벤질도 페닐에틸도 아니다. 바람직한 실시태양에서, R1및 R2가 모두 수소 원자는 아니다. 더욱 다른 바람직한 실시태양에서, R3는 H가 아니다.
본 발명의 화합물은 WO 99/33815, 1998년 3월 9일자로 출원되고 1999년 7월 8일자로 공개된 국제 출원 PCT/US98/04595에 개시된 수용성 전구약물을 포함할 수 있다. WO 99/33815의 전체 내용은 본 발명에 참고로 인용되어 있다. 상기 수용성 전구약물은 생체 내에서 예를 들어 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 유효 약물로 대사된다. 가능한 전구약물의 예로는 -OC(O)(Z)NH2(여기에서 Z는 천연 아미노산 또는 그의 동족체, α, β, γ 또는 ω 아미노산, 또는 디펩티드의 측쇄이다)로 치환된 사이클로알킬로서 R2를 갖는 데아자퓨린이 있다. 바람직한 아미노산 측쇄에는 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 라이신, α-메틸알라닌, 아미노사이클로프로판 카복실산, 아제티딘-2-카복실산, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 알라닌-알라닌 또는 글리신-글리신의 측쇄들이 포함된다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 R1이 수소이고; R2가 치환되거나 비 치환된 사이클로알킬, 치환되거나 비 치환된 알킬이거나, 또는 R1및 R2가 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성하고; R3가 비 치환되거나 치환된 아릴이고; R4가 수소이고; R5및 R6가 각각 독립적으로 수소 또는 알킬인 화학식 I의 데아자퓨린 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다. 본 실시태양의 데아자퓨린은 가능하게는 선택적인 A3수용체 길항물질일 수 있다.
하나의 실시태양에서, R2는 치환되거나(예를 들어 하이드록시 치환되거나)또는 비 치환된 사이클로알킬이다. 유리한 하위 실시태양에서, R1및 R4는 수소이고, R3는 비 치환되거나 치환된 페닐이고, R5및 R6는 각각 알킬이다. 바람직하게는 R2는 모노 하이드록시사이클로펜틸 또는 몬 하이드록시사이클로헥실이다. R2는 또한 -NH-C(=O)E로 치환될 수 있으며, 여기에서 E는 치환되거나 비 치환된 C1-C4알킬(예를 들어 알킬아민, 예를 들어 에틸아민)이다.
R1및 R2는 또한 함께 아민 또는 아세트아미도 그룹에 의해 치환될 수도 있는 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성할 수 있다.
또 다른 태양에서, R2는 -A-NHC(=O)B일 수 있으며, 여기에서 A는 비 치환된 C1-C4알킬(예를 들어 에틸, 프로필, 부틸)이고, B는 치환되거나 비 치환된 C1-C4알킬(예를 들어 메틸, 아미노알킬, 예를 들어 아미노메틸 또는 아미노에틸, 알킬아미노, 예를 들어 메틸아미노, 에틸아미노)이며, 바람직하게는 R1및 R4가 수소인 경우, R3는 비 치환되거나 치환된 페닐이고, R5및 R6는 각각 알킬이다. B는 치환되거나 비 치환된 사이클로알킬, 예를 들어 사이클로프로필 또는 1-아미노-사이클로프로필일 수 있다.
또 다른 실시태양에서, R3는, 바람직하게는 R5및 R6가 각각 알킬일 때, 치환되거나 비 치환된 페닐일 수 있다. 바람직하게는 R3는 하나 이상의 치환체(예를 들어 o-, m- 또는 p-클로로페닐, o-, m- 또는 p-플루오로페닐)를 가질 수 있다.
유리하게는, R3는, 바람직하게는 R5및 R6가 각각 알킬일 때, 치환되거나 비 치환된 헤테로아릴일 수 있다. 헤테로아릴 그룹의 예로는 피리딜, 피리미딜, 피리다지닐, 피라지닐, 피롤릴, 트리아졸릴, 티오아졸릴, 옥사졸릴, 옥사디아졸릴, 푸라닐, 메틸렌디옥시페닐 및 티오페닐이 있다. 바람직하게는 R3는 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 2-피리미딜 또는 3-피리미딜이다.
바람직하게는 하나의 실시태양에서, R5및 R6는 각각 수소이다. 또 다른 실시태양에서, R5및 R6는 각각 메틸이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 데아자퓨린은 생체 내에서 예를 들어 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 유효 약물로 대사될 수 있는 수용성 전구약물이다. 바람직하게는 상기 전구약물은 -OC(O)(Z)NH2(여기에서 Z는 천연 아미노산 또는 그의 동족체, α, β, γ 또는 ω 아미노산, 또는 디펩티드의 측쇄이다)로 치환된 사이클로알킬인 R2를 포함한다. 바람직한 측쇄의 예로는 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 라이신, α-메틸알라닌, 아미노사이클로프로판 카복실산, 아제티딘-2-카복실산, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 알라닌-알라닌 또는 글리신-글리신의 측쇄들이 있다.
특히 바람직한 실시태양에서, Z는 글리신의 측쇄이고, R2는 사이클로헥실이고, R3는 페닐이고, R5및 R6는 메틸이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(시스-3-하이드록시사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(시스-3-(2-아미노아세톡시)사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 트리플루오로아세트산 염이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(3-아세트아미도)피페리디닐-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-N'-메틸우레아프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세트아미도부틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-N'-메틸우레아부틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아미노사이클로프로필아세트아미도에틸)아미노-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
또 다른 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-(4-피리딜)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 세포를 N-6 치환된 7-데아자퓨린(예를 들어 바람직하게는 아데노신 수용체 길항물질)과 접촉시킴으로써 아데노신 수용체(예를 들어 A1, A2A, A2B또는 바람직하게는 A3)의 활성을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 동물(예를 들어 인간)에게 유효량의 N-6 치환된 7-데아자퓨린을 투여함으로써 상기 동물의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 N-6 치환된 7-데아자퓨린은 동물의 세포에서 A3아데노신 수용체의 길항물질이다. 상기 손상은 망막 또는 시신경유도에 대한 것이고, 급성이거나 만성일 수 있다. 상기 손상은 예를 들어 녹내장, 부종, 허혈증, 저산소증 또는 외상의 결과일 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명은 X가 N 또는 CR6이고; R1및 R2가 각각 독립적으로 수소, 또는 치환되거나 비 치환된 알콕시, 아미노알킬, 알킬, 아릴 또는 알킬아릴이거나, 또는 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 고리를 형성하나, 단 R1및 R2가 모두 수소는 아니고; R3가 치환되거나 비 치환된 알킬, 아릴알킬 또는 아릴이고; R4가 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이고; L이 수소, 치환되거나 비 치환된 알킬이거나, 또는 R4및 L이 함께 치환되거나 비 치환된 헤테로사이클릭 또는 카보사이클릭 고리를 형성하고; R6가 수소, 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 할로겐이고; Q가 CH2, O, S 또는 NR7이고, 이때 R7이 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이며; W가 비 치환되거나 치환된 알킬, 사이클로알킬, 알키닐, 아릴, 아릴알킬, 비아릴, 헤테로아릴, 치환된 카보닐, 치환된 티오카보닐, 또는 치환된 설포닐이나, 단 R3가 피롤리디노인 경우 R4는 메틸이 아닌 상기 화학식 II의 데아자퓨린을 특징으로 한다.
하나의 실시태양에서, 화학식 II의 화합물에서 X는 CR6이고 Q는 CH2, O, S 또는 NH이다. 또 다른 실시태양에서 X는 N이다.
화학식 II 화합물의 추가의 실시태양에서, W는 치환되거나 비 치환된 아릴, 5- 또는 6-원 헤테로아릴 또는 비아릴이다. W는 하나 이상의 치환체로 치환될 수도 있다. 치환체의 예로는 할로겐, 하이드록시, 알콕시, 아미노, 아미노알킬, 아미노카복시아미드, CN, CF3, CO2R8, CONHR8, CONR8R9,SOR8, SO2R8및 SO2NR8R9가 있으며, 이때 R8및 R9는 각각 독립적으로 수소, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다. 바람직하게는, W는 치환되거나 비 치환된 페닐, 예를 들어 메틸렌디옥시페닐일 수 있다. W는 또한 치환되거나 비 치환된 5-원 헤테로아릴 고리, 예를 들어 피롤, 피라졸, 옥사졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라졸, 푸란, 티오펜, 티아졸 및 옥사디아졸일 수 있다. 바람직하게는, W는 6-원 헤테로아릴 고리, 예를 들어 피리딜, 피리미딜, 피리다지닐, 피라지날 및 티오페닐일 수 있다. 바람직한 실시태양에서, W는 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 2-피리미딜, 4-피리미딜 또는 5-피리미딜이다.
화학식 II 화합물의 하나의 유리한 실시태양에서, Q는 NH이고 W는 비 치환되거나, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴 또는 아릴알킬로 N-치환된 3-피라졸로 고리이다.
화학식 II 화합물의 또 다른 실시태양에서, Q는 산소이고 W는 비 치환되거나, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴 또는 아릴알킬로 치환된 2-피라졸로 고리이다.
화학식 II 화합물의 또 다른 실시태양에서, W는 치환되거나 비 치환된 알킬, 사이클로알킬, 예를 들어 사이클로펜틸, 또는 아릴알킬이다. 치환체의 예로는 수소, 하이드록시, 치환되거나 비 치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 NHR10이 있으며, 이때 R10은 수소, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다.
더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 W가 -(CH2)a-C(=O)Y 또는 -(CH2)a-C(=S)Y이고, a가 0 내지 3의 정수이고, Y가 아릴, 알킬, 아릴알킬, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 알키닐, NHR11R12이나, 단 Q가 NH, OR13이고, 이때 R11, R12및 R13이 각각 독립적으로 수소, 또는 비 치환되거나 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 사이클로알킬인 화학식 II의 데아자퓨린을 특징으로 한다. 바람직하게는 Y는 5- 또는 6-원 헤테로아릴 고리이다.
더욱 또한, W는 -(CH2)b-S(=O)jY일 수 있으며, 여기에서 j는 1 또는 2이고, b는 0, 1, 2, 또는 3이고, Y는 아릴, 알킬, 아릴알킬, 사이클로알킬, 알키닐, 헤테로아릴, NHR14R15이나, 단 b가 1일 때 Q는 CH2이며, 여기에서 R14, R15및 R16은 각각 독립적으로 수소, 또는 비 치환되거나 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬 또는 사이클로알킬이다.
또 다른 실시태양에서, R3는 치환 및 비 치환된 페닐, 피리딜, 피리미딜, 피리다지닐, 피라지날, 피롤릴, 트리아졸릴, 티오아졸릴, 옥사졸릴, 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 푸라닐, 메틸렌디옥시페닐 및 티오페닐로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. R3가 페닐인 경우, 상기는 예를 들어 하이드록실, 알콕시(예: 메톡시), 알킬(예: 톨릴) 및 할로겐(예: o-, m- 또는 p-플루오로페닐 또는 o-, m- 또는 p-클로로페닐)으로 치환될 수도 있다. 유리하게는, R3는 2-, 3- 또는 4-피리딜 또는 2- 또는 3-피리미딜일 수 있다.
본 발명은 또한 R6이 수소 또는 C1-C3알킬인 데아자퓨린에 관한 것이다. 바람직하게는, R6은 수소이다.
본 발명은 또한 R1이 수소이고, R2가 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 알콕시, 치환되거나 비 치환된 알킬아민, 아릴아민 또는 알킬아릴아민, 치환되거나 비 치환된 아미노알킬, 아미노아릴 또는 아미노알킬아릴, 치환되거나 비 치환된 알킬아미드, 아릴아미드 또는 알킬아릴아미드, 치환되거나 비 치환된 알킬설폰아미드, 아릴설폰아미드 또는 알킬아릴설폰아미드, 치환되거나 비 치환된 알킬우레아, 아릴우레아 또는 알킬아릴우레아, 치환되거나 비 치환된 알킬카바메이트, 아릴카바메이트 또는 알킬아릴카바메이트, 치환되거나 비 치환된 알킬카복실산, 아릴카복실산 또는 알킬아릴카복실산인 데아자퓨린을 포함한다.
바람직하게는, R2는 치환되거나 비 치환된 사이클로알킬, 예를 들어 모노- 또는 디하이드록시-치환된 사이클로헥실 또는 사이클로펜틸(바람직하게는 모노하이드록시-치환된 사이클로헥실 또는 모노하이드록시-치환된 사이클로펜틸)이다.
유리하게는, R2는 하기의 화학식들을 가질 수 있다:
또는
상기 식들에서,
A는 C1-C6알킬, 할로겐, 하이드록실, 카복실, 티올 또는 아미노 그룹에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C3-C7사이클로알킬, 1 내지 7 개 원자의 쇄, 또는 3 내지 7 개 원자의 고리이고;
B는 메틸 N(Me)2, N(Et)2, NHMe, NHEt, (CH2)rNH3+, NH(CH2)rCH3, (CH2)rNH2, (CH2)rCHCH3NH2, (CH2)rNHMe, (CH2)rOH, CH2CN, (CH2)mCO2H, CHR19R19또는 CHMeOH이고, 여기에서 r은 0 내지 2의 정수이고, m은 1 또는 2이며, R18은 알킬이고, R19는 NH3+또는 CO2H이거나 또는 R18및 R19가 함께
(여기에서 p는 2 또는 3이다)이고;
R17은 C1-C6알킬, 할로겐, 하이드록실, 카복실, 티올 또는 아미노 그룹에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C3-C7사이클로알킬, 1 내지 7 개 원자의 쇄, 또는 3 내지 7 개 원자의 고리이다.
유리하게는, A는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이다. B는 비 치환되거나 치환된 C1-C6알킬일 수 있다.
바람직한 실시태양에서, R2는 화학식 -A-NHC(=O)B를 갖는다.
특히 유리한 실시태양에서, A는 -CH2CH2-이고, B는 메틸이다.
본 발명의 화합물은 예를 들어 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 생체 내에서 유효 약물로 대사되는 수용성 전구약물을 포함할 수 있다. 가능한 전구약물의 예로는 -OC(O)(Z)NH2(여기에서 Z는 천연 또는 비 천연 아미노산 또는 그의 동족체, α, β, γ 또는 ω 아미노산, 또는 디펩티드의 측쇄이다)로 치환된 사이클로알킬로서 R2를 갖는 데아자퓨린이 있다. 바람직한 아미노산 측쇄에는 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 라이신, α-메틸알라닌, 아미노사이클로프로판 카복실산, 아제티딘-2-카복실산, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 알라닌-알라닌 또는 글리신-글리신의 측쇄들이 포함된다.
또 다른 실시태양에서, R1및 R2는 함께
(여기에서 n은 1 또는 2이고, 고리는 하나 이상의 하이드록실, 아미노, 티올, 카복실, 할로겐, CH2OH, CH2NHC(=O)알킬 또는 CH2NHC(=O)NH알킬에 의해 임의로 치환될 수도 있다)이다. 바람직하게는, n은 1 또는 2이고, 상기 고리는 -NHC(=O)알킬로 치환된다.
하나의 유리한 실시태양에서, R1은 수소이고, R2는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이고, R3는 치환되거나 비 치환된 페닐이고, R4는 수소이고, L은 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이고, Q는 O, S 또는 NR7이고, 이때 R7은 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬이고, W는 치환되거나 비 치환된 아릴이다. 바람직하게는, R2는 -A-NHC(=O)B이고, 이때 A 및 B는 각각 독립적으로 비 치환되거나 치환된 C1-C4알킬이다. 예를 들어, A는 CH2CH2일 수 있다. B는 예를 들어 알킬(예: 메틸) 또는 아미노알킬(예: 아미노메틸)일 수 있다. 바람직하게는, R3는 비치환된 페닐이고 L은 수소이다. R6는 메틸이거나 또는 바람직하게는 수소일 수 있다. 바람직하게는 Q는 O, S 또는 NR7이고, 이때 R7은 수소 또는 치환되거나 비 치환된 C1-C6알킬, 예를 들어 메틸이다. W는 비 치환되거나 치환된 페닐(예를 들어 알콕시, 할로겐 치환된) 페닐이다. 바람직하게는 W는 p-플루오로페닐, p-클로로페닐 또는 p-메톡시페닐이다. W는 또한 헤테로아릴, 예를 들어 2-피리딜일 수 있다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-페녹시메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-(4-플루오로페녹시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-(4-클로로페녹시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-(4-메톡시페녹시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-(2-피리딜옥시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-(N-페닐아미노)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-아세틸아미노에틸) 아미노-6-(N-메틸-N-페닐아미노)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
특히 바람직한 실시태양에서, 상기 데아자퓨린은 4-(2-N'-메틸우레아에틸) 아미노-6-페녹시메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이다.
본 발명은 또한 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시킴으로써 상기 세포에서 아데노신 수용체(예를 들어 A2b아데노신 수용체)의 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는 상기 화합물은 상기 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 동물에게 유효량의 본 발명의 화합물(예를 들어 A2b의 길항물질)을 투여함으로써 상기 동물에서 위장 장애(예를 들어 설사)를 치료하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 동물은 인간이다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 본 발명의 N-6 치환된 7-데아자퓨린 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 포유동물에게 치료 유효량의 본 발명의 데아자퓨린을 투여하여, 상기 동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태가 치료되도록 함으로써 상기 동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다. 유리하게는, 상기 질병 상태는 아데노신에 의해 매개되는 질환일 수 있다. 바람직한 질병 상태의 예로는 중추 신경계 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 위장 장애, 눈 질환 및 호흡기 질환이 있다.
"알킬"이라는 용어는 포화된 지방족 그룹의 라디칼, 예를 들어 직쇄 알킬 그룹, 분지된 쇄 알킬 그룹, 사이클로알킬(지환족) 그룹, 알킬 치환된 사이클로알킬그룹 및 사이클로알킬 치환된 알킬 그룹을 지칭한다. 알킬이라는 용어는 또한 탄화수소 주쇄의 하나 이상의 탄소와 치환된 산소, 질소, 황 또는 인 원자를 또한 포함할 수 있는 알킬 그룹을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 직쇄 또는 분지 쇄 알킬은 그의 주쇄에 30 개 이하의 탄소 원자(예를 들어, 직쇄에 대해 C1-C30, 분지 쇄에 대해 C3-C30), 보다 바람직하게는 20 개 이하의 탄소 원자를 갖는다. 마찬가지로, 바람직한 사이클로알킬은 그의 고리 구조에 4 내지 10 개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 고리 구조에 5, 6 또는 7 개의 탄소를 갖는다.
더욱이, 명세서 및 청구의 범위 전체에 걸쳐 사용된 알킬이라는 용어는 "비 치환된 알킬" 및 "치환된 알킬"을 모두 포함하며, 상기 치환된 알킬은 탄화수소 주쇄의 하나 이상의 탄소 상의 수소와 치환되는 치환체를 갖는 알킬 잔기를 지칭한다. 상기와 같은 치환체의 예로는 할로겐, 하이드록실, 알킬카보닐옥시, 아릴카보닐옥시, 알콕시카보닐옥시, 아릴옥시카보닐옥시, 카복실레이트, 알킬카보닐, 알콕시카보닐, 아미노카보닐, 알킬티오카보닐, 알콕실, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이토, 시아노, 아미노(예를 들어 알킬 아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노), 아실아미노(예를 들어 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 카바모일 및 우레이도), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카복실레이트, 설페이트, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 잔기가 있을 수 있다. 당해 분야의 숙련가들은 경우에 따라탄화수소 쇄 상에서 치환된 잔기 자체가 치환될 수도 있음을 이해할 것이다. 사이클로알킬을 예를 들어 상술한 치환체들로 추가로 치환시킬 수 있다. "알킬아릴" 잔기는 아릴로 치환된 알킬(예를 들어 페닐메틸(벤질))이다. "알킬"이라는 용어는 또한 길이가 유사하고 상술한 알킬에 대한 치환이 가능하지만, 각각 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 함유하는 불포화된 지방족 그룹을 포함한다.
본 발명에 사용된 "아릴"이라는 용어는 0 내지 4 개의 헤테로원자를 포함할 수 있는 5- 및 6-원 단일 고리 방향족 그룹을 포함한 아릴 그룹의 라디칼, 예를 들어 벤젠, 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 벤즈옥사졸, 벤조티아졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등을 지칭한다. 아릴 그룹은 또한 방향족 그룹에 축합된 폴리사이클릭, 예를 들어 나프틸, 퀴놀릴, 인돌릴 등을 포함한다. 고리 구조에 헤테로원자를 갖는 아릴 그룹을 또한 "아릴 헤테로사이클", "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족"이라 칭할 수도 있다. 상기 방향족 고리를 하나 이상의 고리 위치에서 상술한 바와 같은 치환체들, 예를 들어 할로겐, 하이드록실, 알콕시, 알킬카보닐옥시, 아릴카보닐옥시, 알콕시카보닐옥시, 아릴옥시카보닐옥시, 카복실레이트, 알킬카보닐, 알콕시카보닐, 아미노카보닐, 알킬티오카보닐, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 시아노, 아미노(알킬 아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 카바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카복실레이트, 설페이트, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 잔기로 치환시킬 수 있다. 아릴 그룹은 또한 폴리사이클(예를 들어 테트랄린)을 형성하기 위해서 방향족이 아닌 지환족 또는 헤테로사이클릭 고리와 축합 또는 가교될 수 있다.
"알케닐" 및 "알키닐"이라는 용어는 길이가 유사하고 상술한 알킬에 대한 치환이 가능하지만, 각각 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 함유하는 불포화된 지방족 그룹을 지칭한다. 예를 들어, 본 발명은 시아노 및 프로파길 그룹을 고려한다.
탄소 수를 달리 나타내지 않는 한, 본 발명에 사용된 "저급 알킬"은 그의 주쇄 구조에 1 내지 10 개의 탄소, 보다 바람직하게는 1 내지 6 개, 훨씬 더 바람직하게는 1 내지 3 개의 탄소 원자를 갖는, 상기 정의한 바와 같은 알킬 그룹을 의미한다. 마찬가지로, "저급 알케닐" 및 "저급 알키닐"은 유사한 쇄 길이를 갖는다.
"알콕시알킬", "폴리아미노알킬" 및 "티오알콕시알킬"이라는 용어는 탄화수소 주쇄의 하나 이상의 탄소가 예를 들어 산소, 질소 또는 황 원자로 치환된, 산소, 질소 또는 황 원자를 또한 포함하는, 상술한 바와 같은 알킬 그룹을 지칭한다.
"폴리사이클릴" 또는 "폴리사이클릴 라디칼"이란 용어는 2 개 이상의 탄소가 2 개의 인접한 고리들(예를 들어 상기 고리는 "축합된 고리"이다)에 공통인 2 개 이상의 환상 고리의 라디칼(예를 들어 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴 및/또는 헤테로사이클릴)을 지칭한다. 비 인접 원자들을 통해 결합된 고리들을 "가교된" 고리라 칭한다. 폴리사이클의 각 고리를 상술한 바와 같은 치환체들, 예를 들어 할로겐, 하이드록실, 알콕시, 알킬카보닐옥시, 아릴카보닐옥시,알콕시카보닐옥시, 아릴옥시카보닐옥시, 카복실레이트, 알킬카보닐, 알콕시카보닐, 아미노카보닐, 알킬티오카보닐, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 시아노, 아미노(알킬 아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 카바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카복실레이트, 설페이트, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 잔기로 치환시킬 수 있다.
본 발명에 사용된 "헤테로원자"란 용어는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 질소, 산소, 황 및 인이다.
"아미노산"이란 용어는 단백질에서 발견되는 천연 및 비 천연 아미노산, 예를 들어 글리신, 알라닌, 발린, 시스테인, 류신, 이소류신, 세린, 쓰레오닌, 메티오닌, 글루탐산, 아스파트산, 글루타민, 아스파라긴, 리신, 아르기닌, 프롤린, 히스티딘, 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판을 포함한다. 아미노산 동족체는 적합한 작용기를 갖는 길어지거나 단축된 측쇄 또는 변형 측쇄를 갖는 아미노산을 포함한다. 아미노산은 또한 상기 아미노산의 구조가 입체 이성체 형태를 허용하는 경우 아미노산의 D 및 L 입체 이성체를 포함한다. "디펩티드"란 용어는 함께 연결된 2 개 이상의 아미노산을 포함한다. 바람직하게는, 디펩티드는 펩티드 결합을 통해 연결된 2 개의 아미노산이다. 특히 바람직한 디펩티드는 예를 들어 알라닌-알라닌 및 글리신-알라닌을 포함한다.
본 발명의 일부 화합물들의 구조는 비 대칭 탄소 원자를 포함하며 따라서 라세메이트 및 라세미 혼합물, 단일의 거울상 이성체, 부분 입체 이성체성 혼합물 및 개별적인 부분 입체 이성체들로서 나타남이 주목될 것이다. 이들 화합물의 모든 상기와 같은 이성체 형태들은 본 발명에 명백히 포함된다. 각각의 입체성 탄소는 R 또는 S 배위를 가질 수 있다. 따라서 상기와 같은 비대칭으로부터 발생하는 이성체들(예를 들어 모든 거울상 이성체 및 부분 입체 이성체)이 달리 나타내지 않는 한 본 발명에 포함됨은 물론이다. 상기와 같은 이성체들을 전형적인 분리 기법 및 입체 화학적으로 조절된 합성에 의해 실질적으로 순수한 형태로 수득할 수 있다.
본 발명은 또한 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태, 예를 들어 호흡기 질환(예: 천식, 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환 및 알레르기성 비염), 신장 질환, 위장 장애 및 눈 질환을 치료하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 상술한 치료 유효량의 N-6 치환된 7-데아자퓨린 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 상술한 모든 데아자퓨린들이 치료에 포함됨은 물론이다. 또한 본 발명의 데아자퓨린을 단독으로 또는 본 발명의 다른 데아자퓨린들과 함께 또는 추가적인 치료 화합물들, 예를 들어 항생제, 소염제 또는 항암제와 함께 사용할 수 있음도 물론이다.
"항생제"란 용어는 당해 분야에 인식되어 있으며, 병원균의 증식을 제거 또는 억제하고 감염된 숙주에 대해 유해 효과가 최소이거나 전혀 없으면서 상기 병원균에는 선택적으로 독성인, 미생물의 증식에 의해 생산되는 물질 및 그의 합성 유도체를 포함한다. 항생제의 적합한 예로는 비 제한적으로 아미노글리코사이드, 세팔로스포린, 클로람페니콜, 푸시드산, 마크로리드, 페니실린, 폴리믹신, 테트라사이클린 및 스트렙토마이신의 주요 부류들이 포함된다.
"소염제"란 용어는 당해 분야에 인식되어 있으며 염증의 원인 인자에 직접적으로 대립하지 않으면서 신체 기전에 작용하는 약제, 예를 들어 글리코코르티코이드, 아스피린, 이부프로펜, NSAIDS 등을 포함한다.
"항암제"란 용어는 당해 분야에 인식되어 있으며 바람직하게는 다른 생리학적 기능들에는 불리한 영향을 미치지 않으면서 암 세포의 증식을 감소, 근절 또는 예방하는 약제들을 포함한다. 대표적인 예로는 시스플라틴 및 사이클로포스파미드가 있다.
본 발명의 화합물을 인간 및 포유동물에게 약제로서 투여하는 경우, 이들을 그 자체로서 또는 예를 들어 0.1 내지 99.5%(보다 바람직하게는 0.5 내지 90%)의 유효 성분을 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 함유하는 약학 조성물로서 제공할 수 있다.
본 발명에 사용된 "약학적으로 허용 가능한 담체"란 용어는 본 발명의 화합물(들)을 그의 목적하는 기능을 수행할 수 있도록 환자 내에서 또는 상기 환자에게 운반 또는 수송함을 수반하는 약학적으로 허용 가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예를 들어 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로는, 상기와 같은 화합물들은 하나의 기관 또는 신체의 일부로부터 또 다른 기관 또는 상기 신체의 일부로 운반 또는 수송된다. 각각의 담체는제형의 다른 성분들과 혼화성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용 가능해야" 한다. 약학적으로 허용 가능한 담체로서 작용할 수 있는 물질들의 일부 예로는 당, 예를 들어 락토오즈, 글루코스 및 슈크로즈; 전분, 예를 들어 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로즈 및 그의 유도체, 예를 들어 나트륨 카복시메틸 셀룰로즈, 에틸 셀룰로즈 및 셀룰로즈 아세테이트; 분말화된 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예를 들어 코코아 버터 및 좌약 왁스; 오일, 예를 들어 땅콩 오일, 면실유, 홍화유, 호마유, 올리브 오일, 옥수수유 및 두유; 글리콜, 예를 들어 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예를 들어 글리세린, 솔비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예를 들어 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트; 아가; 완충제, 예를 들어 수산화 마그네슘 및 수산화 알루미늄; 알긴산; 발열원 비 함유 수; 등장성 염수; 링거액; 에틸 알콜; 포스페이트 완충액; 및 약학 제형에 사용되는 다른 무독성의 혼화성 물질이 있다.
상기 열거한 바와 같이, 본 발명의 몇몇 실시태양들은 염기성 작용기, 예를 들어 아미노 또는 알킬아미노를 함유할 수 있으며, 따라서 약학적으로 허용 가능한 산과 약학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수 있다. 이 점에 있어서 "약학적으로 허용 가능한 염"이란 용어는 본 발명 화합물의 비교적 무독성인 무기 및 유기 산 부가 염을 지칭한다. 이들 염을 본 발명 화합물의 최종 단리 및 정제 중에 동일 반응계에서, 또는 본 발명의 정제된 화합물을 유리 염기 형태로 적합한 유기 또는 무기 산과 별도로 반응시키고 이에 의해 형성된 염을 단리시킴으로써 제조할 수 있다. 대표적인 염으로는 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 비설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 아세테이트, 발레레이트, 올리에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말리에이트, 푸마레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토비오네이트 및 라우릴설포네이트 염 등이 있다(예를 들어 문헌[Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19]을 참조하시오).
다른 경우에, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 산성 작용기를 함유할 수 있으며, 따라서 약학적으로 허용 가능한 염기와 약학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수 있다. 이러한 경우에 "약학적으로 허용 가능한 염"이란 용어는 본 발명 화합물의 비교적 무독성인 무기 및 유기 염기 부가염을 지칭한다. 이들 염을 마찬가지로 상기 화합물의 최종 단리 및 정제 중에 동일 반응계에서, 또는 상기 정제된 화합물을 유리 산 형태로 적합한 염기, 예를 들어 약학적으로 허용 가능한 금속 양이온의 하이드록사이드, 카보네이트 또는 비카보네이트, 암모니아, 또는 약학적으로 허용 가능한 유기 1 차, 2 차 또는 3 차 아민과 별도로 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 전형적인 알칼리 또는 알칼리 토 염으로는 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 염 등이 있다. 염기 부가염의 형성에 유용한 전형적인 유기 아민으로는 에틸아민, 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진 등이 있다.
"약학적으로 허용 가능한 에스테르"란 용어는 본 발명 화합물의 비교적 무독성의 에스테르화된 생성물을 지칭한다. 이들 에스테르를 상기 화합물의 최종 단리 및 정제 중에 동일 반응계에서, 또는 상기 정제된 화합물을 그의 유리 산 형태 또는 하이드록실로 적합한 에스테르화제와 별도로 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 카복실산을 촉매의 존재 하에서 알콜에 의한 처리를 통해 에스테르로 전환시킬 수 있다. 하이드록실 함유 유도체를 에스테르화제, 예를 들어 알카노일 할라이드에 의한 처리를 통해 에스테르로 전환시킬 수 있다. 상기 용어는 또한 생리 조건 하에서 용매화될 수 있는 저급 탄화수소 그룹, 예를 들어 알킬 에스테르, 메틸, 에틸 및 프로필 에스테르를 포함한다(예를 들어 상기 문헌[Berge et al.]을 참조하시오).
본 발명은 또한 생체 내에서 본 발명의 치료 화합물로 전환되는 전구약물의 용도를 고려한다(예를 들어 문헌[R.B. Silverman, 1992, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action", Academic Press, Chapter 8]을 참조하시오). 상기와 같은 전구약물을 사용하여 치료 화합물의 생체 분포(예를 들어 프로테아제의 반응성 부위에 전형적으로 들어가지 않는 화합물을 허용하기 위해서) 또는 약물 동력학을 변경시킬 수 있다. 예를 들어 카복실산 그룹을 예를 들어 메틸 그룹 또는 에틸 그룹에 의해 에스테르화시켜 에스테르를 수득할 수 있다. 상기 에스테르를 환자에게 투여하는 경우, 상기 에스테르는 효소에 의해 또는 비 효소적으로, 환원적으로 또는 가수분해에 의해 절단되어 음이온성 그룹을 드러낸다. 음이온성 그룹을 절단되어 중간체 화합물을 드러내고 후속적으로 분해되어 유효 화합물을 제공하는 잔기들(예를 들어 아실옥시메틸 에스테르)로 에스테르화시킬 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 상기 전구약물은 생체 내에서 치료 화합물로 산화되는 설페이트 또는 설포네이트의 환원된 형태, 예를 들어 티올이다. 더욱 또한, 음이온성 잔기를 생체 내에서 능동 수송되거나, 또는 표적 기관에 의해 선택적으로 흡수되는 그룹으로 에스테르화시킬 수 있다. 상기 에스테르는 치료 잔기가, 담체 잔기에 대해 하기 개시하는 바와 같이, 특정한 반응성 부위로 특이적으로 표적화되도록 선택할 수 있다.
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예를 들어 나트륨 라우릴 설페이트 및 스테아르산 마그네슘뿐만 아니라 착색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 풍미제 및 항료, 보존제 및 산화방지제가 또한 상기 조성물 중에 존재할 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 산화방지제의 예로는 수용성 산화방지제, 예를 들어 아스코르브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 나트륨 비설페이트, 나트륨 메타비설파이트, 나트륨 설파이트 등; 유용성 산화방지제, 예를 들어 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화된 하이드록시아니솔(BHA), 부틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 금속 킬레이트제, 예를 들어 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 솔비톨, 타르타르산, 인산 등이 있다.
본 발명의 제형은 경구, 코, 국소, 경피, 볼, 설하, 직장, 질 및/또는 비 경구 투여에 적합한 것들을 포함한다. 상기 제형을 편의상 단위 투여형으로 제공할 수 있으며 제약 분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조할 수 있다. 단일 투여형을 제조하기 위해 담체 물질과 배합시킬 수 있는 유효 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성시키는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로는 100% 중에서 상기 량은 약 1% 내지 약 99%의 유효 성분, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장바람직하게는 약 10% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
이들 제형 또는 조성물의 제조 방법은 본 발명의 화합물을 담체 및 임의로 하나 이상의 보조 성분들과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 상기 제형은 본 발명의 화합물을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 이들 모두와 균일하고 긴밀하게 회합시키고, 이엇 경우에 따라 제품을 성형시킴으로써 제조한다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 제형은 캡슐, 교갑, 환제, 환약, 정제, 로젠지(풍미 베이스, 예를 들어 슈크로즈 및 아카시아 또는 트라가칸트 사용), 분말, 과립, 또는 수성 또는 비 수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중 유적형 또는 유중 수적형 액체 유화액으로서, 또는 엘릭서 또는 시럽으로서, 또는 파스텔(불활성 베이스, 예를 들어 젤라틴 및 글리세린, 또는 슈크로즈 및 아카시아 사용)로서 및/또는 구강 세척액 등의 형태일 수 있으며, 이들은 각각 소정량의 본 발명의 화합물을 유효 성분으로서 함유한다. 본 발명의 화합물을 또한 큰 환약, 연약 또는 페이스트로서 투여할 수도 있다.
경구 투여용의 본 발명의 고체 투여형(캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말, 과립 등)에서, 유효 성분을 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 예를 들어 시트르산 나트륨 또는 인산 이칼슘 및/또는 하기의 것들 중 임의의 것과 혼합한다: 충전제 또는 증량제, 예를 들어 전분, 락토오즈, 슈크로즈, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; 결합제, 예를 들어 카복시메틸셀룰로즈, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 슈크로즈 및/또는 아카시아; 희석제, 예를 들어 글리세롤; 붕해제, 예를 들어 아가-아가, 탄산 칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정의 실리케이트, 및 탄산 나트륨; 용해 지연제, 예를 들어 파라핀; 흡수 촉진제, 예를 들어 4 급 암모늄 화합물; 습윤제, 예를 들어 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트; 흡수제, 예를 들어 카올린 및 벤토나이트 점토; 윤활제, 예를 들어 활석, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 마그네슘, 고형 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트 및 이들의 혼합물; 및 착색제. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 상기 약학 조성물은 완충제를 또한 포함할 수도 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 연질 및 경질 충전된 젤라틴 캡슐 중의 충전제로서 락토오즈 또는 유당과 같은 부형제뿐만 아니라 고 분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용할 수 있다.
정제를 임의로 하나 이상의 보조 성분들과 함께 압착 또는 성형에 의해 제조할 수 있다. 압착 정제를 결합제(예를 들어 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제(예를 들어 나트륨 전분 글리콜레이트 또는 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로즈), 표면 활성 또는 분산제를 사용하여 제조할 수 있다. 성형 정제는 적합한 기계에서 불활성 액체 희석제로 습윤시킨 분말화된 화합물의 혼합물을 성형시킴으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 정제, 및 다른 고체 투여형, 예를 들어 당의정, 캡슐, 환제 및 과립을 임의로 코팅제 및 외피, 예를 들어 장용 코팅제 및 약제-제형화 분야에 널리 공지된 다른 코팅제들을 사용하여 얻거나 제조할 수 있다. 이들을 또한 예를 들어 목적하는 방출 프로파일을 제공하기 위해 가변 비율의 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈, 다른 중합체 기질, 리포솜 및/또는 미소구들을 사용하여 상기 중의 유효 성분의 느리거나 조절된 방출을 제공하도록 제형화할 수도 있다.이들을 예를 들어 세균 유지 필터를 통한 여과에 의해서, 또는 살균제를 사용 직전에 멸균 수 또는 일부 다른 멸균 주입용 매질에 용해시킬 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 혼입시킴으로써 멸균시킬 수 있다. 이들 조성물은 또한 임의로 불투명화제를 함유할 수 있으며 유효 성분(들)을 오직 또는 우선적으로 위장 관의 특정 부분에, 임의로 지연된 방식으로 방출하는 조성을 가질 수 있다. 사용될 수 있는 매몰 조성물의 예로 중합체성 물질 및 왁스가 있다. 상기 유효 성분은 또한 경우에 따라 상술한 하나 이상의 부형제들과 함께 미세 캡슐화된 형태일 수 있다.
본 발명 화합물의 경구 투여용 액체 투여형은 약학적으로 허용 가능한 유화액, 미세유화액, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭서를 포함한다. 유효 성분 이외에, 상기 액체 투여형은 당해 분야에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제들, 예를 들어 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일(특히, 면실유, 땅콩 오일, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유 및 호마유), 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에, 상기 경구 조성물은 또한 습윤제, 유화 및 현탁제, 감미제, 풍미제, 착색제, 향료 및 보존제와 같은 보조제들을 포함할 수 있다.
현탁액은 유효 화합물 이외에 현탁제, 예를 들어 에톡실화된 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 및 솔비탄 에스테르, 미정질 셀룰로즈, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가(agar)-아가 및 트라가칸트, 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
직장 또는 질 투여를 위해 본 발명의 약학 조성물 제형을 좌약으로서 제공할 수 있으며, 이는 하나 이상의 본 발명의 화합물을 하나 이상의 적합한 비 자극성 부형제 또는 담체, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌약 왁스 또는 살리실레이트와 혼합함으로써 제조할 수 있으며, 실온에서 고체이나, 체온에서는 액체인, 따라서 직장 또는 질강에서 용융되어 상기 유효 화합물을 방출할 것이다.
질 투여에 적합한 본 발명의 제형은 또한 당해 분야에 적합한 것으로 공지된 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 포움 또는 분무 제형을 포함한다.
본 발명 화합물의 국소 또는 경피 투여용 투여형은 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 젤, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 유효 화합물을 멸균 조건 하에서 약학적으로 허용 가능한 담체 및 임의의 보존제, 완충제 또는 경우에 따라 분사제와 혼합할 수 있다.
상기 연고, 페이스트, 크림 및 젤은 본 발명의 유효 화합물 이외에 부형제, 예를 들어 동물 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로즈 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화 아연, 또는 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
분말 및 스프레이는 본 발명의 화합물 이외에 부형제, 예를 들어 락토오즈, 활석, 규산, 수산화 알루미늄, 규산 칼슘 및 폴리아미드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 통상적인 분사제, 예를 들어 클로로플루오로하이드로카본 및 휘발성의 비 치환된 탄화수소, 예를 들어 부탄 및 프로판을 추가로 함유할 수 있다.
경피 패치는 본 발명의 화합물을 신체에 조절하여 전달할 수 있는 부가된 이점을 갖는다. 상기와 같은 투여형은 상기 화합물을 적합한 매질에 용해 또는 분산시킴으로써 제조할 수 있다. 흡수 향상제를 또한 사용하여 피부를 통한 상기 화합물의 흐름을 증가시킬 수 있다. 상기와 같은 흐름의 속도는 속도 조절 멤브레인을 제공하거나 또는 중합체 기질 또는 젤에 유효 화합물을 분산시킴으로써 조절할 수 있다.
안약 제형, 눈 연고, 분말, 용액 등을 또한 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려한다. 바람직하게는, 상기 약학 제제는 안약 제형(예를 들어 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형, 전신 제형 또는 외과용 관주액)이다.
본 발명의 안약 제형은 하나 이상의 데아자퓨린 및 약학적으로 허용 가능한 비히클을 포함할 수 있다. 다양한 유형의 비히클들을 사용할 수 있다. 상기 비히클은 일반적으로 수성일 것이다. 제형의 케이스뿐만 아니라 상기와 같은 조성물을 병에 걸린 눈에 상기 용액을 한 방울 내지 두 방울 떨어뜨림으로써 쉽게 투여할 수 있는 환자의 능력을 기준으로, 수용액이 일반적으로 바람직하다. 그러나, 본 발명의 데아자퓨린을 또한 다른 유형의 조성물, 예를 들어 현탁액, 점성 또는 반 점성 겔 또는 다른 유형의 고체 또는 반고체 조성물에 쉽게 혼입시킬 수도 있다. 본 발명의 안약 조성물은 또한 다양한 다른 성분들, 예를 들어 완충제, 보존제, 공용매 및 점도 형성제를 함유할 수 있다.
적합한 완충 시스템(예를 들어 인산 나트륨, 아세트산 나트륨 또는 붕산 나트륨)을 가하여 보관 조건 하에서 pH가 이동하는 것을 방지할 수 있다.
안약 제품들을 전형적으로는 수회 용량 형태로 패키징한다. 따라서 사용 중의 미생물 오염을 방지하기 위해서 보존제가 요구된다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 티메로살, 클로로부탄올, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 페닐에틸 알콜, 이데테이트 이나트륨, 소르브산, 폴리퀴터늄-1, 또는 당해 분야의 숙련가들에게 공지된 다른 보존제들이 있다. 상기와 같은 보존제를 전형적으로는 0.001 내지 1.0 중량/부피%("w/v%")의 수준으로 사용한다.
본 발명의 데아자퓨린을 눈 안 수술 과정 중에, 예를 들어 눈 뒤 또는 눈 주위 주입 및 눈 안 관류 또는 주입을 통해 투여하는 경우, 비히클로서 균형을 이룬 염 관주액의 사용이 가장 바람직하다. BSS(등록상표) 멸균 관주액 및 BSS 플러스(등록상표) 멸균 눈 안 관주액(Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, Texas, USA)이 생리적으로 균형을 이룬 눈 안 관주액의 예들이다. 상기 후자 유형의 용액은 본 발명에 내용 전체가 참고로 인용되어 있는 미국 특허 제 4,550,022 호(Garabedian, et al.)에 개시되어 있다. 눈 뒤 및 눈 주위 주입은 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있으며 다수의 간행물들, 예를 들어 문헌[Ophthalmic Surgery: Principles of Practice, Ed., G. L. Spaeth. W. B. Sanders Co., Philadelphia, Pa., U.S.A., pages 85-87(1990)]에 개시되어 있다.
상기 지적한 바와 같이, 세포 수준에서 망막 및 시신경유도 조직에 대한 손상을 예방 또는 감소시키기 위한 데아자퓨린의 용도는 본 발명의 실시태양의 특히중요한 태양이다. 치료될 수 있는 안 질환으로는 비 제한적으로 망막병증, 황반변성, 눈 허혈증, 녹내장, 및 눈 조직에 대한 상처, 예를 들어 허혈성 재 관류 상처, 광화학적 상처 및 눈 수술과 관련된 상처, 특히 빛 또는 수술 장비에의 노출에 의한 망막 또는 시산경 유도에 대한 상처와 관련된 손상들이 있다. 상기 화합물을 또한 예를 들어 안과 수술에 따른 유리체 또는 결막하 주입에 의한, 안과 수술에 대한 보조제로서 사용할 수 있다. 상기 화합물을 일시적인 질환의 급성 치료에 사용하거나 또는 만성적으로, 특히 퇴행성 질병의 경우에 만성적으로 투여할 수 있다. 상기 화합물을 또한 특히 눈 수술 또는 비 침습적인 안과 절차, 또는 다른 유형의 수술 전에 예방학적으로 사용할 수 있다.
비 경구 투여에 적합한 본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 하나 이상의 화합물을 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 유화액, 또는 사용 직전에 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 내 조성할 수 있는 멸균 분말(이들은 산화방지제, 완충제, 세균 발육 저지제, 제형을 목적하는 수용자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질 또는 현탁 또는 증점제를 함유할 수 있다)과 함께 포함한다.
본 발명의 약학 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예로는 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예를 들어 올리브 오일, 및 주입 가능한 유기 에스테르, 예를 들어 에틸 올리에이트가 있다. 적합한 유동성을 예를 들어 코팅 물질, 예를 들어 레시틴에 의해, 분산액의 경우에 목적하는 입자 크기를유지함으로써, 계면활성제를 사용함으로써 유지시킬 수 있다.
이들 조성물은 또한 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제들을 함유할 수 있다. 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등의 혼입에 의해 미생물의 작용을 확실히 방지할 수 있다. 또한 등장성 시약, 예를 들어 당, 염화 나트륨 등을 상기 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 수도 있다. 또한, 주입 가능한 약제 형태의 연장된 흡수를 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같이 흡수를 지연하는 약제를 혼입시킴으로써 성취될 수 있다.
일부의 경우에, 약물의 효과를 연장시키기 위해서, 피하 또는 근육 내 주입으로부터 약물의 흡수를 지체시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는 불량한 수 용해도를 갖는 결정성 또는 비 결정성 물질의 액체 현탁액을 사용함으로써 성취될 수 있다. 상기 약물의 흡수 속도는 그의 용해속도에 따라 변하며, 이는 차례로 결정 크기 및 결정 형태에 따라 변할 수 있다. 한편으로, 비경구 투여되는 약물 형태의 지연된 흡수는 상기 약물을 오일 비히클에 용해 또는 현탁시킴으로써 성취된다.
주입 가능한 데포 형태는 폴리락타이드-폴리글리콜라이드와 같은 생물 분해성 중합체로 주제 화합물의 미세캡슐 기질을 형성시킴으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출 속도를 조절할 수 있다. 다른 생물 분해성 중합체의 예로는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)이 있다. 주입 가능한 데포 제형을 또한 약물을 체 조직과 혼화성인 리포솜 또는 미세유화액에 포집하여 제조한다.
본 발명의 제제를 경구, 비 경구, 국소 또는 직장으로 제공할 수 있다. 상기를 물론 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공한다. 예를 들어, 상기를 정제 또는 캡슐 형태로, 주사, 주입 또는 흡입에 의해 투여된 주사액, 흡입액, 눈 로션, 연고, 좌약 등에 의해; 로션 또는 연고에 의해 국소적으로; 및 좌약에 의해 직장으로 투여한다. 경구 투여가 바람직하다.
본 발명에 사용된 "비 경구 투여" 및 "비 경구적으로 투여된"이란 표현은 경구 및 국소 투여 이외에, 대개 주입에 의한 투여 방식을 의미하며, 여기에는 비 제한적으로 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 포막 내, 피막 내, 안와 내, 심장 내, 피내, 복강 내, 경기관내, 피하, 표피하, 관절 내, 피막 하, 거미망막 하, 척수강 내 및 흉골 내 주사 및 주입이 포함된다.
본 발명에 사용된 "전신 투여", "전신적으로 투여된", "말초적 투여" 및 "말초적으로 투여된"이란 표현은 화합물, 약물 또는 다른 물질을 중추 신경계에 직접 이외의 방식으로, 예를 들어 피하 투여에 의해 투여하여, 상기를 환자의 전신에 들어가게 하고 따라서 대사 및 다른 유사한 과정이 가해짐을 의미한다.
이들 화합물을 치료를 위해 임의의 적합한 투여 경로로, 예를 들어 경구, 코, 예를 들어 스프레이, 직장, 질 내, 비 경구, 저장기 내 및 국소적으로, 예를 들어 구강 및 설하를 포함하여, 분말, 연고 또는 점적액에 의해 인간 및 다른 동물에게 투여할 수 있다.
선택된 투여 경로에 관계없이, 적합한 수화된 형태로 사용될 수 있는 본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 약학 조성물을 당해 분야의 숙련가들에게 공지된통상적인 방법에 의해 약학적으로 허용 가능한 투여형으로 제형화한다.
본 발명의 조성물 중의 유효 성분들의 실제 투여 수준을 특정 환자, 조성 및 투여 방식에 대해 환자에게 독성이지 않으면서 목적하는 치료 반응을 달성하기에 효과적인 유효 성분의 양을 얻기 위해서 변화시킬 수 있다.
선택된 투여 수준은 다양한 인자들, 예를 들어 사용되는 본 발명의 특정 화합물 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 분비 속도, 치료 지속 기간, 사용된 특정 화합물과 함께 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료하려는 환자의 연령, 성별, 체중, 질환, 일반적인 건강 및 과거 병력, 및 의료 분야에 널리 공지된 유사한 인자들에 따라 변할 것이다.
당해 분야의 통상적인 기술을 가진 의사 또는 수의사는 필요한 약학 조성물의 유효량을 쉽게 결정 및 처방할 수 있다. 예를 들어 상기 의사나 수의사는 약학 조성물에 사용되는 본 발명 화합물의 용량을 목적하는 치료 효과를 성취하기 위해서 필요한 용량보다 낮은 수준에서 출발하여 상기 목적하는 효과가 성취될 때까지 상기 용량을 점진적으로 증가시킬 수 있다.
일반적으로, 본 발명 화합물의 적합한 1 일 용량은 치료 효과를 생성시키기에 효과적인 최저 용량인 화합물의 양이 될 것이다. 상기와 같은 유효 용량은 일반적으로 상술한 인자들에 따라 변할 것이다. 일반적으로는, 지시된 진통 효과를 위해 사용되는 경우, 환자에 대한 본 발명 화합물의 정맥 내 및 피하 용량은 하루에 체중 ㎏ 당 약 0.0001 내지 약 200 ㎎, 보다 바람직하게는 약 0.01 내지 약 150㎎, 더욱 더 바람직하게는 약 0.2 내지 약 140 ㎎의 범위일 것이다.
경우에 따라, 상기 유효 화합물의 1 일 유효 용량을 하루 전체에 걸쳐 적합한 간격으로, 임의로 단위 투여형으로, 2 회, 3 회, 4 회, 5 회, 6 회 또는 별도로 투여되는 보다 하위의 용량으로 투여할 수 있다.
본 발명의 화합물을 단독으로 투여하는 것도 가능하지만, 상기 화합물을 약학 조성물로서 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명은 또한 포유동물에서 N-6 치환된 7-데아자퓨린 민감성 상태, 예를 들어 바람직하지 못한 증가된 아데노신 수용체 활성을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 패키징된 약학 조성물은 상술한 바와 같은 치료 유효량의 하나 이상의 데아자퓨린을 보유하는 용기 및 상기 포유동물에서 상기 데아자퓨린 민감성 상태를 치료하기 위해 상기 데아자퓨린을 사용하는 설명서를 포함한다.
본 발명의 데아자퓨린을 표준 유기 합성 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 데아자퓨린을 역상 HPLC, 크로마토그래피, 재결정 등에 의해 정제하고, 그의 구조를 질량 분광 분석, 원소 분석, IR 및/또는 NMR 분광학에 의해 확인할 수 있다.
전형적으로는, 본 발명의 데아자퓨린뿐만 아니라 중간체의 합성을 용액으로 수행한다. 하나 이상의 보호 그룹의 첨가 및 제거는 또한 전형적으로 실행되며 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있다. 본 발명의 데아자퓨린 중간체의 제조를 위한 전형적인 합성 안을 하기 반응식 I에 개략한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IV를 갖는 화합물, 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 전구 약물 유도체, 또는 생물학적으로 활성인 대사산물을 제공한다:
[화학식 IV]
상기 식에서,
R1은 트랜스-4-하이드록시 사이클로헥실, 2-메틸아미노 카보닐아미노 사이클로헥실, 아세틸아미노 에틸 또는 메틸아미노 카보닐아미노 에틸이고;
Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원의 고리, 페닐, 피롤, 티오펜, 푸란, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 1,2,4-트리아졸, 피리딘, 2(1H)-피리돈, 4(1H)-피리돈, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이소티아졸, 이속사졸, 옥사졸, 테트라졸, 나프탈렌, 테트랄린, 나프티리딘, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 2,3-디하이드로인돌, 1H-인돌, 인돌린, 벤조피라졸, 1,3-벤조디옥솔, 벤즈옥사졸, 퓨린, 쿠마린, 크로몬, 퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 벤즈이미다졸, 퀴나졸린, 피리도[2,3-b]피라진, 피리도[3,4-b]피라진, 피리도[3,2-c]피리다진, 퓨리도[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸[3,4-d]피리미딘, 프테리딘, 2(1H)-퀴놀론, 1(2H)-이소퀴놀론, 1,4-벤즈이속사진, 벤조티아졸, 퀴녹살린, 퀴놀린-N-옥사이드, 이소퀴놀린-N-옥사이드, 퀴녹살린-N-옥사이드, 퀴나졸린-N-옥사이드, 벤즈옥사진, 프탈라진, 신놀린이거나 또는하기 화학식을 가지며:
(상기 식에서,
Y는 탄소 또는 질소이고;
R2및 R2'는 독립적으로 H, 치환되거나 비 치환된 알킬, 치환되거나 비 치환된 아릴, 할로겐, 메톡시, 메틸 아미노 또는 메틸 티오이다);
R3는 H, 알킬, 차환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고,
상기 치환된 알킬은 -C(R7)(R6)XR5이고, 이때
X는 O, S 또는 NR6이고,
R7및 R8은 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고,
R5및 R6은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는
NR5R6은 치환되거나 비 치환된 4 내지 7 원의 고리이고;
R4는 H, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬이나; 단
R1이 아세틸아미노 에틸인 경우, Ar은 4-피리딜이 아니다.
화학식 IV를 갖는 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, NR5R6은 치환되거나비 치환된 4 내지 7 원의 고리로, 이는 하기로 이루어진 그룹 중에서 선택된다:
(상기에서, m은 0, 1 또는 2이다),
(상기에서, n은 0, 1, 2 또는 3이고; R8은 수소, -OH, -CH2OH, -C(=O)NR9R10, NHR11이고, 이때 R11은 -C(=O)CH3또는 -SO2Me이다), 또는
(상기에서, R은 H, 알킬 또는 아릴이다).
화학식 IV를 갖는 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, Ar은 하기 화학식을갖는다:
상기에서,
Y는 탄소 또는 질소이고;
R2는 H, 또는 할로겐, -O-알킬 그룹, 아민 그룹, 또는 설파이드 그룹이고;
R3는 H, 알킬, 차환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고,
상기 치환된 알킬은 -C(R7)(R8)NR5R6이고, 이때
R7및 R8은 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고,
R5및 R6은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는
R5, R6및 질소가 함께 치환되거나 비 치환된 4 내지 7 원의 고리를 형성한다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, Y는 탄소이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R2는 수소이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R4는 수소이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R3는 수소이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R3및 R4는 각각 메틸이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R3는 -C(R7)(R8)NR5R6이고, 이때
R7및 R8은 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고, R5및 R6은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R5, R6및 질소가 함께 치환되거나 비 치환된 4 내지 7 원의 고리를 형성한다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R2는 할로겐이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, Y는 질소이다.
상기 화합물에 대한 더욱 또 다른 실시태양에서, R2는 수소이다.
상기 화합물에 대한 추가의 실시태양에서, R3및 R4는 각각 수소이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 V를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 V]
상기 식에서,
R1은 아릴, 치환된 아릴, 또는 헤테로아릴이고;
R2는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R3는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고;
상기 치환된 알킬은 -C(R6)(R7)NR4R5이고, 이때
R6및 R7은 각각 H 또는 알킬이고,
R4및 R5는 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는
R4, R5및 질소는 함께 4 내지 7 원의 고리 시스템을 형성한다.
화학식 V를 갖는 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, R4및 R5는 각각 H이고; 이때 R4는 H이고, R5는 -R12C(=O)R13이다.
화학식 V를 갖는 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, R4및 R5는 각각 H이고; 여기에서 고리 시스템은 모르폴리노, 티오모르폴리노, N-4-치환된 피페라지노, 2-치환된 피페라진, 또는 R8치환된 피롤리디노, 피페라딘이고; 여기에서 R8은 H, OH, CH2OH, -C(O)NR9R10, NR11이고, 이때 R11은 -C(=O)CH3, -SO2Me이다.
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 706)
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 1318-a)
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 1318-b)
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 1319)
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 1320)
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 1321)
하기 화학식 VI를 갖는 화합물:
[화학식 VI]
상기 식에서,
R2는 5 내지 6 원 방향족 고리이고;
R3및 R4는 독립적으로 H 또는 알킬이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
(화합물 1500)
본 발명의 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는다:
화합물 1500에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 추가의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
본 발명은 또한 하기 화학식 VII를 갖는 화합물을 제공한다.
[화학식 VII]
상기 식에서,
R2는 5 내지 6 원의 방향족 고리이고;
R3및 R4는 독립적으로 H 또는 알킬이나, 단
R2는 4-피리딜이 아니다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1501)
본 발명은 또한 하기 화학식 VIII를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 VIII]
상기 식에서,
R2는 치환된 5 내지 6 원의 방향족 고리이고;
R3및 R4는 독립적으로 H 또는 알킬이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1520)
본 발명은 또한 하기 화학식 IX를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 IX]
상기 식에서,
R2는 5 내지 6 원의 방향족 고리이고;
X는 산소 또는 황이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1503)
본 발명은 또한 하기 화학식 X를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 X]
상기 식에서,
R2는 5 내지 6 원의 방향족 고리이고;
X는 산소 또는 황이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1504)
본 발명은 또한 환자에게 치료 유효량의 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X의 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된질병을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 환자는 포유동물이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 포유동물은 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 A1아데노신 수용체는 인지 질환, 신부전, 심 부정맥, 호흡기 상피, 전달물질 방출, 진정작용, 혈관수축, 서맥, 심 수축 감소 및 변조 감소, 기관지수축, 호중구 화학주성, 역류 질환 또는 궤양성 질환과 관련이 있다.
본 발명은 또한 화합물 IV 및 V, 및 스테로이드, β2 작용물질, 글루코코르티코이드, 류코트리엔 길항물질, 또는 항콜린성 작용물질을 포함하는, 천식 치료용 복합 요법을 제공한다. 아데노신 A1, A2a, A2b및 A3수용체와 관련된 질병들이 WO 99/06053 및 WO 09822465, WO 09705138, WO 09511681, WO 09733879, JP-09291089, PCT/US98/16053, 및 미국 특허 제 5,516,894 호에 개시되어 있으며, 이들은 본 발명에 참고로 인용되어 있다.
본 발명은 또한 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X를 갖는 수용성 전구약물을 제공하며, 여기에서 상기 수용성 전구약물은 생체 내에서 활성 약물로 대사되어 A1아데노신 수용체를 선택적으로 억제한다.
상기 전구약물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 전구약물은 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 생체 내에서 대사된다.
본 발명은 또한 상기 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 세포를 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X를 갖는 화합물과 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 상기 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X를 갖는 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 위장 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 장애는 설사이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 방법에서, 상기 화합물은 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X를 갖는 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염 또는 상부 호흡기 질환이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X를 갖는 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 환자의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 손상은 망막 또는 시신경 유두 손상을 포함한다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 손상은 급성 또는 만성이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 손상은 녹내장, 부종, 허혈증, 저산소증 또는 외상의 결과이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 치료 유효량의 화학식 IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 치료 유효량은 호흡기 질환 또는 위장 장애를 치료하는데 유효하다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 위장 장애는 설사이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 비염, 또는 만성 폐쇄성 폐 질환이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 안약 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 전신 제형이다.
상기 약학 제제에 대한 추가의 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 수술용 관주액이다.
본 발명은 또한 (a) 치료 유효량의 아데노신 A1특이적 화합물을 보유하는 용기; 및 (b) 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "화합물이 A1선택성이다"란 화합물이 아데노신 A2a, A2b또는 A3에 대한 결합 상수보다 아데노신 A1수용체에 대한 결합 상수가 10 배 이상임을 의미한다.
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화학식 IV를 갖는 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구 약물 유도체, 또는 생물학적으로 활성인 대사산물의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을 NH2R1로 처리하여를 제공하는 단계
(상기 식들에서, R1은 트랜스-4-하이드록시 사이클로헥실, 2-메틸아미노 카보닐아미노 사이클로헥실, 아세틸아미노 에틸 또는 메틸아미노 카보닐아미노 에틸이고; Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원의 고리이고; R4는 H, 알킬, 치환된알킬, 사이클로알킬이나, 단 R1이 아세틸아미노 에틸인 경우, Ar은 4-피리딜이 아니다).
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화학식 V를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을로 처리하여를 제공하는 단계
(상기 식들에서, R1은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴이고; R2는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고; R3는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고; 상기 치환된 알킬은 -C(R6)(R7)NR4R5이고, 이때 R6및 R7은 각각 H 또는 알킬이고, R4및 R5는 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 NR4R5가 4 내지 7 원의 고리 시스템을 형성한다).
화학식 VI, VII 및 VIII로 나타내는 화합물을 반응식 I 내지 VIII 중 임의의 방법에 의해 합성할 수 있다. 화학식 IX 및 X로 나타내는 화합물은 반응식 IX에 의해 제조할 수 있다.
본 발명을 하기의 실시예들로 추가로 예시하며, 이들 실시예는 결코 추가적인 제한으로서 해석해서는 안된다. 배경 기술에서 참고로 한 것들을 포함하여, 본 원 전체를 통해 인용된, 모든 참고문헌, 계류중인 특허 출원 및 공개된 특허 출원들의 내용은 본 발명에 참고로 인용된다. 실시예 전체를 통해 사용된 모델들은 승인된 모델들이며, 이들 모델에서의 효능의 입증은 인간에 대한 효능의 예견임은 물론이다.
본 발명을 하기 실험에 대한 상세한 설명으로부터 보다 잘 이해할 것이다. 그러나, 당해 분야의 숙련가는 논의된 특정한 방법 및 결과들이 이 후에 이어지는청구의 범위에서 보다 충분히 개시되는 바와 같이 본 발명을 단지 예시하는 것임을 쉽게 알 것이다.
실험에 대한 상세한 설명
본 발명의 데아자퓨린을 표준 유기 합성 도식을 사용하여 제조할 수 있다. 데아자퓨린을 역상 HPLC, 크로마토그래피, 재결정 등에 의해 정제할 수 있으며, 질량 분광 분석, 원소 분석, IR 및/또는 NMR 분광학에 의해 그의 구조를 확인할 수 있다.
전형적으로는, 본 발명의 데아자퓨린뿐만 아니라 중간체의 합성을 용액으로 수행한다. 하나 이상의 보호 그룹의 첨가 및 제거는 또한 전형적으로 수행하며 당해 분야에 공지되어 있다. 본 발명의 데아자퓨린 중간체의 제조를 위한 전형적인 합성 도식을 하기 반응식 I에 개략한다.
상기에서,
R3, R5및 R6은 상기 정의한 바와 같다.
일반적으로, 보호된 2-아미노-3-시아노-피롤을 산 할라이드로 처리하여 카복시아미노-3-시아노-피롤을 제조하고, 이를 산성 메탄올로 처리하여 고리를 폐쇄시켜 피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온을 제조할 수 있다(Muller, C.E. et al. J. Med. Chem. 40:4396(1997)). 상기 피롤로 보호 그룹을 제거한 다음 염소화 시약, 예를 들어 옥시염화 인으로 처리하여 치환되거나 비 치환된 4-클로로-7H-피롤로[2,3d]피리미딘을 수득하였다. 상기 클로로피리미딘을 아민으로 처리하여 7-데아자퓨린을 수득하였다.
예를 들어, 반응식 I에 나타낸 바와 같이, N-(1-dl-페닐에틸)-2-아미노-3-시아노-피롤을 피리딘 및 디클로로메탄 중에서 아실 할라이드로 처리하였다. 생성된 N-(1-dl-페닐에틸)-2-페닐카복시아미도-3-시아노-피롤을 메탄올/황산의 10:1 혼합물로 처리하여 고리를 폐쇄시켜, dl-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온을 생성시켰다. 상기 페닐에틸 그룹을 인산(PPA)에 이어서 POCl3로 피리미딘을 처리하여 제거함으로써 주요 중간체인 4-클로로-7H-피롤로[2,3d]피리미딘을 수득하였다. 상기 4-클로로-7H-피롤로[2,3d]피리미딘을 표 1에 나타낸 다양한 아민으로 추가로 처리하여 화학식 I 및 II의 화합물을 수득한다.
[표 1]
6-치환된 피롤을 제조하기 위한 일반적인 접근법을 하기 반응식에 나타낸다(반응식 II).
상기에서,
R1내지 R5는 상기 정의한 바와 같다.
에틸 시아노아세테이트를 α-할로케톤으로 트랜스에스테르화 및 알킬화시켜 케토메틸에스테르를 수득한다. 상기 케톤의 보호에 이어서 아미딘(예를 들어 알킬, 아릴 또는 알킬아릴) 하이드로클로라이드로 처리하여 생성되는 케탈 보호된 피리미딘을 수득하였다. 상기 보호 그룹을 제거한 다음 환화시키고 옥시염화 인으로 처리하여 클로라이드 중간체를 수득하고, 이를 아민으로 추가로 처리하여 아민6-치환된 피롤을 수득할 수 있다. 또한, 상기 피롤 질소의 알킬화를 당해 분야에 인식된 조건 하에서 성취할 수 있다.
5-치환된 피롤을 제조하기 위한 일반적인 접근법을 하기 반응식에 나타낸다(반응식 III)
상기에서,
R1내지 R6은 상기 정의한 바와 같고,
R은 제거 가능한 보호 그룹이다.
말로노니트릴 및 과잉 케톤의 축합에 이어서 생성물을 브롬화시켜 출발 물질, 모노브롬화 및 디브롬화된 생성물의 혼합물을 수득하고, 이를 알킬아민, 아릴아민 또는 알킬아릴아민으로 처리하였다. 생성된 아민 생성물을 산 염화물로 아실화시키고 모노아실화된 피롤을 산의 존재 하에서 환화시켜 상응하는 피리미딘을 수득하였다. 상기 피롤 보호 그룹을 인산으로 제거하고 옥시염화 인으로 처리하여 염소화된 생성물을 수득하였다. 상기 염소화된 피롤을 후속적으로 아민으로 처리하여 아미노 5-치환된 피롤을 수득하였다. 상기 피롤 질소의 알킬화를 당해 분야에 인식된 조건 하에서 성취할 수 있다.
반응식 IV 및 V는 본 발명의 데아자퓨린 1 및 2의 제조 방법을 나타낸다.
1 2
상기에서,
R5및 R6은 상술한 바와 같고, 예를 들어 CH3이다.
6-메틸 피롤로피리미딘의 구체적인 제조 방법:
6-메틸피롤로피리미딘(1)[R5=CH3]에 대한 주요 반응은 시아노아세테이트의 벤즈아미딘에 의한 피리미딘으로의 환화였다. 메틸 시아노아세테이트는 벤즈아미딘에 의해 상응하는 에틸 에스테르보다 피리미딘으로 보다 효율적으로 환화되는 것으로 여겨졌다. 따라서, NaOMe 및 과잉의 α-할로아세틸 잔기, 예를 들어 클로로아세톤의 존재 하에서 에틸 시아노아세테이트의 트랜스에스테르화 및 알킬화에 의해 목적하는 메틸 에스테르(3)를 79% 수율로 수득하였다(반응식 IV). 상기 케토에스테르(3)를 아세탈(4)로서 81%의 수율로 보호하였다. 피리미딘(5)에 대한 새로운 환화 방법을 아미딘 하이드로클로라이드, 예를 들어 벤즈아미딘 하이드로클로라이드에 의해 성취하였으며, 2 당량의 DBU에 의해 상기 (5)를 54%의 단리된 수율로 수득하였다. 이러한 방법은 수율을, 구아니딘에 의한 환화 도중 NaOMe를 사용하는 공개된 조건을 사용하여 20%로부터 개선시킨다. 피롤-피리미딘(6)의 환화를 수성 HCl 중의 아세탈의 탈보호를 통해 78%의 수율로 성취하였다. (6)과 옥시염화 인과의 환류 하에서의 반응으로 상응하는 4-클로로 유도체(7)를 수득하였다. 135 ℃에서 디메틸 설폭사이드 중의 트랜스-4-아미노사이클로헥사놀과의 커플링은 (1)을 (7)로부터 57%의 수율로 제공하였다. 당해 분야의 숙련가는 목적하는 치환체 R5의 선택에 있어서 시약들의 선택을 매우 융통성 있게 실시할 수 있음을 알 것이다.
5-메틸피롤로피리미딘의 구체적인 제조 방법
환류 벤젠 중의 말로노니트릴 및 과잉 케톤, 예를 들어 아세톤의 축합에 의해, 증류 후에 50% 수율로 (8)을 수득하였다. (8)을 클로로포름 중의 벤조일 페록사이드의 존재 하에서 N-브로모숙신이미드로 브롬화시켜 증류 후에 출발 물질, 모노-(9) 및 디-브롬화된 생성물의 혼합물(5/90/5)을 수득하였다(70%). 상기 혼합물을 α-메틸알킬아민 또는 α-메틸아릴아민, 예를 들어 α-메틸벤질아민과 반응시켜 아미노피롤(10)을 전달하였다. 짧은 실리카겔 컬럼을 통과시킨 후에, 부분적으로 정제된 아민(31% 수율)을 산 염화물, 예를 들어 염화 벤조일로 아실화시켜 모노-(11) 및 디아실화된(12) 피롤을 전달하고, 이를 플래시 크로마토그래피에 의해 분리시켰다. 이 치환된 피롤(12)의 산 가수분해에 의해 상기 아실피롤(11)의 경우 29%의 연합 수율을 얻었다. 농축된 황산과 DMF의 존재 하에서 환화에 의해 (13)을 수득하고(23%), 이를 폴리인산으로 (14)로 탈보호시켰다. (14)를 옥시염화 인으로 환류 하에서 반응시켜 상응하는 4-클로로 유도체(15)를 수득하였다. 135 ℃에서 디메틸 설폭사이드 중의 트랜스-4-아미노사이클로헥산올과 커플링시켜 (2)[R6=CH3]를 (14)로부터 30%로 수득하였다(반응식 V를 참조하시오). 당해 분야의 숙련가는 치환체 R6의 선택에 있어서 시약들을 매우 융통성 있게 선택할 수 있음을 인식할 것이다.
R 6 -치환된 피롤, 예를 들어 5-메틸 피롤로피리미딘으로의 대체 합성 경로
상기 R6-치환된 피롤, 예를 들어 5-메틸피롤로피리미딘으로의 대체 경로는 에틸 시아노아세테이트의 (16)으로의 트랜스에스테르화 및 알킬화를 포함한다(반응식 VI). (16)과 벤즈아미딘 하이드로클로라이드와의 2 당량의 DBU에 의한 축합은피리미딘(17)을 제공한다. 피롤-피리미딘(14)으로의 환화는 수성 HCl 중의 아세탈의 탈보호를 통해 성취될 것이다. (14)와 옥시염화 인과의 환류 하에서의 반응은 상응하는 4-클로로 유도체(15)를 제공하였다. 135 ℃에서 디메틸 설폭사이드 중의 트랜스-4-아미노사이클로헥산올과의 커플링은 (2)를 제공한다. 이러한 절차는 표적 화합물(2)에 대한 합성 반응 수를 9에서 4 단계로 감소시킨다. 더욱이, 상기 수율은 극적으로 증가한다. 다시, 당해 분야의 숙련가는 치환체 R6의 선택에 있어서 시약들을 매우 융통성 있게 선택할 수 있음을 인식할 것이다.
데스-메틸 피롤을 제조하기 위한 일반적인 접근방법을 하기 반응식에 나타낸다(반응식 VII).
상기에서,
R1내지 R3은 상기 정의한 바와 같다.
알킬 시아노아세테이트의 염기 존재 하에서의 디에틸 아세탈에 의한 알킬화로 시아노 디에틸 아세탈을 수득하고, 이를 아미딘 염으로 처리하여 메틸 피롤로피리미딘 전구체를 제조하였다. 상기 전구체를 염소화시키고 아민을 처리하여 상기 나타낸 바와 같이 데스-메틸 피롤로피리미딘을 제조하였다.
예를 들어, 반응식 VIII는 화합물 (18)의 합성을 예시한다.
상업적으로 입수할 수 있는 메틸 시아노아세테이트를 탄산 칼륨 및 NaI의 존재 하에서 브로모아세트알데히드 디에틸 아세탈로 알킬화시켜 (19)를 수득하였다. 피리미딘(20)으로의 환화를 2 단계로 성취하였다. 처음에, 피리미딘-아세탈을 (19)와 벤즈아미딘 하이드로클로라이드의 반응을 통해 2 당량의 DBU를 사용하여 형성시켰다. 생성된 피리미딘-아세탈을 수성 1N HCl에 의한 정제 없이 탈보호시키고 생성된 알데히드를 피롤로-피리미딘(20)으로 환화시키고, 이를 여과에 의해 단리시켰다. (20)을 옥시염화 인과 환류 하에서 반응시켜 상응하는 4-클로로 유도체(21)를 수득하였다. 클로로 유도체를 135 ℃에서 DMSO 중의 트랜스-4-아미노사이클로헥산올과 커플링시켜 화합물 (21)로부터 화합물 (18)을 수득하였다.
반응식 II 내지 VIII는 피롤로피리미딘 고리의 5 및 6 번 위치를 작용화시킬 수 있음을 입증한다. 상이한 출발 시약을 사용하고 상기 반응식을 약간 변경시켜 화학식 I 및 II의 5 및 6 번 위치에 다양한 작용기들을 도입시킬 수 있다. 표 2는 일부의 예들을 예시한다.
[표 2]
5- 및 6-치환된 피롤로피리미딘의 소정의 목록
숙련가는 환자에서 본 원에 개시된 화합물의 대사에 의해 약물로서 작용할 수 있는 특정한 생물 활성 대사산물들이 생성됨을 알 것이다.
본 발명을 하기의 실시예들로 추가로 예시하며, 이들 실시예를 결코 추가의 제한으로서 해석해서는 안 된다. 배경 기술에서 참고로 한 것들을 포함하여, 본 원 전체를 통해 인용된, 모든 참고문헌, 계류중인 특허 출원 및 공개된 특허 출원들의 내용은 본 발명에 참고로 인용된다. 실시예 전체를 통해 사용된 모델들은 승인된 모델들이며, 이들 모델에서의 효능의 입증은 인간에 대한 효능의 예견임은 물론이다.
제조예 1:
실라와 뤼프케(Seela, F.; Lupke, U. Chem. Ber. 1977, 110, 1462-1469)의 알킬화 방법을 변경시켜 사용하였다. MeOH(20 ㎖) 중의 에틸 시아노아세테이트(6.58 g, 58.1 밀리몰)의 빙냉(0 ℃) 용액에 NaOMe(25% w/v; 58.1 밀리몰) 용액을 서서히 가하였다. 10 분 후에, 클로로아세톤(5 ㎖; 62.8 밀리몰)을 서서히 가하였다. 4 시간 후에, 용매를 제거하였다. 갈색 오일을 EtOAc(100 ㎖)로 희석하고 H2O(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 분획을 건조시키고, 여과하고 갈색 오일(7.79 g; 79%)로 농축시켰다. 오일(3)(반응식 IV)은 메틸/에틸 에스테르 생성물의 혼합물(9/1)이며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_4.24(q, J=7.2 Hz, OCH2), 3.91(dd, 1H, J=7.2, 7.0 Hz, CH), 3.62(s, 3H, OCH3), 3.42(dd, 1H, J=15.0, 7.1Hz, 1 x CH2); 3.02(dd, 1H, J=15.0, 7.0Hz, 1 x CH2); 2.44(s, 3H, CH3), 1.26(t, J=7.1 Hz, 에스테르-CH3).
제조예 2:
실라와 뤼프케(Seela, F.; Lupke, U. Chem. Ber. 1977, 110, 1462-1469)의 방법을 사용하였다. 따라서, 케톤(3)(반응식 IV; 5.0 g, 32.2 밀리몰)을 TsOH(100 ㎎)의 존재 하에서 에틸렌 글리콜(4 ㎖, 64.4 밀리몰)로 보호하고 플래시 크로마토그래피(SiO2; 3/7 EtOAc/Hex, Rf0.35) 후에 오일로서 (4)(반응식 IV; 5.2g, 81.0)를 수득하였다. 여전히 5% 에틸 에스테르를 함유한다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_4.24(q, J=7.2 Hz, OCH2), 3.98(s, 4H, 2 x 아세탈-CH2), 3.79(s, 3H, OCH3), 3.62(dd, 1H, J=7.2, 7.0 Hz, CH), 2.48(dd, 1H, J=15.0, 7.1 Hz, 1 x CH2); 2.32(dd, 1H, J=15.0, 7.0 Hz, 1 x CH2); 1.35(s, 3H, CH3), 1.26(t, J=7.1 Hz, 에스테르-CH3); MS(ES): 200.1(M++1).
제조예 3:
무수 DMF(15 ㎖) 중의 아세탈(4)(반응식 IV, 1 g, 5.02 밀리몰), 벤즈아미딘(786 ㎎, 5.02 밀리몰) 및 DBU(1.5 ㎖, 10.04 밀리몰) 용액을 85 ℃로 15 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 CHCl3(30 ㎖)로 희석하고, 0.5N NaOH(10 ㎖) 및 H2O(20 ㎖)로 세척하였다. 유기 분획을 건조시키고, 여과하고 갈색 오일로 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피(SiO2; 1/9 EtOAc/CH2Cl2, Rf0.35)를 시도했으나, 물질이 컬럼 상에 결정화되었다. 실리카 겔을 MeOH로 세척하였다. 생성물 (5)(반응식 IV)를 함유하는 분획들을 농축시키고 추가의 정제 없이 사용하였다(783 ㎎, 54.3%).
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 8.24(m, 2H, Ar-H), 7.45(m, 3H, Ar-H), 5.24(brs, 2H, NH2), 3.98(s, 4H, 2 x 아세탈-CH2), 3.60-3.15(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3); MS(ES): 288.1(M++1).
화합물 (20)의 제조(반응식 VIII): 무수 DMF(20 ㎖) 중의 아세탈(19)(4.43 g, 20.6 밀리몰), 벤즈아민 하이드로클로라이드(3.22 g, 20.6 밀리몰) 및 DBU(6.15 ㎖, 41.2 밀리몰) 용액을 85 ℃로 15 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 CHCl3100 ㎖로 희석하고, H2O(2 x 50 ㎖)로 세척하였다. 유기 분획을 건조시키고, 여과하고 짙은 갈색 오일로 농축시켰다. 상기 짙은 갈색 오일을 1N HCl(100 ㎖) 중에서 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 생성된 슬러리를 여과하여 갈색 고체(3.60 g, 70.6%)로서 (20)의 HCl 염을 수득하였다:1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) 11.92(s, 1H), 8.05(m, 2H, Ar-H), 7.45(m, 3H, Ar-H), 7.05(s, 1H, 피롤-H); MS(ES): 212.1(M++1).
제조예 4:
1N HCl(40 ㎖) 중의 아세탈(5)(700 ㎎, 2.44 밀리몰) 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 생성된 슬러리를 여과하여 갈색 고체로서 2-페닐-6-메틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온의 HCl 염(498 ㎎, 78.0%)을 수득하였다:1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 11.78(s, 1H), 8.05(m, 2H, Ar-H), 7.45(m, 3H, Ar-H),6.17(s, 1H, 피롤-H), 2.25(s, 3H, CH3); MS(ES): 226.1(M++1).
제조예 5:
첸 등의 환화 방법을 변경하여 사용하였다(Chen, Y.L.; Mansbach, R.S.; Winter, S.M.; Brooks, E.; Collins, J.; Corman, M.L.; Dunaiskis, A.R.; Faraci, W.S.; Gallaschun, R.J.; Schmidt, A.; Schulz, D.W. J. Med. Chem. 1997, 40, 1749-1754). 이소프로필 알콜(60 ㎖) 중의 브로마이드(9)(반응식 V; 20.0 g, 108 밀리몰; 90% 순도)의 빙냉(0 ℃) 용액에 α-메틸벤질아민(12.5 ㎖, 97.3 밀리몰)의 용액을 서서히 가하였다. 검은색 용액을 실온으로 가온시키고 15 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc(200 ㎖)로 희석하고 0.5N NaOH(50 ㎖)로 세척하였다. 유기 분획을 건조시키고, 여과하고 검은색 타르(19.2 g; 94%)로 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피(SiO2; 4/96 MeOH/CH2Cl2, Rf0.35)에 의해 화합물 dl-1-(1-페닐에틸)-2-아미노-3-시아노-4-메틸피롤로서 검은색 고체(6.38 g, 31%)로 부분 정제시켰다: MS(ES): 226.1(M++1).
제조예 6:
디클로로메탄(50.0 ㎖) 중의 dl-1-(1-페닐에틸)-2-아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤(Liebigs Ann. Chem.1986, 1485-1505)(14.9 g, 62.5 밀리몰) 및 피리딘(10.0㎖) 용액에 0 ℃에서 염화 벤조일(9.37 g, 66.7 밀리몰)을 가하였다. 0 ℃에서 1 시간 동안 교반한 후에, 헥산(10.0 ㎖)을 가하여 생성물을 침전을 도왔다. 용매를 진공 하에서 제거하고 고체를 EtOH/H2O로부터 재 결정시켜 dl-1-(1-페닐에틸)-2-페닐카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤 13.9 g(65%)을 수득하였다. 융점 218-221 ℃;1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.72(s, 3H), 1.76(d, J=7.3 Hz, 3H), 1.98(s, 3H), 5.52(q, J=7.3 Hz, 1H), 7.14-7.54(m, 9H), 7.68-7.72(dd, J=1.4 Hz, 6.9 Hz, 2H), 10.73(s, 1H); MS(ES): 344.4(M++1).
하기의 화합물들을 유사한 방식으로 수득하였다.
제조예 6A:
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(3-피리딜)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.83(d, J=6.8Hz, 3H), 2.02(s, 3H), 2.12(s, 3H), 5.50(q, J=6.8Hz, 1H), 7.14-7.42(m, 5H), 8.08(m, 2H), 8.75(m, 3H); MS(ES): 345.2(M++1).
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(2-푸릴)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.84(d, J=7.4Hz, 3H), 1.92(s, 3H), 2.09(s, 3H), 5.49(q, J=7.4Hz, 1H), 6.54(dd, J=1.8Hz, 3.6Hz, 1H), 7.12-7.47(m, 7H):MS(ES): 334.2(M++1), 230.1.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(3-푸릴)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.80(d, J=7Hz, 3H), 1.89(s, 3H), 2.05(s, 3H), 5.48(q, J=7Hz, 1H), 6.59(s, 1H), 7.12-7.40(m, 6H), 7.93(s, 1H); MS(ES): 334.1(M++1), 230.0.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-사이클로펜틸카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.82(d, J=7.4Hz, 3H), 1.88(s, 3H), 2.05(s, 3H), 1.63-1.85(m, 8H), 2.63(m, 1H), 5.43(q, J=7.4Hz, 1H), 6.52(s, 1H), 7.05-7.20(m, 5H); MS(ES): 336.3(M++1).
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(2-티에틸)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.82(d, J=6.8Hz, 3H), 1.96(s, 3H), 2.09(s, 3H), 5.49(q, J=6.8Hz, 1H), 7.05-7.55(m, 8H); MS(ES): 350.1(M++1), 246.0.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(3-티에틸)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.83(d, J=7.0Hz, 3H), 1.99(s, 3H), 2.12(s, 3H), 5.49(q, J=7.0Hz, 1H), 6.90(m, 1H), 7.18-7.36(m, 6H), 7.79(m, 1H);MS(ES): 350.2(M++1), 246.1.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(4-플루오로페닐)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.83(d, J=7.4Hz, 3H), 1.96(s, 3H), 2.08(s, 3H), 5.51(q, J=7.4Hz, 1H), 7.16-7.55(m, 9H); MS(ES): 362.2(M++1), 258.1.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(3-플루오로페닐)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.83(d, J=7.4Hz, 3H), 1.97(s, 3H), 2.10(s, 3H), 5.50(q, J=7.4Hz, 1H), 7.05-7.38(m, 7H), 7.67-7.74(m, 2H); MS(ES): 362.2(M++1), 258.1.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-(2-플루오로페닐)카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.85(d, J=7.2Hz, 3H), 1.94(s, 3H), 2.11(s, 3H), 5.50(q, J=7.2Hz, 1H), 7.12-7.35(m, 6H), 7.53(m, 1H), 7.77(m, 1H), 8.13(m, 1H); MS(ES): 362.2(M++1), 258.0.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-이소프로필카보닐아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.19(d, J=7.0Hz, 6H), 1.82(d, J=7.2Hz, 3H), 1.88(s, 3H), 2.06(s, 3H), 2.46(m, 1H), 5.39(m, J=7.2Hz, 1H), 6.64(s, 1H), 7.11-7.36(m, 5H), MS(ES): 310.2(M++1), 206.1.
dl-1-(1-페닐에틸)-2-아미노-3-시아노-4-메틸피롤의 아실화의 경우에 , 모노아실화된 dl-1-(1-페닐에틸)-2-벤조일아미노-3-시아노-4-디메틸피롤 및 디아실화된 피롤 dl-1-(1-페닐에틸)-2-디벤조일아미노-3-시아노-4-메틸피롤을 수득하였다: 모노아실화된 피롤:1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_7.69(d, 2H, J=7.8 Hz, Ar-H), 7.58-7.12(m, 8H, Ar-H), 6.18(s, 1H, 피롤-H), 5.52(q, 1H, J=7.2Hz, CH-CH3), 2.05(s, 3H, 피롤-CH3), 1.85(d, 3H, J=7.2Hz, CH-CH3); MS(ES): 330.2(M++1); 디아실화된 피롤:1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_7.85(d, 2H, J=7.7Hz, Ar-H), 7.74(d, 2H, J=7.8Hz, Ar-H), 7.52-7.20(m, 9H, Ar-H), 7.04(m, 2H, Ar-H), 6.21(s, 1H, 피롤-H), 5.52(q, 1H, J=7.2Hz, CH-CH3), 1.77(d, 3H, J=7.2Hz, CH-CH3), 1.74(s, 3H, 피롤-CH3); MS(ES): 434.1(M++1).
제조예 7:
메탄올(10.0 ㎖) 중의 dl-1-(1-페닐에틸)-2-페닐카복시아미도-3-시아노-4,5-디메틸피롤(1.0 g, 2.92 밀리몰) 용액에 0 ℃에서 농 황산(1.0 ㎖)을 가하였다. 생성된 혼합물을 15 시간 동안 환류시키고 실온으로 냉각시켰다. 침전물을 여과하여 dl-5,6-디메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온 0.48 g(48%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_2.02(d, J=7.4Hz, 3H), 2.04(s, 3H), 2.41(s, 3H), 6.25(q, J=7.4 Hz, 1H), 7.22-7.50(m, 9H), 8.07-8.12(dd, J=3.4Hz, 6.8Hz, 2H), 10.51(s, 1H); MS(ES): 344.2(M++1).
하기의 화합물들을 제조예 7과 유사한 방식으로 수득하였다:
dl-5,6-디메틸-2-(3-피리딜)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_2.03(d, J=7.2Hz, 3H), 2.08(s, 3H), 2.42(s, 3H), 6.24(q, J=7.2Hz, 1H), 7.09-7.42(m, 5H), 8.48(m, 2H), 8.70(m, 3H); MS(ES): 345.1(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-(2-푸릴)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.98(d, J=7.8Hz, 3H), 1.99(s, 3H), 2.37(s, 3H), 6.12(q, J=7.8Hz, 1H), 6.48(dd, J=1.8Hz, 3.6Hz, 1H), 7.17-7.55(m, 7H),9.6(s, 1H); MS(ES): 334.2(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-(3-푸릴)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.99(d, J=7Hz, 3H), 2.02(s, 3H), 2.42(s, 3H), 6.24(q, J=7Hz, 1H), 7.09(s, 1H), 7.18-7.32(m, 5H), 7.48(s, 1H), 8.51(s, 1H); MS(ES): 334.2(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-사이클로펜틸-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.95(d, J=7.4Hz, 3H), 2.00(s, 3H), 2.33(s, 3H), 1.68-1.88(m, 8H), 2.97(m, 1H), 6.10(q, J=7.4Hz, 1H), 7.16-7.30(m, 5H), 9.29(s, 1H); MS(ES): 336.3(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-(2-티에닐)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.02(d, J=7.2Hz, 3H), 2.06(s, 3H), 2.41(s, 3H), 6.13(q, J=7.2Hz, 1H), 7.12(dd, J=4.8, 2.8Hz, 1H), 7.26-7.32(m, 5H), 7.44(d, J=4.8Hz, 1H), 8.01(d, J=2.8Hz, 1H), 11.25(s, 1H); MS(ES): 350.2(M++1)
dl-5,6-디메틸-2-(3-티에닐)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.00(d, J=7.4Hz, 3H), 2.05(s, 3H), 2.43(s, 3H), 6.24(q, J=7.4Hz, 1H), 7.24-7.33(m, 5H), 7.33-7.39(m, 1H), 7.85(m, 1H), 8.47(m, 1H), 12.01(s, 1H); MS(ES): 350.2(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-(4-플루오로페닐)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.01(d, J=6.8Hz, 3H), 2.05(s, 3H), 2.42(s, 3H), 6.26(q, J=6.8Hz, 1H), 7.12-7.36(m, 7H), 8.23-8.30(m, 2H), 11.82(s, 1H); MS(ES): 362.3(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-(3-플루오로페닐)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.02(d, J=7.4Hz, 3H), 2.06(s, 3H), 2.44(s, 3H), 6.29(q, J=7.4Hz, 1H), 7.13-7.51(m, 7H), 8.00-8.04(m, 2H), 11.72(s, 1H); MS(ES): 362.2(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-(2-플루오로페닐)-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.00(d, J=7.2Hz, 3H), 2.05(s, 3H), 2.38(s, 3H), 6.24(q, J=7.2Hz, 1H), 7.18-7.45(m, 8H), 8.21(m, 1H), 9.54(s, 1H); MS(ES): 362.2(M++1).
dl-5,6-디메틸-2-이소프로필-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.30(d, J=6.8Hz, 3H), 1.32(d, J=7.0Hz, 3H), 2.01(s, 3H), 2.34(s, 3H), 2.90(m, 1H), 6.13(m, 1H), 7.17-7.34(m, 5H), 10.16(s, 1H); MS(ES): 310.2(M++1)
제조예 8:
DMF(13 ㎖) 중의 dl-1-(1-페닐에틸)-2-벤조일아미노-3-시아노-4-디메틸피롤(785 ㎎, 2.38 밀리몰)과 농축된 H2SO4용액을 130 ℃에서 48 시간 동안 교반하였다. 검은색 용액을 CHCl3(100 ㎖)로 희석하고 1N NaOH(30 ㎖) 및 염수(30 ㎖)로 세척하였다. 유기 분획을 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 플래시 크로마토그래피(SiO2; 8/2 EtOAc/Hex, Rf0.35)에 의해 dl-5-메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온으로서 갈색 고체(184 ㎎, 24%)로 정제하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_8.18(m, 2H, Ar-H), 7.62-7.44(m, 3H, Ar-H), 7.40-7.18(m, 5H, Ar-H), 6.48(s, 1H, 피롤-H), 6.28(q, 1H, J=7.2Hz, CH-CH3), 2.18(s, 3H, 피롤-CH3), 2.07(d, 3H, J=7.2Hz, CH-CH3); MS(ES): 330.2(M++1).
제조예 9:
dl-1-(1-페닐에틸)-2-아미노-3-시아노-4,5-디메틸피롤(9.60 g, 40.0 밀리몰) 및 포름산(50.0 ㎖, 98%)의 혼합물을 5 시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시키고 플라스크의 측면을 긁어낸 후에, 풍부한 침전물이 형성되었으며 여과하였다. 상기 물질을 세척액이 중성 pH를 나타낼 때까지 물로 세척하여 dl-5,6-디메틸-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.96(d, J=7.4Hz, 3H), 2.00(s, 3H), 2.38(s, 3H), 6.21(q, J=7.4Hz, 1H), 7.11-7.35(m, 5H), 7.81(s, 1H), 11.71(s, 1H); MS(ES): 268.2(M++1).
제조예 10:
dl-5,6-디메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온(1.0 g, 2.91 밀리몰)을 폴리인산(30.0 ㎖)에 현탁시켰다. 상기 혼합물을 100 ℃에서4 시간 동안 가열하였다. 상기 고온 현탁액을 얼음물에 붓고, 격렬히 교반하여 현탁액을 분산시키고 고체 KOH로 pH 6으로 염기성으로 만들었다. 생성 고체를 여과하고 수거하여 dl-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온 0.49 g(69%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ_2.17(s, 3H), 2.22(s, 3H), 7.45(br, 3H), 8.07(br, 2H), 11.49(s, 1H), 11.82(s, 1H); MS(ES): 344.2(M++1).
하기의 화합물들을 제조예 10과 유사한 방식으로 수득하였다:
5-메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온. MS(ES): 226.0(M++1).
5,6-디메틸-2-(3-피리딜)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온. MS(ES): 241.1(M++1).
5,6-디메틸-2-(2-푸릴)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.13(s, 3H), 2.18(s, 3H), 6.39(dd, J=1.8, 3.6Hz, 1H), 6.65(dd, J=1.8Hz, 3.6Hz, 1H), 7.85(dd, J=1.8, 3.6Hz, 1H), 11.45(s, 1H), 11.60(s, 1H); MS(ES): 230.1(M++1).
5,6-디메틸-2-(3-푸릴)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.14(s, 3H), 2.19(s, 3H), 6.66(s, 1H),7.78(s, 1H), 8.35(s, 1H), 11.3(s, 1H), 11.4(s, 1H); MS(ES): 230.1(M++1).
5,6-디메틸-2-사이클로펜틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 1.57-1.91(m, 8H), 2.12(s, 3H), 2.16(s, 3H), 2.99(m, 1H), 11.24(s, 1H), 11.38(s, 1H); MS(ES): 232.2(M++1).
5,6-디메틸-2-(2-티에닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.14(s, 3H), 2.19(s, 3H), 7.14(dd, J=3.0, 5.2Hz, 1H), 7.70(d, J=5.2Hz, 1H), 8.10(d, J=3.0Hz, 1H), 11.50(s, 1H); MS(ES): 246.1(M++1).
5,6-디메틸-2-(3-티에닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.17(s, 3H), 2.21(s, 3H), 7.66(m, 1H), 7.75(m, 1H), 8.43(m, 1H), 11.47(s, 1H), 11.69(s, 1H); MS(ES): 246.1(M++1).
5,6-디메틸-2-(4-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.17(s, 3H), 2.21(s, 3H), 7.31(m, 2H), 8.12(m, 2H), 11.47(s, 1H); MS(ES): 258.2(M++1).
5,6-디메틸-2-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.18(s, 3H), 2.21(s, 3H), 7.33(m, 1H), 7.52(m, 1H), 7.85-7.95(m, 2H), 11.56(s, 1H), 11.80(s, 1H); MS(ES): 258.1(M++1).
5,6-디메틸-2-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.18(s, 3H), 2.22(s, 3H), 7.27-7.37(m, 2H), 7.53(m, 1H), 7.68(m, 1H), 11.54(s, 1H), 11.78(s, 1H); MS(ES): 258.1(M++1).
5,6-디메틸-2-이소프로필-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 1.17(d, J=6.6Hz, 6H), 2.11(s, 3H), 2.15(s, 3H), 2.81(m, 1H), 11.20(s, 1H), 11.39(s, 1H); MS(ES): 206.1(M++1).
5,6-디메틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.13(s, 3H), 2.17(s, 3H), 7.65(s, 1H); MS(ES): 164.0(M++1).
제조예 11:
옥시염화 인(25.0 ㎖) 중의 5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4(3H)-온(1.0 g, 4.2 밀리몰)을 6 시간 동안 환류시키고 이어서 진공 하에서 농축건조시켰다. 물을 잔사에 가하여 결정화를 유도하고 생성 고체를 여과하고 수거하여 4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ_2.33(s, 3H), 2.33(s, 3H), 7.46-7.49(m, 3H), 8.30-8.35(m, 2H), 12.20(s, 1H); MS(ES): 258.1(M++1).
하기의 화합물들을 제조예 11과 유사한 방식으로 수득하였다:
4-클로로-5-메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 244.0(M++1).
4-클로로-6-메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 244.0(M++1).
4-클로로-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) 8.35(2, 2H), 7.63(br s, 1H), 7.45(m, 3H), 6.47(br s, 1H); MS(ES): 230.0(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(3-피리딜)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 259.0(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(2-푸릴)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.35(s, 3H), 2.35(s, 3H), 6.68(dd, J=1.8, 3.6Hz, 1H), 7.34(dd, J=1.8Hz, 3.6Hz, 1H), 7.89(dd, J=1.8, 3.6Hz, 1H); MS(ES): 248.0(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(3-푸릴)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.31(s, 3H), 2.31(s, 3H), 6.62(s, 1H), 7.78(s, 1H), 8.18(s, 1H), 12.02(s, 1H); MS(ES): 248.1(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-사이클로펜틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 1.61-1.96(m, 8H), 2.27(s, 3H), 2.27(s, 3H), 3.22(m, 1H), 11.97(s, 1H); MS(ES): 250.1(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(2-티에닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.29(s, 3H), 2.31(s, 3H), 7.14(dd, J=3.1Hz, 4.0Hz, 1H), 7.33(d, J=4.9Hz, 1H), 7.82(d, J=3.1Hz, 1H), 12.19(s, 1H); MS(ES): 264.1(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(3-티에닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.32(s, 3H), 2.32(s, 3H), 7.62(dd, J=3.0, 5.2Hz, 1H), 7.75(d, J=5.2Hz, 1H), 8.20(d, J=3.0Hz, 1H); MS(ES): 264.0(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(4-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.33(s, 3H), 2.33(s, 3H), 7.30(m, 2H), 8.34(m, 2H), 12.11(s, 1H); MS(ES): 276.1(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.31(s, 3H), 2.33(s, 3H), 7.29(m, 1H), 7.52(m, 1H), 7.96(m, 1H), 8.14(m, 1H), 11.57(s, 1H); MS(ES): 276.1(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.34(s, 3H), 2.34(s, 3H), 7.33(m, 2H), 7.44(m, 1H), 7.99(m, 1H), 12.23(s, 1H); MS(ES): 276.1(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-2-이소프로필-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 1.24(d, J=6.6Hz, 6H), 2.28(s, 3H), 2.28(s, 3H), 3.08(q, J=6.6Hz, 1H), 11.95(s, 1H); MS(ES): 224.0(M++1).
4-클로로-5,6-디메틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 2.31(s, 3H), 2.32(s, 3H), 8.40(s, 1H); MS(ES): 182.0(M++1).
dl-4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
제조예 12:
디옥산(100.0 ㎖) 및 물(100.0 ㎖) 중의 dl-1,2-디아미노프로판(1.48 g,20.0 밀리몰) 및 탄산 나트륨(2.73 g, 22.0 밀리몰) 용액에 실온에서 디-3급-디카보네이트(4.80 g, 22.0 밀리몰)를 가하였다. 생성된 혼합물을 14 시간 동안 교반하였다. 디옥산을 진공 하에서 제거하였다. 침전물을 여과하고 여액을 진공 하에서 농축 건조시켰다. 잔사를 EtOAc로 연마하고 이어서 여과하였다. 상기 여액을 진공 하에서 농축 건고시켜 dl-1-아미노-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노-프로판과 dl-2-아미노-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노-프로판의 혼합물(이들은 통상적인 크로마토그래피 법에 의해 분리되지 않았다)을 수득하였다. 상기 혼합물을 실시예 8의 반응에 사용하였다.
제조예 13:
디클로로메탄(20.0 ㎖) 중의 Fmoc-β-Ala-OH(1.0 g, 3.212 밀리몰) 및 염화 옥살릴(0.428 g, 0.29 ㎖, 3.373 밀리몰) 용액에 0 ℃에서 몇 방울의 N,N-디메틸포름아미드를 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 여과한 다음 사이클로프로필메틸아민(0.229 g, 0.28 ㎖, 3.212 밀리몰) 및 트리에틸아민(0.65 g, 0.90 ㎖, 6.424 밀리몰)을 첨가하였다. 10 분 후에, 상기 혼합물을 1M 하이드로클로라이드(10.0 ㎖)로 처리하고 수성 혼합물을 디클로로메탄(3 x 30.0 ㎖)으로 추출하였다. 유기 용액을 진공 하에서 농축 건조시켰다. 잔사를 N,N-디메틸포름아미드(20.0 ㎖) 중의 20% 피페리딘 용액으로 0.5 시간 동안 처리하였다. 진공 하에서 용매를 제거한 후에, 잔사를 1M 하이드로클로라이드(20.0 ㎖) 및 에틸 아세테이트(20.0 ㎖)로 처리하였다. 상기 혼합물을 분리시키고 수성 층을 고체 수산화 나트륨으로 pH=8로 염기성으로 만들었다. 침전물을 여과에 의해 제거하고 수성 용액을 20% 피리딘으로 용출되는 이온 교환 컬럼에 걸어 N-사이클로프로필메틸 β-알라닌 아미드 0.262 g(57%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ_0.22(m, 2H), 0.49(m, 2H), 0.96(m, 2H), 2.40(t, 2H), 2.92(t, 2H), 3.05(d, 2H); MS(ES): 143.1(M++1).
제조예 14:
N-3급-부톡시카보닐-트랜스-1,4-사이클로헥실디아민
트랜스-1,4-사이클로헥실디아민(6.08 g, 53.2 밀리몰)을 디클로로메탄(100 ㎖)에 용해시켰다. 디클로로메탄(40 ㎖) 중의 디-t-부틸디카보네이트(2.32 g, 10.65 밀리몰) 용액을 캐뉼라를 통해 가하였다. 20 시간 후에, 상기 반응물을 CHCl3와 물 사이에 분배시켰다. 층들을 분리시키고 수성 층을 CHCl3(3x)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 백색 고체 1.20 g(53%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.0-1.3(m, 4H), 1.44(s, 9H), 1.8-2.1(m, 4H), 2.62(brm, 1H), 3.40(brs, 1H), 4.37(brs, 1H); MS(ES) 215.2(M++1).
4-(N-아세틸)-N-3급-부톡시카보닐-트랜스-1,4-사이클로헥실 디아민
N-3급-부톡시카보닐-트랜스-1,4-사이클로헥실디아민(530 ㎎, 2.47 밀리몰)을디클로로메탄(20 ㎖)에 용해시켰다. 아세트산 무수물(250 ㎎, 2.60 밀리몰)을 적가하였다. 16 시간 후에, 반응물을 물과 CHCl3로 희석하였다. 층들을 분리시키고 수성 층을 CHCl3(3x)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 재결정(EtOH/H2O)시켜 백색 결정 190 ㎎(30%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 0.9-1.30(m, 4H), 1.43(s, 9H), 1.96-2.10(m, 7H), 3.40(brs, 1H), 3.70(brs, 1H), 4.40(brs, 1H), 4.40(brs, 1H); MS(ES): 257.2(M++1), 242.1(M+-15), 201.1(M+-56).
4-(4-트랜스-아세트아미도사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(N-아세틸)-N-3급-부톡시카보닐-트랜스-1,4-사이클로헥실디아민(190 ㎎, 0.74 밀리몰)을 디클로로메탄(5 ㎖)에 용해시키고 TFA(6 ㎖)로 희석하였다. 16 시간 후에, 반응물이 농축되었다. 조 고체, DMSO(2 ㎖), NaHCO3(200 ㎎, 2.2 밀리몰) 및 4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(35 ㎎, 0.14 밀리몰)을 플라스크에서 합하고 130 ℃로 가열하였다. 4.5 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층들을 분리시키고 수성 층을 EtOAc(3x)로 추출하였다. 상기 합한 유기 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크로마토그래피(실리카 예비 플레이트; 20:1 CHCl3:EtOH)에 의해 갈색 고체 0.3 ㎎(1% 수율)을 수득하였다. MS(ES): 378.2(M++1).
4-(N-메탄설포닐)-N-3급-부톡시카보닐-트랜스-1,4-사이클로헥실디아민
트랜스-1,4-사이클로헥실디아민(530 ㎎, 2.47 밀리몰)을 디클로로메탄(20 ㎖)에 용해시키고 피리딘(233 ㎎, 3.0 밀리몰)으로 희석하였다. 메탄설포닐 클로라이드(300 ㎎, 2.60 밀리몰)를 적가하였다. 16 시간 후에, 반응물을 물과 CHCl3로 희석하였다. 층들을 분리시키고 수성 층을 CHCl3(3x)로 추출하였다. 상기 합한 유기 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 재결정(EtOH/H2O)에 의해 백색 결정 206 ㎎(29% 수율)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.10-1.40(m, 4H), 1.45(s, 9H), 2.00-2.20(m, 4H), 2.98(s, 3H), 3.20-3.50(brs, 2H), 4.37(brs, 1H); MS(ES): 293.1(M++1), 278.1(M+-15), 237.1(M+-56).
4-(4-트랜스-메탄설프아미도사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(N-설포닐)-N-3급-부톡시카보닐-트랜스-1,4-사이클로헥실디아민(206 ㎎, 0.71 밀리몰)을 디클로로메탄(5 ㎖)에 용해시키고 TFA(6 ㎖)로 희석하였다. 16 시간 후에, 반응물이 농축되었다. 조 반응 혼합물, DMSO(2 ㎖), NaHCO3(100 ㎎, 1.1 밀리몰) 및 1-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘을 플라스크에서 합하고 130 ℃로 가열하였다. 15 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc(3x)로 희석하였다. 상기 합한 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크로마토그래피(실리카 예비 플레이트; 20:1 CHCl3:EtOH)에 의해 갈색 고체 2.6 ㎎(5% 수율)을 수득하였다. MS(ES): 414.2(M++1).
실시예 1:
메틸 설폭사이드(10.0 ㎖) 중의 4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(0.50 g, 1.94 밀리몰) 및 4-트랜스-하이드록시 사이클로헥실아민(2.23 g, 19.4 밀리몰) 용액을 130 ℃에서 5 시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 물(10.0 ㎖)을 가하고 생성된 수성 용액을 EtOAc(3 x 10.0 ㎖)로 추출하였다. 합한 EtOAc 용액을 건조(MgSO4)시키고 여과하고, 상기 여액을 진공 하에서 농축 건고시키고, 잔사를 실리카겔 상에서 크로마토그래피시켜 4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 0.49 g(75%)을 수득하였다. 융점 197-199 ℃;1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.25-1.59(m, 8H), 2.08(s, 3H), 2.29(s, 3H), 3.68-3.79(m, 1H), 4.32-4.38(m, 1H), 4.88(d, J=8Hz, 1H), 7.26-7.49(m, 3H), 8.40-8.44(dd, J=2.2, 8Hz, 2H), 10.60(s, 1H); MS(ES): 337.2(M++1).
하기의 화합물들을 실시예 1과 유사한 방식으로 수득하였다:
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-6-메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_11.37(s, 1H, 피롤-NH), 8.45(m, 2H, Ar-H), 7.55(m, 3H, Ar-H), 6.17(s, 1H, 피롤-H), 4.90(br d, 1H, NH), 4.18(m, 1H, CH-O), 3.69(m, 1H, CH-N), 2.40-2.20(m, 2H), 2.19-1.98(m, 2H), 2.25(s, 3H, CH3), 1.68-1.20(m, 4H); MS(ES): 323.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5-메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_11.37(s, 1H, 피롤-NH), 8.40(m, 2H, Ar-H), 7.45(m, 3H, Ar-H), 5.96(s, 1H, 피롤-H), 4.90(br d, 1H, NH), 4.18(m, 1H, CH-O), 3.69(m, 1H, CH-N), 2.38-2.20(m, 2H), 2.18-1.98(m, 2H), 2.00(s, 3H, CH3), 1.68-1.20(m, 4H); MS(ES): 323.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. 융점 245.5 내지 246.5 ℃.
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 8.33(m, 2H, Ar-H), 7.42(m, 3H, Ar-H), 7.02(d, 1H, J=3.6Hz, 피롤-H), 6.53(d, 1H, N=3.6Hz, 피롤-H), 4.26(m, 1H, CH-O),3.62(m, 1H, CH-N), 2.30-2.12(m, 2H), 2.12-1.96(m, 2H), 1.64-1.34(m, 4H); MS, M+1=309.3; 분석(C18H22N4O) C, H, N.
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(3-피리딜)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.21-1.54(m, 8H); 2.28(s, 3H); 2.33(s, 3H); 3.70(m, 1H), 4.31(m, 1H), 4.89(d, 1H), 7.40(m, 1H), 8.61(m, 2H), 9.64(m, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(2-푸릴)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.26-1.64(m, 8H), 2.22(s, 3H), 2.30(s, 3H), 3.72(m, 1H), 4.23(m, 1H), 4.85(d, 1H), 6.52(m, 1H), 7.12(m, 1H), 7.53(m, 1H), 9.28(s, 1H); MS(ES): 327.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(3-푸릴)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.25-1.63(m, 8H), 2.11(s, 3H), 2.27(s, 3H), 3.71(m, 1H), 4.20(m, 1H), 4.84(d, 1H), 7.03(m, 1H), 7.45(m, 1H), 8.13(m, 1H),10.38(m, 1H); MS(ES): 327.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-사이클로펜틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.26-2.04(m, 16H), 2.26(s, 3H), 2.27(s, 3H), 3.15(m, 1H), 3.70(m, 1H), 4.12(m, 1H), 4.75(d, 1H); MS(ES): 329.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(2-티에닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘-4-아민.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.28-1.59(m, 8H), 2.19(s, 3H), 2.29(s, 3H), 3.74(m, 1H), 4.19(m, 1H), 4.84(d, 1H), 7.09(m, 1H), 7.34(m, 1H), 7.85(m, 1H), 9.02(s, 1H); MS(ES): 343.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(3-티에닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.21-1.60(m, 8H), 1.98(s, 3H), 2.23(s, 3H), 3.66(m, 1H), 4.22(m, 1H), 7.27(m, 1H), 7.86(m, 1H), 8.09(m, 1H), 11.23(s, 1H); MS(ES): 343.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(4-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.26-1.66(m, 8H), 1.94(s, 3H), 2.28(s, 3H), 3.73(m, 1H), 4.33(m, 1H), 4.92(d, 1H), 7.13(m, 2H), 8.41(m, 2H), 11.14(s, 1H); MS(ES): 355.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.26-1.71(m, 8H), 2.06(s, 3H), 2.30(s, 3H), 3.72(m, 1H), 4.30(m, 1H), 4.90(d, 1H), 7.09(m, 1H), 7.39(m, 1H), 8.05(m, 1H), 8.20(m, 1H), 10.04(s, 1H); MS(ES): 355.2(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-(2-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.30-1.64(m, 8H), 2.17(s, 3H), 2.31(s, 3H), 3.73(m, 1H), 4.24(m, 1H), 4.82(d, 1H), 7.28(m, 2H), 8.18(m, 1H), 9.02(m, 1H), 12.20(s, 1H); MS(ES): 355.3(M++1).
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-이소프로필-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.31(d, J=7.0Hz, 6H), 1.30-1.65(m, 8H), 2.27(s, 3H), 2.28(s, 3H), 3.01(m, J=7.0Hz, 1H), 3.71(m, 1H), 4.14(m, 1H), 4.78(d, 1H); MS(ES): 303.2.
dl-4-(2-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-이소프로필-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.31-1.42(br, 4H), 1.75-1.82(br, 4H), 2.02(s, 3H), 2.29(s, 3H), 3.53(m, 1H), 4.02(m, 1H), 5.08(d, 1H), 7.41-7.48(m, 3H), 8.30(m, 2H), 10.08(s, 1H); MS(ES): 337.2(M++1).
4-(3,4-트랜스-디하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 353.2(M++1).
4-(3,4-시스-디하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 353.2(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. 융점: 196 내지 199 ℃.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.72(s, 3H), 1.97(s, 3H), 2.31(s, 3H), 3.59(m, 2H), 3.96(m, 2H), 5.63(br, 1H), 7.44-7.47(m, 3H), 8.36-8.43(dd,J=1Hz, 7Hz, 2H), 10.76(s, 1H); MS(ES): 324.5(M++1).
dl-4-(2-트랜스-하이드록시사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.62(m, 2H), 1.79(br, 4H), 1.92(s, 3H), 2.29(s, 3H), 4.11(m, 1H), 4.23(m, 1H), 5.28(d, 1H), 7.41-7.49(m, 3H), 8.22(m, 2H), 10.51(s, 1H); MS(ES): 323.2(M++1).
2-트랜스-하이드록시사이클로펜틸아민의 제조에 대해서 PCT 9417090을 참조하시오.
dl-4-(3-트랜스-하이드록시사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.58-1.90(br, 6H), 2.05(s, 3H), 2.29(s, 3H), 4.48-4.57(m, 1H), 4.91-5.01(m, 2H), 7.35-7.46(m, 3H), 8.42-8.47(m, 2H), 10.11(s, 1H); MS(ES): 323.2(M++1).
3-트랜스-하이드록시사이클로펜틸아민의 제조에 대해서 EP-A-322242를 참조하시오.
dl-4-(3-시스-하이드록시사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.82-2.28(br, 6H), 2.02(s, 3H), 2.30(s, 3H), 4.53-4.60(m, 1H), 4.95-5.08(m, 1H), 5.85-5.93(d, 1H), 7.35-7.47(m, 3H), 8.42-8.46(m, 2H), 10.05(s, 1H); MS(ES): 323.2(M++1).
3-시스-하이드록시사이클로펜틸아민의 제조에 대해서 EP-A-322242를 참조하시오.
4-(3,4-트랜스-디하이드록시사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.92-1.99(br, 2H), 2.14(s, 3H), 2.20(br, 2H), 2.30(s, 3H), 2.41-2.52(br, 2H), 4.35(m, 2H), 4.98(m, 2H), 7.38-7.47(m, 3H), 8.38-8.42(m, 2H), 9.53(s, 1H); MS(ES): 339.2(M++1).
3,4-트랜스-디하이드록시사이클로펜틸아민의 제조에 대해서 PCT 9417090을 참조하시오.
4-(3-아미노-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_2.02(s, 3H), 2.29(s, 3H), 2.71(t, 2H), 4.18(m, 2H), 5.75-5.95(m, 3H), 7.38-7.48(m, 3H), 8.37-8.41(m, 2H), 10.42(s, 1H); MS(ES): 310.1(M++1).
4-(3-N-사이클로프로필메틸아미노-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ_0.51(q, 2H), 0.40(q, 2H), 1.79-1.95(br, 1H), 2.36(s, 3H), 2.40(s, 3H), 2.72(t, 2H), 2.99(d, 2H), 4.04(t, 2H), 7.58-7.62(m, 3H), 8.22-8.29(m, 2H); MS(ES): 364.2(M++1).
4-(2-아미노-3-옥소에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 2.31(s, 3H), 2.38(s, 3H), 4.26(s, 2H), 7.36(m, 3H), 8.33(m, 2H); MS(ES): 396.1(M++1).
4-(2-N-메틸아미노-2-옥소에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.99(s, 3H), 2.17(s, 3H), 2.82(d, 3H), 4.39(d, 2H), 5.76(t, 1H), 6.71(br, 1H), 7.41-7.48(m, 3H), 8.40(m, 2H), 10.66(s, 1H); MS(ES): 310.1(M++1).
4-(3-3급-부틸옥시-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.45(s, 9H), 1.96(s, 3H), 2.29(s, 3H),2.71(t, 2H), 4.01(q, 2H), 5.78(t, 1H), 7.41-7.48(m, 3H), 8.22-8.29(m, 2H); MS(ES): 367.2(M++1).
4-(2-하이드록시에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.92(s, 3H), 2.29(s, 3H), 3.81-3.98(br, 4H), 5.59(t, 1H), 7.39-7.48(m, 3H), 8.37(m, 2H), 10.72(s, 1H); MS(ES): 283.1(M++1).
4-(3-하이드록시프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.84(m, 2H), 1.99(s, 3H), 2.32(s, 3H), 3.62(t, 2H), 3.96(m, 2H), 3.35(t, 1H), 7.39-7.48(m, 3H), 8.36(m, 2H), 10.27(s, 1H); MS(ES): 297.2(M++1).
4-(4-하이드록시부틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.71-1.82(m, 4H), 1.99(s, 3H), 2.31(s, 3H), 3.68-3.80(m, 4H), 5.20(t, 1H), 7.41-7.49(m, 3H), 8.41(m, 2H), 10.37(s, 1H); MS(ES): 311.2(M++1).
4-(4-트랜스-아세틸아미노사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(4-트랜스-메틸설포닐아미노사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(3-피리딜메틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
4-(2-메틸프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-7-(1-페닐에틸)피롤로[2,3d]피리미딘.
실시예 2:
0 ℃로 냉각시킨 THF(1.0 ㎖) 중의 트리페닐포스핀(0.047 g, 0.179 밀리몰) 및 벤조산(0.002 g, 0.179 밀리몰)의 교반된 현탁액에 0 ℃에서 4-(4-트랜스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(0.05 g, 0.149 밀리몰)을 가하였다. 이어서 디에틸 아조디카복실레이트(0.028 ㎖, 0.179 밀리몰)를 10 분에 걸쳐 적가하였다. 이어서 반응물을 실온으로 가온시켰다. TLC에 의해 반응을 완료한 후에 반응 혼합물을 수성 중탄산 나트륨(3.0 ㎖)으로 급냉시켰다. 수성 상을 분리시키고 에테르(2 x 5.0 ㎖)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 건조시키고 진공 하에서 농축 건조시켰다. 잔사에 에테르(0.2 ㎖) 및 헥산(5.0 ㎖)을 가하고, 이때 대부분의 트리페닐포스핀 옥사이드가 여과되었다.상기 여액을 농축시켜 점성 오일을 수득하고 이를 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트=4:1)에 의해 정제시켜 4-(4-시스-벤조일옥시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 5.0 ㎎(7.6%)을 수득하였다. MS(ES): 441.3(M++1). 상기 반응에 의해 또한 4-(3-사이클로헥세닐)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 50.0 ㎎(84%)을 수득하였다. MS(ES): 319.2(M++1).
실시예 3:
에탄올(1.0 ㎖) 중의 4-(4-시스-벤조일옥시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(5.0 ㎎, 0.0114 밀리몰) 용액에 2M 수산화 나트륨 10 방울을 가하였다. 1 시간 후에, 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 5.0 ㎖)로 추출하고 유기 층을 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축 건조시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트=4:1)시켜 4-(4-시스-하이드록시사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 3.6 ㎎(94%)을 수득하였다. MS(ES): 337.2(M++1).
하기의 화합물들을 실시예 3과 유사한 방식으로 수득하였다:
4-(3-N,N-디메틸-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.01(s, 3H), 2.31(s, 3H), 2.73(t, 2H),2.97(s, 6H), 4.08(m, 2H), 6.09(t, 1H), 7.41-7.48(m, 3H), 8.43(m, 2H), 10.46(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
4-(2-포르밀아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.26(s, 3H), 2.37(s, 3H), 3.59-3.78(m, 2H), 3.88-4.01(m, 2H), 5.48-5.60(m, 1H), 7.38-7.57(m, 3H), 8.09(s, 1H), 8.30-8.45(m, 2H), 8.82(s, 1H); MS(ES): 310.1(M++1).
4-(3-아세틸아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 338.2(M++1).
실시예 4:
4-(3-3급-부틸옥시-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(70.0 ㎎, 0.191 밀리몰)을 트리플루오로아세트산:디클로로메탄(1:1, 5.0 ㎖)에 용해시켰다. 생성 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 이어서 2 시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에, 혼합물을 진공 하에서 농축 건조시켰다. 잔사를 예비 박층 크로마토그래피(EtOAc:헥산:AcOH=7:2.5:0.5)시켜 4-(3-하이드록시-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 40.0 ㎎(68%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 2.32(s, 3H), 2.38(s, 3H), 2.81(t, 2H), 4.01(t, 2H), 7.55(m, 3H), 8.24(m, 2H); MS(ES): 311.1(M++1).
하기의 화합물을 실시예 4와 유사한 방식으로 수득하였다:
4-(3-아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 296.1(M++1), 279.1(M+-NH3).
실시예 5:
4-(3-하이드록시-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(50.0 ㎎, 0.161 밀리몰)을 N,N-디메틸포름아미드(0.50 ㎖), 디옥산(0.50 ㎖) 및 물(0.25 ㎖)의 혼합물에 용해시켰다. 상기 용액에 메틸아민(0.02 ㎖, 수중 40 중량%, 0.242 밀리몰), 트리에틸아민(0.085 ㎖) 및 N,N,N',N'-테트라메틸 유로늄 테트라플루오로보레이트(61.2 ㎎, 0.203 밀리몰)를 가하였다. 실온에서 10 분간 교반한 후에, 상기 용액을 농축시키고 잔사를 예비 박층 크로마토그래피(EtOAc)시켜 4-(3-N-메틸-3-옥소프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 35.0 ㎎(67%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.92(s, 3H), 2.30(s, 3H), 2.65(t, 2H), 4.08(t, 2H), 5.90(t, 1H), 6.12(m, 1H), 7.45(m, 3H), 8.41(m, 2H), 10.68(s,1H); MS(ES): 311.1(M++1).
하기의 화합물들을 실시예 5와 유사한 방식으로 수득하였다.
4-(2-사이클로프로판카보닐아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 350.2(M++1).
4-(2-이소부티릴아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 352.2(M++1).
4-(3-프로피오닐아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.00-1.08(t, 3H), 1.71-2.03(m, 4H), 2.08(s, 3H), 2.37(s, 3H), 3.26-3.40(m, 2H), 3.79-3.96(m, 2H), 5.53-5.62(m, 1H), 6.17-6.33(m, 1H), 7.33-7.57(m, 3H), 8.31-8.39(m, 2H), 9.69(s, 1H); MS(ES): 352.2(M++1).
4-(2-메틸설포닐아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.18(s, 3H), 2.27(s, 3H), 2.92(s, 3H), 3.39-3.53(m, 2H), 3.17-3.88(m, 2H), 5.31-5.39(m, 1H), 6.17-6.33(m, 1H), 7.36-7.43(m, 3H), 8.20-8.25(m, 2H), 9.52(s, 1H); MS(ES): 360.2(M++1).
실시예 6:
4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(0.70 g, 2.72 밀리몰) 및 1,2-디아미노에탄(10.0 ㎖, 150 밀리몰)의 혼합물을 불활성 분위기 하에서 6 시간 동안 환류시켰다. 과잉의 아민을 진공 하에서 제거하고, 잔사를 에테르와 헥산으로 연속적으로 세척하여 4-(2-아미나에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 0.75 g(98%)을 수득하였다.
실시예 7:
디클로로메탄(2.0 ㎖) 중의 4-(2-아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(70.0 ㎎, 0.249 밀리몰) 및 트리에틸아민(50.4 ㎎, 0.498 밀리몰) 용액에 염화 티오닐(25.6 ㎎, 0.024 ㎖, 0.274 밀리몰)을 0 ℃에서 가하였다. 1 시간 후에, 상기 혼합물을 진공 하에서 농축시키고 잔사를 예비 박층 크로마토그래피(EtOAc)시켜 4-(2-프로피오닐아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 22.0 ㎎(26%)을 수득하였다. MS(ES): 338.2(M++1).
하기의 화합물을 실시예 7과 유사한 방식으로 수득하였다:
4-(2-N'-메틸우레아에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 2.13(s, 3H), 2.32(s, 3H), 3.53(d, 3H), 3.55(m, 2H), 3.88(m, 2H), 4.29(m, 1H), 5.68(t, 1H), 5.84(m, 1H), 7.42(m, 3H),8.36(dd, 2H), 9.52(s, 1H); MS(ES): 339.3(M++1).
4-(2-N'-에틸우레아에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 353.2(M++1).
실시예 8:
디클로로메탄(2.0 ㎖) 중의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(41.1 ㎎, 0.215 밀리몰), 디메틸아미노피리딘(2.4 ㎎, 0.020 밀리몰) 및 피루브산(18.9 ㎎, 0.015 ㎖, 0.215 밀리몰) 용액에 4-(2-아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(55.0 ㎎, 0.196 밀리몰)을 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 통상적인 후처리 및 컬럼 크로마토그래피(EtOAc)에 의해 4-(2'-피루빌아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 10.0 ㎎(15%)을 수득하였다. MS(ES): 352.2(M++1).
실시예 9:
디클로로메탄(2.0 ㎖) 중의 4-(2-아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(60.0 ㎎, 0.213 밀리몰) 용액에 N-트리메틸실릴 이소시아네이트(43.3 ㎎, 0.051 ㎖, 0.320 밀리몰)를 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 다음 수성 중탄산 나트륨을 가하였다. 소량의 실리카겔을 통해 여과시킨 후에, 상기 여액을 진공 하에서 농축 건고시켜 4-(2-우레아에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 9.8 ㎎(14%)을 수득하였다. MS(ES): 325.2(M++1).
하기의 화합물들을 실시예 9와 유사한 방식으로 수득하였다:
dl-4-(2-아세틸아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.28-1.32(d, J=8Hz, 3H), 1.66(s, 3H), 1.96(s, 3H), 2.30(s, 3H), 3.76-3.83(m, 2H), 4.10-4.30(m, 1H), 5.60-5.66(t, J=6Hz, 1H), 7.40-7.51(m, 3H), 8.36-8.43(m, 2H), 10.83(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
(R)-4-(2-아세틸아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.31(d, 3H), 1.66(s, 3H), 1.99(s, 3H), 2.31(s, 3H), 3.78-3.83(m, 2H), 4.17-4.22(m, 1H), 5.67(t, 1H), 7.38-7.5(m, 3H), 8.39(m, 2H), 10.81(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
(R)-4-(1-메틸-2-아세틸아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.41(d, 3H), 1.68(s, 3H), 2.21(s, 3H), 2.34(s, 3H), 3.46-3.52(br, m, 2H), 4.73(m, 1H), 5.22(d, 1H), 7.41-7.46(m,3H), 8.36-8.40(m, 2H), 8.93(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
(S)-4-(2-아세틸아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.31(d, 3H), 1.66(s, 3H), 2.26(s, 3H), 2.35(s, 3H), 3.78-3.83(m, 2H), 4.17-4.22(m, 1H), 5.67(t, 1H), 7.38-7.5(m, 3H), 8.39(m, 2H), 8.67(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
(S)-4-(1-메틸-2-아세틸아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.41(d, 3H), 1.68(s, 3H), 2.05(s, 3H), 2.32(s, 3H), 3.46-3.52(m, 2H), 4.73(m, 1H), 5.22(d, 1H), 7.41-7.46(m, 3H), 8.36-8.40(m, 2H), 10.13(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
실시예 10:
4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘과 dl-1-아미노-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노-프로판 및 dl-2-아미노-1-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노-프로판의 혼합물과의 반응을 실시예 1의 방식과 유사한 방식으로 실시하였다. 상기 반응에 의해 dl-4-(1-메틸-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노)에틸아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘과 dl-4-(2-메틸-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노)에틸아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘의 혼합물(이들은 컬럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산=1:3)에 의해 분리되지 않았다)을 수득하였다. 상기 첫 번째 분획은 dl-4-(1-메틸-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이고:1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.29-1.38(m, 12H), 1.95(s, 3H), 2.31(s, 3H), 3.34-3.43(m, 2H), 4.62-4.70(m, 1H), 5.36-5.40(d, J=8 Hz, 1H), 5.53(br, 1H), 7.37-7.49(m, 3H), 8.37-8.44(m, 2H), 10.75(s, 1H). MS 396.3(M++1); 두 번째 분획은 dl-4-(2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘이었다:1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.26-1.40(m, 12H), 2.00(s, 3H), 2.31(s, 3H), 3.60-3.90(m, 2H), 3.95-4.10(m, 1H), 5.41-5.44(d, J=6.0Hz, 1H), 5.65(br, 1H), 7.40-7.46(m, 3H), 8.37-8.44(m, 2H), 10.89(s, 1H); MS(ES): 396.2(M++1).
하기의 화합물을 실시예 10과 유사한 방식으로 수득하였다:
(S,S)-4-(2-아세틸아미노사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.43(m, 4H), 1.60(s, 3H), 1.83(m, 2H), 2.18(s, 3H), 2.30(m, 2H), 2.32(s, 3H), 3.73(br, 1H), 4.25(br, 1H), 5.29(d,1H), 7.43-7.48(m, 3H), 8.35-8.40(m, 2H), 9.05(s, 1H).
4-(2-메틸-2-아세틸아미노프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘.
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.51(s, 6H), 1.56(s, 3H), 2.07(s, 3H), 2.36(s, 3H), 3.76(d, 2H), 5.78(t, 1H), 7.41-7.48(m, 3H), 7.93(s, 1H), 8.39(m, 2H), 10.07(s, 1H); MS(ES): 352.3(M++1).
실시예 11:
dl-4-(1-메틸-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐 아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(60.6 ㎎, 0.153 밀리몰)을 디클로로메탄(2.0 ㎖) 중의 트리플루오로아세트산(0.5 ㎖)으로 14 시간 동안 처리하였다. 유기 용매를 진공 하에서 제거하여 건조시켰다. 잔사를 N,N-디메틸포름아미드(2.0 ㎖) 및 트리에틸아민(2.0 ㎖)에 용해시켰다. 0 ℃에서 상기 용액에 아세트산 무수물(17.2 ㎎, 0.016, 0.169 밀리몰)을 가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 48 시간 동안 교반하고 이어서 진공 하에서 농축 건조시켰다. 잔사를 예비 박층 크로마토그래피(EtOAc)시켜 dl-4-(1-메틸-2-아세틸아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 27.0 ㎎(52%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.38-1.42(d, J=8Hz, 3H), 1.69(s, 3H), 2.01(s, 3H), 2.32(s, 3H), 3.38-3.60(m, 2H),4.65-4.80(m, 1H), 5.23-5.26(d, J=6Hz, 1H), 7.40-7.51(m, 3H), 8.37-8.43(m, 2H), 10.44(s, 1H); MS(ES): 338.2(M++1).
실시예 12:
4-클로로-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(0.15 g, 0.583 밀리몰) 및 (1R,2R)-1,2-디아미노사이클로헥산(0.63 g, 5.517 밀리몰)로부터 실시예1과 유사한 방식으로 제조된 (R,R)-4-(2-아미노사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘을 실온에서 N,N-디메틸포름아미드(10.0 ㎖) 중의 트리에틸아민(0.726 g, 7.175 밀리몰) 및 아세트산 무수물(0.325 g, 3.18 밀리몰)로 2 시간 동안 처리하였다. 용매를 진공 하에서 제거한 후에, 에틸 아세테이트(10.0 ㎖) 및 물(10.0 ㎖)을 잔사에 가하였다. 혼합물을 분리시키고 수성 층을 에틸 아세테이트(2 x 10.0 ㎖)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 용액을 건조(MgSO4)시키고 여과하였다. 상기 여액을 진공 하에서 농축 건고시키고 잔사를 컬럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산=1:1)시켜 (R,R)-4-(2-아세틸아미노사이클로헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 57.0 ㎎(26%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.43(m, 4H), 1.60(s, 3H), 1.84(m, 2H), 2.22(s, 3H), 2.30(m, 2H), 2.33(s, 3H), 3.72(br, 1H), 4.24(br, 1H), 5.29(d, 1H), 7.43-7.48(m, 3H), 8.35-8.39(m, 2H), 8.83(s, 1H); MS(ES): 378.3(M++1).
실시예 13:
피리딘(1.0 ㎖) 중의 4-(2-하이드록시에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(40.0 ㎎, 0.141 밀리몰) 용액에 0 ℃에서 아세트산 무수물(0.108 g, 1.06 밀리몰)을 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하고 용매를 진공 하에서 제거하였다. 잔사를 예비 박층 크로마토그래피(EtOAc:헥산=1:1)시켜 4-(2-아세틸옥시에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 32.3 ㎎(71%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_1.90(s, 3H), 2.08(s, 3H), 2.31(s, 3H), 4.05(m, 2H), 4.45(t, 2H), 5.42(m, 1H), 7.41-7.49(m, 3H), 8.42(m, 2H), 11.23(s, 1H).
실시예 14:
1 방울의 N,N-디메틸포름아미드가 첨가된 디클로로메탄(4.0 ㎖) 중의 Fmoc-β-Ala-OH(97.4 ㎎, 0.313 밀리몰) 및 염화 옥살릴(39.7 ㎎, 27.3 ㎕, 0.313 밀리몰) 용액을 0 ℃에서 교반한 다음 4-(2-아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(80.0 ㎎, 0.285 밀리몰) 및 트리에틸아민(57.6 ㎎, 79.4 ㎕, 0.570 밀리몰)을 가하였다. 3 시간 후에, 상기 혼합물을 진공 하에서 농축시키고 잔사를 N,N-디메틸포름아미드(2.0 ㎖) 중의 20% 피페리딘 용액으로 0.5 시간 동안 처리하였다. 용매를 진공 하에서 제거한 후에, 잔사를 디에틸 에테르:헥산(1:5)으로 세척하여 4-(6-아미노-3-아자-4-옥소헥실)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 3.0 ㎎(3%)을 수득하였다. MS(ES): 353.2(M++1).
실시예 15:
1 방울의 N,N-디메틸포름아미드가 첨가된 디클로로메탄(4.0 ㎖) 중의 4-(2-아미노에틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘(70.0 ㎎, 0.249 밀리몰) 및 숙신산 무수물(27.0 ㎎, 0.274 밀리몰) 용액을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 20% 수산화 나트륨(3 x 5.0 ㎖)으로 추출하였다. 상기 수성 용액을 3M 하이드로클로라이드로 pH 7.0으로 산성화시켰다. 상기 전체 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 10 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 건조(MgSO4)시키고 여과하였다. 상기 여액을 진공 하에서 증발 건고시켜 4-(7-하이드록시-3-아자-4,7-디옥소헵틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 15.0 ㎎(16%)을 수득하였다. MS(ES): 382.2(M++1).
실시예 16:
디메틸포름아미드(DMF) 10 ㎖에 실온에서 4-시스-3-하이드록시사이클로펜틸아미노-2-페닐-5,6-디메틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 700 ㎎을 가한 다음 N-Boc 글리신 455 ㎎, N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP) 20 ㎎, 하이드록시벤조트리아졸(HOBT) 293 ㎎ 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드하이드로클로라이드(EDCl) 622 ㎎을 가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 교반하면서 방치시켰다. 이어서 DMF를 감압 하에서 제거하고 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 20 ㎖과 물 50 ㎖ 사이에 분배시켰다. 상기 수성 부분을 2 x 20 ㎖의 에틸 아세테이트로 추가로 추출하고 합한 유기 부분들을 염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 에틸 아세테이트/헥산으로 용출시키면서 실리카겔 상에서 정제시켜 목적하는 생성물, 즉 4-(시스-3-(N-t-부톡시카보닐-2-아미노아세톡시)사이클로펜틸)아미노-2-페닐-5,6-디메틸-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 410 ㎎을 수득하였다. MS(ES)(M++1)=480.2. 이어서 상기 에스테르를 실온에서 디클로로메탄 중의 20% 트리플루오로아세트산 5 ㎖로 처리하고, 밤새 방치시키고 이어서 농축시켰다. 에틸 아세테이트로 연마시켜 회색 고체, 즉 4-(시스-3-(2-아미노아세톡시)사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 트리플루오로아세트산 염 300 ㎎을 수득하였다. MS(ES)(M++1)=380.1.
당해 분야의 숙련가는 하기의 화합물을 상기 개시된 방법들에 의해 합성할 수 있음을 알 것이다:
4-(시스-3-하이드록시사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=323.1.
4-(시스-3-(2-아미노아세톡시)사이클로펜틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 피리미딘트리플루오로아세트산 염 MS(ES)(M++1)=380.1.
4-(3-아세트아미도)피페리디닐-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=364.2.
4-(2-N'-메틸우레아프로필)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=353.4.
4-(2-아세트아미도부틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=352.4.
4-(2-N'-메틸우레아부틸)아미노-5,6-디메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=367.5.
4-(2-아미노사이클로프로필아세트아미도에틸)아미노-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=309.1.
4-(트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-(3-클로로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=342.8.
4-(트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=327.2.
4-(트랜스-4-하이드록시사이클로헥실)아미노-2-(4-피리딜)-7H-피롤로[2,3d]피리미딘 MS(ES)(M++1)=310.2.
실시예 17
(7)의 피롤 질소(반응식 IX)를 염기성 조건 하에서 디-t-부틸디카보네이트로 보호하여 상응하는 카바메이트(22)를 수득하였다. (22)의 라디칼 브롬화를 입체 선택적으로 진행시켜 브로마이드(23)를 수득하였다. 일반적으로는, 화합물(23)은 다양한 친핵성 커플링 상대에 대해 주요 친전자성 중간체로서 작용한다. 상기 알킬 브로마이드의 나트륨 페놀레이트 트리하이드레이트에 의한 치환으로 화합물(24)를 수득하였다. 상기 아릴 클로라이드를 후속적으로 치환하고 t-부틸 카바메이트 보호 그룹의 제거를 1 단계로 수행하여 목적하는 화합물(25)을 수득하였다.
반응식 IX에 따른 화합물 (22) 내지 (25)의 합성에 대한 상세한 설명
화합물 22
디-티-부틸 디카보네이트(5.37 g, 24.6 밀리몰) 및 디메틸 아미노피리딘(1.13 g, 9.2 밀리몰)을 (7)(1.50 g, 6.15 밀리몰) 및 피리딘(30 ㎖)을 함유하는 용액에 가하였다. 20 시간 후에 반응물을 농축시키고 잔사를 CH2Cl2와 물 사이에 분배시켰다. 상기 CH2Cl2층을 분리시키고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 검은색 고체를 수득하였다. 플래시 크로마토그래피(SiO2; 1/9 EtOAc/헥산, Rf0.40)시켜 백색 고체(22) 1.70 g(80%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_8.50(m, 2H, Ar-H), 7.45(m, 3H, Ar-H), 6.39(s, 1H, 피롤-H), 2.66(s, 3H, 피롤-CH3), 1.76(s, 9H, 카바메이트-CH3); MS, M+1=344.1; Mpt=175-177 ℃.
화합물 23
N-브로모숙신이미드(508 ㎎, 2.86 밀리몰) 및 AIBN(112 ㎎, 0.66 밀리몰)을 (22)(935 ㎎, 2.71 밀리몰) 및 CCl4(50 ㎖)를 함유하는 용액에 가하였다. 상기 용액을 가열 환류시켰다. 2 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 진공 하에서 농축시켜 백색 고체를 수득하였다. 플래시 크로마토그래피(SiO2; 1/1 CH2Cl2/헥산, Rf0.30)시켜 백색 고체(23) 960 ㎎(84%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_8.52(m, 2H, Ar-H), 7.48(m, 3H, Ar-H), 6.76(s, 1H, 피롤-H), 4.93(s, 2H, 피롤-CH2Br), 1.79(s, 9H, 카바메이트-CH3); MS, M+1=423.9; Mpt=155-157 ℃.
화합물 24
나트륨 페녹사이드 트리하이드레이트(173 ㎎, 1.02 밀리몰)를 CH2Cl2(5 ㎖) 및 DMF(10 ㎖)에 용해된 브로마이드(23)(410 ㎎, 0.97 밀리몰) 용액에 한번에 가하였다. 2 시간 후에, 반응 용액을 CH2Cl2와 물 사이에 분배시켰다. 상기 수 층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 CH2Cl2층들을 물로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 플래시 크로마토그래피(SiO2; 1/6 EtOAc/헥산, Rf0.30)시켜 백색 고체(24) 210 ㎎(50%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ_8.53(m, 2H, Ar-H), 7.48(m, 3H, Ar-H), 7.34(m, 2H, Ar-H), 7.03(m, 3H, Ar-H), 6.83(s, 1H, 피롤-H), 5.45(s, 2H, ArCH2O), 1.76(s, 9H, 카바메이트-CH3); MS, M+=436.2.
화합물 25
(24)(85 ㎎, 0.20 밀리몰), N-아세틸에틸렌디아민(201 ㎎, 1.95 밀리몰) 및 DMSO(3 ㎖)를 함유하는 용액을 100 ℃로 가열하였다. 1 시간 후에 상기 온도를 130 ℃로 상승시켰다. 3 시간 후에 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc와 물 사이에 분배시켰다. 상기 수 층을 EtOAc(2x)로 추출하였다. 합한 EtOAc 층들을 물로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피(SiO2; 1/10 EtOAc/CHCl3, Rf0.25)시켜 백색 발포성 고체(25) 73 ㎎(93%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ 11.81(br s, 1H, N-H), 8.39(m, 2H, Ar-H), 8.03(br t, 1H, N-H), 7.57(br t, 1H, N-H), 7.20-7.50(m, 5H, Ar-H), 6.89-7.09(m, 3H, Ar-H), 6.59(s, 1H, 피롤-H), 5.12(s, 2H, ArCH2O), 3.61(m, 2H, NCH3), 3.36(m, 2H, NCH2), 1.79(s, 3H, COCH3); MS, M+1=402.6.
하기의 화합물들을 실시예 17과 유사한 방식으로 수득하였다:
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-페녹시메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. 융점 196-197 ℃; MS(ES): 401.6(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-(4-플루오로페녹시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 420.1(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-(4-클로로페녹시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 436.1(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-(4-메톡시페녹시)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 432.1(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-(N-피리딘-2-온)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 403.1(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-(N-페닐아미노)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 400.9(M++1).
4-(2-아세틸아미노에틸)아미노-6-(N-메틸-N-페닐아미노)메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 414.8(M++1).
4-(2-N'-메틸우레아에틸)아미노-6-페녹시메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3d]피리미딘. MS(ES): 416.9(M++1).
실시예 18: 아데노신 A1길항물질의 합성
화합물 1319 및 화합물 1320(하기 표 13)을 본 발명의 일반적인 과정에 의해 합성할 수 있다:
화합물 26 × = F화합물 1319
화합물 27 × = Cl화합물 1320
화합물 1319(81%)1H NMR(d6-DMSO) δ 1.37(m, 4H), 1.93(m, 2H), 2.01(m, 2H), 4.11(brs, 1H), 4.61(d, 1H, J=4.4Hz), 6.59(m, 1H), 7.09(m, 1H), 7.21(m, 2H), 7.49(dd, 1H, J=8Hz, 14Hz), 8.03(m, 1H), 8.18(d, 1H, J=8Hz), 11.55(brs, 1H); MS(ES): 327.0(M++1).
화합물 1320(31%) MS(ES): 343.1(M++1).
실시예 19: 아데노신 A1길항물질의 합성
화합물 1321(하기 표 13)을 본 발명의 일반적인 과정에 의해 합성할 수 있다:
화합물 1321
화합물 28(10.93 g, 50.76 밀리몰)을 DMF(67 ㎖)에 용해시켰다. 4-아미디노피리딘 하이드로클로라이드(8.0 g, 50.76 밀리몰) 및 DBU(15.4 g, 101.5 밀리몰)를 연속적으로 가하고 반응물을 85 ℃로 가열하였다. 22 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고, DMF를 진공 하에서 제거하였다. 짙은색 오일을 2M HCl(80 ㎖)로 희석하였다. 반응물을 정치시켰다. 2 시간 후에, 상기 용액을 10 ℃로 냉각시키고 여과하였다. 상기 고체를 냉수로 세척하고 건조시켜 황색 고체로서 화합물 29 7.40 g(69%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, d6-DMSO) δ 6.58(s, 1H), 7.27(s, 1H), 8.53(d, 2H, J=5.6), 9.00(d, 2H, J=5.2Hz), 12.35(brs, 1H), MS(ES): 212.8(M++1).
화합물 29(7.4 밀리몰, 29.8 밀리몰)를 POCl3로 희석하고 105 ℃로 가열하였다. 18 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 상기 POCl3를 진공 하에서 제거하였다. 농후한 짙은 색 오일을 MeOH(75 ㎖)로 희석한 다음 에테르(120 ㎖)로 희석한다. 비 결정성 적색 고체를 여과하고 에테르로 세척하여 적색 고체 3.82 g을수득한다. 상기 조 고체는 대략 80% 순수하며 이를 다음 단계에 추가의 정제 없이 사용한다. MS(ES): 230.7(M++1).
화합물 1321.
1H NMR(15%) (200 MHz, d6-DMSO) δ 1.38(m, 4H), 1.92(brs, 2H), 2.02(brs, 2H), 3.44(brs, 1H), 4.14(brs, 1H), 4.56(d, 1H, J=4Hz), 6.63(m, 1H), 7.15(m, 1H), 7.32(d, 1H, J=6.2Hz), 8.20(d, 2H, J=4.4Hz), 8.65(d, 2H, J=4.4Hz), 11.67(brs, 1H); MS(ES): 310.2(M++1).
화합물 1501(하기 표 15).
1H NMR(70%) (200 MHz, CD3OD) δ 1.84(s, 3H), 3.52(t, 2H, J=6.0Hz), 3.83(t, 2H, J=6.0Hz), 6.51(d, 1H, J=3.4Hz), 7.06(d, 1H, J=3.8Hz), 7.42(m, 3H), 8.36(m, 2H); MS(ES): 296.0(M++1).
화합물 1502(하기 표 15) MS(ES): 345.0(M++1).
화합물 1500(하기 표 15)
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.40-1.80(m, 6H), 1.85-2.10(m, 2H), 2.18(s, 3H), 2.33(s, 3H), 2.50(d, 3H), 3.90-4.10(m, 2H), 4.76(m, 1H), 5.50(d, 1H), 6.03(m, 1H), 7.40(m, 3H), 8.37(m, 2H), 9.15(brs, 1H); MS(ES): 393.3(M++1).
실시예 20: 아데노신 A1길항물질의 합성
화합물 1504(하기 표 15)를 하기 제공된 일반적인 절차에 의해 합성할 수 있다:
화합물 1504
화합물 31(200 ㎎, 0.47 밀리몰)을 DCM(4 ㎖)에 용해시켰다. 트리에틸아민(51 ㎎, 0.5 밀리몰) 및 티오모르폴린(52 ㎎, 0.5 밀리몰)을 연속적으로 가하였다. 상기 용액을 수분간 혼합하고 72 시간 동안 정치시켰다. 상기 반응물을 DCM 및 H2O로 희석하고 층들을 분리시켰다. 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 합한 DCM 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 에틸 에테르를 조 샘플에 가하고 생성된 고체를 여과하여 백색 고체 (32) 100 ㎎(62%)을 수득하였다.1H NMR(200 MHz, CDCl3) d 1.76(s, 9H), 2.66(brs, 2H), 2.79(brs, 2H), 3.86(s, 2H), 7.46(m, 3H), 8.50(m, 2H).
화합물 32를 DMSO(3 ㎖) 및 트랜스-4-아미노사이클로헥사놀(144 ㎎, 1.25 밀리몰)과 합하고 130 ℃로 4 시간 동안 가열하였다. 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc 및 H2O로 희석하였다. 상기 층들을 분리시키고 수성 층을EtOAc(2x)로 추출하였다. 상기 합한 유기 층들을 H2O 및 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크로마토그래피(실리카, 8:1 CHCl3/EtOH)에 의해 갈색 오일 32 ㎎을 수득하였다. 에틸 에테르를 가하고 생성된 고체를 여과하여 백색 고체 5 ㎎(9%)을 수득하였다. OSIC-148265:1H NMR(200 MHz, CD3OD) d 1.44(brm, 4H), 2.03(brm, 2H), 2.21(brm, 2H), 2.70(brm, 8H), 3.63(m, 4H), 3.92(m, 1H), 4.26(brs, 1H), 6.42(s, 1H), 7.42(m, 3H), 8.33(m, 2H).
실시예 21: 아데노신 A1길항물질의 합성
화합물 1503(하기 표 15)을 하기 제공된 일반적인 절차에 의해 합성할 수 있다:
화합물 1503
브로마이드 화합물 31(220 ㎎, 0.47 밀리몰)을 1:1 DMF:디클로로메탄(5 ㎖)에 용해시켰다. 상기에 K2CO3(71 ㎎, 0.52 밀리몰) 및 모르폴린(0.047 ㎖, 0.47 밀리몰)을 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매들을 진공하에서 제거하고 잔사를 H2O와 디클로로메탄 사이에 분배시켰다. 유기 층을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 회색 고체를 수득하고, 이를 에테르/헥산으로 연마 시 백색 고체 (33) 175 ㎎(84%)이 수득되었다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3): 1.9(9H, s), 2.54(4H, s), 3.65(4H, s), 3.85(1H, s), 6.59(1H, s), 7.45(3H, m), 8.5(2H, m).
화합물 33(50 ㎎, 0.11 밀리몰) 및 트랜스-4-아미노사이클로헥산올(105 ㎎, 0.91 밀리몰)을 DMSO(2 ㎖)에 용해시켰다. 생성된 용액에 N2를 살포하고 이어서 이를 오일 욕에서 100 ℃로 가열하고 밤새 교반하였다. 상기 조 반응 혼합물을 물에 붓고 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 2 회 추출하였다. 합한 유기 층들을 H2O로 세척하였다. MgSO4로 건조시키고 여과시킨 후에, 유기 층을 진공 하에서 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였다. 크로마토그래피(실리카, CH2Cl2중의 10% CH3OH)시켜 15 ㎎(33%)을 수득하였다.
1H NMR(200 MHz, CDCl3): 1.24-1.62(4H, m), 1.85(2H, m), 2.10(2H, m), 2.26(4H, m), 3.53(4H, m), 4.22(1H, m), 4.73(1H, m), 5.85(1H, d), 6.15(1H, s), 7.25(3H, m), 8.42(2H, M), 10.0(1H, s), MS(ES): 408(M++1).
화합물 1500, 1501 및 1502를, 화합물 32를 적합하게 치환된 아민으로 처리함으로써 실시예 20의 유사한 제조 단계를 사용하여 합성할 수 있다.
인간 아데노신 A1및 A2a수용체에 대한 효모 β-갈락토시다제 정보제공 유전자 분석:
효모 균주(에스 세레비지아에)를 인간 아데노신 A1(A1R; CADUS 균주 CY12660) 또는 인간 A2a(A2a; CADUS 균주 CY8362)로 형질전환시키고 lacZ(β-갈락토시다제) 정보제공 유전자를 첨가하여 기능 해독으로서 이용하였다. 상기 형질전환에 대한 완전한 설명을 하기에 열거한다(효모 균주 참조). A1및 A2a수용체들에 대해 유사한 친화성을 갖는 효능있는 아데노신 수용체 작용물질인 NECA(5'-N-에틸카복스아미도아데노신)를 모든 분석에 대한 리간드로서 사용하였다. 시험 화합물들을 8 개의 농도(0.1 내지 10,000 nM)에서 CY12660 또는 CY8362에 의해 NECA-유도된 β-갈락토시다제 활성을 억제하는 능력에 대해서 검사하였다.
효모 보존 배양액의 제조: 각각의 효모 균주 CY12660 및 CY8326 각각을 LT 한천 플레이트 상에 스트리킹하고 콜로니가 관찰될 때까지 30 ℃에서 배양하였다. 이들 콜로니로부터의 효모를 LT 액체(pH 6.8)에 가하고 30 ℃에서 밤새 증식시켰다. 이어서 각각의 효모 균주를 분광광도 측정법에 의해 측정 시(Molecular Devices VMAX) OD600=1.0 내지 2.0(대략 1 내지 2 x 107세포/㎖)으로 희석하였다. 효모 액체 배양액 각각 6 ㎖에 대해서 4 ㎖의 40% 글리세롤(1:1.5 부피:부피)을 가하였다("효모/글리세롤 모액"). 상기 효모/글리세롤 모액으로부터, 10 개의 1 ㎖ 분액들을 제조하고 분석에 필요할 때까지 -80 ℃에서 보관하였다.
효모 A1R 및 A2aR 분석:각각 CY8362 및 CY12660 효모/글리세롤 모액의 1 바이알을 해동시키고 보충된 LT 액체 배지(pH 6.8, 92 ㎖ LT dor, 여기에 40% 글루코스 5 ㎖, 1M KOH 0.45 ㎖ 및 파이프 2.5 ㎖(pH 6.8)을 가한다)의 접종에 사용하였다. 액체 배양액을 30 ℃에서 16 내지 18 시간 동안 증식시켰다. 이어서 밤새 배양액으로부터의 분액들을 4U/㎖의 아데노신 데아미나제(송아지 장 점막으로부터의 VI 또는 VII 타입, Sigma)를 함유하는 LT 배지로 희석시켜 CY8362(A2aR)에 대해서 OD600=0.15(1.5 x 106세포/㎖), 및 CY12660(A1R)에 대해서 OD600=0.50(5 x 106세포/㎖)을 수득하였다.
분석을 96-웰 미세적정 플레이트에서 100 ㎕의 최종 부피로 수행하여, 모든 웰들에서 2% DMSO의 최종 농도를 성취하였다. 1 차 선별을 위해서, 1 내지 2 농도의 시험 화합물들을 사용하였다(10 μM, 1 μM). 화합물 프로파일링을 위해서, 8 개 농도를 시험하였다(10000, 1000, 500, 100, 50, 10, 1 및 0.1 nM). 각각의 미세적정 플레이트에, 10 ㎕의 20% DMSO를 "대조용" 및 "전체" 웰에 가하는 반면 10 ㎕의 시험 화합물(20% DMSO 중의)을 "미지의" 웰에 가하였다. 후속적으로, 10 ㎕의 NECA(A1R에 대해 5 μM, A2aR에 대해 1 μM)를 "전체" 및 "미지의" 웰에 가하고; 10 ㎕의 PBS를 "대조용" 웰에 가하였다. 최종 첨가에서, 80 ㎕의 효모 균주, CY8362 또는 CY12660을 모든 웰에 가하였다. 이어서 모든 플레이트를 간단히 교반하고(랩라인 오비탈(LabLine orbital) 진탕기 2 내지 3 분) 30 ℃에서 4 시간 동안 건조 오븐에서 배양시켰다.
β-갈락토시다제 활성을 비색측정(예를 들어 ONPG, CPRG), 발광측정(예를 들어 갈락톤-스타(Galacton-Star)) 또는 형광측정(예를 들어 FDG, 레소루핀) 기재를 사용하여 정량화할 수 있다. 현재, 형광 검출이 탁월한 신호:소음 비, 간섭으로부터의 상대적인 자유 및 저렴한 비용을 근거로 바람직하다. 형광성 β-갈락토시다제 기질인 플루오레세인 디갈락토피라노사이드(FDG, 몰레큘라 프로브스 또는 마커 진 테크놀로지스(Molecular Probes or Marker Gene Technologies))를 모든 웰에 20 ㎕/웰(최종 농도=80 μM)로 가하였다. 플레이트를 5 내지 6 초간 진탕시키고(랩라인 오비탈 진탕기) 이어서 37 ℃에서 90 분간 배양시켰다(95% O2/5% CO2배양기). 90 분의 배양 기간의 끝에서, β-갈락토시다제 활성을 1M Na2CO320 ㎕/웰을 사용하여 정지시키고 모든 플레이트를 5 내지 6 초간 진탕시켰다. 이어서 플레이트를 6 초간 교반하고 상대적인 형광 강도를 형광계(테칸 스펙트라플루오르(Tecan Spectrafluor; 여기=485 ㎚, 방출=535 ㎚)를 사용하여 측정하였다.
계산: "대조용" 웰에 대한 상대적인 형광 값을 백그라운드로서 해석하고 "전체" 및 "미지의" 값들로부터 감하였다. 화합물 프로파일을 대수 변환(x 축: 화합물 농도)에 이어서 1 부위 경쟁 곡선 정합을 통해 분석하여 IC50값을 계산하였다(GraphPad Prism).
효모 균주: 사카로마이세스 세레비지아에 균주 CY12660[farl*1442 tbt1-1 fus1-HIS3 can1 ste14::trp1::LYS2 ste3*1156 gpal(41)-Gαi3 lys2 ura3 leu2trp1: his3: LEU2 PGKp-Mfα1Leader-hA1R-PHO5term 2mu-orig REP3 Ampr] 및 CY8362[gpalp-rGαsE10K farl*1442 tbt1-1 fus1-HIS3 can1 ste14::trp1::LYS2 ste3*1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3: LEU2 PGKp-hA2aR 2mu-orig REP3 Ampr]를 발육시켰다.
LT 배지: LT(Leu-Trp 보충) 배지는 하기의 성분들이 보충된 100 g의 DIFCO 효모 질소 베이스로 구성된다: 발린 1.0 g, 아스파르트산 1.0 g, 페닐알라닌 0.75 g, 리신 0.9 g, 티로신 0.45 g, 이소류신 0.45 g, 메티오닌 0.3 g, 아데닌 0.6 g, 우라실 0.4 g, 세린 0.3 g, 프롤린 0.3 g, 시스테인 0.3 g, 아르기닌 0.3 g, 히스티딘 0.9 g 및 쓰레오닌 1.0 g.
인간 A1아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주의 제작
본 실시예에서, 효모 페로몬 시스템에 기능적으로 통합된 인간 A1아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주의 제작을 개시한다.
I. 발현 벡터 제작
인간 A1아데노신 수용체에 대한 효모 발현 벡터를 제작하기 위해서, A1아데노신 수용체 cDNA를 상기 인간 A1아데노신 수용체의 공개된 서열을 기본으로 구상된 프라이머와 표준 기법을 사용하여 인간 해마상 융기 mRNA의 역 전사효소 PCR에 의해 수득하였다. 상기 PCR 산물을 효모 발현 플라스미드 pMP15의 NcoI 및 XbaI부위 내로 서브클로닝시켰다.
상기 pMP15 플라스미드는 pLPXt로부터 하기와 같이 생성되었다: YEP51(Broach, J.R. et al. (1983) "Vectors for high-level, inducible expression of cloned genes in yeast" P. 83-117 in M. Inouye(ed.), Experimental Manipulation of Gene Expression. Academic Press, New York)의 XbaI 부위를 절단에 의해 제거하고, 단부-충전 및 재 연결시켜 Yep51NcoDxba를 생성시켰다. 또 다른 XbaI 부위를 BamHI에 의한 절단에 의해 BamHI 부위에 생성시키고, 단부 충전, 링커(New England Biolabs, #1081) 연결, XbaI 절단 및 재 연결시켜 YEP51NcoXt를 생성시켰다. 상기 플라스미드를 Esp31 및 NcoI로 절단하고 PCR에 의해 생성된 Leu2 및 PGKp 단편에 연결시켰다. 상기 2 kb Leu2 PCR 산물을 Esp31 및 BglII 부위를 함유하는 프라이머를 사용하여 YEP51N채로부터 증폭에 의해 생성시켰다. 상기 660 염기쌍 PGKp PCR 산물은 BglII 및 NcoI 부위를 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 pPGKαs(Kang, Y.-S. et al.(1990) Mol. Cell. Biol. 10:2582-2590)로부터 증폭에 의해 생성시켰다. 생성된 플라스미드를 pLPXt라 칭한다. pLPXt를 상기 NcoI 부위에 a-인자 프리-프로 리더의 암호화 영역을 삽입시킴으로써 변경시켰다. 상기 프리프로 리더를 상기 NcoI 클로닝 부위가 상기 리더의 3' 단부에서 유지되지만 5' 단부에서는 재생되지 않도록 삽입하였다. 이와 같이 수용체들을 NcoI 및 XbaI에 의한 상기 플라스미드의 절단에 의해 클로닝시킬 수 있다. 생성된 플라스미드를 pMP15라 칭한다.
인간 A1아데노신 수용체 cDNA가 삽입된 상기 pMP15 플라스미드를 p5095로 표시하였다. 이 벡터에서, 상기 수용체 cDNA를 효모 a-인자 프리프로 리더의 3' 단부에 융합시켰다. 단백질 돌연변이 도중에 상기 프리프로 펩티드 서열들이 절단되어 성숙한 전체 길이 수용체가 생성된다. 이는 상기 효모 분비 경로를 통한 상기 수용체의 진행 중에 일어난다. 상기 플라스미드를 Leu 선택(즉 류신 결핍 배지 상에서의 생육)에 의해 유지시킨다. 상기 클로닝된 암호화 영역의 서열을 측정하였으며, 이는 공개된 문헌(GenBank 수탁 번호 S45235 및 S56143)의 것과 같은 것으로 밝혀졌다.
II. 효모 균주 제작
인간 A1아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주를 생성시키기 위해서, 효모 균주 CY7967을 출발 모 균주로서 사용하였다. CY7967의 유전자형은 하기와 같다:
MATα gpaD1163 gpa1(41)Gαi3 far1D1442 tbt-1 FUS1-HIS3 can1 ste14::trp1::LYS2 ste3D1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3
유전자 마커를 하기에서 고찰한다:
MATa 교배 유형 a
gpa1D1163 내생 효모 G-단백질 GPA1이 결실되었다.
gpa1(41)Gαi3 gpa1(41)-Gai3이 효모 게놈에 통합되었다. 상기 키메릭 Ga 단백질은 같은 기원의 N-말단 아미노산이 결실된 포유동물 G-단백질 Gai3에 융합된 내생 효모 Ga 서브유닛 GPA1의 처음 41 개 아미노산으로 구성된다.
far1D1442 FAR1 유전자(세포 주기 정지에 기여함)가 결실되었다(이에 의해 페로몬 반응 경로의 활성 화 시 세포 주기의 정지가 방지된다)
tbt-1 일렉트로포레이션에 의한 고도의 형질전환 효율을 갖는 균주
FUS1-HIS3 FUS1 프로모터와 HIS3 암호화 영역간의 융합(이에 의해 페로몬 유도 가능한 HIS3 유전자가 생성된다)
can1 아르기닌/카나비닌 퍼미아제
ste14::trp1::L YS2 STE14, C-파르네실 메틸트랜스퍼라제의 유전자 붕괴(이에 의해 페로몬 경로를 통한 기본 신호화가 강하된다)
ste3D1156 a 인자 페로몬 수용체(STE3)인 내생 효모 STR이 붕괴된다
lys2 2-아미노아피데이트 리덕타제의 결핍, 효모는 생육에 리신이 필요하다
ura3 오로티딘-5'-포스페이트 데카복실라제의 결핍, 효모는 생육에 우라실이 필요하다
leu2 b-이소프로필말레이트 데하이드로게나제의 결핍, 효모는 생육에 류신이 필요하다
trp1 포스포리보실안트라닐레이트의 결핍, 효모는 생육에 트립토판이 필요하다
his3 이미다졸글리세롤포스페이트 데하이드로게나제의 결핍, 효모는 생육에 히스티딘이 필요하다
2 개의 플라스미드, 즉 플라스미드 p5095(인간 A1아데노신 수용체; 상기 개시됨) 및 플라스미드 p1584(FUS1-β-갈락토시다제 정보제공 유전자 플라스미드)를 일렉트로포레이션에 의해 CY7967로 형질전환시켰다. 플라스미드 p1584를 플라스미드 pRS426(Christianson, T.W. et al. (1992) Gene 110:119-1122)으로부터 유도하였다. 플라스미드 pRS426은 뉴클레오티드 2004-2016에서 폴리링커 부위를 함유한다. 상기 FUS1 프로모터와 β-갈락토시다제 유전자간의 융합을 제한 부위 EagI 및 XhoI에 삽입시켜 플라스미드 p1584를 생성시켰다. 상기 p1584 플라스미드를 Trp 선택(즉 류신 결핍 배지 상에서의 증식)에 의해 유지시켰다.
생성된 p5095 및 p1584 함유 균주(CY12660이라 칭함)는 인간 A1아데노신 수용체를 발현한다. 상기 균주를 액체 또는 한천 플레이트 상에서 증식시키기 위해서, 류신 및 트립토판 결핍 최소 배지를 사용하였다. 플레이트 상에서의 생육 분석(FUS1-HIS3 분석)을 수행하기 위해서, 상기 플레이트들의 pH는 6.8이었으며, 상기 플레이트들은 0.5 내지 2.5 mM 3-아미노-1,2,4-트리아졸을 함유하였고 류신, 트립토판 및 히스티딘이 결핍되었다. 특이성에 대한 대조군으로서, 하나 이상의 다른 효모 기재의 7 개의 막통과 수용체 스크린들에 대한 비교를 모든 실험에 포함시켰다.
인간 A2a아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주의 제작
본 실시예에서, 효모 페로몬 시스템에 기능적으로 통합된 인간 A2a아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주의 제작을 개시한다.
I. 발현 벡터 제작
인간 A2a아데노신 수용체에 대한 효모 발현 벡터를 제작하기 위해서, 인간 A2a 수용체 cDNA를 필 머피 박사(Dr. Phil Murphy, NIH)로부터 수득하였다. 상기 클론의 수령 시, 상기 A2a 수용체 삽입물을 서열화하였으며, 상기는 공개된 서열(GenBank 수탁 #S46950)과 동등한 것으로 밝혀졌다. 상기 수용체 cDNA를 VENT 폴리머라제를 사용하여 PCR에 의해 상기 플라스미드로부터 절단시키고 플라스미드 pLPBX 내로 클로닝시켜, 효모에서 구성적인 포스포글리세레이트 키나제(PGK) 프로모터에 의한 수용체 발현을 구동한다. 상기 전체 삽입물의 서열을 일단 다시서열화하였으며 이는 공개된 서열과 동등한 것으로 밝혀졌다. 그러나, 사용된 클로닝 전략 덕분에 상기 수용체의 카복시 말단에 3 개의 아미노산(GlySerVal)이 붙었다.
II. 효모 균주 제작
인간 A2a 아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주를 생성시키기 위해서, 효모 균주 CY8342를 출발 모 균주로서 사용하였다. CY8342의 유전자형은 하기와 같다:
MATα far1D1442 tbt-1 lys2 ura3 leu2 trp1 his3 can1 ste3D1156 gpaD1163 ste14::trp1::LYS2 gpalp-rGαsE10K(또는 gpalp-rGαsD229S 또는 gpalp-rGEαs10K+D229S)
유전자 마커는 G-단백질 변화를 제외하고 실시예 1에 개시된 바와 같다. 인간 A2a 수용체-발현에 대해서, 내생 효모 G 단백질 GPA1이 결핍되고 포유동물 Gαs가 대체된 효모 균주를 사용하였다. 3 개의 래트 Gαs돌연변이체를 사용하였다. 이들 변체들은 상기를 효모 βγ에 효율적으로 커플링하는 단백질로 전환시키는 하나 또는 2 개의 점 돌연변이를 함유한다. 이들을 GαsE10K(여기에서 10 번 위치의 글루탐산이 리신으로 치환된다), GαsD229S(여기에서 229 번 위치의 아스파르트산이 세린으로 치환된다) 및 GαsE10K+D229S(2 개의 점 돌연변이를 모두 함유한다)로서 식별한다.
균주 CY8342(3 개의 돌연변이체 래트 Gαs단백질들 중 하나를 갖는다)를 모 벡터 pLPBX(수용체-) 또는 pLPBX-A2a(수용체-)로 형질전환시켰다. β-갈락토시다제 암호화 서열(상기 개시되어 있음)에 융합된 FUS1 프로모터를 갖는 플라스미드를 가하여 페로몬 반응 경로의 활성화 크기를 평가하였다.
인간 A1아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주를 사용하는 기능 분석
본 실시예에서, 인간 A1아데노신 수용체의 조절인자에 대한 효모에서의 기능 선별 분석에 대한 전개가 개시되어 있다.
I. 분석에 사용된 리간드
상기 수용체에 대한 천연 작용물질인 아데노신뿐만 아니라 2 개의 다른 합성 작용물질들을 상기 분석의 전개에 사용하였다. 대략 75 nM의 EC50을 갖는 것으로 보고된 아데노신 및 대략 50 nM의 보고된 친화성을 갖는 (-)-N6-(2-페닐이소프로필)-아데노신(PIA)를 하위 실험에 사용하였다. 5'-N-에틸카복스아미도-아데노신(NECA)을 모든 생육 분석에 사용하였다. 생육 배지에서 아데노신의 존재로 인한 신호화를 방지하기 위해서, 아데노신 데아미나제(4U/㎖)를 모든 분석에 가하였다.
II. 효모에서의 생물학적 반응
이종 효모 시스템에서 작용적으로 커플링하는 상기 A1아데노신 수용체의 능력을 상기 A1수용체 발현 벡터(p5095, 상기 개시되어 있음)를 상이한 G 단백질 서브유닛을 발현하는 일련의 효모 균주에 도입시킴으로써 평가하였다. 이들 형질전환체들의 대다수는 Gαi또는 Gαo서브유형의 Gα서브유닛들을 발현하였다. 추가적인 Gα단백질들을 또한 혼잡한 수용체-Gα 단백질 커플링의 가능한 식별에 대해 시험하였다. 다양한 균주들에서, STE18 또는 키메릭 STE18-Gγ2 구조물을 효모의 게놈에 통합시켰다. 상기 효모 균주들은 결함 HIS3 유전자와 FUS1-HIS3의 통합된 사본을 함유하며, 이에 의해 3-아미노-1,2,4-트리아졸(0.2, 0.5 및 1.0 mM에서 시험된 것)을 함유하고 히스티딘이 결핍된 선택 배지를 선택할 수 있었다. 형질전환체들을 단리시키고 3-아미노-1,2,4-트리아졸, 4U/㎖의 아데노신 데아미나제를 함유하고 히스티딘이 결핍된 배지 상에 단층을 제조하였다. 5 ㎕의 다양한 농도의 리간드(예를 들어, 0, 0.1, 1.0 및 10 mM의 NECA)를 적용시켰다. 생육을 2 일간 감시하였다. 리간드-의존성 생육 반응들을 다양한 효모 균주에서 상기 방식으로 시험하였다. 결과를 하기 표 1에 요약한다. 기호 (-)는 리간드-의존성 수용체 활성화가 탐지되지 않음을 가리키는 반면, (+)는 리간드-의존성 반응을 표시한다. "LIRMA"란 용어는 리간드 독립성 수용체 매개된 활성화를 가리킨다.
[표 3]
효모 균주 Gα 서브유닛 Gγ 서브유닛 균주 변이체 결과
GY1316 GPA1 STE18 -
GPA41-Gαi1 +
GPA41-Gαi2 +
GPA41-Gαi3 +
GPA41-Gαi2-Gαo8 LIRMA
GPA41-GαSE10K -
GPA41-GαSD229S -
CY7967 GPA41-Gαi3-통합된 것 STE18 +++
GY2120 GPA1 STE18 +
GPA41-Gαi1 +
GPA41-Gαi2 +
GPA41-Gαi3 +
GPA41-Gαi2-Gαo8 LIRMA
GPA41-GαSE10K -
GPA41-GαSD229S -
GY9438 GPA1 STE18-Gγ2 -
GPA41-Gαi1 +
GPA41-Gαi2 +
GPA41-Gαi3 +
GPA41-Gαi2-Gαo8 LIRMA
GPA41-GαSE10K -
GPA41-GαSD229S -
CY10560 GPA1-통합된 것 STE18-Gγ2 sst2Δ ++
표 3에 나타낸 바와 같이, 대부분의 강한 신호화가 GPA1(41)-Gαi3키메라를 발현하는 효모 균주에서 발생하는 것으로 밝혀졌다.
III. fus1-LacZ 분석
페로몬 반응 경로의 활성화를 보다 충분히 특성화하기 위해서, 작용물질 자극에 대한 반응에서 fus1LacZ를 통한 β-갈락토시다제 합성을 측정하였다. β-갈락토시다제 분석을 수행하기 위해서, 증가하는 농도의 리간드를 Ste18-Gγ2 키메라및 GPA41-Gαi3을 동시 발현하는 효모 균주에서 발현된 인간 A1아데노신 수용체의 중간 로그 배양액에 가하였다. 형질전환체들을 단리시키고 히스티딘 및 4U/㎖의 아데노신 데아미나제의 존재 하에서 밤새 증식시켰다. 4U/㎖의 아데노신 데아미나제와 리간드를 배양한 지 5 시간 후에, β-갈락토사이드에 대한 기질로서 CPRG를 사용하여 β-갈락토시다제의 유도를 측정하였다. 분석 당 5 x 105세포를 사용하였다.
NECA 자극에 대해 수득된 결과는 10-8M의 NECA 농도에서 대략 2 배의 β-갈락토시다제 자극이 성취되었음을 가리킨다. 더욱이, 대략 10 배의 자극 지수는 10-5M의 NECA 농도에서 관찰되었다.
상기 분석의 유용성은 상기 균주에 대한 길항물질의 활성을 확인함으로써 확장되었다. 2 개의 공지된 아데노신 길항물질 XAC와 DPCPX를 β-갈락토시다제 분석에서의 활성에 대해 NECA(5 mM에서)와 경쟁하는 이들의 능력에 대해 시험하였다. 이러한 분석에서, β-갈락토시다제 유도를 기질로서 FDG 및 분석 당 1.6 x 105세포를 사용하여 측정하였다. 결과는 XAC와 DPCPX가 모두 효모 발현된 A1아데노신 수용체의 효능 있는 길항물질로서 작용하며, 이때 IC50값은 각각 44 nM 및 49 nM임을 가리켰다.
상기 억제 효과가 A1서브유형에 대해 특이적인지를 측정하기 위해서, 일련의 상보적인 실험들을 효모 기재 A2a수용체 분석(실시예 4에 개시되어 있음)으로 수행하였다. 상기 A2a효모-기재 분석에 의해 수득된 결과는 XAC가 비교적 효과적인 A2a수용체 길항물질이며, 이는 공개된 보고와 일치함을 가리켰다. 대조적으로, DPCPX는 공개된 보고서로부터 예상하는 바와 같이 상기 수용체에서 비교적 불활성이었다.
IV. 방사성 리간드 결합
A1아데노신 수용체 분석을 상기 수용체의 방사성리간드 결합 변수의 측정에 의해 추가로 특성화시켰다. 다수의 아데노신 수용체 기준 화합물, XAC, DPCPX 및 CGS에 의한 [3H]CPX의 치환 결합을 상기 인간 A1아데노신 수용체를 발현하는 효모로부터 제조된 막을 사용하여 분석하였다. 상기 인간 A1아데노신 수용체를 발현하는 효모 막에 대한 결과를 인간 A2a 아데노신 수용체 또는 인간 A3 수용체를 발현하는 효모 막으로부터의 결과와 비교하여 결합 특이성을 검사하였다. 상기 분석을 수행하기 위해서, 50 ㎎의 막을 0.4 nM [3H]CPX 및 증가하는 농도의 아데노신 수용체 리간드와 함께 배양하였다. 배양은 실온에서 60 분 동안 프로테아제 억제제의 존재 하에 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 1 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0.25% BSA 및 2 U/㎖의 아데노신 데아미나제 중에서 수행하였다. 결합을 빙냉 50 mM 트리스-HCl(pH 7.4) + 10 mM MgCl2의 첨가에 의해 중단시키고, 패카드 96-웰 수확기를 사용하여, 0.5% 폴리에티에니민으로 미리 적신 GF/B 필터 상에서 신속히 여과하였다. 데이터를 프리즘 2.01 소프트웨어를 사용하여 비 선형의 최소 구획 곡선 정합 절차에 의해 분석하였다. 본 실험으로 수득된 IC50값을 하기 표 4에 요약한다.
[표 4]
IC50[nM]
화합물 hAIR hA2aR hA3R
XAC 6.6 11.7 53.1
DPCPX 8.5 326.4 1307.0
CGS-15943 13.1 15.8 55.5
NECA 215.5 294.9 34.9
R-PIA 67.6 678.1 23.6
IB-MECA 727.7 859.4 3.1
알록소진 1072.0 1934.0 8216.0
이들 데이터는 기준 화합물들이 문헌에 보고된 것들과 동일한 친화성을 가짐을 가리킨다. 상기 데이터는 또한 상기 효모-기재 분석이 수용체 서브유형 특이성을 식별하는데 충분한 감도를 가짐을 가리킨다.
인간 A2a 아데노신 수용체를 발현하는 효모 균주를 사용하는 기능 분석
본 실시예에서, 인간 A1아데노신 수용체의 조절인자에 대한 효모에서의 기능 선별 분석에 대한 전개가 개시되어 있다.
I. 분석에 사용된 리간드
천연 리간드 아데노신뿐만 아니라 다른 철처히 특성화되고 상업적으로 입수할 수 있는 리간드를 효모에서 작용적으로 발현되는 인간 A2a 수용체에 대한 연구에 사용하였다. 3 개의 리간드를 상기 분석의 확립에 사용하였다. 이들은 하기와 같다:
리간드 보고된 Ki 기능
아데노신 500 nM 작용물질
5'-N-에틸카복스아미도아데노신(NECA) 10 내지 15 nM 작용물질
(-)-N6-(2-페닐이소프로필)-아데노신(PIA) 100 내지 125 nM 작용물질
생육 배지 중의 아데노신의 존재로 인한 신호화를 방지하기 위해서, 아데노신 데아미나제(4U/㎖)를 모든 분석에 첨가하였다.
II. 효모에서 생물학적 반응
A2a 수용체 작용물질을 A2a 수용체 발현 플라스미드로 형질전환되고 GαsE10K, GαsD229S 또는 GαsE10K+D229S를 발현하는 효모에서 페로몬 반응 경로를 자극하는 능력에 대해 시험하였다. 수용체 의존 방식으로 페로몬 반응 경로를 자극하는 리간드의 능력을 효모 표현형의 변경으로 나타냈다. 수용체 활성화는 상기 표현형을 히스티딘 영양 요구성에서 히스티딘 프로토트로피(fus1-HIS3의 활성화)로 변경시켰다. 3 개의 독립적인 형질전환체들을 단리시키고 히스티딘의 존재 하에서 밤새 증식시켰다. 세포를 세척하여 히스티딘을 제거하고 2 x 106세포/㎖로 희석하였다. 5 ㎕의 각 형질전환체를 4 U/㎖의 아데노신 데아미나제의 존재 또는 부재 하에서 비 선택성 배지(히스티딘 포함) 또는 선택성 배지(1 mM AT) 상에 스폿팅하였다. 플레이트를 30 ℃에서 24 시간 동안 증식시켰다. 히스티딘의 존재 하에서 수용체+(R+) 및 수용체-(R-) 모두가 생육할 수 있었다. 그러나, 히스티딘 부재하에서는 오직 R+세포만이 생육하였다. 이들 플레이트에 리간드가 첨가되지 않았기 때문에 상기 결과에 대해 2 가지 설명이 가능하였다. 한 가지 가능한 해석은 상기 수용체 함유 효모가 리간드 독립성 수용체 매개된 활성화(LIRMA)로 인해 생육이 유리했다는 것이다. 한편으로, 상기 효모는 리간드 아데노신을 합성할 수 있었다. 이들 2 개의 가능성을 구별하기 위해서, 리간드를 분해하는 효소인 아데노신 데아미나제(ADA)를 상기 증식 중인 효모와 플레이트에 첨가하였다. 아데노신 데아미나제의 존재 하에서 R+세포는 히스티딘의 부재 하에 더 이상 생육하지 않았고, 이는 상기 효모가 실제로 리간드를 합성하였음을 가리킨다.
상기 해석을 액체 중에서 A2a 생육 분석에 의해 확인하였다. 이 실험에서 R+효모(A2a 수용체를 발현하는 GαsE10K 균주)를 아데노신 데아미나제(4 U/㎖)의 존재 또는 부재 하에서 3 개의 밀도(1 x 106세포/㎖; 3 x 105세포/㎖; 또는 1 x 105세포/㎖)로 접종하였다. 상기 분석에 대한 엄중성을 HIS3 유전자의 단백질 산물인, 이미다졸글리세롤-P 데하이드라타제의 경쟁적인 길항물질인 3-아미노-1,2,4-트리아졸(AT)의 농도를 증가시켜(0, 0.1, 0.2 또는 0.4 mM) 향상시켰다. 아데노신 데아미나제 및 3-아미노-1,2,4-트리아졸의 존재 하에서 효모는 잘 자라지 못했다. 그러나, 3-아미노-1,2,4-트리아졸의 부재 하에서는 아데노신 데아미나제의 효과가 거의 없었다. 따라서 아데노신 데아미나제 자체는 페로몬 반응 경로에 직접적인영향이 없다.
생육을 측정하고 고도의 작업 처리량 선별을 위해 소형화시킬 수 있는 또 다른 접근법은 A2a 수용체 리간드 스폿 분석이다. A2a 수용체를 발현하거나(A2aR+) 또는 수용체 결핍된(R-) GαsE10K 균주를 히스티딘 및 4U/㎖의 아데노신 데아미나제의 존재 하에서 밤새 생육시켰다. 세포들을 세척하여 히스티딘을 제거하고 5 x 106세포/㎖로 희석하였다. 1 x 106세포를 4U/㎖의 아데노신 데아미나제 및 0.5 또는 1.0 mM 3-아미노-1,2,4-트리아졸(AT)을 함유하는 선택성 플레이트 상에 도말하고 1 시간 동안 건조시켰다. 5 ㎕의 하기의 시약들을 단일 층에 적용시켰다: 10 mM 아데노신, 38.7 mM 히스티딘, 디메틸설폭사이드(DMSO), 10 mM PIA 또는 10 mM NECA. 세포를 30 ℃에서 24 시간 증식시켰다. 결과는 수용체가 없는 세포들은 히스티딘이 배지에 첨가된 경우에만 생육할 수 있었음을 나타낸다. 대조적으로, R+세포는 오직 A2a 수용체 리간드 PIA 및 NECA가 스폿팅된 영역에서만 생육하였다. 상기 플레이트들은 아데노신 데아미나제를 함유하기 때문에, 아데노신이 스폿팅된 플레이트에서의 생육의 결여는 아데노신 데아미나제가 활성임을 입증하였다.
III. fusl LacZ 분석
효모 교배 경로의 활성화를 정량화하기 위해서, fuslLacZ를 통한 β-갈락토시다제의 합성을 측정하였다. GαsE10K, GαsD229S 또는 GαsE10K+D229S를 발현하는 효모 균주들을 인간 A2a 수용체(R+)를 암호화하는 플라스미드 또는 상기 수용체가 결핍된 플라스미드(R-)로 형질전환시켰다. 형질전환체들을 단리시키고 히스티딘 및 4U/㎖의 아데노신 데아미나제의 존재 하에서 밤새 생육시켰다. 1 x 107세포를 1 x 106세포/㎖로 희석하고 증가하는 농도의 NECA에 4 시간 동안 노출시킨 다음, 상기 세포에서 β-갈락토시다제 활성을 측정하였다. 상기 결과는 β-갈락토시다제 활성이 R- 균주에서 필수적으로 탐지되지 않은 반면, 증가량의 β-갈락토시다제 활성은 NECA의 농도가 증가함에 따라 GαsE10K, GαsD229S 또는 GαsE10K+D229S를 발현하는 R+ 균주에서 탐지되었음을 입증하였으며, 이는 β-갈락토시다제 단위의 용량 의존적인 증가가, 증가된 리간드 농도에의 노출에 대한 반응에서 탐지되었음을 가리킨다. 이러한 용량 의존성은 오직 A2a 수용체를 발현하는 세포에서만 관찰되었다. 더욱 또한, A2a 수용체에 대한 가장 효능 있는 Gαs구조물은 GαsE10K이었다. 상기 GαsD229S 구조물은 A2a 수용체에 대해 두 번째로 가장 효능 있는 Gαs구조물인 반면, GαsE10K+D229S 구조물은 시험된 3 개의 Gαs구조물들 중에 효능이 가장 적지만, 상기 GαsE10K+D229S 구조물은 쉽게 탐지할 수 있는 양의 β-갈락토시다제 활성을 자극하였다.
상기 분석들에 대한 추가의 설명에 대해 1998년 6월 2일자로 출원된 "효모에서 아데노신 수용체들의 기능 발현"이란 표제하의 미국 특허 출원 제 09/088985 호(대리인 명부 번호 CPI-093)를 참조하시오. 상기 출원의 전체 내용은 본 발명에 참고로 인용되어 있다.
인간 아데노신 수용체 서브유형들에 대한 약리학적 특성화
물질 및 방법
물질. [3H]-DPCPX[사이클로펜틸-1,3-디프로필크산틴), 8-[디프로필-2,3-3H(N)](120.0 Ci/밀리몰); [3H]-CGS 21680, [카복시에틸-3H(N)](30 Ci/밀리몰) 및 [125I]-AB-MECA([125I]-4-아미노벤질-5'-N-메틸카복스아미드아데노신)(2,200 Ci/밀리몰)을 뉴 잉글랜드 뉴클리어(New England Nuclear, Boston, MA)로부터 구입하였다. XAC(크산틴 아민 동류물); NECA(5'-N-에틸카복스아미도아데노신); 및 IB-MECA를 리써치 바이오케미칼스 인터내셔날(Research Biochemicals International, RBI, Natick, MA)로부터 구입하였다. 아데노신 데아미나제 및 경쟁적인 프로테아제 억제제 칵테일 정제를 베링거 만하임 코포레이션(Boehringer Mannheim Corp. Indianapolis, IN)으로부터 구입하였다. 인간 아데노신 2[RB-HA2a]를 안정하게 발현하는 HEK-293 세포로부터의 막; 아데노신 2b[RB-HA2b] 또는 아데노신 3[RB-HA3] 수용체 서브유형 각각을 리셉터 바이올로지(Receptor Biology, Beltsville, MD)로부터 구입하였다. 세포 배양 시약들을 하이클론(Hyclone, Logan, UT)으로부터의 혈청을 제외하고 라이프 테크놀로지스(Life Technologies, Grand Island, NY)로부터 구입하였다.
효모 균주: 사카로마이세스 세레비지아에 균주 CY12660[farl*1442 tbt1-1 fus1-HIS3 can1 ste14::trp1::LYS2 ste3*1156 gpal(41)-Gαi3 lys2 ura3 leu2 trp1: his3: LEU2 PGKp-Mfα1Leader-hA1R-PHO5term 2mu-orig REP3 Ampr] 및 CY8362[gpalp-rGαsE10K farl*1442 tbt1-1 fus1-HIS3 can1 ste14::trp1::LYS2 ste3*1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3: LEU2 PGKp-hA2aR 2mu-orig REP3 Ampr]를 상기 개시한 바와 같이 발육시켰다.
효모 배양액: 형질전환된 효모를 2% 글루코스가 보충된 Leu-Trp[LT] 배지(pH 5.4)에서 증식시켰다. 막의 제조를 위해서 LT 배지 250 ㎖을 30 ㎖의 밤샘 배양액으로부터 1 내지 2 x 106세포/㎖의 출발 역가로 접종하고 30 ℃에서 회전에 의해 영속적으로 산소 처리하면서 배양하였다. 16 시간 증식시킨 후에, 세포들을 원심분리에 의해 수확하고 막을 하기 개시하는 바와 같이 제조하였다.
포유동물 조직 배양액: 인간 아데노신 2a 수용체 서브유형(Cadus 클론 #5)을 안정하게 발현한 HEX-293 세포를 10% 소의 태아 혈청 및 1x 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 둘베커의 최소 필수 배지(DMEM)에서 선택적인 압력 하에 37 ℃에서 축축한 5% CO2분위기 하에 500 ㎎/㎖의 G418 항생제를 사용하여 증식시켰다.
효모 세포막 제조: 250 ㎖의 배양액을 소르발(Sorvall) RT6000 원심분리기에서 2,000 x g에서 원심분리에 의해 밤새 배양시킨 후에 수확하였다. 세포를 빙냉 수로 세척하고, 4 ℃에서 원심분리시키고, 펠릿을 프로테아제 억제제 칵테일 정제(완충액 25 ㎖ 당 1 정제)가 보충된 10 ㎖의 빙냉 용해 완충액[5 mM 트리스-HCl, pH 7.5; 5 mM EDTA; 및 5 mM ETGA]에 재 현탁시켰다. 유리 비이드(17 g; 메쉬 400 내지 600; 시그마)를 상기 현탁액에 가하고 세포들을 4 ℃에서 5 분간 격렬히 와동시켜 파괴하였다. 상기 균질액을 추가량의 30 ㎖의 용해 완충액 + 프로테아제 억제제로 희석하고 3,000 x g에서 5 분간 원심분리시켰다. 후속적으로, 상기 막들을 36,000 x g(소르발 RC5B, 유형 SS34 로터)에서 45 분간 펠릿화하였다. 생성된 막 펠릿을 프로테아제 억제제 칵테일 정제(완충액 50 ㎖ 당 1 정제)가 보충된 5 ㎖의 막 완충액[5 mM 트리스-HCl, pH 7.5; 0.6 mM EDTA; 및 5 mM MgCl2]에 재 현탁시키고 추가의 실험을 위해 -80 ℃에서 보관하였다.
포유동물 세포막 제조: HEK-293 세포막을 이전에 개시된 바와 같이 제조하였다(Duzic E et al.: J. Biol. Chem., 267, 9844-9851, 1992). 간단히, 세포를 PBS로 세척하고 고무 채집기로 수확하였다. 세포를 4 ℃에서 소르발 RT6000 원심분리기에서 200 x g에서 펠릿화하였다. 상기 펠릿을 4 ℃에서 용해 완충액(5 mM 트리스-HCl, pH 7.5; 5 mM EDTA; 5 mM EGTA; 0.1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 10 ㎎/㎖의 펩스타틴 A; 및 10 ㎎/㎖의 아프로티닌) 5 ㎖/디쉬에 재 현탁시키고 다운스(Dounce) 균질화기에서 균질화시켰다. 이어서 세포 용해물을 36,000 x g(소르발 RC5B, 유형 SS34 로터)에서 45 분간 원심분리시키고 펠릿을 5 ㎖의 막 완충액[5 mM 트리스-HCl, pH 7.5; 0.6 mM EDTA; 5 mM MgCl2; 0.1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 10 ㎎/㎖의 펩스타틴 A; 및 10 ㎎/㎖의 아프로티닌]에 재 현탁시키고 추가의 실험을 위해 -80 ℃에서 보관하였다.
브래드포드 염료-결합 과정(Bradford, M.; Anal. Biochem. 72:248(1976))을 기본으로 하는, 바이오-래드 단백질 분석 키트를 사용하여 효모와 포유동물 막 중의 전체 단백질 농도를 측정하였다.
아데노신 1 수용체 서브유형 포화 및 경쟁적인 방사성리간드 결합: 인간 A1수용체 서브유형으로 형질전환된 효모 세포막 상의 포화 및 경쟁 결합을 방사능 리간드로서 길항물질 [3H] DPCPX를 사용하여 수행하였다. 막을 결합 완충액[50 mM 트리스-HCl, pH 7.4; 10 mM MgCl2; 1.0 mM EDTA; 0.25% BSA; 2 U/㎖의 아데노신 데아미나제 및 하나의 프로테아제 억제제 칵테일 정제/50 ㎖]에서 1.0 ㎎/㎖의 농도로 희석하였다.
포화에서 결합 막(50 ㎍/웰)을 96-웰 미세적정 플레이트에서 10 μM의 비 표지된 XAC의 존재 및 부재 하에 25 ℃에서 1 시간 동안 최종 부피 100 ㎕의 결합 완충액 중의 증가하는 농도의 [3H] DPCPX(0.05 내지 25 nM)와 배양시켰다.
경쟁에서 결합 막(50 ㎍/웰)을 96-웰 미세적정 플레이트에서 10 μM의 비 표지된 XAC 또는 증가하는 농도의 경쟁 화합물의 존재 및 부재 하에 25 ℃에서 1 시간 동안 최종 부피 100 ㎖의 결합 완충액 중의 [3H] DPCPX(1.0 nM)와 배양시켰다.
아데노신 2a 수용체 서브유형 경쟁 방사성리간드 결합: 인간 A2a 수용체 서브유형을 안정하게 발현하는 HEK293 세포의 막에 대한 경쟁 결합을 방사성 리간드로서 작용물질 [3H] CGS-21680을 사용하여 수행하였다. 막을 결합 완충액[50 mM 트리스-HCl, pH 7.4; 10 mM MgCl2; 1.0 mM EDTA; 0.25% BSA; 2 U/㎖의 아데노신 데아미나제 및 하나의 프로테아제 억제제 칵테일 정제/50 ㎖]에서 0.2 ㎎/㎖의 농도로 희석하였다. 막(10 ㎍/웰)을 96-웰 미세적정 플레이트에서 50 μM의 비 표지된 NECA 또는 증가하는 농도의 경쟁 화합물의 존재 및 부재 하에 25 ℃에서 1 시간 동안 최종 부피 100 ㎖의 결합 완충액 중의 [3H] CGS-21680(100 nM)과 배양시켰다.
아데노신 3 수용체 경쟁 방사성리간드 결합: 인간 A3 수용체 서브유형을 안정하게 발현하는 HEK293 세포의 막에 대한 경쟁 결합을 방사성 리간드로서 작용물질 [125I] AB-MECA를 사용하여 수행하였다. 막을 결합 완충액[50 mM 트리스-HCl, pH 7.4; 10 mM MgCl2; 1.0 mM EDTA; 0.25% BSA; 2 U/㎖의 아데노신 데아미나제 및 하나의 프로테아제 억제제 칵테일 정제/50 ㎖]에서 0.2 ㎎/㎖의 농도로 희석하였다. 막(10 ㎍/웰)을 96-웰 미세적정 플레이트에서 10 μM의 비 표지된 IB-MECA 또는 증가하는 농도의 경쟁 화합물의 존재 및 부재 하에 25 ℃에서 1 시간 동안 최종 부피 100 ㎕의 결합 완충액 중의 [125I] AB-MECA(0.75 nM)와 배양시켰다.
배양의 끝에서, A1, A2a및 A3수용체 서브유형 방사성 리간드 결합 분석을 10% MgCl2가 보충된 빙냉 50 mM 트리스-HCl(pH 7.4) 완충액을 첨가하여 종료시키고, 이어서 필터메이트(Filtermate) 196 세포 수확기(Packard) 중에서 앞서 0.5% 폴리에틸렌이민으로 미리 적신 유리 섬유 필터(96-웰 GF/B 유니필터스(Unifilters), Packard) 상에서 신속히 여과하였다. 상기 필터 플레이트를 50 ㎕/웰의 섬광 유체(MicroScint-20, Packard)로 건조 코팅시키고 탑카운트(TopCount)(Packard)에서 카운트하였다. 분석을 3 회 중복 수행하였다. 비 특이적인 결합은 각각 AIR, A2aR 및 A3R 결합 분석에서 전체 결합의 5.6 ± 0.5%, 10.8 ± 1.4% 및 15.1 ± 2.6%였다.
아데노신 2b 수용체 서브유형 경쟁 방사성리간드 결합: 인간 A2b 수용체 서브유형을 안정하게 발현하는 HEK293 세포의 막에 대한 경쟁 결합을 방사성 리간드로서 A1수용체 길항물질 [3H] DPCPX를 사용하여 수행하였다. 막을 결합 완충액[10 mM Hepes-KOH, pH 7.4; 1.0 mM EDTA; 0.1 mM 벤즈아미딘; 및 2 U/㎖의 아데노신 데아미나제]에서 0.3 ㎎/㎖의 농도로 희석하였다. 막(15 ㎍/웰)을 96-웰 미세적정 플레이트에서 10 μM의 비 표지된 XAC 또는 증가하는 농도의 경쟁 화합물의 존재 및 부재 하에 25 ℃에서 1 시간 동안 최종 부피 100 ㎕의 결합 완충액 중의 [3H] DPCPX(15 nM)와 배양시켰다. 배양의 끝에서, 상기 분석을 10 mM Hepes-KOH(pH 7.4) 완충액을 첨가하여 종료시키고, 이어서 필터메이트 196 세포 수확기(Packard) 중에서 앞서 0.5% 폴리에틸렌이민으로 미리 적신 유리 섬유 필터(96-웰 GF/B 유니필터스, Packard) 상에서 신속히 여과하였다. 상기 필터 플레이트를 50 ㎕/웰의 섬광 유체(MicroScint-20, Packard)로 건조 코팅시키고 탑카운트(Packard)에서 카운트하였다. 분석을 3 회 중복 수행하였다. 비 특이적인결합은 전체 결합의 14.3 ± 2.3%였다.
[3H] DPCPX; [3H] CGS-21680 및 [125I] AB-MECA의 특이적 결합을 전체 결합과 비 특이적인 결합간의 차이로서 정의하였다. 화합물의 억제 퍼센트를 전체 결합에 대해 계산하였다. 경쟁 데이터를 1 부위 모델에 대한 반복적인 곡선 정합에 의해 분석하였다. KI값을 그래프패드(GraphPad) 프리즘 2.01 소프트웨어를 사용하여 IC50값으로부터 계산하였다(Cheng and Prusof, Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3109, 1973).
결과
특정 세포 표면 수용체들의 주요 기능은 적합한 리간드들을 인식하는 것이다. 따라서, 본 출원인들은 효모에서 발현된 아데노신 1 수용체 서브유형의 기능 보전을 확립시키기 위해서 리간드 결합 친화성을 측정하였다. 인간 아데노신 1 수용체 서브유형 구조물로 형질전환된 사카로마이세스 세레비지아에로부터 제조된 조 세포막들은 4.0 ± 0.19 nM의 KD를 갖는 [3H] DPCPX의 특이적인 포화 가능한 결합을 나타내었다. 상기 KD및 Bmax값을 상기 포화 등온선으로부터 계산하였으며 상기 데이터의 스캐차드(Scatchard) 형질전환은 단일 부류의 결합 부위들을 가리켰다. 효모 막 제제에서 아데노신 결합 부위들의 밀도는 716.8 ± 43.4 fmol/㎎ 막 단백질로 평가되었다.
인간 A1수용체 서브유형으로 형질전환된 재조합 효모 세포의 약리학적 서브유형 특징을 예상된 랭크 순으로 [3H] DPCPX와 경쟁하는 서브유형 선택적인 아데노신 리간드(XAC, DPCPX; CGS-15943; 화합물 600; 화합물 1002; NECA, (R)-PIA; IB-MECA 및 알록사진)를 사용하여 조사하였다. 이들 화합물에 의해 기록된 치환 곡선은 모든 리간드에 대해 전형적인 기울기를 나타내며, 상기 리간드들 각각에 대한 데이터를 1 부위 정합에 의해 모델링할 수 있다. 상기 곡선으로부터 개별적인 화합물에 대해 추정된 겉보기 해리 상수(표 5)는 다른 출처들로부터 수득된 수용체에 대해 공개된 값과 일치한다.
[표 5]
인간 A1수용체 서브유형에 의해 형질전환된 효모 세포의 세포막에 대한 Ki값
리간드 KI(nM)
XAC 5.5
DPCPX 7.1
CGS-1594 10.8
NECA 179.6
(R)-PIA 56.3
IB-MECA 606.5
알록사진 894.1
화합물 600 13.9
화합물 1002 9.8
표 6 내지 12는 본 발명의 데아자퓨린의 효능과 구조 활성 프로파일을 입증한다. 표 13 및 14는 상기 데아자퓨린 구조에 대한 작용성의 변화에 의해 인간 아데노신 수용체 부위에 대한 선택성을 성취할 수 있음을 입증한다. 표 14는 또한 본 발명에 나열된 화합물들이 표 13의 화합물들에 비해 나노몰 이하의 활성을 가지며 A2b수용체에 대한 선택성이 보다 높다는 놀라운 발견을 입증한다.
[표 6]
N6-치환체의 효과
[표 7]
C2-치환체의 효과
[표 8]
피롤 고리 치환체의 효과
[표 9]
[표 10]
N6-치환체의 효과
[표 11]
N6-치환체의 효과
[표 12]
"레트로-아미드" 동족체
[표 13]
선택적인 아데노신 길항물질들의 프로파일
12-티에닐-2-일;2C5-H;3수용성;4R5및 R6은 수소이다;5R3은 3-플루오로페닐이고;6R3는 3-클로로페닐이고;7R3는 4-피리딜이고;8활성% @ 10 μM.
[표 14]
선택적인 A2b길항물질의 프로파일
[표 15]
아데노신 A1수용체 선택성 화합물
(* 다른 3 개의 서브유형들보다 10 배 이상 더 선택적이다)
페이지 176 내지 201은 A 2a 수용체에 특이적인 화합물에 관한 것이다
발명의 요약
본 발명은 또한 아데노신 A2a수용체에 선택적으로 결합하는 화합물을 기본으로 하며, 이에 의해 환자에게 치료 유효량의 상기와 같은 화합물을 투여함으로써 상기 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료한다. 상기 치료하려는 질병들은 예를 들어 중추 신경계 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 염증성 질환, 위장 장애, 눈 질환, 알레르기성 질환 또는 호흡기 질환과 관련이 있다.
본 발명은 또한 하기 화학식 VI의 화합물을 특징으로 한다:
[화학식 VI]
상기 식에서,
NR1R2는 치환되거나 비 치환된 4 내지 8 원의 고리이고;
Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원의 고리이고;
R4는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기 치환된 알킬은 -C(R8)(R9)XR6이고, 여기에서 X는 O, S 또는 NR7이고, 이때 R8및 R9는 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고, R6및 R7은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R6, R7및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 치환되거나 비 치환된 고리를 형성하고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이나; 단
NR1R2는 3-아세트아미도 피페라디노, 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸, 또는 피롤리디노가 아니고;
NR1R2는 Ar이 4-피리딜인 경우에만 3-하이드록시메틸 피페라디노이다.
본 발명은 또한 세포를 상기 언급한 화합물들과 접촉시킴을 포함하는, 상기세포에서 A2a아데노신 수용체의 활성을 억제시키는 방법을 특징으로 한다.
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 VI]
상기 식에서,
NR1R2는 치환되거나 비 치환된 4 내지 8 원의 고리이고;
Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원의 고리이고;
R4는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기 치환된 알킬은 -C(R8)(R9)XR6이고, 여기에서 X는 O, S 또는 NR7이고, 이때 R8및 R9는 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고, R6및 R7은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R6, R7및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 치환되거나 비 치환된 고리를 형성하고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이나; 단
NR1R2는 3-아세트아미도 피페라디노, 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸, 또는 피롤리디노가 아니고;
NR1R2는 Ar이 4-피리딜인 경우에만 3-하이드록시메틸 피페라디노이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원 고리, 페닐, 피롤, 티오펜, 푸란, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 1,2,4-트리아졸, 피리딘, 2(1H)-피리돈, 4(1H)-피리돈, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이소티아졸, 이속사졸, 옥사졸, 테트라졸, 나프탈렌, 테트랄린, 나프티리딘, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 2,3-디하이드로인돌, 1H-인돌, 인돌린, 벤조피라졸, 1,3-벤조디옥솔, 벤즈옥사졸, 퓨린, 쿠마린, 크로몬, 퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 벤즈이미다졸, 퀴나졸린, 피리도[2,3-b]피라진, 피리도[3,4-b]피라진, 피리도[3,2-c]피리다진, 퓨리도[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸[3,4-d]피리미딘, 프테리딘, 2(1H)-퀴놀론, 1(2H)-이소퀴놀론, 1,4-벤즈이속사진, 벤조티아졸, 퀴녹살린, 퀴놀린-N-옥사이드, 이소퀴놀린-N-옥사이드, 퀴녹살린-N-옥사이드, 퀴나졸린-N-옥사이드, 벤즈옥사진, 프탈라진, 신놀린 또는 하기 화학식을 갖는 화합물이다:
상기 식에서,
Y는 탄소 또는 질소이고;
R3는 H, 치환되거나 비 치환된 알킬, 치환되거나 비 치환된 아릴, 할로겐, 메톡시, 메틸 아미노, 메틸 티오이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 식에서,
m은 1 또는 2이고;
RA및 RB는 각각 독립적으로 H, -OH, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(=O)NH2, 헤테로원자 또는 -C(=O)NR3R3'이고; 여기에서 R3는 아릴, 치환된 아릴, 또는 헤테로아릴이고, R3'는 알킬이거나, 또는 XR3"이고, 이때 X는 O 또는 N이고 R"는 치환된 알킬 또는 아릴이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R1R2N은 (D)-2-아미노카보닐 피롤리디노, (D)-2-하이드록시메틸 피롤리디노, (D)-2-하이드록시메틸-트랜스-4-하이드록시 피롤리디노, 피페라지노 또는 3-하이드록시메틸 피페라디노이다.
상기 화합물에 따른 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 식에서,
m은 0, 1, 2 또는 3이고;
Y는 O, S 또는 NR이고;
R은 RA또는 RB이고;
RA및 RB는 각각 독립적으로 H, -OH, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(=O)NH2, 헤테로원자 또는 -C(=O)NR3R3'이고; 여기에서 R3는 아릴, 치환된 아릴, 또는 헤테로아릴이고, R3'는 알킬이거나, 또는 XR3"이고, 이때 X는 O 또는 N이고 R"는 치환된 알킬 또는 아릴이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1600)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1601)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1602)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1603)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1604)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1605)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1606)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1607)
상기 화합물에 대한 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 추가의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
본 발명은 하기 화학식 V를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 V]
상기 식에서,
R은 H 또는 메틸이다.
상기 화합물 V에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1608)
상기 화합물 V에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
본 발명은 또한 환자에게 치료 유효량의 화합물 IV 또는 V를 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 아데닐레이트 사이클라제를 자극함으로써 상기 질병을 치료한다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 포유동물이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 포유동물은 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 A2a아데노신 수용체는 파킨슨 병, 및 운동 활동, 혈관확장, 혈소판 억제, 호중구 과산화물 생성, 인지 질환 또는 노인성 치매와 관련된 질병들과 관련이 있다.
아데노신 A1, A2a, A2b및 A3수용체들과 관련된 질병들이 WO 99/06053 및 WO-09822465, WO-09705138, WO-09511681, WO-09733879, JP-09291089, PCT/US98/16053및 미국 특허 제 5,516,894 호에 개시되어 있으며, 이들의 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용되어 있다.
본 발명은 또한 화합물 IV 또는 V의 수용성 전구약물을 제공하며; 이때 상기 수용성 전구약물은 생체 내에서 대사되어 활성 약물을 생성시키며, 이는 A2a아데노신 수용체를 선택적으로 억제한다.
상기 전구약물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 전구약물은 생체 내에서 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 대사된다.
본 발명은 또한 상기 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 세포를 화합물 IV 또는 V와 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A2a아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 상기 A2a아데노신 수용체의 길항물질이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 안약 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 전신 제형이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 화합물 IV 또는 V를 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 위장 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 장애는 설사이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 방법에서, 상기 화합물은 A2a아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 화합물 IV 또는 V를 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염 또는 상부 호흡기 질환이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A2a아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 화합물 IV 또는 V를 투여함을 포함하는, 상기 환자의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 손상은 망막 또는 시신경 유두 손상을 포함한다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 손상은 급성 또는 만성이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 손상은 녹내장, 부종, 허혈증, 저산소증 또는 외상의 결과이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A2a아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 치료 유효량의 화합물 IV 또는 V, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 치료 유효량은 파킨슨 병, 및 운동 활동, 혈관확장, 혈소판 억제, 호중구 과산화물 생성, 인지 질환 또는 노인성 치매와 관련된 질병들의 치료에 유효하다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 안약 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 전신 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 외과용 관주액이다.
본 발명은 또한 화합물 IV 및 V, 및 임의의 도파민 강화제를 포함하는 파킨슨병에 대한 복합 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 IV 및 V, 및 임의의 세포독성제를 포함하는 암에 대한 복합 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 IV 및 V, 및 프로스타글란딘 작용물질, 무스크린 작용물질 또는 b-2 길항물질을 포함하는, 녹내장에 대한 복합 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 (a) 치료 유효량의 화합물 IV 또는 V를 보유하는 용기; 및 (b) 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화합물 IV의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을 NHR1R2로 처리하여를 제공하는 단계
(상기에서,
NR1R2는 치환되거나 비 치환된 4 내지 8 원의 고리이고;
Ar은 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원의 고리이고;
R4는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기 치환된 알킬은 -C(R8)(R9)XR6이고, 여기에서 X는 O, S 또는 NR7이고, 이때 R8및 R9는 각각 독립적으로 H 또는 알킬이고, R6및 R7은 각각 독립적으로 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R6, R7및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 치환되거나 비 치환된 고리를 형성하고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이나; 단
NR1R2는 3-아세트아미도 피페라디노, 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸, 또는 피롤리디노가 아니고;
NR1R2는 Ar이 4-피리딜인 경우에만 3-하이드록시메틸 피페라디노이다).
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화합물 V의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을 먼저 디메틸아민과 포름알데히드로 처리하고, 이어서 N-메틸 벤질아민으로 처리하고, 마지막으로 NH2R1으로 처리하여를 제공하는 단계
(상기에서, R1은 아세트아미도 에틸이고; Ar은 4-피리딜이고; R은 H 또는 메틸이고; R5는 N-메틸-N-벤질 아미노메틸이다).
본 발명에 사용된 "화합물이 A2a선택적이다"는 화합물이 아데노신 A1, A2b또는 A3에 비해 5 배 이상 높은 아데노신 A2a수용체에 대한 결합 상수를 가짐을 의미한다.
본 발명을 하기의 실시예들로 추가로 예시하며, 이들 실시예는 결코 추가적인 제한으로서 해석해서는 안 된다. 배경 기술에서 참고로 한 것들을 포함하여, 본 원 전체를 통해 인용된, 모든 참고문헌, 계류중인 특허 출원 및 공개된 특허 출원들의 내용은 본 발명에 참고로 인용된다. 실시예 전체를 통해 사용된 모델들은 승인된 모델들이며, 이들 모델에서의 효능의 입증은 인간에 대한 효능의 예견임은 물론이다.
본 발명을 하기 실험에 대한 상세한 설명으로부터 보다 잘 이해할 것이다. 그러나, 당해 분야의 숙련가는 논의된 특정한 방법 및 결과들이 이 후에 이어지는 청구의 범위에서 보다 충분히 개시되는 바와 같이 본 발명을 단지 예시하는 것임을 쉽게 알 것이다.
실시예 22: 아데노신 A2a길항물질인 화합물 1601, 1602 및 1603의 합성
화합물 26(10.93 g, 50.76 밀리몰)을 DMF(67 ㎖)에 용해시켰다. 4-아미디노피리딘 하이드로클로라이드(8.0 g, 50.76 밀리몰) 및 DBU(15.4 g, 101.5 밀리몰)를 연속적으로 첨가하고 반응물을 85 ℃로 가열하였다. 22 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 DMF를 진공 하에서 제거하였다. 짙은 색 오일을 2M HCl(80 ㎖)로 희석하였다. 반응물을 정치시켰다. 2 시간 후에, 상기 용액을 10 ℃로 냉각시키고 여과하였다. 상기 고체를 냉수로 세척하고 건조시켜 황색 고체인 화합물 27의 7.40 g(69%)을 수득하였다.1H-NMR(200 MHz, d6-DMSO) d 6.58(s, 1H), 7.27(s, 1H), 8.53(d, 2H, J=5.6), 9.00(d, 2H, J=5.2Hz), 12.35(brs, 1H). MS(ES): 212.8(M++1).
화합물 27(7.4 밀리몰, 29.8 밀리몰)을 POCl3로 희석하고 105 ℃로 가열하였다. 18 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 POCl3를 진공 하에서 제거하였다. 농후한 짙은 색 오일을 MeOH(75 ㎖)에 이어서 에테르(120 ㎖)로 희석한다. 비 결정성 적색 고체를 여과하고 에테르로 세척하여 적색 고체 3.82 g을 수득한다. 조 고체 화합물 28은 대략적으로 80% 순수하며, 다음 반응에 추가의 정제 없이 사용한다.1H-NMR(200 MHz, d6-DMSO) d 6.58(s, 1H), 7.27(s, 1H), 8.53(d, 2H, J=5.6), 9.00(d, 2H, J=5.2Hz), 12.35(brs, 1H). MS(ES): 212.8(M++1).
화합물 1601:
DMSO(5 ㎖) 및 D-프롤리놀(500 ㎎, 4.94 밀리몰)을 화합물 28(500 ㎎, 2.17 밀리몰)에 가하였다. 반응물을 120 ℃로 가열하였다. 18 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc 및 H2O로 희석하였다. 층들을 분리시키고 수성 층을 EtOAc(2x)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 H2O(2x), 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 갈색 고체 200 ㎎을 수득하였다. 상기 고체를 EtOAc로부터 재 결정시켜 갈색 고체 82 ㎎(13%)을 수득하였다.1H-NMR(200 MHz, d6-DMSO) d 2.05(m, 4H), 3.43(m, 1H), 3.70-4.00(m, 3H), 4.50(brs, 1H), 4.92(brs, 1H), 6.62(m, 1H), 7.22(m, 1H), 8.22(d, 2H, J=6.0Hz), 6.64(d, 2H, J=6.2Hz), MS(ES): 296.0(M++1), mp=210-220 ℃(분해).
화합물 1602.
크로마토그래피(실리카, 9:1 CHCl3/MeOH)에 의해 갈색 고체 10 ㎎(2%)을 수득하였다.1H-NMR(d6-DMSO) d 2.00-2.50(m, 4H), 4.05(m, 1H), 4.21(m, 1H), 6.71(d, 1H, J=3.2Hz), 7.18(d, 1H, J=3.2Hz), 8.37(d, 2H, J=4.8Hz), 8.56(d, 2H,J=5.0Hz). MS(ES): 309.1(M++1).
화합물 1603.
크로마토그래피(실리카, 20:1 헥산/EtOAc)에 의해 갈색 고체 135 ㎎(53%)을 수득하였다.1H-NMR(d6-DMSO) d 2.00(m, 4H), 3.43(brs, 1H), 3.74(brs, 2H), 3.87(brs, 1H), 4.49(brs, 1H), 4.93(m, 1H), 6.56(m, 1H), 7.12(m, 1H), 7.40(m, 3H), 8.34(m, 2H), 11.62(brs, 1H). MS(ES): 295.1(M++1).
화합물 1605.
50 ㎖의 RBF에 60 ㎎의 2-(4'-피리딜)-4-클로로피리미디노피롤 HCl 염을 2 ㎖의 무수 DMSO에 용해시켰다. 여기에 3-(R)-하이드로-(D)-프롤리놀 TFA 염(380 ㎎)을 가하였다. 이어서 상기 혼합물을 질소 기체로 5 분간 플래시시키고 130 ℃로 가열하였다. 2 시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고 DMSO를 진공 하에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc(15 ㎖)와 포화된 중탄산 나트륨 수용액(15 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 분리하고 염수(15 ㎖)로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시켰다. 용매를 제거한 후에, 조 생성물을 예비 TLC(CH2Cl2/MeOH=95/5)에 의해 정제시켜 35 ㎎(50%)을 수득하였다.1H-NMR(200 MHz, CDCl3) 2.3-2.5(1H), 3.4-3.8(3H), 4.4-4.6(2H), 6.4(1H); 7.1(1H); 8.2(d, 2H); 8.7(d, 2H); 11.0(1H). MS(ES): 312(M++1).
실시예 23: 아데노신 A2a길항물질인 화합물 1606의 합성
화합물 28(200 ㎎)을 DMF(30 ㎖), (-)-디메틸글리신 메틸 에스테르(물 2 ㎖ 중의 73 ㎎ HCl 염) 및 중탄산 나트륨 500 ㎎으로 처리하였다. 18 시간 후에, 상기 DMF를 진공 하에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc(30 ㎖)와 포화된 중탄산 나트륨 수용액(15 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수(15 ㎖)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크로마토그래피(실리카, 10:4 헥산/EtOAc)시켜 순수한 생성물, 화합물 29 150 ㎎(69%)을 수득하였다.1H-NMR(200 MHz, CDCl3) 1.4(s, 6H), 3.8(s, 3H); 3.9(s, 2H); 6.4(s, 1H); 7.4-7.5(m, 3H); 8.4(m, 2H); 9.8(s, 1H).
화합물 1606.
과정은 화합물 1605와 동일하다(72%).1H-NMR(200 MHz, CDCl3) 1.3(s, 6H), 1.7-1.9(m, 2H); 2.05-2.30(m, 2H); 3.6-4.1(m, 11H); 4.80-4.95(m, 1H); 6.4(s, 1H); 7.4-7.6(m, 3H); 8.3-8.4(d, J=8.5Hz, 2H), 10(s, 1H), MS(ES): 424.0(M++1).
하기의 화합물들을 동일한 방식으로 합성할 수 있다.
화합물 1600: (51%). MS(ES): 326.0(M++1).
화합물 1607:
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.40-1.80(m, 5H), 2.80-3.50(m, 3H), 4.60-4.80(m, 3H), 6.66(d, 1H, J=6.2Hz), 7.26(m, 1H), 8.21(d, 2H, J=6.3Hz), 8.65(d, 2H, J=5.8Hz), 11.90(s, 1H); MS(ES): 310.1(M++1).
화합물 1608:
1H NMR(200 MHz, d6-DMSO) δ 1.75(s, 3H), 2.11(s, 3H), 2.29(s, 3H), 3.56(m, 6H), 7.23-7.41(m, 5H), 8.00(brs, 1H), 8.23(d, 2H, J=6.0Hz), 8.63(d, 2H, J=5.4Hz), 8.82(brs, 1H), 11.56(brs, 1H); MS(ES): 444.0(M++1).
화합물 1604:
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 3.40(m, 4H), 4.29(m, 4H), 6.99(s, 1H), 7.5-7.2(m, 3H), 7.90(d, 2H), 8.39(d, 2H), 8.61(d, 2H), MS(ES): 357.0(M++1).
[표 16]
아데노신 A2a수용체 선택성 화합물
(* 다른 3 개의 서브유형들보다 5 배 이상 더 선택적이다)
페이지 202 내지 256은 A 3 수용체에 특이적인 화합물에 관한 것이다
발명의 요약
본 발명은 또한 아데노신 A3수용체에 선택적으로 결합하는 화합물을 기본으로 하며, 이에 의해 환자에게 치료 유효량의 상기와 같은 화합물을 투여함으로써 상기 환자에서 A3아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료한다. 상기 치료하려는 질병들은 예를 들어 천식, 과민증, 비염, 건초열, 혈청병, 알레르기성 혈관염, 아토피성 피부염, 피부염, 건선, 습진, 특발성 폐 섬유증, 호산구성 담낭염, 만성 기도 염증, 과호산구 증후군, 호산구성 위장염, 부종, 두드러기, 호산구성 심근 질병, 호산구 증가증에 의한 에피소드성 혈관부종, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 알레르기성 육아종증, 암종증, 호산구성 육아종, 가계성 조직구증, 고혈압, 비만 세포 탈과립, 종양, 심장 저산소증, 대뇌 허혈, 이뇨, 신부전, 신경 질환, 정신 질환, 인지 질환, 심근 허혈, 기관지수축, 관절염, 자가면역 질환, 크론병, 그레이브병, 당뇨병, 다발성 경화증, 빈혈, 건선, 출산 질환, 홍반성 루프스, 재 관류 손상, 뇌 소동맥 직경, 알레르기성 매개체의 방출, 경피증, 발작, 전체적인 허혈, 중추 신경계 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 염증 질환, 위장 장애, 눈 질환, 알레르기성 질환, 호흡기 질환 또는 면역학적 질환과 관련이 있다.
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 특징으로 한다:
상기 식에서,
R1은 H이고,
R2는 사이클로프로필 메틸아미노 카보닐에틸, 시스-3-하이드록시 사이클로펜틸, 아세트아미도 부틸, 메틸아미노 카보닐아미노 부틸, 에틸아미노 카보닐아미노 프로필, 메틸아미노 카보닐아미노 프로필, 2-아세틸 아미노-3-메틸 부틸, N,N-디에틸아미노 카보닐아미노 에틸, 티오아세트아미도 에틸, 3-아미노 아세틸옥시 사이클로펜틸, 3-하이드록시 사이클로펜틸, 2-피롤릴 카보닐 아미노에틸, 2-이미다졸리디논 에틸, 1-아미노카보닐-2-메틸 프로필, 1-아미노카보닐-2-페닐 에틸, 3-하이드록시 아제티디노, 2-이미다졸릴 에틸, 아세트아미도 에틸, 1-(R)-페닐-2-하이드록시에틸, N-메틸아미노카보닐 피리딜-2-메틸이거나, 또는
R1, R2및 질소가 함께 3-아세트아미도 피페라디노, 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸 피롤리디노, 또는 3-하이드록시메틸 피페라디노이고;
R3는 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원 고리, 피롤, 티오펜, 푸란, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 1,2,4-트리아졸, 피리딘, 2(1H)-피리돈, 4(1H)-피리돈, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이소티아졸, 이속사졸, 옥사졸, 테트라졸, 나프탈렌, 테트랄린, 나프티리딘, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 2,3-디하이드로인돌, 1H-인돌, 인돌린, 벤조피라졸, 1,3-벤조디옥솔, 벤즈옥사졸, 퓨린, 쿠마린, 크로몬, 퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 벤즈이미다졸, 퀴나졸린, 피리도[2,3-b]피라진, 피리도[3,4-b]피라진, 피리도[3,2-c]피리다진, 퓨리도[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸[3,4-d]피리미딘, 프테리딘, 2(1H)-퀴놀론, 1(2H)-이소퀴놀론, 1,4-벤즈이속사진, 벤조티아졸, 퀴녹살린, 퀴놀린-N-옥사이드, 이소퀴놀린-N-옥사이드, 퀴녹살린-N-옥사이드, 퀴나졸린-N-옥사이드, 벤즈옥사진, 프탈라진, 또는 신놀린이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 또는 치환된 아릴이다.
본 발명은 또한 세포를 상기 언급한 화합물과 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
본 발명의 데아자퓨린 중간체의 제조를 위한 전형적인 합성 반응식이 하기 반응식 I에 개략되어 있다.
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화합물 IV의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을 NHR1R2로 처리하여를 제공하는 단계
(상기에서,
R1은 H이고,
R2는 사이클로프로필 메틸아미노 카보닐에틸, 시스-3-하이드록시 사이클로펜틸, 아세트아미도 부틸, 메틸아미노 카보닐아미노 부틸, 에틸아미노 카보닐아미노 프로필, 메틸아미노 카보닐아미노 프로필, 2-아세틸 아미노-3-메틸 부틸, N,N-디에틸아미노 카보닐아미노 에틸, 티오아세트아미도 에틸, 3-아미노 아세틸옥시 사이클로펜틸, 3-하이드록시 사이클로펜틸, 2-피롤릴 카보닐 아미노에틸, 2-이미다졸리디논 에틸, 1-아미노카보닐-2-메틸 프로필, 1-아미노카보닐-2-페닐 에틸, 3-하이드록시 아제티디노, 2-이미다졸릴 에틸, 아세트아미도 에틸, 1-(R)-페닐-2-하이드록시에틸, N-메틸아미노카보닐 피리딜-2-메틸이거나, 또는
R1, R2및 질소가 함께 3-아세트아미도 피페라디노, 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸 피롤리디노, 또는 3-하이드록시메틸 피페라디노이고;
R3는 치환되거나 비 치환된 4 내지 6 원 고리이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 또는 치환된 아릴이다).
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화합물 V의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을 NH2CH2(CH2)mCHNHC(=O)R1로 처리하여를 제공하는 단계
(상기에서,
m은 0, 1 또는 2이고;
R1은 사이클로프로필 메틸, 메틸, 메틸아미노 또는 아미노메틸이고;
R2는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기 치환된 알킬은 -C(R9)(R10)NR7R9이고, 여기에서 R9및 R10은 각각 H 또는 알킬이고, R7및 R8은 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R7, R8및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 고리시스템을 형성한다).
본 발명은 또한 하기의 단계들을 포함하는, 화합물 VI의 제조 방법을 제공한다:
a)과를 반응시켜를 제공하는 단계(이때 P는 제거 가능한 보호 그룹이다);
b) 단계 a)의 생성물을 환화 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계;
c) 단계 b)의 생성물을 적합한 조건 하에서 처리하여를 제공하는 단계; 및
d) 단계 c)의 염소화된 생성물을로 처리하여를 제공하는 단계
(상기에서,
R2는 비 치환된 아릴이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기치환된 알킬은 -C(R9)(R10)NR7R9이고, 여기에서 R9및 R10은 각각 H 또는 알킬이고, R7및 R8은 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R7, R8및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 고리시스템을 형성한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 IV를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 IV]
상기 식에서,
R1은 H이고,
R2는 사이클로프로필 메틸아미노 카보닐에틸, 시스-3-하이드록시 사이클로펜틸, 아세트아미도 부틸, 메틸아미노 카보닐아미노 부틸, 에틸아미노 카보닐아미노 프로필, 메틸아미노 카보닐아미노 프로필, 2-아세틸 아미노-3-메틸 부틸, N,N-디에틸아미노 카보닐아미노 에틸, 티오아세트아미도 에틸, 3-아미노 아세틸옥시 사이클로펜틸, 3-하이드록시 사이클로펜틸, 2-피롤릴 카보닐 아미노에틸, 2-이미다졸리디논 에틸, 1-아미노카보닐-2-메틸 프로필, 1-아미노카보닐-2-페닐 에틸, 3-하이드록시 아제티디노, 2-이미다졸릴 에틸, 아세트아미도 에틸, 1-(R)-페닐-2-하이드록시에틸, N-메틸아미노카보닐 피리딜-2-메틸이거나, 또는
R1, R2및 질소가 함께 3-아세트아미도 피페라디노, 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸 피롤리디노, 또는 3-하이드록시메틸 피페라디노이고;
R3는 치환되거나 비 치환된 벤젠, 피롤, 티오펜, 푸란, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 1,2,4-트리아졸, 피리딘, 2(1H)-피리돈, 4(1H)-피리돈, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 이소티아졸, 이속사졸, 옥사졸, 테트라졸, 나프탈렌, 테트랄린, 나프티리딘, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 2,3-디하이드로인돌, 1H-인돌, 인돌린, 벤조피라졸, 1,3-벤조디옥솔, 벤즈옥사졸, 퓨린, 쿠마린, 크로몬, 퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 벤즈이미다졸, 퀴나졸린, 피리도[2,3-b]피라진, 피리도[3,4-b]피라진, 피리도[3,2-c]피리다진, 퓨리도[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸[3,4-d]피리미딘, 프테리딘, 2(1H)-퀴놀론, 1(2H)-이소퀴놀론, 1,4-벤즈이속사진, 벤조티아졸, 퀴녹살린, 퀴놀린-N-옥사이드, 이소퀴놀린-N-옥사이드, 퀴녹살린-N-옥사이드, 퀴나졸린-N-옥사이드, 벤즈옥사진, 프탈라진, 또는 신놀린이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 또는 치환된 아릴이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R3는 페닐이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R5는 수소 또는 메틸이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, R6은 수소, 메틸, 페닐, 3-클로로페닐옥시 메틸, 또는 트랜스-2-페닐아미노 메틸 피롤리디노 메틸이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 V를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 V]
상기 식에서,
m은 0, 1 또는 2이고;
R1은 사이클로프로필 메틸, 메틸, 메틸아미노 또는 아미노메틸이고;
R2는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기 치환된 알킬은 -C(R9)(R10)NR7R9이고, 여기에서 R9및 R10은 각각 H 또는 알킬이고, R7및 R8은 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R7, R8및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 고리시스템을 형성한다
상기 화합물 V에 대한 하나의 실시태양에서, m은 0이고 R2는 페닐이다.
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, m은 1이고 R2는 페닐이다.
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, m은 2이고 R2는 페닐이다.
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, R5및 R6은 메틸이다.
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, R5및 R6은 메틸이다.
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, R5및 R6은 메틸이다.
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1316)
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1311)
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1202)
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1310)
상기 화합물 V에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1312)
본 발명은 또한 하기의 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
(화합물 609)
본 발명은 또한 하기 화학식 VI를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 VI]
상기 식에서,
R2는 비 치환된 아릴이고;
R5는 H, 알킬, 치환된 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R6은 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 아릴알킬, 아미노, 치환된 아릴이고, 이때 상기 치환된 알킬은 -C(R9)(R10)NR7R8이고, 여기에서 R9및 R10은 각각 H 또는 알킬이고, R7및 R8은 각각 알킬 또는 사이클로알킬이거나, 또는 R7, R8및 질소 원자가 함께 4 내지 7 원의 고리시스템을 형성한다.
상기 화합물 VI에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1309)
상기 화합물 1309에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물 1309에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
본 발명은 또한 하기 화학식 VII를 갖는 화합물을 제공한다.
[화학식 VII]
상기 식에서,
R1은 3-하이드록시 사이클로펜틸 에틸아미노 카보닐아미노 프로필, N,N-디에틸아미노 카보닐아미노 에틸, 티오아세트아미도에틸, 3-아미노아세틸옥시 사이클로펜틸, 3-하이드록시사이클로펜틸, 2-피롤릴 카보닐 아미노에틸, 2-이미다졸리디논에틸, 1-아미노카보닐-2-메틸 프로필, 1-아미노카보닐-2-페닐 에틸, 3-하이드록시 아제티디노, 2-이미다졸릴 에틸, 아세트아미도 에틸, 1-(R)-페닐-2-하이드록시에틸, 또는 메틸아미노카보닐 피리딜-2-메틸이고;
R3및 R4는 독립적으로 H, 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 아릴이다.
상기 화합물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1700)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1701)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1702)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1704)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1705)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1706)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1707)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1708)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1709)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1710)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1712)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1713)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1714)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1715)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
본 발명은 또한 하기 화학식 VIII를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 VIII]
상기 식에서,
R1, R2및 질소는 함께 3-하이드록시 피롤리디노, 3-메틸옥시 카보닐메틸 피롤리디노, 3-아미노카보닐메틸 피롤리디노 또는 3-하이드록시메틸 피페라디노이고;
R3및 R4는 독립적으로 H, 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 아릴이다.
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1711)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1703)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1716)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
(화합물 1717)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
(화합물 1718)
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을 갖는다:
상기 화합물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 하기의 화학식을갖는다:
본 발명은 또한 환자에게 치료 유효량의 임의의 화학식 IV, V, VI, VII 또는 VIII의 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 A3아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 환자는 포유동물이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 포유동물은 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 A3아데노신 수용체는 중추 신경계 질환, 심혈관 질환, 천식, 과민증, 비염, 건초열, 혈청병, 알레르기성 혈관염, 아토피성 피부염, 피부염, 건선, 습진, 특발성 폐 섬유증, 호산구성 담낭염, 만성 기도 염증, 과호산구 증후군, 호산구성 위장염, 부종, 두드러기, 호산구성 심근 질병, 호산구 증가증에 의한 에피소드성 혈관부종, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 알레르기성 육아종증, 암종증, 호산구성 육아종, 가계성 조직구증, 고혈압, 비만 세포 탈과립, 종양, 심장 저산소증, 대뇌 허혈, 이뇨, 신부전, 신경 질환, 정신 질환, 인지 질환, 심근 허혈, 기관지수축, 관절염, 자가면역 질환, 크론병, 그레이브병, 당뇨병, 다발성 경화증, 빈혈, 건선, 출산 질환, 홍반성 루프스, 재 관류 손상, 뇌 소동맥 직경, 알레르기성 매개체의 방출, 경피증, 발작, 전체적인 허혈, 중추 신경계 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 염증 질환, 위장 장애, 눈 질환, 알레르기성 질환, 호흡기 질환 또는 면역학적 질환과 관련이 있다.
아데노신 A1, A2a, A2b및 A3수용체와 관련된 질병들이 WO 99/06053 및 WO 09822465, WO 09705138, WO 09511681, WO 09733879, JP-09291089, PCT/US98/16053, 및 미국 특허 제 5,516,894 호에 개시되어 있으며, 이들은 본 발명에 참고로 인용되어 있다.
본 발명은 또한 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII의 수용성 전구약물을 제공하며, 여기에서 상기 수용성 전구약물은 생체 내에서 활성 약물로 대사되어 A3아데노신 수용체를 선택적으로 억제한다.
상기 전구약물에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 전구약물은 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 생체 내에서 대사된다.
본 발명은 또한 상기 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 세포를 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII와 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 화합물은 상기 A3아데노신 수용체의 길항물질이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 안약 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 전신 제형이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII를 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 위장 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 질환은 설사이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A3아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII를 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염 또는 상부 호흡기 질환이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A3아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 환자에게 유효량의 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII를 투여함을 포함하는, 상기 환자의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 대한 하나의 실시태양에서, 상기 손상은 망막 또는 시신경 유두 손상이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 손상은 급성 또는 만성이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 손상은 녹내장, 부종, 허혈, 저산소증 또는 외상의 결과이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 환자는 인간이다.
상기 방법에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 화합물은 A3아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 치료 유효량의 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 치료 유효량은 호흡기 질환 또는 위장 장애를 치료하는데 유효하다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 위장 장애는 설사이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 비염, 또는 만성 폐쇄성 폐 질환이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 안약 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형이다.
상기 약학 조성물에 대한 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 전신 제형이다.
상기 약학 제제에 대한 추가의 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 수술용 관주액이다.
본 발명은 또한 (a) 치료 유효량의 임의의 화합물 IV, V, VI, VII 또는 VIII을 보유하는 용기; 및 (b) 환자에서 A3아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "화합물이 A3선택성이다"란 화합물이 아데노신 A1, A2a또는 A2b에 대한 결합 상수보다 아데노신 A1수용체에 대한 결합 상수가 10 배 이상임을 의미한다.
본 발명을 하기의 실시예들로 추가로 예시하며, 이들 실시예는 결코 추가적인 제한으로서 해석해서는 안된다. 배경 기술에서 참고로 한 것들을 포함하여, 본 원 전체를 통해 인용된, 모든 참고문헌, 계류중인 특허 출원 및 공개된 특허 출원들의 내용은 본 발명에 참고로 인용된다. 실시예 전체를 통해 사용된 모델들은승인된 모델들이며, 이들 모델에서의 효능의 입증은 인간에 대한 효능의 예견임은 물론이다.
숙련가는 환자에서 본 발명에 개시된 화합물들의 대사에 의해 약물로서 작용할 수 있는 특정의 생물학적으로 활성인 대사산물들이 생성됨을 알 것이다.
본 발명을 하기 실험에 대한 상세한 설명으로부터 보다 잘 이해할 것이다. 그러나, 당해 분야의 숙련가는 논의된 특정한 방법 및 결과들이 이 후에 이어지는 청구의 범위에서 보다 충분히 개시되는 바와 같이 본 발명을 단지 예시하는 것임을 쉽게 알 것이다.
실시예 24: 아데노신 A3길항물질 실험
화합물 1700(하기 표 17): MS(ES): 366.1(M++1).
화합물 1710(하기 표 17): MS(ES): 381.1(M++1).
화합물 1316(하기 표 17): MS(ES): 353.2(M++1).
화합물 1703(하기 표 17): MS(ES): 357.1(M++1).
화합물 1719(하기 표 17):
1H NMR(200 MHz, d6-DMSO) δ 1.75(m, 2H), 3.11(m, 2H), 3.35(s, 3H), 3.59(m, 2H), 5.72(m, 1H), 5.96(m, 1H), 6.55(s, 1H), 7.15(s, 1H), 7.49(m, 2H),8.32(m, 2H).
화합물 1704(하기 표 17): MS(ES): 367.0(M++1).
화합물 1706(하기 표 17):
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.22(m, 2H), 1.60-2.40(m, 4H), 4.53(m, 1H), 4.94(m, 1H), 5.70(d, 1H, J=8.2Hz), 6.35(d, 1H, J=2.8Hz), 6.97(d, 1H, J=2.0Hz), 7.50(m, 3H), 8.40(m, 2H), 10.83(brs, 1H).
화합물 1707(하기 표 17): MS(ES): 347.0(M++1).
화합물 1708(하기 표 17): MS(ES): 399.0(M++1).
화합물 1709(하기 표 17): MS(ES): 385.9(M++1).
화합물 1710(하기 표 17): MS(ES): 434.0(M++1).
화합물 1711(하기 표 17):
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 3.95(d, 2H, J=5.8Hz), 4.23-4.31(m, 2H), 4.53(t, 2H, J=8.8Hz), 6.30(d, 1H, J=3.0Hz), 6.98(d, 1H, J=3.0Hz), 7.45-7.48(m, 3H), 7.83-8.42(m, 2H), 9.70(brs, 1H), MS(ES): 281.1(M++1).
OSIC-1483131H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 3.02(m, 2H), 3.92(m, 2H), 5.09(2, 2H), 6.53(s, 1H), 6.90-7.04(brs, 1H), 6.92(m, 2H), 7.02(m, 1H), 7.21(dd, 1H,J=8.2Hz), 7.40(m, 3H), 7.50-7.80(brs, 1H), 8.33(m, 2H), MS(ES): 445.1(M++1).
화합물 1713(하기 표 17):
1H NMR(200 MHz, CDCl3) δ 1.65-1.80(m, 7H), 1.88-2.00(m, 1H), 2.10-2.40(m, 1H), 2.70-3.05(m, 3H), 3.09-3.14(m, 2H), 3.16-3.38(m, 1H), 3.45(d, 1H, J=14Hz), 3.53-3.60(m, 2H), 3.84-3.92(m, 2H), 3.97(d, 1H, J=14Hz), 5.55(t, 1H, J=5.8Hz), 6.17(s, 1H), 6.55-6.59(m, 2H), 6.64-6.71(m, 1H), 7.11-7.19(m, 2H), 7.43-7.46(m, 3H), 8.38-8.42(m, 2H), MS(ES): 484.0(M++1).
화합물 1714(하기 표 17): MS(ES): 471.0(M++1).
화합물 1715(하기 표 17): MS(ES): 505.0(M++1).
화합물 1716(하기 표 17): .
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 1.65(m, 1H), 2.18(m, 1H), 2.49(brd, 2H, J=6.2Hz), 2.64(m, 1H), 3.38(m, 1H), 3.69(s, 3H), 3.72(m, 1H), 3.93(m, 1H), 4.10(m, 1H), 5.06(2, 2H), 6.58(s, 1H), 6.92(m, 2H), 7.02(m, 1H), 7.23(dd, 1H, J=8.1Hz), 7.39(m, 3H), 8.32(m, 2H). MS(ES): 477.1(M++1).
화합물 1717(하기 표 17):
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 1.69(m, 1H), 2.26(m, 1H), 2.42(d, 2H,J=7.4Hz), 2.72(m, 1H), 3.53(m, 1H), 3.83(m, 1H), 4.02(m, 1H), 4.14(dd, 1H, J=10.6, 7.0Hz), 5.14(2, 2H), 6.69(s, 1H), 6.96(m, 2H), 7.06(m, 1H), 7.25(dd, 1H, J=8.0Hz), 7.39(m, 3H), 8.35(m, 2H). MS(ES): 462.2(M++1).
화합물 1718(하기 표 17): .
1H NMR(200 MHz, CD3OD) δ 1.40-2.00(m, 5H), 3.52(d, 2H, 7.6Hz), 3.80-4.00(m, 1H), 4.00-4.20(m, 3H), 4.50(m, 2H), 6.36-6.50(m, 2H), 6.54(s, 1H), 6.84-6.92(m, 1H), 7.05(t, 1H, J=8.2Hz), 7.30-7.45(m, 3H), 8.24(d, 2H, J=9.8Hz), MS(ES): 449.0(M++1).
[표 17]
아데노신 A3수용체 선택성 화합물
(*다른 3 개의 서브유형들보다 10 배 이상 더 선택적이다)
본 발명은 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에게 치료 유효량의 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 상기 환자가 포유동물인 상기 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 상기 포유동물이 인간인 상기 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 상기 A1아데노신 수용체가 인지 질환, 신부전, 심 부정맥, 호흡기 상피, 전달물질 방출, 진정작용, 혈관수축, 서맥, 심 수축 감소 및 변조 감소, 기관지수축, 호중구 화학주성, 역류 질환 또는 궤양성 질환과 관련이 있는 상기 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520의 수용성 전구약물을 제공하며, 여기에서 상기 수용성 전구약물은 생체 내에서 활성 약물로 대사되어 A1아데노신 수용체를 선택적으로 억제한다.
본 발명의 추가의 실시태양에서, 상기 전구약물은 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 생체 내에서 대사된다.
추가의 실시태양에서 본 발명은 상기 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
추가의 실시태양에서 본 발명은 세포를 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520과 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 상기 방법을 제공하며, 여기에서 상기 화합물은 상기 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 상기 방법을 제공하며, 여기에서 상기 세포는 인간 세포이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 상기 방법을 제공하며, 여기에서 상기 화합물은 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 질병은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염 또는 상부 호흡기 질환이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 질병은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염 또는 상부 호흡기 질환이고, 상기 환자는 인간이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 상기 질병을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 화합물은 A1아데노신 수용체의 길항물질이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520, 및 스테로이드, β2작용물질, 글루코코르티코이드, 류코트리엔 길항물질 또는 콜린형성 억제성 작용물질을 포함하는, 천식에 대한 복합 요법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 치료 유효량의 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520로 호흡기 질환을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 비염 또는 만성 폐쇄성 폐 질환이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형인 상기 약학 조성물(들)을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 전신 제형인 상기 약학 조성물(들)을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 외과용 관주액인 상기 약학 조성물(들)을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은
(a) 치료 유효량의 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520를 보유하는 용기; 및
(b) 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서
를 포함하는, 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 또는 1520의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 화합물 1509, 1511, 1515, 1518 또는 1519의 약학적으로 허용 가능한 염이 나트륨, 칼슘 및 암모늄으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 양이온을 함유하는, 상기 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
더욱 추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 A1아데노신 수용체는 울혈성 심부전과 관련이 있다.
실시예
실시예 21: 1-[6-(4-하이드록시-4-페닐-피페리딘-1-일-메틸)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-피롤리딘-2-카복실산 아미드(1505)의 합성.
화합물 1505를 L-프롤린아미드 및 4-페닐-피페리딘-4-올과 함께 합성 반응식 IX를 사용하여 실시예 17과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
1H NMR(d6-DMSO) δ 1.53(s, 1H), 1.60(s, 1H), 1.84-2.30(m, 6H), 2.66(m, 2H), 3.60(s, 2H), 3.88(m, 1H), 4.02(m, 1H), 4.66(d, 1H, J=6.8Hz), 4.73(s, 1H), 6.44(s, 1H), 6.94(s, 1H), 7.12-7.50(m, 10H), 8.35(m, 2H), 11.6(brs, 1H); MS(ES): 305.1(M++1); 융점 = 234 내지 235 ℃.
실시예 22: [N-(2-페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일] (L)-프롤린아미드(1506)의 합성.
화합물 1506을 L-프롤린아미드와 함께 합성 반응식 VII를 사용하여 합성하여하기 화합물을 수득하였다:
1H NMR(d6-DMSO) δ 2.05(m, 4H), 3.85(m, 1H), 4.05(m, 1H), 4.70(d, 1H, J=8.0Hz), 6.58(brs, 1H), 6.95(brs, 1H), 7.15(d, 1H, J=3.4Hz), 7.40(m, 3H), 7.50(brs, 1H), 8.40(m, 2H), 11.6(brs, 1H); MS(ES): 308.3(M++1). 융점 = 236 내지 238 ℃.
실시예 23: [N-(2-페닐-6-메톡시메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일] (L)-프롤린아미드(1507)의 합성.
화합물 1507을 합성 반응식 IX의 전구체 화합물 23을 사용하여 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
브로마이드 23(4.23 g, 10 밀리몰)을 무수 메탄올(60 ㎖)과 DCM(120 ㎖)에 용해시키고 실온에서 N2하에 1 시간 동안 AgO2CCF3로 처리한다. 상기 고체를 여과에 의해 제거하고 DCM(2 x 20 ㎖)으로 세척한다. 상기 여액을 진공 하에서 농축시킨다. 잔사를 DCM(80 ㎖)에 재 용해시킨다. 이어서 생성 용액을 포화된 NaHCO3용액과 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 회색 고체 3.71 g(4, 99%)을 수득한다.1H-NMR(CDCl3) d 1.75(s, 9H), 3.51(s, 3H), 4.83(s, 2H), 6.70(s, 1H), 7.47(m, 3H), 8.52(m, 2H).
아릴 클로라이드 4(2.448 g, 6.55 밀리몰), DMSO(15 ㎖), L-프롤린아미드(4.0 g, 35.0 밀리몰) 및 NaHCO3(2.9 g)를 합하고 질소 하에서 120 ℃로 가열한다. 4 시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고 물(60 ㎖)로 희석한다. 생성된 슬러리를 DCM(10 x)으로 추출한다. 합한 유기 층들을 포화된 NaHCO3용액과 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 갈색 고체 2.48 g을 수득한다. 순수한 생성물(1.86 g, 81%)을 플래시 컬럼 후에 백색 고체로서 수득한다. 백색 결정을 THF/헥산으로부터 수득한다. 융점 = 213-215 ℃.1H-NMR(CDCl3) d 2.15(m, 3H), 2.52(m, 1H), 3.26(s, 3H), 3.92(m, 1H), 4.10(m, 1H), 4.42(s, 2H), 5.08(d, 1H, J=8.2Hz), 5.49(brs, 1H), 6.48(s, 1H),7.08(brs, 1H), 7.42(m, 3H), 8.38(m, 2H), 9.78(brs, 1H); MS(ES): 352.2(M++1).
실시예 24: 4-하이드록시-1-(2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-프롤리딘-2-카복실산 아미드(1508)의 합성.
화합물 1508을 하이드록시 프롤린아미드와 함께 합성 반응식 VII를 사용하여 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
1H NMR(d6-DMSO) δ 1.90(m, 1H), 3.85(d, 1H, J=9.2Hz), 4.08(m, 1H), 4.37(s, 1H), 4.67(dd, 1H, J=8.8, 4.0Hz), 5.30(s, 1H), 6.55(s, 1H), 7.15(s, 2H), 7.37(m, 3H), 7.64(s, 1H), 8.37(m, 2H), 11.65(brs, 1H); MS(ES): 324.2(M++1). 융점 = 268 내지 271 ℃.
실시예 25: 3-[4-((S)-2-카바모일-피롤로딘-1-일)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-프로피온산(1509)의 합성.
화합물 1509를 합성 반응식 IX의 화합물 23을 사용하여 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
3급-부톡시카보닐 보호된 아릴 브로마이드 23(4.0 g, 9.5 밀리몰), 무수 DMSO(25 ㎖), NaH2PO4(454 ㎎, 3.79 밀리몰) 및 Na2HPO4(1.62 g, 11.4 밀리몰)를 합하고 아르곤 하에서 대략 3.5 시간 동안 50 ℃로 가열하였다. 이어서 상기 혼합물을 물(200 ㎖)에 붓고 3 회 100 ㎖ 분취량의 EtOAc로 추출하였다. 상기 합한 유기 층들을 물, 염수로 철저히 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 황색 고체를 수득하고 이를 에탄올로 연마하여 정제시켜 담황색 고체(7) 1.55 g을 수득하였다. 상기 모액을 플래시 크로마토그래피(헥산 중의 10% EtOAc)에 의해 정제시켜 추가로 454 ㎎(60%)을 수득하였다.1H-NMR(CDCl3) d 1.77(s, 9H), 7.25(s, 1H), 7.48(m, 3H), 8.52(m, 2H), 10.39(s, 1H); 융점 = 156 ℃(분해).
알데히드(600 ㎎, 1.7 밀리몰)를 무수 THF(20 ㎖)에 용해시키고 아르곤 하에서 0 ℃로 냉각시켰다. 여기에 무수 THF 10 ㎖ 중의 (3급-부톡시카보닐메틸렌)-트리페닐포스포란(694 ㎎, 1.8 밀리몰)의 0 ℃ 용액을 캐뉼라를 통해 적가하였다. 3 시간 후에, 상기 혼합물을 농축시키고 에탄올로 연마시켜 정제하여 백색 고체(8) 565 ㎎(73%)을 수득하였다.1HNMR(CDCl3) d 1.58(s, 9H), 1.79(s, 9H), 6.46(d, 1H), 6.95(s, 1H), 7.48(m, 3H), 8.09(d, 1H), 8.56(m, 2H).
THF 5 ㎖ 중의 화합물 8(565 ㎎, 1.2 밀리몰) 용액을 EtOAc 100 ㎖로 희석하였다. 촉매 600 ㎎(5 중량% Pd, 50% H2O)을 가하고 아르곤으로 퍼징시킨 후에, 상기 혼합물을 대기압 하에서 수소화시켰다. 8 시간 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 농축시키고 플래시 크로마토그래피(헥산 중의 10% EtOAc)에 의해 정제시켜 정치 시 결정화되는 등명한 오일로서 9 200 ㎎(35%)을 단리하였다.1HNMR(CDCl3) d 1.42(s, 9H), 1.75(s, 9H), 2.65(t, 2H), 3.32(t, 2H), 6.41(s, 1H), 7.45(m, 3H), 8.51(m, 2H).
아실 클로라이드 9(200 ㎎, 0.44 밀리몰), DMSO(10 ㎖) 및L-프롤린아미드(440 ㎎, 4.4 밀리몰)를 합하고 아르곤 하에서 85 ℃로 가열하였다. 14 시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배시켰다. 층들을 분리시키고 수성 층을 EtOAc(3 x)로 세척하였다. 상기 합한 유기 층들을 물(3 x), 염수로 철저히 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 황색 필름으로서 10을 수득하고 이를 플래시 크로마토그래피(CH2Cl2중의 2.5% MeOH)에 의해 정제시켰다. 185 ㎎(97%). MS(ES): 435.8(M++1).
디옥산 5 ㎖ 중의 에스테르 10(30 ㎎, 밀리몰)을 농 HCl 0.5 ㎖을 가하여 가수분해시켰다. 3 시간 후에, 상기 혼합물을 진공 하에서 농축시키고 EtOH/EtOAc에 재 결정시켜 백색 고체로서 1509(20 ㎎, 61%)를 수득하였다. MS(ES): 380(M++1).
실시예 26: [N-(2-페닐-6-아미노카보닐 메톡시메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-프롤린아미드(1510)의 합성.
화합물 1510을 합성 반응식 IX의 화합물 23을 사용하여 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
브로마이드 23(1.27 g, 3 밀리몰) 및 분자체(5 g)를 무수 메틸 글리콜레이트(5.8 g, 60 밀리몰) 및 DCM(40 ㎖) 중에서 교반한다. 상기 용액을 N2하에서 AgOTf로 처리하고 3 시간 동안 교반한다. 상기 고체를 여과에 의해 제거하고 DCM(2 x 20 ㎖)으로 세척한다. 상기 여액을 진공 하에서 농축시켰다. 상기 잔사를 DCM(80 ㎖)에 재 용해시킨다. 이어서 생성된 용액을 물, 포화된 NaHCO3용액 및 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 회색 고체(12) 1.35 g(99%)을 수득한다.1H-NMR(CDCl3) d 1.75(s, 9H), 3.80(s, 3H), 5.0(s, 2H), 6.78(s, 1H), 7.47(m, 3H), 8.52(m, 2H).
아릴 클로라이드 12(177 ㎎, 0.41 밀리몰), DMSO(10 ㎖), L-프롤린아미드(466 ㎎, 4 밀리몰) 및 NaHCO3(500 ㎎)를 합하고 질소 하에서 120 ℃로 가열한다. 4 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고 물(60 ㎖)로 희석한다. 생성된 슬러리를 DCM(5 x 30 ㎖)으로 추출한다. 합한 유기 층들을 포화된 NaHCO3용액 및 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 건조시켜 갈색 고체를 수득한다. 순수한 생성물(154 ㎎, 92%)을 플래시 컬럼 후에 백색 고체(13)로서 수득한다.1H-NMR(CDCl3) d 2.15(m, 3H), 2.52(m, 1H), 3.55(s, 3H), 4.58(s, 2H), 5.08(s, 1H), 5.85(brs, 1H), 6.48(s, 1H), 7.08(brs, 1H), 7.42(m, 3H), 8.40(m, 2H), 10.58(brs, 1H); MS(ES): 410.1(M++1).
메틸 에스테르 13(124 ㎎, 0.3 밀리몰)을 HOCH3(15 ㎖)에 용해시킨다. 암모니아를 상기 용액에 0.5 시간 동안 발포시킨다. 이어서 반응 혼합물을 실온에서 추가로 3 시간 동안 교반한다. 용매를 제거한 후에 백색 고체(1510, 93%) 111 ㎎을 수득한다.1H-NMR(CDCl3) d 1.82(m, 3H), 2.20(m, 1H), 2.80(m, 1H), 3.10(m, 1H), 3.63(dd, 2H, J1=13.8Hz, J2=19.4Hz), 3.87(m, 1H), 4.07(m, 1H), 4.97(m, 1H), 5.96(m, 2H), 6.35(s, 1H), 6.86(brs, 1H), 7.11(brs, 1H), 7.37(m, 3H),8.28(m, 2H), 11.46(brs, 1H); MS(ES): 394.8(M++1).
실시예 27: [4-(2-카바모일피롤리딘-1-일)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카복실산](1511)의 합성.
화합물 1511을 합성 반응식 VII의 전구체 화합물 15를 사용하여 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
빙/수 욕에 의해 질소 하에서 냉각시킨, 무수 DMF(20 ㎖) 중의 수소화 나트륨의 현탁액(60% 오일 현탁액 중의 780 ㎎, 19.5 밀리몰)에 DMF(10 ㎖) 중의 피롤로피리미딘 15(2.00 g, 7.52 밀리몰) 용액을 5 분에 걸쳐 가한다. 15 분 후에, 벤젠설포닐 클로라이드(1.2 ㎖, 9.40 밀리몰)를 가하고, 이어서 냉각 욕을 제거한다. 4 시간 후에, 반응 혼합물을 얼음과 포화된 NaHCO3용액의 혼합물에 붓고, 침전된 고체를 여과하고 아세톤(3) 및 메탄올(2)로 연마하여 베이지색 고체 2.37 g을 수득한다. 상기 고체 (16)는 대략 10 몰%의 DMF(83% 수율을 기준으로)를 함유하며 다음 단계에 사용될 수 있고; 순수한 샘플을 용출제로서 아세톤을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 수득할 수 있다.1H-NMR(CDCl3) d 6.70(d,J=4.2Hz, 1H), 7.47-7.68(m, 6H), 7.76(d, J=4.2Hz, 1H), 8.24-8.32(m, 2H), 8.48-8.56(m, 2H); IR(고체): n=3146 ㎝-1, 1585, 1539, 1506, 1450, 1417, 1386, 1370, 1186, 1176, 1154, 1111, 1015, 919, 726, 683, 616, 607; MS(ES): 372/370(MH+); 융점 = 226 내지 227 ℃.
드라이 아이스/아세톤에 의해 냉각시킨, 무수 THF(34 ㎖) 중의 N-설포닐 화합물 16(337 ㎎, 0.911 밀리몰) 용액에 LDA·THF(1.0 ㎖, 사이클로헥산 중의 1.5M 용액, 1.5 밀리몰)를 가한다. 45 분 후에, 이산화 탄소를 상기 용액에 5 분간 발포시키고, 이어서 상기 냉각 욕을 제거한다. 상기 용액이 주변 온도에 도달한 후에, 용매를 증발시켜 황색 고체로서 0.5 당량의 (iPr)2NCO2Li를 함유하는 염 17의 398 ㎎을 수득한다. 상기 염을 정제 없이 다음 단계에 사용한다.1H-NMR(D6-DMSO) d 6.44(s, 1H), 7.50-7.75(m, 6H), 8.33-8.40(m, 2H), 8.53(dd, J=8.0, 1.6Hz,2H).
DMSO(1.5 ㎖) 중의 리튬 염 17(50 ㎎) 및 L-프롤린아미드(122 ㎎, 1.07 밀리몰) 용액을 질소 하에서 80 ℃로 15.5 시간 동안 가열한다. 4% 수성 아세트산(10 ㎖)을 냉각된 용액에 가하고, 혼합물을 EtOAc(5'10 ㎖)로 추출한다. 합한 유기 층들을 4% 수성 아세트산(10 ㎖), 물(10 ㎖) 및 염수(10 ㎖)로 세척하고 MgSO4상에서 건조시킨다. 여과 및 농축에 의해 황색을 띤 고체로서 18의 40 ㎎을 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에 사용한다.1H-NMR(CD3OD) d=1.95-2.36(m, 4H), 3.85-3.95(m, 1H), 3.95-4.17(m, 1H), 4.72(brs, 1H), 7.14(s, 1H), 7.35-7.45(m, 3H), 7.45-7.70(m, 3H), 8.33-8.50(m, 4H).
메탄올(1.5 ㎖, 5M, 7.5 밀리몰) 중의 수산화 나트륨 용액을 메탄올(2 ㎖) 중의 피롤로피리미딘 18(40 ㎎, 0.081 밀리몰) 용액에 가한다. 2 시간 후에, pH를 5로 조절하고, 대부분의 메탄올을 증발시키고, 메탄올을 EtOAc(5 10 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층들을 염수로 세척하고 MgSO4상에서 건조시킨다. 여과 및 농축에 의해 담황색 고체 24 ㎎을 수득하고, 이를 톨루엔/EtOAc/MeOH로 연마하여 약간 황색을 띤 고체로서 산 1511 15.6 ㎎(55%)을 수득한다.1H-MNR(CD3OD) d = 2.05-2.20(m, 4H), 3.95-4.10(m, 1H), 4.15-4.25(m, 2H), 4.85(brs, 1H), 7.14(s, 1H), 7.35-7.42(m, 3H), 8.38-8.45(m, 2H); IR(고체) n = 3192 ㎝-1, 2964, 2923, 2877, 1682, 1614, 1567, 1531, 1454, 1374, 1352, 1295, 1262, 1190, 974, 754, 700; MS(ES): 352(M++1); 융점 = 220 ℃(분해).
실시예 28: 1-(6-메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-(S)-피롤리딘-2-카복실산 아미드(1512)의 합성.
화합물 1512를 하기 단계에 의해 합성하였다:
아릴 클로라이드 20(3 g, 10.7 밀리몰), DMSO(50 ㎖) 및 (S)-프롤린아미드를 합하고 아르곤 하에서 85 ℃로 가열하였다. 밤새 교반한 후에(14 시간), 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물 800 ㎖에 부었다. 이를 3 회 200 ㎖ 분취량의EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층들을 물(3 x 300 ㎖), 염수로 철저히 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 짙은 갈색 고체를 수득하였다. 상기 고체를 EtOAc로부터 2 회 재 결정시켜 갈색 고체 (1512) 1.95 g(57%)을 수득하였다.1HNMR(DMSO-d6) d 1.8-2.2(m, 4H), 2.3(s, 3H), 3.8(m, 1H), 4.0(m, 1H), 4.6(d, 1H), 6.2(s, 1H), 6.9(s, 1H), 7.2(m, 3H), 7.3(s, 1H), 8.4(m, 2H), 11.5(s, 1H); MS(ES): 322(M++1)
실시예 29: 1-[6-(2-하이드록시-에톡시메틸)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-피롤리딘-2-카복실산 아미드(1513)의 합성.
화합물 1513을 L-프롤린아미드 및 에탄-1,2-디올과 함께 합성 반응식 IX를 사용하여 실시예 17과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
MS(ES): 382(M++1).
실시예 30: 4-(6-이미다졸-1-일메틸-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일아미노)-사이클로헥산올(1514)의 합성.
화합물 1514를 N-6 아미노 사이클로헥산올 및 이미다졸과 함께 합성 반응식 IX를 사용하여 실시예 17과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
MS(ES): 389(M++1).
실시예 31: 4-(4-하이드록시-사이클로헥실아미노)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카복실산(1515)의 합성.
화합물 1515를 N-6 아미노 사이클로헥산올과 함께 합성 반응식 IX를 사용하여 실시예 27과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
MS(ES): 353(M++1).
실시예 32: 4-[6-(2-하이드록시-에톡시메틸)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일아미노]-사이클로헥산올(1516)의 합성.
화합물 1516을 N-6 아미노 사이클로헥산올과 함께 합성 반응식 IX를 사용하여 화합물 1513의 합성 방법과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
MS(ES): 383(M++1).
실시예 33: 4-(4-하이드록시-사이클로헥실아미노)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카복실산 메틸 에스테르(1517)의 합성.
무수 DMF(4 ㎖) 중의 리튬 염 17(0.13 밀리몰) 용액을 20 ℃에서 아르곤 하에 3 시간 동안 메틸 요오다이드(0.1 ㎖, 1.6 밀리몰)와 함께 교반한다. DMF를 증발시키고, 수성 염화 암모늄 용액을 가한다(15 ㎖). 상기 혼합물을 EtOAc(3'15 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층들을 물(2'10 ㎖) 및 염수(10 ㎖)로 세척하고 MgSO4상에서 건조시킨다. 여과 및 농축시켜 메틸 에스테르 22 21 ㎎(38%)을 수득한다.
DMSO(1.5 ㎖) 중의 메틸 에스테르 22(24.5 ㎎, 0.057 밀리몰) 및 4-트랜스-아미노사이클로헥산올(66 ㎎, 0.57 밀리몰) 용액을 질소 하에서 5 시간 동안 80 ℃로 가열하고, 이어서 상기 가열을 멈추고, 20 ℃에서 교반을 13.5 시간 동안 계속한다. 4% 수성 아세트산(10 ㎖)을 냉각된 용액에 가하고, 상기 혼합물을 EtOAc(3'10 ㎖)로 추출한다. 합한 유기 층들을 4% 수성 아세트산(10 ㎖), 물(10 ㎖), 2N NaOH(10 ㎖), 물(10 ㎖) 및 염수(10 ㎖)로 세척하고 MgSO4상에서 건조시킨다. 여과 및 농축 후에 수득된 THF(2 ㎖) 중의 조 물질 용액(1H NMR은 벤젠설포닐 그룹의 약 50%가 제거되었음을 가리킨다)에 주변 온도에서 MeOH 중의 NaOH 용액(5M 용액 0.5 ㎖, 2.5 밀리몰)을 가한다. 20 분 후에, 물과 포화된 NaHCO3용액(각각 5 ㎖)을 가한 후에, 혼합물을 EtOAc(4'15 ㎖)로 추출한다. 합한 유기 층들을 2N NaOH(10 ㎖), 물(10 ㎖) 및 염수(10 ㎖)로 세척하고 MgSO4상에서 건조시킨다. 여과 및 농축시킨 후에 수득된 조 물질을 헥산/EtOAc(1:1 내지 1:2)로 용출시키면서 실리카 겔 상에서 크로마토그래피시켜 백색 고체로서 1517 8.6 ㎎(41%)을 수득한다. 융점 225 내지 227 ℃.1H-NMR(CD3OD) d = 1.38-1.62(m, 4H), 1.95-2.10(m, 2H), 2.10-2.25(m, 2H), 3.55-3.70(m, 1H), 3.91(s, 3H), 4.20-4.35(m, 1H), 7.32(s, 1H), 7.35-7.47(m, 3H), 8.35-8.42(m, 2H); IR(고체): n = 3352 ㎝-1, 3064, 2935, 2860, 1701, 1605, 1588, 1574, 1534, 1447, 1386, 1333, 1263, 1206, 1164, 1074, 938, 756, 705; MS(ES): 367(MH+).
실시예 34: [4-(2-카바모일-피롤리딘-1-일)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일메톡시]-아세트산 메틸 에스테르(1518)의 합성.
화합물 1518을 전구체 화합물 12를 사용하여 실시예 26과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
MS(ES): 410(M++1).
실시예 35: [4-(2-카바모일-피롤리딘-1-일)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일메톡시]-아세트산(1519)의 합성.
화합물 1519를 화합물 1518의 합성 방법(여기에서 메틸 에스테르 그룹을 염기로 가수분해시켰다)과 유사한 방식으로 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
MS(ES): 396(M++1).
실시예 36: 4-(4-하이드록시-사이클로헥실아미노)-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카복실산 아미드(1520)의 합성.
기상 암모니아를 전체 부피가 12 ㎖에 도달할 때까지 드라이아이스/아세톤으로 냉각시킨, 메탄올(6 ㎖) 중의 피롤로피리미딘 23(7.8 ㎎, 0.021 밀리몰) 용액으로 응축시킨다. 20 ℃에서 10 일간 교반한 후에, 상기 용매를 증발시키고 잔사를 CH2Cl2중의 5% MeOH로 용출시키면서 실리카겔 상에서 예비 TLC에 의해 정제한다. 상기와 같이 수득된 물질을 에테르로 연마하여 백색 고체로서 아미드 1520 6.5 ㎎(88%)을 수득한다. 융점 210 내지 220 ℃(분해).1H-NMR(CD3OD) d = 1.40-1.60(m, 4H), 2.00-2.15(m, 2H), 2.15-2.25(m, 2H), 3.55-3.70(m, 1H), 4.20-4.35(m, 1H), 7.16(s, 1H), 7.35-7.47(m, 3H), 8.34-8.40(m, 2H); IR(고체): n = 3358 ㎝-1, 3064, 3025, 2964, 2924, 2853, 1652, 1593, 1539, 1493, 1452, 1374, 1326, 1251, 1197, 1113, 1074, 1028, 751, 699; MS(ES): 352(MH+).
화합물의 활성
아데노신 1(A1) 수용체 서브유형의 포화 및 경쟁 방사성 리간드 결합을 특히 본 명세서의 152 내지 153 페이지에 개시되어 있는 화합물 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 및 1520에 대해 수행하였다. 상기 언급한 화합물들은 모두 본 원에 개시된 바와 같이, 특히 본 명세서의 171 페이지, 표 13의 기준 화합물 1318 또는 1319에 대한 A1수용체 결합 친화성과 같거나 이를 능가하였다.
표 18에 나타낸 상기 화합물들의 수 용해도는 그들의 cLogP 값[캠브리지소프트 코포레이션(Cambridgesoft Corporation, 100 Cambridge Park Drive, Cambridge, MA02140)에 의해 제공된 컴퓨터 프로그램 CS 켐드로우(ChemDrawUltra ver. 6.0 ⓒ1999)를 사용하여 계산하였음]으로 인해 기준 화합물 1318 또는 1319보다 양호할 것으로 예상된다.
표 18에 열거된 상기 A1수용체에 특이적인 화합물들은 약 3.8의 cLogP 값을 갖는 기준 화합물 1318 또는 1319에 비해 보다 낮은 cLogP 값, 약 1.5 내지 약 3.4를 가졌다. 기준 화합물 1318 또는 1319보다 더 낮은 cLogP 값을 갖는 표 18에 열거된 보다 극성인 A1수용체 화합물들이 여전히 상기 기준 화합물들에 비해 효능과 A1수용체 결합 선택성을 유지함은 예견되지 않았다.
[표 18]
화합물 cLogP
1505 4.1
1506 3.0
1507 2.88
1508 2.1
1509 2.9
1510 1.5
1511 2.7
1512 3.37
1513 2.4
1514 2.8
1515 3.1
1516 2.8
1517 3.4
1518 2.4
1519 2.2
1520 2.4
페이지 288 내지 293은 A 1 수용체에 특이적인 추가의 화합물들에 관한 것이다
본 발명은 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
본 발명은 또한 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에게 치료 유효량의 화합물 1609 또는 1610을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 환자가 포유동물인 상기 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 포유동물이 인간인 상기 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 A2a아데노신 수용체가 파킨슨 병, 및 운동 활동, 혈관확장, 혈소판 억제, 호중구 과산화물 생성, 인지 질환 또는 노인성 치매와 관련된 질병들과 관련이 있는, 환자에서 A2아데노신 수용체와 관련이 있는 질병을 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명은 상기 화합물이 아데닐레이트 사이클라제를 자극함으로써 상기 질병을 치료하는 상기 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 1609 또는 1610의 수용성 전구약물을 제공하며, 여기에서 상기 수용성 전구약물은 생체 내에서 활성 약물로 대사되어 A2a아데노신 수용체를 선택적으로 억제한다.
본 발명은 또한 전구약물이 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 생체 내에서 대사되는 상기 화합물 1609 또는 1610의 수용성 전구약물을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 화합물 1609 또는 1610의 수용성 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 세포를 화합물 1609 또는 1610과 접촉시킴을 포함하는, 상기세포에서 A2a아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 세포를 화합물 1609 또는 1610과 접촉시킴을 포함하는, 세포에서 A2아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 화합물은 상기 A2a아데노신 수용체의 길항물질이다.
본 발명은 또한 세포가 인간 세포인 상기 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 세포가 인간 세포이고 화합물이 A2a아데노신 수용체의 길항물질인 상기 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 치료 유효량의 화합물 1609 또는 1610 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 치료 유효량이 파킨슨병, 및 운동 활동, 혈관확장, 혈소판 억제, 호중구 과산화물 생성, 인지 질환 또는 노인성 치매와 관련된 질병들의 치료에 유효한 상기 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 안약 제형인 상기 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형인 상기 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 전신 제형인 상기 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 외과용 관주액인 상기 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 1609 또는 1610, 및 임의의 도파민 강화제를 포함하는 파킨슨병에 대한 복합 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 1609 또는 1610, 및 임의의 세포독성제를 포함하는 암에 대한 복합 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 1609 또는 1610, 및 프로스타글란딘 작용물질, 무스크린 작용물질 또는 β-2 길항물질을 포함하는, 녹내장에 대한 복합 요법을 제공한다.
본 발명은 또한 (a) 치료 유효량의 화합물 1609 또는 1610을 보유하는 용기; 및 (b) 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물을 제공한다.
실시예
실시예 41: 1-(6-페닐-2-피리딘-4-일-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-피롤리딘-2-카복실산 아미드(1609)의 합성.
화합물 1609를 페이지 82의 합성 반응식 II에 개시된 적합한 클로라이드 중간체와 L-프롤린아미드를 반응시킴으로써 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
1H NMR(d6-DMSO) δ 1.95-2.15(m, 4H), 4.00(brs, 1H), 4.15(brs, 1H), 4.72(brs, 1H), 6.90(brs, 1H), 7.19(brs, 1H), 7.30(t, 1H, J=7.0Hz), 7.44(t, 2H, J=7.0Hz), 7.59(s, 1H), 7.92(brs, 2H), 8.26(d, 2H, J=6.2Hz), 8.65(d, 2H, J=6.2Hz); MS(ES): 384.9(M++1). 융점 = 280 내지 316 ℃(분해).
실시예 42: 1-[6-(3-메톡시-페닐)-2-피리딘-4-일-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일]-피롤리딘-2-카복실산 아미드(1610)의 합성.
화합물 1610을 페이지 82의 합성 반응식 II에 개시된 적합한 클로라이드 중간체와 L-프롤린아미드를 반응시킴으로써 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
1H NMR(d6-DMSO) δ 2.07(m, 4H), 3.85(s, 3H), 4.02(m, 1H), 4.17(m, 1H), 4.75(m, 1H), 6.89(m, 1H), 7.00(s, 1H), 7.23(s, 1H), 7.35(t, 1H, J=8.2Hz), 7.53(s, 2H), 7.60(s, 1H), 8.28(d, 2H, J=5.8Hz), 8.67(d, 2H, J=5.8Hz), 12.37(s, 1H); MS(ES): 415.0(M++1).
화합물의 활성
아데노신 2a(A2a) 수용체 서브유형의 경쟁 방사성 리간드 결합을 본 원에 개시된 바와 같이, 특히 본 명세서의 페이지 153에 개시된 바와 같이 화합물 1609 및 1610에 대해서 수행하였다. 화합물 1609 및 1610은 A2a수용체 결합 친화성과 선택성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
페이지 294 내지 300은 A 3 수용체에 특이적인 추가의 화합물들에 관한 것이다
본 발명은 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:
추가의 실시태양에서 본 발명은 세포를 화합물 1720과 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 상기 방법을 제공하며, 여기에서 상기 화합물은 상기 A3아데노신 수용체의 길항물질이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 상기 방법을 제공하며, 여기에서 상기 세포는 인간 세포이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하기 위한 상기 방법을 제공하며, 여기에서 상기 세포는 인간 세포이고 상기 화합물은 A3아데노신 수용체의 길항물질이다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에게 치료 유효량의 화합물 1720을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 환자의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 상기 손상이 망막 또는 시신경 유두 손상을 포함하는 상기 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 환자에게 치료 유효량의 화합물 1720을 투여함을 포함하는, 녹내장에 대한 요법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 하나 이상의 아데노신 수용체 길항물질들, 바람직하게는 아데노신 수용체 A3 길항물질(바람직하게는 N-6 치환된 7-데아자퓨린, 가장 바람직하게는 [2-(3H-이미다졸-4-일)-에틸]-(2-페닐-7H-피롤[2,3-d]피리미딘-4-일)-아민)을 포함하는 녹내장에 대한 요법을 제공한다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 하나 이상의 아데노신 수용체 길항물질들, 바람직하게는 아데노신 수용체 A3 길항물질(바람직하게는 N-6 치환된 7-데아자퓨린, 가장 바람직하게는 [2-(3H-이미다졸-4-일)-에틸]-(2-페닐-7H-피롤[2,3-d]피리미딘-4-일)-아민), 및 베타 아드레날린 수용체 길항물질(즉 베타 아드레날린 생성 길항물질 또는 b-차단제)(예를 들어 티몰올 말리에이트, 베탁솔롤, 카르테올롤, 레보뷰놀롤, 메티프라놀롤, L-653328(L-652698의 아세테이트 에스테르), 베타 1 아드레날린 수용체 길항물질), 알파-2 아드레날린 수용체 작용물질(예를 들어 아플라클로니딘, 브리모니딘, AGN-195795, AGN-190837(배이-a-6781의 동족체)), 탄소 무수화 효소 억제제(브린졸아미드, 도르졸아미드, MK-927(인간 탄소 무수화 효소 II 이소효소), 탄소 무수화 효소 IV 이소효소의 억제제), 콜린생성 작용물질(예를 들어 무스카린 콜린생성 작용물질, 카르바콜, 필로카르핀 HCl, 필로카르핀 니트레이트, 필로카르핀, 필로카르핀 전구약물(예를 들어 DD-22A)), 프로스타글란딘 및 프로스타글란딘 수용체 작용물질(예를 들어 라타노프로스트, 유노프로스톤 이소프로필, PGF2 알파 작용물질, 프로스타노이드-선택성 FP 수용체 작용물질, PG 작용물질, 예를 들어 저혈합성 프로스타미드), 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제(예를 들어 스피라프릴, 스피라프릴라트), AMPA 수용체 길항물질, 5-HT 작용물질(예를 들어 선택성 5-HT 1A 수용체 작용물질, 예를 들어 MKC-242(5-3-[((2S)-1,4-벤조디옥산-2-일메틸)아미노]프로폭시-1,3-벤조디옥솔 HCl), 혈관형성 억제제(예를 들어 스테로이드 아네코르타브), NMDA 길항물질(예를 들어 HU-211, 메만틴, 칸나비노이드 NMDA-수용체 작용물질 덱사나비놀, 덱사나비놀의 전구약물 및 동족체, NR2B-선택성 길항물질(예를 들어 엘리프로딜(SL-82.0715)), 레닌 억제제(예를 들어 CGP-38560, SR-43845), 칸나비노이드 수용체 작용물질(예를 들어 테트라하이드로칸나비놀(THC) 및 THC 동족체, 선택성 CB2 칸나비노이드 수용체 작용물질(예를 들어 L-768242, L-759787), 뇌 특이적인 CB1 수용체 및 말초 CB2 수용체 모두에 결합하는 아난다미드와 같은 화합물), 안지오텐신 수용체 길항물질(예를 들어 안지오텐신 II 수용체 길항물질(예를 들어 CS-088), 선택성 안지오텐신 II AT-I 수용체 길항물질, 예를 들어 로사르탄 칼륨), 하이드로클로로티아지드(HCTZ), 소마토스타틴 작용물질(예를 들어 비-펩티드 소마토스타틴 작용물질 NNC-26-9100), 글루코코르티코이드 길항물질, 비만 세포 탈과립 억제제(예를 들어 네도크로밀), 알파-아드레날린 생성 수용체 차단제(예를 들어 다피프라졸, 알파-2 아드레날린 수용체 길항물질, 알파 1 아데르날린 수용체 길항물질(예를 들어 부나조신)), 알파-2 아드레날린 수용체 길항물질, 트롬복산 A2 유사물질, 단백질 키나제 억제제(예를 들어 H7), 프로스타글란딘 F 유도체(예를 들어 S-1033), 프로스타글란딘-2 알파 길항물질(예를 들어 PhXA-34), 도파민 D1 및 5-HT2 작용물질(페놀도팜), 산화 질소 방출제(예를 들어 NCX-904 또는 NCX-905, 티몰롤의 산화 질소 방출 유도체), 5-HT 2 길항물질(예를 들어 사르포그렐레이트), NMDA 길항물질(예를 들어 덱사나비놀의 전구약물 및 동족체), 알파 1 아드레날린 수용체 길항물질(예를 들어 부나조신), 사이클로옥시게나제 억제제(예를 들어 디클로페낙 또는 비 스테로이드성 화합물 네파페낙), 이노신, 도파민 D2 수용체 및 알파 2 아드레날린 수용체 작용물질(예를 들어 탈리펙솔), 도파민 D1 수용체 길항물질 및 D2 수용체 작용물질(예를 들어 SDZ-GLC-756), 바소프레신 수용체 길항물질(예를 들어 바소프레신 V2 수용체 길항물질(예를 들어 SR-121463)), 엔도텔린 길항물질(예를 들어 TBC-2576), 1-(3-하이드록시-2-포스포닐메톡시프로필 시토신)(HPMPC) 및 관련된 동족체 및 전구약물, 갑상선 호르몬 수용체리간드(예를 들어 KB-130015), 무스카린 M1 작용물질, NMDA-수용체 길항물질(예를 들어 칸나비노이드 NMDA-수용체 길항물질 덱사나비놀), PG 작용물질, 예를 들어 저혈압성 지질, 프로스타미드, 나트륨 채널 차단제, NMDA 길항물질, 혼합 작용 이온 채널 차단제, 베타 아드레날린 수용체 길항물질 및 PGF2 알파 작용물질 조합(예를 들어 라타노프로스트 및 티몰롤), 구아닐레이트 사이클라제 활성화제(예를 들어 심방 나트륨이뇨 펩티드(ANP) 또는 비 펩티드 유사물질, ANP 중성 엔도펩티다제의 억제제, 니트로 혈관 확장제(예를 들어 니트로글리세린, 히드랄라진, 나트륨 니트로프루시드), 엔도텔린 수용체 조절제(예를 들어 ET-1 또는 비 펩티드 유사물질, 사라포톡신-S6c), 에타크린산, 다른 페녹시아세트산 동족체(예를 들어 인다크리논, 티크리나펜), 액틴 파괴제(예를 들어 라트룬쿨린), 칼슘 채널 차단제(예를 들어 베라파밀, 니페디핀, 브로빈카민, 니발디핀) 및 신경보호제로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 다른 화합물을 포함하는 녹내장에 대한 복합 요법을 제공한다.
녹내장에 대한 복합 요법은 화합물 1702, 및 베타 아드레날린 수용체 길항물질, 알파-2 아드레날린 수용체 작용물질, 탄소 무수화 효소 억제제, 콜린생성 작용물질 및 프로스타글란딘 수용체 작용물질로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 치료 유효량의 화합물 1720 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은
(a) 치료 유효량의 화합물 1720을 보유하는 용기; 및
(b) 환자에서 A3아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서
를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 화합물 1720을 적합한 담체와 혼합함을 포함하는, 상기 화합물 1720을 포함하는 조성물의 제조 방법을 제공한다.
추가의 실시태양에서, 본 발명은 화합물 1720의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 여기에서 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 아세테이트, 포스페이트 및 메실레이트로 이루어진 그룹 중에서 선택된 음이온을 함유한다.
실시예
실시예 43: [2-(3H-이미다졸-4-일)-에틸]-2-페닐-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아민(1720)의 합성
화합물 1720을 합성 반응식 VII의 전구체 화합물 1을 사용하여 합성하여 하기 화합물을 수득하였다:
(히스타민)
아릴 클로라이드 1(400 ㎎, 1.50 밀리몰), DMSO(10 ㎖) 및 히스타민(1.67 g, 15.0 밀리몰)을 합하고 120 ℃로 질소 하에서 가열한다. 6.5 시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc와 물 사이에 분배시킨다. 층들을 분리시키고 수성 층을 EtOAc(3 x)로 추출한다. 합한 유기 층들을 염수(2 x)로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 갈색 고체 494 ㎎을 수득한다. 상기 고체를 냉 MeOH로 세척하고 MeOH로부터 재결정시켜 회색 고체(1720) 197 ㎎(43%)을 수득한다.1H-NMR(CD3OD) d 3.05(t, 2H, J=7.0Hz), 3.94(t, 2H, J=7.0Hz), 6.50(d, 1H, J=3.5Hz), 6.88(brs, 1H), 7.04(d, 1H, J=3.5Hz), 7.42(m, 3H), 7.57(s, 1H), 8.34(m, 2H); MS(ES): 305.1(M++1); Mpt = 234-235 ℃.
화합물의 활성
아데노신 3(A3) 수용체의 경쟁 방사성 리간드 결합을 본 원에 개시된 바와 같이, 특히 본 명세서의 페이지 153 내지 154에 개시된 바와 같이 화합물 1720에 대해 수행하였다. 화합물 1720은 본 원에 개시된 바와 같이, 특히 본 명세서의 페이지 169, 표 13에 개시된 바와 같이 기준 화합물 1308의 친화성보다 10 배 이상 큰 A3수용체 결합 친화성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
본 원에 개시된 모든 특허, 공개된 특허 출원 및 다른 참고문헌들은 명백히본 발명에 참고로 인용되어 있다.
당해 분야의 숙련가들은 본 원에 구체적으로 개시된 본 발명의 특정 실시태양들에 대한 많은 등가물들을 단지 통상적인 실험을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 상기와 같은 등가물들은 하기 청구의 범위에 포함시키고자 한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 XI를 갖는 화합물을 제공한다:
[화학식 XI]
상기 식에서,
R1NR2는 함께 화학식또는을 갖는 고리를 형성하거나; 또는
R1은 H이고,
R2는이며,
R5는 H, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 알킬아릴이다.

Claims (82)

  1. 하기 화학식을 갖는 화합물:
    상기 식에서,
    R1NR2는 함께 화학식또는을 갖는 고리를 형성하거나; 또는
    R1은 H이고,
    R2는이며,
    R5는 H, 또는 치환되거나 비 치환된 알킬 또는 알킬아릴이다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  3. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  4. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  5. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  6. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  7. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  8. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  9. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  10. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  11. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  12. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  13. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  14. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  15. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  16. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  17. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식을 갖는 화합물:
  18. 환자에게 치료 유효량의 제 1 항의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위한 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    환자가 포유동물인 방법.
  20. 제 19 항에 있어서,
    포유동물이 인간인 방법.
  21. 제 18 항에 있어서,
    A1아데노신 수용체가 인지 질환, 신부전, 심 부정맥, 호흡기 상피, 전달물질 방출, 진정작용, 혈관수축, 서맥, 심 수축 감소 및 변조 감소, 기관지수축, 호중구 화학주성, 역류 질환 또는 궤양성 질환과 관련이 있는 방법.
  22. 생체 내에서 대사되어 A1아데노신 수용체를 선택적으로 억제하는 활성 약물을 생성하는 제 1 항 화합물의 수용성 전구약물.
  23. 제 22 항에 있어서,
    생체 내에서 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 대사되는 전구약물.
  24. 제 22 항의 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  25. 세포를 제 1 항의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 상기 세포에서 A1아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법.
  26. 제 25 항에 있어서,
    화합물이 A1아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  27. 제 25 항에 있어서,
    세포가 인간 세포인 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    화합물이 A1아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  29. 제 18 항에 있어서,
    질병이 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 알레르기성 비염 또는 상부 호흡기 질환인 방법.
  30. 제 29 항에 있어서,
    환자가 인간인 방법.
  31. 제 30 항에 있어서,
    화합물이 A1아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  32. 제 1 항의 화합물, 및 스테로이드, β2작용물질, 글루코코르티코이드, 류코트리엔 길항물질 또는 콜린형성 억제성 작용물질을 포함하는, 천식에 대한 복합 요법.
  33. 치료 유효량의 제 1 항의 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  34. 제 29 항에 있어서,
    호흡기 질환이 천식, 알레르기성 비염 또는 만성 폐쇄성 폐 질환인 방법.
  35. 제 33 항에 있어서,
    눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형인 약학 조성물.
  36. 제 33 항에 있어서,
    전신 제형인 약학 조성물.
  37. 제 33 항에 있어서,
    외과용 관주액인 약학 조성물.
  38. (a) 치료 유효량의 제 1 항의 화합물을 보유하는 용기; 및
    (b) 환자에서 A1아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서
    를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물.
  39. 제 1 항 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염.
  40. 제 39 항에 있어서,
    제 6 항, 제 8 항, 제 12 항, 제 15 항 또는 제 16 항 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염이 나트륨, 칼슘 및 암모늄으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 양이온을 함유하는 약학적으로 허용 가능한 염.
  41. 제 18 항에 있어서,
    A1아데노신 수용체가 울혈성 심부전과 관련이 있는 방법.
  42. 하기 화학식을 갖는 화합물:
  43. 하기 화학식을 갖는 화합물:
  44. 환자에게 치료 유효량의 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위한 방법.
  45. 제 44 항에 있어서,
    환자가 포유동물인 방법.
  46. 제 45 항에 있어서,
    포유동물이 인간인 방법.
  47. 제 46 항에 있어서,
    A2a아데노신 수용체가 운동 활동, 혈관확장, 혈소판 억제, 호중구 과산화물 생성, 인지 질환, 노인성 치매, 또는 파긴슨병과 관련이 있는 방법.
  48. 제 44 항에 있어서,
    화합물이 아데닐레이트 사이클라제를 자극시킴으로써 질병을 치료하는 방법.
  49. 생체 내에서 A2a아데노신 수용체를 선택적으로 억제하는 활성 약물로 대사되는, 제 42 항 또는 제 43 항 화합물의 수용성 전구약물.
  50. 제 49 항에 있어서,
    생체 내에서 에스테라제 촉매화된 가수분해에 의해 대사되는 전구약물.
  51. 제 49 항의 전구약물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  52. 세포를 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 상기 세포에서 A2a아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법.
  53. 제 52 항에 있어서,
    화합물이 A2a아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  54. 제 53 항에 있어서,
    세포가 인간 세포인 방법.
  55. 제 53 항에 있어서,
    화합물이 A2a아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  56. 치료 유효량의 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  57. 제 56 항에 있어서,
    치료 유효량이 파킨슨병, 및 운동 활동, 혈관확장, 혈소판 억제, 호중구 과산화물 생성, 인지 질환 또는 노인성 치매와 관련된 질병을 치료하는데 유효한 약학 조성물.
  58. 제 56 항에 있어서,
    안약 제형인 약학 조성물.
  59. 제 56 항에 있어서,
    눈 주위, 눈 뒤 또는 눈 안 주입 제형인 약학 조성물.
  60. 제 56 항에 있어서,
    전신 제형인 약학 조성물.
  61. 제 56 항에 있어서,
    외과용 관주액인 약학 조성물.
  62. 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물 및 임의의 도파민 강화제를 포함하는, 파킨슨병에 대한 복합 요법.
  63. 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물 및 임의의 세포독성제를 포함하는, 암에 대한 복합 요법.
  64. 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물 및 프로스타글란딘 작용물질, 무스크린 작용물질 또는 β-2 길항물질을 포함하는, 녹내장에 대한 복합 요법.
  65. (a) 치료 유효량의 제 42 항 또는 제 43 항의 화합물을 보유하는 용기; 및
    (b) 환자에서 A2a아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서
    를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물.
  66. 제 42 항 또는 제 43 항 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염.
  67. 제 66 항에 있어서,
    제 41 항 또는 제 42 항 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염이 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 아세테이트, 포스페이트 및 메실레이트로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 음이온을 함유하는 약학적으로 허용 가능한 염.
  68. 하기 화학식을 갖는 화합물:
  69. 세포를 제 68 항의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 상기 세포에서 A3아데노신 수용체의 활성을 억제하는 방법.
  70. 제 69 항에 있어서,
    화합물이 A3아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  71. 제 69 항에 있어서,
    세포가 인간 세포인 방법.
  72. 제 71 항에 있어서,
    화합물이 A3아데노신 수용체의 길항물질인 방법.
  73. 환자에게 치료 유효량의 제 68 항의 화합물을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자의 눈에 대한 손상을 치료하는 방법.
  74. 제 73 항에 있어서,
    손상이 망막 또는 시신경 유두 손상을 포함하는 방법.
  75. 환자에게 치료 유효량의 제 68 항의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 녹내장에 대한 요법.
  76. 제 68 항의 화합물, 및 베타 아드레날린 수용체 길항물질, 알파-2 아드레날린 수용체 작용물질, 탄소 무수화 효소 억제제, 콜린생성 작용물질, 프로스타글란딘 및 프로스타글란딘 수용체 작용물질, 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제, AMPA 수용체 길항물질, 5-HT 작용물질, 혈관형성 억제제, NMDA 길항물질, 레닌 억제제, 칸나비노이드 수용체 작용물질, 안지오텐신 수용체 길항물질, 하이드로클로로티아지드(HCTZ), 소마토스타틴 작용물질, 글루코코르티코이드 길항물질, 비만 세포 탈과립 억제제, 알파-아드레날린 생성 수용체 차단제, 알파-2 아드레날린 수용체 길항물질, 트롬복산 A2 유사물질, 단백질 키나제 억제제, 프로스타글란딘 F 유도체, 프로스타글란딘-2 알파 길항물질, 도파민 D1 및 5-HT2 작용물질, 산화 질소 방출제, 5-HT 2 길항물질, 사이클로옥시게나제 억제제, 이노신, 도파민 D2 수용체 및 알파 2 아드레날린 수용체 작용물질, 도파민 D1 수용체 길항물질 및 D2 수용체 작용물질, 바소프레신 수용체 길항물질, 엔도텔린 길항물질, 1-(3-하이드록시-2-포스포닐메톡시프로필) 시토신(HPMPC) 및 관련된 동족체 및 전구약물, 갑상선 호르몬 수용체 리간드, 무스카린 M1 작용물질, 나트륨 채널 차단제, 혼합 작용 이온 채널 차단제, 베타 아드레날린 수용체 길항물질 및 PGF2 알파 작용물질 조합, 구아닐레이트 사이클라제 활성화제, 니트로 혈관 확장제, 엔도텔린 수용체 조절제, 에타크린산, 다른 페녹시아세트산 동족체, 액틴 파괴제, 칼슘 채널 차단제 및 신경보호제로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 다른 화합물을 포함하는, 녹내장에 대한 복합 요법.
  77. 제 68 항의 화합물, 및 베타 아드레날린 수용체 길항물질, 알파-2 아드레날린 수용체 작용물질, 탄소 무수화 효소 억제제, 콜린생성 작용물질 및 프로스타글란딘 수용체 작용물질로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는, 녹내장에 대한 복합 요법.
  78. 치료 유효량의 제 68 항의 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  79. (a) 치료 유효량의 제 68 항의 화합물을 보유하는 용기; 및
    (b) 환자에서 A3아데노신 수용체와 관련된 질병을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하기 위한 설명서
    를 포함하는, 상기 환자에서 상기 질병을 치료하기 위한 패키징된 약학 조성물.
  80. 제 68 항의 화합물을 적합한 담체와 혼합함을 포함하는, 제 68 항의 화합물을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  81. 제 68 항 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염.
  82. 제 81 항에 있어서,
    말레산, 푸마르산, 타르타르산, 아세테이트, 포스페이트 및 메실레이트로 이루어진 그룹 중에서 선택된 음이온을 함유하는 약학적으로 허용 가능한 염.
KR1020037007247A 2000-12-01 2001-11-30 아데노신 ａ₁, ａ₂ａ 및 ａ₃ 수용체에 특이적인 화합물및 그의 용도 KR100897430B1 (ko)

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