KR102663392B1 - Composition for preventing or improving oral diseases comprising an extract of saussurea neoserrata - Google Patents

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Abstract

본 발명은 구강질환의 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 경우, 천연물을 이용함에 따라 장기간 복용에 따른 부작용의 우려가 없으며, 치주질환 유도 모델에서의 치은조직내 IL-1β, TNF-α 및 MDA 함량 감소, 파골세포 형성 감소 활성, 치주골량 증가 활성 및 치주질환 유도 모델에서의 구강 협부 총 호기성 생균수 감소를 통해 치주질환 예방 또는 개선 활성을 나타내면서도 타액 분비량을 향상시켜 구강건조증을 개선할 수 있어 치주질환 및 구강건조증을 포함하는 구강질환 예방 또는 개선 활성을 나타낼 수 있다.The present invention relates to a composition for preventing or improving oral diseases. In the case where it contains the extract of mountain odor as an active ingredient, there is no concern about side effects due to long-term administration due to the use of natural products, and it is used in the gingival tissue in a periodontal disease induction model. It shows activity in preventing or improving periodontal disease through reduction of IL-1β, TNF-α and MDA content, activity in reducing osteoclast formation, activity in increasing periodontal bone mass, and reduction in the total number of aerobic bacteria in the oral buccal area in a periodontal disease-induced model, while also increasing the amount of saliva secretion. It can improve dry mouth by improving dry mouth, showing activity in preventing or improving oral diseases including periodontal disease and dry mouth.

Description

산골취 추출물을 포함하는 구강질환의 예방 또는 개선용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING OR IMPROVING ORAL DISEASES COMPRISING AN EXTRACT OF SAUSSUREA NEOSERRATA}Composition for preventing or improving oral diseases comprising extract of mountain odor {COMPOSITION FOR PREVENTING OR IMPROVING ORAL DISEASES COMPRISING AN EXTRACT OF SAUSSUREA NEOSERRATA}

본 발명은 구강 질환의 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 산골취 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 구강 건조증 및 치주질환을 포함하는 구강 질환의 예방 또는 개선 활성을 나타내는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing or improving oral diseases. More specifically, it relates to a composition that exhibits preventive or ameliorating activity for oral diseases, including dry mouth and periodontal disease, by containing an extract of mountain odor as an active ingredient.

건강한 치아는 오복 중 하나라 일컬을 정도로 삶의 질을 결정하는 중요한 요소이다. 구강질환 중 치아 우식증(dental cavities, 충치)과 치주질환(periodontal disease, 풍치)은 세계적으로 발병률이 높은 질환으로서, 통증, 저작기능 장애, 치주조직의 파괴, 구취 및 시린이와 같은 다양한 임상적인 증상을 유발하고 치아상실을 초래하는 주된 요인으로 알려져 있으며 식생활의 변화로 구강질환의 원인요소는 더 증가하고 있는 실정이다.Healthy teeth are such an important factor in determining the quality of life that they are called one of the five blessings. Among oral diseases, dental caries (cavities) and periodontal disease (periodontal disease) are diseases with a high incidence worldwide and are associated with various clinical symptoms such as pain, impaired chewing function, destruction of periodontal tissue, bad breath, and sensitive teeth. It is known to be the main factor causing tooth loss, and the causative factors of oral diseases are increasing due to changes in eating habits.

사람의 구강에는 대략 600 내지 800종 이상의 미생물이 존재하는 것으로 알려져 있는데 이러한 미생물들은 타액이 분비하는 리소자임(lysozyme)과 같은 효소에 의해 제어되고 있다. 그러나 영양분과 수분이 풍부한 구강환경은 미생물이 성장하기 좋은 조건이며, 혀나 치태(dental plaque)는 미생물의 훌륭한 서식처를 제공한다. 이러한 미생물 중 일부는 기회병원성 균으로서 치아우식, 치주질환 및 시린이(상아질 지각과민증)과 같은 질환 및 구취의 원인이 된다.It is known that approximately 600 to 800 types of microorganisms exist in the human oral cavity, and these microorganisms are controlled by enzymes such as lysozyme secreted by saliva. However, an oral environment rich in nutrients and moisture is a good condition for the growth of microorganisms, and the tongue and dental plaque provide an excellent habitat for microorganisms. Some of these microorganisms are opportunistic pathogens and cause diseases such as dental caries, periodontal disease, and dentinal hypersensitivity, as well as bad breath.

치태 내에 서식하면서 치아우식, 치주질환, 구취 및 시린이를 유발하는 구강병원균 증식을 억제하는 방법으로 항균제가 있으며, 구강병원균에 대한 살균 및 정균 작용을 갖는 항생제를 포함하는 다양한 종류의 항균제제가 충치, 치주질환, 치수 및 치근단 감염의 억제 및 치료제로써 개발되어 왔다.There are antibacterial agents as a way to suppress the growth of oral pathogens that live in plaque and cause dental caries, periodontal disease, bad breath, and sensitive teeth. Various types of antibacterial agents, including antibiotics that have sterilizing and bacteriostatic effects on oral pathogens, are used to treat cavities, It has been developed as a treatment and suppressant for periodontal disease, dental pulp, and periapical infections.

그런데, 항생제는 우리 몸에 대한 전신적인 부작용과 함께 구강내 내성균의 출현 및 균교대증(superinfection)을 유발할 수 있기 때문에 장기적인 사용이 곤란하여 단지 치료제로만 이용될 수 있는 단점이 있다. 또한, 구강청정제에 사용되고 있는 항균제제로는 생구이나린(Sangquinarine), 리스테린(Listerine), 피록사이드(Peroxide), 클로르헥시딘(Chlorhexidine) 등이 있는데, 생구이나린은 구강 내에서 세균에 대한 효과가 불분명하고 치주질환에 대한 치료 효과가 더욱 불분명할 뿐만 아니라 가격도 비싼 단점이 있고, 리스테린은 알코올이 주성분으로 약간의 정균 작용이 있으나 실제 구강 내에서는 일시적인 효과를 나타낼 뿐, 장기간 사용 시 조직에 대해 위해 작용도 나타날 수 있는 단점이 있다. However, antibiotics have the disadvantage of being difficult to use long-term and being used only as a treatment because they can cause systemic side effects on our body and the emergence of resistant bacteria in the oral cavity and bacterial superinfection. In addition, antibacterial agents used in mouthwashes include Sangquinarine, Listerine, Peroxide, and Chlorhexidine, but the effectiveness of Sangquinarine against bacteria in the oral cavity is unclear. Not only is the treatment effect for periodontal disease more unclear, but it is also more expensive. Listerine has alcohol as its main ingredient and has a slight bacteriostatic effect, but it only has a temporary effect in the oral cavity and may be harmful to tissues when used for a long period of time. There are disadvantages that may appear.

아울러, 최근 미백 효과를 위해 첨가되고 있는 피록사이드는 세균에 대한 독성이 있으나 동시에 인체 조직에도 독성을 나타내어 안전성에 문제가 있을 뿐 아니라 간혹 세균에서 피록사이드에 대한 내성균이 출현하기도 한다. 또한 클로르헥시딘은 치태 형성 억제와 더불어 치주질환 예방 및 치료제로써 현재까지 알려진 제제 중에서 가장 우수한 것으로 알려져 있으나, 조직에 대한 자극, 조직의 착색 및 변성을 유발하고, 특히 자극적인 맛이 강하고 냄새가 심한 부작용을 나타내는 문제점이 있을 뿐 아니라, 균교대증이 유발될 수 있고, 발암성이 있어 임신부의 경우 사용이 제한되는 등 치료나 특히 예방의 목적으로 장기간 사용할 수 없는 단점이 있다.In addition, pyroxide, which has recently been added for whitening effect, is toxic to bacteria, but is also toxic to human tissue, which not only poses a safety problem, but sometimes resistant bacteria to pyroxide appear in bacteria. In addition, chlorhexidine is known to be the best among the agents known to date as a preventive and therapeutic agent for periodontal disease in addition to inhibiting plaque formation. However, it causes tissue irritation, discoloration and degeneration of tissues, and has side effects such as a particularly strong irritating taste and strong odor. In addition to the problems it presents, it has the disadvantage of not being able to be used for long periods of time for treatment or especially prevention purposes, such as it can cause bacterial hyperplasia and is carcinogenic, so its use is restricted to pregnant women.

한편, 구강 건조증(xerostomia)은 여러 가지 원인에 의하여 타액의 분비량이 감소되어 구강 점막이 건조화되는 질환으로 주로 저작기능과 언어기능의 이상을 호소하게 되고, 심한 구취와 충치의 발생이 생기며 정도에 따라 구강 점 막의 작열감 또는 구강 점막의 궤양 등으로 심한 고통을 겪게 된다.On the other hand, xerostomia is a disease in which the oral mucosa dries out due to a decrease in saliva secretion due to various causes. It mainly complains of abnormalities in chewing and speech functions, causes severe bad breath and tooth decay, and depending on the degree, You may experience severe pain due to a burning sensation in the oral mucosa or ulcers in the oral mucosa.

타액은 구강 환경 및 구강 기능의 유지에 중요한 역할을 한다. 즉, 타액에는 음식물 섭취 기능과 구강 환경 유지 기능의 두가지 기능이 있다. 타액의 음식물 섭취 기능에 있어서는 타액은 음식 덩어리의 형성 및 소화 효소 작용과 같은 소화 작용, 또는 미각자극물질의 가용화 또는 가스틴(gastin)(카르보네이트 탈수소효소임)의 분비를 통한 미각을 유지하는 작용을 나타낸다. 구강 환경 유지 기능에 있어서는, 타액은 치아나 점막의 자정 효과, 치아의 재석회화 작용, 항균 작용, 면역 작용, 성장 인자 등에 의한 조직 복구 증진 작용, 및 항염증 작용을 나타낸다.Saliva plays an important role in maintaining oral environment and oral function. In other words, saliva has two functions: food intake and oral environment maintenance. Regarding the food intake function of saliva, saliva maintains the sense of taste through digestion, such as the formation of food lumps and the action of digestive enzymes, or the solubilization of taste irritants or the secretion of gastin (carbonate dehydrogenase). It shows action. In terms of the oral environment maintenance function, saliva exhibits a self-purifying effect on teeth and mucous membranes, a recalcification effect of teeth, an antibacterial effect, an immune effect, an effect to promote tissue repair by growth factors, etc., and an anti-inflammatory effect.

최근, 다양한 요인에 의해서 야기되는 타액분비의 저하를 호소하는 환자가 증가하고 있다. 따라서, 그의 치료에 대한 사회적 요구가 높아지고 있다. 타액분비 저하는 방사선요법이나 이하선염에 의해 유발되는 침샘 자체의 비정상, 및 대사성 질환 (예를 들면, 바세도우씨병, 당뇨병 등), 또는 콜라겐 질환과 같은 기타 질환에 수반되고, 또한 타액분비 저하는 스트레스 요인 또는 다양한 의약품의 부작용에 의해서도 유발된다. 최근 인구의 고령화에 따라, 침샘의 기능이 노화에 의해 저하되고, 고령자에게 병발되는 다양한 복합 질환에 대한 각종 약품 요법의 결과로서 타액분비의 저하를 호소하는 환자의 수가 미래에는 점점 더 증가할 것으로 생각되고 있다.Recently, the number of patients complaining of decreased saliva secretion caused by various factors is increasing. Therefore, social demand for his treatment is increasing. Reduced saliva secretion is associated with other diseases such as abnormalities in the salivary glands themselves caused by radiation therapy or parotitis, metabolic diseases (e.g., Basedow's disease, diabetes, etc.), or collagen diseases, and reduced saliva secretion is also caused by stress. It can also be caused by factors or side effects of various medications. With the recent aging of the population, the function of the salivary glands deteriorates due to aging, and the number of patients complaining of decreased salivary secretion as a result of various drug therapies for various complex diseases that occur in elderly people is expected to increase in the future. It is becoming.

타액분비 저하는, 구강 건조의 결과, 혀가 붉게 변하고, 때로 갈라지게 되어 타액분비 저하 환자는 섭식 시에 아픔을 호소하고, 씹거나 삼키는데 곤란을 호소한다. 또한, 타액분비 저하는 구강에 불편한 느낌, 또는 미각 장애 및 발음 장애를 유발하고, 의치 불안정, 충치, 치주염의 발증, 구내염, 폐렴, 및 소화기능 부전을 유발하는 것으로 알려졌다.Decreased salivary secretion is a result of dry mouth, causing the tongue to turn red and sometimes crack. Patients with decreased salivary secretion complain of pain when eating and difficulty chewing or swallowing. In addition, decreased saliva secretion is known to cause an uncomfortable feeling in the oral cavity, taste and pronunciation disorders, denture instability, tooth decay, onset of periodontitis, stomatitis, pneumonia, and digestive dysfunction.

타액분비 저하의 치료로서 인공 타액의 국소적용이 사용되지만, 그 효과는 한시적이고 한정적이다. 타액분비 촉진제로서 무스카린 수용체 효능제로서 알려진 아네톨 트리티온, 및 세비멜린 염산염이 사용되는데, 이들은 그 효과가 불안정하고 오심, 구토, 식욕감퇴, 복부 불쾌감과 같은 소화기계 부작용의 가능성 문제가 있는 등 몇몇 단점이 있다. 이러한 상황에서, 타액분비 저하의 치료를 위한 새로운 치료제의 개발이 요망되고 있다.Topical application of artificial saliva is used as a treatment for decreased salivary secretion, but its effect is temporary and limited. As salivary secretion stimulants, anethole trithion, known as a muscarinic receptor agonist, and cevimeline hydrochloride are used, but their effects are unstable and there is a possibility of digestive side effects such as nausea, vomiting, loss of appetite, and abdominal discomfort. There are some downsides. In this situation, the development of a new therapeutic agent for the treatment of decreased saliva secretion is desired.

이에, 본원발명에서는 부작용을 최소화 하면서도 구강 질환 개선을 위해 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하고자 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present invention was completed in order to provide a composition containing the extract of sorghum as an active ingredient to improve oral diseases while minimizing side effects.

KRKR 10-2288920 10-2288920 B1B1 KRKR 10-2251534 10-2251534 B1B1

본 발명의 목적은 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 구강 질환의 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.An object of the present invention relates to a composition for preventing or improving oral diseases containing extract of mountain snail as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하여 구강 질환의 예방 또는 개선 효과가 우수한 식품 조성물 또는 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a food composition or quasi-drug composition that has excellent effects in preventing or ameliorating oral diseases, including an extract of Sangolchwi extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하여 구강 질환의 예방 또는 치료 효과가 우수한 약학 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition that is excellent in the prevention or treatment of oral diseases and contains an extract of sorghum as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 개선용 조성물은 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 것이다.In order to achieve the above object, a composition for preventing or improving oral diseases according to an embodiment of the present invention contains an extract of mountain bone odor as an active ingredient.

상기 구강질환은 치주질환, 구강건조증, 치아 우식증, 치통, 시린이 및 구취로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.The oral disease is selected from the group consisting of periodontal disease, dry mouth, dental caries, toothache, dry teeth, and bad breath.

상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출되는 것이다.The extract is extracted using an extraction solvent selected from the group consisting of water, C 1 to C 6 lower alcohols, and mixtures thereof.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것이다.A food composition for preventing or improving oral diseases according to another embodiment of the present invention includes the composition.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것이다.A quasi-drug composition for preventing or improving oral diseases according to another embodiment of the present invention includes the composition.

상기 의약외품 조성물은 치약, 구강세정제, 구강청정제, 껌, 캔디류, 구강스프레이, 구강용 연고제, 구강용 바니쉬, 구강양치액 및 잇몸 마사지 크림으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 제형인 것이다.The quasi-drug composition is one or more formulations selected from the group consisting of toothpaste, mouthwash, mouthwash, gum, candy, oral spray, oral ointment, oral varnish, oral rinse, and gum massage cream.

본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것이다.A pharmaceutical composition for preventing or treating oral diseases according to another embodiment of the present invention includes the composition.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다.The term 'extract' used in this specification has the meaning commonly used in the art as a crude extract, as described above, but in a broad sense also includes fractions obtained by additional fractionation of the extract.

즉, 천연 추출물은 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 천연 추출물에 포함되는 것이다.In other words, natural extracts include not only those obtained using extraction solvents, but also those obtained by additionally applying a purification process. For example, fractions obtained by passing the extract through an ultrafiltration membrane with a certain molecular weight cut-off value, separation by various chromatographs (designed for separation according to size, charge, hydrophobicity, or affinity), etc. Fractions obtained through purification methods are also included in the natural extract of the present invention.

본 발명에서 이용되는 천연 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.The natural extract used in the present invention can be prepared in powder form by additional processes such as reduced pressure distillation and freeze drying or spray drying.

본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 하기의 천연 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다.As used herein, the term 'including as an active ingredient' means containing a sufficient amount to achieve the efficacy or activity of the natural extract below.

본 발명의 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 개선용 조성물은 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 것이다.A composition for preventing or improving oral diseases according to an embodiment of the present invention contains an extract of mountain snail root as an active ingredient.

상기 산골취(saussurea neoserrata nakai)는 깊은 산에서 자라며 높이는 50 내지 110cm이고. 줄기는 곧게 서고 윗부분에서 가지를 내기도 한다. 잎의 밑동이 줄기로 흘러서 줄기의 날개가 된다. 뿌리에 달린 잎과 밑부분에 달린 잎은 꽃이 필 때 지며, 줄기에 달린 잎은 어긋나고 바소꼴이거나 타원 모양 바소꼴로서 길이 12 내지 15cm이다. 끝이 뾰족하며 밑은 좁아진다. 윗부분으로 갈수록 작아지고, 뒷면에 꼬부라진 털이 나며 가장자리에 뾰족한 톱니가 있다. 또한 꽃은 8 또는 9월에 자줏빛으로 핀다. 가지 끝과 원줄기 끝에 두화(頭花)가 산방꽃차례로 달리며, 꽃 지름 8 내지 10mm이다. 총포는 통 모양이며 길이 8 내지 9mm, 지름 4 내지 5mm이다. 포조각은 4줄로 늘어서며 가장자리가 자줏빛이고 거미줄 같은 흰 털이 난다. 열매는 수과로서 길이 약 5mm이며 검은 갈색 줄이 있다. 관모(冠毛)는 2 줄이며 갈색이다. 어린순은 식용한다. 한국 특산종으로 북부지방에 분포한다.The saussurea neoserrata nakai grows deep in the mountains and has a height of 50 to 110 cm. The stem stands upright and sometimes produces branches from the upper part. The base of the leaf flows into the stem and becomes the stem's wings. The leaves on the roots and the leaves on the bottom fall when flowers bloom, and the leaves on the stems are alternate, lanceolate or oval-shaped, and are 12 to 15 cm long. The end is sharp and the bottom is narrow. It gets smaller toward the top, has curly hairs on the back, and has sharp sawtooth edges. Also, the purple flowers bloom in August or September. Head flowers grow in corymbs at the ends of branches and main stems, and the flowers are 8 to 10 mm in diameter. The involucre is barrel-shaped, 8 to 9 mm long and 4 to 5 mm in diameter. The bract pieces are arranged in four rows, have purple edges and have white hairs like spider webs. The fruit is an achene, about 5 mm long, and has black-brown lines. The hairs have two rows and are brown. Young shoots are edible. It is a species endemic to Korea and is distributed in the northern region.

본원발명은 상기 산골취 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 구강질환의 예방 또는 개선 활성을 나타낼 수 있다.The present invention can exhibit prevention or improvement activity of oral diseases by including the extract of mountain odor as an active ingredient.

상기 구강질환은 치주질환, 구강건조증, 치아 우식증, 치통, 시린이 및 구취로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.The oral disease is selected from the group consisting of periodontal disease, dry mouth, dental caries, toothache, dry teeth, and bad breath.

상기 구강질환은 구강영역에서 발생하는 여러 가지 질환을 말하며, 상기 구강영역은 앞쪽 입술부터 뒤쪽 구협에서 인두와 연결되는 입 안의 공간을 의미한다. 본 발명에서 상기 구강질환은 구강에 발생하는 질환이라면 그 병증에 관계없이 모두 포함하는 개념으로, 본원발명에서는 치주질환, 구강건조증, 치아 우식증, 치통, 시린이 및 구취로 이루어진 군으로부터 선택되는 것으로 정의하였다.The oral diseases refer to various diseases that occur in the oral region, and the oral region refers to the space in the mouth connected to the pharynx from the front lips to the back oral cavity. In the present invention, the oral disease is a concept that includes all diseases that occur in the oral cavity regardless of the condition, and in the present invention, it is defined as selected from the group consisting of periodontal disease, dry mouth, dental caries, toothache, sensitive teeth, and bad breath. did.

상기 치주질환(periodontal disease)은 치아를 받치고 있는 치은과 치주인대 및 골조직에 염증이 생기는 질환으로서, 흔히 풍치라고도 하는데, 병의 정도에 따라 치은염(gingivitis)과 치주염(periodontitis)으로 나뉜다. 비교적 가볍고 회복이 빠른 형태의 치주질환으로 잇몸 즉, 연조직에만 국한된 형태를 치은염이라고 하고, 이러한 염증이 잇몸과 잇몸뼈 주변까지 진행된 경우를 치주염이라고 한다. 치은(잇몸)과 치아 사이에는 V자 모양의 틈이 있는데, 이 홈(sulcus)의 잇몸 선 아래 부분을 구강병원균이 공격하면서 염증 자극원인 리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharide, LPS)를 방출하고, 이로 인해 잇몸이 붓고 출혈이 일어나는 등 염증이 생성되며, 이로써 치주인대와 인접조직이 손상된다. 치주염이 진행되면 치주인대, 더 나아가 치조골까지 손상시키고 결국 치아가 손실된다. 단백질, 비타민 등의 영양부족, 임신한 경우나 당뇨병 등과 같은 호르몬 장애, 흡연, 후천성면역결핍증(AIDS) 등이 질환을 악화시킬 수 있다. 또한, 치주질환의 다른 원인으로 치태 및 치석을 들 수 있다. 본 발명의 치주질환은 치주질환을 일으키는 원인균이라면 그 종류에 관계없이 모두 포함되나, 구체적으로는 악티노바실루스 악티노마이세템코미탄스(Actinobacillus actinomycetemcomitans), 포피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis), 타네렐라 포르시시아(Tannerella forsythia), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola) 및 푸소박테리움 누클리아툼(Fusobacterium nucleatum)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균일 수 있으며, 보다 구체적으로는 포피로모나스 진지발리스일 수 있다.The periodontal disease (periodontal disease) is a disease in which inflammation occurs in the gingiva, periodontal ligament, and bone tissue supporting the teeth. It is also commonly referred to as gum disease, and is divided into gingivitis and periodontitis depending on the degree of the disease. It is a relatively mild and fast-recoverable form of periodontal disease. When it is limited to the gums, or soft tissue, it is called gingivitis. When this inflammation progresses to the area around the gums and gum bones, it is called periodontitis. There is a V-shaped gap between the gingiva (gum) and the tooth. When oral pathogens attack the area below the gum line in this groove (sulcus), they release lipopolysaccharide (LPS), an inflammatory irritant, which causes Inflammation occurs, including swelling and bleeding of the gums, which damages the periodontal ligament and adjacent tissues. As periodontitis progresses, the periodontal ligament and even the alveolar bone are damaged, ultimately leading to tooth loss. Malnutrition such as protein and vitamins, hormonal disorders such as pregnancy or diabetes, smoking, and acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) can worsen the disease. Additionally, other causes of periodontal disease include plaque and tartar. The periodontal disease of the present invention includes all causative bacteria that cause periodontal disease, regardless of the type, but specifically, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, and Tane. It may be one or more species selected from the group consisting of Tannerella forsythia, Treponema denticola, and Fusobacterium nucleatum, and more specifically, Porphyromonas ginji It could be Balis.

상기 포피로모나스 진지발리스는 박테로이드(Bacteroide) 유연균의 일종으로 그람음성균이고, 혐기성균이다. 상기 포피로모나스 진지발리스는 치주질환이 발생한 구강 내에서 발견되며, 그 외에도 위장관 상부, 호흡기 및 결장에서도 발견된다. 만성 치주질환 환자는 상기 균의 콜라게네이즈 효소에 의해 콜라겐이 분해되며, 상기 균은 치은 섬유아세포에 침입할 수 있으며, 상당한 농도의 항생제 하에서도 생존할 수 있다. 또한, 상기 균은 치은 상피세포에 침입하여 장시간 생존할 수 있다.The Porphyromonas gingivalis is a type of Bacteroide flexible bacteria, a Gram-negative bacterium, and an anaerobic bacterium. The Porphyromonas gingivalis is found in the oral cavity where periodontal disease occurs, and is also found in the upper gastrointestinal tract, respiratory tract, and colon. In patients with chronic periodontal disease, collagen is decomposed by the collagenase enzyme of the bacteria, and the bacteria can invade gingival fibroblasts and survive even under high concentrations of antibiotics. Additionally, the bacteria can invade gingival epithelial cells and survive for a long time.

상기 구강건조증(xerostomia)은 타액의 분비량이 감소되어 구강 점막이 건조화되는 질환으로 쇼그렌 증후군, 빈혈, 당뇨, 영양소 결핍, 노화 등의 전신적인 원인 또는 약물복용, 신경계 질환 등으로 인해 유발될 수 있다. 주로 저작기능과 언어기능의 이상을 호소하게 되고, 심한 구취와 충치의 발생이 생기며 정도에 따라 구강 점막의 작열감 또는 구강 점막의 궤양 등으로 심한 고통을 겪게 되는 질환이다. The dry mouth (xerostomia) is a disease in which the oral mucosa dries out due to a decrease in saliva secretion. It can be caused by systemic causes such as Sjögren's syndrome, anemia, diabetes, nutrient deficiency, aging, drug use, nervous system disease, etc. It is a disease that mainly complains of abnormalities in chewing and speech functions, causes severe bad breath and tooth decay, and, depending on the severity, causes severe pain due to a burning sensation in the oral mucosa or ulcers in the oral mucosa.

상기 치아 우식증(dental cavities)은 치아면에 서식하는 세균으로 인한 감염성 질환으로서, 충치라고도 하며, 치아의 경조직이 침식되어 결손하는 증세를 보인다. 구체적으로 치아의 머리 부분 표면을 덮고 있고, 치아 상아질을 보호하는 유백색의 반투명하고 단단한 물질을 치아 법랑질 또는 에나멜질이라고 하는데, 입 안에 서식하는 구강병원균에 의해 설탕, 전분 등이 분해되면서 생기는 산에 의해 치아의 법랑질이 손상되어 충치가 생기는 것을 말한다. 치아 우식증을 일으키는 주요 원인으로는 치아 표면에 생성된 세균막인 치태(dental plaque, 플라크)를 들 수 있는데, 타액이 치아에 얇고 끈적한 막을 형성하고, 그 위에 연쇄 상구균의 일종인 스트렙토코쿠스 소브리누스(Streptococcus sobrinus)균 및 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 등의 구강 미생물이 부착해 바이오 필름(biofilm)을 형성함으로써 치태(dental plaque, 플라크)가 만들어지고 푸조박테리움(Fusobacterium)에 의해 더욱 두꺼워진다.The dental caries (dental cavities) is an infectious disease caused by bacteria living on the surface of the teeth, and is also called cavities, and shows symptoms of erosion and loss of the hard tissues of the teeth. Specifically, the milky-white, translucent, hard substance that covers the surface of the head of the tooth and protects the dentin of the tooth is called tooth enamel or enamel. It is damaged by acids produced when sugar, starch, etc. are broken down by oral pathogens living in the mouth. This means that the enamel of the teeth is damaged, resulting in cavities. The main cause of dental caries is dental plaque, which is a bacterial film formed on the surface of the teeth. Saliva forms a thin, sticky film on the teeth, and Streptococcus sobry, a type of streptococcus, forms on it. Dental plaque is created when oral microorganisms such as Streptococcus sobrinus and Streptococcus mutans attach and form a biofilm, which is further formed by Fusobacterium. It becomes thicker.

상기 치통(toothache)은 단 음식, 또는 아주 차갑거나 뜨거운 음식 등을 먹을 때 치아에 통증이 오는 것을 말하는데, 일반적으로는 치아 자체의 통증 뿐만 아니라, 치아를 턱뼈에 지탱시키고 있는 치주조직의 통증도 포함된다. 보통 씹을 때 통증이 발생하며, 잇몸이 붓고 역한 냄새의 분비물이 나온다. 치통은 원인 질병에 따라 조금씩 다른 통증을 보이는데, 구체적으로 치아 우식증에 의한 통증은 초기에는 통증이 없으나 점차 진행되어 치아 속 신경까지 깊이 썩은 경우에 통증이 나타나고, 매복치가 있는 경우 치아 주변 조직의 염증으로 통증이 유발되며, 치아가 부서지거나 금이 간 경우, 찬 음식에 닿거나 강하게 깨물었을 때 치아가 갈라지면서 신경에 자극을 주어 통증이 생긴다. 치수염에 의한 경우, 초기에는 찬 음식이 닿을 때 통증을 느끼고 더 진행된 경우에는 뜨거운 음식에 통증을 느끼게 되며, 염증이 진행되어 치수 조직이 죽으면 찬 것, 더운 것에 대한 반응은 없고 치근단(치아 뿌리 끝)의 염증에 의한 통증이 생기게 된다.Toothache refers to pain in the tooth when eating sweet food, or very cold or hot food, and generally includes not only pain in the tooth itself, but also pain in the periodontal tissue that supports the tooth to the jawbone. do. It usually causes pain when chewing, gums swell, and foul-smelling discharge comes out. Toothache causes slightly different pain depending on the cause of the disease. Specifically, the pain caused by dental caries is painless in the beginning, but gradually progresses and pain appears when the nerve inside the tooth is deeply rotted, and in the case of an impacted tooth, inflammation of the tissues around the tooth causes pain. Pain is caused, and when a tooth is broken or cracked, when it touches cold food or bites hard, the tooth splits and irritates the nerve, causing pain. In the case of pulpitis, in the early stages, pain is felt when cold food touches it, and in more advanced cases, pain is felt when hot food is touched. As the inflammation progresses and the pulp tissue dies, there is no response to cold or hot things, and the periapex (end of the tooth root) Pain occurs due to inflammation.

상기 시린이는 상아질과민증 치아(hypersensitive dentine)를 말하며, 시린이 증상이란 상아질 지각과민증(dentine hyperesthesia)을 말한다. 시린이 증상은 노출된 치아의 상아질 부분이 찬 공기나 자극적인 음식물 등에 접촉되었을 때 민감하게 느껴지는 것으로써, 치주질환을 가진 성인의 60 ~ 98 %에서 증상을 보이고 있다. 시린이 증상은 잘못된 양치 습관이나 과도한 교합력, 산에 의한 용해에 의해 잇몸쪽에 이가 패이는 경우, 구강 위생 상태가 불량한 경우, 치주 치료 후, 수복 치료를 받은 후, 산성화에 의한 치아가 용해된 경우에 나타날 수 있다. 시린이 증상의 근본적인 원인으로 치아의 상아질에 존재하는 많은 세관이 외부로 노출되면서 나타나는데, 노출에 의해 모든 자극을 그대로 치수내 신경으로 전달하여 똑같은 자극에 대해서도 평소보다 민감하게 반응 하게 되며 통증을 유발할 수 있다. 시린이 증상은 가벼운 증상에서 격렬하고 지속적인 통증까지 다양하게 나타날 수 있으며, 치아의 특성상 재생이 되지 않기 때문에 진통제나 소염제 등의 복용은 시린 현상의 근본적인 해결책이 되지 못한다. 시린이 증상은 치아 전체에 전반적으로 나타나기도 하며, 상악이나 하악, 또는 오른쪽이나 왼쪽 등 특정 부위에 한정되어 나타나기도 한다. 많이 발병하는 부위는 원인에 따라 다르나, 주로 송곳니, 작은 어금니 부위이며 가장 심하게 통증이 나타나는 부위는 90% 이상이 잇몸과 치아의 경계부분인 치경부이다.The syrin refers to teeth with hypersensitive dentine, and the syrin symptoms refer to dentine hyperesthesia. Sensitivity is a symptom in which the exposed dentin of teeth feels sensitive when it comes in contact with cold air or irritating food, and 60 to 98% of adults with periodontal disease show the symptom. Symptoms of sensitive teeth occur when teeth are dented in the gum area due to incorrect tooth brushing habits, excessive bite force, dissolution by acid, poor oral hygiene, after periodontal treatment, after receiving restorative treatment, or when teeth are dissolved due to acidification. It may appear. The fundamental cause of this symptom is that many tubules present in the dentin of the tooth are exposed to the outside. Due to this exposure, all stimulation is transmitted to the nerves within the pulp, making the patient react more sensitively to the same stimulation than usual, which can cause pain. there is. Symptoms of sensitive teeth can range from mild symptoms to intense and persistent pain. Due to the nature of teeth, they do not regenerate, so taking painkillers or anti-inflammatory drugs is not a fundamental solution to the sensitive condition. Sensitivity may appear throughout the teeth, or may be limited to specific areas such as the upper or lower jaw, or the right or left side. The most affected area varies depending on the cause, but it is mainly the canines and premolars, and the most painful area in more than 90% of cases is the cervical region, which is the border between the gums and teeth.

상기 구취(bad breath)는 구강 및 인접기관으로부터 유래되는 냄새로 구취의 85 ~ 90%가 구강에서 유래하며, 특히, 혀의 뒷쪽에서 유래하고 있다. 구취의 주요 성분은 휘발성 황화합물인데, 휘발성 황화합물의 전체량 중 90%가 시스테인으로부터 만들어지는 황화수소(hydrogen sulfide)와 메티오닌으로부터 만들어지는 메틸머캡탄(methyl mercaptan)및 디메틸설파이드(dimethyl sulfide)이다. 이러한 성분들은 주로 혐기성 세균이 분비하는 단백질 효소에 의해서 생성되며, 혀의 뒷쪽이 가장 중요한 서식지가 된다. 이 부위는 타액에 의해 세정작용이 잘 되지 않고, 많은 작은 함몰이 있어 세균이 지속적으로 살아가는 장소가 된다. 혐기성 세균에 의한 휘발성 황화합물 생성이 구취의 원인으로 가장 중요하지만, 그 외 치아 우식증, 치주염, 구강 건조증 등과 같은 구강질환에 의해서도 발생한다. 구취를 발생시키는데 많은 종류의 혐기성 세균이 관여하며, 구취 발생 원인균의 비제한적인 예로 많은 종류와 많은 양의 효소를 분비하는 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)를 들 수 있다.The bad breath is an odor originating from the oral cavity and adjacent organs, and 85 to 90% of bad breath originates from the oral cavity, especially from the back of the tongue. The main components of bad breath are volatile sulfur compounds, and 90% of the total amount of volatile sulfur compounds are hydrogen sulfide made from cysteine, and methyl mercaptan and dimethyl sulfide made from methionine. These ingredients are mainly produced by protein enzymes secreted by anaerobic bacteria, and the back of the tongue is their most important habitat. This area is not cleaned well by saliva and has many small depressions, making it a place where bacteria continue to live. The production of volatile sulfur compounds by anaerobic bacteria is the most important cause of bad breath, but it can also be caused by other oral diseases such as dental caries, periodontitis, and dry mouth. Many types of anaerobic bacteria are involved in causing bad breath, and a non-limiting example of the bacteria causing bad breath is Porphyromonas gingivalis, which secretes many types and large amounts of enzymes.

이에 본원발명의 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 상기 치주질환, 구강건조증, 치아 우식증, 치통, 시린이 및 구취로 이루어진 군으로부터 선택되는 구강 질환의 예방 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다.Accordingly, the composition containing the mountain bone odor extract of the present invention as an active ingredient can exhibit an effect of preventing or improving oral diseases selected from the group consisting of periodontal disease, dry mouth, dental caries, toothache, dry teeth, and bad breath.

바람직하게, 치주질환 및 구강건조증에 대한 예방 또는 개선 효과를 나타내는 것일 수 있다.Preferably, it may exhibit a preventive or improvement effect on periodontal disease and dry mouth.

상기 본원발명의 산골취 추출물을 유효성분으로 포함하는 구강질환의 예방 또는 개선용 조성물은 고산부전바디 추출물, 카칼리아 추출물 및 잔잎바디 추출물을 더 포함하는 것일 수 있다.The composition for preventing or improving oral diseases containing the extract of mountain odor of the present invention as an active ingredient may further include extract of alpine insufficiency body, Cacalia extract, and fine leaf body extract.

상기 고산부전바디(Coelopleurum saxatile DRUDE.)는 산형과의 여러해살이풀로 다년초로 뿌리는 굵고 깊이 들어가며 줄기는 곧추서고 능선이 있으며 밑에서 분지하고 종종 마디에 미모(微毛)가 있으며 높이 25~40㎝이다. 잎은 2~3회 우상복엽이고 근엽은 엽병이 길며 밑부분이 넓어져 줄기를 감싸고 윗부분의 것은 완전히 엽초로 된다. 열편은 난형 또는 타원형이고 끝이 뾰족하며 끝이 가시처럼 뾰족한 톱니가 있고 표면 맥 위에 털이 약간 있다. 꽃은 8월에 홍백색으로 피고 복산형화서로 달리며 소산경은 20여 개로 길이 3.8㎝이고 총포는 없으며 소총포는 많고 선형으로 소화경보다 훨씬 길다. 꽃은 5수성이고 자방에 잔 돌기가 있으며 과실은 분과로 타원형이며 분과의 늑(肋)은 몹시 얇고 넓은 날개 모양으로 균등하게 발달한다. 본원발명에서는 고산부전바디의 줄기를 사용하는 것일 수 있다.Coelopleurum saxatile DRUDE. is a perennial herb of the Umbrella family. The roots are thick and deep, the stems are upright, have ridges, branch from the bottom, often have beautiful hairs at the nodes, and are 25 to 40 cm tall. am. The leaves are 2-3 pinnately compound leaves, the rosettes have long petioles, the lower part widens to surround the stem, and the upper part becomes completely a leaf sheath. The lobes are egg-shaped or oval-shaped, have pointed ends, have sharp teeth like thorns, and have some hairs on the surface veins. The flowers bloom in red and white in August and grow in compound umbels, with about 20 small peduncles, 3.8 cm long, without involucre, and with many lanceolate inflorescences, which are linear and much longer than the peduncles. The flowers are pentapodous, have fine protrusions on the ovary, and the fruits are oval-shaped and the ribs of the branches are very thin and evenly developed in the shape of wide wings. In the present invention, the stem of the alpine body may be used.

상기 카칼리아(Emilia coccinea)는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 여러해살이 풀로 인도가 원산지이고 관상 식물로 재배한다. 잎은 어긋나고 긴 달걀 모양이며 가장자리에 둔한 톱니가 있고 잎자루가 없으며 분을 칠한 것처럼 보인다. 꽃은 6∼10월에 주황색이 도는 붉은 색으로 피고 가는 꽃줄기 끝에 두상화(頭狀花:꽃대 끝에 꽃자루가 없는 작은 꽃이 많이 모여 피어 머리 모양을 이룬 꽃)가 달린다. 두상화는 관상화로 구성되며, 관상화의 화관은 5개로 갈라진다. 열매는 수과이다. 봄에 파종하며 성질이 강하다. 카칼리아란 과거의 속명(屬名)인 Cacalia에서 유래했으며, 불꽃씀바귀와 비슷하다.The Emilia coccinea is a perennial herb of the dicotyledonous plant Campanula Asteraceae, is native to India, and is cultivated as an ornamental plant. The leaves are alternate, long egg-shaped, have dull sawtooth edges, have no petioles, and look like they are powdered. The flowers bloom in an orange-red color from June to October, and a capitate flower (a flower made up of many small flowers without peduncles blooming at the end of a flower stalk, forming a head) hangs at the end of a thin flower stem. The capitol flower is composed of tubular flowers, and the corolla of the tubular flower is divided into five parts. The fruit is an achene. It is sown in spring and has strong properties. Cacalia is derived from the old genus name Cacalia, and is similar to the fireweed.

상기 잔잎바디(Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.)는 쌍떡잎식물 산형화목 산형과의 여러해살이 풀로 높이는 1m 정도이다. 잎은 서로 어긋나게 생겨나며 큰 세모꼴로서 두세 번 깃털 모양으로 갈라진다. 지름이 3mm 안팎으로 아주 자그마한 흰 꽃이 10~30송이 모여 작은 우산 모양을 이룬 것이 다시 10여 개가 모여져서 큰 우산 모양의 꽃차례를 구성하고 있다. 한 송이의 꽃은 5장의 꽃잎으로 이루어진다. 꽃이 지고 난 뒤 생기는 열매에는 기름기가 스미는 구멍이 있어서 윤기가 난다. 7~8월에 겹산형 꽃차례로 흰 꽃이 피며, 열매는 9~10월에 공 모양으로 익는다. 강원, 경기, 제주 등지에 분포한다.The fine leaf body (Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.) is a perennial herb of the dicotyledonous Umbrella family Umbrella and has a height of about 1 m. The leaves grow alternately and are shaped like large triangles, splitting two or three times into feather shapes. About 10 to 30 very small white flowers, about 3 mm in diameter, gather together to form a small umbrella, and about 10 more gather together to form a large umbrella-shaped inflorescence. One flower consists of 5 petals. The fruits that appear after the flowers wither have holes through which oil seeps, making them shiny. White flowers bloom in compound inflorescences in July and August, and the fruit ripens in a ball shape in September and October. Distributed in Gangwon, Gyeonggi, Jeju, etc.

바람직하게, 본원발명의 구강 질환의 예방 또는 개선용 조성물은 상기 산골취 추출물에 고산부전바디 추출물, 카칼리아 추출물 및 잔잎바디 추출물을 더 포함함으로써 산골취 추출물 만을 포함하는 조성물에 비해 보다 더 향상된 구강 질환의 예방, 개선 또는 치료 효과를 나타낼 수 있다.Preferably, the composition for preventing or improving oral diseases of the present invention further includes alpine body extract, Cacalia extract, and fine leaf body extract in the above-mentioned mountain bonech extract, thereby improving oral disease more than a composition containing only the mountain bonech extract. It can show prevention, improvement or treatment effects.

보다 바람직하게는, 상기 산골취 추출물 100 중량부에 대하여 고산부전바디 추출물 10 내지 30 중량부, 카칼리아 추출물 10 내지 30 중량부 및 잔잎바디 추출물 10 내지 30 중량부를 포함하는 것일 수 있다.More preferably, it may include 10 to 30 parts by weight of Gosanjeonbae body extract, 10 to 30 parts by weight of Cacalia extract, and 10 to 30 parts by weight of fine leaf body extract, based on 100 parts by weight of the mountain bonech extract.

상기 중량부 범위 내에서 복합 추출물로 사용하는 경우, 각 추출물의 상호 작용에 의한 상승 효과로 임계적 의의가 있는 정도의 상승 효과가 발현되며, 복합 추출물로 포함함으로써 산골취 추출물만을 포함하는 조성물에 비해 맛 및 향을 포함하는 종합 기호도가 향상될 수 있다. 한편, 상기 중량부 범위를 벗어나는 경우 상승 효과가 급격히 저하되거나 큰 폭으로 증가하지 않을 수 있게 된다. When used as a complex extract within the above weight part range, a synergistic effect of critical significance is expressed due to the synergistic effect due to the interaction of each extract, and by including it as a complex extract, compared to a composition containing only the mountain golch extract, Comprehensive preference, including taste and aroma, can be improved. On the other hand, if it is outside the above weight part range, the synergistic effect may decrease sharply or may not increase significantly.

상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출되는 것이다.The extract is extracted using an extraction solvent selected from the group consisting of water, C 1 to C 6 lower alcohols, and mixtures thereof.

상기 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 침출법 및 환류 추출법 등 당업계의 통상적인 추출 방법일 수 있다. 구체적으로 세척 및 건조로 이물질이 제거된 천연물을 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 상기 용매들을 순차적으로 시료에 적용하여 추출한 추출물일 수 있다.The method of preparing the extract may be a conventional extraction method in the art, such as ultrasonic extraction, leaching, and reflux extraction. Specifically, it may be an extract obtained by extracting a natural product from which foreign substances have been removed by washing and drying with water, alcohol having 1 to 6 carbon atoms, or a mixed solvent thereof, and may be an extract obtained by sequentially applying the solvents to the sample.

상기 초음파 추출법은 30 내지 50℃, 0.5 내지 2.5시간 동안 반응을 진행하며, 추출용매는 물 또는 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다. 구체적으로는 40 내지 50℃, 1 내지 2.5시간 동안 추출하며, 추출용매로 물 또는 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.The ultrasonic extraction method proceeds at 30 to 50°C for 0.5 to 2.5 hours, and the extraction solvent is water or 50 to 100% alcohol with 1 to 6 carbon atoms. Specifically, extraction is performed at 40 to 50°C for 1 to 2.5 hours, and the extraction solvent is water or 70 to 80% alcohol with 1 to 6 carbon atoms.

상기 침출법은 15 내지 30℃, 24 내지 72시간 동안 진행하며, 추출용매로 물 또는 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올을 이용한다. 보다 구체적으로는 20 내지 25℃, 30 내지 54시간 동안 진행하며, 추출 용매는 물 또는 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.The leaching method is carried out at 15 to 30°C for 24 to 72 hours, and water or 50 to 100% alcohol with 1 to 6 carbon atoms is used as an extraction solvent. More specifically, it is carried out at 20 to 25°C for 30 to 54 hours, and the extraction solvent is water or 70 to 80% alcohol with 1 to 6 carbon atoms.

상기 환류 추출법은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100mL기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 30g, 환류 시간 1 내지 3시간 및 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 물에 의한다. 보다 구체적으로, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100mL 또는 물 100mL 기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 20g, 환류 시간 1 내지 2 시간 및 70 내지 90%의 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 물에 의한 것이다.The reflux extraction method is based on 100 mL of water and alcohol with 1 to 6 carbon atoms, 10 to 30 g of pulverized natural product, reflux time of 1 to 3 hours, and 50 to 100% of alcohol or water with 1 to 6 carbon atoms. More specifically, based on 100 mL of alcohol with 1 to 6 carbon atoms or 100 mL of water, 10 to 20 g of pulverized natural product, 1 to 2 hours of reflux time, and 70 to 90% of alcohol or water with 1 to 4 carbon atoms.

상기 추출 용매는 시료의 중량 기준으로 2 내지 50배를 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로는 2 내지 20배이다. 추출을 위해 시료는 추출 용매에서 침출을 위해 1 내지 72 시간 동안 방치될 수 있으며, 보다 구체적으로 24 내지 48시간 동안 방치될 수 있다.The extraction solvent can be used in an amount of 2 to 50 times, more specifically, 2 to 20 times the weight of the sample. For extraction, the sample may be left for 1 to 72 hours, more specifically, 24 to 48 hours for leaching in the extraction solvent.

추출 후, 추출물은 새로운 분획 용매를 순차적으로 적용하여 분획할 수 있다. 분획시 사용하는 분획 용매는 상기 용매는 물, 헥산, 부탄올, 에틸아세트산, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이며, 바람직하게는 에틸아세테이트 또는 메틸렌클로라이드이다.After extraction, the extract can be fractionated by sequentially applying a new fractionation solvent. The fractionating solvent used during fractionation is at least one selected from the group consisting of water, hexane, butanol, ethyl acetic acid, ethyl acetate, methylene chloride, and mixtures thereof, and is preferably ethyl acetate or methylene chloride.

추출물 또는 분획물을 얻은 후에는 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 사용할 수 있다.After obtaining the extract or fraction, additional methods such as concentration or freeze-drying can be used.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것이다.A food composition for preventing or improving oral diseases according to another embodiment of the present invention includes the composition.

이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 약 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 약 0.01 내지 10g의 비율로 가할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.At this time, the amount of the extract in the food or beverage can be added at about 0.01 to 15% by weight of the total weight of the food, and the health drink composition can be added at a rate of about 0.01 to 10g based on 100 ml, but is not limited thereto. .

본 발명의 식품 조성물이 음료 조성물인 경우, 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파탐 등)를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g의 범위일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.When the food composition of the present invention is a beverage composition, other than containing the extract as an essential ingredient in the ratio indicated, there are no particular restrictions on other ingredients, and various flavoring agents or natural carbohydrates may be contained as additional ingredients like ordinary beverages. You can. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose, etc.; Disaccharides such as maltose, sucrose, etc.; and polysaccharides, such as common sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (thaumatin, stevia extract (e.g. rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used, but are not limited to these. The ratio of the natural carbohydrate may generally range from about 1 to 20 g per 100 ml of the composition of the present invention, but may not be limited thereto.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, Ph 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.In addition to the above, the composition of the present invention contains various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic and natural flavors, colorants and thickening agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its It may contain salt, organic acid, protective colloidal thickener, Ph adjuster, stabilizer, preservative, glycerin, alcohol, carbonating agent used in carbonated beverages, etc., but may not be limited thereto.

그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있고, 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 중요하지는 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 약 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, the composition of the present invention may contain natural fruit juice and pulp for the production of fruit juice drinks and vegetable drinks, and these ingredients can be used independently or in combination. The proportion of these additives is not critical, but may be selected in the range of about 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention, but is not limited thereto.

또한, 상기 식품 조성물을 포함하여 기능성 식품을 제조할 수 있으며, 본 발명에서 말하는 기능성 식품은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품으로 건강보조식품을 포함하며, 기타, 식품성분이 갖는 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품으로서, 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능도 갖는 것을 모두 포함하는 것으로 한다.In addition, functional food can be manufactured including the above food composition, and the functional food referred to in the present invention is made of a specific ingredient as a raw material for the purpose of health supplement, or extracts, concentrates, purifies, mixes, etc. a specific ingredient contained in the food raw material. Foods manufactured and processed by methods include health supplements, and are designed and processed to fully exert the bioregulatory functions of food ingredients, such as biodefense, regulation of biorhythm, and disease prevention and recovery, on the living body. It is a food that has functions related to disease prevention and disease recovery, etc.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것이다.A quasi-drug composition for preventing or improving oral diseases according to another embodiment of the present invention includes the composition.

본 발명의 의약외품 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 유효성분 이외에 구강용 의약외품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 연마제, 습윤제, 결합제, 기포제, 감미제, 방부제, 약효성분, 향미제, 색소, 용제, 증백제, 가용화제 또는 pH 조정제를 포함할 수 있다.The ingredients included in the quasi-drug composition of the present invention are active ingredients and may include ingredients commonly used in oral quasi-drug compositions in addition to the above-mentioned active ingredients, such as abrasives, wetting agents, binders, foaming agents, sweeteners, preservatives, medicinal ingredients, and flavors. It may include agents, pigments, solvents, brighteners, solubilizers, or pH adjusters.

또한, 상기 구강질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으나, 바람직하게 상기 의약외품 조성물은 치약, 구강세정제, 구강청정제, 껌, 캔디류, 구강스프레이, 구강용 연고제, 구강용 바니쉬, 구강양치액 및 잇몸 마사지 크림으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 제형인 것이다.In addition, the quasi-drug composition for preventing or improving oral diseases may be manufactured in any formulation commonly manufactured in the art, but preferably the quasi-drug composition is toothpaste, mouthwash, mouthwash, gum, candy, oral spray, It is one or more formulations selected from the group consisting of oral ointment, oral varnish, oral rinse, and gum massage cream.

본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 구강질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 상기 조성물을 포함하는 것이다.A pharmaceutical composition for preventing or treating oral diseases according to another embodiment of the present invention includes the composition.

상기 약학 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition may further include one selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable carriers, excipients, and diluents. Specifically, the pharmaceutical composition may be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, and aerosols, external preparations, suppositories, and sterile injection solutions, respectively, according to conventional methods. You can.

본 발명에서, 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.In the present invention, carriers, excipients, and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, and calcium phosphate. , calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. When formulated, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations include the extract and its fractions with at least one excipient such as starch, calcium carbonate, It is prepared by mixing sucrose, lactose, and gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate and talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, oral solutions, emulsions, and syrups, and may contain various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives in addition to the commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. there is. Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao, laurin, glycerogenatin, etc. can be used.

상기 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 단독으로 투여하거나 공지된 면역치료제와 병용하여 투여 될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount, and the term "pharmaceutically effective amount" in the present invention refers to treating or preventing a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment or prevention. It means a sufficient amount, and the effective dose level is determined by the severity of the disease, the activity of the drug, the patient's age, weight, health, gender, the patient's sensitivity to the drug, the administration time, administration route, and excretion rate of the composition of the present invention used. It may be determined depending on factors including the duration of treatment, drugs used in combination or concurrently with the composition of the present invention used, and other factors well known in the medical field. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered alone or in combination with a known immunotherapeutic agent. It is important to consider all of the above factors and administer the amount that will achieve the maximum effect with the minimum amount without side effects.

본 발명의 조성물은 산골취 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 치주질환 및 구강건조증을 포함하는 구강 질환 예방, 개선 또는 치료 효과를 나타낼 수 있는 천연추출물 기반의 조성물을 제공할 수 있다.The composition of the present invention can provide a composition based on natural extracts that can prevent, improve, or treat oral diseases, including periodontal disease and dry mouth, by including mountain bone odor extract as an active ingredient.

또한, 본 발명의 조성물을 식품 조성물, 의약외품 조성물 또는 약학 조성물 등으로 제공하여 부작용의 문제가 없으며, 우수한 구강 질환 예방, 개선 또는 치료 효과를 나타내고 기호도 또한 우수한 조성물을 제공할 수 있다.In addition, the composition of the present invention can be provided as a food composition, quasi-drug composition, or pharmaceutical composition, thereby providing a composition that has no side effects, shows excellent oral disease prevention, improvement, or treatment effects, and has excellent palatability.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art can easily implement it. However, the present invention may be implemented in many different forms and is not limited to the embodiments described herein.

[제조예 1: 천연추출물의 제조][Preparation Example 1: Preparation of natural extract]

1. 산골취 추출물의 제조1. Preparation of mountain bone extract

산골취를 물에 세척한 후, 완전히 자연 건조시켰다. 건조된 산골취를 믹서기로 분쇄한 뒤, 80% 에탄올을 사용하여 상온에서 36시간 동안 침출시킨 후 시료를 여과(filter)하여 산골취 추출물(SE)을 제조하였다.After washing the mountain bone with water, it was completely dried naturally. The dried mountain golchwi was pulverized in a blender, leached at room temperature for 36 hours using 80% ethanol, and then the sample was filtered to prepare mountain golchwi extract (SE).

2. 기타 추출물의 제조2. Preparation of other extracts

상기 산골취 추출물(SE)과 동일한 방법으로 고산부전바디 추출물(CE), 카칼리아 추출물(EE) 및 잔잎바디 추출물(AE)을 제조하였다.Gosanjeonbu body extract (CE), Cacalia extract (EE), and fine leaf body extract (AE) were prepared in the same manner as the mountain golchwi extract (SE).

3. 복합 추출물의 제조3. Preparation of complex extract

상기 산골취 추출물(SE)과 동일한 방법으로 고산부전바디 추출물(CE), 카칼리아 추출물(EE) 및 잔잎바디 추출물(AE)을 하기 표 1과 같은 중량부 범위 내로 혼합하여 복합 추출물을 제조하였다.A composite extract was prepared by mixing Gosanjeonbae body extract (CE), Cacalia extract (EE), and Aleaf body extract (AE) within the weight range as shown in Table 1 in the same manner as the above-mentioned mountain golchwi extract (SE).

MX1MX1 MX2MX2 MX3MX3 MX4MX4 MX5MX5 MX6MX6 MX7MX7 MX8MX8 MX9MX9 SES.E. 100100 100100 100100 100100 100100 100100 100100 100100 100100 CEC.E. -- 2020 -- -- 1One 1010 2020 3030 4040 EEEE -- -- 2020 -- 1One 1010 2020 3030 4040 AEA.E. -- -- -- 2020 1One 1010 2020 3030 4040

(단위 : 중량부)(Unit: parts by weight)

[실험예 1 : 산골취 추출물의 치주 질환(치은염 및 치주염) 예방 또는 개선 활성 측정][Experimental Example 1: Measurement of periodontal disease (gingivitis and periodontitis) prevention or improvement activity of mountain bone extract]

1. 실험 방법1. Experimental method

산골취 추출물(SE)의 치은염 및 치주염 개선 효과를 평가하기 위해, 현재 대표적인 치은염 및 치주염 개선 모델로 이용되고 있는 치아 경부 결찰 래트(rat) 치주질환(experimental periodontitis; EPD)을 이용하여 평가하였다. 즉, 치아 경부 결찰 24시간 후부터 산골취 추출물(SE)을 멸균 증류수에 용해시켜, 5 ml/kg의 용량 (200 mg/kg)으로 매일 1회씩 10일간 강제 경구투여하고, 치은조직 내 interleukin(IL)-1β 및 치주골량의 변화를 조직병리학적 변화와 함께 관찰하였다. 이때, non-steroid antiinflammatory drugs (NSAIDs) 계열의 항염제인 indomethacin (IND) 5 mg/kg 경구 투여군과 각각 비교 평가하였다.In order to evaluate the effect of ginseng extract (SE) on improving gingivitis and periodontitis, the cervical ligation rat periodontal disease (EPD), which is currently used as a representative model for improving gingivitis and periodontitis, was evaluated using periodontal disease (EPD). That is, starting 24 hours after tooth neck ligation, mountain snail extract (SE) was dissolved in sterile distilled water and administered orally at a dose of 5 ml/kg (200 mg/kg) once daily for 10 days, and interleukin (IL) in the gingival tissue was administered. )-1β and periodontal bone mass changes were observed along with histopathological changes. At this time, each group was compared and evaluated with the oral administration group of 5 mg/kg indomethacin (IND), an anti-inflammatory agent of the non-steroid antiinflammatory drugs (NSAIDs) class.

실험 물질 조성 및 투여Experimental material composition and administration

산골취 추출물(SE)을 40 mg/ml의 농도로 멸균 증류수에 용해시켜, 5 ml/kg의 용량(200 mg/kg)으로 치아 경부 결찰 24시간 후부터 매일 1회씩 10일간 각각 경구 투여 하였으며, IND(항염제)는 1 mg/ml의 농도로 멸균증류수에 용해시켜, 5 ml/kg의 용량 (5 mg/kg)으로 치아 경부 결찰 24시간 후부터 매일 1회씩 10일간 경구 투여하였다. 정상 매체 대조군 및 EPD(치주질환) 대조군에서는 동일한 투여 스트레스를 가하기 위해 산골취 추출물(SE) 대신 매체인 멸균증류수만을 동일한 용량 및 빈도로 경구 투여하였다.Sangolchwi extract (SE) was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 40 mg/ml, and administered orally at a dose of 5 ml/kg (200 mg/kg) once daily for 10 days starting 24 hours after tooth neck ligation. IND (Anti-inflammatory agent) was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 1 mg/ml and administered orally at a dose of 5 ml/kg (5 mg/kg) once daily for 10 days starting 24 hours after tooth neck ligation. In the normal medium control group and the EPD (periodontal disease) control group, in order to apply the same administration stress, only sterilized distilled water, the medium, was administered orally at the same dose and frequency instead of Sanggolchwi extract (SE).

치주질환유발Causes periodontal disease

실험동물을 10일간 실험실 환경에 순화시킨 다음, 설치류용 흡입마취기 (Surgivet, Waukesha, WI, USA)와 환기 장치(Model 687, Harvard Apparatus, Cambridge, UK)를 이용하여 3% isoflurane (Hana Pharm. Co., Hwasung, Korea)과 70% N2O 및 28.5% O2 혼합가스로 전신 흡입 마취하고, 왼쪽 절치의 치아 경부에 3-0 나일론 봉합사를 이용하여 결찰을 실시하여 치주염 및 치은 질환을 유발하였다. 한편 정상 매체 대조군에서는 절치의 치아 경부 부분만 확인한 후 결찰하지 않았다.The experimental animals were acclimatized to the laboratory environment for 10 days and then administered 3% isoflurane (Hana Pharm. Co. ., Hwasung, Korea) and 70% N 2 O and 28.5% O 2 mixed gas, followed by ligation using 3-0 nylon suture on the tooth neck of the left incisor to induce periodontitis and gingival disease. . Meanwhile, in the normal medium control group, only the cervical part of the incisor was checked and not ligated.

증체량 확인 방법How to check weight gain

증체량을 측정하기 위해 실험기간 동안 체중 변화를 전자저울을 통해 측정하였다. 치아 결찰 1일 후 시료투여 첫날의 체중을 측정하고 10일 후 최종 샘플 투여날의 체중을 측정하여 증체량을 측정한다.(증체량 = 희생시킨 날의 체중 - 샘플 투여 시작 시점의 체중(결찰 후 24시간 후))To measure weight gain, body weight changes were measured using an electronic scale during the experiment. 1 day after tooth ligation, body weight is measured on the first day of sample administration, and 10 days later, body weight is measured on the final sample administration day to determine body weight gain. (Weight gain = body weight on the day of sacrifice - body weight at the start of sample administration (24 hours after ligation) after))

치은조직 내 interleukin(IL)-1β와 TNF-α 변화 확인Confirmation of changes in interleukin (IL)-1β and TNF-α in gingival tissue

11일간 EPD한 치은 조직을 균질화 한 후 ELISA kit(IL-1β rat ELISA kit, Abcam, Cambridge, UK)을 사용하여 측정하였다. 시험방법은 제조사의 방법에 따라 진행하였으며, 균질화된 샘플과 표준품 100uL를 각 well에 첨가한 후 37℃ 배양기에서 2시간 배양한다. 배양 후 상층액을 제거하고 각 well에 1×biotin 으로 표지된 항체(antibody)를 각 100uL씩 넣은 후 37℃ 배양기에서 1시간 배양한다. 각 well의 상층액을 제거하고 3회 세척한 후 100uL의 1×horseradish peroxidase-conjugated avidin 을 넣어준 뒤 37℃에서 한시간 배양한다. 각 well에 3,3‘,5,5’-Tetramethylbenzidine을 90uL 넣어준 후 37℃에서 15~30분간 배양한다. 각 well에 stop solution을 50uL 씩 넣어준 후 microplate Reader(Tecan, Mannedofr, Switzerland)에서 450nm의 파장으로 흡광도를 측정하여 결과값을 계산한다.Gingival tissue EPDed for 11 days was homogenized and measured using an ELISA kit (IL-1β rat ELISA kit, Abcam, Cambridge, UK). The test method was conducted according to the manufacturer's method, and 100uL of the homogenized sample and standard were added to each well and incubated in an incubator at 37°C for 2 hours. After incubation, the supernatant is removed, 100uL of 1×biotin-labeled antibody is added to each well, and cultured in an incubator at 37°C for 1 hour. Remove the supernatant from each well, wash three times, add 100uL of 1×horseradish peroxidase-conjugated avidin, and incubate at 37°C for one hour. Add 90uL of 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine to each well and incubate at 37°C for 15 to 30 minutes. After adding 50uL of stop solution to each well, measure the absorbance at a wavelength of 450nm in a microplate reader (Tecan, Mannedofr, Switzerland) and calculate the result.

MDA 함량 확인 방법How to check MDA content

지질과산화 지표인 MDA를 측정하기 위해, 치아의 결찰된 부위와 닿아 있는 치은 조직을 떼어낸 뒤, 50 mM TrisHCl, 0.1 mM EGTA, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride(pH 7.4) buffer 에 넣어 homogenizer를 통해 균질화한다. 100 ul의 균질화된 치은 조직에 200 uL의 reaction mixture(8.1% (w/v) sodium dodecyl sulfate, 1500ul 의 20%(v/v) acetic acid, 1500 ul의 0.8%(w/v) thiobarbituric acid, 700 ul DW) 첨가한다. 95℃에서 1시간 반응 시킨 후 3000 × g 에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 UV/VIS spectrophotometer를 통해 650nm에서 측정한다.To measure MDA, an indicator of lipid peroxidation, gingival tissue in contact with the ligated area of the tooth is removed, placed in 50mM TrisHCl, 0.1mM EGTA, 1mM phenylmethylsulfonyl fluoride (pH 7.4) buffer, and homogenized using a homogenizer. To 100 ul of homogenized gingival tissue, 200 ul of reaction mixture (8.1% (w/v) sodium dodecyl sulfate, 1500 ul of 20% (v/v) acetic acid, 1500 ul of 0.8% (w/v) thiobarbituric acid, Add 700 ul DW). After reacting at 95°C for 1 hour, centrifuge at 3000 × g for 10 minutes and measure the supernatant at 650nm using a UV/VIS spectrophotometer.

파골세포의 수 측정 방법How to measure the number of osteoclasts

파골세포 수의 측정은 TRAP 염색을 통해 TRAP 양성 다핵세포의 수를 세어 평가하였다. TRAP 염색은 TRAP 염색 kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 이용하여 kit에 기재된 염색과정을 지켜 실시하였다. 탈파라핀과 함수과정을 거친 슬라이드를 고정액(citrate 용액 25 ml, acetone 65 ml, 37% formaldehyde 8 ml)에 30초간 담근 후 흐르는 물에 10분 동안 수세하였다. 37℃ 증류수 45 ml, fast garnet GBC 용액 0.5 ml, sodium nitrite 용액 0.5 ml, naphthol AS-BI 0.5 ml, acetate 용액 2 ml, tartrate 용액 1 ml를 혼합한 용액을 슬라이드 글라스에 떨어뜨린 후 평균 16시간 정도 37℃ humid chamber에서 반응시켰다. 그 후 100% 알코올에 수세하고 대조염색을 위해 1시간 동안 methyl green으로 염색하고 봉입하였다. 광학현미경을 이용하여 치조골 표면을 따라 형성된 TRAP 양성다핵의 파골세포(핵 3개 이상)의 수를 측정하였다.The number of osteoclasts was assessed by counting the number of TRAP-positive multinucleated cells through TRAP staining. TRAP staining was performed using the TRAP staining kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) by following the staining process described in the kit. The slides that had gone through the deparaffinization and hydration process were immersed in a fixative solution (25 ml of citrate solution, 65 ml of acetone, 8 ml of 37% formaldehyde) for 30 seconds and then washed in running water for 10 minutes. A mixture of 45 ml of 37℃ distilled water, 0.5 ml of fast garnet GBC solution, 0.5 ml of sodium nitrite solution, 0.5 ml of naphthol AS-BI, 2 ml of acetate solution, and 1 ml of tartrate solution was dropped on a slide glass and left on average for about 16 hours. The reaction was performed in a 37°C humid chamber. Afterwards, it was washed with 100% alcohol, stained with methyl green for 1 hour for counterstaining, and sealed. Using an optical microscope, the number of TRAP-positive multinucleated osteoclasts (three or more nuclei) formed along the surface of the alveolar bone was measured.

치주골량의 변화 확인Confirmation of changes in periodontal bone mass

치주골 소실량의 측정은 Crawford et al.[1987] 방법을 통해 측정하였으며, 샘플 투여 10일 후(EPD 11일 후) 쥐를 희생시킨 후 치아와 잇몸을 최대한 들어내도록 한다. EPD를 시행한 두 치아 사이의 잇몸 끝과 절치(incisior)의 끝부분 즉 잇몸 밖으로 들어난 치아의 최 하단 부분을 평행으로 하여 면적을 계산하여 mm/rats로 표현한다.The amount of periodontal bone loss was measured by Crawford et al. [1987]. It was measured using this method, and after 10 days of sample administration (11 days after EPD), the rat was sacrificed and the teeth and gums were lifted out as much as possible. The area is calculated by paralleling the tip of the gum between the two teeth on which EPD was performed and the tip of the incisor, that is, the lowest part of the tooth protruding from the gum, and expressed in mm/rats.

호기성 생균수의 변화 측정 방법Method for measuring changes in aerobic viable bacteria count

호기성 생균수의 측정을 위해 결찰하였던 왼쪽 절치를 뽑은 후 결찰부와 맞닿아있던 치주 조직을 떼어낸 후, 0.3ml의 brain heart infusion broth(BHI, Becton, Dicknson and company, USA)에 담는다. 조직을 균질화 한 후 1:100 그리고 1:1000의 비율로 희석하여 blood agar에 접종하여 37℃에서 48시간동안 5%의 CO2 조건에서 배양한 후 콜로니 갯수를 측정하고 생균수를 계산하였다.To measure the number of aerobic bacteria, the ligated left incisor is removed, the periodontal tissue in contact with the ligature is removed, and placed in 0.3 ml of brain heart infusion broth (BHI, Becton, Dicknson and company, USA). After homogenizing the tissue, it was diluted at a ratio of 1:100 and 1:1000, inoculated on blood agar, and cultured at 37°C for 48 hours under 5% CO 2 conditions. The number of colonies was measured and the number of viable cells was calculated.

생균수 = colony 갯수 × 105 CFU/g tissuesNumber of viable bacteria = number of colonies × 10 5 CFU/g tissues

2. 실험 결과2. Experimental results

치주질환 유도 모델에서의 체중의 변화Changes in body weight in periodontal disease induction model

EPD 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.05) 체중의 감소가, 결찰 후 7일 (투여시작 후 6일) 후부터 인정되기 시작하였으며, 10일간의 투여기간 동안의 증체량 역시 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 감소를 나타내었다. 한편, 산골취 추출물(SE) 투여군에서는 EPD 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 체중의 증가가 투여시작 4일 후부터 인정되어 산골취 추출물(SE)에 의한 증체량 증가를 확인할 수 있었다.In the case of the EPD control group, a significant (p<0.05) decrease in body weight compared to the normal medium control group began to be recognized 7 days after ligation (6 days after starting administration), and the amount of weight gain during the 10-day administration period was also normal medium. There was a significant (p<0.01) decrease compared to the control group. Meanwhile, in the group administered with extract (SE), a significant (p<0.01 or p<0.05) increase in body weight was recognized 4 days after the start of administration compared to the EPD control group, confirming the increase in body weight gained by extract (SE). .

치주질환 유도 모델에서의 치은 조직 내 IL-1β 및 TNF-α 함량의 변화 확인을 통한 치은염 및 치주염 개선 효과Effect of improving gingivitis and periodontitis through confirmation of changes in IL-1β and TNF-α content in gingival tissue in periodontal disease-induced model

하기 표 2를 참조하면, EPD 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 치은 조직내 IL-1β 및 TNF-α 함량의 증가가 인정되었으나, 산골취 추출물(SE) 200 mg/kg 투여군에서는 EPD 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 치은조직 내 IL-1β 및 TNF-α 함량의 감소가 인정되었다.Referring to Table 2 below, in the case of the EPD control group, a significant (p<0.01) increase in the content of IL-1β and TNF-α in the gingival tissue was recognized compared to the normal medium control group, but 200 mg/mg/kg of mountain snail extract (SE) was recognized. In the kg administration group, a significant (p<0.01) decrease in IL-1β and TNF-α content in gingival tissue was recognized compared to the EPD control group.

구분division IL-1β 함량(pg/mL)IL-1β content (pg/mL) TNF-α 함량(pg/mL)TNF-α content (pg/mL) Intact(무처리군, control)Intact (untreated group, control) 17.2417.24 201.01201.01 EPDE.P.D. 78.6778.67 884.92884.92 IND(5mg/kg)IND (5mg/kg) 28.4328.43 327.69327.69 산골취 추출물(SE, 200mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 200mg/kg) 25.1125.11 296.21296.21

(단위 : pg/mL)(Unit: pg/mL)

치주질환 유도 모델에서의 치은 조직 내 MDA 함량의 변화 확인을 통한 항산화에 의한 치은염 및 치주염 개선 효과Effect of improving gingivitis and periodontitis through antioxidants by confirming changes in MDA content in gingival tissue in a periodontal disease-induced model

하기 표 3을 참조하면, EPD 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 치은 조직내 MDA 함량의 증가가 인정되었으나, 산골취 추출물(SE) 200 mg/kg 투여군에서는 EPD 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) MDA 함량의 감소가 인정되었다.Referring to Table 3 below, in the case of the EPD control group, a significant (p<0.01) increase in MDA content in the gingival tissue was recognized compared to the normal medium control group, but in the group administered 200 mg/kg of sage extract (SE), the EPD control group A significant (p<0.01) decrease in MDA content was recognized.

구분division MDA contents(μM/mg of tissue)MDA contents (μM/mg of tissue) Intact(무처리군, control)Intact (untreated group, control) 1.721.72 EPDE.P.D. 9.819.81 IND(5mg/kg)IND (5mg/kg) 5.985.98 산골취 추출물(SE, 200mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 200mg/kg) 5.045.04

(단위 : μM/mg of tissue)(Unit: μM/mg of tissue)

치주질환 유도 모델에서의 치주골 내 파골세포(Osteoclast cell)의 수 측정을 통한 치은염 및 치주염 개선 효과Effect of improving gingivitis and periodontitis through measuring the number of osteoclast cells in periodontal bone in a periodontal disease-induced model

하기 표 4를 참조하면, 파골세포의 수는 EPD 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 675.65%의 변화를 나타내었으나, IND 및 산골취 추출물(SE) 투여군에서는 각각 EPD 대조군에 비해 -48.28%, 및 -66.05%의 변화를 나타내었다.Referring to Table 4 below, the number of osteoclasts in the EPD control group showed a change of 675.65% compared to the normal medium control group, but in the IND and Sangolchwi extract (SE) groups, the number changed by -48.28% and -66.05, respectively, compared to the EPD control group. % change was indicated.

구분division Osteoclast cell(cells/mm)Osteoclast cells (cells/mm) Intact(무처리군, control)Intact (untreated group, control) 4.234.23 EPDE.P.D. 32.8132.81 IND(5mg/kg)IND (5mg/kg) 16.9716.97 산골취 추출물(SE, 200mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 200mg/kg) 11.1411.14

(단위 : cells/mm)(Unit: cells/mm)

치주질환 유도 모델에서의 치주골량의 변화 측정을 통한 치은염 및 치주염 개선 효과Effect of improving gingivitis and periodontitis through measuring changes in periodontal bone mass in a periodontal disease induction model

하기 표 5를 참조하면, EPD 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 치주골량의 감소가 인정되었으나, 산골취 추출물(SE) 200 mg/kg 투여군에서는 EPD 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 치주골량의 증가가 인정되었다.Referring to Table 5 below, in the case of the EPD control group, a significant (p<0.01) decrease in periodontal bone mass was recognized compared to the normal medium control group, but in the group administered 200 mg/kg of mountain snail extract (SE), there was a significant decrease compared to the EPD control group. (p<0.01) An increase in periodontal bone mass was recognized.

구분division Alveolar bone loss scores (mm)Alveolar bone loss scores (mm) Intact(무처리군, control)Intact (untreated group, control) 0.920.92 EPDE.P.D. 2.472.47 IND(5mg/kg)IND (5mg/kg) 1.521.52 산골취 추출물(SE, 200mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 200mg/kg) 1.341.34

(단위 : mm)(Unit: mm)

치주질환 유도 모델에서의 구강 협부 총 호기성 생균수의 변화 측정을 통한 항균에 의한 치은염 및 치주염 개선 효과Effect of improving gingivitis and periodontitis by antibacterial agents by measuring changes in total aerobic bacteria count in the oral buccal area in a periodontal disease-induced model

하기 표 6을 참조하면, EPD 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 구강 협부 총 호기성 생균수의 증가가 인정되었으나, EPD 대조군과 유사한 생균수를 나타낸 IND 5 mg/kg 투여군 이외 산골취 추출물(SE) 투여군에서는 EPD 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 구강내 생균수의 감소가 인정되었다.Referring to Table 6 below, in the case of the EPD control group, a significant (p<0.01) increase in the total number of aerobic viable bacteria in the oral cavity was recognized compared to the normal medium control group, but the IND 5 mg/kg administered group showed a similar number of viable bacteria as the EPD control group. In addition, a significant (p<0.01) decrease in the number of live bacteria in the oral cavity was recognized in the group administered with mountain snail extract (SE) compared to the EPD control group.

구분division Vlable bacteria numbers
(Log CFU X 105/g tissue)
Bad bacteria numbers
(Log CFU
Intact(무처리군, control)Intact (untreated group, control) 0.850.85 EPDE.P.D. 6.976.97 IND(5mg/kg)IND (5mg/kg) 6.846.84 산골취 추출물(SE, 200mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 200mg/kg) 2.022.02

(단위 : Log CFU X 105/g tissue)(Unit: Log CFU

[실험예 2 : 산골취 추출물의 구강건조증 예방 또는 개선 활성 측정][Experimental Example 2: Measurement of dry mouth prevention or improvement activity of mountain bone extract]

타액선 세포에서 타액분비 기능성 검사(in vitro)Saliva secretion function test in salivary gland cells (in vitro)

구강건조증의 주요원인 중인 하나인 ROS에 의한 타액선 세포의 손상을 확인하기 위해 고혈당 조건 (30 mM high glucose)로 ROS의 생성을 유도하고 산골취 추출물(SE)의 활성을 검증하였다. Human submandibular duct cell인 A253 cell (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA)을 Complete Growth Medium (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA)을 이용하여 배양한다. 96 well plate에 2 X 105/well의 세포를 키운 후 산골취 추출물(SE)을 다양한 농도로 희석하여 1시간동안 처리한 후 ROS의 생성을 유도하기 위해 30 mM의 high glucose 조건에서 24시간 동안 처치하였다. 이후 각각 DCF-DA(Invitrogen Corp., CA, USA) 및 MitoSOX(Invitrogen Corp.)로 염색 한 후, 1시간 동안 배양하였다. 그 후 fluorescence microplate reader에서 형광을 측정하여 세포질 내 및 미토콘드리아 내에서 생성되는 ROS의 양을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.To confirm damage to salivary gland cells caused by ROS, which is one of the main causes of dry mouth, the production of ROS was induced under high blood sugar conditions (30mM high glucose) and the activity of mountain snail extract (SE) was verified. A253 cells (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA), human submandibular duct cells, were cultured using Complete Growth Medium (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA). After growing 2 treated. Afterwards, they were stained with DCF-DA (Invitrogen Corp., CA, USA) and MitoSOX (Invitrogen Corp.), respectively, and then incubated for 1 hour. Afterwards, the amount of ROS generated in the cytoplasm and mitochondria was measured by measuring fluorescence in a fluorescence microplate reader, and the results are shown in Table 7 below.

구분division DCFH fluorescence (%)DCFH fluorescence (%) MitoSox fluorescence (%)MitoSox fluorescence (%) ControlControl 100.00100.00 100.00100.00 HG(30mM)HG (30mM) 169.24169.24 132.76132.76 산골취 추출물(SE, 10ug/ml)Sangolchwi extract (SE, 10ug/ml) 122.18122.18 116.48116.48 산골취 추출물(SE, 50ug/ml)Sangolchwi extract (SE, 50ug/ml) 84.7884.78 107.61107.61 산골취 추출물(SE, 100ug/ml)Sangolchwi extract (SE, 100ug/ml) 61.5661.56 103.14103.14

(단위 : %)(unit : %)

상기 표 7을 참조하면, DCFH dye를 이용하여 세포질 내에 생성되는 ROS의 양을 확인한 결과 high glucose 조건하에서 ROS의 생성이 약1.7배 정도 증가하였으며, 산골취 추출물(SE)을 10 내지 100 ug/ml의 농도로 처치한 결과 농도 의존적으로 ROS의 생성을 억제하는 효능을 확인하였다. 또한 MitoSox dye를 이용하여 미토콘드리아에서 생성되는 ROS의 양을 확인한 결과에서도 앞선 결과와 유사하게 high glucose에서 증가되는 ROS의 생성양이 산골취 추출물(SE) 처리에 의해 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.Referring to Table 7 above, as a result of confirming the amount of ROS generated in the cytoplasm using DCFH dye, the production of ROS increased by about 1.7 times under high glucose conditions, and the amount of ROS produced in the cytoplasm was increased by about 1.7 times, and the amount of ROS produced in the cytoplasm was increased by about 1.7 times when the extract (SE) was used at 10 to 100 ug/ml. As a result of treatment at a concentration of , the efficacy of suppressing the production of ROS was confirmed in a concentration-dependent manner. In addition, as a result of confirming the amount of ROS generated in mitochondria using MitoSox dye, similar to the previous results, it was confirmed that the amount of ROS generated in high glucose was reduced in a concentration-dependent manner by treatment with mountain snail extract (SE). .

타액분비 소화효소 아밀라아제 (amylase) 및 water pump Aquaporin-5 발현양 분석Analysis of expression levels of salivary digestive enzyme amylase and water pump Aquaporin-5

산골취 추출물(SE)이 타액선 세포에서 타액의 분비를 촉진시키는 효능을 검증하기 위해 타액분비 소화효소 아밀라아제(amylase) 및 water pump Aquaporin-5 발현양을 분석하였다. A253 cell을 96 well plate에 2 X 105/well의 세포를 키운 후 산골취 추출물(SE)을 다양한 농도로 희석하여 1시간동안 처치한 후 30 mM의 high glucose 조건에서 24시간 동안 처치하였다. 이후 단백질을 추출하여 western blot을 실시하였다. BCA kit (Sigma-Alderich Co. LLC)를 사용하여 단백질의 농도를 측정한 후, 동일한 양의 단백질을 SDS-PAGE gel에 전기영동하고, Hybond-ECL nitrocellulose membrane (Amersham Pharmacia Biotech, Inc., Piscataway, NJ, USA)으로 transfer 하였다.To verify the effectiveness of mountain golchwi extract (SE) in promoting saliva secretion from salivary gland cells, the expression levels of the salivary digestive enzyme amylase and water pump Aquaporin-5 were analyzed. A253 cells were grown at 2 Afterwards, proteins were extracted and western blot was performed. After measuring the protein concentration using a BCA kit (Sigma-Alderich Co. LLC), the same amount of protein was electrophoresed on an SDS-PAGE gel and transferred to a Hybond-ECL nitrocellulose membrane (Amersham Pharmacia Biotech, Inc., Piscataway, NJ, USA).

이 후 membrane을 1시간 동안 0.1% skim milk로 블로킹한 후, 1차 항체로 1시간동안 반응한 후 HRP-conjugated 2차 항체(Thermo Fisher Scientific Inc.)로 1시간 동안 반응하고, SuperSignal West Pico ECL 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.)으로 단백질을 검출하고 Fuji LAS-3000 시스템(Fujifilm, Tokyo, Japan)으로 상기 단백질을 검출하였다. 본 실험에 사용한 1차 항체는 mouse anti-amylase antibody (Santa Cruz Biotechnology, CA, USA), rabbit anti-AQP5 antibody (Santa Cruz Biotechnology), β-actun (Sigma-Alderich Co. LLC)였다. 그 실험 결과는 하기 표 8에 나타내었다.Afterwards, the membrane was blocked with 0.1% skim milk for 1 hour, reacted with primary antibody for 1 hour, then reacted with HRP-conjugated secondary antibody (Thermo Fisher Scientific Inc.) for 1 hour, and SuperSignal West Pico ECL Proteins were detected in solution (Thermo Fisher Scientific Inc.) and detected with a Fuji LAS-3000 system (Fujifilm, Tokyo, Japan). The primary antibodies used in this experiment were mouse anti-amylase antibody (Santa Cruz Biotechnology, CA, USA), rabbit anti-AQP5 antibody (Santa Cruz Biotechnology), and β-actun (Sigma-Alderich Co. LLC). The experimental results are shown in Table 8 below.

구분division Relactive expression levels of amylase(AU)Relative expression levels of amylase(AU) Relative expression levels of AQP5(AU)Relative expression levels of AQP5(AU) ControlControl 1.021.02 1.011.01 HG(30mM)HG (30mM) 0.450.45 0.340.34 산골취 추출물(SE, 10ug/ml)Sangolchwi extract (SE, 10ug/ml) 1.591.59 1.851.85 산골취 추출물(SE, 50ug/ml)Sangolchwi extract (SE, 50ug/ml) 2.142.14 2.942.94 산골취 추출물(SE, 100ug/ml)Sangolchwi extract (SE, 100ug/ml) 2.362.36 3.313.31

(단위 : AU)(Unit: AU)

상기 표 8를 참조하면, high glucose(HG)를 처리하면 타액선 세포는 소화효소인 아밀라아제의 발현양이 감소하고, 타액 세포에서 침을 분비하는 중요한 펌프인 aquaporin-5 (AQP5)의 발현양이 현저히 감소하게 된다. 그러나 산골취 추출물(SE)을 10 내지 100 ug/ml의 농도로 처리하면 이들 단백질의 발현양을 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다.Referring to Table 8 above, when treated with high glucose (HG), the expression level of amylase, a digestive enzyme, in salivary gland cells decreases, and the expression level of aquaporin-5 (AQP5), an important pump that secretes saliva in salivary cells, significantly decreases. It decreases. However, it was confirmed that when Sangolchwi extract (SE) was treated at a concentration of 10 to 100 ug/ml, the expression level of these proteins increased in a concentration-dependent manner.

당뇨쥐에서 타액 분비 촉진 효능 평가(in vivo)Evaluation of the efficacy of promoting saliva secretion in diabetic rats (in vivo)

생후 6주령 male SD 랫 (샘타코, 한국)를 1주일 동안 적응시킨 후 사용하였다. 사료와 음용수는 자유 급식하였다. STZ (60㎎/㎏,ip)로 당뇨를 유발하고 일주일 후 350㎎/㎗ 이상의 혈당 개체들만 선별한 후 실험에 사용하였다. 다음과 같이 군을 분리하여 시험약물을 투여하였다. (1) 정상군(control), (2) 당뇨유도군(Diabetes), (3) 산골취 추출물(SE) 100㎎/㎏ 투여군, (4) 산골취 추출물(SE) 250㎎/㎏ 투여군. 시험약물은 경구투여 하였으며, 1일 1회 4주 동안 경구투여 하였다. 각각의 군별로 약물투여 4주 후 부검 실시하였다. 타액 분비량 측정을 위해 랫에 pilocarpine9 (0.6 mg/kg)을 복강 주사하여 타액분비를 유도하였다. 이후 미리 무게를 측정한 cotton ball을 구강 내에 집어넣은 후 1분 동안 방치하여 분비된 타액을 흡수하게 방치하였다. 1분 뒤 타액을 흡수하여 젖어 있는 cotton ball을 회수한 후 무게를 측정하고 10,000 rpm에서 원심분리하여 타액을 회수하여 타액량을 정량한다. 타액분비량 측정은 4주 동안 매주 1회씩 4회 동안 실시하였으며, 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.Six-week-old male SD rats (Samtaco, Korea) were used after acclimatization for one week. Feed and drinking water were provided ad libitum. Diabetes was induced with STZ (60 mg/kg, ip), and a week later, only those with blood sugar levels above 350 mg/dl were selected and used in the experiment. The groups were separated and the test drugs were administered as follows. (1) Normal group (control), (2) Diabetes-induced group (Diabetes), (3) Sanggolchwi extract (SE) 100 mg/kg administered group, (4) Sanggolchwi extract (SE) 250 mg/kg administered group. The test drug was administered orally once a day for 4 weeks. An autopsy was performed 4 weeks after drug administration for each group. To measure saliva secretion, pilocarpine9 (0.6 mg/kg) was intraperitoneally injected into rats to induce salivation. Afterwards, a cotton ball whose weight was previously measured was placed in the oral cavity and left for 1 minute to absorb the secreted saliva. After 1 minute, the saliva is absorbed and the wet cotton ball is recovered, its weight is measured, and the saliva is recovered by centrifugation at 10,000 rpm to quantify the amount of saliva. Salivary secretion was measured four times, once a week for four weeks, and the results are shown in Table 9 below.

구분division Salivary flow rate(μL/min)Salivary flow rate(μL/min) 1 weeks1 week 2 weeks2 weeks 3 weeks3 weeks 4 weeks4 weeks ControlControl 98.1898.18 97.2897.28 98.5498.54 99.2599.25 DiabetesDiabetes 47.2547.25 40.8440.84 38.1738.17 11.4811.48 산골취 추출물(SE, 100mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 100mg/kg) 51.9151.91 54.3754.37 56.4456.44 58.5458.54 산골취 추출물(SE, 250mg/kg)Sangolchwi extract (SE, 250mg/kg) 58.4958.49 60.2160.21 63.4863.48 66.8766.87

(단위 : μL/min)(Unit: μL/min)

상기 표 9를 참조하면, 당뇨가 유발된 쥐에서는 1주일 뒤 타액분비량이 절반정도 감소하였으며, 이후 4주동안 타액의 분비량은 점점 더 감소하여 4주 뒤 타액이 거의 분비되지 않는 상태에 이르렀다. 하지만, 산골취 추출물(SE)을 투여한 쥐에서는 타액의 분비량이 정상쥐에 비해서는 감소하였지만, 더 이상의 타액량이 감소되는 현상이 보이지 않았으며, 1000 mg/kg, 250 mg/kg 투여 군 모두에서 적은 양이긴 하지만 4주 투여 후에는 타액분비량이 소량 증가하는 양상이 관찰되었다.Referring to Table 9 above, in mice induced with diabetes, the amount of saliva secretion decreased by about half after 1 week, and over the next 4 weeks, the amount of saliva secretion gradually decreased, reaching a state where almost no saliva was secreted after 4 weeks. However, although the amount of saliva secreted in mice administered mountain snail extract (SE) decreased compared to normal mice, no further decrease in saliva volume was observed in both the 1000 mg/kg and 250 mg/kg administration groups. Although it was a small amount, a small increase in saliva secretion was observed after 4 weeks of administration.

[실험예 3 : 복합 추출물의 구강 질환 예방 또는 개선 활성 측정][Experimental Example 3: Measurement of oral disease prevention or improvement activity of complex extract]

상기 실험예 1 및 2에 나타난 산골취 추출물(SE)의 치주질환 및 구강건조증 예방 또는 개선 활성을 나타내는 실험방법과 동일한 방법으로 나머지 복합 추출물(MX2 내지 MX9)의 실험 평가 결과를 산골취 추출물 SE(MX1)의 실험 결과를 지수 3으로하고 이와 비교하여 하기 표 10에 종합적으로 나타내었다. The experimental evaluation results of the remaining complex extracts (MX2 to MX9) were evaluated using the same method as the experimental method showing the activity of preventing or improving periodontal disease and dry mouth of the mountain bone extract (SE) shown in Experimental Examples 1 and 2 above. The experimental results of MX1) were compared with the exponent 3 and are comprehensively shown in Table 10 below.

상기 지수는 그 숫자가 높을수록 치주질환 및 구강건조증 예방, 치료 또는 개선 활성이 우수한 것이며, 실험 결과는 1 내지 10의 지수로 나타내었다.The higher the number, the better the activity in preventing, treating or improving periodontal disease and dry mouth, and the experimental results were expressed as an index of 1 to 10.

MX1MX1 MX2MX2 MX3MX3 MX4MX4 MX5MX5 MX6MX6 MX7MX7 MX8MX8 MX9MX9 치은조직 내 IL-1β 및 TNF-α 함량 감소 Decreased IL-1β and TNF-α content in gingival tissue 33 33 44 44 55 88 88 88 66 치은 조직 내 MDA 함량 감소Reduced MDA content in gingival tissue 33 44 44 44 55 88 88 99 66 치주골 내 파골세포 감소Reduction of osteoclasts in periodontal bone 33 33 33 44 55 88 99 99 77 치주골량 증가Increased periodontal bone mass 33 33 44 33 66 88 88 88 66 구강 협부 총 호기성 생균수 감소Decrease in total aerobic bacteria count in the oral isthmus 33 44 33 33 55 88 99 99 77 타액 분비량 증가 Increased saliva production 33 44 33 44 66 88 99 99 66

(단위 : 지수)(Unit: index)

상기 표 10을 참조하면, 치주질환과 관련한 실험인 치은조직 내 IL-1β 및 TNF-α 함량 감소, 치은 조직 내 MDA 함량 감소, 치주골 내 파골세포 감소, 치주골량 증가, 구강 협부 총 호기성 생균수 감소에 있어 산골취 추출물 만을 포함하는 MX1 에 비해 천연추출물을 각각 더 포함하는 MX2 내지 MX4의 경우 소폭 향상됨을 알 수 있으며, 천연 추출물을 혼합하는 구성인 MX5 내지 MX9의 경우 혼합 작용에 의한 활성 증가로 인해 보다 향상된 결과 값을 나타냄을 확인할 수 있다. 나아가, 바람직한 중량부의 천연 추출물을 포함하는 MX6 내지 MX8의 경우 그 활성이 우수하게 향상되어 산골취 추출물(SE) 100 중량부에 대하여, 고산부전바디 추출물(CE) 10 내지 30 중량부, 카칼리아 추출물(EE) 10 내지 30 중량부 및 잔잎바디 추출물(AE) 10 내지 30 중량부로 포함함으로써 치주질환의 예방, 개선 또는 치료 효과가 우수하게 나타날 수 있음을 알 수 있다.Referring to Table 10 above, experiments related to periodontal disease include a decrease in IL-1β and TNF-α content in gingival tissue, a decrease in MDA content in gingival tissue, a decrease in osteoclasts in periodontal bone, an increase in periodontal bone mass, and the total number of aerobic bacteria in the oral isthmus. In terms of reduction, it can be seen that there is a slight improvement in the case of MX2 to MX4, which each contain more natural extracts, compared to MX1, which contains only the mountain bone extract, and in the case of MX5 to MX9, which are compositions that mix natural extracts, the activity increases due to the mixing action. It can be confirmed that this results in improved results. Furthermore, in the case of MX6 to MX8 containing a preferable weight part of natural extract, the activity is greatly improved, and for 100 parts by weight of mountain golchwi extract (SE), 10 to 30 parts by weight of high mountain body extract (CE) and Cacalia extract. It can be seen that by including 10 to 30 parts by weight of (EE) and 10 to 30 parts by weight of leaf body extract (AE), the prevention, improvement or treatment effect of periodontal disease can be excellent.

한편, 구강 건조증에 대한 실험인 타액 분비량 증가에 있어 산골취 추출물 만을 처리한 MX1에 비해 천연 추출물을 각각 더 포함하는 경우 보다 향상된 타액 분비량을 보여 천연 추출물을 포함함으로써 타액 분비가 보다 활성될 수 있음을 알 수 있고, 단일로 포함하는 것 보다 산골취 추출물에 상기 천연 추출물 3종을 모두 혼합한 MX5 내지 MX9를 처리함으로써 구강건조증 개선 활성을 나타냄을 알 수 있다. 또한, 치주질환 관련 실험과 마찬가지로 산골취 추출물 100 중량부에 대하여, 고산부전바디 추출물(CE) 10 내지 30 중량부, 카칼리아 추출물(EE) 10 내지 30 중량부 및 잔잎바디 추출물(AE) 10 내지 30 중량부로 포함하는 MX6 내지 MX8의 경우 그 활성이 매우 향상되어 단순 혼합하는 것이 아닌 바람직한 중량부로 포함함으로써 구강건조증에 대한 예방, 개선 또는 치료 활성이 우수하게 나타날 수 있음을 확인하였다.Meanwhile, in an experiment for dry mouth, saliva secretion was increased when more natural extracts were included compared to MX1 treated with only mountain bone extract, showing that saliva secretion can be more active by including natural extracts. It can be seen that treatment with MX5 to MX9, which is a mixture of all three natural extracts, shows an activity in improving dry mouth, rather than using them alone. In addition, as in the periodontal disease-related experiment, for 100 parts by weight of the mountain bone extract, 10 to 30 parts by weight of the alpine body extract (CE), 10 to 30 parts by weight of the Cacalia extract (EE), and 10 to 10 to 30 parts by weight of the leaf body extract (AE) In the case of 30 parts by weight of MX6 to MX8, the activity was greatly improved, and it was confirmed that the prevention, improvement, or treatment activity for dry mouth could be excellent by including them in a preferred weight part rather than simply mixing them.

[실험예 4: 차음료에 대한 기호도 평가][Experimental Example 4: Evaluation of preference for tea drinks]

상기 MX1 내지 MX9를 포함하는 차음료에 대하여 20 내지 40대 성인남녀 30인의 시험자에게 시음하게 한 뒤 향과 맛을 평가하게 하여 1 내지 10의 지수로 기호도를 평가하도록 하였다. 그 결과를 종합하여 평균한 뒤 하기의 표 11에 나타내었다. 하기의 지수는 높을수록 기호도가 우수한 것이며, 각 지수는 평균값에 반올림을 적용하여 나타내었다.The tea beverages containing the above MX1 to MX9 were sampled by 30 male and female testers in their 20s to 40s, and were then evaluated for aroma and taste, and preference was evaluated on a scale of 1 to 10. The results were compiled and averaged and shown in Table 11 below. The higher the index below, the better the preference, and each index is expressed by applying rounding to the average value.

MX1MX1 MX2MX2 MX3MX3 MX4MX4 MX5MX5 MX6MX6 MX7MX7 MX8MX8 MX9MX9 taste 22 33 33 44 66 88 99 99 77 incense 22 22 44 44 66 88 88 99 66 종합
기호도
Synthesis
preference
22 33 4
4
44 66 88 99 99 77

(단위 : 지수)(Unit: index)

상기 표 11을 참조하면, 본원발명 산골취 추출물만을 포함하는 MX1의 경우에 비해 천연 추출물 고산부전바디 추출물(CE), 카칼리아 추출물(EE) 및 잔잎바디 추출물(AE)을 더 포함하는 MX2 내지 MX4의 경우 맛 및 향에 대한 기호도가 향상됨을 확인할 수 있다.Referring to Table 11, compared to the case of MX1 containing only the mountain bone extract according to the present invention, MX2 to MX4 further include the natural extracts Gosanbu body extract (CE), Cacalia extract (EE), and Aleaf body extract (AE). In the case of , it can be seen that preference for taste and aroma improves.

또한 상기 고산부전바디 추출물(CE), 카칼리아 추출물(EE) 및 잔잎바디 추출물(AE)을 모두 포함하는 MX5 내지 MX9의 경우 보다 더 향상된 기호도를 나타냄을 확인할 수 있으나 산골취 추출물 100 중량부에 대하여 고산부전바디 추출물(CE) 10 내지 30 중량부, 카칼리아 추출물(EE) 10 내지 30 중량부 및 잔잎바디 추출물(AE) 10 내지 30 중량부로 포함하는 경우 전체적인 기호도가 매우 우수함을 알 수 있다. In addition, it can be confirmed that MX5 to MX9, which contain all of the above-mentioned alpine body extract (CE), Cacalia extract (EE), and fine leaf body extract (AE), show more improved preference than that of MX5 to MX9, but for 100 parts by weight of mountain golchwi extract It can be seen that the overall preference is very good when it contains 10 to 30 parts by weight of high-acid body extract (CE), 10 to 30 parts by weight of Cacalia extract (EE), and 10 to 30 parts by weight of leaf body extract (AE).

따라서, 상기 혼합제형에 의하는 경우, 천연 추출물을 기반으로 하여 산골취 추출물(MX1, SE)에 대한 기호도를 향상시킬 수 있음을 알 수 있으며, 이를 통해 장기간 복용에 따른 부작용 등의 문제가 없으며, 치주질환 및 구강건조증을 포함하는 구강 질환에 대하 기능성이 우수할 뿐더러 높은 기호성을 가져 기능성 및 기호도가 우수한 조성물로의 제공이 가능하다는 것을 확인할 수 있다.Therefore, in the case of the above mixed formulation, it can be seen that the preference for mountain golchwi extract (MX1, SE) can be improved based on natural extracts. As a result, there are no problems such as side effects due to long-term use, It can be confirmed that it is possible to provide a composition with excellent functionality and preference as it not only has excellent functionality for oral diseases including periodontal disease and dry mouth, but also has high palatability.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.Although the preferred embodiments of the present invention have been described in detail above, the scope of the present invention is not limited thereto, and various modifications and improvements made by those skilled in the art using the basic concept of the present invention defined in the following claims are also possible. falls within the scope of rights.

Claims (7)

산골취 추출물을 포함하는
구강질환의 예방 또는 개선용 조성물.
Contains mountain bone extract
Composition for preventing or improving oral diseases.
제 1항에 있어서,
상기 구강질환은 치주질환, 구강건조증, 치아 우식증, 치통, 시린이 및 구취로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인
구강질환의 예방 또는 개선용 조성물.
According to clause 1,
The oral disease is selected from the group consisting of periodontal disease, dry mouth, dental caries, toothache, dry teeth, and bad breath.
Composition for preventing or improving oral diseases.
제 1항에 있어서,
상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출되는 것인
구강질환의 예방 또는 개선용 조성물.
According to clause 1,
The extract is extracted using an extraction solvent selected from the group consisting of water, C 1 to C 6 lower alcohols, and mixtures thereof.
Composition for preventing or improving oral diseases.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
구강 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
Comprising the composition according to any one of claims 1 to 3
Food composition for preventing or improving oral diseases.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
구강 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
Comprising the composition according to any one of claims 1 to 3
Quasi-drug composition for preventing or improving oral diseases.
제 5항에 있어서,
상기 의약외품 조성물은 치약, 구강세정제, 구강청정제, 껌, 캔디류, 구강스프레이, 구강용 연고제, 구강용 바니쉬, 구강양치액 및 잇몸 마사지 크림으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 제형인 것인
구강 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
According to clause 5,
The quasi-drug composition is one or more formulations selected from the group consisting of toothpaste, mouthwash, mouthwash, gum, candy, oral spray, oral ointment, oral varnish, oral rinse, and gum massage cream.
Quasi-drug composition for preventing or improving oral diseases.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
구강 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
Comprising the composition according to any one of claims 1 to 3
Pharmaceutical composition for preventing or treating oral diseases.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (1)

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Biomedical Science Letters 2020, 26(3): 157~163.
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