KR102597536B1 - 고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 타우로리딘의 정량 분석 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 적어도 정량 분석 시간동안 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 것을 억제하는 분석 용매를 제조하는 분석 용매 제조단계와, 상기 분석 용매에 상기 타우로리딘을 함유한 분석 시료를 혼합하여 분석 용액을 제조하는 분석 용액 제조단계 및 HPLC를 이용하여 상기 분석 용액의 타우로리딘의 함량을 정량 분석하는 타우로리딘 정량 분석단계를 포함하는 타우로리딘의 정량분석 방법을 개시한다.
Description
본 발명은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 의약품 원료인 타우로리딘의 정량 분석 방법에 관한 것이다.
타우로리딘(Taurolidine)은 아미노타우린 유도체이며, 감염 예방을 위한 약품으로서 전세계적으로 중요한 위치를 차지하고 있는 약물이다. 타우로리딘은 박테리아 세포벽 구조와의 생화학반응을 통하여 박테리아를 사멸시키며 방출된 독소(endotoxin)를 불활성화시키는 작용을 한다. 또한, 타우로리딘은 일정 시간이 지나면 인체에 무해한 타우린(Taurine)과 물로 전환되는 특성이 있는 매우 안전한 약물로 알려져 있다., 또한 타우로리딘은 최근에는 항암 효과 등에 다방면에서 의약품 원료로 사용 가능성에 대한 연구가 진행되고 있는 약물이다.
타우로리딘은 국내에서 주사제의 형태로 판매되고 있으며, 삼진제약이 가이스트리히제약(Giestlich Pharma)으로부터 기술 제휴 및 원료 공급을 받아 1988년부터 식약처 허가를 받아 삼진타우로린™ 주사2%의 제품으로 시판되고 있다.
타우로리딘의 원료 의약품 합성은 많은 업체들이 시도하고 있으며, 원료 의약품으로 사용 허가를 득하기 위해서는 품질을 지속적으로 보증할 수 있는 자료를 작성해야 한다. 이에 따라 의약품 원료인 타우로리딘의 정량법의 개발은 의약품 개발에 있어 매우 중요한 과제이다.
일반적으로 원료 의약품은 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 이용하여 정량 분석을 실시하고 있다. 그러나, 타우로리딘은 아래의 화학식 1과 같이 발색단 (Chromophore)이 존재하지 않아 HPLC로 정량 분석하는 것이 어렵다고 알려져 있다.
[화학식 1]
현재까지 개발된 타우로리딘을 정량 분석하는 방법은 전위차 적정 (potentiometric titration), 타우로리딘을 유도체화 시켜 HPLC로 정량하는 방법이 알려지고 있다.
전위차 적정법은 시험이 용이하여 원료 의약품의 정량에 많이 사용되는 방법이나, 특이성 (Specificity)에 문제가 있어 타우로리딘의 정량 분석에는 적절하지 않다는 사실을 본 연구자들에 의해 확인되었다.
타우로리딘은 발색단이 존재하지 않아 통상적인 230nm 이상의 파장에서는 흡광도를 가지지 않아 정량 분석이 어려운 것으로 알려지고 있다. 따라서 타우로리딘을 정량 분석하는 방법으로, 타우로리딘을 5-(디메칠아미노)나프탈렌-1-술포닐 클로라이드 (5-(dimethyamino)naphthalene-1-sulfonyl chloride, Dansyl chloride) 혹은 7-클로로-4-니트로벤즈-2-옥사-1,3-디아졸 클로라이드 (7-chloro-4-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole chloride, NBD-HCl)과 같은 발색단과 반응시킨 후에 자외선 검출기 (UV detector)나 형광 검출기(Fluorescence detector)로 정량하는 분석 전 유도체화 HPLC 분석 (Pre-column derivatization & HPLC assay)법이 사용되고 있다. 분석 전 유도체화 HPLC 분석법은 분석 시료를 제조하는데 상당한 시간 및 비용이 소요되며, 유도체화 반응을 조절하는데 용이하지 않은 단점이 따르게 되며, 분석의 오차를 유발시키는 원인이 되기도 한다.
한편, 타우로리딘은 230nm 이하의 파장에서는 일정 흡광도를 가지게 되지만, 분석에 사용되는 분석 용매들도 흡광도를 가지게 되어 분석 중 간섭 현상에 의해 정확한 정량이 불가능하게 하는 요인으로 작용하게 된다.
또한, 타우로리딘을 HPLC로 분석하기 위해서는 분자의 극성 차이에 의해 분석 대상 물질을 분리하는 역상 크로마토그래피 (Reversed-phase chromatography)를 사용하게 되는데, 이때 분석 용매로서 유기 용매와 물을 적절히 혼합하여 이동상을 제조하여 사용하게 된다.
다만, 타우로리딘은 수용액내에서 매우 빠르게 분해되어 분해 산물인 타우린아미드로 변환될 수 있다. 즉, 타우로리딘은 수용액에서 불안정하여 가수 분해에 의하여 타우린아미드로 변환되면서 오차를 유발하여 정량 분석의 정확성을 저하시킬 수 있다.
본 발명은 타우로리딘의 분해를 억제시킬 수 있는 분석 용매를 타우로리딘이 함유된 분석 시료와 혼합하여 분석 용액을 제조함으로써 정량 분석의 정확도를 증가시킬 수 있는 타우로리딘의 정량 분석 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 분석 용액에 함유된 타우로리딘에 발색단을 결합시키는 유도체화 공정을 생략하고 분석하여 정량 분석을 신속하게 진행할 수 있는 타우로리딘의 정량 분석 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 타우로리딘의 정량 분석 방법은 타우로리딘의 가수 분해를 억제시키는 분석 용매에 상기 타우로리딘이 함유된 분석 시료를 혼합하여 제조한 분석 용액에 대하여 HPLC를 이용하여 상기 타우로리딘을 정량 분석하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 타우로리딘의 정량분석 방법은 적어도 정량 분석 시간동안 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 것을 억제하는 분석 용매를 제조하는 분석 용매 제조단계와, 상기 분석 용매에 상기 타우로리딘을 함유한 분석 시료를 혼합하여 분석 용액을 제조하는 분석 용액 제조단계 및 HPLC를 이용하여 상기 분석 용액의 타우로리딘의 함량을 정량 분석하는 타우로리딘 정량 분석단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 분석 용매는 아세토니트릴과 물의 비율이 94:6 내지 96:4의 부피비로 혼합될 수 있다.
또한, 본 발명의 타우로리딘의 정량 분석 방법은 상기 분석 용액에 함유된 상기 타우로리딘에 발색단을 결합시키는 상기 타우로리딘의 유도체화 과정을 생략하고 직접 정량 분석할 수 있다.
또한, 상기 HPLC의 분석 조건은 검출 파장 210 내지 220 nm, 컬럼 C8, 컬럼 온도 25℃, 시료온도 5℃, 유속이 0.5 내지 1.0 mL/min일 수 있다.
본 발명에 따른 타우로리딘의 정량 분석 방법은 적어도 정량 분석 시간동안 타우로리딘의 가수 분해를 억제시킬 수 있는 분석 용매를 타우로리딘이 함유된 분석 시료와 혼합하여 분석 용액을 제조함으로써 정량 분석의 정확도를 증가시킬 수 있다.
본 발명에 따른 타우로리딘의 정량 분석 방법은 분석 용액에 함유된 타우로리딘에 발색단을 결합시키는 유도체화 과정을 생략하고 정량 분석을 신속하게 진행할 수 있는 효과가 있다.
또한, 본 발명에 따른 타우로리딘의 정량 분석 방법은 타우로리딘의 정량 분석 과정에서 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 것을 억제하여 정량 분석의 정확성을 증가시킬 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 타우로리딘의 정량 분석 방법에 대한 공정도이다.
도 2는 실시예의 분석 용매를 사용한 분석 용액들에 대한 타우로리딘과 타우린아미드의 정량 분석에 대한 크로마토그램이다.
도 3은 비교예의 분석 용매를 사용한 분석 용액들에 대한 타우로리딘의 정량 분석에 대한 크로마토그램이다.
도 4는 서로 다른 타우로리딘 함량을 갖는 타우로리딘 혼합 분석 용액의 타우로리딘에 대한 정량 분석 결과이다.
도 5는 본 발명의 타우로리딘 정량 분석 방법의 타당성을 확인하기 위하여 분석법 검증을 실시한 결과이다.
도 6은 아세토니트릴과 물의 부피비가 다른 블랭크 분석 용액에 대한 정량 분석의 크로마토그램이다.
도 7은 분석 용매의 종류에 따른 타우로리딘에 대한 정량 분석의 크로마토그램이다.
도 2는 실시예의 분석 용매를 사용한 분석 용액들에 대한 타우로리딘과 타우린아미드의 정량 분석에 대한 크로마토그램이다.
도 3은 비교예의 분석 용매를 사용한 분석 용액들에 대한 타우로리딘의 정량 분석에 대한 크로마토그램이다.
도 4는 서로 다른 타우로리딘 함량을 갖는 타우로리딘 혼합 분석 용액의 타우로리딘에 대한 정량 분석 결과이다.
도 5는 본 발명의 타우로리딘 정량 분석 방법의 타당성을 확인하기 위하여 분석법 검증을 실시한 결과이다.
도 6은 아세토니트릴과 물의 부피비가 다른 블랭크 분석 용액에 대한 정량 분석의 크로마토그램이다.
도 7은 분석 용매의 종류에 따른 타우로리딘에 대한 정량 분석의 크로마토그램이다.
이하에서 본 발명의 실시예들에 따른 고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 타우로리딘의 정량 분석 방법에 대하여 구체적으로 설명한다.
먼저, 본 발명의 일 실시예에 따른 타우로리딘의 정량 분석 방법을 설명한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 타우로리딘의 정량 분석 방법에 대한 공정도이다.
상기 타우로리딘의 정량 분석 방법은, 도 1을 참조하면, 분석 용매 제조단계(S10)와 분석 용액 제조단계(S20) 및 타우로리딘 정량 분석단계(S30)를 포함하여 이루어질 수 있다.
상기 타우로리딘의 정량 분석 방법은 타우로리딘을 적어도 정량 분석하는 동안 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 것을 억제하는 분석 용매에 타우로리딘이 함유된 분석 시료를 혼합하여 제조한 분석 용액에 대하여 타우로리딘을 HPLC를 이용하여 정량 분석하는 방법이다. 상기 타우로리딘의 정량 분석 방법은 분석 용매의 조성 조건에 의해 타우로리딘의 분해 산물인 타우린아미드의 생성이 없으며, 분석 대상 성분인 타우로리딘의 유도체화 공정을 생략하여 신속, 정확하게 정량 분석하는 방법이다.
본 발명의 발명자들은 수용액내에서 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 반응 메커니즘을 면밀히 검토한 바, 분석 용매의 비율을 세밀히 조절하면 타우로리딘의 가수 분해가 억제된다는 사실을 확인하였다.
상기 분석 용매 제조단계(S10)는 타우로리딘을 분해시켜 타우린아미드의 생성하는 것을 억제하는 분석 용매를 제조하는 단계이다. 상기 분석 용매는 적어도 정량 분석의 시간 동안 분석 용액내에서 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 것을 억제할 수 있다.
상기 분석 용매는 아세토니트릴과 물이 혼합되어 제조될 수 있다. 상기 아세토니트릴과 물의 혼합비율은 94:6 내지 96:4 부피비의 비율로 조절될 수 있다. 혼합비율이 94:6 보다 낮으면 분석 중에 타우로리딘이 가수분해되어 분해산물인 타우린아미드가 생성되어 타우로리딘의 정량성을 저하시키는 문제점이 발생하게 되며, 아세토니트릴과 물의 비율이 94:6보다 작거나 96:4 보다 크게 되면 타우로리딘 피크 위치에서 용매에 기인하는 고스트 피크 (ghost peak)가 발생하거나, 용매 피크의 간섭 현상에 의해 정량성의 저해요인으로 작용하게 된다.
상기 분석 용액 제조단계(S20)는 분석 용매에 분석 시료를 혼합하여 분석 용액을 제조하는 단계이다. 상기 분석 시료는 타우로리딘이 혼합된 원료 의약품일 수 있다. 상기 분석 시료는 분석 시료에 포함되어 있는 타우로리딘의 개략적인 함량을 고려하여 소정 양으로 혼합될 수 있다. 상기 분석 용액 제조 단계는 HPLC 의 타우로리딘의 정량 한계를 고려하여 분석 시료를 적정한 양으로 혼합할 수 있다. 예를 들면, 상기 HPLC의 정량 한계가 1.30ⅹ10-4M일 수 있다. 따라서, 상기 분석 시료는 분석 용매에 1.30ⅹ10-4M ~ 7.0ⅹ10-2M의 혼합량 범위로 혼합될 수 있다.
상기 타우로리딘 정량 분석단계(S30)은 HPLC를 이용하여 분석 용액의 타우로리딘의 함량을 정량 분석하는 단계이다.
상기 타우로리딘 정량 분석단계(S30)는 HPLC를 이용한 일반적인 분석 조건으로 진행될 수 있다. 또한, 상기 타우로리딘 정량 분석단계(S30)는 본 발명의 실시예에 따른 분석 용액을 이용한 타우로리딘의 정량 분석에 적합한 조건을 설정하여 진행될 수 있다. 예를 들면 상기 타우로리딘 정량 분석단계는 분석 용액의 소정량을 HPLC 샘플 장치에 주입하고, 검출파장은 210 내지220 nm, 컬럼은 C8, 컬럼 온도 25℃, 시료온도 5℃, 유속은 0.5 내지 1.0 mL/min 조건으로 정량 분석할 수 있다. 상기 HLPC의 분석 조건은 분석 장비에 따라 변경될 수 있다.
다음은 본 발명의 타우로리딘의 정량 분석 방법에 따른 분석 용액의 정량 분석 결과에 대하여 설명한다.
본 평가에서는 다양한 조성의 분석 용액에 대한 정량 분석을 통하여 분석 용액에 대한 타우로리딘의 유도체화 공정이 없이 신속하고 정확하게 타우로리딘의 정량 분석이 가능한지 여부를 확인하였다. 즉, 분석 용액에 포함되는 타우로리딘이 정량 분석 과정에서 타우로리딘이 타우린아미드로 분해되는지 여부를 확인하였다. 또한, 본 평가에서는 분석 용매에 혼합된 타우로리딘의 함량이 정량 분석에 영향을 주는지 여부를 확인하였다. 또한, 분석 용액에 포함되는 타우로리딘의 함량에 따라 정량 분석 과정에서 타우로리딘이 타우린아미드로 분해되는지 여부를 확인하였다. 또한, 본 평가에서는 상기 타우로리딘 정량 분석 방법의 정량 분석 특이성에 대한 검증도 실시하였다. 또한, 상기 타우로리딘 정량 분석 방법의 정량 분석 조건에 대한 밸리데이션 시험을 통하여 특이성, 정확성, 직선성, 정밀성 등을 확인하였다.
본 평가에서 분석 용액에 대한 정량 분석은 HPLC를 이용하여 진행하였다. HPLC는 Agilent 1260 infinity II 시스템을 사용하였다. 분석 조건은 Capcell Pak 컬럼 UG120 (5 um, 4.5 x 150 mm), 분석 시료의 유속은 0.5 mL/min으로 일정하게 유지하였다. 분석 용액 5uL를 HPLC 샘플 장치에 주입하고 컬럼 온도 25℃, 샘플온도는 5℃로 유지하면서 정량 분석을 진행하였다. 분석 용액은 검출 파장 210 nm에서 분석 용매의 조성에 따른 분석 간섭(interference)를 확인하였다.
1. 분석 용매의 타우로리딘 분해 억제에 대한 평가
본 평가에서는 타우로리딘과 분석 용매가 혼합된 분석 용액에서 타우로리딘이 타우린아미드로 분해되는지 여부에 대하여 평가하였다. 실시예의 분석 용매는 아세토니트릴과 물을 부피비로 95:5로 혼합하여 제조하였으며, 전체 부피가 2L가 되도록 제조하였다. 제조된 분석 용매는 블랭크 분석 용액으로 사용하였다. 또한, 분석 용매에 1,000ppm의 타우로리딘을 용해시켜 타우로리딘 혼합 분석 용액을 제조하였다. 또한, 타우로리딘 혼합 용액에 100ppm의 타우린아미드를 용해시켜 타우린아미드 혼합 분석 용액을 제조하였다. 블랭크 분석 용액과 타우로리딘 혼합 분석 용액과 타우린아미드 혼합 분석 용액에 대하여 타우로리딘과 타우린아미드에 대한 정량 분석을 진행하였다.
또한, 비교예의 분석 용매는 아세토니트릴과 물을 부피비로 50:50으로 혼합하여 제조하였으며, 분석 용매에 1,000ppm의 타우로리딘을 용해시켜 타우로리딘 혼합 분석 용액을 제조하였다.
도 2는 실시예의 분석 용매를 사용한 분석 용액들에 대한 타우로리딘과 타우린아미드의 정량 분석에 대한 크로마토그램이다.
블랭크 분석 용액은, 도 2의 (A)에서 보는 바와 같이, 타우로리딘과 타우린아미드의 피크가 검출되지 않았다. 타우로리딘 혼합 분석 용액은, 도 2의 (B)에서 보는 바와 같이, 타우로리딘의 피크(3.4분대)만 검출되고 타우린아미드의 피트가 검출되지 않았다. 따라서, 타우로리딘은 분석 용매에서 타우린아미드로 분해되지 않은 것을 확인할 수 있다. 또한, 타우로리딘과 타우린아미드 혼합 분석 용액은 타우로리딘의 피크(3.4분대)과 타우린아미드의 피크(2.0분대)가 함께 검출되었다.
도 3은 비교예의 분석 용매를 사용한 분석 용액들에 대한 타우로리딘의 정량 분석에 대한 크로마토그램이다.
도 3에서 보는 바와 같이, 타우로리딘 함유 분석 용액은 타우로리딘의 피크와 함께 타우린아미드의 피크도 함께 검출되고 있다. 따라서, 비교예의 분석 용매를 사용한 타우로리딘 혼합 분석 용액은 타우로리딘이 타우린아미드로 분해되는 것을 확인할 수 있다.
따라서, 본 평가로부터 분석 용매의 조성은 타우로리딘의 정량 분석에 영향을 주는 인자인 것을 확인할 수 있다. 본 발명의 분석 용매의 조성은 정량 분석 과정에서 분석 용액에 포함되어 있는 타우로리딘이 타우린아미드로 분해되는 것을 억제한다고 판단할 수 있다.
2. 타우로리딘의 함량에 따른 영향 평가.
본 평가에서는 분석 용매에 혼합되는 타우로리딘의 함량이 타우로리딘의 정량 분석에 영향을 주는지 여부를 평가하였다.
본 평가에서는 타우로리딘의 함량이 각각 200ppm, 500ppm, 800ppm, 1000ppm, 1200ppm이 되도록 복수 개의 타우로리딘 혼합 분석 용액을 제조하였다. 제조된 복수의 타우로리딘 혼합 분석 용액에 대하여 각각 타우로리딘에 대한 정량 분석을 진행하였다.
도 4는 서로 다른 타우로리딘 함량을 갖는 타우로리딘 혼합 분석 용액의 타우로리딘에 대한 정량 분석 결과이다.
타우로리딘 혼합 분석 용액은, 도 4에서 보는 바와 같이, 타우로리딘의 함량에 따라 타우로리딘이 비례적으로 정량 분석되는 것을 확인할 수 있다. 본 평가에서 분석 용매에 혼합된 타우로리딘에 대한 정량 분석은 타우로리딘 함량에 대하여 양호한 직선성(R2 = 0.999)을 가지는 것을 확인하였다.
도 5는 본 발명의 타우로리딘 정량 분석 방법의 타당성을 확인하기 위하여 분석법 검증을 실시한 결과이다.
상기에서 진행된 다양한 분석 용액에 대한 정량 분석 과정에서 본 발명의 타우로디린 정량 분석 방법에 대한 검증을 함께 진행하였다. 도 5에서 보는 바와 같이 본 발명의 타우로리딘 정량 분석 방법은 특이성, 정확성, 직선성, 정밀성 등 의약품 개발에 있어 갖추어야 할 검증 기준내에 있으며, 분석 방법 타당성이 있음을 확인하였다.
3. 분석 용매의 조성에 따른 영향 평가
본 평가에서는 분석 용매의 조성이 타우로리딘의 정량 분석에 영향을 주는지 여부를 평가하였다.
분석 용매는 아세토니트릴과 물의 비율(부피비)을 각각 95:5, 90:10, 85:15, 80:20, 70:30, 50:50, 30:70, 20:80, 15:85, 10:90 및 5:95가 되도록 제조하였다. 제조된 분석 용매는 블랭크 분석 용액으로 사용하여 정량 분석을 진행하였다. 이때, 블랭크 분석 용액에 대하여 타우로리딘의 피크와 타우린아미드의 피크가 존재하는 영역을 중심으로 정량 분석을 진행하였다.
도 6은 아세토니트릴과 물의 부피비가 다른 블랭크 분석 용액에 대한 정량 분석의 크로마토그램이다.
도 6의 (A)에서 보는 바와 같이, 아세토니트릴과 물의 비율이 95:5인 블랭크 분석 용액은 아무런 피크도 확인되지 않았다. 그러나, 도 6의 (B), (C), (D)에서 보는 바와 같이 아세토니트릴과 물의 비율이 85:15, 70:30, 20:80인 블랭크 분석 용액은 3, 4분대에서 고스트 피크(ghost peak)가 확인되었다. 3, 4분대의 고스트 피크는 타우로리딘의 피크와 일부 겹치게 되거나 인접하여 타우로리딘의 함량을 정량 분석하는데 방해 인자로 작용할 소지가 있다.
따라서, 아세토니트릴과 물의 비율이 본 발명의 범위를 벗어나는 분석 용매는 타우로리딘의 정량 분석에 부적절한 것으로 판단된다.
4. 분석 용매의 종류에 따른 영향 평가
본 평가에서는 분석 용매의 종류가 타우로리딘의 정량 분석에 영향을 주는지 여부를 평가하였다.
비교예의 분석 용매는 아세토니트릴 대신에 에탄올과 메탄올을 사용하였으며, 물과의 혼합 비율은 부피비로 95:5로 하였다. 제조된 분석 용매에 1,000ppm의 타우로리딘을 용해시켜 타우로리딘 혼합 분석 용액을 제조하였다. 또한, 대비를 위하여 본 발명의 분석 용매(아세토니트릴:물=95:5)에 1,000ppm의 타우로리딘을 용해시켜 타우로리딘 혼합 분석 용액을 제조하였다. 제조된 타우로리딘 혼합 분석 용액에 대하여 각각 타우로리딘의 함량을 정량 분석하였다.
도 7은 분석 용매의 종류에 따른 타우로리딘에 대한 정량 분석의 크로마토그램이다.
도 7의 (A)와 (B)에서 보는 바와 같이, 에탄올 또는 메탄올이 혼합된 타우로리딘 혼합 분석 용액은 용매의 간섭 효과로 인하여 타우로리딘의 피크가 관찰되지 않았다. 반면에, 도 7의 (C)에서 보는 바와 같이, 아세토니트릴이 혼합된 타우로리딘 혼합 용액은 타우로리딘의 피크가 관찰되었다.
따라서, 에탄올 또는 메탄올은 타우로리딘의 정량 분석을 위한 용매로 적정하지 않은 것을 확인할 수 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 의해 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
Claims (5)
- 삭제
- 적어도 정량 분석 시간동안 타우로리딘이 타우린아미드로 가수 분해되는 것을 억제하는 분석 용매를 제조하는 분석 용매 제조단계와,
상기 분석 용매에 상기 타우로리딘을 함유한 분석 시료를 혼합하여 분석 용액을 제조하는 분석 용액 제조단계 및
HPLC를 이용하여 상기 분석 용액의 타우로리딘의 함량을 정량 분석하는 타우로리딘 정량 분석단계를 포함하며,
상기 분석 용매는 아세토니트릴과 물의 혼합 비율이 94:6 내지 96:4의 부피비로 혼합되는 것을 특징으로 하는 타우로리딘의 정량분석 방법. - 삭제
- 제 2 항에 있어서,
상기 분석 용액에 함유된 상기 타우로리딘에 발색단을 결합시키는 상기 타우로리딘의 유도체화 과정을 생략하고 직접 정량 분석하는 것을 특징으로 하는 타우로리딘의 정량분석 방법. - 제 4 항에 있어서,
상기 HPLC의 분석 조건은 검출 파장 210 내지 220 nm, 컬럼 C8, 컬럼 온도 25℃, 시료온도 5℃, 유속이 0.5 내지 1.0 mL/min인 것을 특징으로 하는 타우로리딘의 정량분석 방법.
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