KR19990022176A - 특정 식품을 오염시키는 내열성 미생물의 검출 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 리보좀 유닛의 내부 전사 스페이서 (ITS) 상에 포함된 서열, 즉 비소클라미스 니베아에 대해서 ITS1 상에서 상응 서열 1 및 ITS2 상에서 상응 서열 2, 네오사르토리아 피스케리에 대해서 ITS1 상에서 상응 서열 3 및 ITS2 상에서 상응 서열 4, 지고사카로마이세스 베일리에 대해서 ITS1 상에서 상응 서열 5 및 ITS2 상에서 상응 서열 6을 프라이머로 사용하여 표적화된 미생물의 게놈 DNA의 증폭에 의한 비소클라미스 니베아, 네오사르토리아 피스케리 및 지고사카로마이세스 베일리의 검출 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 식품, 특히 과일 기재 식품에서 특정 식품을 오염시키는 내열성 진균 미생물의 신속한 검출 방법에 관한 것이다.
더 구체적으로, 연구된 미생물은 필라멘트성 진균인 비소클라미스 니베아 (Byssochlamyces nivea) 및 네오사르토리아 피스케리 (Neosartorya fischeri), 및 효모인 지고사카로마이세스 베일리 (Zygosaccharomyces bailli)이다.
이 식품 오염원들은 과일 기재 식품에서 발생되어서, 특히 비소클라마이스 니베아의 경우에는 식품에 플라스틱 또는 방부제 형태의 불유쾌한 표시를 남기고, 네오사르토리아 피스케리의 경우는 진균독의 부패 및 발생에 기인하고, 지고사카로마이세스 베일리는 기체를 형성한다.
이 미생물들은 특히 포자 형태이고, 식품 산업에서 사용되는 통상의 멸균 처리 후에도 지속될 수 있는 매우 높은 내열성을 보인다.
이 미생물들을 검출하는 현존 시험들은 선택 인자로서 필라멘트성 잔균의 내열성 또는 당업계에서 흔히 사용되는 벤조간과 같은 방부제에 대한 효모의 내성을 이용하여 선택적 배지의 시료를 변경하는 것으로 이루어진다. 그러나, 이러한 형태의 검출법은 배양, 상당히 긴 배양, 즉 몇일 내지 몇주 배양에 관여하고, 이들은 오염될 수 있는 식품의 장기간의 보관에 관여하기 때문에, 이는 이들을 식품 분야에서 실질적으로 사용할 수 없게 한다.
따라서, 이러한 미생물들의 매우 신속한 검출을 가능하게 하는 검출법에 대한 연구가 진행 중이고, 채취된 생성물이 다음 단계에서 계속 처리될 수 있는 지를 신속히 알아내기 위하여 최대 몇시간 내에 상기 시험을 수행할 수 있다.
따라서, 본 발명은 리보좀 유닛의 내부 전사된 스페이서 (ITS) 상에 포함된 한쌍의 서열, 즉
-비소클라미스 니베아에 대해서
- ITS1 상에서 상응 서열 1 및
- ITS2 상에서 상응 서열 2,
-네오사르토리아 피스케리에 대해서
- ITS1 상에서 상응 서열 3 및
- ITS2 상에서 상응 서열 4,
-지고사카로마이세스 베일리에 대해서
- ITS1 상에서 상응 서열 5 및
- ITS2 상에서 상응 서열 6
을 프라이머로 사용하여 표적화된 미생물의 게놈 DNA의 증폭에 의한 비소클라미스 니베아, 네오사르토리아 피스케리 및 지고사카로마이세스 베일리의 검출 방법을 제안한다.
ITS1 및 ITS2 서열에서, 더 구체적으로
- 비소클라미스 니베아에 있어서, 서열 7 및 8,
- 네오사르토리아 피스케리에 있어서, 서열 9 및 10,
- 지고사카로마이세스 베일리에 있어서, 서열 11 및 12가 선택될 것이다.
사용될 수 있는 증폭 방법 중에서, 소위 PCR (폴리머라제 연쇄 반응법)을 특히 사용할 것이다.
실시예에서 특히 보고된 시험은 이 프라이머들은 완벽하게 식별하여서, 목적하는 미생물과 매우 유사하고, 관련 미생물 간의 구별을 가능하게 한다.
또한, 본 발명은 과일 함유 시료를 예비처리하여서 포자 또는 세포를 방출 및 농축하고, Taq 폴리머라제의 길항제의 작용을 감소 또는 억압하고, 포자 또는 세포로부터 DNA를 추출하는 것으로 이루어진, 식품, 특히 과일 기재 식품, 더 구체적으로 딸기 기재 식품에서 상기 미생물들의 검출 방법에 관한 것이다.
더 구체적으로, 고체 생성물 함유 시료를 셀룰라제/헤미셀룰라제의 혼합물을 사용하여 처리하여서 이들을 액화한 후, 여과하고, DNA가 추출될 수 있는 세포 함유 생성물을 얻을 수 있는 조건 하에서 원심분리하였다.
시료는 종종 Taq 폴리머라제의 길항제를 함유하기 때문에, 페놀-클로로포름을 사용하여 시료를 희석하거나 또는 처리하고, 알코올로 침전시켜서 길항제의 활성을 감소시킬 수 있는 단계를 요구한다.
비록, 본 발명은 더 구체적으로 식품용이지만, 또한 식품과 전혀 관련되지 않은 다른 시료에 존재하는 미생물을 검출하는데에도 사용될 수 있다.
마지막으로, 본 발명은, 상기한 바대로, 프라이머 및 이 프라이머를 사용하는 검출용 키트에 관한 것이다.
본 발명의 다른 특징 및 잇점은 하기 실시예를 통해 나타날 것이다.
실시예 1- DNA의 추출 및 증폭 방법
(I) 5 mm2의 진균 균사체, 105의 진균 포자 또는 106의 효모 세포를 사용함:
- 스크류-탑 마이크로튜브 (1.5 ㎖의 에펜도르프형)에서 20 mM EDTA, 0.8% SDS를 함유하는 pH 8.5의 50 mM 트리스 완충액 200 ㎕에서 미생물을 현탁시키고, 여기에 유리 비드(직경이 0.25-0.5 mm) 100 ㎕를 가하고,
- 최대 진동수로 1분 동안 볼텍싱하고,
- 100℃(끓는 물)에서 15분 동안 혼합물을 인큐베이션하고,
* 포자 처리를 위하여, 볼텍싱 및 인큐베이션을 대신해서
- 액체 N2에서 동결시키고, 100℃에서 5분 동안 비등시키고,
- 액체 N2에서 재동결시키고, 100℃에서 10분 동안 비등시키고,
- 10,000 g에서 1분간 원심분리 (벤취 원심분리기)하고,
- 상등액을 회수하고,
- 상등액을 물로 10배 희석하였다.
이 희석된 상등액을 증폭에 직접 사용한다.
(II) 20 mM 트리스-HCl pH8.5, 16 mM (NH4)2SO4, 2.5 mM MgCl2, 150 ㎍의 소혈청 알부민, dNTP 각각 0.2μM 및 프라이머 올리고뉴클레오티드 각각 100 μM를 함유하는 최종 부피 25 ㎕에서 증폭을 수행하였다. Taq DNA 폴리머라제 (바이오텍, 바이오시스템사, 프랑스)의 2 유닛을 반응에 사용하였다. 증폭 반응을 페르킨 엘머 2400 열순환기 (페르킨 엘머사, 미국)에서 하기의 방법으로 수행하였다.
-지고사카로마이세스, 비소클라미스 및 네오사르토리아에 있어서,
· 94℃에서 15초
· 58℃에서 10초
· 72℃에서 20초
이 사이클을 30분 반복하였다. 이어서, 72℃에서 5분간 말단 연장하였다.
(III) 얻은 생성물을 1xTBE 완충액, 1 ㎍/㎖의 에티듐브로마이드, 0.8% 아가로즈의 성분을 지닌 전기영동 겔 상에서 이동시킨 후, UV 하에 가시화하였다.
실시예 2
검출용 균주와 유사한 다양한 균주에 대해서 본 발명에 따른 방법을 사용하여 얻은 결과는 청구된 일련의 프라이머에 의해 제공된 우수한 식별능을 보였고, 하기와 같다.
사용된 프라이머:
- 비소클라미스 니베아에 대해서 서열번호 7 및 8,
- 네오사르토리아 피스케리에 대해서 서열번호 9 및 10,
- 지고사카로마이세스 베일리에 대해서 서열번호 11 및 12.
아스퍼질러스 푸미가투스 (A. fumigatus)는 네오사르토리아 피스케리의 무성 (asexual) 형태이기 때문에, 프로브에 반응한다는 점에 유의한다.
네오사르토리아 피스케리에 대해 특이적인 프라이머 올리고뉴클레오티드
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 아스퍼질러스(Aspergillus) | 플로리포르미스(floriformis) | M 93 2663 | 57 ℃ | 음성 |
| 아스퍼질러스(Aspergillus) | 푸미가투스(fumigatus) | M 70 665 | 57 ℃ | 양성 |
| 아스퍼질러스(Aspergillus) | 푸미가투스(fumigatus) | M 88 2521 | 57 ℃ | 양성 |
| 비소클라미스(Byssochlamys) | 니베아(nivea) | M 90 1496 | 57 ℃ | 음성 |
| 비소클라미스(Byssochlamys) | 니베아(nivea) | M 93 2932 | 57 ℃ | 음성 |
| 에메리켈라(Emericella) | 니둘란스(nidulans) | M 88 2519 | 57 ℃ | 음성 |
| 에메리켈라(Emericella) | 니둘란스 변형 아크리스타타(nidulans var. acristata) | M 84 2558 | 57 ℃ | 음성 |
| 에메리켈라(Emericella) | 니둘란스 변형 덴타타(nidulans var. dentata) | M 84 2556 | 57 ℃ | 음성 |
| 에메리켈라(Emericella) | 니둘란스 변형 라타(nidulans var. lata) | M 68 1987 | 57 ℃ | 음성 |
| 에메리켈라(Emericella) | 니둘란스 변형 시누라타(nidulans var. shinulata) | M 84 9557 | 57 ℃ | 음성 |
| 유페니실륨(Eupenicillium) | 브레펠디아눔(brefeldianum) | M 89 2573 | 57 ℃ | 음성 |
| 유로티움(Eurotium) | 암스텔로다미(amstelodami) | M 50 142 | 57 ℃ | 음성 |
| 유로티움(Eurotium) | 암스텔로다미(amstelodami) | M 88 2536 | 57 ℃ | 음성 |
| 유로티움(Eurotium) | 레펜스(repens) | M 66 2534 | 57 ℃ | 음성 |
| 마리아네(Mariannae) | 엘레강스(elegans) | M 95 3777 | 57 ℃ | 음성 |
| 모나스커스(Monascus) | 루베르(ruber) | M 65 1079 | 57 ℃ | 음성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 페넬리아(fennelliae) | M 93 2982 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 페넬리아(fennelliae) | M 95 3781 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 페넬리아(fennelliae) | M 95 3780 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 슈도피스케리(pseudofischeri) | M 93 2986 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 슈도피스케리(pseudofischeri) | M 95 3784 | 57 ℃ | 양성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 피스케리 변형 스피노사(fischeri var. spinosa) | M 92 2924 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 피스케리 변형 스피노사(fischeri var. spinosa) | M 93 2935 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 히라츠카(hiratsukae) | M 95 3782 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 콰드리신타(quadricincta) | M 93 2984 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 콰드리신타(quadricincta) | M 95 3786 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 스파둘라타(spathulata) | M 93 2978 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 스파둘라타(spathulata) | M 93 2979 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 스트라메니아(stramenia) | M 93 2985 | 57 ℃ | 양성 |
| 네오사르토리아(Neosartoria) | 타테노이(tatenoi) | M 95 3783 | 57 ℃ | 양성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 카르네우스(carneus) | M 52 907 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 카르네우스(carneus) | M 95 3776 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 엘레강스(elegans) | M 79 1670 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 파리노수스(farinosus) | M 75 3028 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 푸모소-로제우스(fumoso-roseus) | M 52 597 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 인플라투스(inflatus) | M 57 1387 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 자바니쿠스(javanicus) | M 69 3302 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 자바니쿠스(javanicus) | M 90 2684 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 릴라시누스(lilacinous) | M 2689 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 릴라시누스(lilacinous) | M 70 3099 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 마르콴디(marquandii) | M 50 85 | 57 ℃ | 음성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 니페토데스(niphetodes) | M 79 3238 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 니페토데스(niphetodes) | M 95 3778 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 바리오티(variotii) | M 93 3701 | 57 ℃ | 음성 |
| 페실로마이세스(Paecilomyces) | 졸레니아(zolerniae) | M 93 3648 | 57 ℃ | 음성 |
| 페니실륨(Penicillium) | 크리소게눔(chrysogenum) | M 47 673 | 57 ℃ | 음성 |
| 페니실륨(Penicillium) | 이슬라디쿰(islandicum) | M 73 2233 | 57 ℃ | 음성 |
| 페니실륨(Penicillium) | 이슬라디쿰(islandicum) | M 73 2233 | 57 ℃ | 음성 |
| 페니실륨(Penicillium) | 푸르푸로게눔(purpurogenum) | M 90 2600 | 57 ℃ | 음성 |
| 페니실륨(Penicillium) | 바리아빌레(variabile) | M 78 3162 | 57 ℃ | 음성 |
| 페니실륨(Penicillium) | 비리디카툼(viridicatum) | M 88 2485 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 바실리포르미스(bacilliformis) | M 88 1497 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 바실리포르미스(bacilliformis) | M 88 2511 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 바실리포르미스(bacilliformis) | M 90 1493 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 바실리포르미스(bacilliformis) | M 90 2646 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 바실리포르미스(bacillisporus) | M 88 2511 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 플라부스(flavus) | M 83 1179 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 플라부스(flavus) | M 88 2481 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 플라부스(flavus) | M 89 1489 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 플라부스(flavus) | M 93 2944 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 헬리쿠스 변형 헬리쿠스(helicus var. helicus) | M 88 2510 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | 루테우스(luteus) | M 61 1858 | 57 ℃ | 음성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | sp. | M 92 2885 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | sp. | M 92 2887 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Talaromyces) | sp. | M 92 2888 | 57 ℃ | 음성 |
| 탈라로마이세스(Thermoascus) | 크루스타세우스(crustaceus) | M 88 2540 | 57 ℃ | 음성 |
파리 자연사 국립 박물관으로 부터 얻은 균주
지고사카로마이세스 베일리에 대해 특이적인 프라이머 올리고뉴클레오티드
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 칸디다(Cadndida) | 인콘스피쿠아(inconspicua) | M E 10 | 50 ℃ | 음성 |
| 칸디다(Cadndida) | 마그놀리아(magnoliae) | M E14 | 50 ℃ | 양성 |
| 칸디다(Cadndida) | 모기(mogii) | M 95 3795 | 55 ℃ | 양성 |
| 클라비스포라(Clavispora) | 루지타니아(lusitaniae) | M E9 | 50 ℃ | 음성 |
| 클라비스포라(Clavispora) | 루지타니아(lusitaniae) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
| 사이토플로바시듐(Cytofilobasidium) | ME 13 | 50 ℃ | 음성 | |
| 데바리오마이세스(Debaryomyces) | 한세니(hansenii) | SIAS | 59 ℃ | 음성 |
| 데바리오마이세스(Debaryomyces) | 한세니(hansenii) | M E18 | 50 ℃ | 음성 |
| 하이포피키아(Hypopichia) | M E6 | 50 ℃ | 음성 | |
| 클루이베로마이세스(Kluyvermyces) | 마르시아누스 변형 락티스(marxianus var. lactis) | M 95 3788 | 55 ℃ | 음성 |
| 클루이베로마이세스(Kluyvermyces) | 마르시아누스 변형 락티스(marxianus var. lactis) | M 95 3789 | 55 ℃ | 음성 |
| 클루이베로마이세스(Kluyvermyces) | 마르시아누스 변형 마르시아누스(marxianus var. marxianus) | M 95 3790 | 55 ℃ | 음성 |
| 클루이베로마이세스(Kluyvermyces) | 마르시아누스 변형 마르시아누스(marxianus var. marxianus) | M 95 3791 | 55 ℃ | 음성 |
| 클루이베로마이세스(Kluyvermyces) | 마르시아누스 변형 락티스(marxianus var. lactis) | P 8 | 57 ℃ | 음성 |
| 모니리엘라(Moniliella) | M E 2 | 50 ℃ | 음성 | |
| 피키아(Pichia) | 아모말라(anomala) | M E 12 | 50 ℃ | 음성 |
| 피키아(Pichia) | 아모말라(anomala) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
| 피키아(Pichia) | 페르만탄스(fermantans) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
| 피키아(Pichia) | 구일리에르몬디(guilliermondii) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 피키아(Pichia) | 구일리에르몬디(guilliermondii) | M E 17 | 50 ℃ | 음성 |
| 피키아(Pichia) | 파스토리스(pastoris) | M 95 3792 | 55 ℃ | 음성 |
| 피키아(Pichia) | 파스토리스(pastoris) | M 95 3793 | 55 ℃ | 음성 |
| 로도툴롤라(Rhodotulora) | 무실라기노사(mucilaginosa) | M E 15 | 50 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 바야누스(bayanus) | M 95 3796 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 바야누스(bayanus) | P 562 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 바야누스(bayanus) | P 563 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 캡슐라리스(capsularis) | M 95 3807 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | H 5035 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | H 5090 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | H 5130 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | H 5160 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | H 5200 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | H 5334 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | M E 16 | 50 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | P 1 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | P 575 | 57 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세레비지에(cerevisiae) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 엑시구스(exiguus) | M 95 3797 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 클루이베르(kluyver) | M 95 3798 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 루드위기(ludwigii) | M 95 3806 | 55 ℃ | 음성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 세르바지(servazii) | M 95 3799 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 스텔라우스(stellatus) | M 95 3803 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 스텔라우스(stellatus) | M 95 3804 | 55 ℃ | 음성 |
| 사카로마이세스(Saccharomyces) | 우니스포루스(unisporus) | M 95 3805 | 55 ℃ | 음성 |
| 시조사카로마이세스(Schyzosaccharomyces) | 폼베(pombe) | H 5096 | 57 ℃ | 음성 |
| 내삼투성 균주(Osmophilic strain) | H 11 077 | 57 ℃ | 음성 | |
| 내삼투성 균주(Osmophilic strain) | H 37 080 | 57 ℃ | 음성 | |
| 토룰라스포라(Torulaspora) | 델브루키(delbruckii) | M 95 3794 | 55 ℃ | 음성 |
| 토룰라스포라(Torulaspora) | 델브루키(delbruckii) | P L121 | 57 ℃ | 음성 |
| 토룰라스포라(Torulaspora) | 델브루키(delbruckii) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
| 트리코스포룸(Trichosporum) | 캐피타툼(capitatum) | SIAS | 50 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 90 2638 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 90 2639 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2895 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2896 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2897 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2899 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2900 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2901 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2902 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2903 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2904 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2905 | 55 ℃ | 양성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2906 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2907 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2908 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2909 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2911 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2912 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2913 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2914 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2915 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2916 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2917 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2918 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2920 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2921 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2922 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M 92 2923 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | M E 11 | 55 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 베일리(bailii) | PL443 | 58 ℃ | 양성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 비스포루스(bisporus) | DBVPG 6382 | 58 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 시드리(cidri) | DBVPG 6385 | 55 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 페르멘타티(fermentati) | DBVPG 6297 | 55 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 플로렌티누스(florentinus) | DBVPG 6186 | 55 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 마이크로엘립소이데스(microellipsoides) | DBVPG 6188 | 55 ℃ | 음성 |
| 속 | 종 | 균주 | T ℃ | PCR 반응도 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 므라키(mrakii) | DBVPG 6289 | 55 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 룩시(rouxii) | MUCL 30008 | 55 ℃ | 음성 |
| 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) | 룩시(rouxii) | SIAS | 58 ℃ | 음성 |
균주 공급원:
DBVPG: 페르기아 식물학과(Department of Plant Biology, Perugia) (이태리)
H: 호데베르(Heudebert Company) 사
M: 파리 자연 역사 국립 박물관 (Paris National Museum of Natural History)
MUCL: 루베잉 카톨릭 대학의 진균 컬쳐 콜렉션 (Fungus Culture Collection of the Catholic University of Louvains)
P: 페르노드-리카르드(Pernod-Richard) 사
SIAS: 시아스(SIAS) 사 (프랑스)
〈서열표〉
(1) 일반적 정보 :
(i) 출원인:
(A) 명칭: UNIR
(B) 거리: 뤼 뒤 벡 46
(C) 도시: 파리
(E) 국가: 프랑스
(F) 우편 번호: 75007
(iii) 서열수: 12
(2) 서열 1에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 186 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 2에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 187 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 3에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 183 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 4에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 176 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 5에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 279 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 6에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 237 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 7에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 25 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 8에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 25 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 9에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 25 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 10에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 27 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 11에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 25 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
(2) 서열 12에 대한 정보:
(i) 서열 특징:
(A) 길이: 25 염기쌍
(B) 유형: 뉴클레오티드
(C) 가닥수: 단일
(D) 토폴로지: 선형
(ii) 분자 형태: DNA (게놈)
(xi) 서열 설명:
Claims (7)
- 리보좀 유닛의 내부 전사 스페이서 (ITS) 상에 포함된 서열, 즉-비소클라미스 니베아에 대해서- ITS1 상에서 상응 서열 1 및- ITS2 상에서 상응 서열 2,-네오사르토리아 피스케리에 대해서- ITS1 상에서 상응 서열 3 및- ITS2 상에서 상응 서열 4,-지고사카로마이세스 베일리에 대해서- ITS1 상에서 상응 서열 5 및- ITS2 상에서 상응 서열 6을 프라이머로 사용하여 표적화된 미생물의 게놈 DNA의 증폭에 의한 비소클라미스 니베아, 네오사르토리아 피스케리 및 지고사카로마이세스 베일리의 검출 방법.
- 제1항에 있어서, ITS1 및 ITS2 서열에 있어서, 더 구체적으로 비소클라미스 니베아에 대해서 서열 7 및 8, 네오사르토리아 피스케리에 대해서 서열 9 및 10 및 지고사카로마이세스 베일리에 대해서 서열 11 및 12를 선택하는 것을 특징으로하는 방법.
- 제1항 또는 2항에 있어서, 증폭을 PCR 방법에 의해 수행하는 것을 특징으로하는 방법.
- 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 식품, 특히 과일 기재 식품, 더 구체적으로 딸기 기재 식품에서 상기 미생물들을 검출하는데 있어서, 포자 또는 세포를 방출 및 농축시키고, Taq 폴리머라제의 길항제의 작용을 감소 또는 억압하고, 그리고 포자 또는 세포로부터 DNA를 추출하기 위하여 과일 함유 시료를 예비처리하는 방법.
- 제4항에 있어서, 과일 함유 시료를 셀룰라제/헤미셀룰라제의 혼합물을 사용하여 처리하여 이들을 액화한 후, 여과하고, DNA가 추출될 수 있는 세포 함유 생성물을 얻을 수 있는 조건 하에서 원심분리하는 것을 특징으로하는 방법.
- 서열 1 내지 12의 서열로부터 선택된 서열을 갖는 프라이머.
- 제6항의 프라이머를 포함하는 것을 특징으로하는, 제3항 내지 5항의 방법을 수행하기 위한 DNA의 증폭에 의한 검출용 키트.
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