KR20000011142A

KR20000011142A - 피부의 상태를 개선시키는 방법

Info

Publication number: KR20000011142A
Application number: KR1019980709302A
Authority: KR
Inventors: 요셉 구베르니크; 게오르게 씨오카
Original assignee: 카렌 에이. 로우니; 이-엘 매니지먼트 코포레이션
Priority date: 1996-05-21
Filing date: 1997-05-13
Publication date: 2000-02-25
Also published as: US5905265A; JP2001508761A; TWI272635B; CN1123050C; IN183686B; CN1226338A; AU708049B2; AR048562A1; ZA974421B; KR100450713B1; WO1997044810A1; TW483020B; IL127182A0; CA2256348C; CA2256348A1; CO4850561A1; AU3002897A

Abstract

피부에 생리학적으로 수용 가능한 기질을 투여하여 피부 상태를 개선시키는 방법에 대해 상술하고 있는데, 이때 기질은 정보 에너지를 포함하는 자기 벡터 자장에 노출시킨 것이다.

Description

피부의 상태를 개선시키는 방법

동종요법(Homeopathy; 원리는 질병은 건강한 사람에게 질병을 일으키는 것과 같은 약물에 의해 치유되고, 치유제는 그 투여량이 적을수록 효과가 크다는 설)은 정보를 복사하는 것으로 설명을 할 수 있는데, 예를 들면 약초, 항체 또는 꽃가루등과 같은 천연물질의 분자구조에 존재하는 정보 또는 패턴의 기질에 상이한 진동수의 진동을 복합시키는 것이다. 복사된 정보 또는 결합된 패턴을 가지는 기질을 이용하여 원하는 반응을 일으킬 수 있다. 가령, 동종요법 약물에서 원하는 반응은 건초열 환자에서 알레르기 증상을 감소시키는 것이다.

미국 특허 5,138,172 (K. E. Werner Kropp)에서는 자기(magnetic) 벡터 전장에 기질을 노출시킴으로써 염 용액 또는 오일과 같은 기질에 정보 에너지를 제공하는 방법에 대해 설명을 하고 있다. 미국 특허 5,012,110(K. E. Werner Kropp)에서는 기질을 자석의 반대측 사이에 두어 합성 동종요법 기질을 제조하는 공정에 대해 상술하고 있다.

프랑스 특허 출원 공고번호 2,634,381(January 26, 1990 공고)와 WO 91.10450(July 25, 1991; J. J. C. Morez)에서는 물과 같은 물질에 동종치료요법 치료의 전자기 정보를 송신-발신수단에 의해 전달함으로써 다량의 동종요법 약물을 만드는 방법에 대해 상술하고 있다.

본 발명의 목적은 화장품에 이용할 수 있는 가령, 피부 상태를 개선시키기 위해 정보 에너지를 포함하는 생리학적 수용 가능한 기질을 이용하는 신규의 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 동종요법 약물에 이용할 수 있는 정보 에너지를 포함하는 생리학적 수용 가능한 기질을 이용하는 신규 방법을 제공한다.

발명의 요약

본 발명은 천연 약초에서 진동 패턴과 같은 정보 에너지를 발견한 후에 이를 주형화한 정보 에너지에 노출시킨 수용성 염 용액, 마사지 오일 또는 다른 제약학적 수용 가능한 담체와 같은 기질을 이용하는 것에 관계한다. 일반적으로, 기질은 기체, 액체, 고체 또는 액정상태가 될 수 있다. 수용성 염 용액에는 염화나트륨 및 염화 마그네슘 뿐만 아니라 철 또는 칼슘이온이 용해된 상태로 포함될 수 있다.

정보 에너지를 포함하는 기질을 이용하여 피부에 이를 국소적으로 투여하면 피부 상태를 개선시킬 수 있다. 피부 상태라 함은 건조한 피부, 제로시스(zerosis), 어린선(각화이상), 비듬, 붉은 점, 각화증, 흑피증, 흑자, 검버섯, 짙은 흑자, 주름, 잡티, 피부 라인, 지성 피부, 좌창, 사마귀, 습진, 소양증 피부, 건선, 염증성 피부염, 장애성 케라틴화반응, 나이가 들면서 피부에 변화, 세안, 컨디셔닝 또는 치료를 요하는 손톱 또는 피부, 샴푸 또는 컨디셔닝을 요하는 두발 또는 두피 등을 말하는 것이나 이에 국합시키지는 않는다.

본 발명은 정보 에너지를 포함하는 생리학적 수용 가능한 기질을 세포와 접촉시킴으로써 사람 피부의 섬유아세포에 프로린 수용을 증가시키는 특별한 방법을 제공한다.

프로린 수용을 증가시킨다는 것은 이들 세포들의 콜라겐 합성을 나타내는데-이는 피부 상태를 개선시키는 한 가지 방법으로 바람직한 미용상의 장점을 가진다. 진피에 위치하는 섬유아세포는 많은 기능을 하는데 예를 들면, 콜라겐, 엘라스틴, 글리코자미노글리칸(GAGS) 등을 합성한다. 프로린은 콜라겐 구조의 필수 부분이 되는 아미노산이다. 수용되는 프로린의 전체 양이 증가된다는 것은 전체 총 합성되는 콜라겐의 양이 증가된다는 것을 말하는 것이다. 콜라겐과 엘라스틴은 피부가 단단함과 탄성을 가질 수 있도록 하는 진피에서 발견할 수 있는 두 가지 단백질이다. 어린 건강한 피부에는 이들 두 가지 단백질이 풍부하다. 따라서, 나이가 들수록 총 콜라겐/엘라스틴의 양이 감소되고, 피부는 건강함을 상실하게 된다. 본 발명에 의해 진피에 콜라겐/엘라스틴의 양을 증가시키면 피부 상태를 개선시킬 수 있다.

본 발명은 또한, 정보 에너지를 포함하는 생리학적 수용 가능한 기질을 만드는 특정 방법을 제공하는 것이다. 일반적인 방법은 미국 특허 5,012,110과 5,138,172(K. E. Werner Kropp)에서 설명을 하고 있는데, 자기 벡터 자장이라고 불리는 자장에 특정한 모양으로 기질에 위치시키고 이에 원하는 진동수의 정보 에너지를 부여하는 것으로 구성된다. 기질에 정보 에너지를 제공하는 장치는

a) 두 개의 반대되는 자석, 각 자석 세트는 나란히 배열된 다수의 자석으로써, 이들은 N과 S극을 엇갈리며 배지하고, 기질이 반대되는 자석사이에 위치시키면 기질은 자기 벡터 자장에 노출되는 것이고;

b) 기질에 자기 벡터 자장에 위치하면 기질에 정보 에너지를 공급하는 수단으로 구성된다.

기질에 정보 에너지를 제공하는 방법은 다음과 같은 성질을 가지는 Wekroma 막대에 기질을 노출시켜 실행하는 것이다;

1200.7 항산화제 BHT N-아세틸시스테인 베타 카라텐

622 셀룰라이트

232 콜라겐 합성에 새로운 활력을 제공, 발란싱 로드

7509 자유 라디칼을 중화시킴

326 세균 생장을 방해

329 세균 생장을 방해

Fibro 1 섬유아세포를 자극

Fibro 2 섬유아세포를 자극

바람직하게는, 기질은 Wekroma Bio-Transer 장치를 이용하여 상기 Wekroma 막대에 노출시키고, 이때 기질은 적어도 한 번은 장치를 통과시킨다. 지질은 개별적으로 또는 복합하여 막대에 노출된다.

본 발명은 추가로 피부 상태를 개선시키는 방법을 제공하는데 이는 a) 자기 벡터 자장에 생리학적 수용 가능한 기질을 노출시키고; 그리고 b) 피부에 노출된 기질을 투여하는 것으로 구성된다. 따라서, 정보 에너지를 이용하지 않고도 상기 자석 세트와 같은 자기 벡터 자장에 기질을 노출시키면 피부 상태를 개선시킬 수 있는 처리된 기질을 얻을 수 있다. 자기 벡터 자장으로 기질을 처리하는 한 가지 바람직한 방법은 장치 내에 임의 Wekroma Rods없이도 Wekroma Bio-Transer 장치를 통하여 적어도 한 번 기질 통과시키는 것이다.

본 발명은 동종요법(homeopathic) 치료 분야에 관계하는데, 특히 화장품 및 의료계에 사용할 수 있는 정보 에너지를 가지는 생리학적 수용 가능한 기질을 이용하는 것과 연관이 있다.

도 1은 Wekroma-Vertrieb Schweiz에서 이용할 수 있는 Bio-Transer 장치를 나타낸 것이다.

도 2는 Wekroma Bio-Transer 장치로 처리한 신체의 부터스(Booster) 미네랄 수의 농도를 증가시켰을 때 사람 진피의 섬유아세포에 프로린 수준이 증가되는 것을 그래프로 나타낸 것이다.

기질을 정보 에너지에 노출시키는 방법은 미국 특허 5,138,172(K. E. Werner Kropp); 미국 특허 5,012,110(K. E. Werner Kropp); 프랑스 특허 출원 공고번호 2,634,381(J. J.C. Morez)와 WO 91,10450(J. J.C. Morez)에 상술하고 있다. 기질은 일반적으로 기체, 액체, 고체 또는 액정형이 된다.

정보 에너지에 수용성 용액을 노출시키는 한 가지 배열 방법은 Wekroma-Vertrieb Schweiz, Beat Lanz, 6313 Menzingen, Federal Republic of Germany에서 구입한 Wekroma Bio-Transer device를 이용하는 것이다. Wekroma에서 공급하는 Rod No.332를 도 1에서 나타낸 것과 같이 Wekroma Bio-Transer 장치에 둔다. 수용액을 포함하는 테스트 튜브를 채널 오프닝을 통하여 Wekroma Bio-Transer 장치를 통과시킨다. Wekroma Bio-Transer에 용액의 잔류시간은 중요한 것이 아니고, 일반적으로 1초 내지 몇 초간 범위가 된다. Wekroma Bio-Transer장치를 테스트 튜브가 통과할 때의 속도는 이들이 떨어지는 속도가 일반적이다. 잔류시간과 이를 통과하는 속도는 특정 조절된 속도에서 Wekroma Bio-Transer 장치를 통과하는 용액 펌프를 통하여 조절할 수 있다.

실시예 1

다음은 Wekroma Bio-Transer 장치로 처리된 수용성 염 용액을 이용하여, 사람의 진피 섬유아세포가 프로린 수용을 자극 받는지를 설명하는 것이다.

1. 멸균 증류수 99.2g에 염화나트륨 0.4g와 염화마그네슘 0.4g를 첨가한다. 고체가 용해되어, 맑은 용액을 얻을 때까지 실온에서 젓는다.

2. 제1단계에서 수득한 용액을 동일한 양으로 5등분하고, 멸균한 테스트 튜브에 보관한다.

3. 샘플 1은 처리를 하지 않고 내버려두고; 이는 다른 처리한 샘플과 비교용 기준으로 삼는다.

4. Rod No. 232-1(Wekroma에서 공급하는)을 도 1에서 보는 바와 같이 Wekroma Bio-Transer 장치에 둔다.

5. 멸균 염 용액을 포함하는 테스트 튜브중 한 개를 첨부된 도면에서 볼 수 있는 바와 같이 Wekroma Bio-Transer 장치를 통과시킨다. 이 과정은 2회 반복한다. 그 다음 샘플은 옆에 둔다.

6. 그 다음 Rod No. 232-1을 Wekroma Bio-Transer로부터 제거하고, Rod No. 232-2를 Wekroma Bio-Transer에 둔다. 멸균 염 용액을 포함하는 또 다른 테스트 튜브를 단계5에서와 같이 Wekroma Bio-Transer를 통과시킨다.

7. 나머지 테스트 튜브를 처리할 때까지 상기 과정을 반복한다; 샘플 4는 Rod No.232-3으로 처리를 하고, 샘플 5는 Rod No. 232-4로 처리를 한다. Rods No. 232-1, 2, 3, 4는 서로 동일한 복제품이다.

8. 모든 샘플은 프로린 수용 테스트를 하기 위해 제출한다.

결과를 보면, 모든 샘플에서 기준 것보다 증가되었음을 알 수 있다. Wekroma 처리된 염 용액(샘플 번호 2, 5)에서는 샘플 1(염 용액, Wekroma Bio-Transer에 의해 처리를 받지 않음)에 비해 통계학적으로 유의성이 있을 정도로 증가되었음을 알 수 있다.

프로린 수용 테스트의 프로토콜은 다음과 같다; 두 개의 합류 24-웰 플레이트로 샘플 용액을 처리한다. 처리안된 염 용액 기준은 1, 5, 10% 농도로 첨가한다. 동일 물질로 된 용액을 Rod No. 232로 통과시키고, 기준과 같은 동일 농도에서 검사한다. 각 샘플은 3회 검사를 한다. 샘플은 그 다음 각 1㎖씩 웰에 첨가하여 1μCi/㎖³H 프로린으로 라벨링한다. 플레이트는 5일 주기로 배양을 하고 각 주기에 처리 과정을 반복한다. 처리 배양이 완료되면, 플레이트는 총 단백질 수용에 대해 검사를 한다. 각 플레이트는 1㎖ 얼음에 냉각시킨 PBS로 처리하고, 그 다음 1㎖ MeOH로 세척을 하고 건조시킨다. 그 다음 단백질은 0.3M NaOH로 용해를 시키고, 0.5시간동안 부드럽게 교반을 시킨다. 상청액을 수득하고, 신틸란트(scintillant)에 첨가하고 액체 신틸레이션 카운터에서 측정을 한다.

실시예 2

다음은 Wekroma Bio-Transer 장치로 처리한 특수 미네랄 수를 이용하면 어떻게 사람의 진피 섬유아세포가 프로린의 수용을 자극을 받는지를 설명하고 있다.

표 1에 열거한 조성물을 가지는 신체 부스터 미네랄 수를 실시예 1에 설명한 것과 같이 Wekroma Rod No.232를 이용하여 Wekroma Bio-Transer 장치에서 처리하였다.

세 가지 합류 24-웰 플레이트는 미네랄 수를 첨가하기 전에 1μCi/㎖³H 프로린으로 라벨링한다. 테스트는 기준으로 처리 안된 미네랄 수를 이용하여 Wekroma Bio-Transer 장치로 치리된 신체 부터스 미네랄 수로 실행한다.

각 샘플은 0.1, 0.5, 1% 농도를 이용하여 3회 반복 검사를 한다. 플레이트는 전체 단백질에 대해 검사를 하기 전에 1주일간 배양을 한다. 이때 각 플레이트는 1㎖ 얼음 냉각시킨 PBS로 세척을 하고 그 다음 10분간 1㎖의 얼음 냉각시킨 TCA로 세척을 한다. TCA 세척은 각 5분간 2회 반복을 한다. 각 플레이트는 그 다음 1㎖ MeOH로 세척을 하고 건조한다. 단백질은 1% SDS를 포함하는 0.3M NaOH로 용해를 시키고 0.5시간동안 부드럽게 교반을 시킨다. 상청액은 수득하고, 신틸란트(scintillant)에 첨가하고 액체 신틸레이션 카운터에서 측정을 한다.

Wekroma 처리한 신체 부스터 미네랄 수에 대해서 단백질 량이 증가된 것을 알 수 있다. 약량에 따른 단백질의 증가가 나타났는데, 0.1%, 0.5%, 1% 농도에서 3, 17, 27% 각각 단백질이 증가되었다. 표 2와 도 2를 참고. 0.5%와 1% 약량에 대한 결과는 각각 p값이 0.02와 0.03의 통계학적 유의성을 가진다.

실시예 3

다음은 신체 부스터 미네랄 수 자체가 프로린 수용을 증가시키는 것을 설명한다. 그러나, 실시예 1에 나타낸 것과 같은 Rod No. 232를 이용한 Wekroma Bio-Transer 장치로 처리된 미네랄 수로 처리를 하면, 처리 안된 미네랄 수를 이용한 것과 비교를 하면 프로린 수용이 더 높은 것을 알 수 있다. Rod No. 1200.7을 이용한 Wekroma Bio-Transer로 처리한 이와 같은 미네랄 수로 처리하면 기준보다 프로린 수용이 증가되지 않았음을 알 수 있다.

두 개의 합류 24 웰- 플레이트는 다음과 같이 처리한다; Wekroma Rods Nos. 232와 1200.7로 구성된 신체 부스터를 다양하게 처리한다. 신체 부스터 기준은 1, 5, 10% 농도로 첨가된다. 동일한 물질된 용액을 Rod No. 232와 1200.7로 통과시키고, 기준과 같은 동일 농도에서 검사한다. 각 샘플은 3회 검사를 한다. 샘플은 그 다음 각 1㎖씩 웰에 첨가하여 1μCi/㎖³H 프로린으로 라벨링한다. 플레이트는 5일 주기로 배양을 하고 각 주기에 처리 과정을 반복한다. 처리 배양이 완료되면, 플레이트는 총 단백질 수용에 대해 검사를 한다. 각 플레이트는 1㎖ 얼음에 냉각시킨 PBS로 처리하고, 그 다음 1㎖ TCA로 세척을 하고 건조시킨다. TCA 세척은 각각 5분간 2회 반복한다. 그 다음 각 플레이트는 1㎖ NaOH로 세척을 하고, 건조시킨다. 그 다음 단백질은 0.3M NaOH로 용해를 시키고, 0.5시간동안 부드럽게 교반을 시킨다. 상청액을 수득하고, 신틸란트(scintillant)에 첨가하고 액체 신틸레이션 카운터에서 측정을 한다.

신체 부스터는 Rod 232로 처리를 하였을 경우에 약 52% 수용이 증가되었어 처리안된 집단보다는 12% 증가되었으며, 1200.7로 처리를 하면 처리 안된 집단과 평행하였다. Student's t-test에서는 모든 물질이 통계학적으로 유의성이 있는 것으로 나타났다. 표 3을 참고.

실시예 4

우리는 신체 부스터 미네랄 수가 프로린 농도를 증가시킴을 보여주는 초기 실험을 반복하였다. 임의 정보의 전달 없이도 신체 부스터 미네랄 수는 프로린을 수용하는 것이 1, 5, 10% 농도에서 각 44, 38, 33% 증가시키는 것을 알 수 있다. 표 4를 참고. 이 실험에서, Wekroma Rod No.1200.7로 전달된 정보는 10% 약량에서 통계학적으로 유의성을 가지고 증가되었음을 알 수 있다.

두 개의 합류 24-웰 플레이트는 Wekroma Rods. No.1200.7을 10회 통과한 신체 부스터 미네랄 수로 처리하였다. 신체 부스터 미네랄 수 기준은 1, 5, 10% 농도로 첨가되었다. 동일 물질로 된 용액을 Rod No. 232로 통과시키고, 기준과 같은 동일 농도에서 검사한다. TGF β(10ng/㎖)을 양성 기준으로 삼는다. 각 샘플은 3회 검사를 한다. 샘플은 그 다음 각 1㎖씩 웰에 첨가하여 1μCi/㎖³H 프로린으로 라벨링한다. 플레이트는 5일 주기로 배양을 하고 각 주기에 처리 과정을 반복한다. 처리 배양이 완료되면, 플레이트는 총 단백질 수용에 대해 검사를 한다. 각 플레이트는 1㎖ 얼음에 냉각시킨 TCA로 10분간 세척시킨다. TCA 세척은 각 5분간 2회 반복한다. 각 플레이트는 1㎖ MeOH로 세척하고, 건조시킨다. 그 다음 단백질은 0.3M NaOH로 용해를 시키고, 0.5시간동안 부드럽게 교반을 시킨다. 상청액을 수득하고, 신틸란트(scintillant)에 첨가하고 액체 신틸레이션 카운터에서 측정을 한다.

TGF β는 63%, 87%(P<0.003) 증가시키는 것으로 나타났다. 신체 부스터 미네랄 수는 1, 5, 10% 농도에서 기준으로 44, 38, 33% 증가된 것으로 나타났다. Rods. No. 1200.7(항산화제)로 처리한 신체 부스터 미네랄 수는 기준인 신체 부스터 미네랄 수와 비교를 하였을 때 5%와 10% 농도에서 각 6%와 16% 증가된 것으로 나타났다. Student's t-test에 따르면 모든 물질에 대해 처리안된 기준과 비교를 하면 통계학적 유의성이 있는 것을 알 수 있다. 기준인 신체 부스터 미네랄 수와 비교를 하면 통계학적 분석에서 0.05배 이상 값이 나타나는데, Rod No. 1200.7로 처리한 10% 농도는 배제한다.

실시예 5

다음의 실험은 Wekroma Rod 232로 처리한 염화나트륨과 염화마그네슘 수용액이 정상적인 사람 진피 섬유아세포("NHDF")에 의해 생산되는 콜라겐 생산을 증가시키는 것으로 이는 동일한 염 농도를 포함하나 Wekroma Rod 232로 처리 안된 기준 수용액과 비교를 하면 유의성이 있다는 것을 나타낸다. 콜라겐 생산을 증가시키는 처리된 수용액의 능력은 적어도 6개월간 저장하였을 때에도 유지된다.

탈이온수에 0.4% NaCl과 0.4% MgCl₂의 다섯 가지 염 용액을 만든다. 한 가지 용액(3249/1)은 Wekroma Rod 232로 처리하지 않고, 기준 용액으로 삼는다. 나머지 4가지 염 용액(3249/2-3249/5)는 각 Wekroma Rod, 232-1, 232-2, 232-3, 232-4로 처리한다. 이들 Wekroma Rod는 모두 서로 동일한 복제물이다. 다섯 가지 모든 염 용액은 NHDF 세포에 의한 콜라겐 생산에 임의 증가가 있는 지에 대해 세 가지 다른 약량(탈이온 수에서 1%, 5%, 10%)에서 검사를 하였다.

모든 샘플 용액에서는 기준(표 5의 변화 칼럼%)에 대해 다양한 정도로 증가되었음을 나타낸다. Wekroma 처리된 염 용액 3249/2와 3249/5에서는 배양물에서 NHDF 세포에 의해 방출되는 콜라겐 양이 3249/1에 비해 통계학적으로 유의성을 가지는 범위로 증가되었음을 나타낸다. 처리안된 기준 용액인 3249/1도 콜라겐 생산에서 증가를 나타내었다(기준에 비해).

Wekroma Rod 232로 처리한 4가지 염 용액을 봉하고, 6개월 동안 실온상태에서 저장을 하고, NHDF 세포에 의한 콜라겐 생산 능력이 증가되었는지에 대해 다시 검사를 하였다. 이들 "보관된 용액" 또한 Wekroma Rods 232으로 다시 처리한 저장한 용액("다시 만든 용액"이라는 라벨을 함)과 비교를 한다.

기준 염 용액, 보관 용액 및 다시 만든 용액의 검사 결과를 표 6에 나타내었다.

기준 염 용액(탈이온수 H₂O에 MgCl₂, NaCl₂) 10% 존재 하에서 콜라겐 수준이 강화되지 않았다. #232-Rod 4로 처리된 10% 다시 만든 용액을 포함하는 배지는 순수 콜라겐 수준이 36% 증가하였고, DNA에서는 6% 감소하였고, 이를 복합하면 기준 염 용액에 비해 콜라겐/DNA는 전체적으로 43% 증가되었다. 10% 농도로 존재할 경우에, #232-Rod 4로 처리한 유지 용액은 순수 콜라겐 수준이 14% 증가되었고, DNA 에서는 24% 감소되었고, 이를 복합하면 콜라겐/DNA에서는 전체적으로 50% 증가되었다. 대조적으로 양성 기준으로 이용한 Mimosa pudica는 순수 콜라겐 수준을 약 20% 증가시키고, DNA는 65% 감소시키고, 전반적으로는 콜라겐/DNA가 238% 증가되었다.

테스트한 샘플용액중에서, 콜라겐 양이 실제 증가를 나타낸 유일한 것은 #232-Rod 4로 처리한 다시 만든 용액과 #232-Rod 4로 처리한 유지 용액이다. 이들 샘플은 기준인 염용액에 비교해 각 43%와 50% 증가되었다. 이 검사에서, 양성 기준인 Mimosa pudica(@ 50㎍/㎖)은 기준에 비해 238% 증가되었다.

다음은 콜라겐과 DNA 수준을 결정하는 것에 이용된 방법을 계략적으로 나타낸 것이다.

NHDF 세포를 접종하고, Wekroma 샘플(n=3)로 처리하기 전에 96웰 플레이트에 합류하도록 생장시킨다. Mimosa pudica(@ 50㎍/㎖)를 첨가하여 양성 기준으로 삼고, 배지만은 음성 기준으로 한다. 플레이트는 37℃/5% CO₂에서 4일간 배양을 하고, 상청액은 수득하고, 실리콘 처리된 튜브에 -70℃에서 저장을 하고, 필요시에 ELISA 테스트를 다음과 같이 실행한다;

콜라겐 ELISA는 다음과 같이 실행을 한다;

적정량의 사람 콜라겐 타입 I으로 4℃에서 96웰 효소 면역검사에 사용하는 미량 적정 플레이트에 피복을 한다. 별도의 미량적정 플레이트에서(단백질 결합이 낮은), 동량의 1차 항체(토끼 항-사람 콜라겐 타입 I)을 콜라겐 표준 또는 미지샘플과 혼합을 하고, 4℃에서 하룻밤동안 반응을 하도록 한다(저해 단계). 콜라겐 표준 또는 미지의 샘플에 있는 콜라겐은 1차 항체와 결합을 할 것이고, 결합이 안된 1차 항원 일부가 남게 된다.

콜라겐 피복된 플레이트는 0.05% Tween-20(PBST)을 포함하는 인산염 완충된 염으로 강하게 세척을 하고, 건조시키고, 37℃에서 1.5시간동안 3% 소 혈청 알부민을 포함하는 PBS로 차단한다. 그 다음 차단 용액을 웰로부터 제거하고, 플레이트는 건조시키고, 1차 항체/표준 또는 미지의 용액을 포함하는 웰의 내용물을 차단된 콜라겐 피복된 플레이트로 옮긴다. 플레이트는 실온에서 30분간 배양을 하여, 1차 항에가 자유 콜라겐에 결합 안된 체로 남아 있는지, 콜라겐 피복된 플레이트에 결합되었는지를 알아본다. 30분 배양 후에, 용액은 버린다. 자유 콜라겐(표준 또는 미지의 샘플)에 결합된 1차 항체는 용액은 버려진 용액이 된다. 저해 단계동안에 콜라겐에 결합 안된 임의 1차 항체는 콜라겐 피복 웰에 자유롭게 결합을 한다. 표준 또는 미지의 용액에 콜라겐이 많을 경우에, 대부분의 1차 항체는 결합이 되어 콜라겐 피복 웰에 결합시키는데 이용을 할 수 없을 것이다.

콜라겐 피복 웰에 결합된 1차 항체는 염소 항-토끼 IgG-알칼리 포스포타제 공액된 항체를 첨가하고, 1.5시간동안 실온에서 배양을 하고, PBST로 강하게 세척을 하여 감지할 수 있다. 웰에 있는 알칼리 포스포타제는 기질로써 p-니트로페닐 포스페이트를 첨가하여 감지를 하고, 광학 밀도는 Molecular Devices microplate reader를 이용하여 405㎚에서 판독한다. 표준 곡선을 만들고, 미지 용액에서 콜라겐 수준은 이 표준 곡선으로부터 결정을 한다.

DNA 검사는 다음과 같이 실행한다. 물과 Hoechst 33258(DNA에 결합을 하여 형광을 발하는 염료)존재 하에 세포의 냉동/해동 용해를 실행하여 DNA 수준을 결정한다. 그 다음 플레이트는 분광광도계로 판독을 하고, 표준 곡선으로부터 DNA 수준을 계산한다.

실시예 6

임의 정보 에너지를 적용하기 않고도 자기 벡터 자장으로만 처리하여 기질을 만드는 것도 가능하다. 이는 장치 내에 임의 Rod 없이도 Wekroma Bio-Transer 장치를 통하여 용액을 통과시키면 된다. 이와 같이 처리된 기질은 피부에 바를 경우 피부 상태를 개선시킬 수 있다.

신체 부스터 미네랄 수의 조성물.

알루미늄	1-10%	몰리브데늄	0
비소	0	니오븀	0
안티몬	0	니켈	0.01-0.1%
바륨	0	인	0
베릴륨	0.01-0.1%	칼륨	0
붕소	0.01-0.1%	나트륨	0.1-1.0%
창연	0	실리콘	0.01-1.0%
카드늄	0	은	0
칼슘	10-100%	스트론튬	0.1-1.0%
크로미늄	0	탈탄	0
코발트	0	텔루르	0
구리	0.01-0.1%	주석	0
철	0.01-0.1%	티타늄	0.01-0.1%
납	0	텅스텐	0
리튬	0	바나디움	0
마그네슘	1-10%	아연	<0.01%
망간	1-5%	지르코늄	0
수은	0

물질		평균 DPM	변화율%	P 값
처리안된Fe H₂O	기준	29666.67
	0.10%	30266	2.020225
	0.50%	28933.33	-2.47191
	1%	31395	5.825843
처리된Fe H₂O	기준	26077.33
	0.10%	26974.33	3.439769	0.49
	0.50%	30508.67	16.99305	0.02
	1%	33053.33	26.7512	0.03

		dpm	avg. dpm	변화%	P 값	BB기준에서변화%
BB-기준	1%	105215110134113281	109543.3	34.19933	0.001
	5%	95021117246110378	107548.3	31.75529	0.02
	10%	957869919499801	98260.33	20.37675	0.001

BB-232	1%	111191125587134227	123668.3	51.50358	0.003	12.89444
	5%	122170110580120287	117679	44.16617	0.001	9.419641
	10%	95146104946100019	100037	22.55331	0.004	1.808122
BB-12007	1%	104023112237111857	109372.3	34.08511	0.002	-0.1561
	5%	109353108673121246	113090.7	38.64361	0.003	5.153342
	10%	10670910071082910	96776.33	18.64304	0.12	-1.51027

		dpm	avg,dpm	변화%	P-값	dpm minu avg. control	BB간의P 값
기준		363353092530414	32558
TGF B		512885815949600	53015.67	62.83453	0.003
BB-C	1%	487524494147082	46925	44.1274	0.003	161941238314524
	5%	493674180143797	44988.33	38.17904	0.01	16809924311239
	10%	394325054239763	43245.67	32.82655	0.06	6874179847205

BB-232	1%	419924641248420	45608	40.08231	0.01	94341385415862	0.58
	5%	459204464250013	46858.33	43.92264	0.005	133621208417455	0.54
	10%	441624327644348	43928.67	34.92434	0.004	116041071811790	0.86
기준		285782552433584	29228.67
TGF B		515485720655401	54718.33	87.20776	0.001
BB-1200.7	1%	444804290741449	42945.33	46.92881	0.005	15251.3313678.3312220.33	0.67
	5%	454155204145126	47527.33	62.6052	0.005	16186.3322812.3315897.33	0.14
	10%	498504983550472	50052.33	71.24398	0.001	20621.3320606.3321243.33	0.05

샘플 용액에 노출된 NHDF 세포에 의한 콜라겐의 합성

샘플	pg/㎖+/-S.D.	변화%	P 값
3249/1 10%	2.5+/-0.02	4.2
5%	2.7+/-0.03	12.5
1%	2.6+/-0.01	8.3
3249/2 10%	3.0+/-0.06	25	0.02
5%	2.8+/-0.07	17	0.1
1%	2.4+/-0.12	0	0.8
3249/3 10%	2.6+/-0.02	8.3	0.1
5%	2.7+/-0.06	12.5	0.2
1%	2.8+/-0.11	17	0.2
3249/4 10%	2.7+/-0.09	12.5	0.1
5%	2.7+/-0.09	12.5	0.8
3249/5 10%	3.5+/-0.04	46	0.002
5%	3.0+/-0.05	25	0.02
TBFβ	3.0+/-0.02	25
기준	2.4+/-0.01

보유 용액 및 새로 만든 용액에 노출된 NHDF 세포에 의한 콜라겐의 생산

샘플	콜라겐(㎍/㎖)	변화%	DNA(㎍/㎖)	변화%	콜라겐/DNA	변화%
Media	0.15+/-0.001		6.2+/-0.3		0.024
M. pudica	0.18+/-0.008	+20	2.2+/-0.1	-65	0.081	238
기준 염용액	0.14+/-0.006		5.0+/-0.11		0.028
#232 Rod 4 remake	0.19+/-0.015	+36	4.7+/-0.08	-6	0.040	+43
#232 Rod 4 retain	0.16+/-0.023	+14	3.8+/-0.09	-24	0.042	+50
#232 Rod 1 retain	0.15+/-0.012	+7	4.6+/-0.07	-8	0.033	+18
#232 Rod 2 retain	0.14+/-0.018	0	6.5+/-0.02	+30	0.021	-25
#232 Rod 3 retain	0.15+/-0.015	+7	5.2+/-0.07	+4	0.029	+3
#232 Rod 3 remake	0.16+/-0.01	+14	4.6+/-0.12	-8	0.035	+25
BQ RodBQ-DAT-C4	0.14+/-0.002	0	4.4+/-0.06	-12	0.032	+14

당업자는 여기에서 상술하지 않는 다른 구체예고 본 발명의 범위에 속함을 인지할 것이다. 따라서, 상세한 설명에 본 발명을 국한시키지 않음을 알 것이고, 본 발명은 다음의 청구범위에 한한다.

모든 언급한 문헌은 참고문헌으로 첨부한다.

Claims

피부 상태를 개선시키는 방법에 있어서,

a) 자기 벡터 자장에 생리학적으로 수용 가능한 기질을 노출시키고;

b) 노출된 기질을 피부에 투여하는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
피부 상태를 개선시키는 방법에 있어서,

a) 생리학적으로 수용 가능한 기질을 자기 벡터 자장에 노출시키고, 기질이 자기 벡터 자장에 노출되는 동안에 정보 에너지를 포함하는 기질을 만들기 위해, 기질에 정보 에너지를 직접 제공하고;

b) 정보 에너지를 포함하는 기질을 피부에 투여하는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
피부 상태를 개선시키는 방법에 있어서, 피부에 생리학적으로 수용 가능한 기질을 투여하고, 이때 기질은 자기 벡터 자장에 생리학적으로 수용 가능한 기질을 노출시켜 만드는 것을 특징으로 하는 방법.
피부 상태를 개선시키는 방법에 있어서, 정보 에너지를 포함하는 생리학적으로 수용 가능한 기질을 피부에 투여하고, 이때 기질은 자기 벡터 자장에 노출시켜, 기질이 자기 벡터 자장에 노출되는 동안에 기질에 정보 에너지를 직접 제공하는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 1, 2, 3 또는 4항에 있어서, 개선은 피부에 콜라겐 함량을 증가시키는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 1, 2, 3 또는 4항에 있어서 기질은 기체, 액체, 고체 또는 액정상태인 것을 특징으로 하는 방법.
제 6 항에 있어서, 기질은 액체 또는 액정상태인 것을 특징으로 하는 방법.
제 7 항에 있어서, 기질은 액체 상태인 것을 특징으로 하는 방법.
제 7 항에 있어서, 액체상태는 물로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 있어서 액체 상태는 염화나트륨과 염화마그네슘으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 있어서 액체 상태는 칼슘이온과 철이온으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 1, 2, 3 또는 4항에 있어서 자기 벡터 자장은 두 개의 반대되는 일련의 자석에 의해 만들어지고, 각 자석 세트는 N극과 S극을 번갈아 가면서 나란히 배열된 다수의 자석으로 구성되고, 이때 기질이 두 개의 반대되는 자석사이에 있는 동안에 자기 벡터 자장에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 12 항에 있어서, 기질은 적어도 한 번은 Wekroma Bio-Transer 장치를 통과하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 2 항 또는 4항에 있어서, 1200.7, 622, 232, 7509, 326, 329, Fibro1, Fibro2에서 선택된 적어도 한 개의 Wekroma Rods는 기질에 정보 에너지를 바로 공급하는데 이용되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 14 항에 있어서, 적어도 한 개의 Wekroma Rod No.232를 이용하여 기질에 정보 에너지를 바로 공급하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 15 항에 있어서, 기질은 자기 벡터 자장을 생성하는 Wekroma Bio-Transer 장치를 적어도 한 번은 통과시키고, 이 장치에는 적어도 한 개의 Wekroma Rd No. 232를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.