KR20020020809A

KR20020020809A - 페길화-인터페론-알파와 관련된 미코페놀레이트 모페틸

Info

Publication number: KR20020020809A
Application number: KR1020027001782A
Authority: KR
Inventors: 그레이브즈메리캐써린; 파파스스티븐크리스토퍼; 잠프리드릭크
Original assignee: 프리돌린 클라우스너, 롤란드 비. 보레르; 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 1999-08-13
Filing date: 2000-08-08
Publication date: 2002-03-15
Also published as: US20010046957A1; IL147612A0; MA26814A1; HK1048951A1; AR025549A1; HRP20020118A2; CO5180574A1; NO20020704L; NO20020704D0

Abstract

본 발명은 간 질병 환자 치료용 의약의 제조를 위한, 치료효과량의 IFN-α또는 PEG-IFN-α와 치료효과량의 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 조합의 용도에 관한 것이다. 상기 성분들은 적어도 상기 환자의 말초혈중 존재하는 HCV-RNA의 양을 치료 완료 후 24주째 100카피/㎖ 미만까지 감소시키기에 충분한 소정의 기간에 걸쳐 투여된다.

Description

페길화-인터페론-알파와 관련된 미코페놀레이트 모페틸{MYCOPHENOLATE MOFETIL IN ASSOCIATION WITH PEG-IFN-ALPHA}

C형 간염 바이러스(HCV)는 간 경변, 간 부전 또는 간암을 유도할 수 있는 간 손상 감염이다. 현재 전세계적으로 이러한 바이러스에 감염된 사람은 1억 7천만 내지 2억만명으로 추정된다.

인터페론(IFN)은 항바이러스성 면역조절 및 항종양 활성과 같은 특징적인 생물학적 효과를 갖는 자연적으로 발생하는 작은 단백질 및 당단백질의 부류이다. 이들 물질은 몇가지 질병, 특히 바이러스 감염에 대한 반응으로 대부분 동물의 유핵세포에 의해 생성되고 분비된다.

인터페론 시스템은 더욱 항바이러스성인 보호 메카니즘보다 더 넓은 의미를 갖는다. IFN는 바이러스성, 악성, 혈관생성성, 알러지성, 염증성 및 섬유성 기원등의 많은 상이한 질병에서 증명되었다(A. Billiau (1984), Elsevier Sciences Publisher B. V.,vol.1, 25-28).

4가지의 구별되는 부류의 사람 IFN가 이미 개시되어 있다(Peska 등 (1987), Ann. Rev. Biochem,56,727-777 및 Emanuel 및 Peska(1993), J. Biol. Chem.,268, 12565-12569). 재조합 DNA 기술 뿐만 아니라 천연 공급원로부터 정제된 IFN이 많은 문헌의 주제로 다루어졌다. 재조합 IFN의 제조방법이 예를 들면 유럽 특허번호 제 32134 호, 제 43980 호 및 제 211148 호 뿐만 아니라 문헌[Nature 295, (1982), 503-508, Nature 284, (1980), 320-326, Nature 290, (1981), 20-26, Nucleic Acids Res. 8 (1980), 4057-4074]에 공지되어 있다.

IFN의 부류에서, IFN-α는 자극된 말초혈 백혈구(Peska 등, loc. cit.; Have 등, (1975), Proc. Natl. Acad. Sci. USA72,2185-2187; Cavalieri 등, (1977), Proc. Natl. Acad. Sci. USA74, 3287-3291) 및 림포블라스토이드 및 미엘로블라스토이드 세포주(Familletti 등, (1981), Antimicrob. Agents. Chemother., 20,5-9)에 의해 생성된 IFN의 지배적인 부류를 나타낸다. IFN-α는 세포 신호전달 및 면역학 콘트롤에 영향을 미치는 중요한 성장 및 분화의 조절제임이 증명되었다. IFN-α는 만성 C형 간염과 같은 만성 간염의 치료에 자주 사용된다.

사실상, IFN는 만성 HCV 감염(CHC)을 위한 유일하게 입증된 단일치료이다. 치료 목적은 치료 완료 후 6개월째에 지속적인 바이러스 반응(이는 말초혈중 HCV-RNA를 감지할 수 없다는 것을 의미한다( < 100 카피/ml))을 달성하는 것이다. 그러나, CHC의 치료에 있어서 IFN의 효율은 만족스럽지 않다. IFN-α 단일 치료는일반적인 CHC 집단의 단지 5 내지 20%에서만 지속된 반응을 나타낸다(Fried 등, (1995),"Therapy of hepatitis C", Semin. Liver Dis., 15 (1), 82-91). 또한, IFN은 일반적으로 치료의 개시 시점에서 독감 유사 증후군을 나타낸다.

IFN는 특히 체순환으로부터 신속하게 제거되기 때문에 최대 임상 포텐시를 달성하지 못한다고 생각된다. 본 발명에 의해, IFNα을 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 콘쥬게이션시키면 이러한 제거 경향이 감소된다는 것을 밝혀냈다. 또한, 최근 PEG-IFN-α2A 콘쥬게이트가 상 II 검사에서 CHC을 갖는 비 간경화성 환자의 36%에 있어서 바이러스를 감지불가능한 양으로 지속적으로 감소시켰음을 밝혀냈다[쉬프만(Shiffman M), 포크로스(Pockros PJ), 레디(Reddy RK) 등, "A controlled, randomized, multicenter, ascending dose phase II trial of pegylated interferon α-2a (PEG) vs. standard interferon α-2a (IFN) for treatment of chronic hepatitis C", Gastroneterology 1999; 116 (pt 2): 1275. Abstract L0418]. 간경변증을 갖고 있는 CHC 환자에 있어서 후속적인 상 III 검사로, 29%의 지속적인 바이러스 반응이 입증되었다(헤쓰코트(Heathcote J), 쉬프만(Shiffman ML), 쿡슬리(Cooksley G.) 등, "Multinational evaluation of the efficacy and safety of once weekly PEG interferon alpha-2a (PEG-IFN) in patients with chronic hepatitis C (CHC) with compensated cirrhosis." Hepatology 1999; 30 (suppl): 316A).

미코페놀산(MPA)은 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나아제(IMP-DH)(즉, 구아닌 뉴클레오티드의 노보합성 경로에서 중요한 효소임)의 비경쟁적이고 가역적인 억제를 통해 B 및 T 림프구의 증폭을 억제하는 활성제이다. 미코페놀레이트 모페틸, 즉 MPA의 모르폴리노에틸 에스테르 전구체는 특히 간 이식 수용자의 불응성 거부반응의 치료에 효과적인 면역억제제임이 입증되었다. 이는 단일 치료에 사용되거나 사이클로스포린 및 코르티코스테로이드와 조합하여 사용되었다(J. Neyts 및 E. de Clercq, (1998), Antiviral Research40, 53-56; Z. J. Gong 등,"The influences of immunosuppressive agents on HBV replication in vitro" 및 K. P. Platz 등, (1998), Elsevier Science Inc., 2232-2233).

미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체와 함께 IFN-α는 간 질병의 치료에 중요하고 특히 만성 바이러스성 C형 간염의 치료에 중요하다.

발명의 요약

본 발명은 간 질환 환자 치료용 의약의 제조를 위해 사용되는 IFN-α 및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 제공한다. 본 발명은 또한 간 질병의 치료에 동시에, 부분적으로 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 결합된 제제로서 IFN-α 및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 함유하는 의약을 목표로 한다. 최종적으로, 본 발명은 간 질환 환자에게 IFN-α 및 MPA 또는 그의 전구체중 하나, 예를 들면 미코페놀레이트 모레틸을 함께 투여하는 것을 포함하는 상기 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.

본 발명의 복합 치료를 실행하기 위한 IFN-α의 투여량은 매주 3회 투여되는 3 내지 6백만 국제 단위(IU)이다. 본 발명의 복합 치료를 실행하기 위한 바람직한양은 매주 3회 투여되는 3백만 국제 단위(IU)이다. 본 발명의 복합 치료를 실행하기 위한 PEG IFN-α의 투여량은 매주 1회 투여되는 40 내지 270 ㎍이다. 본 발명을 실행하기 위한 MPA 또는 그의 전구체 또는 염(예를 들면, MMF)의 투여량은 1일당 250 내지 2000 mg, 바람직하게는 500 내지 1000 mg 이다. 매일 투여량은 1일당 2회 내지 4회 나누어 투여할 수 있다.

환산을 위해, IFN-α 1 mg은 2.7 ×10⁸IU이다. 따라서, IFNα의 3백만 IU는 IFN-α11.1㎍이다.

특히, 본 발명은 바이러스 감염의 심각성을 감소시키기 위해 HCV로 감염된 환자의 치료에 사용되는 IFN-α 및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 용도에 관한 것이다. 상기 용도는 활성 성분으로서 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 바이러스 감염의 심각성을 감소시키는 치료효과량으로 함유하는 약학 조성물로 이루어진 제 1 성분 및 활성 성분으로서 IFN-α 또는 PEG-IFN-α콘쥬게이트를 바이러스 감염의 심각성을 감소시키는 치료효과량으로 함유하는 주사 용액으로 이루어진 제 2 성분을 환자에게 소정의 시간에 걸쳐 동시에 투여하는 것을 포함한다. 상기 성분들은 적어도 환자의 말초혈중 존재하는 HCV-RNA의 양을 투여 기간 후 100 카피/㎖ 미만까지 감소시키기에 충분한 기간에 걸쳐 동시에 투여된다.

특정 태양에서, 본 발명은 환자에게 (i) 활성 성분으로서 하기 화학식 1의 약학적으로 허용가능한 염 또는 하기 화학식 2의 화합물을 함유하는 약학 조성물로이루어진 제 1 성분(제 1 성분의 충분한 효과량은 1일당 약 250 내지 약 2000 mg의 양으로 매일 투여된다)

(상기 식에서, Y는이고, Z는 수소 또는 -(CO)R이고, R는 저급 알킬 또는 아릴이다); 및

(ii) 활성 성분으로서 IFN-α 또는 페길화-IFN-α 콘쥬게이트를 함유하는 주사 용액으로 이루어진 제 2 성분(제 2 성분의 활성 성분은 3 내지 6백만 IU의 양으로 매주 3회 투여한다)을 약 24 내지 약 72주의 기간에 걸쳐 동시에 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 바이러스로 감염된 환자를 치료하기 위한 IFN-α 및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 의해, 본 발명에 따른 2 성분들의 투여가 말초혈중 존재하는 HCV-RNA의 양을 예를 들면 투여 완료 후 24주에 100 카피/㎖ 미만으로 감소시킨다는 것을 밝혀냈다.

다른 태양에서, 본 발명은 키트에 관한 것이다. 상기 키트는 제 1 구성요소 및 제 2 구성요소를 포함한다. 제 1 구성요소는 활성 성분의 1개 이상의 경구 단위 투여 형태를 함유하고, 각각의 단위는 MPA의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체인 활성 성분을 약 250 내지 약 2000mg 함유하고, 제 2 구성요소는 단일의 주사 용액 투여량 또는 다수의 주사 용액 투여량을 함유하는 바이알 또는 일련의 바이알을 함유하되, 각각의 투여량은 IFN-α또는 페길화 IFN-α 약 40 내지 약 270㎍을 활성성분으로서 함유한다.

특정 태양에서, 본 발명은 제 1 구성요소 및 제 2 구성요소를 포함하는 키트에 관한 것이다. 제 1 구성요소는 활성 성분의 1개 이상의 경구 단위 투여 형태를 포함하되, 각 단위는 하기 화학식 2의 화합물인 활성 성분을 약 250 내지 약 2000 mg 함유한다:

화학식 2

상기 식에서,

Y는이고,

Z는 수소이다.

제 2 구성요소는 단일의 주사 용액 투여량 또는 다수의 주사 용액 투여량을 함유하는 바이알 또는 일련의 바이알을 함유하는, 각각의 투여량은 활성 성분으로서 페길화 IFN-α 콘쥬게이트 약 40 내지 약 270 ㎍을 함유한다.

본 발명은 (i) 인터페론-α 또는 페길화 인터페론-α 및 (ii) 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 투여함으로써 간 질환, 특히 C형 간염 감염을 치료하는 분야에 관한 것이다.

MPA는 하기 화학식 1의 공지된 화합물이다:

화학식 1

본 발명의 제 1 성분은 바이러스 감염의 심각성을 감소시키기 위해 활성 성분으로서 치료효과량의 MPA의 전구체 또는 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약학 조성물로 이루어진다.

본원에서 사용된 "MPA의 약학적으로 허용가능한 염"은 적절한 무독성 유기 또는 무기 산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성된 MPA의 생물학적 효능 및 성질을 보유하는 임의의 통상적인 염 또는 염기 부가염이다. 바람직한 것은 양이온성 염, 예를 들면 알칼리 금속의 염, 특히 나트륨 염이다. 나트륨 미코페놀레이트 염은 예를 들면 WO 97/38689에 공지되어 있다.

본원에서 사용된 "MPA의 전구체"란 용어는 약리학적 조건하에 또는 MPA로의 가용매분해에 의해 전환된 화합물을 말한다. MPA의 전구체는 개체로 투여될 때 불활성이되 생체내에서 MPA로 전환된다.

MPA의 전구체로서 바람직한 것은 하기 화학식 2의 화합물이다:

화학식 2

상기 식에서,

Y는이고, Z는 수소 또는 -(CO)R이되, 다수 저급 알킬 또는 아릴이다.

이들 화합물은 본원에서 참조로서 인용된 미국 특허 제 4,753,935호에 공지되어 있다. 가장 바람직한 화합물은 MMF(Z는 수소임)이다.

활성 성분으로서 치료효과량의 IFN-α 또는 페길화-IFN-α 콘쥬게이트를 함유하는 주사 용액으로 이루어진 제 2 성분은 바이러스 감염의 심각성을 감소시킨다.

본원에서, "IFN-α"이란 임의의 천연 물질(예: 백혈구, 섬유아세포, 림프구) 또는 이로부터 유도된 물질(세포주), 또는 재조합 DNA 기술로 제조된 것으로부터 유도된 IFN-α을 포함한다. 특히 E. coli에서의 IFN-α의 클로닝 및 그의 직접 발현에 대한 상세한 사항은 많은 문헌의 주제로 다루어졌다. 재조합 IFN-α의 제조방법이 예를 들면 문헌[Goeddel 등(1980) Nature 284, 316-320 및 (1981), Nature290, 20-26, 및 유럽 특허 제 32134 호, 제 43980 호 및 제 211148 호]에 공지되어 있다. IFN-α1, IFN-α2; 및 추가로 IFN-α2A, IFN-α2B, IFN-α2C 및 IFN-αII(또한 IFN-αII 또는 w-IFN으로 명명됨) 등(이에 제한되지 않음)의 서브 타입과 같은 많은 유형의 IFN-α가 있다. 본 발명에서, IFN-α2A의 용도가 바람직하다. IFN-α2A의 제조방법이 유럽 특허 제 43980 호 및 제 211148 호에 개시되어 있다.

본 발명에 사용된 IFN-α는 PEG-IFN-α을 형성하기 위해 폴리알킬렌 글리콜(치환되거나 비치환된), 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜과 같은 중합체에 콘쥬게이트될 수 있다. 콘쥬게이션은 당해 기술분야에 공지된 다양한 링커에 의해, 특히 유럽 특허 출원 제 0510356 호 및 유럽 특허 공보 제 593868 호 및 유럽 특허 출원 제 97108261.5 호에 개시된 것과 같은 링커에 의해 달성될 수 있다. 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜인 중합체의 분자량은 300 내지 30000 돌턴이고, 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 3개의 중합체가 IFN-α에 콘쥬게이트될 수 있다.

가장 바람직하게는, 상기 시약은 예를 들면 라이신상에서 1차 아미노기에 또는 IFN-α의 N-말단에 부착된다. 상기 시약은 또한 예를 들면 세린상에서 하이드록실기에 부착된다. 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 3개의 PEG가 IFN-α에 콘쥬게이트될 수 있다.

가장 바람직한 시약은 하기 화학식 3의 화합물이다:

상기 식에서,

2개의 모노메톡시 PEG(m-PEG) 쇄 모두는 카바메이트(우레탄) 결합을 통해서 라이신에, 즉 α 및 ε아미노기에서 하나에 연결되고, 라이신 카복실기는 숙신이미딜 에스테르로 활성화된다.

이러한 시약은 R이 저급 알킬이고 바람직한 n을 갖는 시약에 적용가능한 공지된 절차[몬파르디니(Monfardini) 등, "A branched monomethoxypoly(ethylene glycol) for protein modification", Bioconjugate Chem. 6: 62, 1995]에 따라 종래의 방법에 의해 달성될 수 있다. 이러한 시약은 쉬어워터 폴리머스, 인크.(Shearwater Polymers, Inc. ; 미국 알라바마주 헌트스빌 소재)로부터 수득될 수 있다. 바람직한 PEG의 평균 분자량은 약 20,000 돌턴으로서, PEG2-NHS으로 약 40,000 돌턴의 총 PEG 질량을 제공한다(다른 분자량은 상기 통상적인 방법에 의해 상기 화학식의 시약을 위한 PEG-알콜 출발 물질에 대해 변화하는 n에 의해 수득될 수 있다).

바람직한 페길화-IFN-α 콘쥬게이트는 하기 화학식 4를 갖는다:

상기 식에서,

R 및 R'는 독립적으로 저급 알킬이고;

X는 NH 또는 O이고;

n 및 n'은 600 내지 1500의 합계를 갖는 정수이고;

상기 콘쥬게이트중 폴리에틸렌 글리콜의 평균 분자량은 약 26,000 돌턴 내지 약 66,000이다.

가장 바람직한 것은 하기 화학식 5의 페길화 인터페론-α이다:

상기 식에서,

n 및 n'는 독립적으로 420 또는 520이다.

이러한 페길화 IFN-α 콘쥬게이트는 예를 들면 본원에서 참조로서 도입한 유럽 특허 출원 제 809996 호에 공지되어 있다.

본 발명을 실행하기 위해서, IFN-α및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 간 질병을 앓고 있는 환자에게 투여한다.

특히, 본 발명에 개시된 바와 같은 IFN-α및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체는 바이러스 감염, 특히 만성 C형 간염을 치료하기 위해 효율적이다.

본 발명에 따르면, IFN-α및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 투여하여 각각의 성분을 개별적으로 투여하였을 때보다 만성 C형 간염의 치료 효과를 향상시킨다. 상승 효과는 지속적인 반응을 초래한다. "지속적 반응"이란 말초혈중 HCV-RNA의 카피로서 설명된 말초혈중 HCV의 양이 예를 들면 2가지 성분의 투여 완료 후 24주째 측정시 100 카피/㎖ 미만임을 의미한다.

ml당 HCV-RNA의 카피로서 설명되는 말초혈중 HCV의 양은 공지된 방법에 의해 결정된다. 상기 양을 결정하기 위한 생체내 진단 키트가 시판중이며, 예를 들면 엠플리코(등록상표) HCV 모니터 테스트[Amplicor(등록상표) HCV Monitor Test](1000카피/ml에 감응성인 정량 시험), 엠플리코(등록상표) HCV 테스트(100카피/ml에 감응성인 정성 시험), 코바스 엠플리코(등록상표) C형 간염 테스트[Cobas Amplicor(등록상표) Hepatitis C Virus Test](100 카피/ml에 감응성인 자동화 정성 시험), 및 코바스 엠플리코(등록상표) HCV 모니터 테스트(1000 카피/ml에 감응성인자동화 정량 시험)(각각의 시험은 미국 뉴저지주 브렌치버그 소재의 로슈 다이아그노스틱 시스템즈, 인크.(Roche Diagnostic Systems, Inc.)로부터 입수함). 상기 양을 측정하기 위한 바람직한 방법은 하기 실시예에서 설명한다.

IFN-α 또는 페길화 IFN-α의 주사 용액을 상기 환자에게 비경구적으로, 바람직하게는 피하 주사(sc) 또는 근육내 주사(im)에 의해 투여한다. 바람직하게는, MPA의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 환자에게 경구 단위 투여 형태, 더욱 바람직하게는 캡슐, 환약, 봉지 또는 정제 형태로 IFN-α 또는 페길화 IFN-α의 비경구 투여와 관련하여 투여한다.

물론, 비강내 분무, 경피적, 좌제, 서방성 투여 형태 등과 같이 기타 모든 의약의 투여 형태가 가능하다. 활성 성분을 파괴하지 않으면서 적절한 투여량이 전달되는 한 임의의 투여 형태가 작용할 것이다.

본 발명의 성분은 C형 간염 감염의 심각성을 감소시키는데 효과적인 임의의 양으로 임의의 지속시간 동안 투여된다.

일반적으로, 제 1 성분 및 제 2 성분은 약 24 내지 약 72주의 기간 동안, 바람직하게는 약 24 내지 약 48주, 가장 바람직하게는 약 48주동안 동시에 투여되는 것이 바람직하다.

일반적으로, 주사 용액의 활성 성분(IFN-α또는 페길화 IFN-α)에 대한 투여량은 체중의 약 0.5 내지 약 3.6㎍/㎏이고, 1주당 약 1회 투여된다. 일반적으로, MPA의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 투여량은 매일 투여로 약 3 내지 약 40mg/㎏, 바람직하게는 약 5 내지 약 36mg/㎏, 가장 바람직하게는 약 12 내지약 25mg/㎏이다. 상기 투여량은 환자의 요구, 및 치료에 대한 환자의 반응에 따라 본원에 진술된 것보다 더 낮거나 높도록 의사에 의해 변동될 수 있다.

상기 투여량은 환자의 요구사항에 따라 의사에 의해 결정된 임의의 투여 스케쥴에 따라 투여될 수 있다. 예를 들면, 2개의 성분 각각의 투여량은 단일 또는 분할 투여 형태로 투여될 수 있다.

치료효과량의 IFN-α또는 PEG IFN-α와 치료효과량의 MPA 또는 그의 전구체 또는 염중 하나(예를 들면, MMF)의 조합은 동시에, 부분적으로 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 치료효과적인 MPA 또는 전구체 또는 염중 하나(예를 들면, MMF)는 치료효과량의 IFN-α또는 PEG IFN-α과 함께 환자에게 투여될 수 있고, 즉 IFN-α또는 PEG IFN-α투여량을 환자가 MPA 또는 전구체 또는 염중 하나(예를 들면, MMF)의 투여량을 수용하는 동일 또는 상이한 기간동안 투여할 수 있다.

본 발명에 따르면, C형 간염을 치료하는데 유용한 키트가 제공된다. 상기 키트는 제 1 구성요소 및 제 2 구성요소를 포함한다. 상기 제 1 구성요소는 활성 성분의 하나 이상의 경구 단위 투여 형태를 포함하되, 각 단위는 약 250 내지 약 2000mg(바람직하게는 500 내지 1000mg)의 활성 성분을 함유하고, 상기 활성 성분은 MPA의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체이다. 상기 제 2 구성요소는 단일의 주사 용액 투여량 또는 다수의 주사 용액 투여량을 함유하는 바이알 또는 일련의 바이알을 포함하되, 각각의 투여량은 약 40 내지 약 270㎍(바람직하게는 180㎍)의 IFN-α또는 페길화 IFN-α 콘쥬게이트를 활성 성분으로서 함유한다.

바람직하게는, 상기 제 1 구성요소는 환자가 약 1 내지 약 4주 동안 활성 성분을 1일당 약 2g 투여할 수 있는 충분한 수의 단위를 함유하고 상기 제 2 구성요소는 환자가 약 1 내지 약 4주 동안 IFN-α또는 IFN-α콘쥬게이트를 1주당 약 180㎍ 투여할 수 있도록 충분한 수의 투여량을 함유한다.

바람직하게는, 제 1 구성요소의 활성 성분은 하기 화학식 2를 갖는 미코페놀레이트 모페틸의 전구체이다:

화학식 2

상기 식에서,

Y는이고;

Z는 수소 또는 -(CO)R이되, R은 저급 알킬 또는 아릴이다.

가장 바람직하게는, 제 1 구성요소의 활성 성분은 하기 화학식 2의 화합물이다:

화학식 2

상기 식에서,

Y는이고;

Z는 수소이다.

바람직하게는, 각 주사가능한 용액 투여의 활성 성분은 페길화 IFN-α2A 콘쥬게이트, 더욱 바람직하게는 하기 화학식 4의 페길화 IFN-α2A 콘쥬게이트이다:

화학식 4

상기 식에서,

R 및 R'는 독립적으로 저급 알킬이고;

X는 NH 또는 O이고;

n 및 n'는 600 내지 1500의 합계를 갖는 정수이고;

상기 콘쥬게이트중 폴리에틸렌 글리콜의 평균 분자량은 약 26,000 돌턴 내지 약 66,000 돌턴이다.

가장 바람직하게는, 각 주사 용액 투여의 활성 성분은 하기 화학식 5의 페길화 IFN-α2A 콘쥬게이트이다:

화학식 5

상기 식에서,

n 및 n'는 독립적으로 420 또는 520이다.

본 발명은 본 발명을 제한없이 설명하는 하기 실시예에 나타낸 바와 같은 대조 임상 시험에 의해 예시될 수 있다.

환자

60명의 환자를 치료한다. 모든 환자는 HCV의 혈청학적 증거를 갖고 2000 카피/㎖ 이상에서 정량가능한 혈청 HCV-RNA를 가지며, 시험 의약 투여의 개시 전 35일 기간 동안 증명된 상승된 혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 활성을 갖고, 시험 의약 투여 개시 전 24개월 안에 수득된 생체검사상에 만성 HCV 감염과 일관성을 갖는 만성 간 질병을 갖는다.

환자는 다른 형태의 간 질병(예를 들면 간 경변), 빈혈, 간세포성 암, 기존의 심한 우울증 또는 기타 정신의학적 질병, 심장병, 신장병, 발작 이상 또는 심한 망막병증은 가져서는 안된다.

의약 배합물

배합물 1

정제 배합물

성분	mg/정제
MMF	500.00
미세결정성 셀룰로즈	244.00
크로스카멜로즈 나트륨	32.50
포비돈 K90	24.40
마그네슘 스테아레이트	12.20
합계	813.10
정제된 물	충분량

배합물 2

성분	㎖당 단위 배합량
PEG 인터페론 α-2A 벌크 용액¹	360g
염화나트륨²	8.0g
벤질 알콜	10.0mg
나트륨 아세테이트 트리하이드레이트	2.617mg
아세트산(빙초산)²	0.0462mg
폴리소르베이트 80	0.05mg
나트륨 아세테이트 3수화물 10%³	pH 6.0 0.2까지 충분량
아세트산 10%³	pH 6.0 0.2까지 충분량
주사용 물⁴	1.0㎖까지 임의량(1.004g⁴)
¹벌크 PEG-IFN은 20 mM 나트륨 아세테이트중 수용액으로서 공급되고, pH 6에서 완충되고 50 mM 염화나트륨을 함유한다; 필요량은 벌크 의약 물질의 실제 단백질 함량 및 실제 밀도를 사용하여 계산된다. PEG-IFN의 이론적 단백질 함량은 1.3mg/㎖이고 이론적 밀도는 1.002 g/㎖이다.²이미 벌크 의약 물질중에 포함된 염화나트륨 및 나트륨 아세테이트 및 빙초산의 양에 대해 보정이 이루어져야 한다.³상이한 농도의 등가량이 사용될 수 있다.⁴의약 제품 용액의 밀도(20℃)는 1.004g/㎖이다.

치료

각각의 환자에게 48주 동안 1일당 2회로 배합물 1을 경구투여한다. 동시에, 각각의 환자에게 48주 동안 주 1회로 배합물 2를 피하주사로서 투여한다.

1차 효능인자:

1차 효능 인자는 지속적 바이러스 반응률(즉, 24주 치료-자유 추적 기간의 완료시 HCV-RNA가 감지되지 않는 것)이다(<100카피/㎖).

HCV-RNA를 감지하기 위해, HCV-RNA를 카오트로프제를 사용하여 바이러스 입자의 용해에 의해 혈청 또는 플라즈마로부터 우선 단리한 후, 알콜을 사용하여 RNA를 침전시킨다. 제 2 타켓 서열(표준)을 용해제를 사용하여 도입한다. 바람직하게는, 표준은 비-감염성이고, HCV의 타켓 서열과 동일한 1차 결합 영역을 갖는 351뉴클레오티드 시험관내 전사된 RNA 분자이다. 바람직하게는, 표준은 KY78 및 KY80 프라이머 결합 영역을 함유하고 HCV 타겟 RNA와 동일한 길이(244 염기) 및 염기 조성의 생성물을 생성한다. 표준 엠플리콘의 프로브 결합 영역은 증폭되어 HCV 타켓 엠플리콘으로부터 표준 엠플리콘을 차별화시킨다. 표준은 시험편 제조, 역전사, 증폭 및 감지 단계를 통해 달성된다. 표준은 증폭 과정에 위해 억제 및 조절의 효과를 보상하여 HCV-RNA의 정확한 정량화를 가능케한다.

HCV에 대한 타겟 RNA 서열의 선택은 다양한 HCV 유전형중 최대 보존을 나타내는 HCV 게놈 안에 영역의 인식에 달려있다. HCV 게놈의 5'-비번역된 영역은 공지된 HCV 유전형중 RNA 서열의 최대 보전을 갖는 것으로 나타났다. 바람직하게는, HCV 게놈의 매우 높게 보전된 5'-비번역된 영역 안에서 244 뉴클레오티드의 서열을 정의하기 위해 프라이머 KY78 및 KY80이 사용된다.(Young, K., Resnick, 및 Myers, T., 1992. Detection of Hepatitis C Virus RNA by combined reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay, Journal of Clinical Microbiology 31: 882-886). 캡쳐 프로브 서열 및 프라이머 서열은 5'-비번역된 영역 안에서 가장 잘 보존된 도메인에 위치한다(Bukh, J., Purcell, R. H., 및 Miller R. H., 1992. Sequence analysis of the 5'noncoding region of hepatitis C virus, Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 89: 4942-4946).

역전사 및 증폭 반응은 열안정한 재조합 효소 써무스 써모필루스 DNA 폴리머라제(Thermus thermophilusDNA Polymerase; rTth pol)로 수행된다. 망간의 존재하에 적절한 완충 조건하에서, rTth pol은 역 트랜스크립타제 및 DNA 폴리머라아제활성을 모두 갖는다. 이는 동일한 반응 혼합물중 역전사 및 PCR 증폭을 모두 허용한다.

가공된 시험편을 모든 역전사 및 PCR 증폭이 발생하는 반응 튜브중 증폭 혼합물에 첨가한다. 하류 또는 안티센스 프라이머(KY78)은 5' 말단에서 바이오티닐화되고; 업스트림 또는 센스 프라이머((KY80)는 바이오티닐화되지 않는다. 반응 혼합물을 가열하여 다운스트림 프라이머를 HCV 타켓 RNA로 구체적으로 어닐링하고 HCV 표준 RNA로 어닐링되도록 한다. 데옥시아데노신, 데옥시구아노신, 데옥시시티딘 및 데옥시유리딘(티미딘 대신) 트리포스페이트을 비롯한 과량의 데옥시뉴클레오사이드 트리포스페이트(dNTP)의 존재하에, rTth pol은 RNA 타켓과 상보적인 DNA 스트랜드(cDNA)를 형성하는 어닐링된 프라이머를 연장시킨다.

하기 HCV 타겟 RNA 및 HCV 표준 RNA의 역전사에 뒤이어, 반응 혼합물을 가열하여 RNA:cDNA 하이브리드를 변성시키고 프라이머 타겟 서열을 노출시킨다. 혼합물이 냉각됨에 따라, 업스트림 프라이머(KY80)는 구체적으로 cDNA 스트랜드로 어닐링되고, rTth pol은 프라이머를 연장시키고 제 2 DNA 스트랜드가 합성된다. 이로써 PCR의 제 1 사이클을 완성하고 HDV 및 표준 RNA의 타겟 영역의 이중-스트랜드 DNA 카피를 수득한다. 반응혼합물을 다시 가열하여 생성된 이중-스트랜드 DNA를 분리하고 프라이머 타겟 서열을 노출시킨다. 혼합물이 냉각됨에 따라, 프라이머 KY78 및 KY80은 타겟 DNA로 어닐링한다. 과량의 dNTP의 존재하에 RTth pol는 타겟 주형을 따라 어닐링된 프라이머를 연장시켜 엠플리콘으로 명명되는 244 염기쌍 이중 스트랜드 DNA 분자를 생성한다. 이러한 방법을 사이클의 지정된 수만큼 반복하고, 각각의 사이클은 엠플리콘 DNA의 양을 효과적으로 2배화한다. 증폭은 프라이머들 사이의 HCV 게놈 영역에서만 발생하고, 전체 HCV 게놈은 증폭되지 않는다.

임상 시험편으로부터 타겟 핵산의 선택적 증폭은 우라실-N-글리코실라아제, UNG 및 데옥시유리딘 트리포스페이트(dUTP)를 사용하여 달성한다. 우라실-N-글리코실라아제, 즉 UNG는 데옥시유리딘을 함유하는 DNA 스트랜드의 파괴를 인식하여 촉매하되, 티미딘을 함유하는 DNA는 아니다. 데옥시유리딘은 천연적으로 발생하는 DNA중에는 존재하지 않고, 다만 마스터 믹스(Master Mix) 시약중 dNTP중 하나로서 티미딘 트리포스페이트 대신 데옥시 유리딘 트리포스페이트의 사용에 기인하여 엠플리콘중 항상 존재한다. 따라서, 엠플리콘만이 데옥시유리딘을 함유한다. 데옥시유리딘은 타겟 DNA의 증폭 전에 오염 엠플리콘을 우라실-N-글리코실라아제, 즉 UNG에 의해 파괴되기 쉽게 만든다. 마스터 믹스 시약중에 포함된 우라실-N-글리코실라아제, 즉 UNG는 C-1 위치에서 데옥시리보즈 쇄를 열어 데옥시유리딘 잔기에서 데옥시유리딘을 함유하는 DNA의 절단을 촉매한다. 마스터 믹스의 알칼리성 pH에서 제 1 열적 순환 단계에서 가열될 때, 엠플리콘 DNA 쇄는 데옥시유리딘의 위치에서 잘라져서 DNA를 비-증폭성으로 만든다. 우라실-N-글리코실라아제, 즉 UNG는 55℃ 이상의 온도에서, 즉 열적 순환 단계를 통해 불활성이고, 따라서 타겟 엠플리콘을 파괴하지 않는다. 다음 증폭시, 임의의 잔사성 효소를 변성 용액을 첨가하여 변성시켜 임의의 타겟 엠플리콘의 분해를 방지한다. 우라실-N-글리코실라아제, 즉 UNG는 PCR당 데옥시유리딘-함유 HCV 엠플리콘의 10³카피 이상 불활성화시키는 것으로입증되었다.

PCR 증폭에 이어, HCV 엠플리콘 및 표준 엠플리콘을 변성 용액을 부가하여 화학적으로 변성시켜 단일-스트랜드 DNA를 형성한다. 변성 엠플리콘의 분취액을 첨가하여 HCV-특이적(예를 들면, KY 150) 및 표준-특이적(예를 들면, SK 535) 올리고뉴클레오티드 프로브로 피복된 마이크로웰 플레이스(MWP)의 웰을 분리한다. HCV 및 표준 엠플리콘을 MWP-결합된 올리고뉴클레오티드 프로브에 하이브리드화에 의해 각각 HCV 및 표준 웰에 결합시킨다. 정량적 결과를 넓은 동적 범위에 걸쳐 달성하기 위해, 변성된 엠플리콘의 일련의 희석으로 MWP중에서 분석한다.

하이브리드 반응 후, MWP를 세척하여 임의의 비결합된 물질을 제거하고 아비딘-호스라디쉬(Avidin-horseradish) 퍼옥시다제 콘쥬게이트를 각각의 MWP 웰에 첨가한다. 아비딘-호스라디쉬 퍼옥시다제 콘쥬게이트는 MWP에 결합된 타겟-특이적 올리고뉴클레오티드 프로브(HCV 또는 표준)에 의해 캡쳐된 비오틴-표지화 엠플리콘에 결합한다. MWP를 다시 세척하여 미결합된 콘쥬게이트를 제거하고 수소 퍼옥사이드 및 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)를 함유하는 기질 용액을 웰에 첨가한다. 수소 퍼옥사이드의 존재하에, 결합된 호스라디쉬 퍼옥시다제는 TMB의 산화를 촉매하여 착색된 콤플렉스를 형성한다. 상기 반응은 약산을 부가함으로써 종결되고 광학 밀도는 자동화 마이크로웰 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 측정된다.

선형 평가 범위 안에서, MWP의 각각의 웰에서 광학 밀도(OD)는 웰 중의 HCV 엠플리콘 또는 표준 엠플리콘의 양에 비례한다. 계산된 총 OD는 각각 역전사/PCR 증폭 반응에 존재하는 HCV RNA 또는 표준 RNA의 양에 비례한다. 각 시험편중 HCVRNA의 양은 하기 수학식 1을 사용하여 총 표준 OD에 대한 총 HCV OD의 비율 및 표준 RNA 분자의 입력 수로부터 계산된다:

상기 식에서,

총 HCV OD는 HCV 엠플리콘에 대해 계산된 총 OD이고;

총 QS OD는 QS 엠플리콘에 대해 계산된 총 OD이고;

입력 HCV QS 카피/PCR은 각 반응에서 QS의 카피 수이고;

200은 카피/PCR을 카피/㎖로 전환시키기 위한 인자이다.

상기 실시예에 따라 2개의 배합물을 투여함으로써 치료된 환자의 20% 이상이 말초혈중 존재하는 HCV-RNA의 양을 치료 완료 후 24주째 100카피/㎖미만으로 감소시킬 수 있었음이 예기치 않게 밝혀졌다.

Claims

간 질병 환자 치료용 의약의 제조에 사용하기 위한, 치료효과량의 IFN-α 또는 PEG-IFN-α와 치료효과량의 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 조합의 용도.
제 1 항에 있어서,

미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 충분한 효과량이 1일당 약 250 내지 약 2000mg인 용도.
제 1 항에 있이서,

IFN-α의 충분한 효과량이 주 3회 투여되는 3 내지 6백만 IU(International Unit)인 용도.
제 1 항에 있어서,

PEG-IFN-α의 충분한 효과량이 주 1회 투여되는 약 40 내지 270㎍인 용도.
제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 있어서,

IFN-α이 IFN-α2A인 용도.
제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서,

간 질병이 바이러스 감염인 용도.
제 6 항에 있어서,

바이러스 감염이 만성 C형 간염인 용도.
제 1 항에 있어서,

충분한 양의 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체가 경구적으로 투여되는 용도.
제 1 항에 있이서,

충분한 양의 IFN-α 또는 PEG IFN-α가 비경구적으로 투여되는 용도.
제 1 항 내지 제 9 항중 어느 한 항에 있어서,

치료효과량의 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 일부가 우선 투여된 후, 그 나머지와 치료효과량의 IFN-α 또는 PEG-IFN-α의 조합이 투여되는 용도.
제 1 항 내지 제 9 항중 어느 한 항에 있어서,

활성 성분으로서 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 바이러스감염의 심각성을 감소시키는 치료효과량으로 함유하는 약학 조성물로 이루어진 제 1 성분 및 활성 성분으로서 IFN-α 또는 PEG-IFN-α를 바이러스 감염의 심각성을 감소시키는 치료효과량으로 함유하는 주사 용액으로 이루어진 제 2 성분이 환자에게 소정의 기간에 걸쳐 동시에 투여되는 것을 포함하되, 상기 성분들이 적어도 환자의 말초혈중에 존재하는 HCV-RNA의 양을 투여 기간 후 100 카피/㎖ 미만까지 감소시키기에 충분한 기간에 걸쳐 동시에 투여되는 용도.
간 질병의 치료에 동시에, 부분적으로 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 결합된 제제로서 IFN-α 또는 PEG-IFN-α 및 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 함유하는 의약.
제 12 항에 있어서,

IFN-α이 IFN-α2A인 의약.
제 12 항에 있어서,

PEG-IFN-α가 PEG-IFN-α2A인 의약.
제 10 항 내지 제 14 항중 어느 한 항에 있어서,

간 질병이 바이러스 감염인 의약.
제 14 항에 있어서,

바이러스 감염이 만성 C형 간염인 의약.
(a) 활성 성분의 1개 이상의 경구 단위 투여 형태를 함유하되, 각각의 단위가 활성 성분으로서 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 약 250 내지 약 2000mg의 양으로 함유하는 제 1 구성요소; 및

(b) 단일의 주사 용액 투여량 또는 다수의 주사 용액 투여량을 함유하는 바이알 또는 일련의 바이알을 함유하되, 각각의 투여량이 활성성분으로서 IFN-α약 3 내지 6백만 IU 또는 PEG-IFN-α 약 40 내지 약 270㎍을 함유하는 제 2 구성요소를 포함하는 키트.
제 17 항에 있어서,

제 1 구성요소는 환자가 약 1 내지 약 4주 동안 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체를 1일당 약 2g으로 투여할 수 있도록 충분한 수의 단위를 함유하고, 제 2 구성요소는 환자가 약 1 내지 약 4주 동안 IFN-α또는 PEG-IFN-α를 1주당 약 180㎍으로 투여할 수 있도록 충분한 수의 투여량을 함유한 키트.
제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,

각각의 주사 용액 투여량의 활성 성분이 PEG-IFN-α2A인 키트.
치료효과량의 IFN-α또는 페길화 IFN-α와 치료효과량의 미코페놀산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구체의 조합을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 간 질병의 심각성을 감소시키기 위한 상기 질병으로 감염된 환자의 치료방법.