KR102691626B1 - 엔히드로박테르 아에로사쿠스 v-5 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 - Google Patents
엔히드로박테르 아에로사쿠스 v-5 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 Download PDFInfo
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Abstract
신규한 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주 및 이의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다. 일 양상에 따른 신규 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주에 의하면, 피부 보습 및 피부 장벽 강화가 있으므로, 피부 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.
Description
신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액 및 이들의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다.
피부의 생태계는 미생물에게 다양한 형태의 서식처를 제공하며, 광범위한 미생물들이 살고 있다. 이들은 숙주인 인간과 공생관계를 이루고 있으며, 숙주에 많은 긍정적인 영향을 미친다고 알려져 있다. 피부는 함입부, 특화 되어있는 틈새 등 다양한 형태의 서식처를 구성하고 있으며, 넓은 분포의 미생물이 자랄 수 있도록 돕는다. 기본적으로 피부는 물리적인 막을 형성하며, 외부로부터 잠재적인 위험요소 및 독성물질들로부터 방어를 하도록 도와준다. 피부는 외부환경과의 접속 지점이 되며, 다양한 미생물들(예: 진균, 세균, 바이러스 및 작은 유충)의 집합소이기도 하다. 물리적, 화학적 기능의 선택에 맞게 미생물들은 특화된 틈새에 적응하여 서식처를 마련한다. 일반적으로 피부는 차갑고, 산성 성질을 나타내며, 건조된 상태로 유지된다. 구조적으로 표피(epidermis)는 피부 장벽을 이루고 있으며, 미생물과 독소가 침투하는 것을 차단하고, 수분을 유지하는 중요한 역할을 한다. 표피의 최상위층은 각질층(stratum corneum)으로 구성되어 있다. 표피는 일명 '벽돌과 몰탈 구조'라고 불리는 형태를 띠고 있는데, 피부 조직은 계속적인 자가 회복 과정을 거치고, 분화 과정의 마지막을 거친 비늘(squames)은 끊임없이 피부 조직에서 탈락되는 과정을 반복하게 된다.
프로바이오틱스(Probiotics)는 인체에 유익한 작용을 하는 미생물을 총칭하는 말로 우리 몸에 유익(benefit)을 주는 미생물을 말한다. 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균으로 알려져 있다. 프로바이오틱스는 인체에 여러 가지 유익 작용을 통해 효과적인 효능이 발생되는 것으로 보고되었지만, 피부상재균과 피부의 상호관계에 대한 연구는 미비한 실정이다.
이에, 피부 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 피부상재균의 개발이 필요한 실정이다.
일 양상은 신규한 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 균주를 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일 양상은 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 균주를 제공한다.
상기 균주는 분리된 것일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "분리된(isolated)"이란 자연계에 존재하는 것이 아닌 인위적으로 분리하여 이용가능한 것을 의미한다. 상기 균주는 인간 피부로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 균주는 인간 피부 세포를 TSB(Tryptic Soy Broth) 또는 R2A(Reasoner's 2A) 배지에 접종하여 배양된 콜로니를 순수 분리 배양하는 방법에 의해 분리된 균주일 수 있다.
상기 균주는 엔히드로박테르 속(Enhydrobacter sp.)에 속하는 균주일 수 있다.
상기 균주는 서열번호 1과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "서열 동일성(sequence identity)"은 특정 비교 영역에서 양 서열을 최대한 일치되도록 얼라인시킨 후 서열간의 아미노산 잔기 또는 염기의 동일한 정도를 의미한다. 서열 동일성은 당업계에 공지된 방법에 따라 확인될 수 있다. 상기 서열 동일성의 퍼센트는 공지의 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며, 일례로 BLASTN(NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM(DNASTAR Inc) 등을 들 수 있다.
상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 균주는 기탁번호 KCCM13073P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 기탁번호로 기탁된 균주는 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주일 수 있다.
상기 균주는 피부 상태 개선 효과를 갖는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 상태 개선은 피부 보습 및 피부 장벽 강화 중 1종 이상일 수 있다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공한다.
상기 균주의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 "용해물"과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다. 상기 파쇄액은 파쇄액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 상호교환적으로 사용될 수 있고, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며, 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 상기 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로, 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간 동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물, 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다. 예를 들어, 상기 배양액은 배지(예를 들면, R2A 배지)에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 50시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 균주의 배양 상층액은 균주 배양액을 원심분리 또는 여과시켜 균체를 제거하는 단계에 의해 수득될 수 있다.
다른 구체예에서, 농축물은 상기 균주 배양액 자체, 또는 상기 배양액을 원심분리 또는 여과한 후 수득된 상층액을 농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액으로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물은 생물학적으로 순수한 것일 수 있다. 상기 균주는 순수배양(pure culture)에 의해 얻은 것일 수 있다.
또 다른 양상은 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 용도를 제공한다. 상세하게는, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 용도 또는 조성물에 있어서, 상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주는 상기 일 양상에 따른 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주일 수 있다. 따라서, 상기 균주는 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주일 수 있다.
상기 균주의 용도는 피부 상태 개선, 피부 미용 개선, 피부 질환의 예방, 개선 또는 치료를 포함할 수 있다.
상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 노화 억제 또는 개선, 피부 주름 개선, 피부 보습 및 피부 장벽 강화 중 1종 이상일 수 있다. 상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 보습 및 피부 장벽 강화 중 1종 이상일 수 있다.
상기 균주 또는 조성물은 피부 보습 관련 유전자(예: 히알루론산 합성효소(Hyaluronan synthase 3, HAS3), 아쿠아포린(Aquaporin-3, AQP-3)) 및 피부 장벽 강화 관련 유전자(예: 인볼루크린(Involucrin, IVL) 및 로리크린(Loricrin, LOR))의 발현을 증가시키는 것일 수 있다. 상기 균주 또는 조성물은 HAS3, AQP-3, IVL 및 LOR 중 1종 이상의 발현을 증가시키는 것일 수 있다. HAS3, AQP-3, IVL, LOR과 같은 마커들의 증가는 정상적인 각질층의 형성을 통해 각질세포 내에 천연보습인자(Natural Moisturizing Factor, NMF)의 전구체인 필라그린과 세포간 지질이 정상화 되었다는 것을 의미한다. 따라서, 상기 균주 또는 조성물은 피부 조직의 수분 유지를 촉진하면서, 피부 조직의 수분의 손실을 방지하는 피부 장벽을 강화하도록 각질층을 형성함으로써, 피부 노화를 방지하고, 대기 건조, 자외선 및 각종 공해 물질과 같은 외부 환경 변화로부터 피부 건강을 유지할 수 있도록 할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다.
상기 균주 또는 조성물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 처짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다.
본 명세서에서 용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하거나 피부 수분을 증가시키는 것에 의해 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 질환"은 피부 건조, 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환, 피부 노화, 또는 피부 염증일 수 있다.
상기 피부 장벽 기능 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다.
용어 "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다. 용어 "개선"은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함함으로써, 피부 보습 관련 유전자(예: HAS3, AQP-3) 및 피부 장벽 강화 관련 유전자(예: IVL 및 LOR)의 발현을 증가시켜, 피부 보습 및/또는 피부 장벽 강화 효과를 가질 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 균주는 피부 상태 개선 효과를 갖는 다른 균주, 예를 들어, 엔히드로박테르 속에 속하는 균주 및/또는 레이나넬라 속(Reyranella sp.)에 속하는 균주와 함께 사용되어 시너지 효과를 나타낼 수 있다. 상기 엔히드로박테르 속에 속하는 균주는 예를 들어, 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 등을 포함할 수 있다. 상기 레이나넬라 속에 속하는 균주는 예를 들어, 레이나넬라 마실리엔시스(Reyranella massiliensis), 레이나넬라 아쿠아틸리스(Reyranella aquatilis), 레이나넬라 그라미니폴리(Reyranella graminifolii) 등을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 상기 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함할 수 있다. 이때, 균주, 이의 파쇄액, 배양액, 또는 이의 배양액의 추출물의 함량이 상기 범위 미만인 경우, 피부 상태 개선 효과, 예를 들면, 피부 보습 또는 피부 장벽 효과가 충분히 발휘되지 않을 수 있다.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 제형화(formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.
상기 조성물은 액체 상태 또는 건조 상태인 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 건조 분말 형태일 수 있다.
상기 조성물을 건조 상태로 제조하는 건조 방법은 당업계에서 일반적으로 사용되는 방법을 사용할 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. 상기 건조 방법의 비제한적인 예는, 공기 건조 방법, 자연 건조 방법, 분무 건조 방법, 동결 건조 방법 등이 있다. 이들 방법은 단독으로 사용하거나 적어도 두 가지 방법을 함께 사용할 수 있다.
상기 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 열화(deterioration)를 감소시키기에 충분한 유효량의 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 결합제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 화장품학적으로, 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 담체와 함께 제형화되어 화장품, 약품, 식품 첨가제 등으로 제공될 수 있다.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 명세서에 개시된 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 기능성 첨가물 등을 추가로 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 분산제, 유화제, 방부제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 특정 제형에 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 가용화 제형, 유화 제형, 또는 분산 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제; 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제; 비타민 C, 마그네슘아스코빌포스페이트, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산; 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 만니톨, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제 등일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 연고제 등일 수 있다.
상기 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물 단독을 사용하거나, 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태, 예를 들어, 피부 건조, 피부 장벽 기능 손상, 피부 노화, 또는 피부 염증과 관련된 상태일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고, 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 피부에의 도포를 포함할 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 개선을 필요로 하는 개체, 예를 들어 피부 보습 또는 피부 장벽 강화 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
일 양상에 따른 신규 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주에 의하면, 피부 보습 또는 피부 장벽 강화 효과가 있으므로, 피부 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.
도 1은 V-5 균주가 보습에 관여하는 HAS3(Hyaluronan synthase 3)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, RA: 양성대조군으로서 레티노산(RA) 1 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 2는 V-5 균주가 보습에 관여하는 AQP-3(Aquaporin-3)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, RA: 양성대조군으로서 레티노산(RA) 1 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 3은 V-5 균주가 피부 장벽에 관여하는 IVL(Involucrin)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, Adiporon: 양성대조군으로서 아디포론 10 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 4는 V-5 균주가 피부 장벽에 관여하는 LOR(Loricrin)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, Adiporon: 양성대조군으로서 아디포론 10 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 2는 V-5 균주가 보습에 관여하는 AQP-3(Aquaporin-3)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, RA: 양성대조군으로서 레티노산(RA) 1 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 3은 V-5 균주가 피부 장벽에 관여하는 IVL(Involucrin)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, Adiporon: 양성대조군으로서 아디포론 10 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 4는 V-5 균주가 피부 장벽에 관여하는 LOR(Loricrin)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, Adiporon: 양성대조군으로서 아디포론 10 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정
사람의 피부에서 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주를 분리 및 동정하였다.
구체적으로, 사람의 피부로부터 채취한 시료를 R2A(Reasoner's 2A)를 함유하는 액체 배지 또는 고체 배지에 접종하였다. 접종 후 72시간 동안 37℃ 인큐베이터에서 배양한 뒤 형성된 집락 100개를 순수 분리 배양하여, 72 시간 동안 37℃ 인큐베이터에서 재배양 하였다. 배양이 완료된 집락은 16S rRNA 유전자 서열 동정을 실시하였다. 이때 사용된 프라이머는 박테리아에만 반응하여 증폭하도록 고안되었다(27F, 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' (서열번호 2); 1492R, 5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3 (서열번호 3)). PCR 증폭은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 75℃ 1분30초씩 30 사이클로 실시 하였으며, 마지막으로 72℃에서 8분간 처리한 후 4℃에서 보관하였다. PCR 반응이 끝난 뒤 분리 배양된 종들의 DNA 서열은 ABI-3730XL(ABI, USA)를 이용하여 결정하였다. Ezcloud 홈페이지에서 제공되는 BLAST 프로그램을 사용하여, 분리 배양된 미생물 집락 중 결정된 16S rRNA 부위의 염기서열을 등록된 표준 균주(type strain)들과 비교 분석 하였을 때, 상동성 97% 이하의 신규성 있는 종들만 선별하였고, 그 중 상동성 97% 이하의 신규 미생물 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydorbacter aerosaccus) 균주(이하 "V-5"이라 함)을 선별하였다.
선별된 V-5 균주를 2021년 11월 15일자로 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM)에 기탁하여 기탁번호 KCCM13073P를 부여 받았다. V-5 균주는 서열번호 1(complementary DNA)의 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다.
실험예 1. 피부 보습 효과 - HAS3 및 AQP-3 발현 증가능 확인
V-5 균주 배양액이 피부 보습에 미치는 영향을 분석하기 위해, 보습과 관련된 유전자 히알루론산 합성효소(Hyaluronan synthase 3, HAS3) 및 아쿠아포린(Aquaporin-3, AQP-3)의 발현량을 분석하였다.
구체적으로, 인간 각질형성세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovine serum, FBS)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였다. 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 V-5 균주의 배양액을 1%(w/w) 또는 10%(w/w)로 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다.
양성대조군으로 레티노산(Retionic acid, RA) 1 μM을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, TAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭(nanodrop)으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 HAS3 및 AQP-3에 대한 프라이머를 사용하여 실시간(real-time) PCR 기계(Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.
도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, V-5 균주 배양액은 HAS3 및 AQP-3의 발현을 유의적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 보습 효과가 있음을 알 수 있었다.
실험예 2. 피부 장벽 강화 효과 - IVL 및 LOR 발현 증가능 확인
V-5 균주 배양액이 피부 장벽 강화에 미치는 영향을 분석하기 위해, 피부 장벽 강화와 관련된 유전자 인볼루크린(Involucrin, IVL) 및 로리크린(Loricrin, LOR)의 발현량을 분석하였다.
구체적으로, 인간 각질형성세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovine serum, FBS)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였다. 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 V-5 균주의 배양액을 1%(w/w) 또는 10%(w/w)로 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다.
양성대조군으로 아디포론(Adiporon) 10 μM을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, TAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭(nanodrop)으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 IVL 및 LOR에 대한 프라이머를 사용하여 실시간(real-time) PCR 기계(Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.
도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, V-5 균주 배양액은 IVL 및 LOR의 발현을 유의적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 장벽 강화 효과가 있음을 알 수 있었다.
종합하면, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 보습 관련 유전자(예: HAS3, AQP-3) 및 피부 장벽 강화 관련 유전자(예: IVL 및 LOR)의 발현을 증가시킴을 확인하였다. 따라서, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 보습 및 피부 장벽 강화 효과를 가짐을 알 수 있었다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다.
SEQUENCE LISTING
<110> Cosmax, INC.
<120> Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain and its use for improving
skin conditions
<130> PN142224KR
<160> 3
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 1366
<212> DNA
<213> Enhydrobacter aerosaccus V-5
<400> 1
ctaccatgca gtcgaacgcg tgtagcaata cacgagtggc gcacgggtga gtaacgcgtg 60
gatatctgcc ttttggttcg gaataacccc gggaaactgg ggctaatacc ggatggttcc 120
tacgggataa agatttatcg ccaaaagatg agtccgcgtc cgattagcta gttggtgggg 180
taacggccta ccaaggcgac gatcggtagc tggtctgaga ggacgatcag ccacactggg 240
actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgg acaatggggg 300
caaccctgat ccagccatgc cgcgtgagtg atgaaggcct tcgggttgta aagctctttt 360
ggcggggacg atgatgacgg tacccgcaga ataagccccg gctaacttcg tgccagcagc 420
cgcggtaaga cgaagggggc tagcgttgtt cggaattact gggcgtaaag cgagtgtagg 480
cggttgttat agtcaggtgt gaaagccttg agctcaactc aagaaatgca cttgatactg 540
aacagctaga gtaccggaga ggatagtgga attcccagtg tagtggtgaa atacgtagag 600
attgggaaga acaccagtgg cgaaggcggc tatctggacg gttactgacg ctaagactcg 660
aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgggtg 720
ctagacgttg gcgagcttgc tcgtcagtgt cgcagctaac gcgttaagca ccccgcctgg 780
ggagtacggc cgcaaggttg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 840
gcatgtggtt caattcgacg caacgcgcag aaccttacca gcccttgaca tgtgactcgc 900
cggctccaga gacggagcct tcggttcggc cggagtcaac acaggtgctg catggctgtc 960
gtcagctcgt gtcgtgagaa tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac cctcgtctcc 1020
agttgccatc aggttatgct gggcactttg gagaaactgc cggtgacaag ccggaggaag 1080
gtggggatga cgtcaagtcc tcatggccct tacgggctgg gctacacacg tgctacaatg 1140
gcggtgacag tgggatgcga aggggcgacc cggagccgat cccaaaaagc cgtcccagtt 1200
cggattgcac tctgcaactc gagtgcatga aggtggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1260
atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgcc atgggagttg 1320
gttctacccg aagatggtgc gctaaccgca aggaggcagc cagcct 1366
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 27F primer
<400> 2
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 1492R primer
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19
Claims (10)
- 기탁번호 KCCM13073P로 기탁된, 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) V-5 균주.
- 청구항 1에 있어서, 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것인 균주.
- 청구항 1의 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 화장료 조성물로서,
HAS3(Hyaluronan synthase 3), AQP-3(Aquaporin-3), IVL(Involucrin) 및 LOR(Loricrin) 중 1종 이상의 발현을 증가시키는 것인 화장료 조성물. - 삭제
- 청구항 3에 있어서, 피부 보습 또는 피부 장벽 강화용인 것인 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 청구항 1의 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 식품 조성물.
- 청구항 9에 있어서, 피부 보습 또는 피부 장벽 강화용인 것인 식품 조성물.
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GenBank Accession No: FR727223.1(2010.11.19.) |
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